CN101229265B - 一种降糖及降脂药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种降糖及降脂药物组合物及其制备方法。本发明提供一种降糖及降脂药物组合物，其有效药效成分由如下重量份数的原料制成：盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、黄芪多糖提取物10～60份。本发明还提供上述降糖及降脂药物组合物的制备方法。本发明还提供由上述降糖及降脂药物组合物制备的治疗高血糖高血脂相关疾病的药物。动物实验表明，本发明提供的药物组合物具有明显的降血糖功效，可修护胰岛细胞，促进胰岛素分泌，同时，能较好的调节血脂，保护肝脏。
Description
技术领域
本发明涉及一种降糖及降脂药物组合物及其制备方法。
背景技术
糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一种常见的内分泌代谢紊乱性疾病，由体内胰岛素分泌相对或绝对不足及靶细胞对胰岛素敏感性降低，或胰岛素本身存在结构上的缺陷而引起。糖尿病终身不愈，其并发症严重威胁人类健康，目前我国糖尿病患者已达五千万，并且随着人们生活水平的提高，患病人数还在增加。而高脂血症，是动脉硬化和冠心病的重要危险因素之一，是引起心脑血管的病理基础。糖尿病与癌症、心血管疾病并称为世界三大疾病。
目前治疗II型糖尿病的西药当中，通过刺激胰岛B细胞分泌胰岛素达到降低血糖的目的主要有磺酰脲类及非磺酰脲类，双胍类促进葡萄糖利用和肝糖元合成的药物，α-葡萄糖苷酶抑制剂(AGI)，如阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇等，胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类等。西药降糖作用明显，起效时间短，但毒副作用较强，容易引起低血糖，乳酸血症，肾脏肝脏器官损坏等，不适于长期服用。目前临床上常用的降脂西药以他汀类药物为代表，虽然疗效不错，但长期服用有毒副作用，最严重可导致横纹肌溶解。近年来随着对中药降血糖作用的深入研究，国内也上市了很多具有降糖和降脂作用的中成药，但效果并不十分理想。
发明内容
为了解决现有技术中存在的毒副作用大和疗效欠佳的问题，本发明提供一种降糖及降脂药物组合物。
本发明的技术方案如下：
本发明提供一种降糖及降脂药物组合物，其有效药效成分由如下重量份数的原料制成：
盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、黄芪多糖提取物10～60份。
上述盐酸小檗碱由黄连提取制得。
由黄连提取制备盐酸小檗碱的方法如下：
黄连用体积分数为0.25％的硫酸常温浸泡后收集浸泡液，浓缩后调PH值至9-11，滤除杂质，取滤液，用盐酸调PH值小于4，氯化钠盐析取沉淀，80℃下干燥后制得。
上述地黄多糖提取物的制备方法如下：
地黄加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀制得。
上述黄芪多糖提取物的制备方法如下：
黄芪加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀制得。
本发明还提供上述降糖及降脂药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)由黄连提取制备盐酸小檗碱的方法如下：
黄连用体积分数为0.25％的硫酸常温浸泡后收集浸泡液，浓缩后调PH值至9-11，滤除杂质，取滤液，用盐酸调PH值为小于4，氯化钠盐析取沉淀，80℃下干燥后制得。
(2)地黄多糖提取物的制备方法如下：
地黄加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀，干燥制得。
(3)黄芪多糖提取物的制备方法如下：
黄芪加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀，干燥制得。
本发明还提供由上述降糖及降脂药物组合物制备的治疗高血糖高血脂相关疾病的药物。
上述高血糖高血脂相关疾病是指：2型糖尿病，高脂血症，糖尿病肾病等。
上述药物可以制成胶囊剂，片剂，颗粒剂等剂型。
本发明所实现的技术效果如下：
动物实验表明，本发明提供的药物组合物具有明显的降血糖功效，可修护胰岛细胞，促进胰岛素分泌，同时，能较好的调节血脂，保护肝脏。
具体实施方式
实施例1：
本实施例采用的配方如下：
盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、黄芪多糖提取物10～60份。
制备方法：
取盐酸小檗碱20份，地黄多糖10份，黄芪多糖60份，加适量糊精，制得黄连、黄芪、地黄提取物的β-环糊精包合物，加入适量乳糖、微晶纤维素、三硅酸镁，以3％PVP乙醇溶液为黏合剂，制成软材，过80目筛制粒，60℃左右热风吹至近干时用18目筛整粒，完全干燥后用22目筛筛出细粉得均匀的颗粒，再包衣制得颗粒剂。
制成剂型：颗粒剂。
动物实验：
1.实验材料
1.1实验试剂及器材：
黄连、黄芪、地黄药用饮片，购自北京京卫大药房，盐酸二甲双胍(贵州天安药业股份有限公司)。链脲佐菌素(STZ)，购自北京奇华盛生物技术发展中心。柠檬酸，柠檬酸钠，伊红、苏木精(北京化工厂)，APES粘片剂(北京赛驰生物科技有限公司)。
强生稳豪血糖试纸(LifeScan，Inc.)，总胆固醇试剂盒，甘油三脂试剂盒，高、低密度脂蛋白试剂盒，葡萄糖测定试剂盒，均购自中生北控生物科技有限公司，尿酸，转氨酶，胰岛素测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
强生One Touch Ultra血糖仪(强生(中国)医疗器材有限公司)，高速冷冻离心机(美国Thermo公司)，MD-200半自动生化仪(华士信医疗集团公司)，自动脱水机，包埋机以及切片机，染色机，倒置显微镜均为德国Leica公司。
高糖高脂饲料(北京科澳协力饲料有限公司订做)，配方：10％猪油、20％蔗糖、1％胆酸钠、2.5％胆固醇、66.5％常规饲料。
1.2实验动物：
SD大鼠50只，雄性，180-220g，洁净级，购自中国科学院遗传与发育生物学研究所，生产许可证：SCXK(京)2006-2008。实验室温度20-25℃，湿度50-60％，12小时交替光照，动物购进后自由饮食饮水。
2.实验方法
2.1糖尿病大鼠模型的建立
取SD大鼠50只，按体重随机分为4组，一组为正常对照组(NC)，喂正常饲料，剩余喂以高糖高脂饲料，诱导胰岛素抵抗模型。喂养8周后，将高糖高脂饲料喂养的大鼠禁食12小时，腹腔注射新鲜配制的STZ液(25mg·kg-1)，72h后，剪尾测定空腹血糖值，取大于11.1mmol·L-1者为造模成功者。将造模成功大鼠禁食12小时，大鼠眼眦后静脉取血，测TC、TG及高、低密度脂蛋白。
2.2分组与给药
取造模成功大鼠共36只，按血糖值随机分为3组，其中，模型对照组(MC)12只，阳性药对照组12只，药物组合物组12只。阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，按0.3g·kg-1剂量，正常组与模型组灌相应剂量的自来水。除正常组外，其他组继续喂高糖高脂饲料。
2.3血糖，血脂水平的测定
灌胃治疗第3周，第10周剪尾取血，用血糖仪和血糖试纸测定大鼠血糖值。于实验最初和最末眼角后静脉丛采血，半自动生化分析仪测定大鼠血清总胆固醇(TC)，甘油三脂(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-L)。
2.4血清胰岛素含量的测定，血清转氨酶量，尿酸测定
分别按照试剂盒说明书测定，所用仪器为半自动生化分析仪。
2.5肝糖原的提取和含量的测定
大鼠处死后取肝脏，将表面血液冲洗干净，称取0.1g左右，用PBS组织匀浆(1g:0ml)，加4％的磺基水杨酸0.5ml于0.5ml的匀浆中，混匀，离心，取上清夜沸水浴15min，冷却，冰浴加蒽酮试剂，测620nmOD值。
2.6糖异生实验
大鼠灌胃治疗8周后，禁食12小时，腹腔注射L-丙氨酸(2g/kg)，采集0min，60min时血测血糖水平。
2.7病理组织学观察
用0.3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，取肝，肾，胰腺等组织，于多聚甲醛溶液中固定，以梯度酒精、二甲苯脱水，透明，浸蜡，包埋机石蜡包埋，用超薄切片机行超薄组织切片，展片机展片，60℃烘片4～5h，复脱蜡后以苏木精-伊红染色，脱水，树胶封片，倒置显微镜下观察组织超微结构变化。
3.实验结果
3.1.药物组合物提取物对STZ致糖尿病大鼠血糖水平的影响
表1 药物组合物提取物对糖尿病大鼠血糖的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 第1周(mmol·L-1) | 第3周(mmol·L-1) | 第10周(mmol·L-1) |
| 模型组 | 21.52±2.05 | 23.83±4.69 | 23.93±3.77 |
| 阳性药 | 21.70±2.06 | 17.63±4.34 | 12.44±3.16*** |
| 药物组合物组 | 21.8±2.04 | 22.5±3.48 | 17.05±2.52*** |
| 正常组 | 5.25±0.36 | 5.28±0.24 | 5.18±0.26 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表1可见，给药组第3，10周DM大鼠的血糖含量均有显著性降低，与模型组比较差异较显著(P＜0.001)，说明本药物对血糖具有很好的降低作用。
3.2.药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原含量的影响
表2药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 肝糖原(mmol·L-1) |
| 模型组 | 30.98±6.23 |
| 阳性药 | 50.69±21.51** |
| 药物组合物组 | 66.11±22.25*** |
| 正常组 | 91.61±13.70 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表2可见，给药10周后，测定大鼠肝糖原含量，给药组能有效的促进糖原合成，与模型组比较，差异显著(p＜0.05)，可推知本药物组合物的降血糖机制应该包括促进肝糖原合成。
3.3.药物组合物提取物对DM大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响
表3药物组合物提取物对DM大鼠血脂水平的影响(±s，n＞10)
| 组别 | TC(mmol·L-1) | TG(mmol·L-1) | HDL-C(mmol·L-1) | LDL-C(mmol·L-1) |
| 模型组 | 14.80±9.93 | 2.75±1.57 | 1.48±0.48 | 10.89±9.16 |
| 阳性药 | 4.25±1.55*** | 1.09±0.32* | 2.35±1.72 | 0.18±0.31* |
| 药物组合物组 | 2.93±0.70*** | 0.94±0.43* | 2.69±1.76* | 0.65±0.34* |
| 正常组 | 2.26±0.74 | 0.59±0.34 | 1.72±0.51 | 0.37±0.12 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
高糖高脂饲料喂养并灌胃给药10周以后，模型组TC水平明显高于其他给药组(P＜0.001)，阳性药与药物组合物均能较好的调节血浆胆固醇水平。药物组合物组降低DM大鼠的TG与模型组相比，差异显著(P＜0.05)。对于HDL-C，LDL-C来说，药物组合物组效果也明显，可以上调HDL-C，下调LDL-C，与模型比较P＜0.05。总体来说，药物组合物对DM大鼠的TC，TG，LDL-C有比较明显的降低作用，而对HDL-C则有升高作用，从而能够较为有效的调节血脂。
3.4.药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素水平，尿酸含量和血清转氨酶含量的影响
表4 药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素，尿酸和血清转氨酶的影响(±s，n＞10)
| 组别 | 胰岛素(μIU·ml-1) | 转氨酶(IU/L) | 尿酸(mg·L-1) |
| 模型组 | 45.43±2.78 | 59.41±11.03 | 0.55±0.04 |
| 阳性药 | 44.39±22.67 | 36.56±14.96* | 0.34±0.10*** |
| 药物组合物组 | 50.90±16.49 | 28.52±13.35* | 0.39±0.14* |
| 正常组 | 104.99±56.25 | 14.91±7.82 | 0.16±0.05 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
胰岛分泌胰岛素是调节血糖水平的重要环节，在DM大鼠灌胃治疗10周后，测血清胰岛素水平可见，药物组合物组与模型组差异不显著，可以说明本剂量比药物组合物的降血糖机制可能不主要为促胰岛素分泌作用。
高尿酸水平是胰岛素抵抗综合征的特征表现之一，本实验结果显示，DM大鼠药物组合物组尿酸含量与模型组相比，差异性非常显著，对抑制尿酸产生，提高尿酸清除率有较好作用，从而改善并治疗糖尿病肾病并发症。
由表4可见，比较血清中谷丙转氨酶含量，给药组与模型组比较差异显著，P＜0.05，说明药物组合物对大鼠肝损伤也有一定的保护作用。
3.5.药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的影响药物组合物各剂量比
表5 药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 0min(mmol·L-1) | 60min(mmol·L-1) | 血糖升高值(mmol·L-1) |
| 模型组 | 22.97±2.69 | 29.89±2.79 | 6.92 |
| 阳性药 | 3.50±1.37 | 8.53±4.43 | 5.02 |
| 药物组合物组 | 5.2±1.78 | 12.5±7.39 | 7.3 |
| 正常组 | 2.66±0.20 | 5.65±1.57 | 2.99 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
如表5所见，药物组合物组抑制糖异生作用明显，与模型组比较P＜0.05。
3.6.药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构的影响
表6药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构变化的作用
| 组别 | 大鼠只数 | 胰岛病变程度 | |||
| —— | - | + | ++ | ||
| 模型组 | 12 | 0 | 00 | 3 | 9 |
| 阳性药 | 12 | 1 | 6 | 4 | 1 |
| 药物组合物组 | 12 | 0 | 6 | 5 | 1 |
| 正常组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
——为无胰岛B细胞脱颗粒、变性、减少等；-为有轻微病变10％-20％；+为有20％～50％胰岛细胞病变；++为50％以上胰岛细胞发生病变
糖尿病早期，可见大量淋巴细胞浸润，胰岛B细胞颗粒脱失、空泡变性、坏死、消失，后期胰岛B细胞减少，胰岛变小，纤维组织增生、玻变，胰岛淀粉样变性。由表6可见，药物组合物组能有效减缓和改善胰岛细胞病变，坏死，胰岛空腔部位明显减少，对遭到损伤的胰岛B细胞有明显恢复作用，可能是降低糖尿病大鼠血糖的原因。
实施例2：
本实施例采用的配方如下：
盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、黄芪多糖提取物10～60份。
制备方法：取盐酸小檗碱20份，地黄多糖40份，黄芪多糖10份，加适量糊精，制得黄连、黄芪、地黄提取物的β-环糊精包合物，加入适量乳糖、微晶纤维素、三硅酸镁，以3％PVP乙醇溶液为黏合剂，制成软材，过80目筛制粒，60℃左右热风吹至近干时用18目筛整粒，完全干燥后用22目筛筛出细粉得均匀的颗粒，再包衣制得颗粒剂。
制成剂型：制备颗粒剂
动物实验：
1.实验材料
1.1实验试剂及器材：
黄连、黄芪、地黄药用饮片，购自北京京卫大药房，盐酸二甲双胍(贵州天安药业股份有限公司)。链脲佐菌素(STZ)，购自北京奇华盛生物技术发展中心。柠檬酸，柠檬酸钠，伊红、苏木精(北京化工厂)，APES粘片剂(北京赛驰生物科技有限公司)。
强生稳豪血糖试纸(LifeScan，Inc.)，总胆固醇试剂盒，甘油三脂试剂盒，高、低密度脂蛋白试剂盒，葡萄糖测定试剂盒，均购自中生北控生物科技有限公司，尿酸，转氨酶，胰岛素测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
强生One Touch Ultra血糖仪(强生(中国)医疗器材有限公司)，高速冷冻离心机(美国Thermo公司)，MD-200半自动生化仪(华士信医疗集团公司)，自动脱水机，包埋机以及切片机，染色机，倒置显微镜均为德国Leica公司。
高糖高脂饲料(北京科澳协力饲料有限公司订做)，配方：10％猪油、20％蔗糖、1％胆酸钠、2.5％胆固醇、66.5％常规饲料。
1.2实验动物：
SD大鼠50只，雄性，180-220g，洁净级，购自中国科学院遗传与发育生物学研究所，生产许可证：SCXK(京)2006-2008。实验室温度20-25℃，湿度50-60％，12小时交替光照，动物购进后自由饮食饮水。
2.实验方法
2.1糖尿病大鼠模型的建立
取SD大鼠50只，按体重随机分为4组，一组为正常对照组(NC)，喂正常饲料，剩余喂以高糖高脂饲料，诱导胰岛素抵抗模型。喂养8周后，将高糖高脂饲料喂养的大鼠禁食12小时，腹腔注射新鲜配制的STZ液(25mg·kg-1)，72h后，剪尾测定空腹血糖值，取大于11.1mmol·L-1者为造模成功者。
2.2分组与给药
取造模成功大鼠共36只，按血糖值随机分为3组，其中，模型对照组(MC)12只，阳性药对照组12只，药物组合物组12只。阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，按0.3g·kg-1剂量，正常组与模型组灌相应剂量的自来水。除正常组外，其他组继续喂高糖高脂饲料。
2.3血糖，血脂水平的测定
灌胃治疗第3周，第10周剪尾取血，用血糖仪和血糖试纸测定大鼠血糖值。于实验最初和最末眼角后静脉丛采血，半自动生化分析仪测定大鼠血清总胆固醇(TC)，甘油三脂(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-L)。
2.4血清胰岛素含量的测定，血清转氨酶量，尿酸测定
分别按照试剂盒说明书测定，所用仪器为半自动生化分析仪。
2.5肝糖原的提取和含量的测定
大鼠处死后取肝脏，将表面血液冲洗干净，称取0.1g左右，用PBS组织匀浆(1g:50ml)，加4％的磺基水杨酸0.5ml于0.5ml的匀浆中，混匀，离心，取上清夜沸水浴15min，冷却，冰浴加蒽酮试剂，测620nmOD值。
2.6糖异生实验
大鼠灌胃治疗8周后，禁食12小时，腹腔注射L-丙氨酸(2g/kg)，采集0min，60min时血测血糖水平。
2.7病理组织学观察
用0.3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，取肝，肾，胰腺等组织，于多聚甲醛溶液中固定，以梯度酒精、二甲苯脱水，透明，浸蜡，包埋机石蜡包埋，用超薄切片机行超薄组织切片，展片机展片，60℃烘片4～5h，复脱蜡后以苏木精-伊红染色，脱水，树胶封片，倒置显微镜下观察组织超微结构变化。
3.实验结果
3.1.药物组合物提取物对STZ致糖尿病大鼠血糖水平的影响表1药物组合物提取物对糖尿病大鼠血糖的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 第1周(mmol·L-1) | 第3周(mmol·L-1) | 第10周(mmol·L-1) |
| 模型组 | 22.52±3.05 | 22.85±4.34 | 23.76±3.51 |
| 阳性药 | 21.90±1.53 | 18.63±3.59 | 13.74±3.23*** |
| 药物组合物组 | 22.23±2.43 | 20.67±2.70 | 16.6±2.85*** |
| 正常组 | 5.26±0.36 | 5.28±0.44 | 5.30±0.22 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表1可见，给药后第3，10周DM，阳性药组与药物组合物组大鼠的血糖含量均有显著性降低，与模型组比较差异较显著(P＜0.001)，说明本药物对血糖具有很好的降低作用。
3.2.药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原含量的影响
表2药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 肝糖原(mmol·L-1) |
| 模型组 | 31.03±5.96 |
| 阳性药 | 53.69±18.37** |
| 药物组合物组 | 44.58±20.72* |
| 正常组 | 95.23±15.74 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表2可见，给药10周后，测大鼠肝糖原含量，两给药组均能有效的促进糖原合成，与模型组比较，差异显著(p＜0.05)，可推知本药物组合物的降血糖机制可能与二甲双胍相似，即包含有促进肝糖原合成的作用。
3.3.药物组合物提取物对DM大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响
表3药物组合物提取物对DM大鼠血脂水平的影响(±s，n＞10)
| 组别 | TC(mmol·L-1) | TG(mmol·L-1) | HDL-C(mmol·L-1) | LDL-C(mmol·L-1) |
| 模型组 | 10.20±6.63 | 3.20±1.12 | 1.03±0.48 | 8.62±7.11 |
| 阳性药 | 3.99±1.45*** | 0.98±0.63* | 1.96±1.21 | 0.23±0.31* |
| 药物组合物组 | 3.45±0.77** | 1.03±0.34* | 2.19±0.90* | 0.59±0.21* |
| 正常组 | 2.06±0.36 | 0.55±0.23 | 1.58±0.49 | 0.42±0.22 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
高糖高脂饲料喂养并灌胃给药10周以后，比较TC水平，模型组明显高于其他给药组(P＜0.001)，阳性药与药物组合物均能较好的调节血浆胆固醇水平。药物组合物组降低DM大鼠的TG与模型组相比，差异显著(P＜0.05)。同时，药物组合物组对DM大鼠HDL-C，LDL-C也有明显回调作用。总体来说，药物组合物对DM大鼠的TC，TG，LDL-C有比较明显的降低作用，而对HDL-C则有升高作用，从而能够较为有效的调节血脂。
3.4.药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素水平，尿酸含量和血清转氨酶含量的影响
表4药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素，尿酸和血清转氨酶的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 胰岛素(μIU·ml-1) | 转氨酶(IU/L) | 尿酸(mg·L-1) |
| 模型组 | 40.04±2.78 | 63.89±9.83 | 0.85±0.04 |
| 阳性药 | 43.36±12.56 | 40.73±11.69* | 0.63±0.09*** |
| 药物组合物组 | 60.99±9.83* | 19.22±6.99*** | 0.20±0.06*** |
| 正常组 | 100.37±35.49 | 12.77±5.43 | 0.19±0.03 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
胰岛分泌胰岛素是调节血糖水平的重要环节，在DM大鼠灌胃治疗10周后，测血清胰岛素水平可见，本药物组合物组可以促进胰岛素分泌，与模型组相比有差异性，P＜0.05，可以说明本药物组合物的降血糖机制包含促胰岛素分泌作用。
高尿酸水平是胰岛素抵抗综合征的特征表现之一，本实验结果显示，DM大鼠各给药组尿酸含量与模型组相比有显著差异，尤其药物组合物组，差异性非常显著，说明本药物组合物对抑制尿酸产生，提高尿酸清除率有较好作用，从而改善并治疗糖尿病肾病并发症。
比较表4中血清谷丙转氨酶含量，药物组合物组组与模型组比较差异显著，P＜0.001，说明药物组合物对大鼠肝损伤也有一定的保护作用。
3.5.药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的影响药物组合物各剂量比
表5药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 0min(mmol·L-1) | 60min(mmol·L-1) | 血糖升高值(mmol·L-1) |
| 模型组 | 22.97±2.69 | 30.24±2.79 | 7.27 |
| 阳性药 | 9.03±1.37 | 13.33±4.43 | 4.3 |
| 药物组合物组 | 12.30±6.18 | 17.94±5.34 | 5.64 |
| 正常组 | 2.99±0.20 | 6.02±0.96 | 3.03 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
如表5所见，药物组合物剂量比2组抑制糖异生作用最明显，与模型组比较P＜0.05，剂量比1组作用不明显。
3.6.药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构的影响
表6药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构变化的作用
| 组别 | 大鼠只数 | 胰岛病变程度 | |||
| —— | - | + | ++ | ||
| 模型组 | 12 | 0 | 00 | 3 | 9 |
| 阳性药 | 12 | 1 | 5 | 5 | 1 |
| 药物组合物组 | 12 | 2 | 5 | 5 | 0 |
| 正常组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
——为无胰岛B细胞脱颗粒、变性、减少等；-为有轻微病变10％20％；+为有20％～50％胰岛细胞病变；++为50％以上胰岛细胞发生病变
糖尿病早期，可见大量淋巴细胞浸润，胰岛B细胞颗粒脱失、空泡变性、坏死、消失，后期胰岛B细胞减少，胰岛变小，纤维组织增生、玻变，胰岛淀粉样变性。由表6可见，药物组合物组能有效减缓和改善胰岛细胞病变，坏死，胰岛空腔部位明显减少，对遭到损伤的胰岛B细胞有明显恢复作用，可能是降低糖尿病大鼠血糖的原因。
实施例3：
本实施例采用的配方如下：
盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、黄芪多糖提取物10～60份。
制备方法：取盐酸小檗碱80份，地黄多糖提取物10份，黄芪多糖提取物10份，敷料适量，取β-CD100g加蒸馏水200ml，研匀后再与三黄提取物Sg研磨均匀，低温下干燥即得β-环糊精包合物，再加入一定的辅料，制粒，压片，薄膜包衣。
制成剂型：制得片剂
动物实验
2.实验材料
1.1实验试剂及器材：
黄连、黄芪、地黄药用饮片，购自北京京卫大药房，盐酸二甲双胍(贵州天安药业股份有限公司)。链脲佐菌素(STZ)，购自北京奇华盛生物技术发展中心。柠檬酸，柠檬酸钠，伊红、苏木精(北京化工厂)，APES粘片剂(北京赛驰生物科技有限公司)。
强生稳豪血糖试纸(LifeScan，Inc.)，总胆固醇试剂盒，甘油三脂试剂盒，高、低密度脂蛋白试剂盒，葡萄糖测定试剂盒，均购自中生北控生物科技有限公司，尿酸，转氨酶，胰岛素测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
强生One Touch Ultra血糖仪(强生(中国)医疗器材有限公司)，高速冷冻离心机(美国Thermo公司)，MD-200半自动生化仪(华士信医疗集团公司)，自动脱水机，包埋机以及切片机，染色机，倒置显微镜均为德国Leica公司。
高糖高脂饲料(北京科澳协力饲料有限公司订做)，配方：10％猪油、20％蔗糖、1％胆酸钠、2.5％胆固醇、66.5％常规饲料。
1.2实验动物：
SD大鼠70只，雄性，180-220g，洁净级，购自中国科学院遗传与发育生物学研究所，生产许可证：SCXK(京)2006-2008。实验室温度20-25℃，湿度50-60％，12小时交替光照，动物购进后自由饮食饮水。
2.实验方法
1.2实验动物：
SD大鼠50只，雄性，180-220g，洁净级，购自中国科学院遗传与发育生物学研究所，生产许可证：SCXK(京)2006-2008。实验室温度20-25℃，湿度50-60％，12小时交替光照，动物购进后自由饮食饮水。
2.实验方法
2.1糖尿病大鼠模型的建立
取SD大鼠50只，按体重随机分为4组，一组为正常对照组(NC)，喂正常饲料，剩余喂以高糖高脂饲料，诱导胰岛素抵抗模型。喂养8周后，将高糖高脂饲料喂养的大鼠禁食12小时，腹腔注射新鲜配制的STZ液(25mg·kg-1)，72h后，剪尾测定空腹血糖值，取大于11.1mmol·L-1者为造模成功者。将造模成功大鼠禁食12小时，大鼠眼眦后静脉取血，测TC、TG及高、低密度脂蛋白。
2.2分组与给药
取造模成功大鼠共36只，按血糖值随机分为3组，其中，模型对照组(MC)12只，阳性药对照组12只，药物组合物组12只。阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，按0.3g·kg-1剂量，正常组与模型组灌相应剂量的自来水。除正常组外，其他组继续喂高糖高脂饲料。
2.3血糖，血脂水平的测定
灌胃治疗第3周，第10周剪尾取血，用血糖仪和血糖试纸测定大鼠血糖值。于实验最初和最末眼角后静脉丛采血，半自动生化分析仪测定大鼠血清总胆固醇(TC)，甘油三脂(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-L)。
2.4血清胰岛素含量的测定，血清转氨酶量，尿酸测定
分别按照试剂盒说明书测定，所用仪器为半自动生化分析仪。
2.5肝糖原的提取和含量的测定
大鼠处死后取肝脏，将表面血液冲洗干净，称取0.1g左右，用PBS组织匀浆(1g:50ml)，加4％的磺基水杨酸0.5ml于0.5ml的匀浆中，混匀，离心，取上清夜沸水浴15min，冷却，冰浴加蒽酮试剂，测620nmOD值。
2.6糖异生实验
大鼠灌胃治疗8周后，禁食12小时，腹腔注射L-丙氨酸(2g/kg)，采集0min，60min时血测血糖水平。
2.7病理组织学观察
用0.3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，取肝，肾，胰腺等组织，于多聚甲醛溶液中固定，以梯度酒精、二甲苯脱水，透明，浸蜡，包埋机石蜡包埋，用超薄切片机行超薄组织切片，展片机展片，60℃烘片4～5h，复脱蜡后以苏木精-伊红染色，脱水，树胶封片，倒置显微镜下观察组织超微结构变化。
3.实验结果
3.1.药物组合物提取物对STZ致糖尿病大鼠血糖水平的影响
表1 药物组合物提取物对糖尿病大鼠血糖的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 第1周(mmol·L-1) | 第3周(mmol·L-1) | 第10周(mmol·L-1) |
| 模型组 | 23.52±2.56 | 23.79±5.23 | 24.21±2.68 |
| 阳性药 | 23.70±2.45 | 18.86±4.11 | 13.76±4.01*** |
| 药物组合物组 | 22.97±2.67 | 20.08±3.25 | 15.22±3.97*** |
| 正常组 | 5.20±0.44 | 5.10±0.34 | 5.18±0.29 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表1可见，给药组第3，10周DM大鼠的血糖含量均有显著性降低，与模型组比较差异较显著(P＜0.001)，说明本药物组合物对血糖具有很好的降低作用，长期用药可以达到与西药相当的降血糖程度。
3.2.药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原含量的影响
表2 药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 肝糖原(mmol·L-1) |
| 模型组 | 40.60±6.23 |
| 阳性药 | 59.68±19.35** |
| 药物组合物组 | 55.04±17.40** |
| 正常组 | 101.38±13.70 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表2可见，给药10周后，测定大鼠肝糖原含量，阳性药与药物组合物组均能有效的促进糖原合成，与模型组比较，差异显著(p＜0.01)，可推知本药物组合物的降血糖机制应该包括促进肝糖原合成。
3.3.药物组合物提取物对DM大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响
表3 药物组合物提取物对DM大鼠血脂水平的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | TC(mmol·L-1) | TG(mmol·L-1) | HDL-C(mmol·L-1) | LDL-C(mmol·L-1) |
| 模型组 | 8.80±3.63 | 1.99±1.57 | 1.24±0.48 | 5.84±4.32 |
| 阳性药 | 4.25±1.76*** | 1.01±0.42* | 2.63±1.19 | 0.96±0.31* |
| 药物组合物组 | 3.48±0.55*** | 0.97±0.49* | 2.98±1.40* | 0.56±0.28* |
| 正常组 | 1.75±0.74 | 0.96±0.39 | 1.40±0.37 | 0.29±0.11 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
高糖高脂饲料喂养并灌胃给药10周以后，模型组TC水平明显高于阳性药与药物组合物组(P＜0.001)，可见两给药组均能较好的调节血浆胆固醇水平。药物组合物组降低DM大鼠的TG与模型组相比，差异显著(P＜0.05)，而与阳性药组之间无显著性差异。总体来说，药物组合物对DM大鼠的TC，TG，LDL-C有比较明显的降低作用，而对HDL-C则有升高作用，从而能够较为有效的调节血脂。
3.4.药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素水平，尿酸含量和血清转氨酶含量的影响
表4 药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素，尿酸和血清转氨酶的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 胰岛素(μIU·ml-1) | 转氨酶(IU/L) | 尿酸(mg·L-1) |
| 模型组 | 55.34±2.78 | 64.26±13.03 | 0.66±0.14 |
| 阳性药 | 54.22±19.99 | 39.57±16.56* | 0.43±0.10*** |
| 药物组合物组 | 72.13±14.73* | 33.01±21.37* | 0.45±0.43** |
| 正常组 | 115.65±30.28 | 10.84±6.97 | 0.20±0.18 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
胰岛分泌胰岛素是调节血糖水平的重要环节，在DM大鼠灌胃治疗10周后，测血清胰岛素水平可见，药物组合物组与模型组差异有显著差异，可以说明本药物组合物的降血糖机制包含为促胰岛素分泌作用。
高尿酸水平是胰岛素抵抗综合征的特征表现之一，本实验结果显示，药物组合物组尿酸含量与模型组相比，差异性非常显著，对抑制尿酸产生，提高尿酸清除率有较好作用，从而改善并治疗糖尿病肾病并发症。
由表4可见，比较血清中谷丙转氨酶含量，药物组合物组与模型组比较差异显著，P＜0.05，说明药物组合物对大鼠肝损伤有一定的保护作用。
3.5.药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的影响药物组合物各剂量比
表5 药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的作用(±s，n＞10)
| 组别 | 0min(mmol·L-1) | 60min(mmol·L-1) | 血糖升高值(mmol·L-1) |
| 模型组 | 20.17±2.69 | 28.99±2.89 | 8.82 |
| 阳性药 | 5.50±1.44 | 9.53±3.56 | 4.03 |
| 药物组合物组 | 4.48±1.011 | 10.52±4.36 | 6.04* |
| 正常组 | 3.67±0.50 | 5.94±1.17 | 2.27 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
如表5所见，与模型组比较，药物组合物组抑制糖异生作用较明显，P＜0.05，因此，可确定抑制糖异生作用为本药物组合物的降糖机制之一。
3.6.药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构的影响
表6药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构变化的作用
| 组别 | 大鼠只数 | 胰岛病变程度 | |||
| —— | - | + | ++ | ||
| 模型组 | 12 | 0 | 0 | 3 | 9 |
| 阳性药 | 12 | 1 | 5 | 6 | 0 |
| 药物组合物组 | 12 | 1 | 6 | 5 | 0 |
| 正常组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
——为无胰岛B细胞脱颗粒、变性、减少等；-为有轻微病变10％-20％；+为有20％～50％胰岛细胞病变；++为50％以上胰岛细胞发生病变
糖尿病早期，可见大量淋巴细胞浸润，胰岛B细胞颗粒脱失、空泡变性、坏死、消失，后期胰岛B细胞减少，胰岛变小，纤维组织增生、玻变，胰岛淀粉样变性。由表6可见，药物组合物组能有效减缓和改善胰岛细胞病变，坏死，胰岛空腔部位明显减少，对遭到损伤的胰岛B细胞有明显恢复作用，可能是降低血糖的机制之一。
实施例4：
本实施例采用的配方如下：
盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、黄芪多糖提取物10～60份。
制备方法：盐酸小檗碱80份，地黄多糖提取物40份，黄芪多糖提取物60份，梭甲基纤维素适量，其他辅料适量，将黄连、黄芪、地黄提取物与梭甲基纤维素混合，用研磨法制成固体分散体，50℃十燥，过120目，装填胶囊。
制成剂型：胶囊制剂
动物实验
3.实验材料
1.1实验试剂及器材：
黄连、黄芪、地黄药用饮片，购自北京京卫大药房，盐酸二甲双胍(贵州天安药业股份有限公司)。链脲佐菌素(STZ)，购自北京奇华盛生物技术发展中心。柠檬酸，柠檬酸钠，伊红、苏木精(北京化工厂)，APES粘片剂(北京赛驰生物科技有限公司)。
强生稳豪血糖试纸(LifeScan，Inc.)，总胆固醇试剂盒，甘油三脂试剂盒，高、低密度脂蛋白试剂盒，葡萄糖测定试剂盒，均购自中生北控生物科技有限公司，尿酸，转氨酶，胰岛素测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
强生One Touch Ultra血糖仪(强生(中国)医疗器材有限公司)，高速冷冻离心机(美国Thermo公司)，MD-200半自动生化仪(华士信医疗集团公司)，自动脱水机，包埋机以及切片机，染色机，倒置显微镜均为德国Leica公司。
高糖高脂饲料(北京科澳协力饲料有限公司订做)，配方：10％猪油、20％蔗糖、1％胆酸钠、2.5％胆固醇、66.5％常规饲料。
1.2实验动物：
SD大鼠50只，雄性，180-220g，洁净级，购自中国科学院遗传与发育生物学研究所，生产许可证：SCXK(京)2006-2008。实验室温度20-25℃，湿度50-60％，12小时交替光照，动物购进后自由饮食饮水。
2.实验方法
2.1糖尿病大鼠模型的建立
取SD大鼠50只，按体重随机分为4组，一组为正常对照组(NC)，喂正常饲料，剩余喂以高糖高脂饲料，诱导胰岛素抵抗模型。喂养8周后，将高糖高脂饲料喂养的大鼠禁食12小时，腹腔注射新鲜配制的STZ液(25mg·kg-1)，72h后，剪尾测定空腹血糖值，取大于11.1mmol·L-1者为造模成功者。将造模成功大鼠禁食12小时，大鼠眼眦后静脉取血，测TC、TG及高、低密度脂蛋白。
2.2分组与给药
取造模成功大鼠共36只，按血糖值随机分为3组，其中，模型对照组(MC)12只，阳性药对照组12只，药物组合物组12只。阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，按0.3g·kg-1剂量，正常组与模型组灌相应剂量的自来水。除正常组外，其他组继续喂高糖高脂饲料。
2.3血糖，血脂水平的测定
灌胃治疗第3周，第10周剪尾取血，用血糖仪和血糖试纸测定大鼠血糖值。于实验最初和最末眼角后静脉丛采血，半自动生化分析仪测定大鼠血清总胆固醇(TC)，甘油三脂(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-L)。
2.4血清胰岛素含量的测定，血清转氨酶量，尿酸测定
分别按照试剂盒说明书测定，所用仪器为半自动生化分析仪。
2.5肝糖原的提取和含量的测定
大鼠处死后取肝脏，将表面血液冲洗干净，称取0.1g左右，用PBS组织匀浆(1g:50ml)，加4％的磺基水杨酸0.5ml于0.5ml的匀浆中，混匀，离心，取上清夜沸水浴15min，冷却，冰浴加蒽酮试剂，测620nmOD值。
2.6糖异生实验
大鼠灌胃治疗8周后，禁食12小时，腹腔注射L-丙氨酸(2g/kg)，采集0min，60min时血测血糖水平。
2.7病理组织学观察
用0.3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，取肝，肾，胰腺等组织，于多聚甲醛溶液中固定，以梯度酒精、二甲苯脱水，透明，浸蜡，包埋机石蜡包埋，用超薄切片机行超薄组织切片，展片机展片，60℃烘片4～5h，复脱蜡后以苏木精-伊红染色，脱水，树胶封片，倒置显微镜下观察组织超微结构变化。
3.实验结果
3.1.药物组合物提取物对STZ致糖尿病大鼠血糖水平的影响
表1 药物组合物提取物对糖尿病大鼠血糖的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 第1周(mmol·L-1) | 第3周(mmol·L-1) | 第10周(mmol·L-1) |
| 模型组 | 24.15±2.99 | 24.83±2.87 | 23.64±4.03 |
| 阳性药 | 24.05±3.01 | 19.02±3.59* | 12.49±3.16*** |
| 药物组合物组 | 24.11±2.93 | 21.90±3.24* | 15.32±2.77*** |
| 正常组 | 5.30±0.41 | 5.28±0.39 | 5.17±0.36 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
给药后第3，10周测DM大鼠的血糖含量，由表1可见，结果均有显著性降低，与模型组比较差异显著(P＜0.001)，说明本药物组合物对血糖具有较好降低作用。
3.2.药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原含量的影响
表2 药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原的作用(±s，n＞10)
| 组别 | 肝糖原(mmol·L-1) |
| 模型组 | 50.46±6.23 |
| 阳性药 | 71.69±17.68** |
| 药物组合物组 | 65.85±21.42* |
| 正常组 | 110.21±8.70 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表2可见，给药10周后，测定大鼠肝糖原含量，与模型组比较，两给药组均能有效的促进糖原合成，其中药物组合物组与模型组相比，p＜0.05，可知本药物组合物的降血糖机制应该包括促进肝糖原合成。
3.3.药物组合物提取物对DM大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响
表3 药物组合物提取物对DM大鼠血脂水平的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | TC(mmol·L-1) | TG(mmol·L-1) | HDL-C(mmol·L-1) | LDL-C(mmol·L-1) |
| 模型组 | 15.80±8.58 | 3.03±1.65 | 2.74±0.48 | 3.29±1.96 |
| 阳性药 | 5.35±1.75*** | 1.48±0.52* | 3.56±1.72 | 0.29±0.31*** |
| 药物组合物组 | 4.20±0.79** | 1.24±0.32* | 3.89±0.80* | 0.34±0.33*** |
| 正常组 | 2.79±0.34 | 0.65±0.47 | 2.49±0.51 | 0.23±0.12 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
高糖高脂饲料喂养并灌胃给药10周以后，可见模型组TC水平明显高于其他给药组，即阳性药与药物组合物均能较好的调节血浆总胆固醇水平。药物组合物降低DM大鼠的TG与模型组相比，差异显著(P＜0.05)，而与阳性药组之间无显著性差异。对于HDL-C，LDL-C来说，药物组合物也都有很明显的效果。总体来说，药物组合物可以降低DM大鼠的TC，TG，LDL-C，而对HDL-C则有升高作用，从而能够较为有效的调节血脂。
3.4.药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素水平，尿酸含量和血清转氨酶含量的影响
表4 药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素，尿酸和血清转氨酶的影响(±s，n＞10)
| 组别 | 胰岛素(μIU·ml-1) | 转氨酶(IU/L) | 尿酸(mg·L-1) |
| 模型组 | 30.26±4.78 | 70.49±11.03 | 0.44±0.04 |
| 阳性药 | 34.91±8.73 | 46.35±9.96** | 0.23±0.10*** |
| 药物组合物组 | 50.76±5.22* | 25.52±6.54*** | 0.15±0.03*** |
| 正常组 | 99.85±6.13 | 16.84±4.18 | 0.14±0.05 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
胰岛分泌胰岛素是调节血糖水平的重要环节，在DM大鼠给药10周后，测血清胰岛素水平，结果药物组合物组外能有效促进胰岛素的分泌，与模型组比较差异有显著性，可以说明本药物组合物的降血糖机制包括促胰岛素分泌作用。
高尿酸水平是胰岛素抵抗综合征的特征表现之一，通过本实验结果显示，DM大鼠药物组合物给药组能显著降低尿酸含量，与模型组相比，差异性非常显著，对抑制尿酸产生，提高尿酸清除率有较好作用，可改善并治疗糖尿病肾病并发症。
由表4可见，比较血清中谷丙转氨酶含量，给药组与模型组比较差异显著，P＜0.05，说明药物组合物对大鼠肝损伤也有一定的保护作用。
3.5.药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的影响药物组合物各剂量比
表5 药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 0min(mmol·L-1) | 60min(mmol·L-1) | 血糖升高值(mmol·L-1) |
| 模型组 | 17.98±2.96 | 24.84±2.56 | 6.86 |
| 阳性药 | 6.04±3.38 | 9.87±4.43 | 3.83** |
| 药物组合物组 | 7.98±4.18 | 13.68±5.34 | 5.82* |
| 正常组 | 3.00±0.24 | 5.95±1.36 | 2.95 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
如表5所见，60min后药物组合物血糖升高值明显小于模型组(P＜0.05)，说明本药物组合物能抑制DM大鼠的糖异生水平。
3.6.药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构的影响
表6药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构变化的作用
| 组别 | 大鼠只数 | 胰岛病变程度 | |||
| —— | - | + | ++ | ||
| 模型组 | 12 | 0 | 00 | 2 | 10 |
| 阳性药 | 12 | 1 | 6 | 5 | 0 |
| 药物组合物组 | 12 | 2 | 6 | 4 | 0 |
| 正常组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
——为无胰岛B细胞脱颗粒、变性、减少等；-为有轻微病变10％-20％；+为有20％～50％胰岛细胞病变；++为50％以上胰岛细胞发生病变
糖尿病早期，可见大量淋巴细胞浸润，胰岛B细胞颗粒脱失、空泡变性、坏死、消失，后期胰岛B细胞减少，胰岛变小，纤维组织增生、玻变，胰岛淀粉样变性。由表6可见，药物组合物各剂量比给药组能有效减缓和改善胰岛细胞病变，坏死，胰岛空腔部位明显减少，对遭到损伤的胰岛B细胞有明显恢复作用，可能是降低糖尿病大鼠血糖的原因。
实施例5：
本实施例采用的配方如下：
盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、10～60份。
制备方法：取盐酸小檗碱40份，地黄多糖提取物30份，黄芪多糖提取物60份梭甲基纤维素适量，其他辅料适量，将黄连、黄芪、地黄提取物与梭甲基纤维素混合，用研磨法制成固体分散体，50℃十燥，过120目，装填胶囊。
制成剂型：胶囊制剂
动物实验
4.实验材料
1.1实验试剂及器材：
黄连、黄芪、地黄药用饮片，购自北京京卫大药房，盐酸二甲双胍(贵州天安药业股份有限公司)。链脲佐菌素(STZ)，购自北京奇华盛生物技术发展中心。柠檬酸，柠檬酸钠，伊红、苏木精(北京化工厂)，APES粘片剂(北京赛驰生物科技有限公司)。
强生稳豪血糖试纸(LifeScan，Inc.)，总胆固醇试剂盒，甘油三脂试剂盒，高、低密度脂蛋白试剂盒，葡萄糖测定试剂盒，均购自中生北控生物科技有限公司，尿酸，转氨酶，胰岛素测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
强生One Touch Ultra血糖仪(强生(中国)医疗器材有限公司)，高速冷冻离心机(美国Thermo公司)，MD-200半自动生化仪(华士信医疗集团公司)，自动脱水机，包埋机以及切片机，染色机，倒置显微镜均为德国Leica公司。
高糖高脂饲料(北京科澳协力饲料有限公司订做)，配方：10％猪油、20％蔗糖、1％胆酸钠、2.5％胆固醇、66.5％常规饲料。
1.2实验动物：
SD大鼠70只，雄性，180-220g，洁净级，购自中国科学院遗传与发育生物学研究所，生产许可证：SCXK(京)2006-2008。实验室温度20-25℃，湿度50-60％，12小时交替光照，动物购进后自由饮食饮水。
2.实验方法
2.1糖尿病大鼠模型的建立
取SD大鼠50只，按体重随机分为4组，一组为正常对照组(NC)，喂正常饲料，剩余喂以高糖高脂饲料，诱导胰岛素抵抗模型。喂养8周后，将高糖高脂饲料喂养的大鼠禁食12小时，腹腔注射新鲜配制的STZ液(25mg·kg-1)，72h后，剪尾测定空腹血糖值，取大于11.1mmol·L-1者为造模成功者。将造模成功大鼠禁食12小时，大鼠眼眦后静脉取血，测TC、TG及高、低密度脂蛋白。
2.2分组与给药
取造模成功大鼠共36只，按血糖值随机分为3组，其中，模型对照组(MC)12只，阳性药对照组12只，药物组合物组12只。阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，按0.3g·kg-1剂量，正常组与模型组灌相应剂量的自来水。除正常组外，其他组继续喂高糖高脂饲料。
2.3血糖，血脂水平的测定
灌胃治疗第3周，第10周剪尾取血，用血糖仪和血糖试纸测定大鼠血糖值。于实验最初和最末眼角后静脉丛采血，半自动生化分析仪测定大鼠血清总胆固醇(TC)，甘油三脂(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-L)。
2.4血清胰岛素含量的测定，血清转氨酶量，尿酸测定
分别按照试剂盒说明书测定，所用仪器为半自动生化分析仪。
2.5肝糖原的提取和含量的测定
大鼠处死后取肝脏，将表面血液冲洗干净，称取0.1g左右，用PBS组织匀浆(1g:50ml)，加4％的磺基水杨酸0.5ml于0.5ml的匀浆中，混匀，离心，取上清液沸水浴15min，冷却，冰浴加蒽酮试剂，测620nmOD值。
2.6糖异生实验
大鼠灌胃治疗8周后，禁食12小时，腹腔注射L-丙氨酸(2g/kg)，采集0min，60min时血测血糖水平。
2.7病理组织学观察
用0.3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，取肝，肾，胰腺等组织，于多聚甲醛溶液中固定，以梯度酒精、二甲苯脱水，透明，浸蜡，包埋机石蜡包埋，用超薄切片机行超薄组织切片，展片机展片，60℃烘片4～5h，复脱蜡后以苏木精-伊红染色，脱水，树胶封片，倒置显微镜下观察组织超微结构变化。
3.实验结果
3.1.药物组合物提取物对STZ致糖尿病大鼠血糖水平的影响
表1 药物组合物提取物对糖尿病大鼠血糖的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 第1周(mmol·L-1) | 第3周(mmol·L-1) | 第10周(mmol·L-1) |
| 模型组 | 22.92±2.43 | 23.75±2.96 | 22.99±3.19 |
| 阳性药 | 22.74±2.60 | 18.26±3.34** | 11.74±3.58*** |
| 药物组合物组 | 22.83±2.63 | 20.24±2.05* | 12.98±4.47*** |
| 正常组 | 5.10±0.49 | 5.15±0.31 | 5.11±0.40 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表1可见，给药第3周后DM大鼠的血糖水平已有显著性降低，第10周后DM大鼠的血糖水平与模型组比较，差异非常显著(P＜0.001)，说明本药物组合物对DM大鼠血糖具有很好的降低作用，并且与阳性药组之间无显著性差异，说明本药物组合物可以达到与西药相当的降血糖程度。
3.2.药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原含量的影响
表2药物组合物提取物对DM大鼠肝糖原的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 肝糖原(mmol·L-1) |
| 模型组 | 24.24±5.38 |
| 阳性药 | 52.63±15.51** |
| 剂量比2组 | 48.61±17.40** |
| 正常组 | 88.71±11.07 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
给药10周后，测定大鼠肝糖原含量，由表2可见，给药组能有效的促进糖原合成，与模型组比较，差异显著(p＜0.01)，可知本药物组合物的降血糖机制应该包括促进肝糖原合成。
3.3.药物组合物提取物对DM大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响
表3 药物组合物提取物对DM大鼠血脂水平的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | TC(mmol·L-1) | TG(mmol·L-1) | HDL-C(mmol·L-1) | LDL-C(mmol·L-1) |
| 模型组 | 9.63±5.53 | 2.17±1.57 | 2.96±0.48 | 0.89±0.16 |
| 阳性药 | 3.98±1.63*** | 1.32±0.32* | 2.70±1.42 | 0.38±0.21*** |
| 药物组合物组 | 3.16±0.94*** | 1.21±0.44* | 5.98±1.99** | 0.59±0.30** |
| 正常组 | 2.43±0.59 | 0.69±0.34 | 4.72±0.51 | 0.27±0.06 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
高糖高脂饲料喂养同时给药10周后，测TC水平可见，模型组明显高于阳性药与药物组合物组(P＜0.001)，说明阳性药与药物组合物均能较好的调节血浆胆固醇水平。在降低DM大鼠的TG方面，阳性药与药物组合物与模型组相比差异显著(P＜0.05)，而二者之间无显著性差异。对于HDL-C，LDL-C来说，药物组合物效果较阳性药明显，与模型比较P＜0.01。总体来说，药物组合物对DM大鼠的TC，TG，LDL-C有比较明显的降低作用，而对HDL-C则有升高作用，从而能够较为有效的调节血脂。
3.4.药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素水平，尿酸含量和血清转氨酶含量的影响
表4药物组合物提取物对DM大鼠胰岛素，尿酸和血清转氨酶的影响(
±s，n＞10)
| 组别 | 胰岛素(μIU·ml-1) | 转氨酶(IU/L) | 尿酸(mg·L-1) |
| 模型组 | 34.54±2.78 | 60.93±12.09 | 0.84±0.09 |
| 阳性药 | 41.18±14.67 | 40.84±16.96* | 0.53±0.13*** |
| 药物组合物组 | 59.42±12.38* | 31.01±19.96* | 0.49±0.26* |
| 正常组 | 96.37±16.26 | 15.44±7.82 | 0.20±0.07 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
胰岛分泌胰岛素是机体调节血糖水平的重要环节，在DM大鼠灌胃给药10周后，测血清胰岛素水平可见，药物组合物能明显升高血清胰岛素水平，即通过刺激胰岛分泌胰岛素达到降血糖的目的，说明本药物组合物的降血糖机制可能为促胰岛素分泌作用。
高尿酸水平是胰岛素抵抗综合征的特征表现之一，本实验结果显示，给药后DM大鼠血清中尿酸含量与模型组相比，差异性非常显著，因此，可以可知本药物组合物对抑制尿酸产生，提高尿酸清除率有较好作用，从而改善并治疗糖尿病肾病并发症。
由表4可见，比较血清中谷丙转氨酶含量，给药组与模型组相比差异性显著，P＜0.05，说明药物组合物对大鼠肝损伤也有一定的保护作用。
3.5.药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的影响药物组合物各剂量比
表5 药物组合物提取物对DM大鼠糖异生的作用(
±s，n＞10)
| 组别 | 0min(mmol·L-1) | 60min(mmol·L-1) | 血糖升高值(mmol·L-1) |
| 模型组 | 15.25±2.37 | 27.06±3.49 | 11.81 |
| 阳性药 | 7.63±1.96 | 15.95±4.05 | 8.32* |
| 药物组合物组 | 8.51±1.64 | 17.77±3.76 | 9.26* |
| 正常组 | 3.76±0.21 | 8.09±1.19 | 4.33 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
如表5所见，药物组合物组能明显抑制糖异生作用，效果明显，与模型组比较P＜0.05，可知机制糖异生是本药物组合物得降血糖机制之一。
3.6.药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构的影响
表6 药物组合物提取物对DM大鼠胰腺超微结构变化的作用
| 组别 | 大鼠只数 | 胰岛病变程度 | |||
| —— | - | + | ++ | ||
| 模型组 | 12 | 0 | 00 | 4 | 8 |
| 阳性药 | 12 | 2 | 6 | 4 | 0 |
| 药物组合物组 | 12 | 3 | 6 | 3 | 0 |
| 正常组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
——为无胰岛B细胞脱颗粒、变性、减少等；-为有轻微病变10％-20％；+为有20％～50％胰岛细胞病变；++为50％以上胰岛细胞发生病变
糖尿病早期，可见大量淋巴细胞浸润，胰岛B细胞颗粒脱失、空泡变性、坏死、消失，后期胰岛B细胞减少，胰岛变小，纤维组织增生、玻变，胰岛淀粉样变性。由表6可见，药物组合物组能有效减缓和改善胰岛细胞病变，坏死，胰岛空腔部位明显减少，对遭到损伤的胰岛B细胞有明显恢复作用，可能是降低糖尿病大鼠血糖的原因。
Claims (8)
1.一种降糖及降脂药物组合物，其有效药效成分由如下重量份数的原料制成：
盐酸小檗碱20～80份、地黄多糖提取物10～40份、黄芪多糖提取物10～60份。
2.根据权利要求1所述降糖及降脂药物组合物，其特征在于，所述盐酸小檗碱由黄连提取制得。
3.根据权利要求2所述降糖及降脂药物组合物，其特征在于，所述由黄连提取制备盐酸小檗碱的方法如下：
黄连用体积分数为0.25％的硫酸常温浸泡后收集浸泡液，浓缩后调PH值至9-11，滤除杂质，取滤液，用盐酸调PH值小于4，氯化钠盐析取沉淀，80℃下干燥后制得。
4.根据权利要求1所述降糖及降脂药物组合物，其特征在于，所述地黄多糖提取物的制备方法入如下：
地黄加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀制得。
5.根据权利要求1所述降糖及降脂药物组合物，其特征在于，所述黄芪多糖提取物的制备方法入如下：
黄芪加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀制得。
6.制备权利要求1-5任意一项所述降糖及降脂药物组合物的方法，包括如下步骤：
(1)黄连用体积分数为0.25％的硫酸常温浸泡后收集浸泡液，浓缩后调PH值至9-11，滤除杂质，取滤液，用盐酸调PH值小于4，氯化钠盐析取沉淀，80℃下干燥后制得；
(2)地黄加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀，干燥制得；
(3)黄芪加水煎煮，滤过杂质取滤液，乙醇沉淀，干燥制得。
7.由权利要求1-5任意一项所述降糖及降脂药物组合物制备的治疗高血糖高血脂相关疾病的药物。
8.根据权利要求7所述治疗高血糖高血脂相关疾病的药物，其特征在于，所述高血糖高血脂相关疾病是指2型糖尿病、高脂血症或糖尿病肾病。
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