MXPA06008738A - Composicion que comprende una mezcla de lavadnos diterpenicos, de un extracto de planta andrographis paniculata, seleccionado de andrografolido, 14-deoxiandrografolido y neoandrografolido; sus usos. - Google Patents

Abstract

Composicion caracterizada por estar constituida por moleculas identificadas como labdanos diterpenicos que se obtienen de una especie de planta valiosa de Andrographis paniculata, hierba seca, mediante un proceso especial de extraccion, para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y otras enfermedades inmunologicas en los seres humanos y animales, que presenta una toxicidad baja y ausencia de efectos colaterales importantes. Asimismo, la nueva composicion es util para preparar una composicion farmaceutica util para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer. La composicion inhibe la sintesis de citoquinas pro-inflamatorias, debido a la activacion de receptor PPAR gamma y la disminucion del factor nuclear kappa B. Ademas, en lo que concierne a sus propias caracteristicas terapeuticas, esta nueva composicion resuelve las inconveniencias de los productos, medicinas y procedimientos actuales, que tienen un nivel de toxicidad importante y/o causan efectos colaterales no deseados. La presente invencion tiene aplicaciones en inmunofarmacologia, farmacologia clinica y pre-clinica humana y veterinaria, tecnologia farmaceutica, reumatologia, e inmunologica clinica, inmunoterapia, transplante de organos y tejidos, y las enfermedades de inmunodeficiencia como el SIDA.

Description

COMPOSICIÓN QUE COMPRENDE UNA MEZCLA DE LÁBDANOS DITERPENICOS, DE UN EXTRACTO DE PLANTA ANDROGRAPHIS PANICULATA, SELECCIONADO DE ANDROGRAFOLIDO, 14- DEOXIANDROGRAFOLIDO Y NEOANDROGRAFOLIDO; SUS USOS MEMORIA DESCRIPTIVA El principal objetivo de la inmunofarmacología y la biofarmacia es la búsqueda continua de nuevas soluciones terapéuticas para tratar los síntomas y modificar el curso de las enfermedades inmunológicas . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las enfermedades autoinmunes se caracterizan por una reacción espontánea del sistema inmunitario contra su propio organismo. Estas reacciones son causadas por el reconocimiento de los autoantígenos por parte de los linfocitos T, que son responsables de provocar respuestas inmunitarias humorales (producción de autoanticuerpos) y celulares (aumento de la actividad citotóxica de los linfocitos y macrófagos). Las enfermedades antoin unes incluyen: enfermedades reu atoides, psoriasis, der-matomiocitis sistémica, esclerosis múltiple, lupus eritematoso o respuestas inmunitarias exacerbadas por antígenos, es decir, asma, alergias a los fármacos y alimentos, etc. Todas estas enfermedades son limitantes, crónicas, y en algunos casos, letales, y en la actualidad, no existe una terapia eficaz para tratarlas. Por lo tanto, cualquier fármaco, medicina o medio que sea capaz de causar una remisión o disminución en el curso de la enfermedad, representa una solución importante para la salud de los pacientes .

La búsqueda de un tratamiento para las enfermedades autoinmunes ha dado como resultado un esfuerzo importante por encontrar fármacos y métodos adecuados. Actualmente, el tratamiento de estas enfermedades se basa principalmente en el uso de fármacos inmunosupresores, como por ejemplo, glucocorticoides, inhibidores de la calcineurina, y antimetabolitos antiproliferativos. Sin embargo, dado que estas terapias farmacológicas actúan en muchos blancos diferentes, pueden reducir la función inmune en su totalidad, o debido a un uso a largo plazo, pueden tener la desventaja de producir diferentes efectos citotóxicos y, por lo tanto, pueden suprimir el sistema inmunitario en una forma no específica, exponiendo al paciente al riesgo de infecciones y cáncer. La calcineurina y los glucocorticoides presentan una ventaja adicional, debido a su nefrotoxicidad y sus efectos diabetogénicos, que limitan su utilidad en diversas condiciones clínicas (por ejemplo, insuficiencia renal, diabetes). Los últimos avances terapéuticos en la inmunosupresión son los anticuerpos monoclonales anti-CD3; los anticuerpos monoclonales anti-receptor IL-2 y los anticuerpos monoclonales anti-TNFa. A pesar del hecho de que estos tratamientos presentan efectos inmunosupresores marcados, se asocian reacciones anafilácticas, infecciones oportunistas (tuberculosis) y neoplasmas, fiebre, urticaria, hipotensión, disnea a estas medicinas, lo cual representa un serio problema en la aplicación de dichas composiciones y productos farmacéuticos. En aplicaciones inyectables, uno de tres pacientes puede presentar picazón, hinchazón y dolor.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN La composición reivindicada en la presente invención, puede disminuir la respuesta inmunitaria, que caracteriza las enfermedades inmunes, las alergias, aliviando los síntomas y el curso de la enfermedad, con mantenimiento de la "tolerancia inmunológica". En otras palabras, la composición divulgada en la presente invención, es caracterizada esencialmente de acuerdo a la tolerancia inmunológica originada por ella, que corresponde al estado activo de la ausencia de una reacción específica contra un antígeno, sin causar los efectos colaterales de los fármacos inmunosupresores actuales . Específicamente, esta composición inhibe la síntesis y la expresión del interferón gamma, IL-2, estimulando el receptor PPAR gamma y reduciendo el factor NF-kappaB. Por consiguiente, esta nueva composición de lábdanos diterpénicos se caracteriza porque reduce en forma selectiva la sobreexpresión de citoquinas, que está involucrada en la patogénesis de las enfermedades autoinmunes.

Avances recientes en la comprensión científica de los mediadores involucrados en las enfermedades inflamatorias agudas y crónicas y el cáncer han llevado a nuevas estrategias en la búsqueda de una terapéutica eficaz. Los enfoques tradicionales incluyen la intervención directa en los blancos como por ejemplo, el uso de anticuerpos específicos, antagonistas de receptores, o inhibidores de enzimas que tienen todos ellos un nivel importante de efectos colaterales (por ejemplo, alergias, úlceras gastrointestinales, hemorragias, etc.). Avances recientes en la elucidación de los mecanismos reguladores involucrados en la transcripción y traducción de una variedad de mediadores han hecho que aumente el interés por enfoques terapéuticos dirigidos al nivel de transcripción de genes (por ejemplo, C0X2, iNOS, ILlbeta, TNF-alfa, ICAM, etc.).

Uno de los mediadores más importantes es el NF-kappaB que pertenece a una familia de complejos de factor de transcripción dimérica estrechamente relacionados, compuestos por varias combinaciones de la familia Rel/NF-kappaB de polipéptidos . La familia está formada por cinco productos de genes individuales en los mamíferos, RelA (p65), NF-kappaBl (p50/pl05) , NF-kappaB2 (p49/pl00) , c-Rel, y RelB, todos los cuales pueden formar heterodímeros u homodímeros. Estas proteínas comparten un "dominio de homología Reí" de 300 aminoácidos sumamente homólogo que contiene los dominios de unión al ADN y de dimerización. En el extremo C-terminal del dominio de homología Reí está una secuencia de translocación nuclear importante en el transporte del NF-kappaB desde el citoplasma al núcleo. Además, el p65 y el cRel poseen dominios de trans-activación potentes en sus extremos C terminales. La actividad del NF-kappaB es regulada por su interacción con un miembro de la familia de proteínas inhibidoras IkappaB. Esta interacción bloquea en forma efectiva la secuencia de localización nuclear en las proteínas NF-kappaB evitando, de esta manera, la migración del dímero al núcleo. Una amplia variedad de estímulos activan el NF-kappaB a través de lo que es probable que sean múltiples vías de transducción de señal. Están incluidos productos bacterianos (LPS), algunos virus (VIH-1, HTLV-1) , citoquinas inflamatorias (TNF-alfa, IL-1) y estrés ambiental. No obstante, al parecer, es común para todos los estímulos la fosforilación y la degradación subsiguiente de la IkappaB. La IkappaB es fosforilada en dos serinas N-ter inales por las recientemente identificadas IkappaB quinasas (J-KK-alfa e JKK-beta) . Estudios de mutagénesis dirigida indican que estas fosforilaciones son esenciales para la subsiguiente activación del NF-kappaB en el sentido de que una vez fosforilada, la proteína es disminuida por degradación a través de la vía de proteasoma ubiquitina. Libres de IkappaB, los complejos de NF-kappaB activos están en condiciones de translocarse al núcleo donde ellos se unen de manera selectiva a secuencias potenciadoras preferidas, específicas en cuanto a genes. En los genes regulados por el NF-kappaB se incluye una serie de citoquinas, moléculas de adhesión celular y proteínas de fase aguda. Se sabe bien que el NF-kappaB desempeña un papel clave en la expresión regulada de un gran número de mediadores pro-inflamatorios que incluyen citoquinas tales como IL-ß e IL-8, moléculas de adhesión celular, tales como ICAM y VCAM, y la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) . Se sabe que dichos mediadores desempeñan un papel en el reclutamiento de leucocitos en lugares de inflamación y en el caso de la iNOS, pueden causar la destrucción de órganos en algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes. La importancia del NF-kappaB en trastornos inflamatorios es reforzada aún más por estudios sobre la inflamación de las vías aéreas incluyendo asma, en los cuales se ha demostrado que el NF-kappaB es activado. Esta activación puede estar subyacente al aumento de la producción de citoquinas y la infiltración de leucocitos que son características de estos trastornos. Además, se sabe que los esteroides inhalados reducen la hipersensibilidad de las vías aéreas y suprimen la respuesta inflamatoria en las vías aéreas asmáticas. A la luz de los recientes hallazgos con respecto a la inhibición del NFkappaB por parte de los glucocorticoides, se puede especular que estos efectos son mediados a través de una inhibición del NFkappaB. Mayor evidencia del papel que desempeña el NF-kappaB en los trastornos inflamatorios proviene de los estudios sobre el sinovio reumatoideo. Si bien el NF-kappaB está normalmente presente como un complejo citoplásmico inactivo, e-studios inmunohistoquímicos recientes han indicado que el NF-kappaB está presente en los núcleos y, por consiguiente, está activo, en las células que conforman el sinovio reumatoideo. Además, se ha mostrado que el NF-kappaB es activado en las células sinoviales humanas en respuesta a la estimulación con TNF-alfa. Dicha distribución puede ser el mecanismo subyacente para el aumento de la producción de citoquinas y eicosanoides que es característica de este tejido. Véase A. K. Roshak y colaboradores, J. Biol. Chem., 271, 31496 - 31505 (1996) . Es probable que las proteínas NF-kappaB/Rel e IkappaB desempeñen también un papel en la transformación neoplástica. Se asocian los miembros de la familia a la transformación celular in vitro e in vivo a raíz de una sobreexpresión, amplificación de genes, reorganizaciones o translocación de genes. Además, se observa reorganización y/o amplificación de los genes que codifican estas proteínas en un 20% a un 25% de ciertos tumores linfoides humanos. Asimismo, se ha informado sobre un papel para el NF-kappaB en la regulación de la apoptosis fortaleciendo el papel de este factor de transcripción en el control de la proliferación celular.

Kopp y Ghosh (1994) informaron acerca de los primeros moduladores de NF-kB derivados de planta hace casi una década. Ellos identificaron el salicilato de sodio y su derivado semi-sintético, las aspirina. Después de este descubrimiento, una serie de nuevos productos naturales, de diferentes clases químicas, han demostrado actividad inhibitoria del NF-kB. Varios inhibidores del NF-kappaB se describen en la literatura: C. Wahl y colaboradores, J. Clin. Invest. 101(5), 1163 - 1174 (1998), R. W. Sullivan y colaboradores, J. Medicamento. Chem. 41, 413 - 419 (1998), J. W. Pierce y colaboradores, J. Biol. Chem. 272, 21096 - 21103 (1997) . Se sabe que el producto natural marino hymenialdisine inhibe el NF-kappaB (A. Roshak y colaboradores, JPET, 283, 955 - 961 (1997), J. J. Bretón y M. C. Chabot-Fletcher, JPET, 282, 459 - 466 (1997)). Las salicilanilidas son compuestos conocidos y que han sido descritos por M. T. Clark, R. A. Coburn, R. T. Evans, R. J. Genco, J. Med. Chem., 1986, 29, 25 - 29. Recientemente, un importante mecanismo de la inhibición del NF-kappaB indica la posible activación de los receptores para los peroxisomas.

Los receptores para los peroxisomas conocidos como "Receptores Activados Proliferadores de Peroxisomas" (PPAR) , [en atención al uso común del término, expresado en su abreviatura conocida en el área científica, dicha abreviatura debería usarse para identificar este receptor] han sido implicados en las enfermedades autoinmunes y otras enfermedades, es decir, diabetes mellitus, enfermedad cardiovascular y gastrointestinal y enfermedad de Alzheimer. Los agentes farmacéuticos actuales con agonista del receptor PPAR gamma están aún en la etapa experimental y tienen efectos colaterales importantes para la salud humana, debido a su mecanismo de acción. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar nuevos agentes con efectos menos tóxicos que puedan modular estos receptores en forma más precisa a fin de prevenir, tratar y/o aliviar las enfermedades o condiciones anteriormente mencionadas. Esta nueva composición modula estos receptores en forma más precisa y, por lo tanto, permite prevenir, tratar y/o aliviar las enfermedades autoinmunes de manera más eficiente, sin causar efectos colaterales no deseados para los pacientes.

Los Receptores Activados Proliferadores de Peroxisomas (PPAR) son miembros de la superfamilia de receptores de hormona nuclear, que son factores de transcripción activados por ligando que regulan la expresión de genes. Se han descubierto diversos subtipos de PPAR. Entre éstos se incluyen PPAR-alfa, PPAR-beta o NUCÍ, PPAR-Y y PPAR-delta. El PPAR-? fue calificado originalmente como un regulador clave de la diferenciación adipocitaria y del metabolismo lípido. La expresión del PPAR-? es dirigida por diferentes promotores, conduciendo a tres isoformas de PPAR-?. Ahora es evidente que se encontró también el PPAR-? en otros tipos de células incluyendo fibroblastos, miocitos, células mamarias, la pulpa blanca y roja del bazo de ratas, precursores de médula ósea humana y macrófagos / monocitos. Además, se ha mostrado el PPAR-? en células espumosas de macrófago en placas ateroscleróticas. Se identificó un papel importante para el PPAR-? en el metabolismo de la glucosa cuando se demostró que una clase de fármacos antidiabéticos, las tiazolidinadionas, eran ligandos con una alta afinidad por PPAR-?. Las tiazolidinadionas fueron desarrolladas originalmente para el tratamiento de la diabetes tipo 2 sobre la base de su capacidad para reducir los niveles de glucosa (y los niveles de ácidos grasos en circulación) en modelos de resistencia a la insulina en roedores. El hallazgo de que las tiazolidinadionas median sus efectos terapéuticos a través de interacciones directas con el PPAR-? estableció el PPAR-? como un regulador clave de la homeostasis de la glucosa y los lípidos. A pesar de haber sido descrito inicialmente como un regulador del metabolismo de los lípidos y la glucosa, se ha demostrado recientemente que el PPAR-? desempeña un papel en la proliferación y malignidad celulares. Se ha mostrado que los ligandos para el PPAR-? median efectos positivos y negativos en la proliferación y malignidad celulares. Además de la clase de fármacos antidiabéticos de las tiazolidinadionas, una variedad de fármacos antiinflamatorios no esteroideos puede funcionar también como ligandos del PPAR-?, si bien estos últimos tiene una afinidad relativamente baja. El producto de deshidratación de la prostaglandina D2 (PGD2) PGJ2 fue el primer ligando endógeno descubierto para el PPAR-?. El producto de deshidratación de la PGD2 adicional, 15-deoxi~?a2'14-PGJ2 (15d-PGJ2) , es también una sustancia que se presenta en forma natural que se une directamente al PPAR-? y es un potente ligando para la activación del PPAR-?. Uno de los primeros hallazgos que asociaron los PPAR y los macrófagos fue el que el PPAR-? estaba sumamente expresado en células espumosas derivadas de macrófago de lesiones aterioscleróticas humanas y murinas.

Posteriormente, se ha demostrado que el PPAR-? está expresado en monocitos / macrófagos humanos y murinos.

Funcionalmente, se ha mostrado que el PPAR-? desempeña un papel en la diferenciación y la activación de los monocitos y en la regulación de las actividades inflamatorias . Muchos estudios han demostrado que los ligandos del PPAR-? inhiben las respuestas inflamatorias por macrófago. Los efectos antiinflamatorios de la activación del PPAR-? han sido demostrados con monocitos /macrófagos y líneas de monocitos / macrófagos humanos y murinos. La activación de los macrófagos normalmente conduce a la secreción de varios mediadores proinflamatorios diferentes. Se ha descubierto que el tratamiento con 15d- PGJ2 o tiazolidinadionas inhibe la secreción de muchos de estos mediadores (incluyendo gelatinasa B, IL-6, TNF-a e IL-lß) y también reduce la expresión inducida de NOS inducible (iNOS) y la transcripción del receptor secuestrador del gen A. Se ha estudiado la importancia del PPAR-? en varias enfermedades autoinmunes humanas y modelos animales de enfermedades autoinmunes. Kawahito y colaboradores demostraron que el tejido sinovial expresaba PPAR-? en pacientes con artritis reumatoide (RA) . Se descubrió que el PPAR-? estaba sumamente expresado en macrófagos, y se observó una modesta expresión en las células endoteliales y fibroblastos de revestimiento sinovial. La activación de PPAR-? por parte de 15d-PGJ2 y la troglitazona indujo apoptosis in vitro de los sinoviocitos en la artritis reumatoide (AR) . Se ha señalado que el PPAR-? es funcionalmente importante en células T recientemente aisladas o llega a ser funcionalmente importante a principios de la activación. En estos estudios, se demostró también que los dos ligandos para el PPAR-? mediaron la inhibición de la secreción de IL-2 por parte de clones de células T y no inhibieron la proliferación inducida por IL-2 de dichos clones.

Varios estudios han investigado el papel de los ligandos del PPAR-? en la modificación de modelos animales de enfermedades autoinmunes. Su y colaboradores mostraron que en un modelo de enfermedad inflamatoria intestinal realizado en ratón, las tiazolidínadionas redujeron en forma notoria la inflamación colónica. Se ha propuesto que este efecto podría ser el resultado de un efecto directo en las células epiteliales colónicas, que expresan altos niveles de PPAR-? y pueden producir citoquinas inflamatorias. Kawahito y colaboradores demostraron que la administración intraperitoneal de los ligando del PPAR-?, 15d-PGJ2 y troglitazona, mejoró la artritis inducida por adyuvantes. Niño y colaboradores examinaron el efecto de una tiazolidinadiona en encefalomielitis alérgica experimental y descubrieron que este tratamiento atenuaba la inflamación y reducía los síntomas clínicos en este modelo de esclerosis múltiple realizado en ratón. Finalmente, Reilly y colaboradores demostraron que las células mesangiales glomerulares renales son moduladores importantes de la respuesta inflamatoria en la nefritis por lupus, secretando, cuando estaban activadas, mediadores inflamatorios incluyendo NO y productos de ciclooxigenasa, perpetuando, de esta manera, la respuesta inflamatoria local. Dado los estudios anteriores, es probable que la importancia de los PPAR y la utilidad del tratamiento con agonistas de PPAR en enfermedades con una patogénesis inflamatoria^ o autoinmune continúe siendo un foco de investigación. Recientemente, se ha clarificado al menos parcialmente el asunto de la especificidad de 15d-PGJ2 para el PPAR-?. El NF-kB es un activador fundamental de genes involucrados en la inflamación y la inmunidad. En esta activación, el complejo IkB quinasa (IKK) fosforila los inhibidores de NF-kB (proteínas IkB) causando su conjugación con ubiquitina y degradación posterior mediante el proteosoma. Esto permite luego que los dímeros NF-kB liberados se transloquen al núcleo e induzcan genes blanco. Rossi y colaboradores demostraron que las prostaglandinas de la ciclopentenona, incluyendo 15d-PGJ2, inhiben y modifican en forma directa la subunidad IKK2 de la IKK. Esto, a su vez, previene la fosforilación de las proteínas inhibidoras IkB que luego se dirigen contra estas proteínas para la conjugación con y la degradación por ubiquitina. Luego esto previene la activación del NF-kB. En forma similar, Castrillo y colaboradores mostraron que en las células de macrófago RAW 264.7 tratadas con LPS e IFN-a, la incubación con 15d-PGJ2 dio como resultado una inhibición importante de la actividad de IKK2 y una inhibición de la degradación de las proteínas inhibidoras IkB. Esto, a su vez, causó una inhibición parcial de la actividad de NF-kB y un daño en la expresión de los genes que requieren activación de NF-kB, como por ejemplo, NOS tipo 2 y ciclooxigenasa 2. Por lo tanto, se puede concluir que el PPAR-? y el NF-kB son mediadores importantes involucrados en las enfermedades autoinmunes, lo cual representa un estímulo para que la industria farmacéutica busque nuevos fármacos y medicinas selectivas que afecten estos mediadores. Por otro lado, la enfermedad de Alzheimer (EA) se caracteriza por la deposición extracelular de fibrilos de ß-amiloide dentro del cerebro y la activación de las células microgliales asociadas a la placa amiloide. La microglía activada secreta posteriormente una gama diversa de productos inflamatorios. Kitamura y colaboradores evaluaron la presencia de PPAR-? y COX-1, COX2, en cerebros normales y con EA usando anticuerpos específicos y descubrieron un aumento de la expresión de estas mitades en los cerebros con EA. Se ha mostrado que los fármacos inflamatorios no esteroideos (AINE) son eficaces en cuanto a reducir la incidencia y el riesgo de EA y en lo que se refiere a demorar la progresión de la enfermedad. Co bs y colaboradores demostraron que los AINE, las tiazolidinadionas y los PGJ2, todos los cuales son agonistas del PPAR-?, inhibían la secreción, estimulada por la ß-amiloide, de productos inflamatorios por parte de la microglía y los monocitos. Se demostró que los agonistas del PPAR-? inhibían la expresión, estimulada por la ß-amiloide, de los genes para IL-6 y TNF-a y la expresión de COX-2. Heneka y colaboradores demostraron que la microinyección de LPS e INF-a en el cerebelo de ratas inducía la expresión de iNOS en las células granulares cerebelares y la muerte posterior de las células. La co-inyección de agonistas de PPAR-? (incluyendo troglitazona y 15d-PGJ2) redujo la expresión de iNOS y la muerte celular, en tanto que la co-inyección de un inhibidor de COX selectivo no tuvo efecto. En términos generales, el trabajo en la EA parece indicar que los agonistas de PPAR-? pueden modular las respuestas inflamatorias en el cerebro y que los AINE pueden ser útiles en la EA debido a su efecto en el PPAR-?. A partir de lo expuesto previamente en la presente, se puede concluir lo siguiente: Hasta ahora, no hay antecedentes de compuestos de agonista de PPAR-? aislados de plantas medicinales. En la actualidad, no existen fármacos, composiciones o medicinas con estas propiedades para el tratamiento de las enfermedades autoinmunes. Esta nueva composición puede reducir la producción de citoquinas pro-inflamatorias, que son aumentadas en las enfermedades autoinmunes y neurodegenerativas. En forma adicional, la composición de la presente invención tiene una baja toxicidad y no presenta ningún efecto colateral dañino. Dado el actual "estado de la técnica" en la Ciencia, el uso de dicha composición no puede ser deducido por un experto en el área, considerando que dicha composición está dirigida para las enfermedades anteriormente mencionadas, con propiedades que mantienen la tolerancia inmune sin causar efectos adversos, como ocurre con otras sustancias que actualmente se emplean para estas enfermedades .

La Andrographis paniculata (Nees) es una planta medicinal perteneciente a la familia Acanthaceae originaria de Asia, India, Malasia, China, Corea y otros lugares. En estos países, se le ha utilizado ampliamente debido a los efectos beneficiosos que posee tanto la planta fresca como seca o sus componentes en diferentes enfermedades, como por ejemplo, resfrío común, afecciones hepáticas, diabetes, etc.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La Figura 1 es un gráfico representativo que muestra el desplazamiento del calcio inducido por el PAF (factor activador de plaquetas) medido a través de la proporción de 340/380 nm, usando células HL-60 marcadas con indicador FURA2-AM. Se diferenciaron las células con ácido retinoico solo, o en presencia de la composición de la presente invención (3,5 µg/mL), según se describe en los ejemplos 1 - 2, divulgados en más adelante. La Figura 2 muestra un diagrama de barras que representa la actividad relativa de la luciferasa en células HL-60 transfectadas con un vector que contiene el promotor de PPAR-? y el efecto de la composición de la presente invención. La Figura 3 es un gráfico de barras que muestra la inhibición de la concentración de IL-2 e INF-gamma en células T activadas con concanavalina CONA por parte de la composición de la presente invención. La Figura 4 muestra la inhibición de la degradación de IkBa por parte de la composición de la presente invención y el diagrama de barras muestra el porcentaje de inhibición de la composición de la presente invención en la actividad relativa de la luciferasa en células HL-60 transfectadas con un vector que contiene el promotor de NFkB. La Figura 5 es una microfotografía que muestra la inhibición in vitro de la formación de ß-amiloide por parte de la composición de la presente invención, usando la coloración con tioflavina.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCIÓN En la presente solicitud, se describe una nueva composición que induce los efectos agonísticos de PPAR-gamma e inhibe la activación del factor de transcripción NF-kappaB usando una mezcla de andrografolidos extraídos de Andrographis paniculata aplicando el procedimiento divulgado en la presente.

DESCRIPCION DE LA COMPOSICIÓN DE ANDROGRAFOLIDOS La composición reivindicada en la presente solicitud, comprende una mezcla de lábdanos diterpénicos, obtenida de un extracto de extracto seco de Andrographis paniculata, que tiene las siguientes fórmulas generales: C20H3o05 andrografolido C20H3o04 14-deoxiandrografolído C26H?08 neoandrografolido La estructura química y caracterización de estos compuestos de andrografolido son las siguientes: - Andrografolido i . Fórmula general : C2oH3o05 ii. Peso molecular: 350,46 iii. Nomenclatura molecular: 3- [2- [decahidro-6-hidroxi-5- (hidroxi-metil) -5,ha-dimetil-2-metilen-l-naftalenil] etilideno] di-hidro-4-hidroxi-2 (3h) -furanona. iv. Estructura molecular: - 14-deoxiandrografolido i. Fórmula general: C2oH3o0 ii. Peso molecular: 336,46 iii. Estructura molecular: - Neoandrografolido i. Fórmula general: C20H41O8 ii. Peso molecular: 326,46 iii. Estructura molecular: Un extracto representativo de la presente composición está constituido por una mezcla de los siguientes andrografolidos : Andrografolido, 14-deoxiandrografolido, y neoandrografolido, donde dichos componentes individuales están contenidos de la siguiente manera: entre aproximadamente un 20% y un 40% peso/peso de andrografolido, alrededor de un 3% a un 6% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y entre aproximadamente un 0,2% y un 0,8% peso/peso de neoandrografolido en el extracto seco. De preferencia, estos compuestos están contenidos de la siguiente manera: entre aproximadamente un 25% y un 35% peso/peso de andrografolido, alrededor de un 4,5% a un 5,5% peso/peso de 14-deoxiandrografolido, y entre 5 aproximadamente un 0,4% y un 0,8% peso/peso de neoandrografolido en el extracto final. En una modalidad más preferida, el nuevo extracto comprende: andrografolido 24,6% 0 14-deoxiandrografolido 4,8% neoandrografolido 0,6%. Dicha formulación es aceptable para elaborar medicinas que pueden ser administradas con un portador farmacéuticamente aceptable, es decir, una forma de 5 tableta, administrada en una dosis que comprende aproximadamente 1 a 6,5 mg/kg BW/día de la mezcla de andrografolidos . a) 1 - 5 mg de andrografolido/kg por día b) 0,2 - 1 mg de 14-deoxiandrografolido/kg por día Gb) 0,02 - 0,12 mg de neoandrografolido/kg por día Sin afectar otras modalidades de formulación y administración, las que se divulgan en la presente contribuyen en forma eficiente y eficaz para el tratamiento de las enfermedades autoinmunes ya mencionadas y también para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, de acuerdo a los ejemplos divulgados en la presente. Por lo tanto, tanto la composición como su formulación farmacéutica particularmente cuando se administra en la forma de tableta y en las dosis anteriormente indicadas, proporcionan una medicina para tratar una variedad de enfermedades autoinmunes tales como: trastornos inflamatorios, particularmente diabetes mellitus, enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedades autoinmunes (lupus eritematoso, esclerosis múltiple y artritis reumatoide) . Debido a su mecanismo de acción, los compuestos y la composición farmacéutica divulgados en la presente pueden ser también útiles para el tratamiento del SIDA y el rechazo de tejidos y órganos. La composición farmacéutica que se puede elaborar con la composición de la presente invención, especialmente de acuerdo a la formulación revelada, puede corresponder a formas farmacéuticas entérales, parenterales, dérmicas, oculares, nasales, óticas, rectales, vaginales, uretrales, bucales, faríngeo-tráqueo-bronquiales .

MÉTODO PARA OBTENER Y ANALIZAR LA MATERIA PRIMA DE ANDROGRAPHIS PANICULATA Ingrediente activo: Andrographis paniculata Nees (Burm . f. ) Familia: Acantaceae Parte usada: Hierba Se secan al sol las hojas verdes, los tallos y las partes más altas, orgánicamente cultivadas bajo la supervisión del inventor incluyendo las semillas. Se retiran en forma manual todas las materias extrañas y se corta la materia prima en pedazos de 1 - 1,5 cm de tamaño, los cuales son almacenados en un área ventilada. Se realizan análisis de rutina a fin de evaluar la identidad: se llevan a cabo análisis macroscópicos y microscópicos, parámetros organolépticos y análisis mediante TLC (cromatografía de capa fina) de acuerdo a la Farmacopea Europea.

MÉTODO PARA OBTENER EL EXTRACTO SECO DE ANDROGRAPHIS PANICULATA Se realiza la extracción de A. paniculata mediante la percolación continua de la planta seca molida (parte aérea) usando un disolvente polar en la parte 1. Se muele el material de fármaco debidamente analizado hasta un tamaño de partículas definido en un molino de martillo con cuchilla (0,8 cm2) . Se carga el material molido en percoladores de acero inoxidable y se agrega la solución de extracción a una temperatura de 50° C. El tiempo de percolación es de aproximadamente 6 días (6 x 24 horas) en dos ciclos de extracción. Se recoge el percolado en tanques de acero inoxidable hasta que se completa la percolación. Se transfiere el percolado directamente a una unidad de evaporación a fin de eliminar el disolvente y la mayor parte del agua. Se realiza la evaporación en un evaporador de película fina LUWA a 140 - 145° F (60 - 70° C) y un vacío de 0,65 - 0,85 bar. Se lleva a cabo el proceso de evaporación en 3 a 4 ciclos, donde se mantiene mezclándose el extracto 4 veces durante 30 minutos al día. Cuando el extracto espeso tiene el contenido correcto de agua, se realizan los siguientes análisis: contenido de cenizas, cenizas por HCL, pérdida por secado, valor pH, identidad por TLC y HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento) , análisis para andrografolido, 14-deoxiandrografolido y neoandrografolido. Luego se transfiere el extracto espeso a la unidad de secado. Antes de secar, se envasa el extracto seco final en bolsas plásticas en tambores de fibras para su posterior análisis.

MÉTODO PARA PREPARAR EL EXTRACTO DE 30% DE ANDROGRAPHIS PAÑI CULATA: Se recogen las hojas/tallos cortados y tamizados de Andrographis paniculata de los campos de cultivo bajo el control directo de los inventores. Se analizan las partes aéreas en cuanto a identidad según lo previamente descrito y luego se separan para su extracción. Se extraen las partes aéreas en una unidad de extracción de acero inoxidable bajo vacío con un disolvente de baja polaridad (A) , como por ejemplo, n-hexano o cloroformo. Después de extracciones sucesivas, se retira el disolvente y se trata la costra residual del extracto con un segundo disolvente que tiene una polaridad más alta (B) como por ejemplo, Pet éter 40:60 o acetato de etilo; después de una extracción simple, se retira el disolvente y se trata la costra residual del extracto con un disolvente (C) que tiene una polaridad mayor como por ejemplo, etanol o agua. Se recupera el tercer disolvente y se evapora dejando detrás una masa con un 30% - 40% de humedad; se trata la costra residual del extracto con un disolvente que tiene una polaridad baja según lo descrito previamente, luego se filtra la masa y se seca bajo vacío hasta que haya menos de un 5% de humedad. Se muelen los granulos hasta obtener un polvo fino que tenga no menos de un 30% de lábdanos diterpénicos calculados como andrografolidos .

Detalles de la extracción: Etapa 1: Se cargan las hoj as/tallos finamente cortados de Andrographis paniculata en un reactor SS con entre 3 - 5 veces peso/peso de disolvente A. Etapa 2 : Se extrae la hierba durante entre 4 y 6 horas repetidamente y se retira el disolvente. Etapa 3: Luego se trata la costra residual del extracto con un disolvente B que tiene una polaridad más alta que el disolvente A y se extrae una vez durante 3 -5 horas . Etapa 4: Se retira el disolvente B y luego se extrae la costra residual del extracto con el disolvente C que tiene una polaridad más alta que los disolventes A ó B. Etapa 5: Se hace circular el disolvente C a través de la costra residual del extracto durante 3 a 5 horas y se retira bajo vacío a un evaporador SS y se extrae nuevamente la costra residual del extracto con disolvente C. Se repite este proceso 3 a 4 veces. Etapa 6: Se recupera el disolvente C de todos los lavados y se combina la masa resultante. Etapa 7 : Luego se trata la masa obtenida de las Etapas 4 a 7 con los Disolventes A ó B y se seca el residuo bajo vacío a una temperatura que no excede los 60° C. Etapa 8: Se pulveriza la masa seca que se obtiene de la Etapa 7 en un molino GMP que tiene mallas de acero inoxidable entre 100 - 200 ASTM. Etapa 9: Se tamiza el polvo obtenido de la Etapa 8 a través de un auto-tamizador y se llena con dicho polvo directamente bolsas de polipropileno (PP) esterilizadas listas para ser selladas. Se analiza el polvo obtenido según lo descrito anteriormente de acuerdo a los protocolos descritos en este documento, el cual contiene un 25% a un 35% peso/peso de andrografolido, entre aproximadamente un 4,5% y un 5,5% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y de alrededor de un 0,4% a un 0,8% peso/peso de neoandrografolido en el extracto final.

IDENTIDAD DE ANDROGRAPHIS PANICULATA - TLC Solución de prueba: A 1 g de extracto de hierba, se agregan 20 ml de metanol, se agitan por alrededor de 1 hora y se decanta el metanol a través de un filtro. Se agita el residuo con 20 ml de metanol, se filtra y se mezcla con el primer extracto (lo cual corresponde a 40 ml de la solución de prueba) . Soluciones de referencia: 1. Andrografolido (A) , 14-deoxiandrografolido (DA) y neoandrografolido (NA), disueltos en metanol. 2. Extracto de referencia tratado de la misma forma que el extracto de prueba. Se aplican 20 a 30 ul de solución de prueba a una placa de TLC (gel de sílice GF254 como sustancia de cobertura) y se desarrolla sobre un sendero de 15 cm usando una mezcla de 77 volúmenes de acetato de etilo, 15 volúmenes de metanol y 8 volúmenes de agua (77:15:8). Posteriormente, se deja que la placa se seque al aire y se examina bajo UV (254 nM) . Las pocas manchas oscuras del cromatograma corresponden a andrografolido a una Rf: 0,65 - 0,7; 14-deoxiandrografolido Rf: 0,75 - 0,8 y neoandrografolido, Rf: 0,60 - 0,65.

MÉTODO HPLC PARA LA CUANTIFICACION DE LÁBDANOS DITERPENICOS Se extraen los tres compuestos con acetona (4) y luego se analizan mediante HPLC usando una columna licrospher RP-C18 de fase inversa (4 x 125 mm) . La fase móvil está compuesta por acetonitrilo al 26% y ácido fosfórico al 0,5%, a una velocidad de 1,1 ml/min, y se detecta a 228 nm de acuerdo a Burgos et al.; 1999, Acta Hort. (ISHS) 501: 83 - 86. Se estandariza el extracto seco de Andrographis paniculata a un contenido mínimo de 30% de andrografolidos totales, lo cual comprende aproximadamente un 20% a un 40% peso/peso de andrografolido, un 3% a un 6% peso/peso de 14-deoxiandrografolido, y un 0,2% a un 0,8% peso/peso de neoandrografolido . La composición de acuerdo a la presente invención no ha sido divulgada previamente en el "estado de la técnica" actual en la ciencia y no hay antecedentes acerca del uso de la misma para resolver los problemas metodológicos descritos concernientes a las enfermedades autoinmunes y la EA.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser administradas por vía oral o parenteral, y la administración parenteral comprende inyección intravenosa, inyección subcutánea, inyección intrasmuscular e inyección intraarticular. La dosis correcta de las composiciones farmacéuticas de la presente invención variarán dependiendo de la formulación particular, del modo de aplicación, la edad, el peso corporal y el sexo del paciente, la dieta, el estado de enfermedad del paciente, los fármacos complementarios y las reacciones adversas. Se entiende que el médico especializado común y corriente estará en condiciones de determinar y prescribir una dosis correcta de estas composiciones farmacéuticas. De preferencia, la dosis diaria de estas composiciones farmacéuticas fluctúa entre 1 y 6,5 mg de la mezcla de andrografolidos por kg de peso corporal. De acuerdo a las técnicas convencionales que son conocidas para los especialistas en la materia, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser formuladas con un portador y/o vehículo farmacéuticamente aceptable según se describió anteriormente, como por ejemplo, una forma de dosis unitaria. Ejemplos no limitantes de las formulaciones incluyen, pero no están limitados a, una solución estéril, una solución, una suspensión o una emulsión, un extracto, un elíxir, un polvo, un granulo, una tableta, una cápsula, un linimento, una loción y un ungüento. LA PRESENTE INVENCIÓN ABARCA TAMBIÉN LAS COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS QUE CONTIENEN LOS COMPUESTOS DE L BDANO ANDROGRAFOLIDO, 14-DEOXIANDROGRAFOLIDO Y NEOANDROGRAFOLIDO EN COMBINACIÓN CON PORTADORES FARMACÉUTICAMENTE ACEPTABLES QUE SE UTILIZAN NORMALMENTE EN LA PREPARACIÓN DE DICHAS COMPOSICIONES.

En las composiciones farmacéuticas de la presente invención, el portador farmacéuticamente aceptable puede ser cualquier portador convencional descrito para las formulaciones farmacéuticas, como por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidón, goma acacia, fosfato de calcio, alginato, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , metilhidroxi benzoato, propilhidroxi benzoato, talco, ácido esteárico, magnesio y aceite mineral, pero que no está limitado a ello. En forma adicional, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden contener cualquier agente humectante, edulcorante, emulsionante, de suspensión, preservante, saborizante, perfume, agente lubricante, o mezclas de estas sustancias . Habitualmente, las composiciones farmacéuticas contienen de un 20% a un 40 %, preferentemente de un 25% a un 35%, y con mayor preferencia, un 30% peso/peso de los lábdanos andrografolido, 14-deoxiandrografolido y neoandrografolido de la mezcla y los portadores farmacéuticamente aceptables . La composición farmacéutica de la presente invención puede ser administrada a mamíferos que necesitan de ella, por vía oral administrada como una dosis única o como una dosis dividida. Por consiguiente, en el caso de la administración oral, se pueden combinar los compuestos con un portador sólido adecuado para formar cápsulas, tabletas, polvos. En forma adicional, las composiciones farmacéuticas pueden contener otros componentes tales como saborizantes, endulzantes, excipientes y similares. De manera adicional, la presente invención proporciona un método para tratar pacientes con la composición que contiene la mezcla de andrografolidos que comprende: administración intravenosa de la solución y administración oral de las tabletas que comprenden la composición de la presente invención a pacientes que lo necesitan. La dosis preferida de la formulación de solución para inyección es de alrededor de 60 a 210 mg/día, con mayor preferencia, 60 a 80 mg/día, de la composición por día en una, dos o tres inyecciones. La presente formulación en la forma de solución inyectable comprende 8 a 16 mg aproximadamente de la composición por ml. Cuando se administra a pacientes, la composición es preferentemente diluida a un volumen de alrededor de 1:5 a 1:10 de solución salina al 0,9%. Los siguientes ejemplos son ilustrativos, pero no limitan el alcance de la presente invención. Se pueden realizar variaciones razonables, como las que se les ocurren a un experto, sin apartarse del alcance de la presente invención. La composición farmacéutica de la presente invención es adecuada para la preparación a una escala típica para la industria farmacéutica como también a una escala menor, conforme a técnicas convencionales de la industria farmacéutica que comprenden granulación en húmedo, granulación en seco, compresión directa, granulación en lecho fluidizado, cuando sea necesario, para las formas de tabletas, según sea pertinente, para entregar los productos orales o parenterales deseados.

Los porcentajes mencionados en los siguientes ejemplos están todos indicados en peso.

EJEMPLOS Ejemplos de un método típico para preparar una tableta que contiene los agentes activos es mezclar en primer lugar el agente con un aglomerante como por ejemplo, gelatina, etil celulosa o aglomerantes similares, realizándose la mezcla en forma adecuada en una mezcladora tipo V estándar y por lo general bajo condiciones anhidras. A continuación, se puede comprimir la mezcla recién preparada a través de máquinas convencionales para fabricar tabletas y se pueden transformar los comprimidos en tabletas. Se recubren las tabletas recién preparadas, con recubrimientos adecuados incluyendo goma laca, metilcelulosa, cera carnauba, copolímeros de estireno-ácido maleico y similares. Para la administración oral, se fabrican las tabletas comprimidas que contienen desde 30 mg hasta 40 mg de la mezcla de andrografolidos de acuerdo a los métodos o técnicas de fabricación anteriormente mencionados que son bien conocidos en la técnica y se encuentran descritos en Remington's Pharmaceutical Science, Capítulo 39, Mack Publishing Co., 1965.

Las composiciones farmacéuticas preferidas de las formulaciones de la presente invención se muestran en algunos de los siguientes Ejemplos.

EJEMPLO No. 1 Composición farmacéutica para preparar una tableta de la presente invención, utilizando las mezcla de andrografolidos contenidas en el extracto seco obtenido de la hierba Andrographis paniculata Nees.

Ingredientes: Por tableta mg. Extracto seco (mezcla de andrografolidos) 135,0 Almidón de papa 168,8 Talco 106,9 Gelatina 11,5 Estearato de magnesio 5,6 Hidroxipropil metil celulosa 3,5 Dióxido de silicio, anhidro 2,0 Polietilenglicol 0,7 Carbonato, calcio (qsp.) 16 Para formular la tableta de manera uniforme, se mezcla el compuesto activo de extracto seco (mezcla de andrografolidos) , almidón de papa, talco, gelatina, hidroxipropil metilcelulosa, dióxido de silicio anhidro, polietilenglicol y carbonato de calcio bajo condiciones secas en una mezcladora V convencional hasta que todos los ingredientes se encuentran mezclados de manera uniforme. Luego se hace pasar la mezcla a través de un tamiz de malla liviana estándar, se seca en una atmósfera anhidra y luego se mezcla con estearato de magnesio y se comprime en tabletas y se recubre con goma laca. Otras tabletas que contienen de 116 a 162 mg, se preparan de una manera similar.

EJEMPLO No. 2 Composición farmacéutica para preparar una cápsula de la presente invención, utilizando el extracto seco obtenido de la hierba Andrographis paniculata Nees.

Ingredientes: Por cápsula mg. Extracto seco, (mezcla de andrografolidos) 135,0 Almidón de papa 168,8 Talco 106,9 Gelatina 11,5 Estearato de magnesio 5,6 Hidroxipropilmetil celulosa 3,5 Dióxido de silicio, anhidro 2,0 Polietilenglicol 0,7 Carbonato, calcio 16 La fabricación de cápsulas que contienen de 30 mg a 40 mg de la mezcla de andrografolidos para uso oral consiste esencialmente en mezclar el Extracto Seco, (mezcla de andrografolidos) con un portador y encerrar la mezcla en una vaina polimérica, generalmente gelatina o de un material similar. Las cápsulas pueden estar en la forma blanda conocida en la técnica de una cápsula elaborada encerrando el compuesto en una dispersión profunda con un portador compatible comestible, o la cápsula puede ser una cápsula dura que está compuesta esencialmente por la composición nueva mezclada con un sólido no tóxico como por ejemplo, talco, estearato de calcio, carbonato de calcio o un sólido similar. Un ejemplo de uso típico para emplear una cápsula que contiene 30 mg a 40 mg es su uso según lo terapéuticamente indicado. Naturalmente, la dosis administrada, ya sea una dosis única, una dosis múltiple o una dosis diaria, variará dependiendo del compuesto particular de la presente invención que se emplee debido a la potencia variable del compuesto, la vía de administración elegida, la talla del paciente y la naturaleza de la condición de enfermedad. La dosis administrada corresponde a una dosis general oral de 80 a 160 mg al día, con una dosis oral normal de 120 mg tres veces al día; la dosis intravenosa usual es de 60 a 80 mg, seguida si se indica por 70 a 100 mg en un período posterior, y la dosis intramuscular usual es de 70 a 100 mg cada 24 horas, con 1 a 2 inyecciones al día. Las composiciones farmacéuticas nuevas y útiles que comprenden el Extracto Seco (que contienen una mezcla de andrografolidos) de la presente invención son adaptables en cuanto a su administración para obtener los efectos fisiológicos esperados de los sistemas de liberación de fármacos, como por ejemplo, sistemas de liberación para la piel, dispositivos de liberación de fármacos gastrointestinales y sistemas similares, donde el dispositivo de liberación es elaborado a partir de materiales que existen en forma natural y de materiales poliméricos sintéticos. Representantes de materiales aceptables para la fabricación de sistemas de liberación de fármacos que contienen los compuestos para la administración controlada de fármacos incluyen materiales tales como cloruro de . polivinilo, poliisopreno, polibutadieno, polietileno, copolímeros de acetato de etileno-vinilo, polidimetilsiloxano, hidrogeles hidrofílicos de esteres de ácido acrílico y metacrílico, acetatos de polivinilo, copolímeros de acetato de propilenvinilo y materiales similares.

EJEMPLO No. 3 Se preparan las tabletas recubiertas por goma laca que contienen la composición antes indicada de acuerdo a técnicas convencionales de la industria farmacéutica que comprenden mezclado, granulado, y compresión, cuando sea necesario, para las formas de tableta. Se mezcla en forma minuciosa específicamente la composición del ejemplo 1 con una cantidad suficiente del extracto seco de Andrographis paniculata . Para la fabricación de tabletas que comprenden andrografolido, 14-deoxiandrografolido y neoandrografolido, se comprime la mezcla en forma directa con los ingredientes inactivos mencionados en el ejemplo N° 1 y posteriormente se recubre con goma laca.

EJEMPLO No. 4 Diferenciación de células HL-60 inducida por la composición. Productos químicos: May Grunwald-Giemsa, NBT, ácido retinoico, citocalasina B, penicilina, estreptomicina, glutamina, suero bovino fetal (Sigma) . RPMI 1640 (GIBCO) , suero bovino fetal de Boehringer Mannheim, ácido todo-trans-retinoico y andrografolido de Aldrich. Los otros aislados fueron suministrados por Amsar Pvt. Ltd., India. Se adquirió el FURA2-AM en Molecular Probes (EE. UU.). El nitroazul de tetrazolio fue de Sigma . Cultivo celular: Se cultivaron células HL 60 en medio de RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal inactivado con calor al 20%, glutamina 2 nM, penicilina 100 Ul/ml y estreptomicina 100 pg/ml a 37° C en una atmósfera humectada que contenía C02 al 5%. Se sembraron las células dos veces a la semana en 3 x 105 células/ml.

Se indujo la diferenciación agregando 100 nM de ácido todo-trans-retinoico, solo o combinado con la composición (17,5 µg/ml) y se evaluó por el cambio en la morfología después de la coloración de May Grun ald-Giemsa y la capacidad de reducir el NBT (11) . Cultivos no diferenciados contuvieron menos de 3% de células positivas al NBT. Se estudiaron los cultivos diferenciados después de 5 días de tratamiento con ácido retinoico.

Medición del calcio [Ca2+] c Se cargaron granulocitos de HL-60 (2 x 107/ml) con 2 µM dura-2/AM en medio de Ca2+ más albúmina de suero bovino 0,1% durante 45 minutos a 37° C, luego se diluyeron a 107 células/ml y se mantuvieron sobre hielo. Justo antes de su uso, se centrifugaron 0,5 ml de esta suspensión celular y se volvieron a suspender en 2,4 ml del medio indicado que incluía 5 µg/ml de citocalasina B. Se midió la fluorescencia del Fura-2 ( F) en una probeta termostatada (37° C) (fluorímetro LS55, Perkin-Elmer Corp.) a una excitación de 340 y 380 nm y una longitud de onda de emisión de 505 nm.

EJEMPLO N° 5 Inhibición de la producción de IL-2 e IFN-? en células T por parte de la composición.

Productos químicos : Concanavalina A y medio de RPMI 1460 de Sigma. Cultivos celulares: Se sacrificaron ratones Rockefeller mediante éter y se colocaron los ganglios poplíteos y el bazo en una placa de Petri que contenía 5 ml de un medio de cultivo RPMI 1640. Se obtuvieron las células linfáticas rompiendo estos órganos en una solución estéril de RPMI 1640, y se volvieron a suspender los linfocitos en 1 ml de medio de RPMI 1640 y se cuantificaron con una cámara de Neubauer. Finalmente, se ajustó la suspensión de linfocitos a una concentración de 4 x 106 células por ml de RPMI . Una vez obtenidos, se cultivaron los linfocitos en presencia o ausencia de la composición. Para este propósito, se emplearon placas de cultivo de poliestireno de 24 pocilios (2 ml cada uno) , que contenían 1 ml de células y diferentes concentraciones de la composición y 1 ml de la concanavalina A mitógena (CONA, 0 µg/ml y 10 µg/ml) . Se incubaron las placas en un horno a 37° C en una atmósfera de 5% de humedad y C02 durante 24 horas, luego se agregó una muestra de 2 ml cada una y se centrifugó durante un minuto a 3.200 rpm. Posteriormente, se congelaron las células en alícuotas de 0,6 ml y se detectaron las citoquinas con ELISA (Análisis de Inmunoabsorción Ligado a Enzimas) . ELISA para IL-2 e INF-? Productos químicos : IL-2 e IFN gamma de Pharmingen; TBM de Pierce, H202 y H2S04 de Merck. Para la determinación de las citoquinas (IL-2 e IFN) , se empleó un primer anticuerpo que captura el anti-antígeno; un segundo anticuerpo que se conjuga con una enzima peroxidasa y una solución estándar para una curva de calibración. Se usaron placas de poliestireno de 96 pocilios de ELISA de "alta unión". Se diluyeron 100 µl por pocilio del primer anticuerpo en tampón de carbonato pH 9,5 con el propósito de facilitar el pegado a la pared, y se incubaron durante la noche a 4° C para asegurar la unión a la parte sólida. Posteriormente, se eliminó el contenido del pocilio y se lavó con 300 µl por pocilio con Tween 20; 0,05% p/v y PBS pH 7,0 tres veces. Luego, se bloqueó el pocilio con 200 µl de leche sin grasa al 5% y PBS, y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Una vez terminado el proceso, se eliminó el contenido del pocilio y se lavó según ya se explicó. Luego, se agregaron las muestras de prueba que contenían el antígeno, 100 µl por pocilio en duplicado, y 100 µl de una curva de calibración específica para la citoquina y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente. Después, se eliminó el contenido del pocilio y se lavó 5 veces de acuerdo al último protocolo mencionado. Luego, se agregó el segundo anticuerpo conjugado con la enzima peroxidasa y se diluyó en una solución de PBS y SBS al 10%, y se colocaron 100 µl en cada pocilio de la placa y se dejaron a temperatura ambiente durante una hora. Luego, se lavaron 7 veces y se revelaron con una solución de TMB y H202, 100 µl por pocilio y se desarrollaron después de 30 minutos en la oscuridad, se detuvo la reacción con H2S0 2 M; 50 µl por pocilio. Se midió el resultado de la reacción mediante ELISA con un filtro de 450 nm (Lector de Microplacas universal ElxdOO, BioteK) .

EJEMPLO No. 6 Estimulación del receptor de PPAR-? por parte de la COMPOSICIÓN Productos químicos: Dimetiisulfóxido adquirido en Merck. Todos los demás reactivos fueron adquiridos en PROMEGA. Ensayos de transcripción: Se transfectaron células HL-60 con pCMX-hPPAR?l, el vector de expresión de PPAR?l humano bajo control de un promotor de citomegalovirus . Se determinaron las actividades de la luciferasa y la ß-galactosidasa y se normalizó la actividad de la luciferasa al nivel de la ß-galactosidasa en HL-60. Plásmidos: Se construyeron el plásmido que expresa el dominio de unión a ADN (DBD) de GAL4 y el dominio de unión al ligando de mPPAR? (pGAL4DBD-mPPAR?) insertando el dominio de unión al ligando de PPAR? de ratón (de aminoácidos 162 - 475), aislado como fragmento Seal/BamHl de pGBTmPPAR? "in-frame" en el DBD de pCMXGal4. Se trataron las células con DMSO o 17,5 µg/ml de composición de la presente invención y se midió la actividad de la luciferasa mediante quimioluminiscencia.

EJEMPLO No. 7 Inhibición del NF-kB en neutrófilos por parte de la composición. Productos químicos: Dimetiisulfóxido (DMSO) de Merck; suero bovino fetal y medio de RPMI-1640 de Gibco, EE. UU.; nitroazul de tetrazolio de Sigma, pRL-TK, pG13 y Dual-Luciferase Repórter Assay System (Promega) ; Fugened de Roche; Cultivo celular Se usó una línea HL-60 mieloide celular de leucemia mieloide aguda. Estas células se pueden diferenciar en la presencia de dimetiisulfóxido 1,3% (DMSO) (Santos Beneit y colaboradores, 2000) . Se mantienen las células en medio de RPMI-1640 complementado con 2 mL de L-glutamina, 10% de suero bovino fetal inactivado por temperatura y antibióticos con C02 al 5% a 37° C. Las células son diferenciadas en neutrófilos incubando los neutrófilos con 1,3% de DMSO durante 4 días. Se analizan las células diferenciadas con nitroazul de tetrazolio (NBT) . Transfección del vector NFkB-pGL3 en células HL-60 y medición de la luciferasa Se cultivaron células HL-60 y se diferenciaron en neutrófilos durante 4 días, según se describe en otras partes. El día 4, se transfectaron las células con los vectores pGL3-NFkB y se usó como control interno de la transfección un vector pRL-TK (Promega) , que es un vector de expresión que contiene un promotor de timidina quinasa del virus herpes simple, que permite la expresión de niveles moderados de la luciferasa de la Renilla . Estos vectores son transfectados en células por un sistema basado en liposomas (Fugened, Roche) . Una vez que se realiza la transfección, se mantienen las células durante 24 horas y luego son estimuladas por PAF o fMLP en diferentes momentos, en presencia o ausencia de la composición de la presente invención. Luego, se mantienen los extractos celulares a -70° C hasta la medición de la actividad de la luciferasa. Se mide la actividad de la luciferasa mediante quimioluminiscencia, con el sistema comercial Dual-Luciferase Repórter Assay System (Promega) que posee los sustratos de las enzimas luciferasa de luciérnaga (pGL3) y de Renilla (pRL) . Inmunoblot de IkBa Productos químicos: se adquirieron el fMLP, el PMSF y el PAF en Calbiochem. Tris, NaCL, NP-40, deoxicolato, dodeciisulfato de sodio, inhibidores de iproteasa, mercaptoetanol en Merck. Se preincubaron los neutrófilos durante diez minutos y luego se estimularon con fMLP (0,1 µM) y PAF (0,1 µM) durante 60 minutos. Para el análisis de las proteínas, se sometieron a lisis las células en un tampón para lisis (50 mM Tris, pH 8,0, 150 nM de NaCl, 1% NP-40, 0,5% deoxicolato, 0,1% dodeciisulfato de sodio, 1 mM de Na2V04, 1 mM de PMSF y 10 µg/ml de inhibidores de iproteasa) . Se cuantificaron las proteínas mediante el método de Bradford, se resolvieron por electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizadas (SDS/PAGE) 12% y se electrotransfirieron a una membrana de nitrocelulosa. Se incubó la membrana con anticuerpos anti-IkBa, seguido por un anticuerpo secundario conjugado de peroxidasa y finalmente se visualizó con quimioluminiscencia (ECL) . Como un control de la cantidad de proteínas en el gel, se trataron los anticuerpos con solución de reextracción ("stripping") (100 nM de 2-mercaptoetanol, 2% SDS, 62,5 M de Tris-HCl, pH 6,7) y se incubaron con anticuerpo antiactina. Finalmente, se llevó a cabo un análisis densitométrico con las señales obtenidas para cada anticuerpo.

EJEMPLO No. 8 Inhibición de la formación de ß-amiloide por parte de la composición en ratas de tipo salvaje Formación de amiloide Para revisar la formación de amiloide, se emplearon dos técnicas complementarias: fluorescencia con tioflavina T (Levine, 1993; Soto y colaboradores, 1995; Reyes y colaboradores, 1997, Inestrosa y colaboradores, 2000) y unión por rojo Congo (Alvarez y colaboradores, 1998) . En resumen, el ensayo de la tioflavina T se basa en la emisión de fluorescencia de la tioflavina cuando ésta se une a fibrilos de amiloide, mostrando un aumento de la emisión en 482 nm cuando se excita en 450 nm. El ensayo con rojo Congo es un ensayo de cuantificación muy específico para determinar la cantidad de amiloide formado. En la actualidad, se usan estas técnicas para verificar la formación específica de amiloide.

EJEMPLO 9 Descripción de un compuesto de la composición de andrografolidos Una composición representativa de la presente invención es una formulación farmacéutica en tabletas, que entrega la siguiente mezcla de compuestos: andrografolido 24,6% 14-deoxiandrografolido 4,8% neoandrografolido 0,6% para la posterior fabricación de las diferentes formas farmacéuticas, y se aplica en las siguientes dosis : a) 1 - 5 mg de andrografolido/kg al día b) 0,2 - 1 mg de 14-deoxiandrografolido/kg al día b) 0,02 - 0,12 mg de neoandrografolido/kg al día.

EJEMPLO No. 10 Eficacia clínica de una formulación oral para el tratamiento del lupus eritematoso Mediante el uso de la mezcla de andrografolidos descrita en el ejemplo 7, se presenta una normalización de los síntomas debido al lupus después de 3 meses de administración. Además, la composición no interfiere en los efectos de restablecimiento normales de otros agentes antiinflamatorios no esteroideos tradicionales.

EJEMPLO No. 11 Eficacia clínica de una formulación oral para el tratamiento de la esclerosis múltiple Mediante el uso de la mezcla de andrografolidos descrita en el ejemplo 7, se presenta una normalización de los síntomas de la enfermedad después de 3 meses de tratamiento con la composición de la presente invención. Además, la composición no interfiere con otros tratamientos .

EJEMPLO No. 12 Eficacia clínica de una formulación oral para el tratamiento de la artrosis y de la artritis reumatoide Mediante el uso de la mezcla de andrografolidos descrita en el ejemplo 7, se presenta una normalización de la rigidez de las articulaciones debido a la osteoartritis después de 3 meses, en presencia o ausencia de glucosamida o sulfato de crondoitina u otros fármacos antiinflamatorios. Además, la composición no interfiere en los efectos de restablecimiento normales de las articulaciones de estos dos constituyentes de proteoglican, a diferencia de los antiinflamatorios no esteroideos tradicionales.

EJEMPLO No. 13 Eficacia clínica de una formulación oral para el tratamiento de la diabetes mellitus Mediante el uso de la mezcla de andrografolidos descrita en el ejemplo 7, se presenta una normalización de los niveles de azúcar después de 5 semanas. Además, la composición no interfiere en los efectos de restablecimiento normales de otros agentes reductores del azúcar.

EJEMPLO No. 14 Eficacia clínica de una formulación oral para tratar el SIDA Se administra una formulación oral según se describe en el Ejemplo 7 a pacientes que son VIH positivos. Se restaura el recuento de CD4 normal dentro de 3 meses de tratamiento.

EJEMPLO No. 15 Eficacia clínica de una formulación oral para tratar la enfermedad de Alzheimer Se administra una formulación oral según se describe en el Ejemplo 7, a pacientes que han manifestado una primera etapa de la enfermedad de Alzheimer (EA) , diagnosticada por el profesional médico y confirmada por un neurólogo titulado independiente. Dos semanas antes del estudio clínico, los pacientes se someten a pruebas psiconeurológicas apropiadas tales como el Examen Cognoscitivo Mini-Mental (MMSE) , la Escala de Evaluación de la Enfermedad de Alzheimer (ADAS) , el Test de Denominación de Boston (BNT) y el Test de Fichas (TT) . Se repiten las pruebas neuropsicológicas el Día 0, a las 6 semanas y 3 meses del estudio clínico. Las pruebas son realizadas por neuropsicólogos que no conocen el régimen de tratamiento del paciente. Se asignan los pacientes al azar a la formulación de prueba o al placebo al inicio del estudio. La formulación de prueba y el placebo son tomados oralmente una o dos veces al día. Se permite el tratamiento para condiciones tales como diabetes, hipertensión, etc., durante el estudio. Se comparan los puntajes desde el punto de vista estadístico entre las formulaciones de prueba y el placebo durante cada uno de los tres períodos de observación. Sin tratamiento, el curso natural de la AE es un deterioro importante en los puntajes de las pruebas durante el curso del estudio clínico. Se considera que los pacientes tratados con la composición según se describe en la formulación han mejorado, si los puntajes de los pacientes siguen siendo los mismos o mejoran durante el curso del estudio clínico. Los pacientes recibirán en forma aleatoria la composición o un placebo al comienzo del estudio. La composición y el placebo son administrados dos veces al día. Durante el estudio, se permite que los pacientes reciban tratamiento para condiciones tales como diabetes, hipertensión, etc. Se comparan los resultados de la composición y el placebo desde el punto de vista estadístico para todos los períodos de estudio. Los pacientes que usaron placebo muestran un deterioro cognitivo importante. Los pacientes tratados con la composición mejoran en forma considerable los puntajes en las pruebas .

A partir de la descripción anterior, resulta obvio que un especialista en la materia no puede determinar fácilmente las características esenciales de la presente invención, y sin apartarse del espíritu y alcance de la misma, puede realizar diversos cambios y/o modificaciones a la invención para adaptarla a diversos usos y condiciones. Como tales, estos cambios y modificaciones están y han sido concebidos para estar adecuada y equitativamente dentro de la gama completa de equivalencia de las siguientes reivindicaciones.

Claims (50)

REIVINDICACIONES 1. Una composición, CARACTERIZADA porque comprende una mezcla de lábdanos diterpénicos obtenidos de un extracto seco de la planta Andrographis paniculata, cuyas fórmulas generales son: C2oH3005 andrografolido C2oH3o0 14-deoxiandrografolido C26H?08 neoandrografolido. 2. La composición de acuerdo a la reivindicación 1, donde el componente andrografolido está CARACTERIZADO porque: i . fórmula general : C2oH3o05 ii. peso molecular: 350,46 iii. Nomenclatura molecular: 3- [2- [decahidro-6-hidroxi-5- (hidroxi-metil) -5, ha-dimetil-2-metilen-l-naftalenil] etilideno] dihidro-4-hidroxi-2 (3h) -furanona, iv. estructura molecular: 3. La composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque el componente 14-deoxiandrografolido se caracteriza por: i. fórmula general: C2oH3o04 ii . peso molecular: 336,46 iii. nomenclatura molecular: iv. estructura molecular: 4. La composición de acuerdo a la reivindicación 1, donde el componente neoandrografolido está CARACTERIZADO porque : i. fórmula general: C26H?08 ii. peso molecular: 345,89 iii. nomenclatura molecular: iv. estructura molecular: 5. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina, fármaco, agente farmacéutico. 6. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar las enfermedades autoinmunes . 7. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la artritis reumatoide. 8. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar el lupus exantematoso. 9. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la esclerosis múltiple. 10. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer. 11. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar el asma y las alergias . 12. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la psoriasis . 13. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la dermatomiocitis sistémica. 14. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la osteoartritis . 15. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) . 16. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar la diabetes mellitus . 17. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar el rechazo en los pacientes con transplantes de tejidos y órganos. 18. Composiciones farmacéuticas, CARACTERIZADAS porque comprenden la composición de acuerdo a la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable. 19. La composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 18, CARACTERIZADA porque la mezcla de lábdanos diterpénicos comprende de un 20% a un 40% peso/peso de andrografolido, entre aproximadamente un 3% y un 6% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y de alrededor de un 0,2% a un 0,8% peso/peso de neoandrografolido, en el extracto seco final. 20. La composición farmacéutica, de acuerdo a la reivindicación 19, CARACTERIZADA porque la mezcla de lábdanos diterpénicos comprende de aproximadamente un 25% a un 35% peso/peso de andrografolido, entre alrededor de un 4,5% y un 5,5% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y de aproximadamente un 0,4% a un 0,8% peso/peso de neoandrografolido, en el extracto seco final. 21. La composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 20, CARACTERIZ DA porque la mezcla de lábdanos diterpénicos comprende un 24,6% peso/peso de andrografolido, un 4,8% peso/peso de deoxiandrografolido y un 0,6% peso/peso de neoandrografolido, basado en el extracto seco final. 22. Composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 18 a 21, CARACTERIZADA porque corresponde a una formulación farmacéutica en forma de tabletas . 23. Composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 22, CARACTERIZADA porque se administra por vía oral contribuyendo con la siguiente dosis para las siguientes moléculas: 1 - 5 mg de andrografolido/kg por día b) 0,2 - 1 mg de 14-deoxiandrografolido/kg por día c) 0, 02 - 0, 12 mg de neoandrografolido/kg por día. 24. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar enfermedades autoinmunes. 25. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la artritis reumatoide. 26. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el lupus exantematoso. 27. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la esclerosis múltiple. 28. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer. 29. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el asma y las alergias. 30. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la psoriasis. 31. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la dermatomiocitis sistémica. 32. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la osteoartritis. 33. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) . 34. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la diabetes mellitus. 35. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 22 y 23, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el rechazo de órganos y tejidos en pacientes transplantados. 36. Composiciones farmacéuticas de acuerdo a la reivindicación 18, CARACTERIZADAS porque pueden estar en formas farmacéuticas entérales, parenterales, dérmicas, oculares, nasales, óticas, rectales, vaginales, uretrales, bucales, faringeo-traqueo-bronquiales adecuadas, comprendiendo las composiciones farmacéuticas un extracto seco que contiene una mezcla de lábdanos diterpénicos de andrografolido, 14-deoxiandrografolido y neoandrografolido . 37. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la reivindicación 36, CARACTERIZADAS porque la mezcla de lábdanos diterpénicos comprende de un 20% a un 40% peso/peso de andrografolido, de entre aproximadamente un 3% y un 6% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y de alrededor de un 0,2% a un 0,8% peso de neoandrografolido, basado en el peso del extracto seco final. 38. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la reivindicación 37, CARACTERIZADAS porque la mezcla de lábdanos diterpénicos comprende de aproximadamente un 25% a un 35% peso/peso de andrografolido, de entre alrededor de un 4,5% y un 5,5% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y de alrededor de un 0,4% a un 0,8% peso/peso de neoandrografolido, basado en el peso del extracto seco final. 39. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la reivindicación 38, CARACTERIZADAS porque la mezcla de lábdanos diterpénicos comprende un 24,6% peso/peso de andrografolido, un 4,8% peso/peso de deoxiandrografolido y un 0,6% peso/peso de neoandrografolido, basado en el peso del extracto seco final. 40. Composiciones farmacéuticas de acuerdo a la reivindicación 36, CARACTERIZADA porque se administran por las vías correspondientes, en las siguientes dosis: -0 1 - 5 mg de andrografolido/kg por día b) 0,2 - 1 mg de 14-deoxiandrografolido/kg por día c) 0,02 - 0,12 mg de neoandrografolido/kg por día. 41. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar las enfermedades autoinmunes. 42. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la artritis reumatoide. 43. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el lupus exantematoso. 44. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la esclerosis múltiple. 45. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer. 46. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el asma y las alergias. 47. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la psoriasis. 48. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la dermatomiocitis sistémica. 49. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la osteoartris. 50. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) . 51. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la diabetes mellitus. 52. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 36 a 40, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el rechazo de órganos y tejidos en pacientes transplantados. REIVINDICACIONES MODIFICADAS [recibidas por la Oficina Internacional el 21 de diciembre de 2004 (21.12.04)] REIVINDICACIONES MODIFICADAS EN VIRTUD DEL ART. 19

1. Una composición, CARACTERIZADA porque comprende una mezcla de lábdanos diterpénicos obtenidos de un extracto seco de la planta Andrographis paniculata, cuyas fórmulas generales son: C2oH3o05 andrografolido C2oH3004 14-deoxiandrografolido C26H4i08 neoandrografolido, donde cada lábdano diterpénico se encuentra presente dentro de la mezcla en una cantidad que fluctúa entre aproximadamente 20% a 40% peso/peso de andrografolido, entre aproximadamente 3% y 6% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y entre aproximadamente 0,2% a 0,8% peso/peso de neoandrografolido.

2. La composición de acuerdo a la reivindicación 1, donde el componente andrografolido está CARACTERIZADO porque: i. fórmula general: C20H30O5 ii. peso molecular: 350,46 iii. nomenclatura molecular: 3- [2- [decahidro-6-hidroxi-5- (hidroxi-metil) -5,ha-dimetil-2-metilen-l-naftalenil] etilideno] dihidro-4-hidroxi-2 (3h) -furanona, iv. estructura molecular:

3. La composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque el componente 14-deoxiandrografolido se caracteriza por: i. fórmula general: C2oH3o04 ii. peso molecular: 336,46 iii. nomenclatura molecular: iv. estructura molecular:

4. La composición de acuerdo a la reivindicación 1, donde el componente neoandrografolido está CARACTERIZADO porque: i. fórmula general: C26H4?08 ii . peso molecular: iii. nomenclatura molecular: iv. estructura molecular:

5. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina, fármaco, agente farmacéutico.

6. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar las enfermedades autoinmunes .

7. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la artritis reumatoide.

8. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar el lupus exantematoso.

9. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la esclerosis múltiple.

10. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer.

11. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar el asma y las alergias .

12. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la psoriasis .

13. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la dermatomiocitis sistémica.

14. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es particularmente útil para preparar una medicina adecuada para tratar la osteoartritis .

15. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) .

16. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar la diabetes mellitus .

17. Uso de la composición de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADO porque es útil para preparar una medicina adecuada para tratar el rechazo en los pacientes con transplantes de tejidos y órganos.

18. Composiciones farmacéuticas, CARACTERIZADAS porque comprenden la composición de acuerdo a la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.

19. La composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 18, CARACTERIZADA porque los lábdanos diterpénicos se encuentran presentes en una cantidad que fluctúa entre aproximadamente 20% a 35% peso/peso de andrografolido, entre aproximadamente 4, 5% y 5, 5% peso/peso de 14-deoxiandrograf olido y entre aproximadamente 0, 4% a 0, 8% peso/peso de neoandrografolido .

20. La composición farmacéutica, de acuerdo a la reivindicación 19, CARACTERIZADA porque cada lábdano diterpénico se encuentra presente en una cantidad de 24,6% peso/peso de andrografolido, de 4,8% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y de 0,6% peso/peso de neoandrografolido.

21. Composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 18 a 20, CARACTERIZADA porque corresponde a una formulación farmacéutica en forma de tabletas.

22. Composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 21, CARACTERIZADA porque se administra por vía oral contribuyendo con la siguiente dosis para las siguientes moléculas: 1) 1 - 5 mg de andrografolido/kg por día e) 0,02 - 0,5 mg de 14-deoxiandrografolido/kg por día f) 0,001 - 0,02 mg de neoandrografolido/kg por día.

23. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar enfermedades autoinmunes.

24. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la artritis reumatoide.

25. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el lupus exantematoso.

26. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la esclerosis múltiple.

27. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer.

28. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el asma y las alergias.

29. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la psoriasis.

30. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la dermatomiocitis sistémica.

31. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la osteoartritis.

32. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) .

33. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la diabetes mellitus.

34. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 21 y 22, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el rechazo de órganos y tejidos en pacientes transplantados.

35. Composiciones farmacéuticas de acuerdo a la reivindicación 18, CARACTERIZADAS porque pueden estar en formas farmacéuticas entérales, parenterales, dérmicas, oculares, nasales, óticas, rectales, vaginales, uretrales, bucales, faringeo-traqueo-bronquiales adecuadas, comprendiendo las composiciones farmacéuticas un extracto seco que contiene una mezcla de lábdanos diterpénicos, donde cada lábdano diterpénico se encuentra presente dentro de la mezcla en una cantidad que fluctúa entre aproximadamente 20% a 40% peso/peso de andrografolido, entre aproximadamente 3% y 6% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y entre aproximadamente 0,2% a 0,8% peso/peso de neoandrografolido.

36. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la 5 reivindicación 35, CARACTERIZADAS porque los lavadnos diterpénicos se encuentran presentes en una cantidad que fluctúa entre aproximadamente 25% a 35% peso/peso de andrografolido, entre aproximadamente 4,5% y 5,5% peso/peso de 14-deoxiandrografolido y entre 0 aproximadamente 0,4% a 0,8% peso/peso de neoandrografolido

37. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la reivindicación 36, CARACTERIZADAS porque cada lábdano 5 diterpénico se encuentra presente en una cantidad de 24,6% peso/peso de andrografolido, 4,8% peso/peso de 14- deoxiandrografolido y 0,6% peso/peso de neoandrografolido

38. Composiciones farmacéuticas de acuerdo con 0 cualquiera de las reivindicaciones 35 a 37, CARACTERIZADAS porque se administran por las vías correspondientes, en las siguientes dosis: d) 1 - 5 mg de andrografolido/kg por día e) 0,02 - 0,5 mg de 14-deoxiandrografolido/kg por día £) 0,001 - 0,02 mg de neoandrografolido/kg por día.

39. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar las enfermedades autoinmunes.

40. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la artritis reumatoide.

41. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el lupus exantematoso.

42. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la esclerosis múltiple.

43. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer.

44. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el asma y las alergias.

45. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la psoriasis.

46. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la dermatomiocitis sistémica.

47. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la osteoartris .

48. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) .

49. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar la diabetes mellitus.

50. Uso de la composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 35 a 38, CARACTERIZADO porque es útil para tratar el rechazo de órganos y tejidos en pacientes transplantados. RESUMEN Composición caracterizada por estar constituida por moléculas identificadas como lábdanos diterpénicos que se obtienen de una especie de planta valiosa de Andrographis paniculata, hierba seca, mediante un proceso especial de extracción, para el tratamiento de enfermedades autoinumnes y otras enfermedades inmunológicas en los seres humanos y animales, que presenta una toxicidad baja y ausencia de efectos colaterales importantes. Asimismo, la nueva composición es útil para preparar una composición farmacéutica útil para prevenir y tratar la enfermedad de Alzheimer. La composición inhibe la síntesis de citoquinas pro-inflamatorias, debido a la activación de receptor PPAR gamma y la disminución del factor nuclear kappa B. Además, en lo que concierne a sus propias características terapéuticas, esta nueva composición resuelve las inconveniencias de los productos, medicinas y procedimientos actuales, que tienen un nivel de toxicidad importante y/o causan efectos colaterales no deseados. La presente invención tiene aplicaciones en inmunofarmacología, farmacología cínica y pre-clínica humana y veterinaria, tecnología farmacéutica, reumatología, e inmunología clínica, inmunoterapia, transplante de órganos y tejidos, y las enfermedades de inmunodeficiencia como el SIDA. EEG/CS/UniversidadAustral/Trads/800PCT-Lll