CN106305591A - Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法及其高脂饲料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法及其高脂饲料的制备方法，包括如下步骤：实验老鼠的培养；模型建立；大鼠胰岛β‑细胞的电镜观察：本发明中的实验结果表明：A组空白大鼠胰岛细胞中，胰岛颗粒较多，均匀的分布于细胞核周围；而B组糖尿病大鼠的胰岛细胞中的胰岛颗粒数量明显减少，且大量空泡化。本发明制作简单、成本低，造模成功率高，老鼠死亡率低，造模成功后血糖稳定，对于Ⅱ型糖尿病的研究具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于医药研究领域，具体涉及一种Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法及其高脂饲料的制备方法。
背景技术
现有技术中，在诱导高血糖动物模型中，选用动物，常用小鼠或大鼠，也可选用兔、犬及猴等，配制不同浓度或单一浓度的STZ水溶液，采用静脉或腹腔注射方式单次或多次重复给药。经过不同处理时间后检测是否成模。分别在注射STZ前，给药后不同时间(一般2-6个月，有1年时间)进行血糖值测定、葡萄糖耐量实验和血清胰岛素或C肽检测，频率均有不同，并观察记录动物的体重变化和临床症状。
随着我国的糖尿病发病率急剧升高，糖尿病患者的数量也随之增加，在动物整体水平建立真实模拟糖尿病的疾病模型，是探讨糖尿病溃疡发病机制及临床前药效学评价等医学研究的必要条件，具有十分重要的科学意义和临床意义。
目前糖尿病动物模型多为诱发性动物模型。文献研究结果显示，现有糖尿病的动物模型多模拟糖尿病足发病的动脉病变，神经病变或感染，由于各类研究目的不同，模型的建立方法多种多样，各模型之间差别较大，与临床上实际的表现差距较大。因此，糖尿病模拟临床实际的糖尿病病因及症状特征的动物模型对于促进实验研究的规范化具有重要意义。
因此，根据临床实际的发病特征及病理改变建立模拟程度较高的动物模型对于糖尿病的发病机制的研究及相关的手术，药物等干预的疗效评价具有重要的实际意义。
发明内容
发明目的：为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法及其高脂饲料的制备方法。
技术方案：一种Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法，包括如下步骤：
(1)实验老鼠的培养：
56只SD雄性大鼠，为SPF级，体重200-250g，8周鼠龄，所有的大鼠饲养在温度22±1℃、湿度50±10％、12h昼夜交替的环境中；
(2)模型建立：
56只SD雄性大鼠在动物实验室适应性适应一周后，随机分成两组：A组8只，B组48只；A组每天给予普通老鼠饲料，B组每天给予高脂饲料，喂养8周之后，空腹12h，但不断水，称重，B组按照25mg/kg的剂量腹腔注射溶于柠檬酸缓冲液的STZ溶液，其pH值为4.2–4.5，A组腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液；一周之后，空腹12h，尾静脉取血测定大鼠的空腹血糖，B组中血糖大于11.1mmol/L的大鼠造模成功，用于后续的糖尿病相关的试验研究；
(3)大鼠胰岛β-细胞的电镜观察：
在电镜中观察得到：A组大鼠胰岛细胞中，胰岛颗粒较多，均匀的分布于细胞核周围；而B组大鼠的胰岛细胞中的胰岛颗粒数量明显减少，且大量空泡化。
一种根据所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂饲料，包括如下组分：
作为优化：所述普通饲料中以重量比计算：玉米30％，麸皮46％，蚕蛹3％，黄豆13％，白粉3％，鱼粉5％。
一种根据所述的的高脂饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量600-700g老鼠基础饲料和10-15g花生，混匀，加入黄城HC-2000粉碎机，38000rpm/min,粉碎20min；
(2)将基础饲料和花生粉末置于不锈钢盆中，加入500ml蒸馏水，混匀；
(3)依次往不锈钢盆中加入0.1-0.5g蔗糖、10-15g猪油、2-4g香油和4-8g鸡蛋，混匀；
(4)定型，采用RX-120小型饲料加工颗粒机对上述混合物压制成圆柱状(长5cm，直径2cm)；
(5)烘干，将圆柱状高脂饲料置于烘箱中，50-80℃，烘干10-12h。
有益效果：本发明中的实验结果表明：由本高脂饲料结合低剂量的STZ诱导的B组糖尿病大鼠相对于A空白大鼠的体重明显下降，而空腹血糖明显升高；A组空白大鼠胰岛细胞中，胰岛颗粒较多，均匀的分布于细胞核周围，而B组糖尿病大鼠的胰岛细胞中的胰岛颗粒数量明显减少，且大量空泡化，这说明B组糖尿病大鼠的胰岛细胞受到了一定程度的损伤，胰岛素分泌功能受损。本发明制作简单、成本低，造模成功率高，老鼠死亡率低，造模成功后血糖稳定，对于Ⅱ型糖尿病的研究具有重要意义。
附图说明
图1是本发明中的A组大鼠的胰岛β-细胞的电镜示意图；
图2是本发明中的B组大鼠的胰岛β-细胞的电镜示意图；
图3是本发明中的A、B两组大鼠的体重变化示意图；
图4是本发明中的A、B两组大鼠的血糖变化示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例
一种Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法，包括如下步骤：
(1)实验老鼠的培养：
56只SD雄性大鼠，为SPF级，体重200-250g，8周鼠龄，所有的大鼠饲养在温度22±1℃、湿度50±10％、12h昼夜交替的环境中；
(2)模型建立：
56只SD雄性大鼠在动物实验室适应性适应一周后，随机分成两组：A组8只，B组48只；A组每天给予普通老鼠饲料，B组每天给予高脂饲料，喂养8周之后，空腹12h，但不断水，称重，B组按照25mg/kg的剂量腹腔注射溶于柠檬酸缓冲液的STZ溶液，其pH值为4.2–4.5，A组腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液；一周之后，空腹12h，尾静脉取血测定大鼠的空腹血糖，B组中血糖大于11.1mmol/L的大鼠造模成功，用于后续的糖尿病相关的试验研究；
(3)大鼠胰岛β-细胞的电镜观察：
在电镜中观察得到：A组大鼠胰岛细胞中，胰岛颗粒较多，均匀的分布于细胞核周围；而B组大鼠的胰岛细胞中的胰岛颗粒数量明显减少，且大量空泡化。
具体实施例1
一种根据所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂饲料，包括如下组分：
所述普通饲料中以重量比计算：玉米30％，麸皮46％，蚕蛹3％，黄豆13％，白粉3％，鱼粉5％。
一种根据所述的的高脂饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量600g老鼠基础饲料和10g花生，混匀，加入黄城HC-2000粉碎机，38000rpm/min,粉碎20min；
(2)将基础饲料和花生粉末置于不锈钢盆中，加入500ml蒸馏水，混匀；
(3)依次往不锈钢盆中加入0.1g蔗糖、10g猪油、2g香油和4g鸡蛋，混匀；
(4)定型，采用RX-120小型饲料加工颗粒机对上述混合物压制成圆柱状：长5cm，直径2cm；
(5)烘干，将圆柱状高脂饲料置于烘箱中，50℃，烘干10h。
具体实施例2
一种根据所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂饲料，包括如下组分：
所述普通饲料中以重量比计算：玉米30％，麸皮46％，蚕蛹3％，黄豆13％，白粉3％，鱼粉5％。
一种根据所述的的高脂饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量700g老鼠基础饲料和15g花生，混匀，加入黄城HC-2000粉碎机，38000rpm/min,粉碎20min；
(2)将基础饲料和花生粉末置于不锈钢盆中，加入500ml蒸馏水，混匀；
(3)依次往不锈钢盆中加入0.5g蔗糖、15g猪油、4g香油和8g鸡蛋，混匀；
(4)定型，采用RX-120小型饲料加工颗粒机对上述混合物压制成圆柱状：长5cm，直径2cm；
(5)烘干，将圆柱状高脂饲料置于烘箱中，80℃，烘干12h。
具体实施例3
一种所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂饲料，包括如下组分：
所述普通饲料中以重量比计算：玉米30％，麸皮46％，蚕蛹3％，黄豆13％，白粉3％，鱼粉5％。
一种根据所述的的高脂饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)称量652g老鼠基础饲料和13g花生，混匀，加入黄城HC-2000粉碎机，38000rpm/min,粉碎20min；
(2)将基础饲料和花生粉末置于不锈钢盆中，加入500ml蒸馏水，混匀；
(3)依次往不锈钢盆中加入0.3g蔗糖、13g猪油、2.5g香油和6g鸡蛋，混匀；
(4)定型，采用RX-120小型饲料加工颗粒机对上述混合物压制成圆柱状：长5cm，直径2cm；
(5)烘干，将圆柱状高脂饲料置于烘箱中，60℃，烘干11h。
图1是本发明中的A组大鼠的胰岛β-细胞的电镜示意图。从图中可得出如下结论：A组空白大鼠胰岛细胞中，胰岛颗粒较多，均匀的分布于细胞核周围。
图2是本发明中的B组大鼠的胰岛β-细胞的电镜示意图。从图中可得出如下结论：B组糖尿病大鼠的胰岛细胞中的胰岛颗粒数量明显减少，且大量空泡化。
图3是本发明中的A、B两组大鼠的体重变化示意图。从图中可得出如下结论：由高脂饲料结合低剂量STZ诱导的糖尿病大鼠的体重相对于空白组的健康大鼠明显下降。
图4是本发明中的A、B两组大鼠的血糖变化示意图。从图中可得出如下结论：由高脂饲料结合低剂量STZ诱导的糖尿病大鼠的空腹血糖相对于空白组的健康大鼠明显升高。
因此，本发明中的实验结果表明：由本高脂饲料结合低剂量的STZ诱导的B组糖尿病大鼠相对于A空白大鼠的体重明显下降，而空腹血糖明显升高；A组空白大鼠胰岛细胞中，胰岛颗粒较多，均匀的分布于细胞核周围，而B组糖尿病大鼠的胰岛细胞中的胰岛颗粒数量明显减少，且大量空泡化，这说明B组糖尿病大鼠的胰岛细胞受到了一定程度的损伤，胰岛素分泌功能受损。本发明制作简单、成本低，造模成功率高，老鼠死亡率低，造模成功后血糖稳定，对于Ⅱ型糖尿病的研究具有重要意义。
本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)实验老鼠的培养：
56只SD雄性大鼠，为SPF级，体重200-250g，8周鼠龄，所有的大鼠饲养在温度22±1℃、湿度50±10％、12h昼夜交替的环境中；
(2)模型建立：
56只SD雄性大鼠在动物实验室适应性适应一周后，随机分成两组：A组8只，B组48只；A组每天给予普通老鼠饲料，B组每天给予高脂饲料，喂养8周之后，空腹12h，但不断水，称重，B组按照25mg/kg的剂量腹腔注射溶于柠檬酸缓冲液的STZ溶液，其pH值为4.2–4.5，A组腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液；一周之后，空腹12h，尾静脉取血测定大鼠的空腹血糖，B组中血糖大于11.1mmol/L的大鼠造模成功，用于后续的糖尿病相关的试验研究；
(3)大鼠胰岛β-细胞的电镜观察：
在电镜中观察得到：A组大鼠胰岛细胞中，胰岛颗粒较多，均匀的分布于细胞核周围；而B组大鼠的胰岛细胞中的胰岛颗粒数量明显减少，且大量空泡化。
2.一种如权利要求1所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂饲料，其特征在于：包括如下组分：
3.根据权利要求2所述的高脂饲料，其特征在于：所述普通饲料中以重量比计算：玉米30％，麸皮46％，蚕蛹3％，黄豆13％，白粉3％，鱼粉5％。
4.一种根据权利要求2所述的的高脂饲料的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)称量600-700g老鼠基础饲料和10-15g花生，混匀，加入黄城HC-2000粉碎机，38000rpm/min,粉碎20min；
(2)将基础饲料和花生粉末置于不锈钢盆中，加入500ml蒸馏水，混匀；
(3)依次往不锈钢盆中加入0.1-0.5g蔗糖、10-15g猪油、2-4g香油和4-8g鸡蛋，混匀；
(4)定型，采用RX-120小型饲料加工颗粒机对上述混合物压制成圆柱状：长5cm，直径2cm；
(5)烘干，将圆柱状高脂饲料置于烘箱中，50-80℃，烘干10-12h。
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