CN101193882A - 作为pdf抑制剂的n-甲酰基羟基胺化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了新的N－甲酰基羟基胺化合物(I)及其衍生物。这些N－甲酰基羟基胺化合物抑制存在于原核生物中的酶--肽基脱甲酰基酶(PDF)。该化合物可用作抗微生物剂和抗生素。本发明化合物相对于其它金属蛋白酶诸如MMP可选择性抑制肽基脱甲酰基酶。还公开了该化合物的制备方法和用途。式I中，R1是氢、烷基、杂烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；R3是氢、卤素或烷氧基；R4是芳基或杂芳基；n是0至3，并且，条件是R1是环烷基和/或R4是任选取代的在环中含有2、3或4个环氮杂原子的6元单环杂芳环，其中一个或多个环氮杂原子任选地被氧化。

Description

作为PDF抑制剂的N-甲酰基羟基胺化合物
本发明涉及新的N-甲酰基羟基胺化合物、这些化合物在各种医学应用、包括治疗可通过用肽基脱甲酰基酶抑制剂治疗而改善的病症中的用途，诸如细菌感染的治疗，并且涉及包含这些化合物的药物组合物。
在宿主生物体中治疗微生物感染需要可以杀死微生物并且同时对宿主产生的损害尽可能小的有效方法。因此，靶向于致病微生物所特有的特征的试剂是治疗所需的。
肽脱甲酰基酶是可见于原核生物体诸如细菌的金属肽酶。在原核生物体内的蛋白合成开始于N-甲酰基蛋氨酸(fMet)。蛋白合成开始后，甲酰基通过肽脱甲酰基酶(PDF)除去；该活性对蛋白的成熟是必需的。
金属蛋白酶对于正常新陈代谢的各个方面是至关重要的。涉及金属蛋白酶的病症包括多种疾病诸如癌症、关节炎和自身免疫疾病。由于MMP在正常生理过程中的重要性，优选开发可抑制PDF并且同时避免对MMP的显著抑制的试剂。或者，在抑制PDF的治疗益处大于抑制MMP所引起的副作用的风险时，可使用也抑制MMP的PDF抑制剂。
对PDF抑制剂的研究远没有对MMP抑制剂的研究深入。N-甲酰基羟基胺衍生物在WO 99/39704和WO 02/102790中有记载。鉴于识别新的抗生素以治疗对现有抗生素耐药的细菌的重要性，需要开发新的PDF抑制剂用于评价并且用作抗菌剂和抗微生物剂。本发明满足了这些需要。
具体地讲，本发明提供了N-甲酰基羟基胺衍生物(在本文中统一称作“本发明化合物”)、其盐或其前药，例如，式(I)化合物：
Figure S2006800181180D00021
其中R1是氢、烷基、杂烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
R3是氢、卤素或烷氧基；并且
R4是芳基或杂芳基；
n是0至3，
其盐或其前药。
一方面，R4是式(II)的杂芳基
Figure S2006800181180D00022
或
Figure S2006800181180D00023
或
其中R6、R7、R8和R9各自独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯基、卤素、羟基或烷氧基，
例如，其中
a.)R6和R8是氢、R9是氢或烷基并且R7是烷基、取代的烷基或苯基；
b.)R6、R7和R9是氢并且R8是卤素、烷基或取代的烷基；
c.)R7、R8和R9是氢并且R6是羟基。
在一个特别有用的方面，杂芳基是式(II.1)
Figure S2006800181180D00025
其中R6、R7和R9如以上式(II)中所定义并且R8是卤素，例如氟。
在另一方面，R4是式(II.2)
其中R6、R7和R8如以上式(II)中所定义。
在另一方面，R4是式(II.3)
Figure S2006800181180D00032
其中R6、R7和R8如以上式(II)中所定义。
在另一方面，R4是式(II.4)
Figure S2006800181180D00033
其中R6、R7和R8如以上式(II)中所定义。
在另一方面，R4是式(II.5)
Figure S2006800181180D00034
其中R6、R7和R8如以上式(II)中所定义。
除非另有指明，说明书中所用的下列术语具有下面的含义。
术语“环烷烃”或“环烷基”含有3-至7-个环碳原子，优选环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语“脂烃基”是指饱和或不饱和的脂肪族基团，例如烷基、链烯基或炔基、环烷基或取代的烷基，包括含有1-10个碳原子的直链、支链和环状基团。术语“烷基”或“alk”(当其出现时)是1-10个碳原子的饱和直链或支链基团或3-10个碳原子的环烷基，更优选的烷基是C1-C7烷基，尤其是C1-C4烷基。“烷基”或“alk”的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、正己基或正庚基、环丙基，尤其是正丁基。
术语“取代的烷基”是指被一个或多个取代基、优选1至3个取代基取代的烷基，所述的取代基包括但不限于例如卤素、低级烷氧基、羟基、巯基、羧基、环烷基、芳基、杂芳基等取代基。取代的烷基的实例包括但不限于-CF3、-CF2-CF3、羟基甲基、1-或2-羟基乙基、甲氧基甲基、1-或2-乙氧基乙基、羧基甲基、1-或2-羧基乙基等。
术语“芳基“或“Ar”是指6至14个碳原子的芳香族碳环基团，其具有单环(包括但不限于诸如苯基之类的基团)或多个稠环(包括但不限于诸如萘基或蒽基之类的基团)，尤其是苯基。
术语“杂芳基“或“HetAr”是指4-至7-元的单环芳香族杂环或由4-至7-元的单环芳香族杂环和稠合的苯环构成的二环。杂芳基在环内具有至少一个杂原子，优选至少两个杂原子，包括但不限于杂原子诸如N、O和S。优选的杂芳基部分是在环中含有2、3或4个氮杂原子的6元的单环杂环。杂芳基的实例是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哒嗪基N-氧化物或苯并二氧戊环基、三嗪或四嗪。
芳基或杂芳基可以是未取代的，或者被一个或多个取代基所取代，所述的取代基包括但不限于C1-7烷基，尤其是C1-4烷基诸如甲基、羟基、烷氧基、酰基、酰氧基、SCN、氰基、硝基、硫代烷氧基、苯基、杂烷基芳基、烷基磺酰基、卤素和甲酰基。
术语“杂烷基”是指以上所定义的饱和或不饱和的C1-8烷基，尤其是C1-4杂烷基，它们含有一个或多个杂原子作为基团的主链、支链或环状链的一部分。杂原子可独立地选自-NR-(其中R是氢或烷基)、-S-、-O-和-P-；优选-NR-(其中R是氢或烷基)和/或-O-。杂烷基可在杂原子(如果有可利用的价键)或者在碳原子处连接到分子的其余部分上。杂烷基的实例包括但不限于基团诸如-O-CH3、-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-O-CH3、-S-CH2-CH2-CH3、-CH2-CH(CH3)-S-CH3和-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-。
杂烷基可以是未取代的，或者被一个或多个、优选1至3个取代基所取代，所述的取代基包括但不限于烷基、卤素、烷氧基、羟基、巯基、羧基，尤其是苯基。该基团的杂原子和碳原子可以被取代。杂原子还可以是氧化的形式。
本文所用的术语“烷氧基”是指连接到氧原子上的C1-10烷基，优选C1-7烷氧基，更优选C1-4烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于基团诸如甲氧基、乙氧基、正丁氧基、叔丁氧基和烯丙氧基。
本文所用的术语“卤素”是指氯、溴、氟、碘，尤其是氟。
“保护基”是指具有以下特征的化学基团：1)选择性地与所需官能团以良好的收率反应以得到被保护的反应物，所述反应物对需要保护的所设计的反应来说是稳定的；2)可选择性地从被保护的反应物中除去以产生所需的官能团；和3)可通过与存在于或产生于所设计的反应的其它官能团相容的试剂以良好的收率除去。适当的保护基的实例可参见Greene等人，“Protective Groups in Organic Synthesis”，2nd Ed.，John Wiley & Sons，Inc.，New York(1991)。优选的氨基保护基包括但不限于苄氧基羰基(CBz)、叔丁氧基羰基(Boc)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)或适当的光不稳定性保护基诸如6-硝基藜芦基氧基羰基(Nvoc)、硝基胡椒基、芘基甲氧基羰基、硝基苄基、二甲基二甲氧基苄基、5-溴-7-硝基二氢吲哚基等。优选的羟基保护基包括Fmoc、TBDMS、光不稳定性保护基(诸如硝基藜芦基氧基甲基醚(Nvom))、Mom(甲氧基甲基醚)和Mem(甲氧基乙氧基甲基醚)。特别优选的保护基包括NPEOC(4-硝基苯乙基氧基羰基)和NPEOM(4-硝基苯乙基氧基-甲基氧基羰基)。
应该意识到，式(I)化合物可以旋光异构体、外消旋体或非对映体的形式存在。例如，其中R3可以是R-或S-构型的式(I)化合物。应当理解，本发明包括所有对映体及其混合物。类似的考虑应用于如上所述的具有不对称碳原子的原料。
本发明化合物可以固体结晶盐的形式存在。优选的结晶盐是金属盐，优选二价金属，尽管对于某些化合物来说，也可以通过利用单价反荷离子诸如Na形成结晶固体。反荷离子优选是Mg、Ca或Zn。
本发明化合物通常是水合物或混合型溶剂化物/水合物的形式。本发明的结晶盐通常含有约2至8个水合水，更优选含有约2至6个水合水，甚至更优选含有约2至4个水合水。因此，本发明的结晶盐通常包含2％以上的水，更优选含有约4至约12％的水，甚至更优选含有约8至约9％的水。溶剂化物可以是一种或多种有机溶剂，诸如低级烷基醇，诸如甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇或其混合物的溶剂化物。
本发明化合物例如式(I)化合物可以游离形式或盐形式、例如以可药用盐的形式存在。化合物的“可药用盐”是指具有母体化合物的所需的药物活性并且不会产生不需要的毒理学作用的生理学和药物学上可接受的盐。所述的盐包括：
(1)与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等所形成的酸加成盐；或与有机酸例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等所形成的酸加成盐；或者
(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子、例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子所代替而形成的盐；或者与有机碱诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位所形成的盐。
本发明化合物例如式(I)化合物可作为前药。“前药”是指当将所述前药施用于哺乳动物个体时可在体内释放式(I)的活性母体药物的任何化合物。式(I)化合物的前药可按照以下方式修饰存在于式(I)化合物中的官能团来制得：所述的修饰可在体内分解以释放母体化合物。前药包括以下式(I)化合物：其中羟基、氨基或巯基连接到可在体内分解以产生游离羟基、氨基或巯基的任何基团上。前药的实例包括但不限于式(I)化合物中的羟基官能团的酯类(例如乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)、氨基甲酸酯(例如N，N-二甲基氨基-羰基)等。
在式(I)化合物中，下面的含义是单独优选的或以任意亚组合优选的：
1.R4是式(II.1)的杂芳基，其中R6、R7和R9是氢且R8是氟，R6、R7和R9是氢且R8是甲基或三氟甲基；或R6、R7和R8是氢且R9是氟；或R6、R8和R9是氢且R7是乙基或甲氧基；或R7、R8和R9是氢且R6是羟基；或R7和R8是氢、R6是甲氧基且R9是甲基；或R4是式(II.2)的杂芳基，其中R6、R7和R8是氢，或R4是式(II.3)的杂芳基，其中R6、R7和R8是氢，或R4是式(II.4)的杂芳基，其中R6、R7和R8是氢，或R4是式(II.5)的杂芳基，其中R6、R7和R8是氢。
2.R1是烷基，优选正丁基或环烷基，优选C3-7环烷基诸如环己基、环丙基或环戊基。
4.R3是卤素、优选氟。
实用性
本发明化合物可用于治疗或预防由各种细菌或原核生物引起的感染性疾病。其实例包括但不限于革兰氏阳性和格兰氏阴性需氧和厌氧细菌，包括葡萄球菌属，例如金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌；肠球菌属，例如粪肠球菌和屎肠球菌；链球菌属，例如肺炎链球菌；嗜血菌属，例如流感嗜血菌；莫拉氏菌属，例如粘膜炎莫拉氏菌；和埃希氏菌属，例如大肠杆菌。其它的实例包括分枝杆菌属，例如结核分枝杆菌；细胞间微生物，例如衣原体和立克次氏体；以及支原体，例如肺炎支原体；和假单胞菌属，例如铜绿假单胞菌；幽门螺旋杆菌；和寄生物，例如疟原虫。
本发明化合物在抑制革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌的微生物学效力方面优选具有实质性的改善。具体地讲，由于对革兰氏阴性和/或革兰氏阳性细菌诸如流感嗜血菌和肺炎链球菌具有改进的抑制性，本发明化合物在其微生物学活性谱方面具有显著的改善。例如，在一个例子中，对于改善的对流感嗜血菌的抑制作用，平均比较指数(average comparative index，ACI)大于3个稀释步骤，并且对于改善的对肺炎链球菌的抑制作用，显示ACI为0.4个稀释步骤。在另一个例子中，对于改善的对肺炎链球菌的抑制作用，ACI为3个稀释步骤，并且对于改善的对流感嗜血菌的抑制作用，显示ACI为1.2个稀释步骤。
本发明化合物还优选具有改进的安全性、毒性和药动学性能，例如，相对于现有技术的化合物可降低或消除在人中的潜在不利事件。
一方面，提供了用于治疗或预防感染病症的组合物，该组合物包含本文所公开的本发明化合物、其可药用盐或其前药以及可药用载体。在另一种实施方案中，该组合物还进一步包含另一种治疗剂。
另一方面，提供了本文所公开的本发明化合物、其可药用盐或其前药的剂量，该剂量为治疗、预防或缓解病症诸如感染病症的有效量。可针对不同的生物学试剂筛选这些化合物或其衍生物的活性并且可以用本领域已知的方法确定适宜的剂量。
本发明的化合物可用于对物体进行处理，以治疗、预防或降低感染的严重程度。所述的物体包括动物、植物、血液产品、培养物和表面诸如医学或研究设备的表面，例如玻璃、针、手术设备和管道系统，以及用于临时或永久植入生物体内的物体。优选的动物包括哺乳动物例如小鼠、大鼠、猫、狗、牛、绵羊、猪、马、灵长类动物诸如猕猴、黑猩猩、大猩猩，最优选人。治疗个体包括但不限于预防、减轻或消除由微生物感染个体所引起的临床症状；预防、减轻或消除微生物对个体的感染；或预防、减轻或消除微生物对个体的污染。所涉及的微生物优选是原核生物，更优选细菌。
另一方面，提供了用于治疗或预防对抑制肽基脱甲酰基酶有响应的个体诸如人或其它动物个体的感染病症的方法，该方法包括向所述个体施用抑制肽基脱甲酰基酶有效量的本发明化合物、其可药用盐或其前药。在一种实施方案中，将该化合物或其衍生物以可药用的形式、任选地在可药用的载体中进行给药。本发明化合物、其可药用盐或其前药可单独给药，或者与另一种治疗剂一起组合给药。所述治疗剂的实例包括但不限于β-内酰胺、喹诺酮、大环内酯、糖肽和唑烷酮。本文所用的“感染病症”是特征在于存在微生物感染、诸如存在细菌的任何病症。所述的感染病症包括例如中枢神经系统的感染、外耳道的感染、中耳道的感染诸如急性中耳炎、脑硬膜窦的感染、眼睛的感染、口腔的感染诸如牙齿、牙床和粘膜的感染、上呼吸道的感染、下呼吸道的感染、泌尿生殖器的感染、胃肠的感染、妇科感染、败血病、骨和关节的感染、皮肤和皮肤结构的感染、细菌性心内膜炎、烧伤、手术的抗菌预防、免疫抑制患者诸如接受癌症化学疗法的患者或器官移植患者的抗菌预防和感染性生物体引起的慢性疾病例如动脉硬化。该化合物和包含该化合物的组合物可通过诸如局部或全身的途径给药。全身应用包括将该化合物引入体内组织的任何方法，例如鞘内、硬膜外、肌内、经皮、静脉内、腹膜内、皮下、舌下、鼻内、阴道、直肠和口服给药。在需要时可调节待给药的抗菌剂的具体剂量以及治疗的持续时间。
本发明的另一方面还提供了抑制肽基脱甲酰基酶的方法。在一种实施方案中，该方法包括向需要治疗的个体施用抑制肽基脱甲酰基酶有效量的式(I)化合物、其可药用盐或其前药。术语“个体”和“抑制肽基脱甲酰基酶有效量”如以上所定义。
本发明的另一方面还提供了以上所定义的式(I)化合物、其可药用盐或其前药在制备用于治疗肽基脱甲酰基酶所介导的疾病的药物中的用途。
给药和药物组合物
本发明还提供了包含生物活性的N-甲酰基羟基胺化合物、其可药用盐或其前药和可药用载体的药物组合物。本发明的组合物包括适于口服、局部或胃肠外使用的组合物形式，并且可用于治疗个体诸如动物、优选哺乳动物、更优选人的细菌感染。药物组合物可进一步包括以下所述的另一种治疗剂。
可将本发明的抗生素化合物(在本文中也被称作抗微生物化合物)通过类似于其它抗生素的方法进行配制以通过用于人和兽医的任何常规方式进行给药。该方法在本领域是已知的(参见例如Remington’s PharmaceuticalSciences，Easton，PA：Mack Publishing Co.)，在本文中不再详细地描述。
将该组合物进行配制以用于通过本领域已知的任何途径给药，诸如皮下、吸入、口服、局部或胃肠外给药。该组合物可以是本领域已知的任何形式，包括但不限于片剂、胶囊、糯米纸囊剂、快速崩解片(不含糯米纸)、散剂、粒剂、锭剂、霜剂或液体制剂诸如口服或无菌的胃肠外溶液或混悬液。该化合物还可以以脂质体、胶团或微乳液制剂的形式给药。该化合物还可以前药的形式给药，其中施用的前药在被治疗的哺乳动物体内进行生物转化而形成具有生物学活性的物质。
本发明的局部制剂可以以例如软膏、霜剂或洗液、溶液、油膏、乳液、硬膏剂、眼膏和滴眼液或滴耳液、浸渍药膏(impregnated dressings)、透皮贴剂、喷雾剂和气雾剂的形式存在，并且可以含有适当的常规添加剂诸如防腐剂、有助于药物渗透的溶剂以及软膏和霜剂中的软化剂。
该制剂还可含有相容的常规载体诸如霜剂或软膏基质和用于洗液的乙醇或油醇。所述载体的存在量为例如制剂的约1％至约99％。例如，它们最高可达制剂的约80％。
用于口服给药的片剂和胶囊可以是单位剂量的存在形式，并且可含有常规赋形剂诸如粘合剂例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、西黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂例如马铃薯淀粉；或可接受的润湿剂诸如月桂基硫酸钠。可将片剂按照标准药物实践中的已知方法进行包衣。
口服液体制剂可以是例如水性或油性混悬液、溶液、乳液、糖浆或酏剂的形式，或者以在使用前用水或另一种适当的载体重新构建的干燥产物的形式存在。所述的液体制剂可含有常规添加剂，诸如助悬剂例如山梨醇、甲基纤维素、葡萄糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化的可食用脂肪；乳化剂例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(其可包括可食用油)，例如，杏仁油、油性酯、诸如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸，和，如果需要的话，常规的矫味剂或着色剂。
对于胃肠外给药，利用化合物和无菌载体、优选水制得流体单位剂型。根据所用的载体和浓度的不同，将化合物悬浮或溶于载体或其它适当的溶剂中。在制备溶液的过程中，将该化合物溶于注射用水并过滤杀菌，然后填充到适当的小瓶或安瓿中并密封。有利地是，诸如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂之类的试剂可溶于载体。为了提高稳定性，可将该组合物填充入小瓶内之后进行冷冻并真空除去水。然后将干燥的冻干粉末密封在小瓶中，并可提供注射用水的随同小瓶以在使用前重新构建液体。胃肠外混悬液按照基本上相同的方式制得，所不同的是将化合物悬浮而不是溶解在载体中，并且杀菌不能通过过滤完成。将该化合物通过与环氧乙烷接触而进行杀菌，然后悬浮在无菌载体中。有利地是，该组合物还包含表面活性剂或润湿剂以利于化合物的均匀分布。
该组合物可含有例如约0.1重量％至约99重量％、例如约10-60重量％的活性物质，这取决于给药的方法。在该组合物包含单位剂量的情况下，每一单位剂量包含例如约1-1000mg的活性成分。用于成人治疗的剂量是例如约1-3000mg/天，例如1500mg/天，这取决于给药途径和频率。该剂量相当于约0.015-50mg/kg/天。该剂量适宜地是例如约5-20mg/kg/天。
含有式(I)化合物的代表性的药物制剂如下所述。
本发明还提供了制备本发明化合物、例如式(I)化合物的方法，该方法包括将式(V)化合物或其官能团衍生物
Figure S2006800181180D00111
其中R1和R2如以上所定义，Y是羟基保护基，
与式(VI)化合物反应
Figure S2006800181180D00121
其中R3和R4如以上所定义，并且n等于1，并且，如果需要，将形成的以游离形式得到的化合物转化成盐的形式，反之亦然。
式(V)化合物的官能团衍生物包括酰氯、酸酐或活性酯。
上述反应可按照本领域已知的方法或按照以下实施例中公开的方法进行。反应通常在碱的存在下进行，然后氢化，优选在氢化催化剂的存在下氢化。适当的碱包括例如Hunig碱(即，二异丙基乙基胺)和无机碱诸如碳酸氢钠。然后将氢化催化剂、优选钯催化剂例如钯碳或钯黑例如在浓缩后加入到所形成的产物中，并且在氢气氛下搅拌例如约16至约24小时。钯催化剂的加入量优选是浓缩产物的约5mol％至约10mol％。
用作原料的式(V)化合物例如可通过以下方法制得：将式(VII)化合物
Figure S2006800181180D00122
其中R1、R2和Y如以上所定义，例如在本领域已知的温和碱性条件下进行反应。该反应通常按照以下方法进行：将式(VII)化合物溶于惰性溶剂诸如THF、DMF、甲苯、二恶烷或CH2Cl2和水的混合物，然后将过氧化氢和碱的水溶液加入到冷却的混合物中。碱的实例包括例如碳酸氢钠、氢氧化锂、氢氧化钠等。碱的用量优选是式(VII)化合物的约1.1至约1.5当量。
式(VII)化合物可通过例如将式(VIII)化合物(其中R1、R2和Y如以上所定义)与甲酸按照本领域已知的方法反应来制得。反应通常在例如0℃下通过将乙酸酐的甲酸溶液加入到式(VIII)化合物的甲酸溶液中来进行。
Figure S2006800181180D00131
式(VIII)化合物可通过例如将式(IX)化合物(其中R1、R2和Y如以上所定义)与对甲苯磺酸在惰性有机溶剂中的溶液和Na2CO3溶液(例如1M)按照本领域已知的方法反应来制得。
式(IX)化合物可通过例如将式(X)化合物(其中R1如以上所定义)与羟基保护的式(XI)化合物(其中Y是芳基、烷基、芳烷基或甲硅烷基)按照本领域已知的方法反应来制得。
式(X)化合物可通过例如将式(XII)化合物与新戊酰氯按照本领域已知的方法反应来制得，其中R4如以上所定义。
当对原料的制备没有具体描述时，该化合物是已知的，或可按照与本领域已知的方法相类似的方法或以下实施例公开的方法制得。
对于所有的目的而言，在本文中将本申请引用的所有专利、专利申请和出版物全文引入作为参考，其程度如同将每一专利、专利申请或出版物单独指出一样。
使用下面的缩写词：
AcOH，HOAc＝乙酸
Ac2O＝乙酸酐
BOC，Boc＝叔丁氧基羰基
DCM＝二氯甲烷
DIEA＝二异丙基乙基胺
DMF＝二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲基亚砜
Et＝乙基
EtOAc＝乙酸乙酯
Fmoc，FMOC＝9-芴基甲氧基羰基
HATU＝O-(7-氮杂-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐
MCPBA＝间氯过氧苯甲酸
Me＝甲基
MeOH＝甲醇
MMP＝基质金属蛋白酶
NVOM＝硝基藜芦基氧基甲基醚
p-TSA＝对甲苯磺酸
RT＝室温
TFA＝三氟乙酸
tBu＝叔丁基
THF＝四氢呋喃
THP＝2-四氢吡喃基
TsOH或p-TSA＝甲苯磺酸
一般合成流程
本发明化合物可通过以下反应流程所述的方法进行制备。
用于制备这些化合物的原料和试剂要么购买自供应商诸如AldrichChemical Co.，(Milwaukee，Wisconsin，USA)、Bachem(Torrance，California，USA)、Emka-Chemie或Sigma(St.Louis，Missouri，USA)，要么通过本领域技术人员已知的方法按照以下参考文献所述的方法制得：诸如Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis，第1-15卷(JohnWiley和Sons，1991)；Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds，第1-5卷和增补卷(Elsevier Science Publishers，1989)，Organic Reactions，第1-40卷(John Wiley和Sons，1991)，March’s Advanced Orgainc Chemistry，(JohnWiley和Sons，第4版)和Larock’s Comprehensive OrganicTransformations(VCH Publishers Inc.，1989)。这些流程仅仅是用来解释可以合成本发明化合物的某些方法，参照本文所公开的内容，本领域技术人员可以对这些流程进行和提出各种改进。
如果需要，将反应的原料和中间体用常规技术进行分离和纯化，该常规技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等。将所述物质用常规方法进行表征，包括物理常数和波谱数据。
                      式(I)化合物的制备
式(I)化合物可通过有机化学领域已知的方法制得。以下详细地解释并描述了用于制备本发明化合物的代表性的合成方法。例如，式(I)化合物可按照以下流程A-B所述的方法制得。
一般方法A：1-{2(R)-[(甲酰基羟基氨基)-甲基]-烷酰基}-吡咯烷-2(S)-甲酸酰胺的合成
Figure S2006800181180D00161
步骤1：2-正丁基丙烯酸(A-2)
向烷基丙二酸A-1(R＝正丁基(107.4mmol)的乙醇(200mL)溶液中加入哌啶(12.7mL，128.8mmol，1.2当量)和37％甲醛水溶液(40.0mL，536.9mmol，5当量)。将该溶液加热至80℃，在这期间出现沉淀物，然后在1小时内逐渐地重新溶解。将反应混合物在80℃下搅拌过夜，然后冷却至室温(rt)。减压除去溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯，依次用1M HCl和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液浓缩得到澄清油状标题化合物A-2。
步骤2：4-苄基-3-(2-丁基-丙烯酰基)-唑烷-2-酮(A-3)
将2-正丁基丙烯酸(9.90g，77.2mmol，和1当量)溶于干燥的THF(260mL)并在氮气氛下冷却至-78℃。以能够将温度保持在-60℃以下的速率加入Hunig碱(17.5mL，100.4mmol，1.3当量)和新戊酰氯(9.5mL，77.2mmol，1当量)。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，在室温下加热2小时，最后冷却到-78℃。
在另一个烧瓶中，将(S)-(-)-4-苄基-2-唑烷酮(13.49g，77.24mmol)溶于干燥的THF(150mL)并在氮气氛下冷却至-78℃。在-78℃下缓慢加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，30.9mL，77.2mmol，1当量)并将混合物在室温下搅拌30分钟。将形成的阴离子通过插管缓慢转移到原始的反应容器中。将混合物升温至室温并在室温下搅拌过夜。将反应液用1M KHCO3终止反应并减压除去溶剂。将残余物在乙酸乙酯和水之间进行分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到黄色油，将其通过快速色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)得到白色固体状标题化合物A-3(15.0g，52.2mmol，68％)。
步骤3：4-苄基-3-[2-(苄氧基氨基-甲基)-己酰基]-唑烷-2-酮(对甲苯磺酸盐)
将化合物A-3(8.25g，28.7mmol)与O-苄基羟基胺(7.07g，57.4mmol，2当量)相混合并在室温下在氮气下搅拌40小时。将该混合物溶于乙酸乙酯并加入对甲苯磺酸(21.84g，114.8mmol，4当量)以沉淀析出过量的白色固体状的O-苄基羟基胺。滤出该白色固体，将滤液浓缩得到粗品黄色油(HPLC分析表明有痕量的起始原料)。向该粗品黄色油中加入过量的二乙醚，然后在0℃下冷却30分钟以得到固体，将该固体通过过滤收集，真空干燥得到白色结晶固体状标题化合物(单一的非对映体)。
步骤4：4-苄基-3-[2-(苄氧基氨基-甲基)-己酰基]-唑烷-2-酮(A-5)
向p-TSA盐(22.9g，393mmol)的乙酸乙酯(400mL)溶液中加入1MNa2CO3(200mL，5当量)并在室温下搅拌30分钟。分层，将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到浅色不透明油状物形式的标题化合物(15.8g，38.6mmol，98％)。
步骤5：N-[2-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-羰基)-己基]-N-苄氧基-甲酰胺(A-6)
将化合物A-5(5.38g，13.1mmol，1当量)的甲酸(7.4mL，196.6mmol，15当量)溶液在氮气氛下冷却至0℃。在另一个烧瓶中，将甲酸(7.4mL，196.6mmol，15当量)在氮气氛下冷却至0℃，然后滴加乙酸酐(2.47mL，26.2mmol，2当量)。将该溶液在0℃下搅拌15分钟。将形成的混合酸酐通过注射器缓慢转移到原始的反应容器中。将混合物在0℃下搅拌1小时，然后在室温下搅拌3小时。将混合物浓缩，向其中加入二氯甲烷并依次用饱和NaHCO3和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到不透明的油，将其通过快速色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1，然后是二氯甲烷∶丙酮＝9∶1)得到无色油状标题化合物。
步骤6：2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酸(A-7)
将化合物A-6(0.163g，0.372mmol，1当量)溶于THF(4.5mL)和水(1.5mL)并冷却至0℃。滴加过氧化氢(30％的水溶液，228μL，2.23mmol，6当量)，然后缓慢加入氢氧化锂(0.019g，0.446mmol，1.2当量)的水(350μL)溶液。将形成的混合物在0℃下搅拌1.5小时。将碱性反应混合物在0℃下用Amberlite IR-120树脂(H+)终止反应至pH 4-5。滤出树脂并用乙酸乙酯冲洗。将混合物浓缩以除去THF，然后向其中加入乙酸乙酯。将水层分离，将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到不透明的油，通过快速色谱纯化(二氯甲烷∶丙酮＝4∶1，然后是丙酮∶甲醇＝99∶1)得到无色油状标题化合物A-7。
步骤7：1-{2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸酰胺
向化合物A-7(0.190g，0.680mmol，1当量)的干燥二恶烷(4mL)溶液中在室温及氮气下依次加入Hunig碱(391μL，2.24mmol，3.3当量)、胺A-8(0.748mmol，1.1当量)和HATU(0.284g，0.748mmol，1.1当量)。将形成的混合物在室温下搅拌22小时。将混合物在乙酸乙酯和10％柠檬酸之间进行分配。将有机层用盐水和饱和NaHCO3洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(二氯甲烷∶丙酮＝3∶1)得到无色油状标题化合物。
步骤2：1-{2-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸酰胺(A-9)
将Pd-C(0.059g，0.1当量)在氮气氛下加入到以上化合物(0.550mmol，1当量)在1∶1乙酸乙酯/乙醇溶液(12mL)中的溶液中。将混合物在氢气氛下搅拌36小时。通过用硅藻土垫过滤来除去催化剂。将滤液浓缩，将残余物通过制备型TLC纯化(二氯甲烷∶丙酮＝2∶1)得到无定形固体状标题化合物(0.121g，0.334mmol，61％)。
一般方法B：1-{2(R)-[(甲酰基羟基氨基)-甲基]-烷酰基}-吡咯烷-2(S)-甲酸酯的合成
Figure S2006800181180D00191
X＝CH2、-S-、-CH(OH)-、-CH(OR)-、-CF2-或-CH(F)-；n＝0至3
步骤1：1-{2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸酯
向化合物A-7(0.680mmol，1当量)的干燥二恶烷(4mL)溶液中在室温及氮气下依次加入Hunig碱(391μL，2.24mmol，3.3当量)、胺A-10(0.748mmol，1.1当量)和HATU(0.284g，0.748mmol，1.1当量)。常规的后处理和纯化得到标题化合物。
步骤2：1-{2-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸酯(A-11)
将Pd-C(0.059g，0.1当量)在氮气氛下加入到上述化合物(0.550mmol)在1∶1乙酸乙酯/乙醇溶液(12mL)中的溶液中。将混合物在氢气氛下搅拌36小时。通过用硅藻土垫过滤来除去催化剂。将滤液浓缩，将残余物通过制备型TLC纯化(二氯甲烷∶丙酮＝2∶1)得到标题化合物。
一般方法C：吡咯烷-2-S-甲酸吡啶-2-基酰胺(A-8)(X＝CH2，n＝1，R1＝2-吡啶基)的制备
步骤1：2-S-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸苄基酯
Figure S2006800181180D00201
将Z-prochloride(5.0g，18.7mmol，1当量)的吡啶(40mL)溶液在氮气氛下冷却至0℃。滴加2-氨基吡啶(5.27g，56.0mmol，3当量)的吡啶(10mL)溶液。将形成的混合物在室温下搅拌4小时，然后浓缩。将残余的油溶于乙酸乙酯并依次用水、10％柠檬酸、饱和NaHCO3和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到不透明固体状标题化合物(4.21g，13.0mmol，69％)。
步骤2：吡咯烷-2-S-甲酸(吡啶-2-基)酰胺氢溴酸盐
Figure S2006800181180D00202
将以上化合物(4.21g，13.0mmol，1当量)的乙酸(65mL)溶液在室温下用HBr(5.7M，33％的乙酸溶液，110mL，649mmol，50当量)处理，然后将该混合物在室温下搅拌2小时。向反应混合物中加入过量的二乙醚，然后在0℃下冷却30分钟得到固体，将该固体通过过滤收集，然后真空干燥得到棕色粉末状标题化合物。
一般方法D 4-R-羟基-吡咯烷-2-S-甲酸(5-甲基-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00211
将O-叔丁基保护的脯氨酸(1mmol)与5-甲基吡啶(1.5mmol)的DMF(5mL)溶液在HATU(1.3mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(5mmol)条件下偶联，然后用TFA-二氯乙烷(1∶1)除去O-叔丁基以85％的收率得到标题化合物。
一般方法E：4-S-氟-吡咯烷-2-S-甲酸(5-甲基-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00212
将以上羟基化合物(2mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液用N，N-二乙基氨基三氟化硫(DAST；4mmol)在-70℃下处理。然后将反应混合物在室温下搅拌16小时，用冷的碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化得到N-保护的衍生物，将其用HBr-AcOH处理得到氨基化合物。
一般方法F：4-S-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯-2-甲酯
Figure S2006800181180D00213
向反式-4-羟基化合物(1mmol)、三苯基膦(1.5mmol)和苯甲酸(1.5mmol)的THF(10mL)溶液中在0℃下滴加N，N-二异丙基-偶氮二甲酸酯(1.5mmol)的THF(5mL)溶液。在室温下搅拌16小时。减压除去溶剂并将残余物溶于乙醚。用冰冷却以沉淀析出氧化膦，将其通过过滤除去，将滤液减压浓缩。将粗产物用甲醇钠的甲醇溶液在0℃下处理2小时以得到标题的顺式-羟基化合物。
一般方法G：4-R-氟-吡咯烷-2-S-甲酸(5-甲基-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00221
以上顺式-羟基的氟化得到反式-4-氟衍生物，将其皂化得到相应的酸。所述的胺从4-R-氟-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和5-甲基-吡啶-2-基胺在HATU条件下制得，得到脯氨酸酰胺衍生物，将其用4M HCl的二恶烷溶液处理得到所需的胺。
实施例1：1-[2-环戊基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸(5-氟-1-氧化-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00222
该标题化合物按照一般方法A从3-苄氧基-甲酰基-氨基)-2-环戊基甲基-丙酸A-7(R＝环戊基甲基)和吡咯烷-2-甲酸吡啶-2-基酰胺A-8(X＝CH2，n＝1，R1＝5-氟2-吡啶基)制得。
2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸
该化合物从环戊基甲基丙二酸按照以下所述的方法制得。
溴甲基-环戊烷
Figure S2006800181180D00231
将环戊烷甲醇(48.5g，484mmol)、Et3N(88.0mL，631mmol)和无水THF(1L)的溶液冷却至4℃并在氮气下搅拌。将甲磺酰氯(45.0mL，581mmol)缓慢加入到搅拌着的溶液中，同时保持10℃。将混合物在10℃下继续搅拌1小时，然后缓慢加入LiBr(300.0g，3454mmol)(放热)。将反应混合物在室温下继续搅拌16小时。加入水以溶解盐，然后将混合物用Et2O萃取。将Et2O层合并，用Na2SO4干燥，然后小心地浓缩(25℃，100托)。将粗产物通过真空蒸馏纯化(35℃，1托，所需化合物是待收集的第一级分)。得到无色油状的溴甲基-环戊烷(31.4g，40％的收率)。
2-环戊基甲基-丙二酸
Figure S2006800181180D00232
将丙二酸二乙酯(36.91g，230.4mmol)、无水甲醇(400mL)和NaOMe(25％的甲醇溶液，49.79g，230.4mmol)的溶液在氮气下搅拌回流1小时。将溴甲基-环戊烷(31.31g，192.0mmol)加入到反应混合物中并继续搅拌3小时。加入NaOH(23.04g，576.0mmol)的水(400mL)溶液并将混合物在回流下继续搅拌1小时。将混合物冷却，用水稀释并用乙醚萃取。将乙醚层丢弃，将水层用1N HCl酸化至pH＝1。将水层用EtOAc萃取。将EtOAc层合并，用Na2SO4干燥并浓缩。得到白色固体状的2-环戊基甲基-丙二酸(21.0g，59％的收率)。
2-环戊基甲基-丙烯酸
Figure S2006800181180D00241
将2-环戊基甲基-丙二酸(24.90g，133.7mmol)、哌啶(15.9mL，160.8mmol)、37％甲醛水溶液(51.0mL，647.2mmol)和EtOH(250mL)的混合物搅拌回流16小时。用1N HCl终止反应至pH＝1，将混合物用EtOAc萃取。将EtOAc萃取合并，用Na2SO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化(SiO2，10％丙酮的DCM溶液)得到油状的2-环戊基甲基-丙烯酸(17.65g，86％的收率)。
4-苄基-3-(2-环戊基甲基-丙烯酰基)-唑烷-2-酮
Figure S2006800181180D00242
将2-环戊基甲基-丙烯酸(17.65g，114.5mmol)溶于无水THF(200mL)并在氮气下冷却至-78℃。以能够将温度保持在-60℃以下并且能够控制气体放出的速率连续加入N，N-二异丙基乙基胺(25.9mL，148.7mmol)和三甲基乙酰氯(14.1mL，114.5mmol)。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，在室温下搅拌2小时，然后冷却至-78℃。
在另一个烧瓶中，将(S)-(-)-4-苄基-2-唑烷酮(20.30g，114.6mmol)溶于无水THF(400mL)并在氮气下冷却至-78℃。在-78℃下缓慢加入BuLi(2.5M，45.8mL，114.5mmol)并将混合物在室温下搅拌30分钟。将形成的阴离子通过插管缓慢转移到原始的反应容器中。将混合物升温至室温，在室温下搅拌过夜(16小时)。将反应混合物用1M KHCO3终止反应并用EtOAc萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩得到黄色油。将粗产物通过快速色谱纯化(SiO2，20％EtOAc的己烷溶液)得到油状的4-苄基-3-(2-环戊基甲基-丙烯酰基)-唑烷-2-酮(22.9g，64％)。
4-苄基-3-[2-环戊基甲基-3-(四氢-吡喃-2-基氧基氨基)-丙酰基]-唑烷-2-酮
Figure S2006800181180D00251
将4-苄基-3-(2-环戊基甲基-丙烯酰基)-唑烷-2-酮(22.90g，73.1mmol)和O-(四氢-2H-吡喃-2-基)-羟基胺(34.24g，292.3mmol)混合并在45℃下在氮气下搅拌48小时。将粗产物通过快速色谱纯化(SiO2，0→30％EtOAc的己烷溶液)得到油状的4-苄基-3-[2-环戊基甲基-3-(四氢-吡喃-2-基氧基氨基)-丙酰基]-唑烷-2-酮(21.65g，69％的收率)。
N-[3-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-基)-2-环戊基甲基-3-氧代-丙基]-N-(四氢吡喃-2-基氧基)-甲酰胺
将甲酸(45.0mL，1193mmol)和乙酸酐(90.0mL，952mmol)的混合物在50℃下在氮气下搅拌1小时。向另一个烧瓶中加入4-苄基-3-[2-环戊基甲基-3-(四氢-吡喃-2-基氧基氨基)-丙酰基]-唑烷-2-酮(21.62g，50.2mmol)、Et3N(170.0mL，1220mmol)和无水DCM(450mL)。将该第二混合物在氮气下冷却至4℃，将混合的酸溶液缓慢加入到第二个烧瓶中，同时保持温度在10℃。将合并的混合物在10℃下搅拌30分钟，终止反应，用饱和NaHCO3水溶液洗涤并用DCM萃取。将DCM层合并，用Na2SO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化(SiO2，50％EtOAc的己烷溶液)得到油状的N-[3-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-基)-2-环戊基甲基-3-氧代-丙基]-N-(四氢-吡喃-2-基氧基)-甲酰胺(20.10g，87％的收率)。
2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸
Figure S2006800181180D00261
将N-[3-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-基)-2-环戊基甲基-3-氧代-丙基]-N-(四氢-吡喃-2-基氧基)-甲酰胺(3.65g，7.96mmol)、THF(125mL)和水(40mL)冷却至4℃。向该混合物中分别加入30％H2O2(5.2mL，50.90mmol)和LiOH一水合物(0.40g，9.53mmol)。将反应混合物搅拌1.5小时。将混合物用0.5M Na2SO3缓慢终止反应，同时用冰浴将温度保持在15℃以下。将该混合物继续搅拌30分钟，真空浓缩至除去THF溶剂，然后用EtOAc洗涤。将碱性反应混合物用Amberlite IR-120树脂(H+)酸化至pH＝4.5。将盐水加入到该酸性溶液中，将合并的混合物用EtOAc萃取。将来自酸性溶液洗涤的有机层合并，用Na2SO4干燥并真空浓缩。得到油状的2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸(1.20g，50％的收率)。
3-(苄氧基-甲酰基-氨基)-2-环戊基甲基-丙酸
该化合物从2-环戊基甲基-丙烯酸和O-苄基羟基胺按照合成相应的O-THp保护的结构单元所述的方法来制得。
4-苄基-3-(3-苄氧基氨基-2-环戊基甲基-丙酰基)-唑烷-2-酮
N-[3-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-基)-2-环戊基甲基-3-氧代-丙基]-N-苄氧基-甲酰胺(化合物A-G，其中：R1＝环戊基甲基，PG1＝苄基)。
Figure S2006800181180D00272
3-(苄氧基-甲酰基-氨基)-2-环戊基甲基-丙酸
Figure S2006800181180D00273
1-[3-苄氧基-甲酰基-氨基)-2-环戊基甲基-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸(5-氟-1-氧化-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00274
实施例2：4-氟-1-{2-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸(5-氟-1-氧化-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00281
该标题化合物按照一般方法A从2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酸A-7(R＝正丁基)和吡咯烷-2-甲酸吡啶-2-基酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝5-氟2-吡啶基)制得。
4-反式-氟-吡咯烷-2-甲酸-[2-氨基-5-氟-吡啶-2-基]酰胺
Figure S2006800181180D00282
向Boc-L-Pro-4-F-OH(2.5g，10.73mmol，1当量)的DMF溶液(15mL)中加入Hunig碱(二异丙基乙基胺，缩写DIEA)(6.73mL，38.61mmol，3.6eq)并将该混合物冷却至0℃。然后在0℃下加入2-氨基-5-氟吡啶(1.44g，12.87mmol，1.2当量)和HATU(4.89g，12.87mmol，1.2当量)。将形成的混合物在室温下搅拌16小时。将混合物在过量乙酸乙酯和10％柠檬酸之间进行分配。将有机层用盐水和饱和NaHCO3洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝1∶0-7∶3)得到无色糖浆状的标题化合物(2.5g，71％)。
4-反式-氟-吡咯烷-2-甲酸-[2-氨基-5-氟-吡啶-2-基]酰胺(盐酸盐)
Figure S2006800181180D00291
将Boc-脯氨酸-4-氟-吡啶酰胺(1g，3.06mmol，1当量)用4N HCl/二恶烷(30mL，120mmol，40当量)在室温下处理并搅拌16小时。将混合物浓缩，将残余物与甲苯一起共蒸发2次，然后浓缩得到略带紫色的粉红色固体(1g)。
1-{2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酰基}-4-反式-氟-吡咯烷-2-甲酸-(2-氨基-5-氟-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00292
向反式-氟-脯氨酸-5-氟-氨基吡啶酰胺HCl盐(644mg，2.15mmol，1.2当量)的DMF溶液(10mL)中在0℃下依次加入Hunig碱(2mL，10.8mmol，5当量)、Versiacid VRI 172(500mg，1.79mmol，1当量)和HATU(818mg，2.15mmol，1.2当量)。将形成的混合物在室温下搅拌16小时。将混合物在过量乙酸乙酯和10％柠檬酸之间进行分配。将有机层用盐水和饱和NaHCO3洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将该化合物通过硅胶色谱纯化，用DCM∶丙酮(1∶0-86∶14)洗脱得到白色粉末状标题化合物(630mg，72％)。ES-MS：C25H30F2N4O5的计算值(504.53)；实测值：505.4[M+H]。
1-{2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酰基}-4-反式-氟-吡咯烷-2-甲酸-(2-氨基-5-氟-吡啶-N-氧化物-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00301
向该化合物(1.25g，2.56mmol，1eq)的DCM溶液中在0℃下连续加入MCPBA(1.32g，7.68mmom，3eq)并将反应液搅拌16小时。将反应混合物在NaHCO3和DCM层之间进行分配。将有机层用Na2SO4干燥并浓缩。
将残余物通过硅胶色谱纯化，用DCM∶丙酮(1∶0-9∶1)洗脱得到标题化合物(1.2g。
实施例3：1-{2-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
Figure S2006800181180D00302
该标题化合物按照一般方法A从2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酸A-7(R＝正丁基)和吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-酰胺A-8(X＝CH2，n＝1，R1＝2-吡嗪基)制得。
实施例4：1-{2-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-基酰胺
该标题化合物按照一般方法A从2-{[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-甲基}-己酸A-7(R＝正丁基)和吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-酰胺A-8(X＝CH2，n＝1，R1＝3-哒嗪基)制得。
步骤1：哒嗪-3-基胺
Figure S2006800181180D00312
向6-氯-2-氨基-哒嗪(4g)和NaOH(粉末，1.4g)的乙醇(150ml)溶液中加入10％Pd/C(0.6g)。将反应混合物在氢气氛下搅拌16小时。将其通过硅藻土过滤并浓缩溶剂。将形成的残余物用乙醚研制得到已知的氨基化合物。
步骤2：2-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure S2006800181180D00313
向Boc-Pro-OH(1当量)的DCM溶液中在0℃下加入Ghosez试剂(1.1当量)并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。向其中加入胺(1.1当量)的吡啶溶液并将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后浓缩以除去所有挥发物并重新溶于过量的DCM。将有机层用10％柠檬酸、盐水和NaHCO3洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。将形成的残余物通过快速色谱纯化，用10-40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱得到标题化合物。HPLC：YMC-Pak Pro C18，S-3m，120A，50×4.6mm I.D.柱；梯度洗脱剂0％-90％MeCN，历时8.5min，1.5mL/min；停留时间＝4.14min。ES-MS：C14H20N4O3的计算值(292)；实测值293[M+H]。
步骤2：吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-基酰胺
Figure S2006800181180D00321
HPLC：YMC-Pak Pro C18，S-3m，120A，50×4.6mm I.D.柱；梯度洗脱剂0％-90％MeCN，历时8.5min，1.5mL/min；停留时间＝2.398min。ES-MS：C9H12N4O的计算值(192.1)；实测值193.2[M+H]。
步骤3：1-(2-{[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-甲基}-己酰基)-吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-基酰胺
Figure S2006800181180D00322
该标题化合物按照一般方法A所述在HATU条件下制得。
HPLC：YMC-Pak Pro C18，S-3m，120A，50×4.6mm I.D.柱；梯度洗脱剂20％-90％MeCN，历时8.5min，1.5mL/min；停留时间＝3.655min。
ES-MS：C22H33N5O5的计算值(447)；实测值448[M+H]。
实施例5：1-[2-环戊基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(5-氟-1-氧化-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00331
该标题化合物按照一般方法A从2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸和吡咯烷-2-甲酸吡啶-2-基酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝5-氟2-吡啶基)制得。
1-{2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酰基}-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(5-氟-1-氧化-吡啶-2-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00332
实施例6：1-[2-环丁基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-基酰胺
Figure S2006800181180D00333
该标题化合物按照一般方法A从2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环丁基甲基)和吡咯烷-2-甲酸哒嗪-2-酰胺A-8(X＝CH2，n＝1，R1＝3-哒嗪基)制得。
实施例7：1-[2-环丁基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
Figure S2006800181180D00341
该标题化合物按照一般方法A从2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环丁基甲基)和吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-酰胺A-8(X＝CH2，n＝1，R1＝2-吡嗪基)制得。
实施例8：1-[2-环戊基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
该标题化合物按照一般方法A从2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环戊基甲基)和吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-酰胺A-8(X＝CH2，n＝1，R1＝2-吡嗪基)制得。
实施例9：4-氟-1-{2-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-己酰基}-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
Figure S2006800181180D00351
该标题化合物按照一般方法A从2-[(苄氧基-甲酰基-氨基)-甲基]-己酸A-7(R＝正丁基)和吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝2-吡嗪基)制得。
实施例10：1-[2-环戊基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
Figure S2006800181180D00352
该标题化合物按照一般方法A从2-环戊基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酸A-7(R＝环戊基甲基)和吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝2-吡嗪基)制得。
实施例11：1-[2-环丁基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
Figure S2006800181180D00361
该标题化合物按照一般方法A从2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环丁基甲基)和吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝2-吡嗪基)制得。
2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸从2-环丁基甲基丙二酸按照实施例1中关于合成相应的环戊基甲基衍生物所述的方法来制得。
2-环丁基甲基-丙二酸
该标题化合物从(溴甲基)环丁烷制得。
2-环丁基甲基-丙烯酸
Figure S2006800181180D00363
4-苄基-3-(2-环丁基甲基-丙烯酰基)-唑烷-2-酮
Figure S2006800181180D00371
4-苄基-3-[2-环丁基甲基-3-(四氢-吡喃-2-基氧基氨基)-丙酰基]-唑烷-2-酮
Figure S2006800181180D00372
N-[3-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-基)-2-环丁基甲基-3-氧代-丙基]-N-(四氢-吡喃-2-基氧基)-甲酰胺
Figure S2006800181180D00373
2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸
1-{2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酰基}-4-氟-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
Figure S2006800181180D00381
实施例12：1-[2-环丁基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸嘧啶-4-基酰胺
该标题化合物按照一般方法A从2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环丁基甲基)和吡咯烷-2-甲酸嘧啶-4-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝2-嘧啶基)制得。
实施例13：1-[2-环丁基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-基酰胺
Figure S2006800181180D00383
该标题化合物按照一般方法A从2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环丁基甲基)和吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝3-哒嗪基)制得。
(2S，4R)-叔丁基4-氟-2-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸酯
向Boc-Pro(F)-OH(5g，21.46mmol，1当量)的DCM溶液中在0℃下加入Ghosez试剂(3.1ml，23.61mmol，1.1当量)并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。向其中在0℃下加入胺(2.65g，27.9mmol，1.3当量)的吡啶溶液并将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后浓缩以除去所有的挥发物并重新溶于过量的DCM。将有机层用10％柠檬酸、NaCl(饱和)和NaHCO3(饱和)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。将形成的残余物通过快速色谱纯化，用10-15％丙酮的二氯甲烷溶液洗脱得到标题化合物。
(2S，4R)-4-氟-N-(哒嗪-3-基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure S2006800181180D00392
将Boc-保护的酰胺加入到4M HCl/二恶烷中并将该反应液在室温下搅拌5小时。减压除去溶剂并将残余物用乙醚研制得到标题化合物。
(2S，4R)-1-((2R)-3-环丁基-2-((N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰氨基)甲基)丙酰基)-4-氟-N-(哒嗪-3-基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure S2006800181180D00393
向Versiacid，(500mg，1.77mmol，1当量)的冷DMF溶液(15mL)中加入DIEA(1.7ml，9.72mmol，5.5当量)、胺.HCl盐(550mg，1.943mmol，1.1当量)和HATU(739mg，1.943mmol，1.2当量)。将形成的反应混合物在室温下搅拌16小时。将混合物在过量乙酸乙酯和10％柠檬酸之间进行分配。将有机层用饱和NaCl和饱和NaHCO3洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化，用10-25％丙酮的DCM溶液洗脱得到标题化合物(53％)。
实施例14：1-[2-环丁基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(2-氧化-哒嗪-3-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00401
该标题化合物按照一般方法A从2-环丁基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环丁基甲基)和吡咯烷-2-甲酸哒嗪-1-氧代-3-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝3-哒嗪基N-氧化物)制得。
6-((2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-2-甲酰氨基)哒嗪1-氧化物
向Boc-Pro(F)-OH(2.047g，8.154mmol，1当量)的DCM溶液中在0℃下加入Ghosez试剂(1.2ml，8.97mmol，1.1当量)并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。向其中在0℃下加入胺(1.27g，11.42mmol，1.4当量)的吡啶溶液并将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后浓缩以除去所有的挥发物并将残余物溶于过量的DCM。将有机层用10％柠檬酸、NaCl(饱和)和NaHCO3(饱和)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。将形成的残余物通过快速色谱纯化，用2-15％丙酮的二氯甲烷溶液洗脱得到标题化合物(61％)。
6-((2S，4R)-4-氟吡咯烷-2-甲酰氨基)哒嗪1-氧化物
Figure S2006800181180D00411
将Boc-保护的酰胺加入到4M HCl/二恶烷中并将该反应液在室温下搅拌5小时。除去所有挥发物并将残余物用乙醚研制得到标题化合物。
6-((2S，4R)-1-((2R)-3-环丁基-2-((N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰氨基)甲基)丙酰基)-4-氟吡咯烷-2-甲酰氨基)哒嗪1-氧化物
Figure S2006800181180D00412
向Versiacid，(571mg，2mmol，1当量)的冷DMF溶液(20mL)中加入DIEA(2.51ml，14.4mmol，6当量)、胺.HCl盐(718mg，2.4mmol，1.2当量)和HATU(913mg，2.4mmol，1.2当量)。将形成的反应混合物在室温下搅拌16小时。将混合物在过量乙酸乙酯和10％柠檬酸之间进行分配。将有机层用饱和NaCl和饱和NaHCO3洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化，依次用10-20％丙酮的DCM溶液和2-8％甲醇的DCM溶液洗脱得到标题化合物(44％)。1H NMR(DMSO-d6)：
实施例15：1-[2-环戊基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-基酰胺
该标题化合物按照一般方法A从2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环戊基甲基)和吡咯烷-2-甲酸哒嗪-2-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝3-哒嗪基)制得。
(2S，4R)-1-((2R)-3-环戊基-2-((N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰氨基)甲基)丙酰基)-4-氟-N-(哒嗪-3-基)吡咯烷-2-甲酰胺
实施例16：1-[2-环戊基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(2-氧化-哒嗪-3-基)-酰胺
Figure S2006800181180D00423
该标题化合物按照一般方法A从2-环戊基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环戊基甲基)和吡咯烷-2-甲酸哒嗪-2-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝3-哒嗪基N-氧化物)制得。
6-氨基哒嗪1-氧化物
Figure S2006800181180D00431
向6-氨基哒嗪的丙酮溶液中一次性加入MCPBA(1当量)的丙酮溶液。将反应混合物在室温下搅拌1小时。除去溶剂并将乙醚加入到残余物中。过滤出固体然后干燥得到标题化合物。其可直接用于下一步骤。
6-((2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-2-甲酰氨基)哒嗪1-氧化物
Figure S2006800181180D00432
向Boc-Pro(F)-OH(2.047g，8.154mmol，1当量)的DCM溶液中在0℃下加入Ghosez试剂(1.2ml，8.97mmol，1.1当量)并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。在0℃下向其中加入胺(1.27g，11.42mmol，1.4当量)的吡啶溶液并将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后浓缩以除去所有的挥发物并将残余物溶于过量的DCM。将有机层用10％柠檬酸、NaCl(饱和)和NaHCO3(饱和)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。将形成的残余物通过快速色谱纯化，用2-15％丙酮的二氯甲烷溶液洗脱得到标题化合物(61％)。
6-((2S，4R)-4-氟吡咯烷-2-甲酰氨基)哒嗪1-氧化物
Figure S2006800181180D00441
将Boc-保护的酰胺加入4M HCl/二恶烷中并将反应液在室温下搅拌5小时。除去所有挥发物并将残余物用乙醚研制得到标题化合物。
6-((2S，4R)-1-((2R)-3-环戊基-2-((N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰氨基)甲基)丙酰基)-4-氟吡咯烷-2-甲酰氨基)哒嗪1-氧化物
Figure S2006800181180D00442
实施例17：1-[2-环己基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-基酰胺
Figure S2006800181180D00443
该标题化合物按照一般方法A从2-环己基甲基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环己基甲基)和吡咯烷-2-甲酸哒嗪-3-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝3-哒嗪基)制得。
2-环己基甲基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酸从2-环己基甲基丙二酸按照实施例1中关于合成相应的环己基甲基丙二酸所述的方法制得。
2-环己基甲基-丙二酸
Figure S2006800181180D00451
该标题化合物从(溴甲基)环己烷制得。
2-环己基甲基-丙烯酸
4-苄基-3-(2-环己基甲基-丙烯酰基)-唑烷-2-酮
Figure S2006800181180D00453
4-苄基-3-[2-环己基甲基-3-(四氢-吡喃-2-基氧基氨基)-丙酰基]-唑烷-2-酮)
Figure S2006800181180D00454
N-[3-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-基)-2-环己基甲基-3-氧代-丙基]-N-(四氢-吡喃-2-基氧基)-甲酰胺
Figure S2006800181180D00461
实施例18：1-{4-环丙基-2-[(甲酰基-羟基-氨基)-甲基]-丁酰基}-4-氟-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
该标题化合物按照一般方法A从2-环丙基乙基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸A-7(R＝环丙基乙基)和吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-酰胺A-8(X＝CHF，n＝1，R1＝2-吡嗪基)制得。
2-环丙基乙基-3-(甲酰基-羟基-氨基)-丙酸从2-环丙基乙基丙二酸按照实施例1中关于合成相应的环戊基甲基甲基丙二酸所述的方法制得。
(溴乙基)环丙烷
该标题化合物从2-环丙基乙醇制得。
2-环丙基乙基-丙二酸
Figure S2006800181180D00471
2-环丙基乙基-丙烯酸
4-苄基-3-(2-环丙基乙基-丙烯酰基)-唑烷-2-酮
4-苄基-3-[2-环丙基乙基-3-(四氢-吡喃-2-基氧基氨基)-丙酰基]-唑烷-2-酮
Figure S2006800181180D00474
N-[3-(4-苄基-2-氧代-唑烷-3-基)-2-环丙基乙基-3-氧代-丙基]-N-(四氢-吡喃-2-基氧基)-甲酰胺
Figure S2006800181180D00475
2-环丙基乙基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酸
Figure S2006800181180D00481
1-{2-环丙基乙基-3-[甲酰基-(四氢-吡喃-2-基氧基)-氨基]-丙酰基}-4-氟-吡咯烷-2-甲酸吡嗪-2-基酰胺
Figure S2006800181180D00482
实施例19：肽脱甲酰基酶活性的抑制
采用PDF/FDH偶联试验(Lazennec等，Anal.Biochem.，Vol.224，pp.180-182(1997))。在该偶联试验中，将通过PDF从其底物fMAS释放的甲酸酯通过偶联酶FDH而氧化，将1分子的NAD+还原成NADH，其导致在340nM处的吸收增加。所有试验均在室温下在50mM HEPES、pH7.2、10mM NaCl、0.2mg/mL BSA缓冲液中在半面积的96-孔微量滴定板(Corning)上进行。通过加入0.5单位/mL FDH、1mM NAD+和所需浓度的fMAS的混合物而开始反应。为了确定IC50(抑制50％酶活性所需的浓度)值，将PDF与各种浓度的抑制剂一起预先保温10分钟，然后加入含4mMfMAS的反应混合物引发脱甲酰基化反应。初始反应速率y是利用SpectraMax板读数器(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)在340nM测得的吸收增加的初始速率。利用下式计算在抑制50％酶活性时的抑制剂浓度[In]，即IC50：
                  y＝yo/(1+[In]/IC50)
其中yo是在不存在抑制剂条件下的反应速率。当y＝yo/2时在[In]处求解关于IC50的方程得到IC50。基于非线性最小二乘法回归拟合利用可购买到的软件包(Deltapoint，Inc.，Chicago，IL.)计算IC50。
利用该试验确定各种化合物的IC50。确定各种化合物对含有镍和锌作为金属离子的脱甲酰基酶的IC50。对于含锌的脱甲酰基酶，优选的式(I)化合物的IC50值为约0.001μM至约0.2μM。对于含镍的脱甲酰基酶，优选的式(I)化合物的IC50值为约0.005μM至约3μM。
实施例20：测定抗微生物活性的试验
最小抑制浓度(MIC)利用微量稀释法在96-孔格式平板中确定。将化合物以5或10mg/mL的浓度悬浮在DMSO中并保存在4℃下待用。将它们在Mueller-Hinton Broth(MHB)或Trypticase Soy Broth(TSB)中稀释，然后用于MIC测定。利用两倍稀释体系测定的浓度范围是64-0.0625μg/mL终浓度。
接种体从在Trypticase Soy Agar(TSA)上生长的细胞制得，并在35℃下保温过夜，将5-10个菌落用于接种MHB或TSB肉汤，并将培养物在35℃下保温过夜。将过夜的培养物稀释1∶10，在35℃下保温1小时，稀释至适当的接种体大小，然后应用到含有肉汤和待测化合物的孔内。接种体的大小是2×104 CFU/mL。
将该板在35℃下保温48小时并在细菌保温18小时后记录MIC。将MIC定义为在保温后不会产生可见生长的化合物的最小浓度。
各种优选的式(I)化合物的最小抑制浓度为：对于流感嗜血菌(四种菌株)为约0.25μg/mL至约32μg/mL，对于金黄色葡萄球菌(四种菌株)为约0.001μg/mL至大于8μg/mL，对于肺炎链球菌(四种菌株)为约0.016μg/mL至约16μg/mL，对于粘膜炎莫拉氏菌为约0.008μg/mL至约16μg/mL。脱甲酰基酶从大肠杆菌得到。
以下是含有式(I)化合物的代表性的药物制剂。
实施例21：片剂制剂
将下列成分紧密混合并压制成单个的划痕片：
每种成分的量                片(mg)
本发明化合物                400
玉米淀粉                    50
交联羧甲基纤维素钠          25
乳糖                        120
硬脂酸镁                    5
实施例22：胶囊制剂
将下列成分紧密混合并填充到硬壳明胶胶囊中：
每种成分的量                胶囊(mg)
本发明化合物                200
喷雾干燥的乳糖              148
硬脂酸镁                    2
实施例23：混悬液制剂
将下列成分混合以形成用于口服给药的混悬液：
成分                            量
本发明化合物                    1.0g
富马酸                          0.5g
氯化钠                          2.0g
羟基苯甲酸甲酯                  0.15g
羟基苯甲酸丙酯                  0.05g
砂糖                            25.0g
山梨醇(70％溶液)                13.00g
Veegum K(Vanderbilt Co.)        1.0g
矫味剂                          0.035mL
着色剂                          0.5mg
蒸馏水                          适量至100mL
实施例24：注射制剂
将下列成分混合以形成注射制剂：
成分                            量
本发明化合物                    0.2-20mg
乙酸钠缓冲液，0.4M              20mL
HCl(1N)或NaOH(1N)               适量至适宜的pH
水(蒸馏，无菌)                  适量至20mL
实施例25：栓剂制剂
通过将本发明化合物与WitepsolH-5(饱和植物脂肪酸的甘油三酸酯；Riches-Nelson，Inc.，New York)相混合而制得总重为2.5g的栓剂，其具有下列组成：
本发明化合物                    500mg
WitepsolH-15                  余量

Claims (15)

1.式(I)化合物或其盐或其前药
Figure S2006800181180C00011
其中R1是氢、烷基、杂烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
R3是氢、卤素或烷氧基；
R4是芳基或杂芳基；
n是0至3，并且
条件是R1是环烷基和/或R4是任选取代的在环中含有2、3或4个氮杂原子的6元单环杂芳环，其中一个或多个环氮杂原子任选地被氧化。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R3选自氟、氯或碘。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是环烷基。
4.根据权利要求1所述的化合物或其盐或其前药，其中R4是式(II)的杂芳基
Figure S2006800181180C00012
或
Figure S2006800181180C00013
或
其中R6、R7、R8和R9彼此独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯基、卤素、羟基、烷氧基。
5.根据权利要求1所述的化合物或其盐或其前药，其中R4是式(II.1)的杂芳基
Figure S2006800181180C00021
其中R6、R7和R8是氢，R8是氟。
6.根据权利要求1所述的化合物或其盐或其前药，其中R4是式(II.2)的杂芳基
其中R6、R7和R8是氢。
7.根据权利要求1所述的化合物或其盐或其前药，其中R4是式(II.3)的杂芳基
其中R6、R7和R8是氢。
8.根据权利要求1所述的化合物或其盐或其前药，其中R4是式(II.4)的杂芳基
Figure S2006800181180C00024
其中R6、R7和R8是氢。
8.根据权利要求1所述的化合物或其盐或其前药，其中R4是式(II.5)的杂芳基
Figure S2006800181180C00025
其中R6、R7和R8是氢。
9.根据权利要求1所述的化合物或其盐或其前药，其中R1选自环己基、环戊基、环丁基或环丙基。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是正丁基。
11.根据权利要求9所述的化合物，其中R4选自2-氨基、5-氟吡啶N-氧化物、2-吡嗪、3-哒嗪、3-嘧啶、4-嘧啶或3-哒嗪N-氧化物。
12.根据权利要求10所述的化合物，其中R4选自2-氨基、5-氟吡啶N-氧化物、2-吡嗪、3-哒嗪、3-嘧啶、4-嘧啶或3-哒嗪N-氧化物。
13.根据权利要求9所述的化合物，其中R3是氟。
14.根据权利要求10所述的化合物，其中R3是氟。
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