KR20070026398A - Ppar-감마 수용체의 활성화에 의한 자가면역 질환 및알츠하이머병의 치료에 유용한, 천심련으로부터 추출된랍단 디테르펜을 포함하는 조성물 - Google Patents

Ppar-감마 수용체의 활성화에 의한 자가면역 질환 및알츠하이머병의 치료에 유용한, 천심련으로부터 추출된랍단 디테르펜을 포함하는 조성물 Download PDF

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후안 루이스 한케 오로즈코
라파엘 아구스띤 부르고스 아귈레라
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우니베르시다드 오스뜨랄 데 칠레
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Abstract

본 발명은 유용한 식물종인 건조 약초인 천심련(Andrographis paniculata )으로부터 특수한 추출 과정에 의해 얻은 랍단 디테르펜 분자들로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 독성이 낮으며, 현저한 부작용을 나타내는 일 없이 인간 및 동물의 자가면역 질환 및 기타 면역학적 질환을 치료하는데 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을 알츠하이머 병을 치료 및 예방하기 위한 약학 조성물을 제조하는데에도 유용하다. 본 발명의 조성물은, PPAR 감마 수용체를 활성화시키고 핵 전사 인자 κB를 감소시킴으로써 전구 염증 사이토카인의 합성을 억제한다. 또한, 고유의 치료학적 특징 이외에도, 본 발명의 조성물은, 높은 독성을 갖고/갖거나 바람직하지 못한 부작용을 유발하는 종래 제품, 의약 및 절차의 단점을 해소한다. 본 발명은 면역약리학, 임상학 및 전임상학적 인간 및 수의약리학, 약제학 기법, 류머티스학, 임상 면역학, 면역요법, 기관 및 조직 이식, AIDS와 같은 면역 결핍 질환에 대해서도 유용하다.

Description

PPAR-감마 수용체의 활성화에 의한 자가면역 질환 및 알츠하이머병의 치료에 유용한, 천심련으로부터 추출된 랍단 디테르펜을 포함하는 조성물{COMPOSITION OF LABDANE DITERPENES EXTRACTED FROM ANDROGRAPHIS PANICULATA, USEFUL FOR THE TREATMENT OF AUTOIMMUNE DISEASES, AND ALZHEIMER DISEASE BY ACTIVATION OF PPAR-GAMMA RECEPTORS}
본 발명은 면역약리학 및 생약제학 분야에 관한 것으로서, 면역학적 질환의 증상을 치료하고 그 진행 과정을 조절하기 위한 신규의 치료학적 해결 수단을 제공한다.
자가면역 질환은 면역 체계가 그 자신의 기관을 공격하여 자발적인 반응을 일으키는 것을 특징으로 한다. 이러한 반응들은 T 림프구에 의한 자가항원(auto-antigen)의 인식에 기인하며, 이로 인하여 체액상(자가항원 생성) 및 세포상 (림프구 및 대식세포 세포독성 활성 증가) 면역 반응이 유발된다. 자가면역 질환으로서는 다음과 같은 것들을 들 수 있다: 류마티스성 질환, 건선, 전신성 피부근염, 다발성 경화증, 홍반성 낭창, 또는 항원에 의한 면역반응 악화, 즉, 천식, 약물 또는 음식에 대한 알레르기 등. 이러한 질환들은 모두 제한성이고 만성인 질환들이며, 경우에 따라서는 치명적이고, 현재까지 상기 질환들을 치료할 수 있는 효과적인 치 료 방법이 존재하지 않는 실정이다. 그러므로, 당해 질환의 진행중에 질환을 경감시키거나 완화시킬 수 있는 약물, 의약 또는 매체라면 환자의 건강을 위해서 중요한 해결 수단이 된다고 할 것이다.
자가면역 질환의 치료방법을 탐색하여 적당한 약물과 방법을 찾고자 집중적인 노력을 해왔다. 오늘날, 자가면역 질환의 치료는 주로 면역억제 약물, 예컨대 글루코코르티코이드(glucocorticoids), 칼시뉴린 억제제(calcineurin inhibitors) 및 증식억제제-대사물 작용 억제제(antiproliferatives-antimetabolites)의 사용에 근거한 것이다. 그러나, 이와 같은 약리 요법은 다양한 표적들에 대하여 작용하므로, 전체적으로는 면역기능을 저하시킬 수 있다. 그렇지 않으면, 이러한 약리 요법을 장기간 사용하였을 경우 여러 가지 세포 독성 작용이 문제가 되어, 면역 체계를 비특이적인 방식으로 억제함으로써, 환자를 감염증 및 암에 걸릴 위험에 노출시킬 수 있다. 칼시뉴린과 글루코코르티코이드는, 그들의 신독성과 당뇨병 유발 특성에 기인하여 또 다른 문제점을 나타내기 때문에, 몇 가지 임상학적 증상의 경우(예: 신기능 부전, 당뇨병 등)에는 그 사용이 제한된다.
최근에는 면역억제 요법이 한층 발전하여, 항CD3 모노클로날 항체, 항IL-2 수용체 모노클로날 항체 및 항-TNFα 모노클로날 항체가 개발되기에 이르렀다. 이러한 치료 방법들이 현저한 면역억제 효과를 나타낸다는 사실에도 불구하고, 상기 의약들은 무방어(anaphylaxis) 반응, 기회 감염(결핵) 및 신생물(neoplasm), 열병, 담마진, 저혈압, 호흡곤란과 관련되어 있으므로, 이들을 포함하는 조성물과 의약품을 사용함에 있어서 심각한 문제점을 나타낸다. 주사제로 투여할 경우, 세 명의 환 자중 한 명은 가려움증, 종기 및 통증을 나타낼 수 있다.
발명의 개요
본 발명의 조성물은 자가면역 질환을 특징으로 하는 면역 반응, 알레르기 질환 등을 경감시킬 수 있으며, 당해 질환의 증상 및 진행을 완화시키는 동시에 "면역학적 내성(immunological tolerance)"을 유지시킬 수 있다.
다시 말해서, 본 발명의 조성물은 그로부터 유발되는 면역학적 내성을 특징으로 하는데, 본 발명의 조성물이 나타내는 면역학적 내성은, 통상의 면역억제 약물의 부작용을 일으키지 않는 동시에 항원에 대한 특이적인 반응이 없는 활성 상태에 해당한다. 구체적으로, 본 발명의 조성물은 PPAR 감마 수용체를 자극하고 NF(nuclear factor, 핵 전사 인자)카파B를 감소시킴으로써 인터페론 감마, IL-2의 합성과 형질발현을 억제한다.
따라서, 랍단 디테르펜을 함유한 본 발명의 신규 조성물은, 자가면역 질환의 발병과 관련된 사이토카인(cytokines) 과형질발현(over-expression)을 선택적으로 감소시킴을 특징으로 한다.
급성 및 만성 염증 질환 및 암과 관련된 매개자(mediator)를 과학적으로 판명하기 위한 최근의 연구 성과에 힘입어 유효한 치료제를 탐색하기 위한 새로운 방법이 마련되었다. 종래의 방법은, 특이 항체, 수용체 길항물질 또는 효소 억제제의 사용을 비롯한 직접적인 표적 간섭을 포함하는데, 상기 물질들은 모두 무시할 수 없는 정도의 부작용(예컨대 알레르기, 위장 궤양, 출혈 등)을 갖는다. 다양한 매개자들의 전사와 번역에 관여하는 조절 메카니즘이 최근 대약진한 연구 결과 규명됨 으로써, 유전자 전사 수준(예: COX2, iNOS, IL1베타, TNF알파, ICAM 등)에서 수행되는 치료학적 방법에 관심이 집중되고 있다.
가장 중요한 매개자중 하나는 NF-카파B로서, 이것은 폴리펩티드의 Rel/NF-카파B 부류의 여러 가지 조합으로 구성된 이합체(dimer) 전사 인자 복합체와 밀접한 관련이 있는 부류에 속한다. 상기 부류는 포유류에서 5개의 개별 유전자 생성물, 즉, RelA(p 65), NF-카파B1(p50/p105), NF-카파-B2(p49/p100), c-Rel 및 RelB로 이루어지는데, 이들은 모두 헤테로이합체(heterodimer) 또는 호모이합체(homodimer)를 형성할 수 있다. 상기 단백질들은 상동성이 높은 300개 아미노산으로 된 "Rel 동족체 도메인"을 공유하는데, 상기 도메인은 DNA 결합 및 이합체화 도메인을 함유한다. Rel 동족체 도메인의 C-말단에는 세포질로부터 핵까지의 NF-카파B의 운반에 있어서 중요한 핵 변위 서열이 있다. 또한, p65와 cRel은 그들의 C-말단에 강력한 트랜스활성화(trans-activation) 도메인을 갖는다.
NF-카파B의 활성은 억제제 I카파B 단백질 부류의 구성원과의 상호작용에 의해서 조절된다. 이러한 상호작용은 NF-카파B 단백질상에서 핵 편재화 서열을 효과적으로 차단함으로써, 이합체가 핵으로 이동하는 것을 방지한다. 광범위한 자극 인자가 NF-카파B를 활성화시키는데, 다중 신호 형질도입(transduction) 경로를 경유하는 것으로 생각된다. 이러한 자극인자로서는, 박테리아 산물(LPS), 몇가지 바이러스(HIV-1, HTLV-1), 염증성 사이토카인(TNF알파, IL-1) 및 환경상의 스트레스를 들 수 있다. 그러나, 모든 자극인자가 보이는 공통점은 I카파B I카파B의 포스포릴화에 이은 분해로서, I카파B I카파B는 2개의 N-말단 세린상에서 최근 동정된 I카파 B 키나제(IKK-알파 및 IKK-베타)에 의해 포스포릴화된다. 부위 지향적인(site-directed) 돌연변이 생성 연구 결과, 이와 같은 포스포릴화는 NF-카파B가 일단 포스포릴화된 다음에 활성화하는데 있어서 매우 중요하다는 사실을 알 수 있으며, 상기 단백질은 유비퀴틴-프로테아좀(ubiquitin-proteasome) 경로를 통해서 약화되어 분해된다. I카파B가 없다면, 활성 NF-카파B 복합체는 핵으로 변위할 수 있으며, 핵에서 바람직한 유전자 특이성 촉진자(enhancer) 서열에 선택적인 방식으로 결합할 수 있다. NF-카파B에 의해 조절되는 유전자로서는, 여러 가지 사이토카인, 세포 접착 분자 및 급성상(acute phase) 단백질을 들 수 있다.
NF-카파B가 사이토카인, 예컨대 IL-6 및 IL-8, ICAM 및 VCAM과 같은 세포 접착 분자 및 iNOS(inducible nitric oxide synthase)을 비롯한 전구염증(pro-inflammatory) 매개자의 형질 발현 조절에 있어서 중요한 역할을 함은 잘 알려진 바이다. 상기 매개자들은 염증 부위에서 백혈구를 보충하는 역할을 하는 것으로 알려져 있으며, iNOS의 경우에는 몇가지 염증 및 자가면역 질환에 있어서 기관 파괴를 일으킬 수 있다.
염증 질환에 있어서 NF-카파B가 갖는 중요성은 천식과 같은 기도 감염의 여구에 의해 더욱 보강되는데, 이러한 질환의 경우 NF-카파B가 활성화되는 것으로 밝혀졌다. 이러한 활성화는 관련 질환의 사이토카인 생성 증가 및 백혈구 침투 특성을 뒷받침할 수 있다. 또한, 흡입 투여된 스테로이드는 기도 반응성 저하를 경감시키고, 기도 천식의 경우에는 염증 반응을 억제한다는 사실이 알려져 있다. NF카파 B의 글루코코르티코이드 억제에 관해 최근에 발견된 사실에 비추어, 상기 작용은 NF카파B의 억제를 통해 조절된다고 추측할 수 있다.
염증 질환에 있어서 NF-카파B의 역할에 대한 또 다른 증거는 활막 류머티스에 관한 연구로부터 얻을 수 있다. NF-카파B는 대개 불활성 세포질 복합체로서 존재하지만, 최근의 면역조직화학 연구에 따르면 NF-카파B는 핵에도 존재하므로, 활막 류머티스를 포함한 세포에서 활성이다. 또한, NF-카파B는 TNF-알파로의 자극에 반응하여 인간 활막 세포에서 활성화되는 것으로 밝혀졌다. 이와 같은 NF-카파B의분포 상태는 당해 조직의 사이토카인 및 아이코사노이드(eicosanoid) 생성 증가 특성을 뒷받침해주는 메카니즘이 될 수 있다. 이에 관해서는, 문헌 [Roshak, A. K. 등, J. Biol. Chem., 271, 31496-31501 (1996)]을 참조할 수 있다.
또한, NF-카파B/Rel 및 I카파B 단백질은 신생물 형질변환에 있어서도 특정한 역할을 하는 것으로 생각된다. 이러한 부류의 구성원들은 과형질발현, 유전자 확장, 유전자 재배열 또는 변위의 결과로서 시험관내 또는 생체내에서 세포 형질변환에 관여한다. 또한, 상기 단백질들을 암호화하는 유전자의 재배열 및/또는 확장은 특정한 인간 림프 종양의 20-50%에서 발견된다. 이외에도, 세포사(apoptosis)의 조절에 있어서 NF-카파B의 역할이 보고되어, 세포 증식을 제어함에 있어서 상기 전사 인자가 갖는 역할이 일층 강화되기에 이르렀다.
식물로부터 유도된 최초의 NF-κB 조절자(modulator)가 약 10년여전에 Kopp 및 Ghosh(1994)에 의해 보고되었다. 이들은 살리실산나트륨과 그 반합성 유도체인 아스피린을 동정한 사람들이다. 이러한 발견 이후에, 다양한 화학적 부류에 속하는 여러 가지 새로운 천연 산물이 NF-κB 억제 활성을 갖는 것으로 입증된 바 있다.
몇가지 NF-카파B 억제제가 다음과 같은 문헌에 개시되어 있다: [C, Wahl 등, J. Clin. Invest. 101(5), 1163-1174 (1998)], [R.W. Sullivan 등, J. Med. Chem. 41, 413-419 (1998)], 및 [J. W. Pierce 등, J. Biol. Chem. 272, 21096-21103 (1997)]. 천연 해산물인 해면동물의 HMD(hymenialdisine)도 NF-카파B를 억제하는 것으로 알려져 있다. 이에 관해서는 문헌 [Roshak, A. 등, JPET, 283, 955-961 (1997)] 및 [Breton, J. J 및 Chabot-Fletcher, M. C., JPET, 282, 459-466 (1997)]을 참조할 수 있다. 살리실라닐리드는 공지의 화합물로서 문헌 {M.T. Clark, R. A. Coburn, R.T. Evans, R. J. Genco, J. Med. Chem., 1986, 29, 25-29]에 개시되어 있다.
최근에는, NF-카파B를 억제하는 중요한 메카니즘으로 퍼옥시좀에 대한 수용체의 활성화가 거론되고 있다.
"퍼옥시좀 증식인자 활성화 수용체(PPARs, Peroxysomes Proliferator Activated Receptors)"로서 알려진 퍼옥시좀에 대한 수용체(과학 분야에서 알려진 약어로 표현하는 것이 당해 용어의 통상 활용 형태이므로, 이하에서는 상기 수용체를 약어로서 언급함)가 자가면역 질환 및 기타 질환, 즉, 당뇨병, 심혈관 질환과 위장 질환 및 알츠하이머 병과 관련하여 연구되고 있다. PPAR 감마의 작용물질(agonist)을 사용한 약제는 여전히 실험 단계에 있으며, 그 작용 메카니즘에 기인하여 인체 건강에 현저한 부작용을 미친다. 그러므로, 상기 수용체들을 보다 정확하게 조절하여 전술한 모든 질환 또는 상태를 예방, 치료 및/또는 경감시킬 수 있도록, 독성 작용이 적은 새로운 약제를 개발할 필요가 있다.
이러한 신규 조성물은 상기 수용체들은 더욱 정확하게 조절할 수 있으며, 따라서 환자에 대한 바람직하지 못한 부작용을 유발하는 일 없이, 자가면역 질환을 더욱 효과적으로 예방, 치료 및/또는 경감시킬 수 있다.
퍼옥시좀 증식인자 활성화 수용체(PPARs)는 핵 호르몬 수용체 상위 부류의 구성원으로서, 유전자 형질발현을 조절하는 리간드-활성화형 전사 인자이다. PPAR의 다양한 아형(subtype)이 발견되어 있으며, 이러한 아형으로서는 PPAR알파, PPAR베타 또는 NUC1, PPARγ 및 PPAR델타를 들 수 있다.
PPARγ는 본래 비만세포(adipocyte) 분화 및 지질 대사의 핵심 조절자로서 특성 규명되었다. PPARγ 형질발현은 다양한 촉진자에 의해 제어되어 세가지 PPARγ 동종체들을 형성한다. 현재 PPARγ는 다른 유형의 세포, 예를 들면 섬유아세포, 근세포, 유방 세포, 래트 비장의 백색 및 적색 펄프, 인간 골수 전구체, 및 대식세포/단핵구에서도 발견된다는 사실은 자명하다. 또한, PPARγ는 동맥경화성 반점내 대포말형 대식세포에서 발견된 바 있다. 글루코오스 대사에 있어서 PPARγ가 중요한 역할을 한다는 사실은, 특정 부류의 항당뇨병 약물인 티아졸리딘디온(thiazolidinedione)에 대한 고친화도의 PPARγ리간드라는 것이 입증된 시점에서 밝혀지게 되었다. 티아졸리딘디온은 원래 인슐린 내성의 설치류 모델에서 글루코오스 농도(순환하는 지방산의 농도)를 저하시킬 수 있는 능력에 근거하여 제2형 당뇨병을 치료하고자 개발된 것이다. 티아졸리딘디온에 있어서, PPARγ와의 직접 상호작용을 통해 그 치료학적 효과가 매개된다는 사실을 발견함으로써 PPARγ는 글루코오스와 지질 항상성(homeostasis)에 관한 중요한 조절자로서 확정되었다. 초기에 PPARγ가 지질과 글루코오스 대사의 조절자로서 문헌에 기재된바 있지만, PPARγ는 최근에 세포 증식과 악성 종양에 있어서도 특정한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. PPARγ에 대한 리간드는 세포 증식과 악성 종양에 대해 양성 및 음성 효과를 매개하는 것으로 밝혀졌다.
티아졸리딘디온 부류의 항당뇨병 약물 이외에도, 다양한 비스테로이드 계열의 항염증 약물도, 비록 친화도는 비교적 낮지만, PPARγ 리간드로서 작용할 수 있다.
프로스타글란딘 D2(PGD2) 탈수반응 생성물인 PGJ2 PPARγ에 대해 발견된 최초의 내인성 리간드이다. 또 다른 프로스타글란딘 D2(PGD2) 탈수반응 생성물인 15-데옥시-Δ12,14-PGJ2(15d-PGJ2)도 PPARγ에 직접 결합하는 천연 물질로서, PPARγ 활성화에 대한 강력한 리간드이다.
PPARγ 및 대식세포에 관하여 가장 초기에 발견된 사실중 한 가지는 PPARγ가 인간과 쥐의 동맥경화증 병소의 대식세포-유도 포말형 세포에서 고도로 형질발현된다는 것이었다. 이후에, PPARγ는 인간과 쥐의 단핵구/대식세포에서 형질발현된다는 사실이 입증되었다. 기능적인 측면에서, PPARγ는 단핵구의 분화 및 활성화에 있어서, 그리고 염증 작용의 조절에 있어서 특정한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다.
많은 연구 결과, PPARγ는 대식세포-염증 반응을 억제한다는 사실이 입증된 바 있다. 이러한 PPARγ 활성화의 항염증 효과는 인간과 쥐의 단핵구/대식세포 및 단핵구/대식세포 세포주를 통해서 입증된 것이다. 대식세포의 활성화는 일반적으로 몇가지 상이한 전구염증 매개체를 분비하는 결과를 초래한다. 15d-PGJ2 또는 티아졸리딘디온을 사용한 치료 방법은 이와 같은 다수의 매개자(젤라티나제 B, IL-6, TNF-α 및 IL-1β 포함)의 분비를 억제하고, 또한 iNOS의 유도된 형질발현 및 스캐빈저 수용체-A 유전자의 전사를 감소시키는 것으로 밝혀졌다.
몇가지 인간 자가면역 질환 및 자가면역 질환의 동물 모델에서 PPARγ의 관련성을 연구한 바 있다. 가와히토(Kawahito) 등은, 류마티스성 관절염(RA)에 걸린 환자에서 활액 조직이 PPARγ를 형질발현한다는 사실을 입증하였다. PPARγ는 대식세포에서 고도로 형질발현되는 것으로 밝혀졌으며, 활액 내막층 섬유아세포 및 EC에서는 소량의 형질발현이 관찰되었다. 15d-PGJ2 및 트로글리나존에 의한 PPARγ의 활성화는 시험관내에서 RA 활액세포 괴사를 유발하였다.
PPARγ는 분리 직후의 T 세포와 기능적으로 관련이 있거나, 활성화 초기에 기능적으로 관련을 갖게 된다는 이론이 제안된 바 있다. 이러한 연구에 따르면, PPARγ에 대한 2종의 리간드가 T-세포 클론에 의한 IL-2 분비의 억제 반응을 매개하며, IL-2에 의해 유발된 당해 클론의 증식을 억제하지 않는다는 사실이 입증되었다.
자가면역 질환의 동물 모델을 변형함에 있어서 PPARγ 리간드의 역할을 연구한 몇가지 사례가 있다. 수(Su) 등은 염증성 장 질환의 동물 모델에서, 티아졸리딘디온이 결장의 염증을 현저하게 감소시킨다는 것을 입증하였다. 이러한 효과가 PPARγ를 고도로 형질발현하고 염증성 사이토카인을 생성할 수 있는 결장 상피 세포에 미치는 직접적인 영향에 따른 결과라는 것도 제안하였다. 가와히토 등은 PPAR 리간드인 15d-PGJ2 및 트로글리타존을 복강내 투여하면 보조제로 유발시킨 관절염을 경감시킨다는 것을 입증하였다. 니노(Nino) 등은 티아졸리딘디온이 실험적인 알레르기성 뇌척수염에 미치는 영향을 조사하였으며, 그 결과 티아졸리딘디온 요법이 다발성 경화증의 마우스 모델에서 염증을 경감시키고 임상학적 증상을 완화시킨다는 것을 밝혀내었다. 마지막으로, 라일리(Reilly) 등은 신장 사구체 혈관사이막 세포(renal glomerular mesanglial cells)가 루푸스 신염에서 염증 반응의 중요한 조절자로서, 활성화될 경우에 NO 및 시클로옥시게나제 생성물을 비롯한 염증 조절자를 분비함으로써 국소 염증 반응을 지속시킨다는 것을 입증하였다. 위와 같은 연구 결과를 고려하면, PPAR의 관련성과 염증 또는 자가면역 병인에 따른 질병에서 PPAR 작용물질을 사용한 요법의 효용성은 여전히 연구 과제의 촛점으로서 계속 유지될 것으로 생각된다.
최근에, 15d-PGJ2의 PPARγ에 대한 특이성에 관해서는 적어도 부분적으로 그내용이 명확히 판명되었다. NF-κB는 염증과 면역에 관여하는 유전자의 중요한 활성인자이다. 이러한 유전자의 활성화에 있어서, IκB 키나제 복합체(IKK)는 NF-κB 억제제(IκB 단백질)을 포스포릴화하여 그 억제제를 유비퀴틴과 결합시킨 후에, 프로테오좀에 의해서 분해시킨다. 이후에, 유리된 NF-κB 이합체는 핵으로 변위하여 표적 유전자를 유발할 수 있다. 로시(Rossi) 등은 시클로펜테논 PG류, 예를 들 면 15d-PGJ2가 IKK의 IKK2 서브유닛(subunit)을 직접 억제하고 변형시킨다는 것을 입증하였다. 이는, 차례로, 억제인자인 IκB 단백질의 포스포릴화를 방지하여, 당해 단백질이 유비퀴틴과 결합하고 분해되는 것을 방지한다. 그 결과, NF-κB의 활성화가 방지된다. 이와 유사하게, 카스트릴로(Castrillo) 등은 LPS 및 IFN-α로 처리된 RAW 264.7 대식세포에서, 15d-PGJ2와 함께 항온처리하면 IKK2 활성이 현저하게 억제되고 억제인자인 IκB 단백질의 분해도 현저하게 억제된다는 사실을 발견하였다. 이와 같이 억제된 이후에는, NF-κB의 활성이 부분적으로 억제되고 NF-κB의 활성화를 필요로 하는 유전자, 예를 들면 제2형 NOS 및 시클로옥시게나제 2의 형질발현이 손상된다.
그러므로, 결론적으로는, PPARγ 및 NF-κB는 자가면역 질환에 관여하는 중요한 매개자이기에, 이러한 매개자에 영향을 미치는 신규의 선택적 약물과 의약을 개발하도록 의약 산업 분야의 연구에 박차를 가해야 한다고 말할 수 있다.
다른 한편으로, 알츠하이머 병(AD)은 뇌내의 β-아밀로이드 미소섬유(fibril)의 세포외 배치 및 아밀로이드 반점과 관련된 미세아교 세포(microglial cell)의 활성화를 특징으로 한다. 이와 같이 활성화된 미세아교 세포는 차후에 다양한 범위의 염증 생성물을 분비한다. 기타무라(Kitamura) 등은 특이 항체를 사용하여 정상 뇌와 AD 뇌에서 PPARγ 및 COX-1, COX-2의 발생을 분석하였으며, 그 결과 AD 뇌에서는 당해 부분들의 형질발현이 증가한다는 사실을 발견하엿다. 비스테로이계 항염증 약물(NSAID)는 AD의 발병과 위험을 저하시키고 질병의 진행을 지연 시키는데 효과적인 것으로 밝혀졌다. 코움스(Combs) 등은 NSAID류, 티아졸리딘디온 및 PGJ2(이들은 모두 PPARγ 작용물질임)가, β-아밀로이드에 의해 촉진되는 미세아교 세포 및 단핵구에 의한 염증 생성물의 분비를 억제한다는 것을 입증하였다. PPARγ 작용물질은, β-아밀로이드에 의해 촉진되는 IL-6 및 TNF-α에 대한 유전자의 형질 발현 및 COX-2의 형질발현을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 헤네카(Heneka) 등은, LPS와 IFN-α를 래트의 소뇌에 소량 주입하면 소뇌 과립 세포에서 iNOS의 형질발현이 유발되고, 이어서 세포사멸이 일어난다는 것을 입증하였다. PPARγ 작용물질(트로글리타존 및 15d-PGJ2)을 동시 주입할 경우, iNOS 형질발현과 세포사멸이 저하되는 반면, 선택적 COX 억제제를 동시 주입할 경우에는 전혀 영향이 없었다. 이러한 연구 결과를 종합해볼때, AD에 관한 연구 결과들은 PPARγ 작용물질이 뇌에서 염증 반응을 조절할 수 있으며, NSAID류는 그들이 PPARγ에 미치는 효과에 의해서 AD의 치료에 도움을 줄 수 있다는 사실을 시사한다 할 것이다.
이상에서 설명한 내용을 토대로 하여, 다음과 같이 결론지을 수 있다:
지금까지, 약용 식물로부터 분리된 PPAR-γ 작용물질 화합물의 선례는 없다. 현재, 이러한 단백질을 사용하여 자가면역 질환을 치료하기 위한 약물, 조성물 또는 의약은 존재하지 않는다.
한편, 이와 같은 신규 조성물은, 자가면역 질환과 신경퇴화 질환의 경우에 증가하는, 전구염증 사이토카인의 생성을 감소시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 독성이 낮으므로, 해로운 부작용을 전혀 나타내지 않는다.
현재의 과학 "기술 수준"을 고려하면, 상기 조성물의 용도는 당분야의 업자라 할지라도 쉽게 유추할 수 없는 것이며, 상기 조성물은 앞에서 언급한 질병을 치료하기 위한 것으로서, 전술한 바와 같은 특성을 갖고, 당해 질병에 통용되는 다른 물질들을 사용할 경우에 나타나는 부작용을 유발하는 일 없이 면역 내성을 유지할 수 있는 조성물이다.
천심련, 즉, Andrographis paniculata (Nees)은 아시아, 인디아, 말레이시아, 중국, 한국 등지에서 자생하는 쥐꼬리망초과(Acanthaceae)에 속하는 약초이다. 상기 국가들에서, 천심련은 신선한 상태 또는 건조된 상태의 식물 또는 그 구성 성분이 갖는 유리한 효과로 인하여 감기, 간 질환, 당뇨병 등을 비롯한 다양한 질병에 광범위하게 사용되고 있다.
본 발명은, 이하에 설명된 절차에 의해 천심련(Andrographis paniculata )으로부터 추출된 안드로그라폴리드류(andrographolides)의 혼합물을 포함하여, PPAR-감마 작용물질 효과를 가지며 전사 인자 NF-카파B의 활성화를 억제하는 신규 조성물을 제공한다.
< 안드로그라폴리드류 조성물>
본 발명에 의한 조성물은 천심련 건조 추출물로부터 얻어지며, 하기 일반식들로 표시되는, 랍단 디테르펜 혼합물을 포함한다:
C20H30O5 안드로그라폴리드
C20H30O4 14-데옥시안드로그라폴리드
C26H41O8 네오안드로그라폴리드
상기 안드로그라폴리드류 화합물의 화학 구조 및 특징은 다음과 같다:
- 안드로그라폴리드
i. 일반식: C20H30O5
ii. 분자량: 350.46
iii. 분자명: 3-[2-[데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시-메틸)-5,8a-디메틸-2-메틸렌-1-나프탈레닐]에틸리덴]-디-히드로-4-히드록시-2-(3h)-푸란온.
iv. 분자구조
Figure 112006062734484-PCT00001
-14-데옥시안드로그라폴리드
i. 일반식: C20H30O4
ii. 분자량: 336.46
iii. 분자 구조:
Figure 112006062734484-PCT00002
- 네오안드로그라폴리드
i. 일반식: C20H41O8
ii. 분자량: 326.46
iii. 분자 구조:
Figure 112006062734484-PCT00003
본 발명의 조성물의 대표적인 실시예는 다음과 같은 안드로그라폴리드류의 혼합물로 이루어진다: 안드로드라폴리드, 14-데옥시안드로그라폴리드 및 네오안드로그라폴리드. 이때, 상기 각 성분들은 건조 추출물중에 안드로그라폴리드 약 20 내지 40% ww, 14-데옥시안드로그라폴리드 약 3 내지 6 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 약 0.2-0.8 중량%의 비율로 함유된다. 바람직한 실시예에 의하면, 본 발명의 조성물은 최종 추출물내에 약 25 내지 35 중량%의 안드로그라폴리드, 약 4.5 내지 5.5 중량%의 14-데옥시안드로그라폴리드 및 약 0.4 내지 0.8 중량%의 데오안드로그라폴리드를 포함한다.
더욱 바람직한 실시예에 의하면, 상기 신규 추출물은 안드로그라폴리드 24.6%, 14-데옥시안드로그라폴리드 4.8%, 및 네오안드로그라폴리드 0.6%를 포함한다.
상기 제제는 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 투여될 수 있는 의약을 제조하는데 적합하며, 예를 들면 1회 투여분으로 안드로그라폴리드류 혼합물을 약 1 내지 6.5 mg/kg(체중)으로 포함하는 정제 제형으로 제조될 수 있다.
구체적으로, 각 성분들의 1회 투여 용량은 다음과 같다:
a) 1-5 mg 안드로그라폴리드/kg/1일
b) 0.2-1 mg 14-데옥시안드로그라폴리드/kg/1일
c) 0.02-0.12 mg 네오안드로그라폴리드/kg/1일
본 명세서에 개시한 바와 같은 다른 제제 및 투여 방법도 물론 사용할 수 있지만, 본 발명의 실시예에 의하면, 전술한 바와 같은 자가면역 질환뿐만 아니라 알츠하이머 병을 효과적이면서도 효율적으로 치료할 수 있다.
그러므로, 본 발명의 조성물과 약학 제제는 특히 정제 제형으로 전술한 바와 같은 용량으로 투여될 경우, 다양한 자가면역 질환, 예컨대 염증 질환, 특히 당뇨병, 염증성 질환, 기타 자가면역 질환(홍반성 낭창, 다발성 경화증 및 류마티스성 관절염)을 치료하는데 유용한 의약을 제공한다.
본 발명의 화합물과 약학 조성물은 그 작용 메카니즘에 기인하여, AIDS(후천성 면역 결핍증) 및 조직 기관 거부반응을 치료하는데에도 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물을 사용하여, 특히 공지된 제제에 따라 제조할 수 있는 약학 조성물은 장경유 투여, 비경구 투여, 피부 투여, 안내 투여, 비강 투여, 귀 투여, 직장 투여, 질내 투여, 요도내 투여, 협측 투여, 및 인두-기관-기관지 투여용 약학 제형에 해당하는 것일 수 있다.
< 천심련 원료의 수득 및 분석 방법>
활성 성분: Andrographis paniculata Nees (Burm . f.)
과: 쥐꼬리망초과
용도: 풀(약용)
본 발명자들의 감독하에 유기 재배된 천심련의 초록잎, 줄기 및 윗부분을 종자를 포함하여 일광 건조시킨다. 모든 이물질은 손으로 제거하고 원료를 1-1.5cm 크기의 조각으로 절단한 후에, 통기가 잘 되는 장소에 보관한다. 통상의 분석 절차를 수행하여 원료를 동정한다: 거시적 분석 및 미시적 분석, 감각 파라미터 및 TLC(박층 크로마토그래피) 분석을 유럽 약전에 의거 수행한다.
< 천심련 건조 추출물을 얻는 방법>
천심련의 추출은 파트 1에서 극성 용매를 사용하여 분쇄된 건조 식물(공중에서 성장하는 부분)을 연속적으로 여과함으로써 수행한다.
이중 분석된 약물을 나이프-해머 밀에서 적당한 입자 크기(0.8cm2)로 분쇄한다. 분쇄된 재료를 스테인레스 스틸 여과기(percolator)에 넣고 추출 용매를 50℃의 온도에서 첨가한다. 여과 시간은 2회의 추출 사이클로 약 6일(6X24 시간)이다. 여과 단계를 완료할 때까지 여과액을 스테인레스 스틸 탱크에 수집한다. 여과액을 직접 증발기로 옮겨서 용매와 대부분의 물을 제거한다. 증발 단계는 LUWA 박막 증발기에서 140-158℉(60-70℃)의 온도에서 2.65-2.85 바아의 진공하에 수행한다. 증발 단계는 추출물을 계속 혼합시키면서 매일 30분동안 4회 3-4 사이클로 수행한다. 코튼 그라스(spissum) 추출물이 알맞은 함수율을 나타낼때, 다음과 같은 항목에 대하여 분석을 수행한다: 회분 함량, HCl-회분, 건조시 손실분, pH 값, TLC 특성분석 및 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피), 및 안드로그라폴리드, 14-데옥시안드로그라폴리드 및 네오안드로그라폴리드에 대한 분석. 이어서, 코튼 그라스 추출물을 건조기로 옮긴다. 건조 단계에 앞서, 최종 건조 추출물을 추후 분석에 사용할 수 있도록 화이버 드럼에서 플라스틱 백에 포장한다.
< 천심련 30% 추출물의 제조 방법>
건조 및 체 분류된 천심련의 잎/줄기를 본 발명자들의 감독하에 농장으로부터 수거한다. 공중 성장 부분을 전술한 바와 같이 특성 분석에 사용한 후에 추출용으로 수집한다.
공중 성장 부분을 진공하에 저극성 용매(A), 예를 들면 N-헥산 또는 클로로포름을 사용하여 스테인레스 추출기에서 추출한다. 연속적인 추출 단계 이후에, 용매를 제거하고 찌꺼기를 극성이 보다 높은 제2의 용매(B), 예를 들면 석유 에테르40:60 또는 에틸 아세테이트를 사용해서 처리하고, 1회 추출한 후에, 용매를 제거하고, 다시 찌꺼기를 극성이 더 높은 용매(C), 예를 들면 에탄올 또는 물로 처리한다.
제3의 용매를 회수하고 증발시켜서 수분이 30-40%인 물질을 얻고, 그 찌꺼기를 전술한 바와 같은 저극성 용매로 처리한 후에 얻은 물질을 여과하고 수분이 5% 이하가 될 때까지 진공하에서 건조시킨다. 수득한 과립을 분쇄하여 안드로그라폴리드로 환산하여 랍단 디테르펜 함량이 30% 이상인 미세 분말을 얻는다.
추출 단계의 상세한 설명:
단계 1: 미세하게 절단된 천심련의 잎/줄기를 중량비로 3-5배에 해당하는 용매 A를 함유한 스테인레스 스틸 반응기에 넣는다.
단계 2: 약초를 4-6회 반복해서 추출하고 용매를 제거한다.
단계 3: 이어서 찌꺼기를 극성이 용매 A보다 높은 용매 B로 처리하고 3-5 시간동안 1회 추출한다.
단계 4: 용매 B를 제거하고, 찌꺼기를 용매 A 또는 B보다 극성이 더 높은 용매 C로 추출한다.
단계 5: 용매 C를 3-5시간동안 찌꺼기를 통해 순환시키고 스테인레스 증발기에서 진공하에 제거한 다음, 찌꺼기를 다시 용매 C로 추출하고, 이 과정을 3-4회 반복한다.
단계 6: 용매 C를 모든 세정액으로부터 회수하고, 수득한 물질을 모두 합친다.
단계 7: 단계 4-7에서 얻은 물질을 용매 A 또는 B로 처리하고, 잔류물을 진공하에서 60℃를 넘지 않는 온도에서 진공하에 건조시킨다.
단계 8: 단계 7로부터 얻은 건조된 물질을 ASTM에 의거 100-200 범위의 메쉬 크기를 가진 GMP 분쇄기를 사용하여 분말로 만든다.
단계 9: 단계 8에서 얻은 분말을 자동 체 분류장치에 통과시키고, 즉석에서 사용할 수 있도록 직접 멸균 PP 백에 채운 다음 밀봉한다.
전술한 바와 같이 얻은 분말을 본 명세서에 설명한 방법에 따라서 분석한 결과, 최종 추출물은 안드로그라폴리드 25-35 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 약 4.5-5.5 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 약 0.4-0.8 중량%를 함유하는 것으로 밝혀졌다.
< 천심련의 특성분석- TLC >
시험 용액: 식물 추출물 1g에, 메탄올 20 ml를 첨가하고, 약 1시간 동안 진탕시킨 후에, 메탄올을 필터를 통해 경사 분리시킨다. 잔류물을 메탄올 20 ml와 함께 진탕시키고, 여과한 후에 제1 추출물과 혼합한다(시험 용액 40 ml를 제조한다).
비교 용액: 1. 안드로그라폴리드(A), 14-데옥시안드로그라폴리드(DA) 및 네오안드로그라폴리드(NA)를 메탄올에 용해시킨 용액. 2. 시험용 추출물과 동일한 방식으로 처리한 비교용 추출물. 시험 용액 20-30 ㎕를 TLC판(코팅 물질: 실리카겔 GF254)에 가하고 77부피비의 에틸 아세테이트와 15부피비의 메탄올 및 8부피비의 물로 이루어진 혼합물(77:15:8)을 사용하여 15cm의 경로에 걸쳐 전개시킨다. 이어서, TLC판을 공기중에서 건조시키고 UV(254nm)로 조사한다. 크로마토그램에 나타나는 몇개의 어두운 반점은 안드로그라폴리드(Rf0.65-0.7); 14-데옥시안드로그라폴리드(Rf 0.75-0.8) 및 네오안드로그라폴리드 (Rf 0.60-0.65)에 해당한다.
<랍단 디테르펜 정량분석을 위한 HPLC 방법>
상기 3종의 화합물을 아세톤(4:1)으로 추출한 후에, 역상 RP-C18 리크로스퍼(licrospher) 컬럼(4X125mm)을 사용하여 HPLC로 분석한다. 이동상은 아세토니트릴 26% 및 인산 0.5%로 이루어지며, 사용 비율은 1.1ml/분이고, 문헌 [Burgos 등, 1999, Acta Hort. (ISHS) 501: 83-86]에 의거하여 228nm에서 검출한다.
천심련 건조 추출물은 총 안드로그라폴리드류 함량 최소 30%로 표준화시키는데, 이는 안드로그라폴리드 약 20-40 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 3-6 중량% 및 네오안드로그라폴리드 0.2-0.8 중량%를 포함하는 것이다.
본 발명에 의한 조성물은 현재 과학 분야의 "기술 수준"에서 전혀 개시된 바 없는 것으로, 본 발명에 의한 조성물을 앞에서 언급한 자가면역 질환 및 알츠하이머변에 관한 치료방법상의 문제점을 해결하기 위해 사용한 전례가 전혀 없는 신규 조성물이다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구 투여되며, 비경구 투여에는 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 투여 및 관절내 투여가 포함된다.
본 발명의 약학 조성물의 정확한 투여량은 특정한 제제, 투여 방식, 환자의 연령, 체중 및 성, 식이, 환자의 질병 상태, 보충 약물 및 부작용에 따라 달라질 것이다. 당업자라면 본 발명의 약학 조성물의 정확한 용량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있을 것이다. 바람직하게는, 상기 약학 조성물의 1일 투여 용량은 체중 1kg당 안드로그라폴리드류 혼합물 1-6.5mg 범위이다.
당업자에 알려진 통상의 기법에 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 전술한 바와 같이 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 사용해서, 예를 들면 단위 투여 제형으로, 제제화될 수 있다. 그러한 제제의 예로서는 멸균 용액, 용액, 현탁액 또는 에멀젼, 추출액, 엘릭시르, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 도포제, 로션 및 연고를 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 안드로그라폴리드, 14-데옥시안드로그라폴리드 및 네오안드로그라폴린 랍단류 화합물을 약학 조성물의 제조에 통상 사용되는 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 함유하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물에서, 약학적으로 허용가능한 담체는 약학 제제에 사용되는 것으로 알려진 통상의 담체, 예를 들면 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알긴산염, 규산칼슘, 미소결정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스(HPMC), 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 스테아르산마그네슘 및 무기 오일을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 습윤제, 감미제, 유화제, 현탁제, 방부제, 방향제, 향료, 윤활제 또는 이들의 혼합물중 어느 하나를 함유할 수도 있다.
통상적으로, 상기 약학 조성물은 랍단류 혼합물인 안드로그라폴리드, 14-데옥시안드로그라폴리드 및 네오안드로그라폴리드의 혼합물 20-40%, 바람직하게는 25-35%, 가장 바람직하게는 30 중량% 및 약학적으로 허용되는 담체들을 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 치료를 요하는 포유동물에게 경구 투여 경로를 통해서 단일 투여 용량으로 또는 분할된 투여 용량으로 투여될 수 있다. 따라서, 경구 투여의 경우에, 상기 화합물들은 적당한 고형 담체와 혼합되어 캡슐, 정제, 분말등을 형성할 수 있다.또한, 상기 약학 조성물은 다른 성분, 예를 들면 방향제, 감미체, 부형제 등을 함유할 수도 있다.
이외에도, 본 발명은 상기 안드로그라폴리드류 혼합물을 함유하는 약학 조성물로 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 본 발명의 방법은 치료를 요하는 환자에게 본 발명의 조성물을 포함하는 용액을 정맥내 투여하거나 본 발명의 조성물을 포함하는 정제를 상기 환자에게 경구 투여하는 단계를 포함한다. 주사 용액 제제의 바람직한 용량은 상기 조성물 약 60-210 mg/1일, 가장 바람직하게는 60-80 mg/1일이며, 매일 1, 2 또는 3회 주사한다.
주사 가능한 제제는 1ml당 상기 조성물을 약 8-16mg 포함한다. 환자에게 투여할 경우에, 상기 조성물은 0.9% 염수 용액을 사용하여 약 1:5 내지 1:10 부피비로 희석하는 것이 바람직하다.
이하에서는 실시예에 의거하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하고자 하나, 후술하는 실시예가 본 발명의 보호 범위를 한정하는 것은 결코 아니다. 당업자가 판단하기에 타당한 여러가지 개조예들을 본 발명의 범위내에서 실시할 수 있음은 물론이다.
본 발명의 약학 조성물은 제약 산업분야의 전형적인 규모로서 뿐만 아니라 소규모로서 제조하는데 적합하다. 필요에 따라, 습식 과립화, 건식 과립화, 직접 압착, 유동층 과립화 등을 비롯한 제약 산업의 통상적인 기법에 의해서, 적절한 경우에는 정제 제형으로, 제제화하여 소정의 경구 투여 약품 또는 비경구 투여 약품을 제공할 수 있다.
하기 실시예에서 제시된 백분율은 모두 중량을 기준으로 한 것이다.
도 1은 FURA2-AM 인디케이터로 표시한 HL-60세포를 사용한 경우, 340/380nm 비율로 측정한 PAF 유발된 칼슘 이동 양상을 보여주는 그래프이다. 상기 세포는 레틴산만으로, 또는 후술하는 실시예 1-2에 기재된 바와 같은 본 발명의 조성물(3.5㎍/mL)의 존재하에 레틴산으로 분화시킨 것이다.
도 2는 PPARγ의 프로모터를 함유하는 벡터로 형질감염시킨 HL-60세포에서 상대 루시페라제 활성 및 본 발명의 조성물의 효과를 도시한 막대 다이아그램이다.
도 3은 콘카나발린(CON-A)로 활성화된 T세포에서 본 발명의 조성물에 의한 IL-2 및 INF-감마 농도의 억제 효과를 보여주는 막대 그래프이다.
도 4는 본 발명의 조성물에 의한 IκBα 분해 억제 효과를 보여주는 도면으로서, 도시된 막대 다이아그램은 NFκB 프로모터를 함유하는 벡터로 형질감염시킨 HL-60 세포에서 상대 루시페라제 활성에 대한 본 발명의 조성물의 억제율(%)를 나타낸 것이다.
도 5는 티오플라빈 염색법을 사용한 경우, 본 발명의 조성물에 의한 β 아밀로이드 형성의 시험관내 억제 효과를 보여주는 현미경촬영 사진(microphotography)이다.
활성 성분을 함유하는 정제를 제조하는 대표적인 방법의 일례를 들면, 먼저 활성 성분과 결합제, 예를 들면 젤라틴, 에틸 셀룰로오스 등을 혼합한다. 이때, 혼합 단계는 표준 V-블렌더에서 대개는 무수 조건하에 수행하는 것이 적당하다. 이어서, 제조한 직후의 혼합물을 통상의 타정기에서 타정하고, 타정된 물질을 정제로 만든다. 제조된 직후의 정제를 쉘락(shellac), 메틸 셀룰로오스, 카르누바 왁스, 스티렌-말레인산 공중합체 등을 비롯한 적당한 코팅제로 피복한다.
경구 투여의 경우, 30 mg 내지 40mg의 안드로그라폴리드류 혼합물을 함유하는 압착된 정제를, 당업자에게 잘 알려져 있고 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, Chapter 39, Mack Publishing Co., 1965]에 기술되어 있는 제조 기법에 따라서 제조한다. 본 발명의 조성물의 바람직한 제제예를 하기 실시예중 몇가지에 구체적으로 설명하였다.
실시예 1
천심련 약초로부터 얻은 건조 추출물에 함유된 안드로그라폴리드류를 사용하여 본 발명의 정제를 제조하기 위한 약학 조성물은 다음과 같다.
성분: 정제 1개당 mg
건조 추출물(안드로그라폴리드류 혼합물) 135.0
감자 전분 168.8
탈크 106.9
젤라틴 11.5
스테아르산마그네슘 5.6
히드록시프로필 메틸 셀룰로오스 3.5
이산화슈소(무수) 2.0
폴리에틸렌 글리콜 0.7
탄산칼슘(충분량) 16
정제를 제제화하기 위해서, 활성 성분인 건조 추출물(안드로그라폴리드류 혼합물), 감자 전분, 탈크, 젤라틴, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스, 이산화규소 (무수), 폴리에틸렌 글리콜 및 탄산칼슘을 건조 상태에서 통상의 V-블렌더를 사용하여 모든 성분들이 균일하게 혼합될때까지 혼합하였다. 이어서, 혼합물을 표준 경량 메쉬 스크린에 통과시키고, 무수 분위기에서 건조시킨 후에, 스테아르산마그네슘과 혼합하고, 정제로 압착시킨 다음, 쉘락으로 피복하였다. 활성 성분 116 내지 162mg을 함유하는 다른 정제들도 유사한 방식으로 제조하였다.
실시예 2
천심련 약초로부터 얻은 건조 추출물을 사용하여 본 발명의 캡슐을 제조하기 위한 약학 조성물은 다음과 같다.
[표 1]
성분: 캡슐 1개당 mg
건조 추출물(안드로그라폴리드류 혼합물) 135.0
감자 전분 168.8
탈크 106.9
젤라틴 11.5
스테아르산마그네슘 5.6
히드록시프로필 메틸 셀룰로오스 3.5
이산화슈소(무수) 2.0
폴리에틸렌 글리콜 0.7
탄산칼슘 16
안드로그라폴리드류 혼합물 30 mg 내지 40 mg을 함유하는 경구 투여용 캡슐을 제조하는 절차는, 건조 추출물(안드로그라폴리드류 혼합물)을 담체와 혼합하고, 상기 혼합물을 통상 젤라틴 등과 같은 중합체 외장내에 봉입시키는 단계로 이루어진다. 캡슐은 당분야에 잘 알려진 바와 같이, 활성 화합물을 상용성이 있는 식용 담체내에 코어 분산액으로 봉입시킴으로써 제조되는 연질 캡슐 제형이거나, 탈크, 스테아르산칼슘, 탄산칼슘 등과 같은 비독성 고체와 혼합된 신규 조성물을 주성분으로 하는 경질 캡슐일 수 있다. 치료 요법에 명시된 바에 따라 사용되는 캡슐의 대표적인 예는 활성 성분 30mg 또는 40mg을 함유하는 캡슐이다.
단일 투여 용량 또는 다수회 투여 용량이거나, 1일 용량이거나, 투여되는 용량은 물론 사용된 본 발명의 특정 화합물에 따라 달라지는데 화합물마다 효능이 다르기 때문이며, 이외에도 투여되는 용량은 선택된 투여 경로, 환자의 체격과 질병 상태의 특성에 따라서도 달라질 것이다. 투여되는 용량은 일반적으로 경구 투여의 경우에는 1일 80-160mg이고, 대개는 1일 3회 120mg이며; 보통의 정맥내 투여 용량은 60-80mg으로서, 이후 지침에 따라서 차후의 기간동안에는 70-100mg을 투여하며; 통상의 근육내 투여 용량은 24시간마다 70-100mg으로서 1일 1 내지 2회 주사한다.
본 발명의 건조 추출물(안드로그라폴리드류 혼합물 포함)을 포함하는 신규의 유용한 약학 조성물은 그 조성물이 갖는 예상되는 생리학적 효과로 인하여, 약물 전달 시스템, 예를 들면 피부 전달 시스템, 위장 약물 전달 기구 등에도 사용할 수 있으며, 이때 전달 기구는 천연의 물질과 합성 중합체 물질로 제조된다. 약물 투여 속도를 조절하기 위한, 본 발명의 화합물들을 함유하는 약물 전달 시스템을 제조하는데 사용할 수 있는 대표적인 물질들로서는, 폴리비닐 클로라이드, 폴리이소프렌, 폴리부타디엔, 폴리에틸렌, 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체, 폴리디메틸실록산, 아크릴산과 메타크릴산 에스테르의 친수성 히드로겔, 폴리비닐 아세테이트, 프로필렌 비닐 아세테이트 공중합체 등을 들 수 있다.
실시예 3
전술한 바와 같은 조성물을 함유하고 쉘락으로 피복된 정제를 혼합 단계, 과립화 단계 및 필요에 따라 정제 제형으로 만들기 위한 압착 단계를 포함하는 제약 산업 분야의 통상의 기법에 따라서 다음과 같이 제조하였다.
구체적으로, 상기 실시예 1의 조성물을 충분한 양의 천심련 건조 추출물과 잘 혼합하였다. 안드로그라폴리드, 14-데옥시안드로그라폴리드 및 네오안드로그라폴리드를 포함하는 정제를 제조하기 위해서, 상기 혼합물을 실시예 1에 기재된 활성 성분들을 사용하여 직접 압착하고, 이어서 쉘락으로 피복하였다.
< 실시예 4> 본 발명에 의해 유발되는 HL -60 세포 분화
화학약품: May Grunwald-Giemsa(염색액), NBT, 레틴산, 사이톡할라신 B(cytochalasin B), 페니실린, 스트렙토마이신, 글루타민, 태아기(fetal) 소 알부민 (Sigma), RPMI 1640(GIBCO), Boehringer Mannheim으로부터 입수한 태아기 소 혈청, 모든 트랜스레틴산과 안드로그라폴리드는 Aldrich로부터 입수한 것이다. 다른 분리물들은 인도 소재의 Amsar Pvt. Ltd.로부터 공급된 것이다. FURA2-AM은 Molecular Probes (미국)로부터 구입한 것이며, 니트로블루 테트라졸륨은 Sigma로부터 입수한 것이다.
세포 배양: HL-60 세포를 20% 열-불활성화된 태아기 소 혈청, 2mM 글루타민, 100 IU/ml 페니실린 및 100 pg/ml 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640 배지에서, 37℃하에 CO2를 함유하는 가습된 대기중에서 성장시켰다. 세포를 매주 2회 3X105 세포/ml의 비율로 접종하였다. 100nM의 전체 트랜스형인 레틴산을 단독으로 또는 상기 조성물(17.5㎍/ml)과 함께 첨가함으로써 세포 분화를 유발시키고, May Grunwald-Giemsa 염색법을 실시한 이후에 형태 변화를 통해서 분석하고 NBT'(11)을 감소시키는 능력을 평가하였다. 미분화된 배양물은 3% 미만의 NBT 양성 세포를 함유하였다. 분화된 배양물은 레틴산으로 처리한지 5일 경과후에 조사하였다.
칼슘 측정 [Ca2 +]c: HL-60 과립구(2X107/ml)를 0.1% 소 혈청 알부민이 추가된 Ca2+ 배지에 2μM fura-2/AM과 함께 37℃에서 45분동안 장입시킨 후에, 107 세포/ml의 비율로 희석한 후에 얼음상에 방치해두었다. 사용하기 직전에, 상기 세포 현탁액 0.5ml를 원심 분리시키고 재차 5㎍/ml의 사이톡할라신 B를 포함하는 상기 배지 2.4ml에 현탁시켰다. Fura-2 형광(F)을 항온 시료 홀더(37℃)에서 340 nm 및 380nm 여기 파장 및 505nm 방출 파장으로 측정하였다(LS55 형광광도계, Perkin-Elmer Corp.).
< 실시예 5> 본 발명의 조성물에 의한 T 세포에서 IL -2 및 IFN -γ 생성의 억제
화학약품: 콘카나발린 A 및 RPMI 1640 배지 (시그마로부터 입수함).
세포 배양: 록펠러(Rockefeller) 마우스를 에테르를 사용해서 치사시키고, 무릎 뒤쪽의 신경절과 비장을 RPMI 1640 배지 5 ml를 함유한 페트리 접시에 놓았다. 상기 기관들을 RPMI 1640 멸균 용액에서 파괴하여 림프구를 얻은 후에, 그 림프구를 RPMI 1640 배지 1 ml에 재차 현탁시키고, 노이바우어(Neubauer) 챔버를 사용하여 정량하였다. 마지막으로, 림프구 현탁액을 RPMI 1 ml당 4X106 세포수의 농도로 조정하였다. 이와 같이 림프구를 일단 준비한 다음, 림프구를 본 발명의 조성물의 존재하에서 또는 부재하에서 배양하였다. 이를 위해서, 세포 1ml 와 다양한 농도의 본 발명의 조성물 및 미토겐 콘카나발린 A(CONA, 0 ㎍/ml 및 10 ㎍/ml) 1 m를 함유하는 24웰(각 2 ml) 폴리스티렌 배양 평판을 사용하였다.
상기 배양 평판을 37℃의 오븐에서 습도 5%인 Co2 함유 대기중에서 24 시간동안 항온 처리한 후에, 각 2ml의 샘플을 첨가하고, 1분동안 3200 rpm하에 원심분리하였다. 그 후에, 세포를 0.6ml 분취량으로 동결시키고, ELISA법(효소 결합 면역 흡착 분석법)으로 사이토카인을 검출하였다.
IL-2 및 IFN-γ에 대한 ELISA:
화학약품: Pharmingen으로부터 입수한 IL-2 및 IFN-γ; Pierce로부터 입수한 TMB, Merck로부터 입수한 H2O2 및 H2SO4 .
사이토카인(IL-2 및 IFN-γ)을 정량하기 위해서, 항-항원(anti-antigen)을 포획하는 제1 항체, 퍼옥시다제 효소에 결합하는 제2 항체 및 검정 곡선 작성용 표준 용액을 사용하였다. ELISA 분석을 위해 96웰의 폴리스티렌 평판을 사용하였다. 웰당 100㎕의 제1 항체를 pH 9.5의 탄산염 완충액중에 희석하여 웰에 대한 접착을 용이하게 하였으며, 4℃에서 밤새 항온 처리하여 제1 항체가 고체 부분에 확실하게 결합될 수 있도록 하였다. 그 후에, 웰의 내용물을 제거하여 웰당 300㎕의 Tween 20, 0.05% p/v 및 PBS pH 7.0 을 사용해서 3회 세척하였다. 이어서, 웰을 5% 탈지 우유 및 PBS 200㎕로 폐쇄하고, 실온에서 1시간 동안 항온 처리하였다. 항온 처리를 완료한 후에, 웰의 내용물을 제거해서 전술한 바와 같이 세척하였다. 이어서, 항원을 웰당 100㎕로 함유하는 시험 샘플을 2벌식으로 첨가하고, 사이토카인에 대해 특이적인 검정 곡선 작성용 표준 용액 100㎕를 첨가한후, 실온에서 2시간 동안 항온 처리하였다. 그 후에, 웰의 내용물을 제거하고 전술한 바와 같이 세척하였다. 이어서, 제2 결합 항체를 퍼옥시다제 효소와 함께 첨가하고, PBS 및 10% SBF 용액에 희석시키고, 웰당 100㎕로 평판 배양을 위해 가한 다음, 실온에서 1시간 동안 방치해두었다. 이어서, 7회 세척한후, TMB 용액과 H2O2를 웰당 100㎕로 사용해서 가시화시킨후, 암실에서 30분 경과후 현상시켰다. 웰당 50㎕의 2M H2SO4를 사용해서 반응을 종료시켰다. 반응 결과를 ELISA법에 의해 450nm 필터를 사용해서 측정하였다(Elx800 universal Microplate Reader, BioteK).
< 실시예 6> 본 발명의 조성물에 의한 PPAR -γ 수용체의 자극
화학약품: Merck로부터 구입한 디메틸 설폭사이드. 기타 모든 시약은 PROMEGA로부터 구입하였다.
전사 분석: HL-60 세포를 인간 PPARγ1 형질발현 벡터인 pCMX-hPPARγ1으로 사이토메갈로비루스 촉진자의 조절하에 형질감염시켰다. 루시페라제 및 β-갈락토시다제 활성을 측정하였으며, 루시페라제 활성은 HL-60세포에서 β-갈락토시다제에 대하여 표준화시켰다.
플라스미드: pGBTmPPARγ1으로부터 ScaI/BamHI 분절로서 분리된 마우스 PPARγ1 리간드 결합 도메인(아미노산 162-475)을 pCMXGal4DBD내로 구조내 삽입시킴으로써, GAL4-DNA 결합 도메인(DBD) 및 mPPARγ 리간드 결합 도메인(pGAL4DBD-mPPARγ)을 형질발현하는 플라스미드를 작제하였다.
상기 세포를 DMSO로, 또는 본 발명의 조성물 17.5㎍/ml 농도로 처리하고, 루시페라제 활성을 화학발광법으로 측정하였다.
< 실시예 7> 본 발명의 조성물에 의한 호중구에서 NF -κB의 억제
화학약품: Merck로부터 구입한 디메틸 설폭사이드(DMSO); Gibco(미국)로부터 입수한 태아기 소 혈청 및 RPMI-1640 배지; Sigma로부터 입수한 니트로테트라졸륨 블루, pRL-TK, pGL3 및 이중 루시페라제 리포터 분석 시스템(Promega); Roche로부터 입수한 Fugene6.
세포 배양:
급성 골수성 백혈병으로부터 유래한 골수 HL-60 세포주를 사용하였다. 상기 세포는 1.3% 디메틸설폭사이드(DMSO)의 존재하에서 분화할 수 있다 (Santos-Beneit 등, 2000). 상기 세포를 2mM L-글루타민, 열처리로 불활성화시킨 10% 태아기 소 혈청 및 항생제가 보충된 5% CO2 존재하의 RPMI-1640배지에서 37℃로 유지시켰다. 호중구를 4일동안 1.3% DMSO를 사용해서 항온 처리함으로써 상기 세포를 호중구로 분화시켰다. 분화된 세포를 니트로테르라졸륨 블루(NBT)를 사용해서 분석하였다.
HL-60세포에서 NFκB-pGL3 벡터의 형질감염과 루시페라제 활성 측정:
문헌에 기재된 방법에 따라 HL-60 세포를 4일동안 배양하고 호중구로 분화시켰다. 4일째, 세포를 pGL3-NFκB 벡터로 형질감염시키고, 내부 대조군으로서 pRL-TK(Promega) 벡터로 형질감염시킨 것을 사용하였다. 대조군에 사용된 벡터는 단순 포진 바이러스의 티미딘 키나제 촉진자를 함유하는 형질발현 백터로서, 이것에 의하면 바다 팬지(Renilla) 루시페라제가 적당한 정도로 형질발현될 수 있다. 상기 벡터들을 리포좀계 시스템(Fugene6, Roche)에 의해서 세포에 대해 형질감염시켰다. 형질감염을 일단 수행한 후에, 세포를 24시간동안 방치한 다음, 다양한 시기에 본 발명에 의한 조성물의 존재 또는 부재하에, PAF 또는 fMLP에 의해서 자극하였다. 이어서, 세포 추출물을 루시페라제 활성을 측정할 때까지 -70℃에 보관하였다. 루시페라제 활성은 화학발광법에 의해서, 개똥벌레(pGL3) 및 바다 팬지(pRL) 효소 기질을 갖는 시판되는 시스템인 이중 루시페라제 리포터 분석 시스템(Promega)을 사용해서 측정하였다.
IκBa 면역염색법:
화학약품: fMLP; PMSF 및 PAF는 Calbiochem으로부터 구입하였다. Tris, NaCl, NP-40, 데옥시콜레이트, 소듐 도데실설페이트, 프로테아제(iprotease) 저해제. Merck로부터 입수한 머캡토에탄올.
호중구를 10분동안 미리 배양시키고, 60분동안 fMLP(0.1μM) 및 PAF(0.1μM)을 사용해서 자극하였다. 단백질 분석을 위해서, 세포를 용해 탬폰(50mM Tris, pH 8.0, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% 데옥시콜레이트, 0.1% 소듐 도데실설페이트, 1 mM Na2VO4, 1 mM PMSF 및 10 ㎍/ml의 프로테아제 저해제)에서 용해시켰다. 브래드포드(Bradford)법에 의해서 단백질을 정량하고, 폴리아크릴아미드 겔에서 변형된 조건(SDS/PAGE 12%)하에 전기영동법으로 분해하였으며, 니트로셀룰로오스 막에 전기 이동시켰다. 상기 막을 안티-IκBα 항체와 함께 항온 처리한 후에, 2차 퍼옥시다제 결합 항체와 함께 항온 처리한 다음, 마지막으로 화학발광법(ECL)에 의해서 육안으로 확인하였다. 겔에 존재하는 단백질 양의 대조군으로서, 항체를 박리 용액(100 mM 2-머캡토에탄올, 2% SDS, 62.5 mM Tris-HCl, pH 6.7)으로 처리하고, 항-액틴 항체를 사용해서 항온 처리하였다. 최종적으로, 각 항체에 대해 얻은 신호에 대한 분광 분석을 수행하였다.
< 실시예 8> 야생형 래트에서 본 발명의 조성물에 의한 β-아밀로이드 형성의 억제
아밀로이드 형성:
아밀로이드 형성에 관한 연구를 위해서, 2가지 상보적인 기법, 즉, 티오블라빈-T 형광 분석법(Levine, 1993: Soto 등, 1995; Reyes 등, 1997; Inestrosa 등, 2000) 및 콩고 레드(Congo red) 결합법(ALvarez 등, 1998)을 사용하였다. 간단히 말하자면, 티오블라빈-T법은 티오블라빈이 아밀로이드 미소섬유에 결합할 때의 형광 발광에 기초한 것으로서, 450nm에서 여기시 482nm에서 발광도의 증가를 보인다. 콩고 레드 분석법은 형성된 아밀로이드의 양을 측정하기 위한 매우 특이적인 정량 분석법이다. 상기 기법들은 특이적인 아밀로이드 형성을 입증하고자 현재 사용되고 있는 것들이다.
< 실시예 9> 안드로그라폴리드류 조성물중의 화합물
본 발명의 대표적인 조성물은 정제 제형의 약학 제제로서, 다음과 같은 화합물들의 혼합물을 제공한다:
안드로그라폴리드 24.6%
14-데옥시안드로그라폴리드 4.8%
네오안드로그라폴리드 0.6%
차후 다른 약학 제형의 조성물을 제조하기 위해서, 다음과 같은 용량을 적용하였다:
a) 1-5mg 안드로그라폴리드/kg/1일
b) 0.2-1 mg 14-데옥시안드로그라폴리드/kg/1일
c) 0.02-0.12 mg 네오안드로그라폴리드/kg/1일.
< 실시예 10> 홍반성 낭창의 치료를 위한 경구 제제의 임상적 효능
실시예 7에 기재된 안드로그라폴리드류 혼합물을 사용한 결과, 루푸스에 기인한 증상은 투여한지 3개월 후에 정상화되었다. 또한, 상기 조성물은 다른 종래의 비스테로이드성 항염증제의 재생 효과를 방해하지 않았다.
< 실시예 11> 다발성 경화증의 치료를 위한 경구 제제의 임상적 효능
실시예 7에 기재된 안드로그라폴리드류 혼합물을 사용한 결과, 다발성 경화증의 증상은 투여한지 3개월 후에 정상화되었다. 또한, 상기 조성물은 다른 치료 방법을 방해하지 않았다.
< 실시예 12> 변형 관절증 및 류마티스성 관절염의 치료를 위한 경구 제제의 임상적 효능
실시예 7에 기재된 안드로그라폴리드류 혼합물을 사용한 결과, 골관절염에 기인한 관절 경직의 증상은, 글루코나민 또는 콘드로이틴 설페이트나 기타 항염증 약물의 존재 또는 부재하에서, 투여한지 3개월 후에 정상화되었다. 또한, 상기 조성물은 다른 종래의 비스테로이드성 항염증제와는 달리, 상기 2종의 플로테오글리칸 성분들의 관절 재생 효능을 방해하지 않았다.
< 실시예 13> 당뇨병의 치료를 위한 경구 제제의 임상적 효능
실시예 7에 기재된 안드로그라폴리드류 혼합물을 사용한 결과, 당 수치는 5주 이후에 정상화되었다. 또한, 상기 조성물은 다른 당 수치 저하제의 치료 효과를 방해하지 않았다.
< 실시예 14> AIDS 의 치료를 위한 경구 제제의 임상적 효능
실시예 7에 기재된 경구 제제를 HIV 양성인 환자에게 투여하였다. 치료한지 3개월 이내에 정상적인 CD4 수치가 회복되었다.
< 실시예 15> 알츠하이머병의 치료를 위한 경구 제제의 임상적 효능
실시예 7에 기재된 경구 제제를, 전문의에 의한 진단 결과, 그리고 별도로 신경과 전문 위원의 확인 결과 알츠하이머병(AD) 초기 단계인 것으로 파악되는 환자들에게 투여하였다. 임상 시험하기 2주 전에, 환자들로 하여금 적절한 신경과 테테스트, 예를 들면 MMSE(Mini Mental Status Exam, 최소 정신 상태 점검), ADAS(Alzheimer Disease Assessment Scale, 알츠하이머병 평가 기준 시험), BNT(Boston Naming Test, 보스톤 명명 시험) 및 TT(Token Test, 표시 시험)를 받게 하였다. 신경과 테스트는 임상 시험 기간중 0일째, 5주째 및 3개월째에 반복하였다. 테스트는 환자의 치료 섭생을 알지 못하는 신경과 전문의에 의해 실시하였다.
환자들을 연구 개시점에서 시험 제제군과 위약 처리군에 무작위 할당하였다. 시험 제제와 위약을 1일당 1회 또는 2회 경구 투여하였다. 당뇨병, 고혈압 등과 같은 증상에 대한 치료는 연구 기간중에도 가능하다. 시험 제제군과 위약 처리군의 수치를 세가지 관찰 기간 동안 각각 통계학적으로 비교하였다. 치료하지 않을 경우, 자연적인 AD의 진행 과정에서는 임상 시험 기간중 테스트 수치가 현저하게 저하된다. 임상 시험 기간동안 환자의 수치가 동일하게 유지되거나 향상된다면, 본 발명의 조성물로 치료한 환자들은 개선된 것이라고 간주하였다.
연구 개시점에서 환자들은 조성물 또는 위약을 무작위적으로 수용할 것이다. 본 발명의 조성물과 위약은 1일 2회 투여하였다. 연구 기간동안, 환자들은 당뇨병 및 고혈압 등과 같은 증상에 대한 치료가 가능하였다. 조성물과 위약을 사용하여 얻은 결과를 연구 전 기간 동안 통계학적으로 비교하였다. 위약을 사용한 환자들은 현저한 지적 능력의 퇴화를 보였다. 본 발명의 조성물로 치료한 환자들은 테스트 수치면에서 상당한 개선을 나타내었다.
이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 자가면역 질환을 특징으로 하는 면역 반응, 알레르기 질환 등을 경감시킬 수 있으며, 면역학적 내성에 영향을 미치는 일 없이 당해 질환의 증상 및 진행을 완화시킬 수 있다.
전술한 바와 같은 상세한 설명에 비추어, 당업자라면 본 발명의 특징을 명확히 파악할 수 있을 것이며, 본 발명의 기술 사상과 보호 범위를 벗어나는 일 없이 본 발명의 다양한 용도 및 조건에 적용시키기 위해 다양한 개조예 및 변경예를 실시할 수 있을 것이다. 따라서, 이와 같은 개조예 및 변경예도 첨부된 청구의 범위에 의해 정하여지는 본 발명의 보호 범위내에 포함된다.

Claims (50)

  1. 천심련(Andrographis paniculata) 건조 추출물로부터 얻은 랍단 디테르펜(diterpenic Labdane)의 혼합물을 포함하는 조성물로서, 상기 랍단 디테르펜은 각각 일반식 C20H30O5 (안드로그라폴리드), C20H30O4 (14-데옥시안드로그라폴리드), 및 C26H41O8 (네오안드로그라폴리드)로 표시되고, 각각의 랍단 디테르펜은 안드로그라폴리드 약 20 중량% 내지 약 40 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 약 3 중량% 내지 약 6 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 약 0.2 중량% 내지 약 0.8 중량%의 양으로 상기 혼합물에 존재하는 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 안드로그라폴리드 성분은 다음과 같은 특징을 갖는 것인 조성물:
    i) 일반식: C20H30O5
    ii) 분자량: 350.46
    iii) 분자명: 3-[2-[데카히드로-6-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,ha-디메틸-2-메틸렌-1-나프탈레닐]에틸리덴]-디히드로-4-히드록시-2(3h)-푸란온
    iv) 분자구조
    Figure 112006062734484-PCT00004
  3. 제1항에 있어서, 상기 14-데옥시안드로그라폴리드 성분은 다음과 같은 특징을 갖는 것인 조성물:
    i) 일반식: C20H30O4
    ii) 분자량: 336.46
    iii) 분자명:
    iv) 분자 구조:
    Figure 112006062734484-PCT00005
  4. 제1항에 있어서, 상기 네오안드로그라폴리드 성분은 다음과 같은 특징을 갖는 것인 조성물:
    i) 일반식: C26H41O8
    ii) 분자량:
    iii) 분자명:
    iv) 분자 구조:
    Figure 112006062734484-PCT00006
  5. 의약, 약물 또는 약제를 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  6. 자가면역 질환을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  7. 류마티스성 관절염을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  8. 홍반성 낭창을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  9. 다발성 경화증을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  10. 알츠하이머 병을 예방하고 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  11. 천식과 알레르기를 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  12. 건선을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  13. 전신성 피부근염을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특 징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  14. 골관절염을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  15. 후천성 면역 결핍증(AIDS)을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  16. 당뇨병을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  17. 조직 및 기관 이식을 받은 환자의 거부반응을 치료하는 데 적합한 의약을 제조하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 조성물의 용도.
  18. 제1항에 따른 조성물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 랍단 디테르펜은 안드로그라폴리드 약 25 중량% 내지 약 35 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 약 4.5 중량% 내지 약 5.5 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 약 0.4 중량% 내지 약 0.8 중량%의 양으로 존재하는 것인 약학 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 각각의 랍단 디테르펜은 안드로그라폴리드 24.6 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 4.8 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 0.6 중량%의 양으로 존재하는 것인 약학 조성물.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 형태의 약학 제제에 상응하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 하기 분자에 대하여 하기 투여량을 제공하도록 경구 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물:
    a) 1-5 mg 안드로그라폴리드/kg/1일
    b) 0.02-0.5 mg 14-데옥시안드로그라폴리드/kg/1일
    c) 0.001-0.02 mg 네오안드로그라폴리드/kg/1일.
  23. 자가면역 질환을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  24. 류마티스성 관절염을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제 22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  25. 홍반성 낭창을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  26. 다발성 경화증을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  27. 알츠하이머 병을 예방하고 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  28. 천식 및 알레르기를 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  29. 건선을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  30. 전신성 피부근염을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  31. 골관절염을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  32. 후천성 면역 결핍증(AIDS)을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  33. 당뇨병을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  34. 이식받은 환자의 기관 및 조직의 거부반응을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제21항 또는 제22항에 따른 약학 조성물의 용도.
  35. 제18항에 있어서, 장 투여, 비경구 투여, 피부 투여, 안내 투여, 비강 투여, 귀 투여, 직장 투여, 질내 투여, 요도내 투여, 협측 투여, 및 인두-기관-기관지 투여용 약학 제형일 수 있으며, 각각의 랍단 디테르펜이 안드로그라폴리드 약 20 중량% 내지 약 40 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 약 3 중량% 내지 약 6 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 약 0.2 중량% 내지 약 0.8 중량%의 양으로 존재하는 랍단 디테르펜 혼합물을 함유하는 건조 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 상기 랍단 디테르펜은 안드로그라폴리드 약 25 중량% 내지 약 35 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 약 4.5 중량% 내지 약 5.5 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 약 0.4 중량% 내지 약 0.8 중량%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  37. 제36항에 있어서, 각각의 랍단 디테르펜은 안드로그라폴리드 24.6 중량%, 14-데옥시안드로그라폴리드 4.8 중량%, 및 네오안드로그라폴리드 0.6 중량%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  38. 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 투여량으로 상응하는 경로에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물:
    a) 1-5 mg 안드로그라폴리드/kg/1일
    b) 0.02-0.5 mg 14-데옥시안드로그라폴리드/kg/1일
    c) 0.001-0.02 mg 네오안드로그라폴리드/kg/1일.
  39. 자가면역 질환을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  40. 류마티스성 관절염을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  41. 홍반성 낭창을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  42. 다발성 경화증을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  43. 알츠하이머 병을 예방하고 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  44. 천식 및 알레르기를 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  45. 건선을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  46. 전신성 피부근염을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  47. 골관절염을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  48. 후천성 면역 결핍증(AIDS)을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  49. 당뇨병을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
  50. 이식받은 환자의 기관 및 조직의 거부반응을 치료하는 데 유용한 것을 특징으로 하는, 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물의 용도.
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