CN101141966A - 维生素d化合物在治疗子宫内膜异位症中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了维生素D化合物在治疗或预防子宫内膜异位症中的用途，通过施用维生素D化合物来治疗或预防子宫内膜异位症的方法，以及其中使用的化合物。

Description

维生素D化合物在治疗子宫内膜异位症中的应用

本申请要求2005年3月23日提交的GB 0505955.5以及2006年3月31日提交的美国临时申请序列号60/667,367的权益，该申请的公开在此引入作为参考。

本发明涉及维生素D化合物在治疗或预防子宫内膜异位症中的用途，施用维生素D化合物来治疗或预防子宫内膜异位症的方法，该方法以及其中使用的化合物。

子宫内膜异位症是涉及子宫内膜异位生长的疾病，所述内膜异位生长导致低生育力、慢性骨盆痛和多次手术。其影响大约10％的生育年龄女性人群(Balweg，M.(2004)Best Pract.Res.Cl.Ob.18：201和Vigano，P.等人(2004)Best Pract.Res.Cl.Ob.18：177)。基质细胞增殖、血管发育及炎症是子宫内膜异位症发病机理的重要因素(Kayama，C.M(2003)Reproductive Biology and Endocrinology 1：123)。大多数现代医学疗法涉及在患者体内诱导低雌激素状态。这些疗法与严重的副作用和疾病的高复发率相关。

本发明人已开发出目的为减轻或缓解前述缺陷的治疗子宫内膜异位症的新方法。

自从Mellanby于1920年发现维生素D(胆钙化醇)以来(Mellanby，E.(1921)Spec.Rep.Ser.Med.Res.Council(GB)SRS 61：4)，人们已经认识到了它在高级动物生物系统中的重要性。正是在1920-1930年间维生素D被正式归类为“维生素”，其是骨骼正常发育以及钙与磷内环境稳定的维持所必需的。

关于维生素D₃代谢的研究开始于血浆代谢物25-羟基维生素D₃[25(OH)D₃](Blunt，J.W.等人.(1968)Biochemistry 6：3317-3322)和激素活性形式1-α，25(OH)₂D₃(Myrtle，J.F.等人.(1970)J.Biol.Chem.245：1190-1196；Norman，A.W.等人.(1971)Science 173：51-54；Lawson，D.E.M.等人.(1971)Nature 230：228-230；Holick，M.F.(1971)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 68：803-804)的发现和化学表征。维生素D内分泌系统的概念的表述依赖于肾脏在以谨慎调节方式产生1-α，25(OH)₂D₃中的关键作用的认识(Fraser，D.R.和Kodicek，E(1970)Nature 288：764-766；Wong，R.G.等人.(1972)J.Clin.Invest.51：1287-1291)和肠中1-α，25(OH)₂D₃核受体(VD₃R)的发现(Haussler，M.R.等人.(1969)Exp.Cell Res.58：234-242；Tsai，H.C.和Norman，A.W.(1972)J.Biol.Chem.248：5967-5975)。

维生素D内分泌系统的运行依赖于下列因素：第一，细胞色素P450酶在肝脏(Bergman，T.和Postlind，H.(1991)Biochem.J.276：427-432；Ohyama，Y和Okuda，K.(1991)J.Biol.Chem.266：8690-8695)和肾脏(Henry，H.L.和Norman，A.W.(1974)J.Biol.Chem.249：7529-7535；Gray，R.W.和Ghazarian，J.G.(1989)Biochem.J.259：561-568)中以及在多种其他组织中的存在，以实现维生素D₃向生物活性代谢物例如1-α，25(OH)₂D₃和24R，25(OH)₂D₃的转化；第二，血浆维生素D结合蛋白(DBP)的存在，以实现这些疏水性分子向维生素D内分泌系统的各种组织的选择性运输和递送(Van Baelen，H.等人.(1988)Ann NY Acad.Sci.538：60-68；Cooke，N.E.和Haddad，J.G.(1989)Endocr.Rev.10：294-307；Bikle，D.D.等人.(1986)J.Clin.Endocrinol.Metab.63：954-959)；第三，立体选择性受体在多种靶组织中的存在，所述受体与激动剂1-α，25(OH)₂D₃相互作用以产生必不可少的对该开环甾类激素的特异性生物学响应(Pike，J.W.(1991)Annu.Rev.Nutr.11：189-216)。迄今为止，有证据表明1-α，25(OH)₂D₃的核受体(VD₃R)存在于30多种组织和癌细胞系中(Reichel，H.和Norman，A.W.(1989)Annu.Rev.Med.40：71-78)，包括正常的膀胱。

Vitamin D₃及其激素活性形式是众所周知的钙和磷内环境稳定的调节剂。已知这些化合物刺激钙与磷的肠吸收、骨矿物质的调动和钙在肾中的存留中的至少一种。此外，发现特异性维生素D受体存在于30多种组织中已经导致维生素D₃被确定为除其在钙/骨内环境稳定中的经典角色以外的多能调节剂。能将维生素D₃氧化为其活性形式的酶、例如25-OHD-1-α-羟化酶和特异性受体在多种组织例如骨、角质形成细胞、胎盘和免疫细胞中的联合存在已经提示了1-α，25(OH)₂D₃的旁分泌作用。而且，已经发现维生素D₃激素和活性代谢物能调节正常细胞和恶性细胞的细胞增殖和分化(Reichel，H.等人.(1989)Ann.Rev.Med.40：71-78)。

由于维生素D₃及其代谢物的活性，很多关注已经集中于这些化合物的合成类似物的开发。大量这些类似物牵涉A环、B环、C/D环和主要是侧链中的结构修饰(Bouillon，R.等人.(1995)Endocrine Reviews 16(2)：201-204)。尽管大多数迄今所开发的维生素D₃类似物牵涉侧链的结构修饰，但是少量研究已经报道了A环非对映体的生物特性(Norman，A.W.等人.(1993)J.Biol.Chem.268(27)：20022-20030)。此外，已经研究了甾类的生物酯化作用(Hochberg，R.B.，(1998)Endocr Rev.19(3)：331-348)，维生素D₃的酯是已知的(WO 97/11053)。

而且，尽管为开发合成类似物已付出大量努力，但是维生素D及其结构类似物的临床应用被这些化合物施用于个体用于维生素D化合物的已知适应症/应用后所引起的不希望的副作用所限制。

维生素D的活化形式、维生素D₃和其类似物中的一些已被描述为细胞生长和分化的有力调节剂。以前已经发现，维生素D₃以及类似物(类似物V)抑制BPH细胞增殖，抵抗BPH细胞的有力生长因子例如角质形成细胞生长因子(KGF)和胰岛素样生长因子(IGF1)的促有丝分裂活性。而且，该类似物在未刺激的与KGF-刺激的BPH细胞中诱导bcl-2蛋白表达、细胞内钙调动和细胞凋亡。

Ailawadi等人，Fertil.Steril.200481(2)：290-296描述了用来曲唑和醋酸炔诺酮对子宫内膜异位症和慢性骨盆痛的治疗。提供一系列其他药物(包括钙和维生素D补充物)以减少治疗可能伴随的骨丢失。

Shippen等人，Fertil.Steril.200481(5)：1395-1398描述了用芳香酶抑制物对严重子宫内膜异位症的治疗。提供一系列其他药物(主要包括骨化三醇)以减少可能的骨丢失。

US2005/0032741描述了用于治疗或预防个体激素变化相关病症的维生素组合物，该维生素组合物包括钙、维生素D、叶酸、维生素B12、维生素B6。在一个实施例中，当对患者施用该维生素组合物时显示骨丢失率的降低和子宫内膜异位症的减轻，该患者患有子宫内膜异位症和骨质疏松，并同时接受促性腺激素释放激素拮抗物、醋酸亮丙瑞林和阿仑特罗。鉴于联合给药的药剂的数量，没有证据表明子宫内膜异位症症状的减轻是维生素D给药的直接结果。

US2002/0010163公开了新的维生素D化合物。声称该化合物用作抗增殖剂，例如在激素依赖性肿瘤(hormone responsive tumour)或增生(如乳癌、前列腺癌或卵巢癌、纤维瘤或子宫内膜异位症)的治疗中，或者用作孕酮活性抑制药，例如在水肿(oedema)、痤疮、黄褐斑或生育力控制中。该申请未提供任何声称的指征的生物学数据。

因此，本发明提供了维生素D化合物，以及使用这类化合物的治疗方法，该方法用于预防或治疗子宫内膜异位症及相关症状，例如慢性骨盆痛和低生育力。治疗和/或预防可包括减少异位生长的数量和/或大小。在一个实施方案中，本发明的用途和方法可涉及子宫腺肌病(可称作宫内子宫内膜异位症(endometriosis interna，uterine endometriosis或internalendometriosis))。

本发明方法可适用于治疗子宫内膜异位症。备选地，本发明方法可用于预防子宫内膜异位症。

在进一步说明本发明之前，为了可以更容易地理解本发明，方便起见在此处首先定义和集中了某些术语。

术语“施用”包括向个体引入维生素D化合物以发挥它们预期功能的途径。可使用的施用途径的实例包括注射(皮下、静脉内、肠胃外、腹膜内)、口服、吸入、直肠、透皮或经由膀胱滴注。药物制剂当然是通过适合于每种施用途径的形式给予的。例如，通过注射、输注、吸入、洗剂、软膏剂、栓剂等、以片剂或胶囊的形式施用这些制剂。口服施用是优选的。注射可以是推注或者可以是连续输注。根据施用的途径，维生素D化合物可以用所选择的材料包衣或者置于所选择的材料中，以保护它免受可能对其发挥预期功能的能力具有有害影响的自然条件。维生素D化合物可以被单独施用或者与用于治疗子宫内膜异位症另一种物质，或与药学上可接受的载体或此二者联合施用。维生素D化合物可以在施用另一种物质之前、与该物质同时或者在施用该物质之后被施用。此外，维生素D化合物也可以以前体形式施用，它在体内转化为其活性代谢物或者更大活性的代谢物。

术语“有效量”包括在必要的剂量和时间段下有效达到所需结果、即足以治疗和/或预防子宫内膜异位症的量。维生素D化合物的有效量可以因多种因素而异，所述因素例如疾病状态、个体的年龄与体重和维生素D化合物在个体中引发所需响应的能力。可以调节给药方案，以提供最佳的治疗响应。有效量还是其中维生素D化合物的治疗有益作用比任何毒性和有害作用(例如副作用)重要的量。

维生素D化合物的治疗有效量(即有效剂量)可以从约0.001至30μg/kg体重不等，优选约0.01至25μg/kg体重，更优选约0.1至20μg/kg体重，甚至更优选约1至10μg/kg、2至9μg/kg、3至8μg/kg、4至7μg/kg或5至6μg/kg体重。本领域技术人员将认识到，某些因素可能影响有效治疗个体所需的剂量，包括但不限于疾病或障碍的严重性、以前的治疗、个体的总体健康状况和/或年龄以及存在的其他疾病。另外，施用的剂量也将取决于所使用的特定维生素D化合物，每种化合物的有效量可以由本领域已知的滴定法来确定。此外，用治疗有效量的维生素D化合物治疗个体可以包括单一治疗，或者优选可以包括一系列治疗。在一个实例中，用维生素D化合物治疗个体，剂量在约0.1至20μg/kg体重的范围内，每天一次，持续六个月或更长时间，这取决于症状的控制和病症的变化情况。而且，如同其他慢性治疗一样，可以考虑“开关(on-off)”或间歇性治疗方案。还应当认识到的是，治疗所用的维生素D化合物的有效剂量可以随着特定治疗过程而增加或减少。

术语“烷基”表示饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环族基团)、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。术语烷基进一步包括这样的烷基，它们可以任选进一步包括氧、氮、硫或磷原子以代替烃骨架中的一个或多个碳，例如氧、氮、硫或磷原子(例如，在一个实施方案中烷基不包括上述原子)。在优选的实施方案中，直链或支链烷基在其骨架中具有30个或30个以下的碳原子(例如对于直链，C₁-C₃₀，对于支链，C₃-C₃₀)，优选26个或26个以下，更优选20个或20个以下，尤其是6个或6个以下。同样，优选的环烷基在其环结构中具有3-10个碳原子，更优选在环结构中具有3、4、5、6或7个碳。

此外，整个说明书和权利要求书中所使用的术语烷基旨在包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”，后者表示具有取代基以代替烃骨架中的一个或多个碳上的氢的烷基部分。这类取代基可以包括例如卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基(alkylthiocarbonyl)、烷氧基、磷酸根、膦酰基(phosphonato)、次膦酰基(phosphinato)、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、磺酸基(sulfonato)、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将理解的是，如果适当，在烃链上取代的部分本身可以被取代。环烷基可以被进一步取代，例如被上述取代基进一步取代。“烷基芳基”部分是被芳基取代的烷基(例如苯甲基(苄基))。未取代的烷基(包括环烷基)，或被卤素，特别是氟取代的烷基一般相对于其他取代基团是优选的。术语“烷基”也包括在长度和可能的取代上类似于上述烷基、但是分别含有至少一条双键或叁键的不饱和的脂族基团。

除非对碳数另有规定，否则本文所用的“低级烷基”表示如上所定义的烷基，但是在其骨架结构中具有1至10个碳，更优选1至6个、最优选1至4个碳原子，它可以是直链或支链的。低级烷基的实例包括甲基、乙基、丙基(正丙基和异丙基)、丁基(叔丁基、正丁基和仲丁基)、戊基、己基、庚基、辛基等。在优选的实施方案中，术语“低级烷基”包括在其骨架中具有4个或4个以下碳原子的直链烷基，例如C₁-C₄烷基。

因此，烷基的具体实例包括C_1-6烷基或C_1-4烷基(例如甲基或乙基)。羟基烷基的具体实例包括C_1-6羟基烷基或C_1-4羟基烷基(例如羟甲基)。

术语“烷氧基烷基”、“多氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”表示如上所述的烷基，它们进一步包括氧、氮或硫原子代替烃骨架中的一个或多个碳，例如氧、氮或硫原子。

本文所用的术语“芳基”表示芳基原子团，包括5-和6-元单环芳族基团，它可以包括0至4个杂原子，例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、苯并唑、苯并噻唑、三唑、四唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。芳基也包括多环稠合芳族基团，例如萘基、喹啉基、吲哚基等。在环结构中具有杂原子的那些芳基也可以称为“芳基杂环”、“杂芳基”或“杂芳族基团”。芳族环可以在一个或多个环位置上被上述取代基取代，例如卤素、羟基、烷氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、磷酸根、膦酰基、次膦酰基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳族或杂芳族部分。芳基也可以与不是芳族的脂环族或杂环的环稠合或桥连以形成多环(例如四氢化萘)。

术语“链烯基”和“炔基”表示长度和可能的取代类似于上述烷基、但是分别含有至少一条双键或叁键的不饱和的脂族基团。例如，本发明涵盖氰基和炔丙基。

术语“手性”表示具有镜像伴侣的不可叠加性质的分子，而术语“非手性”表示可叠加于它们镜像伴侣的分子。

术语“非对映体”表示具有两个或多个不对称中心的立体异构体，它们的分子不是彼此的镜像。

术语“对映体”表示化合物的两种立体异构体，它们是彼此的不可叠加镜像。两种对映体的等摩尔混合物被称为“外消旋混合物”或“外消旋物”。

本文所用的术语“卤素”表示-F、-Cl、-Br或-I；术语“巯基”或“硫醇”表示-SH；术语“羟基”表示-OH。

术语“卤代烷基”旨在包括被卤素单-、二-或多-取代的以上所定义的烷基，例如C_1-6卤代烷基或C_1-4卤代烷基，例如氟甲基和三氟甲基。

本文所用的术语“杂原子”表示任何除碳或氢以外的元素的原子。优选的杂原子是氮、氧、硫和磷。

术语“多环基”或“多环原子团”表示两个或多个环状环的原子团(例如环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环基)，其中两个邻接的环共用两个或多个碳，例如这些环是“稠合环”。通过不相邻原子连接的环被称为“桥连”环。多环的每个环可以被上述取代基取代，例如卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸根、膦酰基、次膦酰基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基、烷基芳基或者芳族或杂芳族部分。

术语“异构体”或“立体异构体”表示具有相同化学组成、但是在原子或基团的空间排列方面不同的化合物。

术语“分离的”或“基本上纯化的”在本文中可互换使用，表示非天然存在状态的维生素D₃化合物。这些化合物当天然产生时可以基本上不含细胞物质或培养基，或者当化学合成时可以基本上不合化学前体或其他化学物质。在本发明的一个实施方案中，以w/w为基础，分离的维生素D化合物为至少75％纯度，特别是至少85％纯度，尤其是至少95％纯度，优选是至少99％纯度，所述纯度参考维生素D化合物天然相关的化合物，或在化学合成过程中化学相关的化合物。在某些优选的实施方案中，术语“分离”或“基本上纯化”也表示基本上没有对映体之一的手性化合物的制备物；即分子的对映体富集或非外消旋制备物。与之相似，术语“分离的差向异构体”或“分离的非对映体”表示基本上不含其他立体化学形式的手性化合物的制备物。例如，分离的或基本上纯化的维生素D₃化合物包括富集具有以α-构型连接于A-环3位手性碳上的取代基的立体异构体的维生素D₃的合成或天然制备物，因而基本上没有其他具有β-构型的异构体。除非另有规定，否则这类术语表示其中α与β形式的重量比大于1∶1的维生素D₃组合物。例如，差向异构体的分离的制备物表示相对于β-立体异构体而言具有大于50重量％、更优选至少75重量％、甚至更优选至少85重量％的α-差向异构体的制备物。当然，富集作用可以远大于85％，提供“基本上差向异构体-富集的”制备物，即相对于β-立体异构体而言具有大于90％、甚至更优选大于95％的α-差向异构体的化合物制备物。术语“基本上不含β-立体异构体”应理解为具有相似的纯度范围。

本文所用的术语“维生素D化合物”包括任何能够治疗或预防子宫内膜异位症的为维生素D类似物的化合物。一般而言，为维生素D受体配体(VDR配体)并且能够治疗或预防子宫内膜异位症的化合物被视为在本发明的范围内。维生素D化合物优选是维生素D受体的激动剂。因此，维生素D化合物旨在包括开环甾类。适用于本发明的方法的具体维生素D化合物的实例在本文中有进一步描述。维生素D化合物包括维生素D₂化合物、维生素D₃化合物、其异构体或者其衍生物/类似物。优选的维生素D化合物是维生素D₃化合物，它们是维生素D受体的配体(更优选是激动剂)。优选地，维生素D化合物(例如维生素D₃化合物)是比天然配体(即维生素D，例如维生素D₃)更有力的维生素D受体激动剂。维生素D₁化合物、维生素D₂化合物和维生素D₃化合物分别包括维生素D₁、D₂、D₃和其类似物。在某些实施方案中，维生素D化合物可以是甾类，例如开环甾类，例如骨化醇(calciol)、骨化二醇或骨化三醇。本发明的维生素D化合物的非限制性实例包括下列文献所述的那些：美国专利No.6,017,908、6,100,294、6,030,962、5,428,029和6,121,312、已公布的国际申请WO 98/51633、WO01/40177A3。维生素D化合物的其他实例包括在US 6,492,353和WO2005/030222中描述的那些。

术语“开环甾类”是本领域公认的，包括其中甾环结构的环戊环多氢菲环之一断裂的化合物。例如，1-α，25(OH)₂D₃及其类似物是有激素活性的开环甾类。在维生素D₃的情况下，B-环的9-10碳-碳键断裂，生成开环-B-甾类。维生素D₃的正式IUPAC名称为9，10-开环胆甾-5，7，10(19)-三烯-3B-醇。为了方便，本文阐述1-α，25(OH)₂D₃的-s-反式构象异构体，所有碳原子均用标准甾类表示法进行编号。

在本文所列的结构式中，环A上的各种取代基与甾族核的连接用这些表示法之一阐述：虚线(----)表示取代基为β-取向(即，在环平面以上)，楔形实线()表示取代基为α-取向(即，在分子平面以下)，或者波浪线

表示取代基可以在环平面以上或以下。关于环A，应当理解的是，维生素D领域中的立体化学常规与一般化学领域相反，其中虚线表示环A上的取代基为α-取向(即，在分子平面以下)，楔形实线表示环A上的取代基为β-取向(即，在环平面以上)。

此外，跨越碳-碳双键的立体化学的表示也与一般化学领域相反，“Z”表示常被称为“顺式”(同侧)的构象，而“E”表示常被称为“反式”(对侧)的构象。无论如何，两种构型顺式/反式和/或Z/E都适用于本发明的化合物。

正如所示的那样，激素1-α，25(OH)₂D₃的A环在碳1和3含有两个不对称中心，每个不对称中心含有构型得到充分表征的羟基，即1-α-和3-β-羟基。换言之，A环的碳1和3是“手性碳”或“碳中心”。

关于手性中心的命名，术语“d”和“l”构型是用IUPACRecommendations定义的。至于术语的使用，非对映体、外消旋物、差向异构体和对映体将以它们的通常含义被用来描述制备物的立体化学。

而且，在本专利文献中，维生素D化合物的A环在一般结构式中常被描绘为下列结构中的任意一种：

其中X₁和X₂被定义为H或＝CH₂；或者

其中X₁和X₂被定义为H₂或CH₂。

尽管似乎没有任何既定常规，但是显然本领域普通技术人员理解式(A)或(B)代表以下的其中例如X₁是＝CH₂且X₂被定义为H₂的A环：

对于本发明的目的，在所有一般结构中将使用式(B)。

因此，一方面，本发明提供了维生素D化合物在预防或治疗子宫内膜异位症中的用途。也提供了通过施用有效量的维生素D化合物治疗患有子宫内膜异位症的患者的方法。进一步提供了维生素D化合物在制备用于预防或治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。进一步提供了用于预防和/或治疗子宫内膜异位症的维生素D化合物。还提供了一种套药盒，其含有维生素D化合物以及指导将所述化合物施用于需要治疗和/或预防子宫内膜异位症的患者、从而治疗和/或预防所述患者的子宫内膜异位症的说明书。子宫内膜异位症可以例如以存在慢性骨盆痛和低生育力症状为特征。

本发明的方法和用途是治疗人类女性的方法和用途，特别是绝经前的人类女性。

在本发明的一个实施方案中，维生素D化合物是式(I)的化合物：

其中：

X是羟基或氟；

Y是H₂或CH₂；

Z₁和Z₂是H或者式(II)所示的取代基，条件是Z₁和Z₂是不同的(优选地，Z₁和Z₂不均代表式(II))：

其中：

Z₃代表上述式(I)；

A是单键或双键；

R₁、R₂和Z₄各自独立地是氢、烷基或者式(III)所示的饱和或不饱和的碳链，条件是R₁、R₂和Z₄至少有一个是式(III)所示的饱和或不饱和的碳链，并且条件是R₁、R₂和Z₄不都是式(III)所示的饱和或不饱和的碳链：

其中：

Z₅代表上述式(II)；

A₂是单键、双键或叁键；

A₃是单键或双键；

R₃和R₄各自独立地是氢、烷基、卤代烷基、羟基烷基；R₅是H₂或氧。R₅也可以代表氢或者可以不存在。

因此，在以上的式(III)结构(和下列相应的结构)中，当A₂代表叁键时，R₅不存在。当A₂代表双键时，R₅代表氢。当A₂代表单键时，R₅代表羰基或两个氢原子。

在本发明的另一实施方案中，维生素D化合物是式(IV)的化合物：

其中：

X₁和X₂是H₂或CH₂，其中X₁和X₂不同时是CH₂；

A是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

A₃是单键或双键；

R₁和R₂是氢、C₁-C₄烷基或4-羟基-4-甲基戊基，其中R₁和R₂不都是氢；

R₅是H₂或氧，R₅也可以代表氢或者可以不存在；

R₃是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基；

R₄是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基。

在本发明的另一实施方案中，维生素D化合物是式(V)的化合物：

其中：

X₁和X₂是H₂或CH₂，其中X₁和X₂不同时是CH₂；

A是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

A₃是单键或双键；

R₁和R₂是氢、C₁-C₄烷基，其中R₁和R₂不都是氢；

R₅是H₂或氧，R₅也可以代表氢或者可以不存在；

R₃是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基；

R₄是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基。

以上的式(V)结构的实例是1，25-二羟基-16-烯-23-炔胆钙化醇。

在另一实施方案中，维生素D化合物是式(VII)的化合物：

其中：

A是单键或双键；

R₁和R₂各自独立地是氢、烷基(例如甲基)；

R₃和R₄各自独立地是烷基；

X是羟基或氟。

在另一实施方案中，维生素D化合物是式(VIII)的化合物：

其中：

R₁和R₂各自独立地是氢或者烷基，例如甲基；

R₃是烷基，例如甲基；

R₄是烷基，例如甲基；且

X是羟基或氟。

在本发明的特定的实施方案中，维生素D化合物选自下组：

在本发明的其他特定的实施方案中，维生素D化合物选自下组：

在另一实施方案中，维生素D化合物是式(VI)的“孪位(geminal)”化合物：

其中：

X₁是H₂或CH₂；

A₂是单键、双键或叁键；

R₃是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基；

R₄是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基；

C₂₀的构型是R或S。

由于在C₂₀上存在两个烷基链，这种类型的化合物可以被称为“孪位”或“偕”维生素D₃化合物。

式(VI)的孪位化合物的实例是1，25-二羟基-21-(3-羟基-3-甲基丁基)-19-降(nor)-胆钙化醇(在本文中也称为化合物C)：

在WO 98/49138和US 6,030,962中描述了上述化合物的合成，将它们全文引入本文作为参考。

在本发明的另外的特定的实施方案中，维生素D化合物选自下组的孪位化合物：

在另一方面，本发明提供式(IX)的孪位维生素D₃化合物及其药学上可接受的酯、盐和前体药物：

其中：

A₁是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是C₁-C₄烷基、C₁-C₄含氘烷基、羟基烷基或卤代烷基；

R₅、R₆和R₇各自独立地是氢、OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基或OC(O)卤代烷基；

C₂₀的构型是R或S；

X₁是H₂或CH₂；

当至少一个R₁和R₂是C₁-C₄含氘烷基并且至少一个R₃和R₄是卤代烷基时，或者当至少一个R₁和R₂是卤代烷基并且并且至少一个R₃和R₄是C₁-C₄含氘烷基时，Z是氢；或者Z是-OH、＝O、-SH或-NH₂。

本发明这方面的多种实施方案包括各式I化合物，其中：A₁是单键；A₂是单键；A₂是叁键；R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是甲基或乙基；R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是C₁-C₄含氘烷基或卤代烷基；R₅是羟基；R₆和R₇是羟基；R₆和R₇分别是OC(O)C₁-C₄烷基；X₁是H₂；X₁是CH₂；Z是羟基或Z是＝O。

在某些实施方案中，R₅、R₆和R₇是羟基。在其他实施方案中，R₆和R₇分别是乙酰基氧基。

在其他实施方案中，当至少一个R₁和R₂是C₁-C₄含氘烷基并且至少一个R₃和R₄是卤代烷基时，或者当至少一个R₁和R₂是卤代烷基并且并且至少一个R₃和R₄是C₁-C₄含氘烷基时，Z是氢；当X₁是CH₂时Z是-OH、＝O、-SH或-NH₂；当X₁是H₂并且C₂₀的构型是S时Z是-OH、＝O、-SH或-NH₂，或者当X₁是H₂并且C₂₀的构型是R时Z是＝O、-SH或-NH₂.

在一个实施方案中，Z是-OH。

本发明这方面的其他实施方案包括那些化合物，其中：X₁是CH₂；A₂是单键；R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是甲基或乙基；并且Z是O。在一个实施方案中，X₁是CH₂；A₂是单键；R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是甲基或乙基；并且Z是-OH。在一个实施方案中，X₁是CH₂；A₂是单键；R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是甲基或乙基、C₂₀的构型是S；并且Z是-OH。在另一实施方案中，X₁是CH₂；A₂是单键；R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是甲基或乙基；并且Z是-OH。在这些实施方案中，R₁、R₂、R₃和R₄有利地各自是甲基。在某些实施方案中，卤代烷基是氟代烷基。有利地，氟代烷基是氟代甲基或三氟甲基。

本发明这方面的其他实施方案包括这样的化合物，其中：X₁是CH₂；A₂是叁键；R₁和R₂各自是C₁-C₄含氘烷基、R₃和R₄各自是氟代烷基；并且Z是氢。在其他实施方案中，X₁是CH₂；A₂是叁键；R₁和R₂各自是C₁-C₄含氘烷基、R₃和R₄各自是三氟甲基；并且Z是氢。

在本发明的其他特定实施方案中，维生素D化合物是式(IX)的挛位化合物及其药学上可接受的酯、盐和前体药物：

其中：

X₁是H₂或CH₂；

A₂是单键、双键或叁键；

R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基；

Z是-OH，Z也可以是＝O、-NH₂或-SH；

且C₂₀的构型是R或S。

在另一实施方案中，X₁是CH₂。在另一实施方案中，A₂是单键。在另一实施方案中，R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是甲基或乙基。在另一实施方案中，Z是-OH。在另一实施方案中，X₁是CH₂；A₂是单键；R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地是甲基或乙基；且Z是-OH。在更另一实施方案中，R₁、R₂、R₃和R₄各自是甲基。

在本发明的另一实施方案中，维生素D化合物是下式的孪位化合物：

上述化合物33和50的化学名称分别是1，25-二羟基-21-(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20R-胆钙化醇和1，25-二羟基-21-(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20S-胆钙化醇。

孪位化合物的另外的实施方案包括用于本发明的下列维生素D化合物：

(1，25-二羟基-21-(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20S-19-降-胆钙化醇)，

(1，25-二羟基-20S-21-(3-羟基-3-甲基-丁基)-24-酮基-19-降-胆钙化醇)，

(1，25-二羟基-20S-21-(3-羟基-3-甲基-丁基)-24-酮基-胆钙化醇)，

(1，25-二羟基-21(3-羟基-3-三氟甲基-4-三氟-丁炔基)-26，27-六氘-19-降-20S-胆钙化醇)

和

(1，25-二羟基-21(3-羟基-3-三氟甲基-4-三氟-丁炔基)-26，27-六氘-20S-胆钙化醇)。

在本发明的另外的实施方案中，维生素D化合物是式(X)的化合物及其药学上可接受的酯、盐和前体药物：

其中：

X₁和X₁各自独立地是H₂或＝CH₂，条件是X₁和X₁不都是＝CH₂；

R₁和R₂各自独立地是羟基、OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基、OC(O)氟代烷基；

R₃和R₄各自独立地是氢、C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基；

R₅和R₆各自独立地是C₁-C₄烷基。

适合地，R₃和R₄各自独立地是氢、C₁-C₄烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基。

在一组化合物实例中，R₅和R₆各自独立地是C₁-C₄烷基。

在另一组化合物实例中，R₅和R₆各自独立地是卤代烷基，例如C₁-C₄氟代烷基。

当R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基时，实例是环丙基。

在一个实施方案中，X₁和X₁各自是H₂。在另一实施方案中，R₃是氢，R₄是C₁-C₄烷基。在一个优选的实施方案中，R₄是甲基。

在另一实施方案中，R₅和R₆各自独立地是甲基、乙基、氟甲基或三氟甲基。在一个优选的实施方案中，R₅和R₆各自是甲基。

在另一实施方案中，R₁和R₁各自独立地是羟基或OC(O)C₁-C₄烷基。在一个优选的实施方案中，R₁和R₁各自是OC(O)C₁-C₄烷基。在另一个优选的实施方案中，R₁和R₁各自是乙酰基氧基。

这类化合物的一个实例是1，3-O-二乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-24-酮基-19-降-胆钙化醇，其具有下列结构：

在本发明的另一实施方案中，用于本发明的维生素D化合物是2-亚甲基-19-降-20(S)-1-α，25-羟基维生素D₃：

在WO 02/05823和US 5,536,713中描述了这种化合物和相关化合物的合成，将它们全文引入本文作为参考。

在本发明的另一实施方案中，维生素D化合物是式(XII)的化合物及其药学上可接受的酯、盐和前体药物：

其中：

A₁是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

X₁和X₂各自独立地是H或＝CH₂，条件是X₁和X₂不都是＝CH₂；

R₁和R₂各自独立地是OC(O)C₁-C₄烷基(例如OAc)、OC(O)羟基烷基或OC(O)卤代烷基，例如OC(O)C₁-C₄烷基或OC(O)羟基烷基；R1和/或R2或者可以是OH；

R₃、R₄和R₅各自独立地是氢、C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基；且

R₆和R₇各自独立地是C_1-4烷基或卤代烷基；且

R₈是H、-COC₁-C₄烷基(例如Ac)、-CO羟基烷基或-CO卤代烷基。

当R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基时，实例是环丙基。

适合地，R₆和R₇各自独立地是卤代烷基。适合地，R₈可以代表H或Ac。

在一个实施方案中，A₁是单键，A₂是单键，E或Z双键或叁键。在另一实施方案中，A₁是双键，A₂是单键，E或Z双键或叁键。本领域普通技术人员将容易认识到，当A₂是叁键时，R₅不存在。

在一个实施方案中，X₁和X₂各自是H。在另一实施方案中，X₁是CH₂，X₂是H₂。在另一实施方案中，R₃是氢，R₄是C₁-C₄烷基。在一个优选的实施方案中，R₄是甲基。

在另一组化合物实例中，R₁和R₂都代表Oac。

在一组化合物实例中，R₆和R₇各自独立地是C_1-4烷基。在另一组化合物实例中，R₆和R₇各自独立地是卤代烷基。在另一实施方案中，R₆和R₇各自独立地是甲基、乙基或氟代烷基。在一个优选的实施方案中，R₆和R₈各自是三氟烷基，例如三氟甲基。

适合地，R₅代表氢。

因此，在某些实施方案中，用于本发明的维生素D化合物如式(XII)所示：

其中：

A₁是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

X₁和X₂各自独立地是H或＝CH₂，条件是X₁和X₂不都是＝CH₂；

R₁和R₂各自独立地是OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基或OC(O)卤代烷基；

R₃、R₄和R₅各自独立地是氢、C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基；

R₆和R₇各自独立地是卤代烷基；R₆和R₇或者可以是烷基；且

R₈是H、C(O)C₁-C₄烷基、C(O)羟基烷基或C(O)卤代烷基；

及其药学上可接受的酯、盐和前体药物。在优选实施方案中，当A₁是单键，R₃是氢、R₄是甲基时，那么A₂是双键或叁键。

在本发明的背景中特别优选的上述式(XII)化合物的一个实例是1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23Z-双烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇：

在另一个优选的实施方案中，化合物是式(XIII)的化合物，其中R₁和R₂各自是OAc；A₁是双键；A₂是叁键；R₈是H或Ac：

在上列式(XII)的某些实施方案中，用于本发明的维生素D化合物是式(XIV)所示的化合物：

在优选实施方案中，X₁是＝CH₂且X₂是H₂。当A₁是单键，且A₂是叁键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基，优选是甲基。当A₁是单键，且A₂是单键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基，优选是甲基。当A₁是双键，且A₂是单键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基，优选是甲基。

在优选实施方案中，X₁和X₂各自是H₂。当A₁是单键，且A₂是叁键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基或卤代烷基。该烷基优选是甲基，且该卤代烷基优选是三氟烷基，优选是三氟甲基。当A₁是单键，且A₂是单键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是或卤代烷基，优选是三氟烷基，优选是三氟甲基。当A₁是双键，且A₂是单键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基，优选是甲基。

上述式(XIV)化合物的其他实例包括：

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-23-炔-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-胆钙化醇；

1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇：

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23E-双烯-25R-26-三氟-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇；

1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-19-降-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-19-降-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-双高(bishomo)-19-降-胆钙化醇。

在上列式(XII)的某些其他实施方案中，用于本发明的维生素D化合物是式(XV)所示的化合物：

上述式(XV)化合物的其他实例包括：

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-19-降-胆钙化醇；

1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-19-降-胆钙化醇；

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇。

优选的式(XV)化合物是1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇：

另一优选化合物地实例是1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-胆钙化醇(称为“化合物D”)，其具有下式：

“化合物D”。

在WO2005/030222中描述了这类化合物，将其全文引入本文作为参考。本发明也涵盖化合物D的酯和盐的用途。酯包括可以在体内水解从而释放出化合物D的药学上可接受的不稳定酯。化合物D的盐包括可以与碱金属和碱土金属离子和金属离子盐例如钠、钾和钙离子及其盐例如氯化钙、丙二酸钙等形成的加合物和络合物。然而，尽管化合物D可以以其药学上可接受的盐或酯的形式施用，但是优选采用化合物D本身，即，不采用其酯或盐。

另一化合物是具有下式的1，25-二羟基-20，21，28-环丙基-胆钙化醇：

该化合物描述于U.S.6,492,353，将其全文引入本文作为参考。

本发明还包括1，25-二羟基-20，21，28-环丙基-胆钙化醇的酯和盐的用途。酯包括可以在体内水解从而释放出1，25-二羟基-20，21，28-环丙基-胆钙化醇的药学上可接受的不稳定酯。1，25-二羟基-20，21，28-环丙基-胆钙化醇的盐包括可以与碱金属和碱土金属离子和金属离子盐例如钠、钾和钙离子及其盐例如氯化钙、丙二酸钙等形成的加合物和络合物。然而，尽管1，25-二羟基-20，21，28-环丙基-胆钙化醇可以以其药学上可接受的盐或酯的形式施用，但是优选采用1，25-二羟基-20，21，28-环丙基-胆钙化醇本身，即，不采用其酯或盐。

其他用于本发明的优选维生素D化合物包括具有式(XVII)的那些：

其中：

B是单键、双键或叁键；

X₁和X₂各自独立地是H₂或CH₂，条件是X₁和X₂不都是CH₂；

R₄和R₅各自独立地是烷基或卤代烷基。

式(XVII)的化合物包括以下化合物：

1，25-二羟基-16-烯-23-炔-20-环丙基(cyclopyl)-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16-烯-23-炔-20-环丙基-19-降-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16-双烯-20-环丙基-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16，23E-双烯-20-环丙基-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16，23E-双烯-20-环丙基-26，27-六氟-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16，23Z-双烯-20-环丙基-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16，23Z-双烯-20-环丙基-26，27-六氟-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-19-降-胆钙化醇：

1，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇：

在另一实施方案中，用于本发明的维生素D化合物是式(XVI)的化合物：

其中：

X是H₂或CH₂；

R₁是氢、羟基或氟；

R₂是氢或甲基；

R₃是氢或甲基。当R₂或R₃是甲基时，R₃或R₂必须是氢；

R₄是甲基、乙基或三氟甲基；

R₅是甲基、乙基或三氟甲基；

A是单键或双键；

B是单键、E-双键、Z-双键或叁键。

在优选的化合物中，R₄和R₅各自是甲基或乙基，例如1-α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-26，27-双高-20-表-胆钙化醇(在实施例中称为“化合物A”)，其具有下式：

“化合物A”。

在US 5,939,408和EP 808833中描述了这类化合物，将它们的全部内容引入本文作为参考。本发明也涵盖化合物A的酯和盐的用途。酯包括可以在体内水解从而释放出化合物A的药学上可接受的不稳定酯。化合物A的盐包括可以与碱金属和碱土金属离子和金属离子盐例如钠、钾和钙离子及其盐例如氯化钙、丙二酸钙等形成的加合物和络合物。然而，尽管化合物A可以以其药学上可接受的盐或酯的形式施用，但是优选采用化合物A本身，即，不采用其酯或盐。

本发明的另一种维生素D化合物是1，25-二羟基-21(3-羟基-3-三氟甲基-4-三氟-丁炔基)-26，27-六氘-19-降-20S-胆钙化醇。

用于本发明的其他优选维生素D化合物包括具有式(XVII)的那些：

在一个实施方案中，A₁是双键，且X₁是＝CH₂、X₂是H₂。当A₂是叁键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基或卤代烷基。该烷基优选是甲基，该卤代烷基优选是三氟烷基，优选是三氟甲基。当A₂是双键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基，优选是甲基。也优选R₆和R₇独立地烷基和卤代烷基。当A₂是单键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基，优选是甲基。

在优选实施方案中，A₁是双键，且X₁和X₂各自是H₂。当A₂是叁键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基或卤代烷基。该烷基优选是甲基或乙基，该卤代烷基优选是三氟烷基，优选是三氟甲基。当A₂是双键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是卤代烷基，优选是三氟烷基，优选是三氟甲基。当A₂是双键时，优选R₈是H或C(O)CH₃、R₆和R₇是烷基，优选是甲基。

在本发明式(XVIII)的另一实施方案中，R₁和R₂是OC(O)CH₃、A₁是单键且A₂是单键、双键或叁键，除非当R₃是H且R₄是甲基、A₂是双键或叁键。在优选实施方案中，R₃是H、R₄是甲基、R₅不存在、R₈是H或C(O)CH₃、R₆是R₇是烷基，优选是甲基。

优选的本发明化合物包括下列：

1，3-二-O-乙酰基-1，25二羟基-16，23Z-双烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇，

1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-胆钙化醇，

1，3，25-三-O乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23E-双烯-25R，26-三氟-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-19-降-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-19-降-胆钙化醇，

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-双高-19-降-胆钙化醇，及

1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-23-炔-胆钙化醇。这些化合物可以如PCT公开WO2005030222所述制备。具有上文所给出的结构的化合物的用途延及其药学上可接受的酯、盐和前体药物。

用于本发明的其他优选维生素D化合物包括具有式(XIX)的那些：

其中：

A₁是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

X₁和X₂各自独立地是H₂或CH₂，条件是X₁和X₂均不是CH₂；

R₁和R₂各自独立地是OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基或OC(O)卤代烷基；

R₃、R₄和R₅各自独立地是氢、C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起形成C₃-C₆环烷基；

R₆和R₇各自独立地是卤代烷基；以及

R₈是H、OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基或OC(O)卤代烷基。在优选实施方案中，R₆和R₇各自独立地是三卤代烷基，尤其是三氟甲基。

这些化合物可以如PCT公开WO2005030222所述制备，其内容在此引用作为参考。具有上文所给出的结构的化合物的用途延及其药学上可接受的酯、盐和前体药物。

特别值得关注的维生素D化合物是骨化三醇(本文中也称为化合物B)。

具有上文所给出的结构的化合物的用途延及其药学上可接受的酯、盐和前体药物。

用于本发明的为维生素D受体激动剂的其他化合物实例包括帕立骨化醇(ZEMPLAR^TM)(参见美国专利5,587,497)、他卡西妥(BONALFA^TM)(参见美国专利4,022,891)、度骨化醇(HECTOROL^TM)(参见Lam等人.(1974)Science 186，1038)、马沙骨化醇(OXAROL^TM)(参见美国专利4,891,364)、钙泊三醇(DAIVONEX^TM)(参见美国专利4,866,048)和氟骨三醇(FULSTAN^TM)。

其他化合物包括ecalcidene、calcithiaZol和tisocalcitate。

其他化合物包括atocalcitol、来沙骨化醇和西奥骨化醇。

另一种可能相关的化合物是司骨化醇(“OSTEO D”)。

可以用于本发明的其他维生素D化合物的非限制性实例包括在下列已公布的国际申请中描述的那些：WO 01/40177、WO0010548、WO0061776、WO0064869、WO0064870、WO0066548、WO0104089、WO0116099、WO0130751、WO0140177、WO0151464、WO0156982、WO0162723、WO0174765、WO0174766、WO0179166、WO0190061、WO0192221、WO0196293、WO02066424、WO0212182、WO0214268、WO03004036、WO03027065、WO03055854、WO03088977、WO04037781、WO04067504、WO8000339、WO8500819、WO8505622、WO8602078、WO8604333、WO8700834、WO8910351、WO9009991、WO9009992、WO9010620、WO9100271、WO9100855、WO9109841、WO9112239、WO9112240、WO9115475、W09203414、WO9309093、WO9319044、WO9401398、WO9407851、WO9407852、WO9408958、WO9410139、WO9414766、WO9502577、WO9503273、WO9512575、W09527697、WO9616035、WO9616036、WO9622973、W09711053、WO9720811、WO9737972、WO9746522、WO9818759、WO9824762、WO9828266、WO9841500、WO9841501、WO9849138、WO9851663、WO9851664、WO9851678、WO9903829、WO9912894、WO9915499、WO9918070、WO9943645、WO9952863，在下列美国专利中描述的那些：US3856780、US3994878、US4021423、US4026882、US4028349、US4225525、US4613594、US4804502、US4898855、US5039671、US5087619、US5145846、US5247123、US5342833、US5428029、US5451574、US5612328、US5747479、US5804574、US5811414、US5856317、US5872113、US5888994、US5939408、US5962707、US5981780、US6017908、US6030962、US6040461、US6100294、US6121312、US6329538、US6331642、US6392071、US6452028、US6479538、US6492353、US6537981、US6544969、US6559138、US6667298、US6683219、US6696431、US6774251、和在下列已公布的美国专利申请中描述的那些：US2001007907、US2003083319、US2003125309、US2003130241、S2003171605、US2004167105。用于本发明的其他维生D化合物包括US4929609、S5393900、US5747478、WO2005/082375、WO2005/030223、WO2005/030222、WO2005/027923、WO2004/098522和WO2004/098507中描述的那些。

应当注意的是，一些本发明的化合物的结构包括不对称的碳原子。因此，不言而喻的是，在本发明的范围内包括从这类不对称性产生的异构体(例如所有对映体和非对映体)，另有说明者除外。通过经典的分离技术和/或通过立体化学控制的合成可以得到基本上纯形式的这类异构体。

天然存在的或合成的异构体可以用本领域已知的多种方式加以分离。分离两种对映体的外消旋混合物的方法包括采用手性固定相的色谱法(例如参见”Chiral Liquid Chromatography，”W.J.Lough编辑.Chapman andHall，New York(1989))。也可以通过经典的拆分技术分离对映体。例如，可以利用非对映体盐的生成和分步结晶来分离对映体。对于羧酸对映体的分离，可以通过加入对映体纯的手性碱例如番木鳖碱、奎宁、麻黄碱、马钱子碱等生成非对映体盐。或者，可以与对映体纯的手性醇例如薄荷醇生成非对映体酯，然后分离非对映体酯并水解，得到游离的对映体富集的羧酸。对于氨基化合物旋光异构体的分离，加入手性羧酸或磺酸例如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸可以导致非对映体盐的生成。

本发明也提供了药物组合物，其包含有效量的本文所述的维生素D化合物和药学上可接受的载体。在另一实施方案中，有效量是有效治疗子宫内膜异位症的量，如前文所述。

在一个实施方案中，使用药学上可接受的制剂将维生素D化合物施用于个体，例如在施用于个体后将维生素D化合物持续递送至个体达至少12小时、24小时、36小时、48小时、一周、两周、三周或四周的药学上可接受的制剂。

在某些实施方案中，这些药物组合物适合于局部或口服施用于个体。在其他实施方案中，正如下文所详细描述的，本发明的药物组合物可以被特殊配制成以固体或液体形式施用，包括适应于以下施用途径的那些：(1)口服施用，例如顿服剂(drench)(水性或非水性的溶液或混悬液)、片剂、大丸剂(bolus)、散剂、颗粒剂、糊剂；(2)肠胃外施用，例如皮下、肌内或静脉内注射，例如无菌的溶液或混悬液；(3)局部应用，例如应用于皮肤的乳膏剂、软膏剂或喷雾剂；(4)阴道内或直肠内，例如阴道栓、乳膏剂或泡沫剂；或者(5)气雾剂，例如水性气雾剂、脂质体制剂或含有化合物的固体颗粒。

措辞“药学上可接受的”表示在合理的医学判断范围内适合于与人类和动物的组织接触使用、没有过度的毒性、刺激作用、变态反应或者其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些本发明的维生素D化合物、含有这类化合物的组合物和/或剂型。

措辞“药学上可接受的载体”包括药学上可接受的材料、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料，它们参与将主题化学物质从个体的一个器官或一个部分携带或运输到个体的另一个器官或另一个部分。每种载体必须是“可接受的”，意义是与制剂其他成分相容并对患者无害。能够用作药学上可接受的载体的一些物质的实例包括：(1)糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末状西黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉子油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原的水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)药物制剂中采用的其他无毒的相容性物质。

在组合物中也可以存在湿润剂、乳化剂和润滑剂，例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂与芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁羟甲苯(BHT)、卵磷脂、棓酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。

含有维生素D化合物的组合物包括适合于口服、鼻、局部(包括口腔和舌下)、直肠、阴道、气雾剂和/或肠胃外施用的那些。组合物可以适宜地为单元剂型，并且可以通过药学领域众所周知的任意方法加以制备。可以与载体物质组合形成单一剂型的活性成分的量将因所治疗的主体、特定的施用方式而异。可以与载体物质组合形成单一剂型的活性成分的量一般是该化合物产生治疗效果的量。一般而言，以百分之一百计，该量将是约1％至约99％的活性成分，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％。

制备这些组合物的方法包括使维生素D化合物与载体和任选地一种或多种辅助成分联合在一起的步骤。一般而言，制剂通过以下方法制备：将维生素D化合物与液体载体或微细粉碎的固体载体或此二者均匀且紧密地联合在一起，然后如果必要，使产物成形。

适合于口服施用的本发明的组合物可以是胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用矫味基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒剂的形式，或者是在水性或非水性液体中的溶液或混悬液形式，或者是水包油型或油包水型乳剂的形式，或者是酏剂或糖浆剂的形式，或者是软锭剂(pastille)(使用惰性基质，例如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯胶)和/或漱口剂等形式，它们各自含有预定量的维生素D化合物作为活性成分。化合物也可以以大丸剂、药糖剂(eleetuary)或糊剂的形式施用。

在用于口服施用的本发明的固体剂型(胶囊剂、片剂、丸剂、糖衣丸、散剂、颗粒剂等)中，活性成分与一种或多种药学上可接受的载体混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或任意下列成分：(1)填充剂或增量剂(extender)，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶解阻滞剂(solution retardingagent)，例如石蜡；(6)吸收加速剂(absorption accelerator)，例如季铵化合物；(7)湿润剂，例如acetyl alcohol和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和其混合物；和(10)着色剂。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含缓冲剂。也可以采用相似类型的固体组合物作为软与硬填充明胶胶囊剂中的填充剂，使用赋形剂例如乳糖或奶糖(milk sugars)，以及高分子聚乙二醇等。

片剂可以通过压制或模制法制备，任选地含有一种或多种辅助成分。压制片可以使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如淀粉羟乙酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂加以制备。模制片可以通过在适合的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末状活性成分混合物来制备。

本发明的药物组合物的片剂和其他固体剂型例如糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可以任选地具有刻痕或者具有包衣和外壳，例如肠溶衣和药物制剂领域中众所周知的其他包衣。也可以使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素(以提供所需的释放性质)、其他聚合物基质、脂质体和/或微球对它们进行配制以提供其中活性成分的缓慢或控制释放。它们可以被灭菌，方法是例如通过截留细菌的滤器进行过滤，或者在使用前以无菌固体组合物的形式掺入可溶于无菌水或一些其他无菌可注射溶媒中的灭菌剂。这些组合物还可以任选地含有遮光剂，并且可以是任选地以延迟方式仅仅在胃肠道的某一部分或者优先在胃肠道的某一部分释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。活性成分也可以是微囊包封的形式，如果适当，还有一种或多种上述赋形剂。

维生素D化合物的用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳、溶液、混悬液、糖浆剂和酏剂。除了活性成分以外，液体剂型可以含有本领域常用的惰性稀释剂例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类(特别是棉子油、花生油、玉米油、胚油(germ oil)、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇(tetrahydrofuryl alcohol)、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯及其混合物。

除了惰性稀释剂以外，口服组合物还可以包括辅剂，例如湿润剂、乳化和助悬剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除了具有活性的维生素D化合物以外，混悬液还可以含有助悬剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂和西黄蓍胶及其混合物。

用于直肠或阴道施用的本发明的药物组合物可以是栓剂的形式，它可以通过将一种或多种维生素D化合物与一种或多种适合的无刺激性的赋形剂或载体(例如包含可可脂、聚乙二醇、栓剂用蜡或水杨酸盐的赋形剂或载体混合)来制备，其在室温下是固体，但是在体温下是液体，因此将在直肠或阴道腔中融化，并释放出活性成分。

适合于阴道施用的本发明的组合物也包括阴道栓、卫生栓(tampon)、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，它们含有本领域已知的适用的载体。

用于局部或透皮施用维生素D化合物的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。可以将活性维生素D化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和可能需要的任意防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。

除了本发明的维生素D化合物以外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂还可以含有赋形剂，例如动物与植物脂肪、油类、蜡类、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合物。

除了维生素D化合物以外，散剂和喷雾剂还可以含有赋形剂，例如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或者这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常用的抛射剂，例如氯氟烃或，和挥发性的未取代的烃，例如丁烷和丙烷。

作为替代选择，维生素D化合物可以通过气雾剂施用。这是通过制备含有该化合物的水性气雾剂、脂质体制剂或固体颗粒来实现的。也可能使用非水性(例如碳氟化合物抛射剂)混悬液。声波喷雾器是优选的，因为它们使药物暴露于剪切最小化，而剪切能够导致化合物的降解。

通常，水性气雾剂是通过配制药物与常规药学上可接受的载体和稳定剂的水性溶液或混悬液来制备的。载体和稳定剂因特定化合物的需要而异，但是通常包括非离子表面活性剂(吐温(Tween)、普流罗尼(Pluronic)或聚乙二醇)、无害的蛋白质如血清白蛋白、脱水山梨醇酯、油酸、卵磷脂、氨基酸如甘氨酸、缓冲剂、盐、糖或糖醇。气雾剂一般是由等渗溶液制备的。

透皮贴剂具有向机体提供维生素D化合物的控制递送的附加优点。这类剂型可以通过将药物溶解或分散在恰当的介质中来制备。也可以使用吸收促进剂，以增加活性成分跨越皮肤的通量。通过提供速率控制膜或者将活性成分分散在聚合物基质或凝胶中可以控制这类通量的速率。

适合于肠胃外施用的本发明的药物组合物包含一种或多种维生素D化合物以及一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散物、混悬液或乳液或者无菌粉末，所述粉末可以在使用前即刻被重构为无菌可注射的溶液或分散物，它们可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或者助悬剂或增稠剂。

在本发明的药物组合物中可以采用的适合的水性与非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适合的混合物、植物油例如橄榄油和可注射的有机酯例如油酸乙酯。恰当的流动性可以通过利用包衣材料例如卵磷脂、在分散物的情况下通过维持所需的粒径以及通过利用表面活性剂来维持。

这些组合物也可以含有辅剂，例如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗细菌和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等，可以确保防止微生物的作用。也可能需要在组合物中包括等渗剂(isotonic agent)例如糖、氯化钠等。另外，通过包含延迟吸收的物质例如单硬脂酸铝和明胶可以实现可注射药物形式的延迟吸收。

在一些情况下，为了延长药物的作用，需要延缓药物从皮下或肌内注射剂中的吸收。利用水溶性差的结晶性或无定形材料的液体混悬液可以实现这一点。因此药物的吸收速率依赖于它的溶解速率，后者则可以依赖于晶体大小和结晶形式。或者，通过将药物溶解或混悬在油性媒介物中实现肠胃外施用的药物形式的延迟吸收。

可注射的贮库形式是通过在生物可降解的聚合物例如聚交酯-聚乙醇酸交酯中形成维生素D化合物的微囊基质来制备的。根据药物与聚合物的比例和所采用的特定聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。其他生物可降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。贮库型可注射制剂也通过将药物包埋在与机体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

当维生素D化合物作为药物被施用于人和动物时，它们可以以其本身或者作为药物组合物被给予，所述组合物含有例如0.1至99.5％(更优选0.5至90％)的活性成分以及药学上可接受的载体。

无论所选择的施用途径如何，通过本领域技术人员已知的常规方法将本发明的维生素D化合物(其可以使用适合的水合形式)和/或药物组合物配制成药学上可接受的剂型。

可以改变活性成分在本发明的药物组合物中的实际剂量水平和施用时间，以获得就特定患者、组合物和施用方式而言有效达到所需治疗响应、对患者没有毒性的活性成分量。举例性的剂量范围是0.1至300μg/天。本发明维生素D化合物的优选剂量是患者能够耐受并且不形成高血钙的最大值。优选地，以下列浓度施用本发明的维生素D化合物：约0.001μg至约100μg/千克体重，约0.001-约10μg/kg或约0.001μg-约100μg/kg体重。刚才引用的数值范围也旨在构成本发明的一部分。

维生素D化合物可以与第二种治疗子宫内膜异位症的药物在独立的或组合的药物制剂中分别、相继或同时施用。

本发明化合物的合成

大量本发明的化合物可以这样制备，在细胞中温育维生素D₃类似物，例如，在UMR 106细胞或Ros 17/2.8细胞中温育维生素D₃类似物，导致本发明维生素D₃化合物的生成。例如，在UMR 106细胞中温育1，25-二羟基-16-烯-5，6-反式-骨化三醇，导致生成1，25-二羟基-16-烯-24-氧代-5，6-反式-骨化三醇。

除了本文所述的方法以外，本发明的化合物可以利用多种合成方法加以制备。例如，本领域技术人员将能够利用合成现有维生素D₃化合物的方法来制备本发明的化合物(例如参见Bouillon，R.等人.，(1995)EndocrineReviews 16(2)：201-204；Ikekawa N.(1987)Med.Res.Rev.7：333-366；DeLuca H.F.和Ostrem V.K.(1988)Prog.Clin.Biol.Res.259：41-55；Ikekawa N.和Ishizuka S.(1992)CRC Press 8：293-316；Calverley M.J.和Jones G.(1992)Academic Press 193-270；Pardo R.和Santelli M.(1985)Bull.Soc.Chim.Fr：98-114；Bythgoe B.(1980)Chem.Soc.Rev.449-475；Quinkert G.(1985)Synform 3：41-122；Quinkert G.(1986)Synform4：131-256；Quinkert G.(1987)Synform 5：1-85；Mathieu C.等人.(1994)Diabetologia 37：552-558；Dai H.和Posner G.H.(1994)Synthesis 1383-1398；DeLuca等人，WO 97/11053)。

举例性的合成方法包括：7-脱氢胆固醇的1-羟基化侧链修饰衍生物的光化学开环，该方法首先生成前维生素，前维生素容易以众所周知的方式热解为维生素D₃(Barton D.H.R.等人.(1973)J.Am.Chem.Soc.95：2748-2749；Barton D.H.R.(1974)JCS Chem.Comm.203-204)；(Lythgoe等人(1978)JCS Perkin Trans.1：590-595)开发的氧化膦偶联法，其包括偶联氧化膦与Grundmman酮衍生物，直接生成1-α，25(OH)₂D₃骨架，如Baggiolini E.G.，等人.(1986)J.Org.Chem.51：3098-3108；DeSchrijver J.和DeClercq P.J.(1993)Tetrahed Lett 34：4369-4372；Posner G.H和KinterC.M.(1990)J.Org.Chem.55：3967-3969所述；双烯炔(dienzyne)经半氢化作用生成前维生素结构，前维生素结构发生重排，生成相应的维生素D₃类似物，如Harrison R.G.等人.(1974)JCS Perkin Trans.1：2654-2657；Castedo L.等人.(1988)Tetrahed Lett 29：1203-1206；Mascarenas J.S.(1991)Tetrahedron 47：3485-3498；Barrack S.A.等人.(1988)J.Org.Chem.53：1790-1796)和Okamura W.H.等人.(1989)J.Org.Chem.54：4072-4083所述；乙烯基丙双烯法，该方法牵涉这样的中间体，它们随后利用加热或者金属催化异构化、继之以敏化光异构化的组合进行排列(Okamura W.H.等人.(1989)J.Org.Chem.54：4072-4083；Van Alstyne E.M.等人.(1994)J.Am.Chem.Soc.116：6207-6210)；Trost等人.B.M.等人.J.Am.Chem.Soc.114：9836-9845；Nagasawa K.等人.(1991)Tetrahed Lett 32：4937-4940所述的方法，该方法牵涉无环的A-环前体，它与溴代烯炔发生分子内交叉偶联，直接导致1，25(OH)₂D₃骨架的形成；甲苯磺酰化衍生物，其被异构化为i-甾类，i-甾类能够在碳-1被修饰，随后在溶剂解条件下反异构化，形成1-α，25(OH)₂D₂或其类似物(Sheves M.和Mazur Y.(1974)J.Am.Chem.Soc.97：6249-6250；Paaren H.E.等人.(1980)J.Org.Chem.45：3253-3258；KabatM.等人.(1991)Tetrahed Lett 32：2343-2346；Wilson S.R.等人.(1991)Tetrahed Lett 32：2339-2342)；维生素D衍生物直接修饰为1-氧合5，6-反式维生素D，如Andrews D.R.等人.(1986)J.Org.Chem.51：1635-1637所述；经由热异构化通过前维生素形式的中间作用可以用前维生素D₃的Diels-Alders环加成法环恢复(cyclorevert)为1-α，25(OH)₂D₂(Vanmaele L.等人.(1985)Tetrahedron 41：141-144)；最后一种方法需要通过使用适合的保护基团例如过渡金属衍生物或者通过其他化学转化作用直接修饰1-α，25(OH)₂D₂或类似物(Okarmura W.H.等人.(1992)J.Cell Biochem.49：10-18)。用于合成维生素D₂化合物的另外的方法例如如日本专利公报No.62750/73、26858/76、26859/76和71456/77；美国专利No.3,639,596、3,715,374、3,847,955和3,739,001中所述。

具有饱和侧链的本发明的化合物的实例可以按照美国专利No.4,927,815所阐述和描述的一般过程加以制备。具有不饱和侧链的本发明的化合物的实例可以按照美国专利No.4,847,012所阐述和描述的一般过程加以制备。其中R基团一起代表环烷基的本发明的化合物的实例可以按照美国专利No.4,851,401所阐述和描述的一般过程加以制备。

在Kutner等人，The Journal of Organic Chemistry，1988，53：3450-3457中公开了另一种制备1-α，25-二羟基麦角骨化醇的侧链修饰类似物的合成策略。另外，在美国专利No.4,717,721中公开了24-高与26-高维生素D类似物的制备。

手性分子的对映选择性合成是本领域的已知技术。通过对映选择性合成与纯化技术的组合，可以合成很多手性分子的对映体富集制备物。例如，已经报道了1-α，25(OH)₂D₃的A-环非对映体的对映选择性合成的方法，如Muralidharan等人.(1993)J.Organic Chem.58(7)：1895-1899和Norman等人.(1993)J.Biol.Chem.268(27)：20022-30所述。本领域已知的各种化合物的其他对映体合成方法尤其包括环氧化物(例如参见Johnson，R.A.；Sharpless，K.B.Catalytic Asymmetric Synthesis；Ojima，I.编辑：VCH：NewYork，1993；第4.1章.Jacobsen，E.N.Ibid.第4.2章)、二醇(例如Sharpless，J.Org.Chem.(1992)57：2768的方法)和醇(例如酮的还原，E.J.Corey等人.，J.Am.Chem.Soc.(1987)109：5551)。其他可用于生成光学富集产物的反应包括烯烃的氢化(例如M.Kitamura等人.，J.Org.Chem.(1988)53：708)、Diels-Alder反应(例如K.Narasaka等人.，J.Am.Chem.Soc.(1989)111：5340)、羟醛反应和烯醇化物的烷基化(例如参见D.A.Evans等人.，J.Am.Chem.Soc.(1981)103：2127；D.A.Evans等人.，J.Am.Chem.Soc(1982)104：1737)、羰基加成(例如R.Noyori，Angew.Chem.Int.Ed.Eng.(1991)30：49)和内消旋(meso)环氧化物的开环(例如Martinez，L.E.；Leighton J.L.，Carsten，D.H.；Jacobsen，E.N.J.Am.Chem.Soc.(1995)117：5897-5898)。利用酶产生光学富集产物也是本领域所众所周知的(例如M.P.Scheider编辑″Enzymes as Catalysts in Organic Synthesis″，D.Reidel，Dordrecht(1986))。

手性合成能够导致高立体异构体纯度的产物。然而，在一些情况下，产物的立体异构体纯度不是足够高的。技术人员将认识到，可以利用本文所述的分离方法进一步提高通过手性合成所获得的维生素D₃-差向异构体的立体异构体纯度。

式(XVIII)的化合物：

其中：

X₁和X₁各自独立地是H₂或＝CH₂，条件是X₁和X₁不都是＝CH₂；

R₁和R₂各自独立地是羟基、OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基、OC(O)氟代烷基，条件是R₁和R₂不都是羟基；

R₃和R₄各自独立地是氢、C₁-C₄烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基；

R₅和R₆各自独立地是C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，例如氟代烷基，例如氟甲基和三氟甲基；

及其药学上可接受的酯、盐和前体药物，可以通过本节和化学文献中所述的方法加以合成。具体而言，本发明的式(XVIII)化合物可以如以下流程图1所示进行制备。因此，式(XVIII)化合物是通过以下方法制备的：用正丁基锂作为碱，在四氢呋喃中偶联式(XIX)化合物与式(XX)化合物，得到式(XXI)化合物。随后除去保护性硅烷基(R₁＝OSi(CH₃)₂t.Bu)，得到式(XVIII)的1，3-二羟基维生素D₃化合物(R₁＝OH，R₂＝OH)。1和/或3位的酰化是利用本领域众所周知的方法实现的。例如，式IV的1，3-二乙酰基氧基化合物(R₁＝R₂＝OAc)的制备需要用乙酸酐和吡啶进行另外的乙酰化，如流程图2所示和下文所述。

关于流程图1，式(XX)的化合物是已知化合物，是从已知的式(XXII)的环氧-酮开始制备的。通过Wittig反应将式(XXII)的化合物转化为式(XXIII)的环氧-烯烃。用LiAlH₄还原为化合物(XXIV)并保护羟基，得到化合物(XXV)。然后，在路易斯酸(CH₃)₂AlCl的存在下在四氢呋喃中使式(XXV)的烯与已知的羟基-缀合的酮(XXVI)(R₅＝R₆＝CH₃)反应，得到化合物(XXVII)，其具有目标维生素D类似物的C，D-环和完整侧链。最后，除去硅烷基并氧化，得到关键中间体式(XX)的酮。

流程图1

流程图2显示了化合物(XX)与硅烷基化的氧化膦在Wittig偶联条件下的偶联。除去硅烷基保护基团，得到式(XVIII)的二醇，其中R₁和R₂都是羟基。

流程图2

其中X₁、X₂、R₃、R₄、R₅和R₆如上文所定义。

流程图3显示了式(P)的维生素D₃衍生物的乙酰化作用，生成式(Q)的乙酸酯。

流程图3

1，25-二羟基-16-烯-24-酮基     1，3-O-二乙酰基-1，25-二羟基-16-

-19-降-胆钙化醇                烯-24-酮基-19-降-胆钙化醇

下式的维生素D₃化合物：

其中：

A₁是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

X₁和X₂各自独立地是H或＝CH₂；

R₁和R₂各自独立地是OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基或OROC(O)卤代烷基；

R₃、R₄和R₅各自独立地是氢、C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基；

R₆和R₇各自独立地是卤代烷基；

R₈是H或C(O)C₁-C₄烷基、C(O)羟基烷基或OROC(O)卤代烷基；

及其药学上可接受的酯、盐和前体药物，可以类似于1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23Z-双烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(1)的合成加以制备，其在标准的二醇的乙酰化条件下进行，得到相应的二乙酸酯：

现在将参照以下的非限制性实施例描述本发明；关于附图，其中：

图1显示维生素D化合物(化合物A)对子宫内膜异位症体内模型病变重量(lesion weight)的处理作用。图A——接受相同供体细胞的处理和未处理个体对。图B——具体对病变重量的变化。图C——处理和未处理个体的平均病变重量。

图2显示维生素D化合物(化合物A)对子宫内膜基质细胞增殖的处理作用。图A——正位细胞、图B——异位细胞。

图3显示维生素D化合物(化合物A)对培养细胞基因表达的处理作用。

图4显示维生素D化合物(化合物A)对子宫内膜异位症体内模型病变重量的处理作用。图A——完整数据集。图B——处理组病变重量的均值。图C——病变重量的相对降低作为处理的结果。

图5显示维生素D化合物(化合物B)对子宫内膜异位症体内模型病变重量的处理作用。图A——完整数据集。图B——处理组病变重量的均值。图C——病变重量的相对降低作为处理的结果。

图6显示维生素D化合物(化合物C)对子宫内膜异位症体内模型病变重量的处理作用。图A——完整数据集。图B——处理组病变重量的均值。图C——病变重量的相对降低作为处理的结果。

图7阐述病变重量的降低作为维生素D化合物，化合物A的不同剂量的函数。

图8阐述一系列使用维生素D化合物，化合物A的不同处理方案产生的病变重量降低。

图9显示化合物A对细胞贴壁的处理作用。

图10显示化合物A对细胞移行的处理作用。

图11显示化合物A对一系列炎症标记物的处理作用。

合成实施例

所有牵涉维生素D₃类似物的操作都是在琥珀色玻璃器皿中、在氮气氛中进行的。在使用前即刻从钠-二苯酮羰游基中蒸馏出四氢呋喃，将溶质的溶液用硫酸钠干燥。熔点是在Thomas-Hoover毛细管仪上测定的，未经校正。旋光度是在25℃下测量的。¹H NMR光谱是在400MHz下、在CDCl₃中记录的，另有说明者除外。TLC是在硅胶板(Merck PF-254)上进行的，在短波长UV光下显影或者向板喷以10％磷钼酸的甲醇溶液，然后加热。快速色谱是在40-65μm目的硅胶上进行的。制备型HPLC是在5×50cm柱和15-30μm目的硅胶上进行的，流速100ml/分钟。

合成实施例1-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23Z-双烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(1)的合成

原料1，25-二羟基-16，23Z-双烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇可以如Doran等人的美国专利5,428,029中所述来制备。将3mg 1，25-二羟基-16，23Z-双烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇溶于0.8ml吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2ml乙酸酐，在该温度下维持16小时。然后将反应混合物用1ml水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在5ml水与20ml乙酸乙酯之间分配。将有机层用3×5ml水洗涤，用5ml饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3ml盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，经过快速色谱处理，使用1∶6、1∶4和1∶2乙酸乙酯-己烷逐步梯度洗脱。用TLC监测柱色谱(1∶4乙酸乙酯-己烷，喷以磷钼酸使斑点显影)，合并适当的级分，蒸发，将残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，然后再次蒸发，得到23.8mg标题化合物(1)，为无色糖浆状物；400MHz¹H NMRδ0.66(3H，s)，0.90(1H，m)，1.06(3H，d，J＝7.2Hz)，1.51(1H，m)，1.72-1.82(3H，m)，1.9-2.1(3H，m)，1.99(3H，s)2.04(3H，s)，2.2-2.3(3m)，2.44-2.64(6H，m)，2.78(1H，m)，3.01(1H，s)，5.10(2H，m).5.38(1H，m)，5.43(1H，d，J＝12Hz)，5.85(1H，d，J＝11.5Hz)，5.97(1H，dt，J＝12和7.3Hz)，6.25(1H，d，J＝11.5Hz).

合成实施例2-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(2)和1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(3)的合成

原料1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇可以如Baggiolini等人的美国专利5,451,574和5,612,328中所述来制备。将314mg(0.619mmol)1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇溶于1.5ml吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.4ml乙酸酐。将反应混合物在室温下保持7小时，然后在冰箱中保持23小时。然后用10ml水稀释，用30ml乙酸乙酯萃取。将有机萃取液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发。将残余物在10×140mm柱上用快速色谱处理，以1∶6和1∶4乙酸乙酯-己烷作为流动相，得到126mg 1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(2)和248mg 1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(3)。

合成实施例3-1，3-二-O-乙酰基-1，25-羟基-16-烯-23-炔-胆钙化醇(4)的合成

向10-mL圆底烧瓶装入40mg 1，25-二羟基-16-烯-23-炔-胆钙化醇。将该原料溶于1mL吡啶。将该溶液在冰浴中冷却，然后加入0.3mL乙酸酐。将溶液搅拌30分钟，然后冷藏过夜，用水稀释，借助10mL水和40mL乙酸乙酯转移至分液漏斗中。将有机层用4×20mL水和10mL通过硫酸钠塞的盐水洗涤，蒸发。将浅棕色的油性残余物用1∶9乙酸乙酯-己烷吸收，然后在10×130mm柱上经快速色谱处理，用1∶9乙酸乙酯-己烷作为级分1-5的流动相，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分6-13的流动相，用1∶4乙酸乙酯-己烷作为级分14-20的流动相(18mL级分)。级分14-19含有主要的带，Rf 0.15(TLC 1∶4)。合并这些级分，蒸发，得到无色油状物0.044g。将该物质用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到无色粘性泡沫状物，0.0414g标题化合物(4)。

合成实施例4-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化醇(5)的合成

将0.0468g 1，25-二羟基-16，23E-双烯-胆钙化醇溶于1.5mL吡啶。将该溶液在冰浴中冷却，然后冷藏过夜，用10mL水稀释，同时仍然浸在冰浴中，搅拌10分钟，借助10mL水和40mL乙酸乙酯转移至分液漏斗中。将有机层用4×20mL水和10mL通过硫酸钠塞的盐水洗涤，蒸发。将浅棕色的油性残余物用1∶9乙酸乙酯-己烷吸收，然后在10×130mm柱上经快速色谱处理，用1∶9乙酸乙酯-己烷作为级分1-3的流动相(20mL级分)，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分6-8的流动相，用1∶4乙酸乙酯-己烷作为级分9-17的流动相(18mL级分)。级分11-14含有主要的带，Rf 0.09(TLC 1∶4)。合并这些级分，蒸发，得到无色油状物0.0153g。将该物质用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.014g标题化合物(5)。

合成实施例6-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-胆钙化醇(6)的合成

将0.0774g 1，25-二羟基-16-烯-胆钙化醇溶于1.5mL吡啶。将该溶液在冰浴中冷却，然后加入0.3mL乙酸酐。将溶液搅拌，冷藏过夜，然后用1mL水稀释，在冰浴中搅拌1小时，用30mL乙酸乙酯和15mL水稀释。将有机层用4×15mL水洗涤，用5mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将浅棕色的油性残余物用1∶9乙酸乙酯-己烷吸收，然后在10×130mm柱上经快速色谱处理，用1∶9乙酸乙酯-己烷作为级分1的流动相(20mL级分)，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分2-7的流动相，用1∶4乙酸乙酯-己烷作为级分8-13的流动相。级分9-11含有主要的带，Rf0.09(TLC 1∶4乙酸乙酯-己烷)。合并这些级分，蒸发，得到无色油状物0.0354g。将该物质用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发溶液，得到0.027g无色薄膜状物，即标题化合物(6)。

合成实施例7-1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇(7)和1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇(8)的合成

将0.0291g 1，25-羟基-16-烯-23-炔-26，27-六氟-胆钙化醇溶于1.5mL吡啶。将该溶液在冰浴中冷却，然后加入0.25mL乙酸酐。将溶液搅拌20分钟，在冰箱中保存过夜。将冷溶液用15mL水稀释，搅拌10分钟，用30mL乙酸乙酯稀释。将有机层用4×15mL水洗涤，用5mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将浅棕色的油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，然后在10×110mm柱上经快速色谱处理，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为流动相。由级分2-3得到72.3461-72.3285＝0.0176g。蒸发级分6-7，得到0.0055g。将级分2-3的残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.0107g标题三乙酸酯(7)。将级分6-7的残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.0049g二乙酸酯(8)。

合成实施例8-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16，23E-双烯-25R，26-三氟-胆钙化醇(9)的合成

将1.5mL 1，25-二羟基-16，23E-双烯-25R，26-三氟-胆钙化醇溶于1.5mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.4mL乙酸酐。然后将混合物冷藏。2天后，将混合物用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，然后在10mL水与30mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用4×15mL水洗涤，用5mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将浅棕色的油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，然后在10×130mm柱上经快速色谱处理，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为流动相。级分4-6(TLC，1∶4)含有主要的带(参见TLC)。蒸发这些级分，得到0.0726g。将该残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.0649g无色泡沫状物，即标题化合物(9)。

合成实施例8-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-19-降-胆钙化醇(10)的合成

将0.0535g 1，25-二羟基-16-烯-19-降-胆钙化醇溶于1.5mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.3mL乙酸酐，将混合物冷藏过夜。将溶液用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，然后在10mL水与30mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用4×15mL水洗涤，用5mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将几乎无色的油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分1-6的流动相，然后使用1∶4乙酸乙酯-己烷。合并级分9-19(TLC，1∶4乙酸乙酯-己烷，Rf0.09，见下)，蒸发，得到0.0306g，将其用甲酸甲酯吸收，过滤，然后蒸发。得到0.0376g标题化合物(10)。

合成实施例9-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-19-降-胆钙化醇(11)的合成

将50mg 1，25-二羟基-16-烯-23-炔-19-降-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐。将混合物冷藏3天，然后用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在5mL水与20mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用4×5mL水洗涤，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将几乎无色的油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，然后在15×120mm柱上经快速色谱处理，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分1-6的流动相，用1∶4乙酸乙酯-己烷作为级分9-12的流动相，用1∶3乙酸乙酯-己烷作为级分13-15的流动相，用1∶2乙酸乙酯-己烷作为其余级分的流动相。合并级分11-16(TLC，1∶4乙酸乙酯-己烷，Rf 0.09，见下)，蒸发76.1487-76.1260＝0.0227g，用甲酸甲酯吸收，过滤，然后蒸发。得到0.0186g标题化合物(11)。

合成实施例10-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-双高-19-降-胆钙化醇(12)的合成

将0.0726g 1，25-二羟基-16-烯-23-炔-26，27-双高-19-降-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐。将溶液在冰浴中搅拌，然后冷藏过夜。然后将溶液用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在10mL水与25mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用3×10mL水洗涤，用5mL饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥和蒸发，33.5512-33.4654＝0.0858g褐色油性残余物，将其在15×120mm柱上经快速色谱处理，用1∶6作为流动相。合并级分7-11(各20mL)(TLC 1∶4乙酸乙酯-己烷，Rf 0.14)，蒸发，67.2834-67.2654＝0.018g。将该残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发。得到0.0211g标题化合物(12)。

合成实施例11-1，3二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-19-降-胆钙化醇(13)的合成

将0.282g 1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-19-降-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐，将混合物冷藏过夜，然后用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在5mL水与20mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用3×5mL水洗涤，用5mL饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，然后在15×110mm柱上经快速色谱处理，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分1-4的流动相，用1∶4乙酸乙酯-己烷作为级分5-12的流动相，用1∶3乙酸乙酯-己烷作为级分13-15的流动相，用作为其余级分的流动相。合并级分7-12(TLC，1∶4乙酸乙酯-己烷，Rf0.13)，蒸发，将残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，然后蒸发，得到0.023g标题化合物(13)。

合成实施例12-1，3，25-三-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(14)和1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(15)的合成

将0.1503g 1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐。将混合物冷藏过夜，然后用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在5mL水与20mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用3×5mL水洗涤，用5mL饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，然后在15×150mm柱上经快速色谱处理，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分1-5的流动相，用1∶4乙酸乙酯-己烷作为其余级分的流动相。合并级分3-4和6-7，蒸发，然后用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.0476g标题三乙酸酯(14)和0.04670g标题二乙酸酯(15)。

合成实施例13-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-胆钙化醇(16)的合成

将0.0369g 1，25-二羟基-20-环丙基-23-炔-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐，将混合物冷藏过夜，然后用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在5mL水与20mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用3×5mL水洗涤，用5mL饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发。将油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，然后在13×110mm柱上经快速色谱处理，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分1-7的流动相，用1∶4乙酸乙酯-己烷作为其余级分的流动相。合并级分9-11(TLC，1∶4乙酸乙酯-己烷)，蒸发，用甲酸甲酯吸收，过滤，然后蒸发，得到0.0099g标题化合物(16)。

合成实施例14-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(17)的合成

将0.0328g 1，25-二羟基-20-环丙基-23E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐。将溶液冷藏过夜。然后将溶液用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在5mL水与20mL乙酸乙酯之间分配(萃取水层没有得到磷钼酸可检测的产物)。将有机层用3×5mL水洗涤，用5mL饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，蒸发，残余物显示Rf 0.25，为唯一的斑点。将油性残余物用1∶6乙酸乙酯-己烷吸收，然后在13.5×110mm柱上经快速色谱处理，用1∶6乙酸乙酯-己烷作为级分1-10的流动相。合并级分4-9，蒸发，将残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，然后蒸发，得到0.0316g标题化合物(17)。合成实施例15-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-23Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(18)的合成

将0.0429g 1，25-羟基-20-环丙基-23Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐。将溶液冷藏过夜。然后将溶液用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在7mL水与25mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用3×5mL水洗涤，用5mL饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥(硫酸钠)，TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)显示几乎一个斑点，蒸发，在15×120mm柱上经快速色谱处理，用1∶6作为流动相。合并级分3-6(各20mL)，蒸发。将残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.0411g标题化合物(18)。

合成实施例16-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-20-环丙基-胆钙化醇(19)的合成

将0.0797g 1，25-二羟基-20-环丙基-胆钙化醇溶于0.8mL吡啶，冷却至冰浴温度，加入0.2mL乙酸酐。将溶液冷藏过夜。然后将溶液用1mL水稀释，在冰浴中搅拌10分钟，在10mL水与25mL乙酸乙酯之间分配。将有机层用3×10mL水洗涤，用5mL饱和碳酸氢钠洗涤一次，用3mL盐水洗涤一次，然后干燥，蒸发，得到0.1061g褐色油性残余物，将其在15×120mm柱上经快速色谱处理，用1∶6作为流动相。合并级分9-16(各20mL)(TLC 1∶4乙酸乙酯-己烷，Rf 0.13)，蒸发。将该残余物用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.0581g标题化合物(19)。

合成实施例17-1，3-二-O-乙酰基-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-19-降-胆钙化醇(20)的合成

在0℃下，向1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-19-降-胆钙化醇(94mg，0.23mmol)在吡啶(3mL)中的溶液中加入乙酸酐(0.5mL，5.3mmol)。将混合物搅拌1小时，冷藏15小时，然后搅拌另外8小时。加入水(10mL)，搅拌15分钟后，将反应混合物用AcOEt∶己烷1∶1(25mL)萃取，用水(4×25mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(120mg)经FC纯化(15g，30％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(20)(91mg，0.18mmol，80％)。[α]³⁰ _D＝+14.4c 0.34，EtOH；UVλmax(EtOH)：242nm(ε34349)，250nm(ε40458)，260nm(ε27545)；¹H NMR(CDCl₃)：6.25(1H，d，J＝11.1Hz)，5.83(1H，d，J＝11.3Hz)，5.35(1H，m)，5.09(2H，m)，2.82-1.98(7H，m)，2.03(3H，s)，1.98(3H，s)，2.00-1.12(15H，m)，1.18(6H，s)，0.77(3H，s)，0.80-0.36(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：170.73(0)，170.65(0)，157.27(0)，142.55(0)，130.01(0)，125.06(1)，123.84(1)，115.71(1)，71.32(0)，70.24(1)，69.99(1)，59.68(1)，50.40(0)，44.08(2)，41.40(2)，38.37(2)，35.96(2)，35.80(2)，32.93(2)，29.48(3)，29.31(2)，28.71(2)，23.71(2)，22.50(2)，21.56(3)，21.51(0)，21.44(3)，18.01(3)，12.93(2)，10.53(2)；C₃₁H₄₆O₅的MS HRES计算值M+Na521.3237，观测值M+Na 521.3233

合成实施例18-1，3-二-O-乙酰基-1-α，25-羟基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(21)的合成

在0℃下，向1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(100mg，0.23mmol)在吡啶(3mL)中的溶液中加入乙酸酐(0.5mL，5.3mmol)。将混合物搅拌2小时，然后冷藏另外15小时。加入水(10mL)，搅拌15分钟后，将反应混合物用AcOEt∶己烷1∶1(25mL)萃取，用水(4×25mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(150mg)经FC纯化(15g，30％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(21)(92mg，0.18mmol，78％)。[α]³⁰ _D＝-14.9c 0.37，EtOH；UVλmax(EtOH)：208nm(ε15949)，265nm(ε15745)；¹H NMR(CDCl₃)：6.34(1H，d，J＝11.3Hz)，5.99(1H，d，J＝11.3Hz)，，5.47(1H，m)，5.33(1H，m)，5.31(1H，s)，5.18(1H，m)，5.04(1H，s)，2.78(1H，m)，2.64(1H，m)，2.40-1.10(18H，m)，2.05(3H，s)，2.01(3H，s)，1.18(6H，s)，0.76(3H，s)，0.66-0.24(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：170.76(0)，170.22(0)，157.18(0)，143.02(0)，142.40(0)，131.94(0)，125.31(1)，125.10(1)，117.40(1)，115.22(2)，72.97(1)，71.32(0)，69.65(1)，59.71(1)，50.57(0)，44.07(2)，41.73(2)，38.36(2)，37.10(2)，35.80(2)，29.45(3)，29.35(2)，29.25(3)，28.92(2)，23.80(2)，22.48(2)，21.55(3)，21.50(3)，21.35(0)，17.90(3)，12.92(2)，10.54(2)；C₃₂H₄₆O₅的MS HRES计算值M+Na 533.3237，观测值M+Na 533.3236

合成实施例19-1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-23-炔-胆钙化醇(22)的合成

将0.2007g(0.486mmol)溶于2mL吡啶。将该溶液在冰浴中冷却，加入0.6mL乙酸酐。将溶液在冰浴中保持45小时，然后用10mL水稀释，搅拌10分钟，用10mL水和40mL乙酸乙酯平衡。将有机层用4×20mL水和10mL盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，蒸发。将棕色的油性残余物经快速色谱处理，用1∶19、1∶9和1∶4乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度。蒸发Rf 0.16(TLC 1∶4乙酸乙酯-己烷)的主要的带，得到1，3-二-O-乙酰基-1，25-二羟基-23-炔-胆钙化醇(22)，为无色泡沫状物，0.0939g。

合成实施例20-(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇的合成

在-78℃下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-1-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-1-基]}-环丙基}-乙炔基(1.0g，2.90mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液中加入n-BuLi(2.72mL，4.35mmol，1.6M己烷溶液)。在-78℃下搅拌1小时后，加入丙酮(2.5mL，34.6mmol)，继续搅拌2.5小时。加入NH₄Cl_aq(15mL)，将混合物在室温下搅拌15分钟，然后用AcOEt萃取(2×50mL)。合并萃取液，用盐水(50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(2.4g)经FC纯化(50g，10％EtOAc的己烷溶液)，得到(3aR，4S，7aR)-5-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-1-基]-环丙基}-2-甲基-戊-3-炔-2-醇(1.05g，2.61mmol)，用四丁基氟化铵(6mL，6mmol，1.0M THF溶液)处理，在65-75℃下搅拌48小时。将混合物用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×25mL)和盐水(25mL)洗涤。合并水洗液，用EtOAc(25mL)萃取，合并有机萃取液，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(1.1g)经FC纯化(50g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(0.75g，2.59mmol，90％)。[α]³⁰ _D＝+2.7c 0.75，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.50(1H，m)，4.18(1H，m)，2.40(2H，s)，2.35-1.16(11H，m)，1.48(6H，s)，1.20(3H，s)，0.76-0.50(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：156.39，125.26，86.39，80.19，69.21，65.16，55.14，46.94，35.79，33.60，31.67，29.91，27.22，19.32，19.19，17.73，10.94，10.37；C₂₂H₂₈O₂的MS HREI计算值M+288.2089，观测值M+288.2091。

合成实施例21-(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇的合成

将(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(-4-羟基-4-甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(0.72g，2.50mmol)、乙酸乙酯(10mL)、己烷(24mL)、无水乙醇(0.9mL)、喹啉(47RL)与Lindlar催化剂(156mg，5％Pd/CaCO₃)的混合物在室温下氢化2小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，滤垫用AcOEt洗涤。合并滤液和洗液，用1M HCl、NaHCO₃和盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥后，蒸发溶剂，将残余物(0.79g)经FC纯化(45g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(640mg，2.2mmol，88％)。

合成实施例22-(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇的合成

利用Paar仪器，将(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(100mg，0.34mmol)、1，4-双(二苯基-膦基)丁烷1，5环辛双烯四氟硼酸铑(25mg，0.034mmol)、二氯甲烷(5mL)与一滴汞的混合物在室温和50p.s.i.压力下氢化3小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，然后用乙酸乙酯洗涤。合并滤液和洗液，蒸发至干(110mg)，经FC纯化(10g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(75mg，0.26mmol，75％)。[α]³⁰ _D＝-8.5c 0.65，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.37(1H，m，)，4.14(1H，m)，2.37-1.16(17H，m)，1.19(6H，s)，1.18(3H，s)，0.66-0.24(4H，m)；C₁₉H₃₂O₂的MS HREI计算值M+H 292.2402，观测值M+H 292.2404。

合成实施例23-(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮的合成

在室温下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(440mg，1.50mmol)与硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的混悬液中加入重铬酸吡啶(1.13g，3.0mmol)。将所得混合物搅拌5小时，通过硅胶(10g)过滤，然后用20％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮粗品(426mg，1.47mmol，98％)。在室温下，向搅拌着的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(424mg，1.47mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三甲基硅烷基-咪唑(0.44mL，3.0mmol)。将所得混合物搅拌1.0小时，通过硅胶(10g)过滤，用10％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到标题化合物(460mg，1.27mmol，86％)。[α]²⁹ _D＝-9.9c 0.55，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.33(1H，dd，J＝3.2，1.5Hz)，2.81(1H，dd，J＝10.7，6.2Hz)，2.44(1H，ddd，J＝15.6，10.7，1.5Hz)，2.30-1.15(13H，m)重叠2.03(ddd，J＝15.8，6.4，3.2Hz)，1.18(6H，s)，0.92(3H，s)，0.66-0.28(4H，m)，0.08(9H，s)；¹³C NMR(CDCl₃)：211.08(0)，155.32(0)，124.77(1)，73.98(0)，64.32(1)，53.91(0)，44.70(2)，40.45(2)，38.12(2)，34.70(2)，29.86(3)，29.80(3)，26.80(2)，24.07(2)，22.28(2)，21.24(0)，18.35(3)，12.60(2)，10.64(2)，2.63(3)；C₂₂H₃₈O₂Si的MSHRES计算值M+362.2641，观测值M+362.2648。

合成实施例24-(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮的合成

在室温下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(381mg，1.32mmol)与硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的混悬液中加入重铬酸吡啶(1.0g，2.65mmol)。将所得混合物搅拌1.5小时，通过硅胶(10g)过滤，然后用20％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮粗品(360mg，1.26mmol，95％)。在室温下，向搅拌着的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(360mg，1.26mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三甲基硅烷基-咪唑(0.25mL，1.7mmol)。将所得混合物搅拌0.5小时，通过硅胶(10g)过滤，用5％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到标题化合物(382mg，1.07mmol，81％)。

合成实施例25-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-胆钙化醇(23)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1S，5R)-1，5-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-3-[2-(二苯基氧膦基(phosphinoyl))-亚乙-(Z)-基]-2-亚甲基-环己烷(513mg，0.88mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.55mL，0.88mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(179mg，0.50mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(25mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(716mg)经FC纯化(15g，5％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-胆钙化醇(324mg，0.45mmol)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-胆钙化醇(322mg，0.45mmol)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌18小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(280mg)经FC纯化(10g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(23)(172mg，0.41mmol，82％)。[α]³¹ _D＝+32.4c 0.50，MeOH.UV λmax(EtOH)：261nm(ε11930)；¹H NMR(CDCl₃)：6.36(1H，d，J＝11.3Hz)，6.09(1H，d，J＝11.3Hz)，5.45(1H，m)，5.33(1H，m)，5.01(1H，s)，4.45(1H，m)，4.22(1H，m)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.50-1.10(16H，m)，1.45(6H，s)，0.81(3H，s)，0.72-0.50(4H，m)；C₂₈H₃₈O₃的MS HRES计算值M+422.2821，观测值M+422.2854。

合成实施例26-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-19-降-胆钙化醇(24)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1R，3R)-1，3-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-5-[2-(二苯基氧膦基)亚乙基]-环己烷(674mg，1.18mmol)在四氢呋喃(8mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.74mL，1.18mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(235mg，0.66mmol)在四氢呋喃(3mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(25mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(850mg)经FC纯化(15g，5％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-19-降-胆钙化醇(330mg，0.46mmol)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-19-降-胆钙化醇(328mg，0.46mmol)中加入四丁基氟化铵(5mL，5mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌62小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(410mg)经FC纯化(10g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(24)(183mg，0.45mmol，68％)。[[α]²⁹ _D＝+72.1c0.58，MeOH.UV λmax(EtOH)：242nm(

29286)，251nm(ε34518)，260nm(ε23875)；¹H NMR(CDCl₃)：6.30(1H，d，J＝11.3Hz)，5.94(1H，d，J＝11.3Hz)，5.48(1H，m)，4.14(1H，m)，4.07(1H，m)，2.78(2H，m)，2.52-1.10(18H，m)，1.49(6H，s)，0.81(3H，s)，0.72-0.50(4H，m)；C₂₇H₃₈O₃的MSHRES计算值M+410.2821，观测值M+410.2823。

合成实施例27-(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇的合成

在-78℃下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-1-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-1-基]}-环丙基}-乙炔基(1.95g，5.66mmol)在四氢呋喃(35mL)中的溶液中加入n-BuLi(4.3mL，6.88mmol，1.6M己烷溶液)。在-78℃下搅拌1小时后，加入六氟丙酮(六滴，来自冷却管)，继续搅拌1小时。加入NH₄Cl_aq(10mL)，使混合物升温至室温。将反应混合物用盐水(100mL)稀释，用己烷萃取(2×125mL)。合并萃取液，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(8.2g)经FC纯化(150g，10％EtOAc的己烷溶液)，得到(3aR，4S，7aR)-5-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-1-基]-环丙基}-1，1，1-三氟-2-三氟甲基-戊-3-炔-2-醇(2.73g，5.35mmol)，用四丁基氟化铵(20mL，20mmol，1.0M THF溶液)处理，在65-75℃下搅拌30小时。将混合物用AcOEt(150mL)稀释，用水(5×150mL)和盐水(150mL)洗涤。合并水性洗液，用AcOEt(150mL)萃取，合并有机萃取液，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(3.2g)经FC纯化(150g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(2.05g，5.17mmol，97％)。[α]²⁸ _D＝+6.0c 0.47，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.50(1H，br.s)，4.16(1H，br.s)，3.91(1H，s)，2.48(1H，AB四重蜂的A部分，J＝17.5Hz)，2.43(1H，AB四重蜂的B部分，J＝17.5Hz)，2.27(1H，m)，2.00-1.40(9H，m)，1.18(3H，s)，0.8-0.5(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：155.26(0)，126.68(1)，121.32(0，q，J＝284Hz)，90.24(0)，71.44(0，七重峰J＝34Hz)，70.54(0)，69.57(1)，55.17(1)，47.17(0)，36.05(2)，33.63(2)，30.10(2)，27.94(2)，19.50(3)，19.27(0)，17.90(2)，11.56(2)，11.21(2)；C₁₉H₂₂O₂F₆的MS HREI计算值M+396.1524，观测值M+396.1513。

合成实施例28-(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-羟基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮的合成

在室温下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(504mg，1.27mmol)与硅藻土(1.5g)在二氯甲烷(12mL)中的混悬液中加入重铬酸吡啶(0.98g，2.6mmol)。将所得混合物搅拌2.5小时，通过硅胶(5g)过滤，然后用20％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到标题化合物(424mg，1.08mmol，85％)。[α]²⁸ _D＝+3.1c 0.55，CHCl₃.¹HNMR(CDCl₃)：5.46(1H，br.s)，3.537(1H，s)，281(1H，dd，J＝10.7，6.5Hz)，2.49-1.76(10H，m)，0.90(3H，s)，0.77-0.53(4H，m)；C₁₉H₂₀O₂F₆的MS HREI计算值M+H 395.1440，观测值M+H 395.1443。

合成实施例29-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(25)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1R，3R)-1，3-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-5-[2-(二苯基氧膦基)亚乙基]-环己烷(900mg，1.58mmol)在四氢呋喃(8mL)中的溶液中加入n-BuLi(1.0mL，1.6mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-羟基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(200mg，0.51mmol)在四氢呋喃(3mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(25mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(850mg)经FC纯化(20g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(327mg，0.44mmol，86％)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(327mg，0.44mmol)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌24小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(250mg)经FC纯化(10g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(25)(183mg，0.45mmol，68％)。[α]³⁰ _D＝+73.3c 0.51，EtOH.UVλmax(EtOH)：243nm(

2938)，251nm(ε34973)，260nm(ε23924)；¹H NMR(CDCl₃)：6.29(1H，d，J＝11.1Hz)，5.93(1H，d，J＝11.1Hz)，5.50(1H，m)，4.12(1H，m)，4.05(1H，m)，2.76(2H，m)，2.55-1.52(18H，m)，0.80(3H，s)，0.80-0.49(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：155.24(0)，141.78(0)，131.28(0)，126.23(1)，123.65(1)，121.09(0，q，J＝285Hz)，115.67(1)，89.63(0)，70.42(0)，67.48(1)，67.29(1)，59.19(1)，49.87(0)，44.49(2)，41.98(2)，37.14(2)，35.76(2)，29.22(2)，28.47(2)，27.57(2)，23.46(2)，19.32(0)，17.97(3)，11.89(2)，10.18(2)；C₂₇H₃₂O₃F₆的MS HRES计算值M+H519.2329，观测值M+H 519.2325。

合成实施例30-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-26，27-六氟-胆钙化醇(26)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1S，5R)-1，5-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-3-[2-(二苯基氧膦基)-亚乙-(Z)-基]-2-亚甲基-环己烷(921mg，1.58mmol)在四氢呋喃(8mL)中的溶液中加入n-BuLi(1.0mL，1.6mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-羟基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(197mg，0.50mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(25mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(876mg)经FC纯化(20g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-26，27-六氟-胆钙化醇(356mg，0.47mmol)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-炔-26，27-六氟-胆钙化醇(356mg，0.47mmol)中加入四丁基氟化铵(5mL，5mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌15小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(270mg)经FC纯化(20g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(26)(216mg，0.41mmol，87％)。[α]³⁰ _D＝+40.0c 0.53，EtOH.UVλmax(EtOH)：262nm(ε12919)；¹H NMR(CDCl₃)：6.38(1H，d，J＝11.5Hz)，6.10(1H，d，J＝11.1Hz)，5.49(1H，m)，5.35(1H，s)，5.02(1H，s)，4.45(1H，m)，4.25(1H，m)，3.57(1H，s)，2.83-1.45(18H，m)，0.82(3H，s)，0.80-0.51(4H，m)；C₂₈H₃₂O₃F₆的MS HRES计算值M+H531.2329，观测值M+H 531.2337。

合成实施例31-(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2E-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇的合成

在5℃下，向氢化铝锂(4.5mL，4.5mmol，1.0M THF溶液)中首先加入固体甲醇钠(245mg，4.6mmol)，然后滴加(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(360mg，0.91mmol)在四氢呋喃(5mL)中的溶液。加入完成后，将混合物在回流下搅拌2.5小时。然后在冰浴中冷却，用水(2.0mL)和氢氧化钠(2.0mL，2.0M水溶液)淬灭；用乙醚(50mL)稀释，搅拌30分钟，然后加入MgSO₄(5g)，继续搅拌30分钟。蒸发滤液后，将残余物(0.42g)经FC纯化(20g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(315mg，0.79mmol，87％)。[α]²⁸ _D＝+2.0c 0.41，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：6.24(1H，dt，J＝15.7，6.7Hz)，5.60(1H，d，J＝15.7Hz)，5.38(1H，br.s)，4.13(1H，br.s)，3.27(1H，s)，2.32-1.34(12H，m)，1.15(3H，s)，0.80-0.45(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：155.89(0)，138.10(1)，126.21(1)，122.50(0，q，J＝287Hz)，119.15(1)，76.09(0，sep.J＝31Hz)，69.57(1)，55.33(1)，47.30(0)，40.31(2)，36.05(2)，33.71(2)，30.10(2)，20.36(0)，19.46(3)，17.94(2)，11.96(2)，11.46(2)；C₁₉H₂₄O₂F₆的MS REI计算值M+398.1680，观测值M+398.1675。

合成实施例32-(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2E-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮的合成

在室温下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基4-三氟甲基-戊-2E-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(600mg，1.51mmol)与硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的混悬液中加入重铬酸吡啶(1.13g，3.0mmol)。将所得混合物搅拌3.5小时，通过硅胶(10g)过滤，然后用25％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2E-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮粗品(550mg，1.39mmol，92％)。在室温下，向搅拌着的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2E-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(550mg，1.39mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三甲基硅烷基-咪唑(1.76mL，12.0mmol)。将所得混合物搅拌1.0小时，通过硅胶(10g)过滤，用10％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到标题化合物(623mg，1.33mmol，88％)。[α]²⁸ _D＝-1.6c 0.51，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：6.14(1H，dt，J＝15.5，6.7Hz)，5.55(1H，d，J＝15.5Hz)，5.35(1H，m)，2.80(1H，dd，J＝10.7，6.4Hz)，2.47-1.74(10H，m)，0.90(3H，s)，0.76-0.40(4H，m)，0.2(9H，s)；¹³C NMR(CDCl₃)：210.99(0)，154.28(0)，137.41(1)，126.26(1)，122.59(0，q，J＝289Hz)，120.89(1)，64.31(1)，53.96(0)，40.60(2)，40.13(2)，35.00(2)，27.03(2)，24.21(2)，20.57(0)，18.53(3)，12.41(2)，10.79(2)，1.65(3)；C₂₂H₃₀O₂F₆Si的MS HRES计算值M+H 469.1992，观测值M+H 469.1995。

合成实施例33-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(27)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1R，3R)-1，3-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-5-[2-(二苯基氧膦基)亚乙基]-环己烷(514mg，0.90mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2E-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(200mg，0.43mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(35mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(750mg)经FC纯化(15g，5％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇的混合物(250mg)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇的混合物(250mg)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌24小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(270mg)经FC纯化(10g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(27)(157mg，0.30mmol，70％)。[α]³⁰ _D＝+63.3c 0.45，EtOH.UVλmax(EtOH)：243nm(ε30821)，251nm(ε36064)，260nm(ε24678)；¹H NMR(CDCl₃)：6.29(1H，d，J＝11.3Hz)，6.24(1H，dt，J＝15.9，6.4Hz)，5.92(1H，d，J＝11.1Hz)，5.61(1H，d，J＝15.7Hz)，5.38(1H，m)，4.13(1H，m)，4.05(1H，m)，2.88(1H，s)，2.82-1.34(19H，m)，0.770(3H，s)，0.80-0.36(4H，m)；C₂₇H₃₄O₃F₆的MS HRES计算值M+H 521.2485，观测值M+H 521.2489。

合成实施例34-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-胆钙化醇(28)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1S，5R)-1，5-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-3-[2-(二苯基氧膦基)-亚乙-(Z)-基]-2-亚甲基-环己烷(525mg，0.90mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2E-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(200mg，0.43mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌2.5小时，用己烷(35mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(760mg)经FC纯化(15g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-胆钙化醇的混合物(274mg)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-胆钙化醇的混合物(274mg)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌15小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(280mg)经FC纯化(15g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(28)(167mg，0.31mmol，73％)。[α]³⁰ _D＝+18.3c 0.41，EtOH.UVλmax(EtOH)：207nm(ε17778)，264nm(ε15767)；¹H NMR(CDCl₃)：6.36(1H，d，J＝11.1Hz)，6.24(1H，dt，J＝15.7，6.7Hz)，6.07(1H，d，J＝11.3Hz)，5.60(1H，d，J＝15.5Hz)，5.35(1H，m)，5.33(1H，s)，5.00(1H，s)，4.44(1H，m)，4.23(1H，m)，3.14(1H，s)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.40-1.40(15H，m)，0.77(3H，s)，0.80-0.36(4H，m)；C₂₈H₃₄O₃F₆的MS HRES计算值M+H 533.2485，观测值M+H533.2483。

合成实施例35-(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇的合成

将(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(300mg，0.76mmol)、乙酸乙酯(5mL)、己烷(12mL)、无水乙醇(0.5mL)、喹啉(30μL)与Lindlar催化剂(75mg，5％Pd/CaCO₃)的混合物在室温下氢化2小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用AcOEt洗涤滤垫。蒸发溶剂，得到标题化合物(257mg，0.65mmol，87％)。[α]²⁸ _D＝+1.8c 0.61，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：6.08(1H，dt，J＝12.3，6.7Hz)，5.47(1H，m，)，5.39(1H，d，J＝12.1Hz)，4.15(1H，br.s)，3.28(1H，s)，2.52-1.34(12H，m)，1.16(3H，s)，0.78-0.36(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：156.66(0)，141.77(1)，126.51(1)，122.79(0，q，J＝285Hz)，115.77(1)，69.59(1)，55.41(1)，47.28(0)，36.44(2)，35.90(2)，33.75(2)，30.22(2)，20.89(0)，19.41(3)，17.94(2)，12.05(2)，11.11(2)；C₁₉H₂₄O₂F₆的MS HRES计算值M+H399.1753，观测值M+H 399.1757。

合成实施例36-(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮的合成

在室温下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(617mg，1.55mmol)与硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的混悬液中加入重铬酸吡啶(1.17g，3.1mmol)。将所得混合物搅拌2.5小时，通过硅胶(5g)过滤，然后用20％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮粗品(600mg，1.51mmol，98％)。在室温下，向搅拌着的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羟基-4-三氟甲基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(600mg，1.51mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三甲基硅烷基-咪唑(1.76mL，12.0mmol)。将所得混合物搅拌1.0小时，通过硅胶(10g)过滤，用10％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到标题化合物(640mg，1.37mmol，88％)。[α]²⁸ _D＝-0.2c 0.55，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.97(1H，dt，J＝12.2，6.2Hz)，5.40(1H，m)，5.38(1H，d，J＝12.2Hz)，2.82(1H，dd，J＝10.7，6.6Hz)，2.60-1.74(10H，m)，0.89(3H，s)，0.75-0.36(4H，m)，0.21(9H，s)；¹³C NMR(CDCl₃)：210.56(0)，154.30(0)，139.28(1)，125.81(1)，122.52(0，q，J＝289Hz)，118.17(1)，64.11(1)，53.69(0)，40.43(2)，35.51(2)，34.85(2)，26.94(2)，24.07(2)，20.89(0)，18.39(3)，12.26(2)，10.61(2)，1.43(3)；C₂₂H₃₀O₂F₆Si的MS HRES计算值M+H 469.1992，观测值M+H 469.1992。

合成实施例37-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇(，29)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1R，3R)-1，3-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-5-[2-(二苯基氧膦基)亚乙基]-环己烷(514mg，0.90mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(194mg，0.41mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.0小时，用己烷(35mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(750mg)经FC纯化(15g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇的混合物(230mg)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-降-胆钙化醇的混合物(230mg)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌40小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(260mg)经FC纯化(10g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(29)(1327mg，0.25mmol，62％)。[α]²⁸ _D＝+53.6c 0.33，EtOH.UVλmax(EtOH)：243nm(

26982)..251nm(ε32081)，260nm(ε21689)；¹H NMR(CDCl₃)：6.29(1H，d，J＝10.7Hz)，6.08(1H，dt，J＝12.5，6.7Hz)，5.93(1H，d，J＝11.1Hz)，5.46(1H，m，)，5.40(1H，d，J＝12.7Hz))，4.12(1H，m)，4.05(1H，m)，3.14(1H，s)，2.80-1.40(19H，m)，0.77(3H，s)，0.80-0.36(4H，m)；C₂₇H₃₄O₃F₆的MS HRES计算值M+H 521.2485，观测值M+H 521.2487。

合成实施例38-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-胆钙化醇(30)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1S，5R)-1，5-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-3-[2-(二苯基氧膦基)-亚乙-(Z)-基]-2-亚甲基-环己烷(525mg，0.90mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(200mg，0.43mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌2.5小时，用己烷(35mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(680mg)经FC纯化(15g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-胆钙化醇的混合物(310mg)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-胆钙化醇与1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-羟基-16-烯-20-环丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-胆钙化醇的混合物(310mg)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌15小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(370mg)经FC纯化(15g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(30)(195mg，0.37mmol，85％)。[α]³⁰ _D＝+9.4c 0.49，EtOH.UV λmax(EtOH)：262nm(ε11846)；¹H NMR(CDCl₃)：6.36(1H，d，J＝11.1Hz)，6.08(2H，m)，5.44(1H，m)，5.40(1H，d，J＝12.3Hz)，5.32(1H，s)，5.00(1H，s)，4.43(1H，m)，4.23(1H，m)，3.08(1H，s)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.55-1.40(15H，m)，0.77(3H，s)，0.80-0.34(4H，m)；C₂₈H₃₄O₃F₆的MS HRES计算值M+H 533.2485，观测值M+H 533.2502。

合成实施例39-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-19-降-胆钙化醇(31)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1R，3R)-1，3-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-5-[2-(二苯基氧膦基)亚乙基]-环己烷(697mg，1.22mmol)在四氢呋喃(9mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.77mL，1.23mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(220mg，0.61mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(35mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(900mg)经FC纯化(15g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-19-降-胆钙化醇(421mg，0.59mmol)。在室温下，向1-αt，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-26，27-六氘代-19-降-胆钙化醇(421mg，0.59mmol)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌40小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(450mg)经FC纯化(15g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(31)(225mg，0.54mmol，89％)。[α]²⁹ _D＝+69.5c 0.37，EtOH.UVλmax(EtOH)：243nm(

27946)，251nm(ε33039)，261nm(ε22701)；¹H NMR(CDCl₃)：6.30(1H，d，J＝11.3Hz)，5.93(1H，d，J＝11.3Hz)，，5.36(1H，m)，4.12(1H，m)，4.04(1H，m)，2.75(2H，m)，2.52-1.04(22H，m)，1.18(6H，s)，0.79(3H，s)，0.65-0.26(4H，m)；¹³CNMR(CDCl₃)：157.16(0)，142.33(0)，131.25(0)，124.73(1)，123.76(1)，115.50(1)，71.10(0)，67.39(1)，67.19(1)，59.47(1)，50.12(0)，44.60(2)，43.84(2)，42.15(2)，38.12(2)，37.18(2)，35.57(2)，29.26(3)，29.11(2)，29.08(3)，28.48(2)，23.46(2)，22.26(2)，21.27(0)，17.94(3)，12.70(2)，10.27(2)；C₂₇H₄₂O₃的MSHRES计算值M+H 415.3207，观测值M+H 415.3207。

合成实施例40-1-α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(32)的合成

在-78℃下，向搅拌着的(1S，5R)-1，5-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-3-[2-(二苯基氧膦基)-亚乙-(Z)-基]-2-亚甲基-环己烷(675mg，1.16mmol)在四氢呋喃(8mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.73mL，1.17mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(210mg，0.58mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(35mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(850mg)经FC纯化(15g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(382mg，0.53mmol)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(382mg，0.53mmol)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌15小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(380mg)经FC纯化(15g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(32)(204mg，0.48mmol，83％)。[α]²⁹ _D＝+16.1c 0.36，EtOH.UVλmax(EtOH)：208nm(ε17024)，264nm(ε16028)；¹H NMR(CDCl₃)：6.37(1H，d，J＝11.3Hz)，6.09(1H，d，J＝11.1Hz)，5.33(2H，m)，5.01(1H，s)，4.44(1H，m)，4.23(1H，m)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.38-1.08(20H，m)，1.19(6H，s)，0.79(3H，s)，0.66-0.24(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：157.07(0)，147.62(0)，142.49(0)，133.00(0)，124.90(1)，124.73(1)，117.19(1)，111.64(2)，71.10(1)，70.70(0)，66.88(1)，59.53(1)，50.28(0)，45.19(2)，43.85(2)，42.86(2)，38.13(2)，35.59(2)，29.27(2)，29.14(3)，28.65(2)，23.57(2)，22.62(2)，21.29(0)，17.84(3)，12.74(2)，10.30(2)；C₂₈H₄₂O₃的MS HRES计算值M+Na 449.3026，观测值M+Na 449.3023。

合成实施例41-1，25-二羟基-21-(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20R-胆钙化醇(33)的合成

[1R，3aR，4S，7aR]-2(R)-[4-(1，1-二甲基乙基)二甲基-硅烷氧基]-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-6-甲基-庚烷-1，6-二醇(34)和[1R，3aR，4S，7aR]-2(S)-[4-(1，1-二甲基乙基)二甲基-硅烷氧基]-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-6-甲基-庚烷-1，6-二醇(35)

将烯醇(alkenol)的四氢呋喃溶液(9mL)在冰浴中冷却，在原来泡腾的反应中滴加1M硼烷-THF的四氢呋喃溶液(17mL)。将溶液在室温下搅拌过夜，在冰浴中重新冷却，滴加水(17mL)，然后加入过碳酸钠(7.10g，68mmol)。将混合物浸在50℃浴中，搅拌70分钟，生成溶液。使两相系统冷却，然后用1∶1乙酸乙酯-己烷(170mL)平衡。将有机层用水(2×25mL)、然后用盐水(20mL)洗涤，干燥，蒸发，留下无色油状物(2.76g)。使该物质通过短的快速柱，使用1∶1乙酸乙酯-己烷和硅胶G。将彻底洗脱后所得的流出物蒸发，用乙酸乙酯吸收，过滤，在2×18”15-20μ二氧化硅YMC HPLC柱上进行色谱处理，用2∶1乙酸乙酯-己烷作为流动相，流速100mL/分钟。异构体34出现在流出物最多2.9L时，为无色油状物，1.3114g，[α]_D+45.2°(甲醇，c0.58；¹H NMR δ-0.002(3H，s)，0.011(3H，s)，0.89(9H，s)，0.93(3H，s)，1.17(1H，m)，1.22(6H，s)，1.25-1.6(16H，m)，1.68(1H，m)，1.80(2H，m)，1.89(1H，m)，3.66(1H，dd，J＝4.8和11Hz)，3.72(1H，dd，J＝3.3和11Hz)，4.00(1H，m)；LR-ES(-)m/z 412(M)，411(M-H)；HR-ES(+)：计算值(M+Na)435.3265，实测值：435.3269。

异构体35出现在流出物最多4.9L时，为无色油状物，0.8562g，长时间放置后结晶：mp 102-3°，[α]_D+25.2°(甲醇，c 0.49)；¹H NMRδ-0.005(3H，s)，0.009(3H，s)，0.89(9H，s)，0.93(3H，s)，1.16(1H，m)，1.22(6H，s)，1.3-1.5，(14H，m)，1.57(2H，m)，1.67(1H，m)，1.80(2H，m)，1.91(1H，m)，3.54(1H，dd，J＝4.8和11Hz)，3.72(1H，dd，J＝2.9和11Hz)，4.00(1H，m)；)；LR-ES(-)m/z 412(M)，411(M-H)。C₂₄H₄₈O₃Si的分析计算值：C，69.84，H，11.72；实测值：C，69.91；H，11.76。

[1R，3aR，4S，7aR]-6(R)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-7-碘-2-甲基-庚-2-醇(36)

将搅拌着的三苯膦(0.333g，1.27mmol)与咪唑(0.255g，3mmol)在二氯甲烷(3mL)中的混合物在冰浴中冷却，加入碘(0.305g，1.20mmol)。将该混合物搅拌10分钟，然后历经10分钟滴加34(0.4537g，1.10mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液。将混合物在冰浴中搅拌30分钟，然后在环境温度下搅拌23/4小时。TLC(1∶1乙酸乙酯-己烷)确认没有反应物(educt)存在。加入硫代硫酸钠(0.1g)在水(5mL)中的溶液，使混合物平衡，将有机相用含有几滴盐水的0.1N硫酸(10mL)洗涤，然后用1∶1水-盐水洗涤(2×10mL)，用盐水(10mL)洗涤一次，然后干燥和蒸发。将残余物用快速色谱纯化，用1∶9乙酸乙酯-己烷作为流动相，得到36，为无色糖浆状物，0.5637g，98％：¹H NMRδ-0.005(3H，s)，0.010(3H，s)，0.89(9H，s)，0.92(3H，s)，1.23(6H，s)，1.1-1.6(16H，m)，1.68(1H，m)，1.79(2H，m)，1.84(1H，m)，3.37(1H，dd，J＝4和10Hz)，3.47(1H，dd，J＝3和10Hz)，4.00(1H，m)；LR-EI(+)m/z 522(M)，465(M-C₄H₉)，477(M-C₄H₉-H₂O)；HR-EI(+)：C₂₄H₄₇IO₂Si的计算值：522.2390，实测值：522.2394。

[1R，3aR，4S，7aR]-6(S)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2-甲基-壬-8-炔-2-醇(37)

将乙炔化锂DMA络合物(0.110g，1.19mmol)加入到36(0.2018g，0.386mmol)在二甲基亚砜(1.5mL)与四氢呋喃(0.15mL)中的溶液中。将混合物搅拌过夜。TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)显示是两个移动得非常接近的斑点(Rf0.52和0.46)的混合物。在洗脱带开始时的级分含有纯的烯醇，它是36的消除产物，是作为主要产物生成的。然而，在洗脱带结束时的级分也是均匀的，蒸发后得到所需的炔37。以前报道过37及其6-差向异构体的NMR光谱用于鉴别。

[1R，3aR，4S，7aR]-7-苯磺酰基-6(S)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2-甲基-庚-2-醇(38)

将37b(0.94g，1.8mmol)、苯亚磺酸钠(2.18g，13mmol)与N，N-二甲基甲酰胺(31.8g)的混合物在室温下搅拌12小时，然后在40℃浴中搅拌约6小时，直至TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)显示全部反应物被转化。将溶液用1∶1乙酸乙酯-己烷(120mL)和1∶1盐水-水(45mL)平衡。将有机层用水(4×25mL)和盐水(10mL)洗涤，然后干燥，蒸发，留下无色油状物，1.0317g。将该物质用快速色谱处理，使用逐步梯度(1∶9，1∶6，1∶3乙酸乙酯-己烷)，得到无色油状物，0.930g，96％：300MHz¹H NMRδ-0.02(3H，s)，0.00(3H，s)，0.87(9H，s)，0.88(3H，s)，1.12(1H，m)，1.20(6H，s)，1.2-1.8(18H，m)，1.81(1H，m)，3.09(2H，m)，3.97(1H，brs)，7.59(3H，m)，7.91(2H，m)。

[1R，3aR，4S，7aR]-1-(1(S)-苯磺酰基甲基-5-甲基-5-三甲基硅烷氧基-己基)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚(39)

将1-(三甲基硅烷基)咪唑(1mL)加入到38(0.8g)在环己烷(10mL)中的溶液中，搅拌过夜，然后用快速色谱处理，使用己烷、1∶39和1∶19乙酸乙酯-己烷的逐步梯度。用TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)监测洗脱，得到39，为无色糖浆状物，0.7915g：300MHz¹H NMRδ0.00(3H，s)，0.02(3H，s)，0.12(9H，s)，0.90(12H，s，t-丁基+7a-Me)，1.16(1H，m)，1.20(6H，s)，1.2-1.6(15H，m)，1.66-1.86(3H，m)，3.10(2H，m)，4.00(1H，brs)，7.56-7.70(3H，m)，7.93(2H，m)。

[1R，3aR，4S，7aR]-6(R)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2，10-二甲基-十一烷-2，3(R)，10-三醇(40)

将39(0.7513g，1.23mmol)与二醇(0.508g，1.85mmol)在四氢呋喃(28mL)中的溶液冷却至-35℃，然后滴加2.5M丁基锂的己烷溶液(2.75mL)。使温度上升至-20℃，在该温度下维持6小时或者直至反应物被消耗。用TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)监测反应进程，显示有反应物(Rf0.71)和两个差向异构的二醇(Rf 0.09和0.12)。接近反应结束时，将温度短暂增加至0℃，再次降低至-10℃，然后加入饱和氯化铵(25mL)，然后加入乙酸乙酯(50mL)和足量的水，以溶解沉淀的盐。将所得的水相用乙酸乙酯(15mL)萃取。合并萃取液，用盐水(15mL)洗涤，干燥，蒸发。将所得糖浆状物用快速色谱处理，使用1∶9、1∶6、1∶4和1∶1乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到39a，为无色糖浆状物，0.8586g。将该物质溶于四氢呋喃(30mL)与甲醇(18mL)的混合物，然后加入5％钠汞齐(20g)。将混合物搅拌14小时后，还原性去磺酰化作用是完全的。用TLC(1∶1乙酸乙酯-己烷)监测反应进程，显示差向异构的二醇(Rf 0.63和0.74)消失，40a(Rf 0.79)与部分去硅烷基化类似物40(Rf 0.16)生成。将混合物用甲醇(20mL)稀释，搅拌3分钟，然后加入冰(20g)，搅拌2分钟，将上清液滗析到含有饱和氯化铵(50mL)的混合物中。将残余物反复用少量四氢呋喃洗涤，也加入到盐溶液中，然后用乙酸乙酯(80mL)平衡。水层用乙酸乙酯(20mL)反萃取一次，合并萃取液，用盐水(10mL)洗涤，然后干燥，蒸发。将所得的含有40a和40的无色油状物溶于10mL1N草酸的甲醇溶液(从二水合物制备)，在数分钟内发生三甲基硅烷基醚的选择性水解。加入碳酸钙(1g)，将混悬液搅拌过夜，然后过滤。蒸发溶液，将所得残余物用快速色谱处理，使用1∶4、1∶2、1∶1和2∶1乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到三醇40的残余物，从乙腈中结晶出非常微细的分支针状结晶，0.45g：mp 94-95℃，[α]_D+44.1°(甲醇，c0.37)；400MHz ¹H NMRδ-0.005(3H，s)，0.007(3H，s)，0.89(9H，s)，0.92(3H，s)，1.15(1H，m)，1.16(3H，s)，1.21(9H，s)，1.2-1.6(19H，m)，1.67(1H，m)，1.79(2H，m)，1.90(2H，m)，2.06(1H，m)，3.31(1H，brd，J＝10Hz)，4.00(1H，brs)，LR-ES(-)m/z：533(M+Cl)，497(M-H)；HR-ES(+)：C₂₉H₅₈O₄Si+Na计算值：521.3996，实测值：521.4003。C₂₉H₅₈O₄Si的分析计算值：C，69.82，H，11.72；实测值：C，69.97；H，11.65。

[1R，3aR，4S，7aR]-6(R)-(4-羟基-7a-甲基-八氢-茚-1-基)-2，10-二甲基-十一烷-2，3(R)，10-三醇(41)

将搅拌着的三醇40(0.4626g，0.927mmol)在乙腈(10mL)与二烷(0.7mL)中的溶液冷却至10℃，滴加氟硅酸溶液(2mL)。除去冷却浴，将两相系统进一步用乙腈(2mL)稀释，然后在室温下搅拌31/4小时。用TLC(乙酸乙酯)监测反应物的消失。将混合物用水(10mL)和乙酸乙酯(30mL)平衡。水相用乙酸乙酯反萃取(2×20mL)，合并萃取液，用水(5mL)和盐水(10mL)洗涤，然后用1∶1盐水-饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥。将残余物经快速色谱纯化，使用1∶1至2∶1乙酸乙酯-己烷和纯乙酸乙酯的逐步梯度，得到残余物，将其用1∶1二氯甲烷-己烷吸收，过滤，蒸发，得到无定形固体，0.3039g(85％)：[α]_D+42.6°(甲醇，c0.48)；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ0.87(3H，s)，0.97(3H，s)，1.02(3H，s)，1.04(6H，s)，1.1-1.4(18H，m)，1.5-1.8(4H，m)，1.84(1H，m)，2.99(1H，dd，J＝6和10Hz)，3.87(1H，brs)，4.02(1H，s，OH)，4.05(1H，s，OH)，4.16(1H，d，OH，J＝3.6Hz)，4.20(1H，d，OH，J＝6.4Hz)；LR-ES(+)：m/z 384(M)，383(M-H)；HR-ES(+)：计算值(M+Na)407.3132，实测值：407.3134。

[1R，3aR，4S，7aR]-1-{5-羟基-5-甲基-1(R)-[2-(2，2，5，5-四甲基-[1，3]二氧戊环-4(R)-基)-乙基]-己基}-7a-甲基-八氢-茚-4-醇(42)

将四醇40(0.2966g，0.771mmol)与甲苯磺酸吡啶(100mg)在丙酮(8mL)与2，2-二甲氧基丙烷(8mL)中的溶液在室温下保持12小时。TLC分析(乙酸乙酯)显示没有反应物(Rf 0.21)存在，有两个新的斑点Rf 0.82和0.71，前者是预期的42，后者被认为是醋酮(methylacetal)。将反应混合物用水(5mL)稀释，搅拌10分钟。此时仅观察到Rf值较高的斑点。将混合物用碳酸氢钠(0.5g)中和，然后用乙酸乙酯(50mL)和盐水(5mL)平衡。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，然后干燥，蒸发，留下粘性残余物(0.324g)，将其直接用于下一步：300MHz ¹H NMR：δ0.94(3H，s)，1.10(3H，s)，1.20(1H，m)，1.22(6H，s)，1.25(3H，s)，1.34(3H，s)，1.41(3H，s)，1.2-1.65(20H，m)，1.78-1.86(3H，m)，1.93(1H，m)，3.62(1H，dd，J＝4.6和8.3Hz)，4.08(1H，brs)。

[1R，3aR，4S，7aR]-乙酸1-{5-羟基-5-甲基-1(R)-[2-(2，2，5，5-四甲基-[1，3]二氧戊环-4(R)-基)-乙基]-己基}-7a-甲基-八氢-茚-4-基酯(43)

将以上所得的残余物溶于吡啶(6.9g)，进一步用乙酸酐(3.41g)稀释。将混合物在室温下放置24小时，然后在35℃浴中放置约10小时，直至不再能检测到反应物(TLC，乙酸乙酯)。将混合物用甲苯稀释，蒸发。经残余物经快速色谱纯化(1∶4乙酸乙酯-己烷)，得到43，为无色糖浆状物，0.3452g，97％：¹H NMR：δ0.89(3H，s)，1.10(3H，s)，1.20(1H，m)，1.22(6H，s)，1.25(3H，s)，1.33(3H，s)，1.41(3H，s)，1.25-1.6(19H，m)，1.72(1H，m)，1.82(2H，m)，1.95(1H，m)，2.05(3H，s)，3.63(1H，dd，J＝4.4和8.4Hz)，5.15(1H，brs)；LR-FAB(+)m/z 467(M+H)，465(M-H)，451(M-Me)。

[1R，3aR，4S，7aR]-乙酸1-[4(R)，5-二羟基-1(R)-(4-羟基-4-甲基-戊基)-5-甲基-己基]-7a-甲基-八氢-茚-4-基酯(44)

使43(0.334g，0.716mmol)在80％乙酸(2mL)中的溶液保持在68℃浴中。用TLC(乙酸乙酯，Rf 0.33)监测水解的进程。2.5小时后不再能检测到反应物。将混合物蒸发，然后与少量甲苯共蒸发，留下无色薄膜状物(0.303g)，直接用于下一步：300MHz 1H NMR：δ0.89(3H，s)，1.17(3H，s)，1.22(6H，s)，1.56(3H，s)，1.1-1.6(21H，m)，1.6-2.0(5H，m)，2.04(3H，s)，3.32(1H，brd，J＝10Hz)，5.15(1H，brs)。

[1R，3aR，4S，7aR]-乙酸1-[4(R)-[二甲基-(1，1，2-三甲基-丙基)-硅烷氧基]-5-羟基-1(R)-(4-羟基-4-甲基-戊基)-5-甲基-己基]-7a-甲基-八氢-茚-4-基酯(45)

使三醇44(0.30g)、咪唑(0.68g，10mmol)与二甲基thexyl硅烷基氯(1.34g，7.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(6g)中的溶液保持在室温下。48小时后，加入4-(N，N-二甲氨基)吡啶(15mg)，将混合物搅拌另外24小时。用TLC(乙酸乙酯；24，Rf 0.83；25a，Rf 0.38)监测反应进程。将混合物用水(2mL)稀释，搅拌10分钟，然后在乙酸乙酯(45mL)与水(20mL)之间分配。水层用乙酸乙酯(10mL)萃取一次。合并有机相，用水(4×12mL)和盐水(8mL)洗涤，然后干燥，蒸发。将残余的油状物经快速色谱纯化，使用1∶9和1∶4乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到45，为无色糖浆状物。少量未反应的反应物(80mg)用乙酸乙酯洗脱。将糖浆状物45直接用于下一步：400MHz¹H NMR：δ0.13(3H，s)，0.14(3H，s)，0.87(6H，s)，0.91(9H，m)，1.10(1H，m)，1.14(3H，s)，1.15(3H，s)，1.21(6H，s)，1.1-1.6(19H，m)，1.6-1.9(5H，m)，1.94(1H，brd，J＝12.8Hz)，2.05(3H，s)，3.38(1H，brs)，5.15(1H，brs)。

[1R，3aR，4S，7aR]-乙酸1-[4(R)-[二甲基-(1，1，2-三甲基-丙基)-硅烷氧基]-5-甲基-1(R)-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-5-三甲基硅烷氧基-己基]-7a-甲基-八氢-茚-4-基酯(46)

将1-(三甲基硅烷基)咪唑(0.90mL，6.1mmol)加入到45(0.2929mg)在环己烷(6mL)中的溶液中，搅拌12小时，然后经快速色谱处理(1∶79乙酸乙酯-己烷)，得到46，为无色糖浆状物(0.3372g)。用TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)监测洗脱，得到46，为无色糖浆状物，0.7915g：¹H NMR δ：0.074(3H，s)，0.096(3H，s)，0.103(9H，s)，0.106(9H，s)，0.82(1H，m)，0.83(6H，s)，0.88(9H，m)，1.32(3H，s)，1.20(9H，s)，1.15-1.6(17H，m)，1.6-1.9(5H，m)，1.97(1H，brd，J＝12.8Hz)，2.05(3H，s)，3.27(1H，m)，5.15(1H，brs)；LR-FAB(+)m/z：712(M)，711(M-H)，697(M-Me)，653(M-AcO)，627(M-C₆H₁₃)。

[1R，3aR，4S，7aR]-1-[4(R)-[二甲基-(1，1，2-三甲基-丙基)-硅烷氧基]-5-甲基-1(R)-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-5-三甲基硅烷氧基-己基]-7a-甲基-八氢-茚-4-醇(47)

将搅拌着的46(0.335mg，0.47mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液在冰浴中冷却，滴加1M氢化铝锂的四氢呋喃溶液(2mL)。TLC(1∶9乙酸乙酯-己烷)显示1.5小时后25b(Rf 0.61)完全转化为26(Rf 0.29)。加入2M氢氧化钠溶液(14滴)，然后加入水(0.5mL)和乙酸乙酯(30mL)。加入少量硅藻土，搅拌15分钟后，滤出液体层。将固体残余物反复用乙酸乙酯冲洗，合并液体相，蒸发，留下无色糖浆状物，将其用己烷吸收，过滤，蒸发，得到26(0.335g)，其无需进一步纯化即可使用：¹H NMR δ：0.075(3H，s)，0.10(21H，brs)，0.82(1H，m)，0.84(6H，s)，0.89(6H，m)，0.93(3H，s)，1.13(3H，s)，1.20(9H，s)，1.2-1.6(16H，m)，1.6-1.7(2H，m)，1.82(3H，m)，1.95(1H，brd，J＝12.4Hz)，3.27(1H，m)，4.08(1H，brs)；LR-FAB(+)m/z：585(M-C₆H₁₃)，481(M-TMSO)；HR-ES(+)m/z：C₃₇H₇₈O₄Si₃+Na的计算值：693.5100实测值：693.5100。

[1R，3aR，7aR]-1-[4(R)-[二甲基-(1，1，2-三甲基-丙基)-硅烷氧基]-5-甲基-1(R)-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-5-三甲基硅烷氧基-己基]-7a-甲基-八氢-茚-4-酮(48)

将硅藻土(0.6g)加入到搅拌着的47(0.310g，0.462mmol)在二氯甲烷(14mL)中的溶液中，然后加入重铬酸吡啶(0.700g，1.86mmol)。用TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)跟踪47(Rf 0.54)向酮27(Rf 0.76)的转化。4.5小时后，将混合物用环己烷稀释，然后通过一层硅胶过滤。合并滤液和乙醚洗液，蒸发。将残余物经快速色谱处理(1∶39乙酸乙酯-己烷)，得到27，为无色糖浆状物，0.2988g，96.6％：¹H NMR δ：0.078(3H，s)，0.097(3H，s)，0.107(18H，s)，0.64(3H，s)，0.81(1H，m)，0.84(6H，s)，0.89(6H，m)，1.134(3H，s)，1.201(3H，s)，1.207(3H，s)，1.211(3H，s)，1.3-1.6(14H，m)，1.6-1.7(3H，m)，1.88(1H，m)，2.04(2H，m)，2.2-2.32(2H，m)，2.46(1H，dd，J＝7.5和11.5Hz)，3.28(1H，m)；LR-FAB(+)m/z：583(M-C₆H₁₃)，479(M-OTMS)；HR-ES(+)m/z：C₃₇H₇₆O₄Si₃+Na的计算值：691.4943，实测值：691.4949。

[1R，3aR，7aR，4E]-4-{2(Z)-[3(S)，5(R)-双-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-亚甲基-亚环己基]-亚乙基}-7a-甲基-1-[5-甲基-1(R)-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-4(R)-[二甲基-(1，1，2-三甲基-丙基)-硅烷氧基]-5-三甲基硅烷氧基-己基]-八氢-茚(49)

在-70℃下，将2.5M丁基锂的己烷溶液(0.17mL)加入到28的四氢呋喃溶液(2mL)中，产生深樱桃红色。10分钟后，历经15分钟滴加酮27(0.1415g，0.211mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。4小时后，加入pH 7磷酸盐缓冲液(2mL)淬灭反应。使温度增加至0℃，然后加入己烷(30mL)。水层用己烷(15mL)反萃取。合并萃取液，用盐水(5mL)洗涤，干燥，蒸发，得到无色油状物，经快速色谱纯化(1∶100乙酸乙酯-己烷)，得到49，为无色糖浆状物，0.155g，71％：¹H NMR δ：0.068(15H，m)，0.103(12H，s)，0.107(9H，s)，0.53(3H，s)，0.82(1H，m)，0.84(6H，s)，0.88(18H，m)，0.89(6H，m)，1.14(3H，m)，1.20(9H，s)，12-1.9(22H，m)，1.97(2H，m)，2.22(1H，dd，J＝7.5和13Hz)，2.45(1H，brd，J＝13Hz)，2.83(1H，brd，J＝13Hz)，3.28(1H，m)，4.20(1H，m)，4.38(1H，m)，4.87(1H，d，J＝2Hz)，5.18(1H，d，J＝2Hz)，6.02(1H，d，J＝11.4Hz)，6.24(1H，d，J＝11.4Hz)；LR-FAB(+)m/z 1033(M+H)，1032(M)，1031(M-H)，901(M-TBDMS)。

1，25-二羟基-21-(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20R-胆钙化醇(33)的合成

将前文实验中所获得的49的残余物(0.153g，0.148mmol)溶于1M四丁基氟化铵溶液(3.5mL)。用TLC(乙酸乙酯)监测反应进程。因而，24小时后将溶液用盐水(5mL)稀释，搅拌5分钟，然后用乙酸乙酯(35mL)和水(15mL)平衡。水层用乙酸乙酯(15mL)反萃取一次。合并有机层，用水洗涤(5×10mL)，用盐水(5mL)洗涤一次，然后干燥，蒸发。将残余物经快速色谱纯化，使用乙酸乙酯和1∶100甲醇-乙酸乙酯的逐步梯度，从甲酸甲酯-戊烷中得到33，为无色微晶性物质，70mg，91％：[α]_D+34.3°(甲醇，c0.51)；¹H NMR(DMSO-d₆)δ：0.051(3H，s)，0.98(3H，s)，1.03(3H，s)，1.05(6H，s)，1.0-1.6(17H，m)，1.64(3H，m)，1.80(2H，m)，1.90(1H，d，J＝11.7Hz)，1.97(1H，dd，J＝J＝9.8Hz)，2.16(1H，dd，J＝5.9和J＝13.7Hz)，2.36(1H，brd)，2.79(1H，brd)，3.00(1H，dd，J＝5和10Hz)，3.99(1H，brs)，4.01(1H，s，OH)，4.04(1H，s，OH)，4.54(1H，OH，d，J＝3.9Hz)，4.76(1H，brs)，4.87(1H，OH，d，J＝4.9Hz)，5.22(1H，brs)，5.99(1H，d，J＝10.7Hz)，6.19(1H，d，J＝10.7Hz)；LR-ES(+)m/z：519(M+H)，518(M)，517(M-H)，501(M-OH)；HR-ES(+)C₃₂H₅₄O₅+Na的计算值：541.3863；实测值541.3870；UV_max(8)：213(13554)，241sh(12801)，265(16029)nm。

合成实施例42-1，25-二羟基-21(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20S-胆钙化醇(50)的合成

[1R，3aR，4S，7aR]-7-苯磺酰基-6(R)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2-甲基-庚-2-醇(51)

将36与苯亚磺酸钠(0.263g，1.6mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液在77℃浴中搅拌3小时。将溶液用1∶1乙酸乙酯-己烷(25mL)平衡，将有机层用水洗涤(5×10mL)，干燥，蒸发。将残余物经快速色谱处理，使用1∶9、1∶4和1∶3乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到砜，为无色糖浆状物：¹H NMR δ-0.02(3H，s)，0.005(3H，s)，0.79(3H，s)，0.87(9H，s)，1.12(1H，m)，1.19(6H，s)，1.12(1H，m)，1.20(6H，s)，1.2-1.8(18H，m)，2.08(1H，m)，3.09(1H，dd，J＝9.3和14.5Hz)，3.31(1H，dd，J＝3和14.5Hz)，3.97(1H，brs)，7.58(3H，m)，7.66(1H，m)，7.91(2H，m)；LR-ES(+)m/z：600(M+Na+MeCN)，559(M+Na)；LR-ES(-)m/z：536(M)，535(M-H)；HR-ES(+)：C₃₀H₅₂O₄SSi+Na的计算值559.3248；实测值559.3253。

[1R，3aR，4S，7aR]-1-(1(R)-苯磺酰基甲基-5-甲基-5-三甲基硅烷氧基-己基)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚(52)

将1-(三甲基硅烷基)咪唑(0.146mL)加入到51(0.145g，0.27mmol)在环己烷(2mL)中的溶液中。17小时后，将产物经快速色谱纯化，使用1∶79和1∶39乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到52，为无色残余物，0.157g 0.258mmol，TLC(1∶9乙酸乙酯-己烷)Rf 0.14。300MHz ¹H NMR：δ-0.02(3H，s)，0.00(3H，s)，0.87(12H，s)，1.12(1H，m)，1.17(6H，s)，1.2-1.6(15H，m)，1.6-1.9(3H，m)，3.08(2H，m)，3.97(1H，brs)，7.53-7.70(3H，m)，7.90(2H，d，J＝7Hz)。

[1R，3aR，4S，7aR]-5(R，S)-苯磺酰基-6(R)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2，10-二甲基-10-三甲基硅烷氧基-十一烷-2，3(R)-二醇(53)

将52(0.2589g，0.425mmol)与二醇(0.176g，0.638mmol)在四氢呋喃(9mL)中的溶液冷却至-25℃，加入1.6M丁基锂的己烷溶液(1.4mL)。使温度上升至-20℃，维持3小时，然后在-10℃下维持2.5小时，在0℃下维持10分钟。将混合物再次冷却至-10℃，加入饱和氯化铵溶液(5mL)，然后用乙酸乙酯(50mL)和足量的水平衡，以溶解沉淀的盐。水层用乙酸乙酯(15mL)反萃取，合并萃取液，干燥，蒸发，将残余物经快速色谱纯化，使用1∶6、1∶4和1∶1乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到53，为无色糖浆状物，0.212g，70％：300MHz¹H NMR：δ0.00(3H，s)，0.017(3H，s)，0.12(9H，s)，0.81(3H，s)，0.89(9H，s)，1.16(1H，m)，1.19(12H，m)，1.1-1.6(20H，m)，1.6-1.8(2H，m)，3.10(1H，dd，J＝8.4和14.7Hz)，3.30(1H，m)，3.99(1H，brs)，7.61(2H，m)，7.67(1H，m)，7.93(2H，m)。

[1R，3aR，4S，7aR]-6(S)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2，10-二甲基-10-三甲基硅烷氧基-十一烷-2，3(R)-二醇(54)

将化合物53(0.186mg，0.262mmol)溶于0.5M草酸二水合物的甲醇溶液(2.5mL)。将溶液搅拌15分钟，然后加入碳酸钙(0.5g)，将混悬液搅拌过夜，然后过滤。蒸发滤液，得到54，为白色泡沫状物，0.188g，98％：TLC(1∶1乙酸乙酯-己烷)Rf0.06。该产物无需进一步纯化即可用于下一步。

[1R，3aR，4S，7aR]-6(S)-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2，10-二甲基-十一烷-2，3(R)，10-三醇(三醇55)

将钠汞齐(5％钠，10.8g)加入到剧烈搅拌着的54(0.426g，0.667mmol)在四氢呋喃(15mL)与甲醇(9mL)混合物中的溶液中。将混悬液搅拌24小时，用TLC(1∶1乙酸乙酯-己烷)监测反应，观察到55(Rf0.17)的生成。将混合物用甲醇(3mL)稀释，搅拌5分钟，然后进一步用水(10mL)稀释，搅拌2分钟，滗析到饱和氯化铵溶液(25mL)中。水层用乙酸乙酯萃取(2×20mL)。合并萃取液，用pH 7磷酸盐缓冲液(5mL)、然后用盐水(10mL)洗涤，干燥，蒸发。将残余物经快速色谱纯化，使用1∶1和2∶1乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到55，为无色糖浆状物，0.244g，73％：¹H NMR：δ-0.006(3H，s)，0.006(3H，s)，0.86(9H，s)，0.92(3H，s)，1.11(1H，m)，1.15(3H，s)，1.21(9H，s)，1.2-1.75(21H，m)，1.7-1.85(3H，m)，1.90(1H，m)，3.29(1H，brd)，3.99(1H，brs)；LR-ES(+)m/z：521(M+Na)，481(M-OH)；LR-ES(-)：m/z 544：(M+CH₂O₂)，543(M-H+CH₂O₂)，533(M-Cl)；HR-ES(+)m/z：C₂₉H₅₈O₄Si+Na的计算值：521.3996，实测值521.3999。

[1R，3aR，4S，7aR]-6(S)-(4-羟基-7a-甲基-八氢-茚-1-基)-2，10-二甲基-十一烷-2，3(R)，10-三醇(56)

将氟硅酸水溶液(3mL)加入到搅拌着的55(0.240g，0.481mmol)在乙腈(12mL)中的溶液中。用TLC(乙酸乙酯)监测反应。2.5小时后，化合物56(Rf0.37)是占优势的物质，其通过消耗极性较小的55而产生。将混合物用乙酸乙酯和水(10mL)平衡，水层用水反萃取(2×10mL)，合并萃取液，用水(6mL)和盐水(2×10mL)洗涤，然后干燥，蒸发。将无色残余物经快速色谱处理，使用1∶2、1∶1和2∶1乙酸乙酯-己烷的逐步梯度洗脱一些未反应的55，然后洗脱56，为无色糖浆状物，0.147g，79％：¹H NMR：0.94(3H，s)，1.12(1H，m)，1.15(3H，s)，1.21(9H，s)，1.15-1.7(20H，m)，1.7-1.9(5H，m)，1.96(1H，brd)，3.29(1H，d，J＝9.6Hz)，4.08(1H，brs)；LR-ES(+)：m/z 448：(M+Na+MeCN)，407(M+Na)；LR-ES(-)：m/z 419(M+Cl)；HR-ES(+)m/z：C₂₃H₄₄O₄+Na的计算值：407.3132，实测值407.3135。

[1R，3aR，4S，7aR]-1-(5-羟基-1(S)-{2-[2-(4-甲氧基-苯基)-5，5-二甲基-[1，3]二氧戊环-4(R)-基]-乙基}-5-甲基-己基)-7a-甲基-八氢-茚-4-醇(57)

将4-甲氧基苯甲醛二甲缩醛(60μL，0.35mmol)加入到56(81.2mg，0.211mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，然后加入在二氯甲烷(10mL)中含有甲苯磺酸吡啶(200mg)的溶液(0.2mL)。用TLC(1∶2乙酸乙酯-己烷)监测反应进程，显示有4-甲氧基苯甲醛二甲缩醛(Rf 0.80)、4-甲氧基苯甲醛(Rf 0.65)、反应物56(Rf 0.42)和产物57(Rf 0.26)。53/4小时后，将混合物与饱和碳酸氢钠溶液(5mL)一起搅拌15分钟，然后用乙酸乙酯(25mL)平衡。将有机层用盐水(5mL)洗涤，干燥，蒸发。将残余物经快速色谱处理，使用1∶3和1∶2乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到57，为无色糖浆状物，0.106mg(100％)：¹H NMR：0.94(3H，s)，1.19，1.21(6H，各为单峰，Me₂COH)，1.23，1.35和1.24，1.37(6H，各为单峰，主要和次要的5，5-二甲基氧杂环戊烷非对映体)，1.1-1.7(18H，m)，1.7-1.9(5H，m)，1.9-2.0(2H，m)，3.65(1H，m)，3.81(3H，s)，4.08(1H，brs)，5.78和5.96(1H，各为单峰，主要和次要的缩醛非对映体)，6.89(2H，m)，7.41(2H，m)。

[1R，3aR，7aR]-1-(5-羟基-1(S)-{2-[2-(4-甲氧基-苯基)-5，5-二甲基-[1，3]二氧戊环-4(R)-基]-乙基}-5-甲基-己基)-7a-甲基-八氢-茚-4-酮(58)

将重铬酸吡啶输(230mg，0.61mmol)加入到搅拌着的含有57(0.0838，0.167mmol)、硅藻土(185mg)和二氯甲烷(4mL)的混合物中。用TLC(1∶25甲醇-氯仿)监测57(Rf 0.31)向58(Rf 0.42)的转化。2.5小时后，将混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，然后通过一层硅胶过滤。蒸发滤液和洗液(1∶1二氯甲烷-乙酸乙酯)，将残余物经色谱处理(1∶4乙酸乙酯-己烷)，得到酮58，0.0763g，91％：¹H NMR：0.63(3H，s)，1.19，1.21和1.23(6H，各为单峰，Me₂COH)，1.25，1.36，1.38(6H，m，s，s，5，5-二甲基氧杂环戊烷非对映体)，1.1-1.9(18H，m)，1.9-2.1(3H，m)，2.1-2.4(2H，m)，2.45(1H，m)，3.66(1H，m)，3.802和3.805(3H，各为单峰)，5.78和5.95(1H，各为单峰，主要和次要的缩醛非对映体)，6.89(2H，m)，7.39(2H，m)。

[1R，3aR，7aR]-1-[4(R)，5-二羟基-1(S)-(4-羟基-4-甲基-戊基)-5-甲基-己基]-7a-甲基-八氢-茚-4-酮(59)

将酮58在1N草酸的90％甲醇溶液中搅拌。几分钟后混合物变得均匀。75分钟后TLC(乙酸乙酯)提示反应完全(59的Rf 0.24)。因而，加入碳酸钙(0.60g)，将混悬液搅拌过夜，然后过滤。蒸发滤液，经快速色谱处理，使用4∶1∶5二氯甲烷-乙酸乙酯-己烷、1∶1乙酸乙酯-己烷和纯乙酸乙酯的逐步梯度，得到59，为无色残余物，0.060mg，94％：¹H NMR：0.5(3H，s)，1.17(3H，s)，1.22(6H，s)，1.23(3H，s)，1.2-1.21(23H，m)，2.15-2.35(2H，m)，2.45(1H，dd，J＝7和11Hz)，3.30，1H，brd)。

[1R，3aR，7aR]-7a-甲基-1-[5-甲基-1(S)-(4-甲基-4-三乙基硅烷氧基-戊基)-4(R)，5-双-三乙基硅烷氧基-己基]-八氢-茚-4-酮(60)

将59(0.055g，0.143mmol)、咪唑(14.9mg，1.69mmol)、N，N-二甲基吡啶(6mg)、三乙基氯硅烷(0.168mL，1mmol)与N，N--二甲基甲酰胺(1.5mL)的混合物搅拌17小时。用TLC(1∶4乙酸乙酯-己烷)跟踪反应，显示迅速转化为二硅烷基中间体(Rf 0.47)。进一步的反应顺利地进行过夜，得到完全硅烷基化的60(Rf 0.90)。将溶液用水(3mL)平衡，用乙酸乙酯(20mL)平衡，将乙酸乙酯层用水洗涤(3×4mL)，干燥，蒸发。将残余物经快速色谱处理，使用己烷和1∶100乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到60，为无色糖浆状物，0.0813g，78.4％：¹H NMR δ0.55-0.64(21H，m)，0.92-0.97(27H，m)，1.12(3H，s)，1.18(3H，s)，1.19(3H，s)，1.21(3H，s)，1.1-1.7(18H，m)，1.9-2.15(2H，m)，2.15-2.35(2H，m)，2.43(1H，dd，J＝7.7和11Hz)，3.30(1H，dd，J＝3和8.4Hz)。

[1R，3aR，7aR，4E]-4-{2(Z)-[3(S)，5(R)-双-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-亚甲基-亚环己基]-亚乙基}-7a-甲基-1-[5-甲基-1(S)-(4-甲基-4-三乙基硅烷氧基-戊基)-4(R)，5-双-三乙基硅烷氧基-己基]-八氢-茚(61)

在-70℃下，将1.6M丁基锂的己烷溶液(0.14mL)加入到膦(0.1308g，0.224mmol)在四氢呋喃(1.5mL)中的溶液中。10分钟后，历经15分钟滴加酮60(0.0813g，0.112mmol)在四氢呋喃(1.5mL)中的溶液。3小时后，内盐的颜色褪去，加入pH 7磷酸盐缓冲液(2mL)，使温度增加至0℃。将混合物用己烷(30mL)平衡，将有机层用盐水(5mL)洗涤，干燥，蒸发，得到无色油状物，将其经快速色谱纯化(1∶100乙酸乙酯-己烷)。仅收集Rf0.33的带(TLC，1∶39乙酸乙酯-己烷)。蒸发这些级分，得到61，为无色糖浆状物，0.070g，57％：¹H NMR δ0.06(12H，brs)，0.53-0.64(21H，m)，0.88(18H，s)，0.92-0.97(27H，m)，1.11(3H，s)，1.177(3H，s)，1.184(3H，s)，1.195(3H，s)，1-1.9(22H，m)，1.98(2H，m)，2.22(1H，m)，2.45(1H，m)，2.83(1H，brd，J＝13Hz)，3.27(1H，d，J＝6Hz)，4.19(1H，m)，4.38(1H，m)，4.87(1H，brs)，5.18(1H，brs)，6.02(1H，d，J＝11Hz)，6.24(1H，d，J＝11Hz)。

1，25-二羟基-21(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20S-胆钙化醇(50)的合成

用TLC(乙酸乙酯)跟踪61(0.068g，0.06238mmol)在1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液中的去保护反应，逐渐进行得到50(Rf 0.19)。25小时后，将混合物用盐水(5mL)稀释，搅拌5分钟，用乙酸乙酯(35mL)和水(15mL)平衡。水层用乙酸乙酯(35mL)反萃取一次，合并萃取液，用水(5×10mL)和盐水(5mL)洗涤，然后干燥，蒸发。将残余物经快速色谱处理，使用1∶1与2∶1乙酸乙酯-己烷和2∶98甲醇-乙酸乙酯的线性梯度，得到残余物，将其用甲酸甲酯吸收，蒸发，得到白色泡沫状物，30mg，93％：[α]_D+29.3°(甲醇，c0.34)；MHz¹H NMR δ：0.55(3H，s)，1.16(3H，s)，1.21(9H，s)，1.1-1.75(22H，m)，1.80(2H，m)，1.9-2.1(5H，m)，2.31(1H，dd，J＝7和13Hz)，2.60(1H，brd)，284(1H，m)，3.29(1H，d，J＝9.5Hz)，4.22(1H，m)，4.43(1H，m)，5.00(1H，s)，5.33(1H，s)，6.02(1H，d，J＝11Hz)，6.02(1H，d，J＝11Hz)；LR-ES(-)m/z：564(M+H2CO2)，563M-H+H2CO2)；HR-ES(+)C₃₂H₅₄O₅+Na的计算值：541.3863；实测值541.3854；UV_max(ε)：211(15017)，265(15850)，204sh(14127)，245sh(13747)nm。

合成实施例43-1，25-二羟基-21-(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20S-19-降-胆钙化醇(62)的合成

[1R，3aR，7aR，4E]-4-{2(Z)-[3(S)，5(R)-双-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-亚环己基]-亚乙基}-7a-甲基-1-[5-甲基-1(S)-(4-甲基-4-三乙基硅烷氧基-戊基)-4(R)，5-双-三乙基硅烷氧基-己基]-八氢-茚(63)

在-70℃下，将1.6M丁基锂的己烷溶液加入到膦的四氢呋喃溶液中。10分钟后，历经15分钟滴加来自实施例2的酮60的四氢呋喃溶液。内盐的颜色褪去后，加入pH 7磷酸盐缓冲液，使温度增加至0℃。将混合物用己烷平衡，将有机层用盐水洗涤，干燥，蒸发，得到无色油状物，将其经快速色谱纯化(1∶100乙酸乙酯-己烷)，得到63。

1，25-二羟基-21-(2R，3-二羟基-3-甲基-丁基)-20S-19-降-胆钙化醇(62)

在1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液中进行63的去保护反应，得到62。25小时后，将混合物用盐水稀释，搅拌5分钟，然后用乙酸乙酯和水平衡。水层用乙酸乙酯反萃取一次，合并萃取液，用水和盐水洗涤，然后干燥，蒸发。将残余物经快速色谱处理，得到残余物，将其用甲酸甲酯吸收，蒸发，得到62。

合成实施例44-1，25-二羟基-20S-21(3-羟基-3-甲基-丁基)-24-酮基-19-降-胆钙化醇(64)的合成

(R)-6-[(1R，3aR，4S，7aR)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2-甲基-7-苯硫基-庚-2-醇(65)

以上反应如Tet.Lett.1975，17：1409-12所述进行。具体而言，向50mL的圆底烧瓶中装入1.54g(3.73mmol)(R)-2-[(1R，3aR，4S，7aR)-4-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-7a-甲基八氢茚-1-基]-6-甲基庚烷-1，6-二醇(1)(Eur.J.Org.Chem.2004，1703-1713)和2.45g(11.2mmol)二苯硫。将混合物溶于5mL吡啶，加入2.27g(11.2mmol，2.80mL)三丁基膦。将混合物搅拌过夜，然后用20mL甲苯稀释，蒸发。将残余物再次用甲苯吸收，蒸发，其余液体在硅胶上经色谱处理，使用己烷、1∶39、1∶19和1∶9乙酸乙酯-己烷的逐步梯度，得到标题化合物65，为糖浆状物，1.95g。

(R)-7-苯磺酰基-6-[(1R，3aR，4S，7aR)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2-甲基-庚-2-醇(67)和(1R，3aR，4S，7aR)-1-((R)-1-苯磺酰基甲基-5-甲基-5-三乙基硅烷氧基-己基)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚(68)

向含有1.95g(3.9mmol)粗品硫化物65的500mL圆底烧瓶中混入84g二氯甲烷(63mL)。将溶液在冰浴中搅拌，然后一次性加入2.77g(11mmol)间氯过苯甲酸。将混悬液在冰浴中搅拌40分钟，然后在室温下搅拌2小时。用TLC(1∶19甲醇-二氯甲烷)监测反应。在反应结束时，观察到仅有一个斑点Rf 0.45。然后，向混悬液中加入1.68g(20mmol)固体碳酸氢钠，将混悬液搅拌10分钟，然后分批加入30mL水，继续剧烈搅拌5分钟，以溶解全部固体。将混合物进一步用40mL己烷稀释，搅拌30分钟，用41.6g己烷转移至分液漏斗中。弃去下层，将上层用25mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥(硫酸钠)，蒸发，得到3.48g 67。将该物质用己烷研制，过滤，蒸发，留下67，为浑浊的糖浆状物(2.81g)，将其直接用于下一步。

向含有2.81g以上获得的67的100mL圆底烧瓶中装入30mL N，N-二甲基甲酰胺、1.43g(21mmol)咪唑和1.75mL(10mmol)三乙基硅烷基氯。将混合物搅拌17小时，然后用50g冰水稀释，搅拌10分钟，进一步用5mL盐水和60mL己烷稀释。水层用20mL己烷反萃取，合并两次萃取液，用2×30mL水洗涤，干燥，蒸发。该物质含有主要的斑点Rf 0.12(1∶39乙酸乙酯-己烷)和次要的斑点Rf 0.06。将该物质在硅胶上进行色谱处理，使用己烷、1∶100、1∶79、1∶39和1∶19乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度。主要的带用1∶39和1∶19乙酸乙酯-己烷洗脱，得到1.83g68。

(R)-5-苯磺酰基-6-[(1R，3aR，4S，7aR)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-10-甲基-2-(R)-甲基-10-三乙基硅烷氧基-十一烷-2，3-二醇(69)

向配有磁搅拌器、温度计和具有橡胶隔板和氮气扫(nitrogen sweep)的克莱森接头的100mL 3颈圆底烧瓶中装入1.7636g(2.708mmol)砜68、1.114g(4.062mmol)甲苯磺酸盐和50mL从二苯酮羰游基新鲜蒸馏的四氢呋喃。将该溶液冷却至-20℃，在≤-20℃下滴加9.31mL 1.6M丁基锂的己烷溶液。维持温度范围在-10与-20℃之间达5小时。除去冷却浴，加入50mL饱和氯化铵溶液，然后加入75mL乙酸乙酯和足量的水，以溶解所有盐。将有机层用15mL盐水洗涤，干燥，蒸发，得到无色油状物。将该残余物在硅胶上进行色谱处理，使用己烷、1∶9、1∶6、1∶4和1∶3乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度。主要的带用1∶4和1∶3乙酸乙酯-己烷洗脱，得到1.6872g化合物69，为无色糖浆状物。

(S)-6-[(1R，3aR，4S，7aR)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-10-甲基-2-(R)-甲基-10-三乙基硅烷氧基-十一烷-2，3-二醇(70)

向配有磁搅拌器、温度计和具有橡胶隔板和氮气扫的克莱森接头的25mL 2颈圆底烧瓶中装入1.6872g(2.238mmol)砜69和40mL甲醇。然后向搅拌着的溶液中分两等份加入1.25g(51.4mmol)镁，间隔30分钟。将混悬液搅拌70分钟，然后加入另外0.17g镁和约5mL甲醇，继续搅拌1小时。然后将混合物用100mL己烷稀释，滴加50mL 1M硫酸，得到两个液体相。水层是中性的。水层用25mL 1∶1二氯甲烷-己烷反萃取一次。合并有机层，然后用15mL盐水洗涤一次，干燥，蒸发。将所得物质在硅胶上进行色谱处理，使用己烷、1∶39、1∶19和1∶9乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度。主要的带用1∶9乙酸乙酯-己烷洗脱，得到1.2611g 70，为无色糖浆状物。(S)-6-[(1R，3aR，4S，7aR)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-八氢-茚-1-基]-2，10-二羟基-2，10-二甲基-十一烷-3-酮(71)

向配有磁搅拌器、温度计、具有氮气扫和橡胶隔板的克莱森接头的25mL圆底烧瓶中装入518mg(3.88mmol)N-氯琥珀酰亚胺和11mL甲苯。搅拌5分钟(没有全部溶解)，然后冷却至0℃，加入2.4mL(4.8mmol)2M二甲硫的甲苯溶液。将混合物搅拌5分钟，然后冷却至-30℃，在-30℃下滴加0.7143g(1.165mmol)二醇70在4×1.5mL甲苯中的溶液。继续在该温度下搅拌1小时。然后使混合物在2小时期间升温至-10℃，然后冷却至-17℃，滴加3.20mL(6.4mmol)2M三乙胺的甲苯溶液。将混合物在-17至-20℃下搅拌10分钟，然后缓慢升温至室温。将混合物在硅胶柱上进行色谱处理，使用己烷、1∶79、1∶39、1∶19、1∶9、1∶4和1∶1乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度。主要的带用1∶1乙酸乙酯-己烷洗脱，得到0.3428g化合物71，为固体。

(S)-2，10-二羟基-6-((1R，3aR，4S，7aR)-4-羟基-7a-甲基-八氢-茚-1-基)-2，10-二甲基-十一烷-3-酮(72)

向配有磁搅拌器的25mL圆底烧瓶中装入0.3428g(0.69mmol)二醇71，溶于5mL乙腈，然后加入1.25mL氟硅酸溶液。3小时后，将混合物在35mL乙酸乙酯与10mL水之间分配，水层用10mL乙酸乙酯反萃取，合并有机层，用2×5mL水洗涤，用5mL 1∶1盐水-饱和碳酸氢钠溶液洗涤一次，干燥，蒸发。将该物质在硅胶上进行色谱处理，使用1∶4、1∶3、1∶2和1∶1作为逐步梯度，得到0.2085g标题化合物72。

(1R，3aR，7aR)-1-[(S)-5-羟基-1-(4-羟基-4-甲基-戊基)-5-甲基-4-氧代-己基]-7a-甲基-八氢-茚-4-酮(73)

向25mL圆底烧瓶中装入0.2153g(0.56mmol) 72、5mL二氯甲烷和0.20g硅藻土。向该搅拌着的混悬液中一次性加入1.00g(2.66mmol)重铬酸吡啶。将反应搅拌3小时，用TLC(1∶1乙酸乙酯-己烷)监测进程。将反应混合物用5mL环己烷稀释，然后通过硅胶G过滤。用二氯甲烷、然后用1∶1乙酸乙酯-己烷对柱进行洗脱，直至在流出物中检测不到溶质。蒸发流出物，得到无色油状物。然后将该油状物在硅胶上进行色谱处理，使用1∶4、1∶3、1∶2、1∶1和2∶1乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度，得到0.2077g二酮73。

(1R，3aR，7aR)-7a-甲基-1-[(S)-5-甲基-1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-4-氧代-5-三甲基硅烷氧基-己基]-八氢-茚-4-酮(74)

向25mL圆底烧瓶中装入0.2077g(0.545mmol)二酮73。将该物质溶于0.5mL四氢呋喃与3mL环己烷的混合物。向所得混合物中加入0.30mL(2.0mmol)TMS-咪唑。10小时后，将反应混合物用3mL己烷稀释，然后浓缩，在硅胶上进行色谱处理，使用己烷、1∶79、1∶39、1∶19乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度，得到0.2381g 74，为无色油状物。

(S)-6-((1R，3aS，7aR)-4-{2-[(R)-3-((R)-叔丁基二甲基硅烷氧基)-5-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-亚环己基]-亚乙基}-7a-甲基八氢茚-1-基)-2，10-二甲基-2，10-双-三甲基硅烷氧基十一烷-3-酮(75)

向配有磁搅拌器、温度计和含有氮气扫与橡胶隔板的克莱森接头的15mL 3颈梨形烧瓶中装入0.2722g(0.4768mmol)[2-[(3R，5R)-3，5-双(叔丁基二甲基硅烷氧基)亚环己基]乙基]二苯基氧化膦和2mL四氢呋喃。将溶液冷却至-70℃，加入0.30mL 1.6M丁基锂的己烷溶液。将深红色溶液在该温度下搅拌10分钟，然后历经10分钟经由注射器滴加溶于2mL四氢呋喃的0.1261g(0.240mmol)二酮74。3小时又15分钟后，在-65℃下加入5mL饱和氯化铵溶液，使混合物升温至10℃，然后在35mL己烷与10mL水之间分配。水层用10mL己烷反萃取一次，合并各层，用含有2mL pH 7缓冲液的5mL盐水洗涤，然后干燥，蒸发。将该物质在15×150mm快速柱上进行色谱处理，使用己烷和1∶100乙酸乙酯-己烷作为逐步梯度，得到0.1572g标题化合物75，为无色糖浆状物。

1，25-二羟基-20S-21(3-羟基-3-甲基-丁基)-24-酮基-19-降-胆钙化醇(64)

向配有磁搅拌器的15mL 3颈圆底烧瓶中装入155mg(0.17mmol)四硅烷基醚75。将该无色残余物溶于2mL 1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液。43小时后，加入另外0.5mL 1M四丁基氟化铵溶液，继续搅拌5小时。将浅褐色溶液用5mL盐水稀释，搅拌5分钟，用50mL乙酸乙酯和5mL水转移至分液漏斗中，然后用5mL乙酸乙酯反萃取。合并有机层，用5×10mL水、10mL盐水洗涤，干燥，蒸发。将所得残余物在15×123mm柱上进行色谱处理，使用2∶3、1∶1、2∶1乙酸乙酯-己烷和乙酸乙酯作为逐步梯度，得到64，为白色固体(TLC，乙酸乙酯，Rf0.23)，将其用甲酸甲酯吸收，过滤，蒸发，得到0.0753g标题化合物64，为固体物质。

合成实施例45-1，25-二.羟基-20S-21(3-羟基-3-甲基-丁基)-24-酮基-胆钙化醇(76)的合成

(S)-6-{(1R，3aS，7aR)-4-[2-[(R)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-5-((S)-叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-亚甲基-亚环己基]-亚乙-(E)-基]-7a-甲基-八氢-茚-1-基}-2，10-二甲基-2，10-双-三甲基硅烷氧基-十一烷-3-酮(77)

如实施例4关于75所述制备化合物77，但是使74与

[(2Z)-2-[(3S，5R)-3，5-双(叔丁基二甲基硅烷氧基)亚甲基亚环己基]-乙基]二苯基氧化膦反应。

1，25-二羟基-20S-21(3-羟基-3-甲基-丁基)-24-酮基-胆钙化醇(76)

如实施例44关于64所述，通过将77去保护从77制备化合物76。

合成实施例46-1α，25-二羟基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(78)的合成

按照下列合成工艺合成化合物(78)。

在-78℃下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-1-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-1-基]}-环丙基}-乙炔基(1.0g，2.90mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液中加入n-BuLi(2.72mL，4.35mmol，1.6M己烷溶液)。在-78℃下搅拌1小时后，加入丙酮(2.5mL，34.6mmol)，继续搅拌2.5小时。加入NH₄Cl_aq(15mL)，将混合物在室温下搅拌15分钟，然后用AcOEt萃取(2×50mL)。合并萃取液，用盐水(50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(2.4g)经FC纯化(50g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到(3aR，4S，7aR)-5-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-1-基]-环丙基}-2-甲基-戊-3-炔-2-醇(1.05g，2.61mmol)，将其用四丁基氟化铵(6mL，6mmol，1.0M THF溶液)处理，在65-75℃下搅拌48小时。将混合物用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×25mL)和盐水(25mL)洗涤。合并水性洗液，用AcOEt(25mL)萃取，合并有机萃取液，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(1.1g)经FC纯化(50g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(0.75g，2.59mmol，90％)。_D＝+2.7 c0.75，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.50(1H，m)，4.18(1H，m)，2.40(2H，s)，2.35-1.16(11H，m)，1.48(6H，s)，1.20(3H，s)，0.76-0.50(4H，m)；¹³CNMR(CDCl₃)：156.39，125.26，86.39，80.19，69.21，65.16，55.14，46.94，35.79，33.60，31.67，29.91，27.22，19.32，19.19，17.73，10.94，10.37；C₂₂H₂₈O₂的MSHREI计算值M+288.2089观测值M+288.2091。

将(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(-4-羟基-4-甲基-戊-2-炔基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(0.72g，2.50mmol)、乙酸乙酯(10mL)、己烷(24mL)、无水乙醇(0.9mL)、喹啉(47L)与Lindlar催化剂(156mg，5％Pd/CaCO₃)的混合物在室温下氢化2小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用AcOEt洗涤滤垫。合并滤液和洗液，用1M HCl、NaHCO₃和盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥后，蒸发溶剂，将残余物(0.79g)经FC纯化(45g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(640mg，2.2mmol，88％)。

利用Paar仪器，将(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊-2Z-烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(100mg，0.34mmol)、1，4-双(二苯基-膦基)丁烷1，5环辛双烯四氟硼酸铑(25mg，0.034mmol)、二氯甲烷(5mL)与一滴汞的混合物在室温和50p.s.i.压力下氢化3小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，然后用乙酸乙酯洗涤滤垫。合并滤液和洗液，蒸发至干(110mg)，经FC纯化(10g，20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(75mg，0.26mmol，75％)。_D＝-8.5c 0.65，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.37(1H，m，)，4.14(1H，m)，2.37-1.16(17H，m)，1.19(6H，s)，1.18(3H，s)，0.66-0.24(4H，m)；C₁₉H₃₂O₂的MS HREI计算值M+H 292.2402，观测值M+H 292.2404。

在室温下，向搅拌着的(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇(440mg，1.50mmol)与硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的混悬液中加入重铬酸吡啶(1.13g，3.0mmol)。将所得混合物搅拌5小时，通过硅胶(10g)过滤，然后用20％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮粗品(426mg，1.47mmol，98％)。在室温下，向搅拌着的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羟基-4-甲基-戊烯基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(424mg，1.47mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三甲基硅烷基-咪唑(0.44mL，3.0mmol)。将所得混合物搅拌1.0小时，通过硅胶(10g)过滤，用10％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到标题化合物(460mg，1.27mmol，86％)。_D＝-9.9c 0.55，CHCl₃.¹H NMR(CDCl₃)：5.33(1H，dd，J＝3.2，1.5Hz)，2.81(1H，dd，J＝10.7，6.2Hz)，2.44(1H，ddd，J＝15.6，10.7，1.5Hz)，2.30-1.15(13H，m)重叠2.03(ddd，J＝15.8，6.4，3.2Hz)，1.18(6H，s)，0.92(3H，s)，0.66-0.28(4H，m)，0.08(9H，s)；¹³CNMR(CDCl₃)：211.08(0)，155.32(0)，124.77(1)，73.98(0)，64.32(1)，53.91(0)，44.70(2)，40.45(2)，38.12(2)，34.70(2)，29.86(3)，29.80(3)，26.80(2)，24.07(2)，22.28(2)，21.24(0)，18.35(3)，12.60(2)，10.64(2)，2.63(3)；C₂₂H₃₈O₂Si的MSHRES计算值M+362.2641，观测值M+362.2648。

在-78℃下，向搅拌着的(1S，5R)-1，5-双-((叔丁基二甲基)硅烷氧基)-3-[2-(二苯基氧膦基)-亚乙-(Z)-基]-2-亚甲基-环己烷(675mg，1.16mmol)在四氢呋喃(8mL)中的溶液中加入n-BuLi(0.73mL，1.17mmol)。将所得混合物搅拌15分钟，滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷氧基-戊基)-环丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-酮(210mg，0.58mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。将反应混合物在-72℃下搅拌3.5小时，用己烷(35mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(850mg)经FC纯化(15g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(382mg，0.53mmol)。在室温下，向1-α，3-β-二(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-25-三甲基硅烷氧基-16-烯-20-环丙基-胆钙化醇(382mg，0.53mmol)中加入四丁基氟化铵(4mL，4mmol，1M THF溶液)。将混合物搅拌15小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(380mg)经FC纯化(15g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(78)(204mg，0.48mmol，83％)。_D＝+16.1c 0.36，EtOH.UV max(EtOH)：208nm(.17024)，264nm(.16028)；¹H NMR(CDCl₃)：6.37(1H，d，J＝11.3Hz)，6.09(1H，d，J＝11.1Hz)，5.33(2H，m)，5.01(1H，s)，4.44(1H，m)，4.23(1H，m)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.38-1.08(20H，m)，1.19(6H，s)，0.79(3H，s)，0.66-0.24(4H，m)；¹³C NMR(CDCl₃)：157.07(0)，147.62(0)，142.49(0)，133.00(0)，124.90(1)，124.73(1)，117.19(1)，111.64(2)，71.10(1)，70.70(0)，66.88(1)，59.53(1)，50.28(0)，45.19(2)，43.85(2)，42.86(2)，38.13(2)，35.59(2)，29.27(2)，29.14(3)，28.65(2)，23.57(2)，22.62(2)，21.29(0)，17.84(3)，12.74(2)，10.30(2)；C₂₈H₄₂O₃的MS HRES计算值M+Na449.3026，观测值M+Na 449.3023。

合成实施例47-1-α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-26，27-双高-20-表-胆钙化醇(79)(化合物A)的合成

按照下列合成工艺合成化合物(79)。

在室温下，向搅拌着的11-(5-羟基-1，5-二甲基-己-3-烯基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氢-3H-茚-4-醇与硅藻土在二氯甲烷中的混悬液(10mL)中加入重铬酸吡啶。将所得混合物搅拌5小时，通过硅胶过滤，然后用20％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到酮。在室温下，向搅拌着的酮的二氯甲烷溶液中加入三甲基硅烷基-咪唑。将所得混合物搅拌1.0小时，通过硅胶过滤，用10％AcOEt的己烷溶液洗涤硅胶垫。合并滤液和洗液，蒸发，得到标题化合物。

在-78℃下，向搅拌着的叔丁基-{3-[2-(二苯基-氧膦基)-亚乙基]-5-氟-4-亚甲基-环己氧基}-二甲基-硅烷的四氢呋喃溶液中加入n-BuLi。将所得混合物搅拌15分钟，滴加1-(5-乙基-1-甲基-5-三甲基硅烷氧基-庚-3-烯基)-7a-甲基-3，3a，5，6，7，7a-六氢-茚-4-酮的四氢呋喃溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌3.5小时，用己烷稀释，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物经FC纯化(15g，10％AcOEt的己烷溶液)，得到硅烷基化的化合物。在室温下，向硅烷基化的化合物中加入四丁基氟化铵。将混合物搅拌15小时，用AcOEt(25mL)稀释，用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后，将残余物(380mg)经FC纯化(15g，50％AcOEt的己烷溶液和AcOEt)，得到标题化合物(79)。

生物学实施例

实施例1：材料和方法

制备基质细胞

将组织温和切碎成小片(1至2mm³)并于37℃用0.1％A型胶原酶温育1小时。在温育末，通过10分钟的统一重力(unity gravity)差速沉降从大团上皮细胞中分离单个基质细胞。然后缓慢移出主要含有基质细胞的上层8ml培养基，并离心收集细胞。在培养基中洗涤富含基质的级分两次，并允许选择性吸附组织培养皿15分钟。之后，除去仍然存在的未吸附的上皮细胞，从培养皿表面获得纯化的基质制备物。

提取总RNA

37℃下将细胞培养在3％FBS DMEM(无化合物A、有1μM浓度的化合物A或有0.1μM浓度的化合物)或10％FBS DMEM(无化合物A、有1μM浓度的化合物A或有0.1μM浓度的化合物)中。细胞培养4或8小时后用胰蛋白酶消化并收集细胞沉淀。

使用下面简述的RNeasy Mini Kit QIAGEN(目录号74106)进行总RNA提取。

加入RLT缓冲液裂解(distrupted)细胞，并将裂解物上样到置于2ml收集管中的QIAshredder spin column(QIAGEN目录号79656)上，并以最大速率离心2分钟。在均一的裂解物中加入1体积的70％乙醇。将样品上样到置于2ml收集管中的RNeasy mini column上，并以大于10000转/分钟离心15秒。用脱氧核糖核酸酶处理来消化结合在柱子上的RNA。用RW1缓冲液洗涤柱子，并以大于10000转/分钟离心15秒。室温下用脱氧核糖核酸酶I混合液(RNase-Free Dnase Set QIAGEN目录号79254)温育样品15分钟。用RW1缓冲液洗涤RNeasy mini column，并转移到新的2ml收集管中。用RPE缓冲液洗涤柱子两次，并以大于10000转/分钟离心15秒；用无核糖核酸酶的水上样该柱子，在大于10000转/分钟离心1分钟后洗脱RNA。用NanoDrop分光光度计评估RNA的浓度。

合成cDNA

使用Applied Biosystems TaqMan Reverse Transcription Reagents试剂盒(Applied Biosystems目录号8080234)进行cDNA的合成。

1μg总RNA在100μl终体积，含有1X RT缓冲液、5.5mM MgCl₂、500μM dNTP、2.5μM随机六聚体、40单位核糖核酸酶抑制物和125单位Multiscribe Reverse Transcription的RT混合液中反转录。混合物在室温下温育10分钟，接着48℃温育30分钟；获得的cDNA的浓度为10ng/μl。

量化基因表达的实时PCR

使用ABI PRISM 7000序列测定系统(Applied Biosystems)进行实时PCR。在含有1X TaqMan Universal PCR Master Mix(Applied Biosystems目录号4304437)和1X Assay Mix目的基因(Applied Biosystems)的25μl体积中扩增30ng cDNA。分析包括维生素D受体(VDR)、细胞色素P450(CYP24)、血管内皮生长因子(VEGF)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、孕酮受体(PR)、芳化酶(CYP19)、2型环加氧酶(COX-2)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、胱冬酶-3(CASP3)、胱冬酶-6(CASP6)、Ki-67核抗原(Ki-67)的基因。

样品于50℃温育2分钟、95℃温育10分钟，并95℃15秒(变性)以及60℃1分钟(退火/延伸)扩增40个循环。用18S rRNA基因的表达归一化基因表达的量，并使用比较CT法(User Bulletin #2 ABI PRISM 7000序列测定系统)进行相对量化。

体外增殖子宫内膜基质细胞

细胞保持在补充有10％胎牛血清(SIGMA)、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素(GIBCO目录号15140-122)的DMEM中。

当基质细胞生长至汇合时，在PBS中洗涤，然后使用1X胰蛋白酶/EDTA溶液(PromoCell目录号C-41002)进行胰蛋白酶消化。细胞以1×10⁵细胞/ml接种于96孔平底板中，其中含有DMEM、5％胎牛血清和不同浓度(1μM-0.1μM)VDR配体(化合物A)。48-96小时后，收获上清并将平板保存在-80℃，以确定增殖。使用CyQuant细胞增殖测定法(MolecularProbe目录号C7026)确定增殖。室温融化平板，在每个样品孔中加入200μL的CyQUANT GR染料/细胞裂解缓冲液。

平板室温避光温育2-5分钟。

使用具有适合大约480nm激发和大约520nm发射的滤光片的荧光微型板读数仪来确定荧光。

ELISA Hu-IL-8

使用人IL-8ELISA仪器(BD OptEIA BD Biosciences目录号555244)测定IL-8。

平板用在包被缓冲液(0.1M碳酸钠，pH 9.5)中1∶250稀释的100μl捕捉抗人IL-8包被，并在4℃温育过夜。洗涤后，室温加入200μl测定稀释液(具有10％FBS的PBS，pH 7.0)封闭平板1-2小时。弃去上清，加入在测定稀释液中1∶2稀释的100μl标准物(200pg/ml至3.1pg/ml的重组人IL-8)或样品。室温温育平板2小时。洗涤后，加入100μl测定抗体(1∶250的测定抗体+1∶250的SAv-HRP试剂)并室温温育1小时。

洗涤平板，每孔加入100μl底物溶液。用终止溶液(1M H₂SO₄)阻断比色反应。使用微量滴定板读数仪在405nm确定光密度。

子宫内膜异位症的体内模型

Balb/c供体小鼠注射雌激素(Estradiol AMSA；3μg/小鼠)，一周后处死并取出子宫，分离两角并捣碎成小碎片。来自分离子宫角的碎片重悬在具有氨苄青霉素(1mg/ml)的盐水中，然后通过腹壁上0.5cm的切口注射到两只预先麻醉的受体Balb/c小鼠的腹膜内。每周一次皮下注射雌激素两周，以支持子宫内膜生长。手术当天以及之后一天施用抗生素(1mg/ml氨苄青霉素)。手术后4小时，每对中的一只小鼠每天腹腔注射测试化合物(100μg/kg)，另一只注射对照物，每周5天进行2周。两周后，给予小鼠致死剂量的麻醉剂，打开它们的腹腔以检查病变的存在。病变鉴定为主要在腹壁、胰腺和子宫周围发现的半透明分离的或成群的囊肿。在一些情况下，病变是坏死。仔细移出病变并置于载玻片上干燥48小时，然后称重。在其他实验中，病变转移到裂解溶液中，分离mRNA用于基因表达分析。为了免疫组织化学分析，病变分离后立即冰冻。

结果

病变重量

图1阐述相对于使用对照物(仅载体)的处理作用，使用1-α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-26，27-双高-20-表-胆钙化醇(化合物A)的处理作用。图A显示17对小鼠的完整数据集。图B显示在处理小鼠中病变生长相对于其对照同组伙伴的抑制百分比数据。图C显示处理和未处理组的均值。统计分析显示接受维生素D化合物处理的那些小鼠有显著降低的病变重量(成对t检验：p＝0.0034；非成对t检验：p＝0.020)。

子宫内膜细胞的体外增殖

图2显示用不同浓度维生素D化合物处理观察到的细胞增殖水平(图A——正位子宫内膜、图B——异位子宫内膜)。虽然由于使用小数据集，结果有一定程度的差异，但是化合物A的处理一般导致正位子宫内膜(图A)和异位子宫内膜(图B)细胞增殖的降低。

理论上，维生素D化合物的处理导致相对于正位细胞增殖降低，异位细胞增殖优先降低。

量化基因表达

图3显示未处理组，1μM化合物A处理组和0.1的μM化合物A处理组VDR(图A)、VEGF(图B)、Cyp24(图C)和Cyp 19(图D)的表达水平。

在图3C中可见Cyp24表达的明显上调。观察到VDR、VEGF或Cyp19的表达有很小的变化或无变化。

维生素D化合物的作用

可明显地看出在子宫内膜异位症体内模型中，所测试的维生素D化合物显著降低总病变重量。

因此数据证明使用维生素D化合物在预防和治疗子宫内膜异位症中的潜力。

实施例2：材料和方法

子宫内膜异位症体内模型

Balb/c供体小鼠注射雌激素(Estradiol AMSA；3μg/小鼠)，一周后处死并取出子宫，分离两角并捣碎成小碎片。来自分离子宫角的碎片重悬在具有氨苄青霉素(1mg/ml)的盐水中，然后通过腹壁上0.5cm的切口注射到两只预先麻醉的受体Balb/c小鼠的腹膜内。手术当天以及之后一天施用抗生素(1mg/ml氨苄青霉素)。手术后4小时，每对中的一只小鼠每天腹腔注射测试化合物，另一只注射对照物，每周5天进行2周。测试化合物的剂量水平是所用化合物的最大耐受水平，即，100μg/kg的1-α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-26，27-双高-20-表-胆钙化醇(化合物A)、0.3μg/kg的骨化三醇(化合物B)以及3μg/kg的1，25-二羟基-21-(3-羟基-3-甲基丁基)-19-降-胆钙化醇(化合物C)。

两周后，给予小鼠致死剂量的麻醉剂，打开它们的腹腔以检查病变的存在。病变鉴定为主要在腹壁、胰腺和子宫周围发现的半透明分离的或成群的囊肿。在一些情况下，病变是坏死。仔细移出病变并置于载玻片上干燥48小时，然后称重。

结果

图4显示相对于使用对照(仅载体)的处理，使用1-α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-26，27-双高-20-表-胆钙化醇(化合物A)的处理作用。图4A显示每组24只小鼠的完整数据集。图4B显示处理和未处理小鼠平均病变重量的数据(显示均值和标准误)。图4C显示处理和对照组之间病变重量的相对降低(显示均值和标准误)。计算成对动物之间病变重量的降低：子宫转移后，当施用100μg/kg化合物A两周后，能够降低病变重量51±11％(均值±标准误)(miglyol和化合物A处理的动物平均病变重量分别为：8.452±1.039mg与3.527±0.5400mg)。统计分析显示接受维生素D类似化合物A处理的那些小鼠有显著降低的病变重量(非成对t检验：p＝0.0001；成对t检验：p＝0.0001)。

图5显示相对于使用对照(仅载体)的处理，使用骨化三醇(化合物B)的处理作用。图5A显示每组7只小鼠的完整数据集。图5B显示处理和未处理小鼠平均病变重量的数据(显示均值和标准误)。图5C显示处理和对照组之间病变重量的相对降低(显示均值和标准误)。统计分析再次显示接受维生素D类似物(在本情况中为化合物B)处理的小鼠有显著降低的病变重量(非成对t检验：p＝0.0207；成对t检验：p＝0.0252)。

图6显示相对于使用对照(仅载体)的处理，使用1，25-二羟基-21-(3-羟基-3-甲基丁基)-19-降-胆钙化醇(化合物C)的处理作用。图6A显示每组9只小鼠的完整数据集。图6B显示处理和未处理小鼠平均病变重量的数据(显示均值和标准误)。图6C显示处理和对照组之间病变重量的相对降低(显示均值和标准误)。统计分析显示接受维生素D类似化合物C处理的那些小鼠没有显著降低的病变重量(非成对t检验：p＝0.1122；成对t检验：p＝0.0781)。

维生素D化合物的作用

实施例2证明一系列维生素D化合物可用于本发明。这三种测试化合物中的每一种导致病变重量的降低，虽然化合物A处理后这种降低最显著(由于更低的相关毒性，化合物A可以比其他测试化合物以更高的剂量水平施用)。

实施例3：：材料和方法

剂量/反应分析

Balb/c供体小鼠注射雌激素(Estradiol AMSA；3μg/小鼠)，一周后处死并取出子宫，分离两角并捣碎成小碎片。来自分离子宫角的碎片重悬在具有氨苄青霉素(1mg/ml)的盐水中，然后通过腹壁上0.5cm的切口注射到两只预先麻醉的受体Balb/c小鼠的腹膜内。手术当天以及之后一天施用抗生素(1mg/ml氨苄青霉素)。手术后4小时，每只小鼠每天腹腔注射特定剂量的化合物A或对照物，每周5天进行2周。

两周后，给予小鼠致死剂量的麻醉剂，打开它们的腹腔以检查病变的存在。病变鉴定为主要在腹壁、胰腺和子宫周围发现的半透明分离的或成群的囊肿。在一些情况下，病变是坏死。仔细移出病变并置于载玻片上干燥48小时，然后称重。每组中至少使用10只测试动物。

处理方案

使用100μg/kg化合物A，但在不同的开始施用维生素D化合物的时间和停止施用的时间点进行其他实验。具体地：(i)注射子宫碎片之前施用一周；(ii)注射子宫碎片之后施用两周；(iii)注射子宫碎片之前施用一周和之后施用两周；(iv)注射子宫碎片之后两天，开始施用两周；(v)注射子宫碎片之后两周，开始施用两周。在这些实验中，个体适合在注射之后两周或在处理阶段末处死。

结果

图7显示上至100μg/kg的最大耐受剂量的四种不同剂量化合物A的作用。显示均值和标准误。结果为典型的剂量/反应图，更高剂量测试化合物产生病变重量的更大降低。需要注意的事实是在远低于最大耐受剂量下，病变重量按照剂量水平降低(即，在1/10MTD处为大约20％，在1/3MTD附近为大约35％)。

图8阐述不同处理时间对病变重量降低的作用。提前用化合物A处理，组(i)，导致两周后40％的病变重量。子宫转移之后用化合物A处理两周，组(ii)，表现48％的病变重量降低。处理动物三周，子宫转移之前一周和之后两周(组(iii))获得最大作用，导致73％的病变重量降低。当子宫转移后2天(组(iv)，35％降低)或2周(组(v)，34％降低)处理动物时(子宫内膜囊肿完全产生)，化合物A仍然有效。

维生素D化合物的作用

化合物A在治疗小鼠模型的子宫内膜异位症中是有效的，甚至当剂量远低于最大耐受剂量时(高于最大耐受剂量时该化合物导致高血钙)。此外，基于处理前和处理后给予化合物A均导致较低的病变重量，当处理前和处理后均给予化合物A时观察到最大降低的事实，期望化合物A用于治疗和/或预防该疾病。

实施例4：材料和方法

细胞吸附

每天口服一次，进行两周，用化合物A(100μg/kg)处理成对动物。然后处死动物，取出子宫角。用解剖刀片刮去子宫肌膜，并用剪刀将剩下的子宫内膜组织剪成小碎片。

将组织切碎成小片(1至2mm³)并于37℃用0.1％A型胶原酶温育1小时。在温育末，通过10分钟的统一重力差速沉降从大团上皮细胞中分离单个基质细胞。然后缓慢移出主要含有基质细胞的上层8ml培养基，并离心收集细胞。在培养基中洗涤富含基质的级分两次，并允许选择性吸附组织培养皿15分钟。之后，除去仍然存在的未吸附的上皮细胞，从培养皿表面获得纯化的基质制备物。

用8mg/ml胞外基质(ECM)(Sigma，美国)50μl/孔包被聚苯乙烯96-孔板(Costar)，并使其无覆盖的在层流通风橱中蒸发过夜。然后用PBS漂洗平板，用于吸附测定。细胞用PBS洗涤三次、胰蛋白酶消化并以2×10⁵/ml的密度将200μl细胞接种于ECM。37℃培养1-2小时后，用PBS温和漂洗孔三次，以除去未吸附的细胞。96-孔板中剩余的细胞用CyQuant细胞增殖试剂盒(Molecular Probes)测试。使用具有适合480nm激发和520nm发射的滤光片的荧光微型板读数仪来测定每孔中的样品荧光。结果表示为全部细胞的百分比(假设对照中的细胞吸附为100％)。使用公式：(PBS漂洗后的吸光值/未漂洗的吸光值)×100％来确定吸附百分比。该实验重复三次。

细胞趋化性测定

人基质细胞的制备：将组织温和切碎成小片(1至2mm³)并于37℃用0.1％A型胶原酶温育1小时。在温育末，通过10分钟的统一重力差速沉降从大团上皮细胞中分离单个基质细胞。然后缓慢移出主要含有基质细胞的上层8ml培养基，并离心收集细胞。在培养基中洗涤富含基质的级分两次，并允许选择性吸附组织培养皿15分钟。之后，除去仍然存在的未吸附的上皮细胞，从培养皿表面获得纯化的基质制备物。

通过48-孔改进Boyden小室(modified Boyden chamber)中的趋化性实验评测子宫内膜基质细胞的移行。利用该移行测定，我们测定了细胞向二维底物上的化学引诱物(我们使用了IV型胶原蛋白)移行的能力。简言之，趋化性实验如下进行：使用10μg/ml IV型胶原蛋白包被的8μmNuclepore无聚乙烯吡咯烷酮的聚碳酸酯滤器，将其置于含有20ng/mlPDGF和/或1μM雌激素作为化学引诱物因子的底层小室。使用无血清的培养基作为阴性对照。悬浮在含有0.1％无脂肪酸的牛血清白蛋白的D-MEM培养基中的ESC细胞用1μM化合物A预处理30分钟，然后细胞用β-雌二醇处理24小时。处理后，细胞以4×10⁴细胞/孔的密度加入到上层小室中。37℃温育6小时后，刮去滤器上表面未移行的细胞。用Diff-Quick染料(VWR Scientific Products，Bridgeport，NJ)染色已经移行到滤器下表面的细胞，每个滤器使用Zeiss显微镜以160倍的放大率计数5-8单位的面积。该测定进行三次。

ELISA量化腹膜巨噬细胞产生的细胞因子

子宫转移后两周，通过腹膜灌洗根据之前实施例1-3描述的方法制备的处理(100μg/kg化合物A)和未处理(仅载体)的动物(每组收集5只小鼠)，将腹膜细胞在冷PBS、2mM EDTA中复苏。腹膜巨噬细胞收集后使用Turk试剂直接计数、洗涤并在RPMI/glutamax 5％FCI、青霉素/链霉素、丙酮酸钠中培养。37℃下2小时后，移除未吸附的细胞，巨噬细胞再培养48小时。收获上清，使用特异ELISA(R&D System DuoSet)量化细胞因子(TNF-α、IL1-α、IL1-β、IL6、MIP-2和VEGF)。所有未稀释样品的ELISA测定重复进行一次。总细胞数用CyQuant测试评定，蛋白质产生值归一化到细胞数。

结果

细胞吸附

如图9所示(显示每组共5个个体的均值和标准误)，化合物A能够极大减少子宫内膜细胞与胶原蛋白的吸附。

细胞趋化性测定

图10表明化合物A能够降低雌激素诱导的人子宫内膜基质细胞的趋化性。相对于雌激素刺激可见的移行的大约50％降低，化合物A对移行基础条件没有明显作用。

ELISA量化

图11显示化合物A显著减少炎症细胞因子和VEGF的产生，这暗示该子宫内膜异位症小鼠模型具有抗炎症机能。

维生素D化合物的作用

在化合物A对子宫内膜异位病变的不同可能作用机理中，存在对子宫内膜细胞吸附和趋化反应性的直接作用。化合物A能够减少吸附细胞的数目，并且在对雌激素的反应中能够减少子宫内膜细胞的趋化性移行。

维生素D化合物的其他可能机能包括抑制炎症。充分证明腹膜巨噬细胞的炎症反应维持人类子宫内膜异位症的发展。因此，我们测试了诸如化合物A的维生素D化合物能够调节子宫内膜异位症小鼠模型腹膜炎症的假设，并证明化合物A显著降低炎症细胞因子和VEGF的产生(图11)。但是，如果体外用诸如LPS的无关刺激物再次激活，同种巨噬细胞仍能够产生相同的细胞因子(数据未显示)。

制剂实施例

制剂实施例1：口服剂型软明胶胶囊

在琥珀色光中、在氮下配制口服给药胶囊：将150mg分馏椰子油(例如，Miglyol 812)中的0.01-25.0mg化合物A(1-α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-26，27-双高-20-表-胆钙化醇)，以及0.015mg丁基化羟基甲苯(BHT)和0.015mg丁基化羟基茴香醚(BHA)填充在软明胶胶囊中。

通过以下方法制备胶囊：

1.将BHT和BHA混悬在分馏椰子油(例如，Miglyol 812)中，升温至约50℃，同时进行搅拌，直至溶解。

2.在50℃下，将化合物A溶于来自步骤1的溶液。

3.将来自步骤2的溶液在室温下冷却。

4.将来自步骤3的溶液填充至软明胶胶囊中。

所有制备步骤都是在氮气氛下、避自然光进行。

制剂实施例2：口服剂型软明胶胶囊

在琥珀色光中、在氮下配制口服给药胶囊：将150mg分馏椰子油(Miglyol 812)中的150μg化合物A，以及0.015mg丁基化羟基甲苯(BHT)和0.015mg丁基化羟基茴香醚(BHA)填充在软明胶胶囊中。

制剂实施例3：口服剂型软明胶胶囊

在琥珀色光中、在氮下配制口服给药胶囊：将150mg分馏椰子油(Miglyol 812)中的75μg化合物A，以及0.015mg丁基化羟基甲苯(BHT)和0.015mg丁基化羟基茴香醚(BHA)填充在软明胶胶囊中。

在整个说明书和以下的权利要求书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含”应理解为意指包括所述整数、步骤、整数组或步骤组，但是不排除任意其他整数、步骤、整数组或步骤组。

参考文献的引用

在本说明书全文中引用的所有参考文献(包括参考文件、已颁布的专利、已公开的专利申请和未决专利申请)的内容均全文明确引用在此作为参考。

等价方式

本领域技术人员将认识到或者能够确定利用不超出惯用的实验方法，可以获得本文所述发明的具体实施方案的很多等价方式。这类等价方式也被以下的权利要求所涵盖。

Claims (15)

1.维生素D化合物在预防或治疗子宫内膜异位症中的用途。

2.权利要求1所述的维生素D化合物在制备用于预防或治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。

3.通过施用有效量的维生素D化合物来预防和/或治疗子宫内膜异位症的方法。

4.用于预防和/或治疗子宫内膜异位症的药物制剂，其包含维生素D化合物和药学上可接受的载体。

5.用于预防和/或治疗子宫内膜异位症的药物制剂，其包含维生素D化合物和药学上可接受的载体，并包装有说明书。

6.用于预防和/或治疗子宫内膜异位症的维生素D化合物。

7.药盒，其含有维生素D化合物以及指导将所述化合物施用于需要治疗和/或预防子宫内膜异位症的患者，从而治疗和/或预防所述患者子宫内膜异位症的说明书。

8.权利要求1至7中任一项的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中维生素D化合物与第二种用于治疗子宫内膜异位症的药物在独立或组合的药物制剂中分别、相继或同时施用。

9.权利要求1至8中任一项的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中所述的维生素D化合物是下式的化合物及其药学上可接受的酯、盐和前体药物：

其中：

A₁是单键或双键；

A₂是单键、双键或叁键；

X₁和X₂各自独立地是H或＝CH₂，条件是X₁和X₂不都是＝CH₂；

R₁和R₂各自独立地是OC(O)C₁-C₄烷基、OC(O)羟基烷基、OC(O)卤代烷基；R₁和/或R₂可任选是OH；

R₃、R₄和R₅各自独立地是氢、C₁-C₄烷基、羟基烷基或卤代烷基，或者R₃和R₄与C₂₀一起构成C₃-C₆环烷基；以及

R₆和R₇各自独立地是C_1-4烷基或卤代烷基；以及

R₈是H、-COC₁-C₄烷基、-CO羟基烷基或-CO卤代烷基。

10.权利要求1至8中任一项的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中所述的维生素D化合物是下式的化合物：

其中：

X是H₂或CH₂；

R₁是氢、羟基或氟；

R₂是氢或甲基；

R₃是氢或甲基，条件是当R₂或R₃是甲基时，R₃或R₂必须是氢；

R₄是甲基、乙基或三氟甲基；

R₅是甲基、乙基或三氟甲基；

A是单键或双键；

B是单键、E-双键、Z-双键或叁键。

11.权利要求10的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中R₄和R₅各自是甲基或乙基。

12.权利要求1至8中任一项的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中所述的维生素D化合物是1，25-二羟基-21-(3-羟基-3-甲基丁基)-19-降-胆钙化醇，其具有下式：

13.权利要求1至8中任意一项的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中所述的维生素D化合物是1-α-氟-25-羟基-16，23E-双烯-26，27-双高-20-表-胆钙化醇，其具有下式：

14.权利要求1至8中任一项的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中所述的化合物是骨化三醇。

15.权利要求1至14中任一项的用途、方法、制剂、化合物或药盒，其中所述的子宫内膜异位症与慢性骨盆痛和/或低生育力症状的存在相关。

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