CN101124261A - 酪蛋白衍生肽及其治疗用途 - Google Patents

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Abstract

从乳酪蛋白的αS1－、αS2－、β－或κ－酪蛋白片段序列衍生的或与其相似的生物活性肽。这些肽能免疫调节和其它治疗活性，包括但不限于刺激和增强免疫响应，防止病毒感染，常化血清胆固醇水平，和刺激造血作用。酪蛋白衍生肽是无毒的，并能用于治疗和预防免疫病理、糖尿病、高胆固醇血症、造血疾病和病毒相关的疾病。

Description

酪蛋白衍生肽及其治疗用途
技术领域
本发明涉及从乳酪蛋白的αS1-、αS2-、β-或κ-酪蛋白片段序列衍生的或与它们相似的生物活性肽。这些肽能免疫调节和其它治疗活性，包括但不限于刺激和增强免疫应答，防止病毒感染，常化血清胆固醇水平，和刺激造血作用。酪蛋白衍生肽是无毒的，并能用于治疗和预防免疫病理、糖尿病、高胆固醇血症、造血疾病和病毒相关的疾病。
背景技术
来自营养素的生物活性分子：
除了许多食物的营养价值，消化通路的某些片段和产物有影响生理过程的能力。某些这样的“额外营养的”成分是以它们的活性形式存在于整个营养物中，例如母乳和初乳中的免疫球蛋白、发现于基于大豆的食物中的植物雌激素、来自水果和维生素的聚苯抗氧化剂。其它是加密于营养物的分子之中，在食品消化或加工过程中以活性的形式释放，例如来自乳球蛋白的抗高血压肽[Kitts，D.D.(1999)，Can.J.Physio.Pharmacol.72：4；423-434]。
乳蛋白中的生物活性：
奶包括多种对它的独特性质有关的多种蛋白。一些蛋白，例如胆盐刺激的脂肪酶、淀粉酶、β-酪蛋白、乳铁蛋白、结合咕啉和α-抗胰蛋白酶有助于消化和利用奶衍生的营养素。其它蛋白，例如免疫球蛋白、κ-酪蛋白、溶菌酶、乳铁蛋白和乳白蛋白，可能以完整或部分消化的形式有免疫调节和抗菌活性。酪蛋白是主要的乳蛋白，传统上定义为包括3种片段，α、β和γ，根据它们的电泳迁移率[N.J.Hipp等人.(1952)，Dairy Sci.，35：272]。现在酪蛋白根据每个亚基的氨基酸序列定义为αS1、αS2、β和κ[W.N.Engel等人.(1984)，J.Dairy Sci.67：1599]。
在消化的过程中，酪蛋白受酸性蛋白酶的溶蛋白性裂解产生更短的肽，并且所得蛋白片段造成乳凝和集钙，酸性蛋白酶例如凝乳酶(凝乳酵素)、胰蛋白酶和胃蛋白酶。少数对乳复合物的研究显示酪蛋白相关的杀菌活性。美国专利No.3,764,670公布蛋白水解的酪蛋白消化液有抗微生物的抗生素性质。以色列专利No.42863描述由酪蛋白N-末端23个氨基酸组成的酪蛋白衍生肽有抗菌活性。Shimizu等描述从αS1酪蛋白的胃蛋白酶的水解产物衍生的短N末端片段有乳化性质，提示它在一定意义上可能对食品工业有用(Shimizu等人.J of Food Science，1984；49：1117-20)。作者研究所述片段的氨基酸组成，它的体外乳化活性，并且注意到与αS-1的23氨基酸长N末端片段相似，结论为片段是一样的。然而，没有提供等同性的证据，没有研究生物活性。
在另一个研究，Chabance等(Biochimie 1998；80：155-65)发现在摄食酸奶和奶后酪蛋白衍生肽和肽片段在人类胃和血液中的存在。作者报道在消化后的血液中生物活性的κ-酪蛋白(酪蛋白糖肽)的片段和有抗菌活性的αS-1酪蛋白的N末端片段的存在。他们总结这些未改变的肽进入血浆的通路提示它们十二指肠吸收的一种通用传输通路。没有证实肽片段的活性。
Lahov和Regelson描述一种简短的(30分钟)凝乳酶消化全酸性沉淀的牛和人的酪蛋白，以生产富含αS-1酪蛋白N末端肽的片段(Lahov andRegelson，Fd Chem Toxic 1996；34：131 -45)，基本是复制属于Katzir-Katchalsky等的美国专利No.3,764,670的教导。凝乳酶消化液然后用TCA沉淀，特征在于离心分析和短柱平衡方法。作者报道一种N末端αS-1酪蛋白肽片段，与Katzir-Katchalsky等报道的抗菌“伊拉地平”相似。然而，作者的声明到纯化到均一性的真实性是有疑问的，考虑用敏感分析技术详细研究酪蛋白的凝乳酶消化液报道多次检出肽混合物(参见，例如，Carles等人，FEBS Lett.1985；115：282-6；McSweeney等人，J Dairy Res.，1993；60：401-12，和Yvon等人.Int.J.Pept.Prot Res，1989；34：166-76)。
另外，酪蛋白和它的衍生物已被预测有其它生理活性性质，例如类鸦片和生长因子样活性[Kitts，D.D.，(1999)，同上]。
酪蛋白肽还被观察到有免疫调节活性。Coste等[Coste等人.(1992)，Immun.Lett.33：41-46)]观察到用从β酪蛋白C-末端衍生的肽治疗后大鼠淋巴细胞增殖的增加。全属于Mukerji等的美国专利No.5,506,209、5,538,952和5,707,968教导在一种液态小肠配方中给药人类β酪蛋白、重组人类β酪蛋白、和二者的水解产物，以治疗呼吸道合胞病毒、中耳炎、H型流行性感冒和其它婴儿感染。牛β-酪蛋白被测试，但发现缺乏显著抑制活性，引导作者总结“从人乳获得的β-酪蛋白与牛β-酪蛋白相比有不同的生物活性”。
属于Dosaka等的美国专利5,147,853和5,344,820教导给药从牛奶中得到的唾液酸共轭的κ-酪蛋白和κ-酪蛋白衍生的糖巨肽(GMP)以在大鼠体内和体外防止细菌和病毒感染。属于Isoda等的美国专利No5,330,975教导使用连接唾液酸的κ-酪蛋白和κ-酪蛋白肽，以中和细菌内毒素，例如霍乱毒素。相似地，属于Mukerji等的美国专利No.5,712,250和属于Andersson的美国专利No.5,968,901教导使用人κ-酪蛋白，但不是牛κ-酪蛋白，以预防细菌和H型流行性感冒的感染。然而，教导于过去本领域的这些酪蛋白组合物是相对粗制的，即使在总体分段分离之后，而且这些研究中没有一个确定了这些酪蛋白中赋予它们的“额外营养的”性质的特殊序列。
最近的研究发现在许多西方国家摄食牛奶的A1 β-酪蛋白片段与缺血性心脏病(IHD)的关联(参见，例如，M.Laugesen，NZ Med J.2003；116：U295)，引导开发无A1 β-酪蛋白的牛奶(属于McLachlan的美国专利No.6,570,060)。
癌症治疗中的造血作用：
大剂量化疗后，特别是通过自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量后，由于各类血细胞减少症病人处于高危。粒细胞减少症可引起恶化，在紧接移植后的时期，由于一般细菌、病毒、真菌和寄生因子偶尔引起致命感染并发症。类似地，血小板减少症常导致出血倾向和偶然长期血小板依赖。无论何时一旦发展了抗血小板，偶然的出血可能是致命的并且出血并发症常是致命的。粒细胞减少症引起的危险可部分地通过支持方法而克服，并且最有效地是通过给药能增强粒细胞重建的重组人细胞因子，特别是粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。这些药剂十分昂贵(大约$200-400/天/病人)，并偶尔由于超敏反应、发热、骨痛和偶尔的包括心包炎和胸膜炎的血管渗漏综合症造成副反应。一些副反应可由于其它细胞因子，它们可能实际通过这些造血生长因子释放。而且，这些造血生长因子可能禁止在有肿瘤病人中使用，例如在急性和慢性髓细胞性白血病和骨髓增生异常综合症的病人的肿瘤细胞带有G-CSF或GM-CSF受体。虽然治疗各类血细胞减少症的危险已通过使用造血细胞因子取得主要进展，治疗血小板减少症还没有取得进展。大剂量化疗后特别是ASCT后，病人处于血小板减少症的危险期，其可持续多个月到3年并且一些血小板减少的病人可能永远不能恢复。以前用多种血液产品治疗过的许多病人变成抗血小板，因此血小板减少症可能不可能克服，即使是短暂的，即使从单个供体加强和经常血小板输血。抗血小板和长期的血小板减少症代表全世界在ASCT中心的通常死因。
目前，几种新的重组细胞因子例如重组人白介素-3(rhIL3)和重组人白介素-6(rhIL6)被研究作为增强巨核细胞生成和血小板重建的可能药剂。不幸运地，初步的临床试验显示虽然rhIL3和rhIL6可能增强血小板重建，这样的作用决不是显著的而且非常耗时。
清楚地，长期的血小板减少症代表当今在临床骨髓移植中心主要的问题，对其还未找到满意的解决方法。
因此注意到拥有安全、节约、快速有效和非常清楚是造血作用刺激因子有广泛的需要并且是高度有利的，特别是对巨核细胞生成，并且无上述的限制。
血小板生成素(TPO)调节造血作用和血小板功能：
TPO显然是体内血小板生成的主要调节子，虽然血小板缺陷中肾源和肝脏源的生长因子的增加不是由于在这些器官中对TPO生物合成的适应。而是好像存在“反馈回路”，其中循环血小板的数量决定骨髓能得到的用以血小板生成的循环TPO的数量。并且，已显示TPO是一种早期作用细胞因子，其有重要的多系效应：TPO单独或与其它早期作用细胞因子联合可以(i)促进祖细胞的生存力和抑制其凋亡；(ii)调节造血干细胞的生成和功能；(iii)激活休眠多能细胞的细胞分裂；(iv)诱导多系分化；(v)增加形成多系集落，其包括粒细胞、红细胞、巨噬细胞和巨核细胞(MK，CFU-GEMM)。而且，TPO刺激更定向的祖细胞的生成，以为粒细胞/单核细胞、巨核细胞和红细胞系集落，并刺激原始人骨髓和巨核细胞粘附于纤维结合蛋白和纤维蛋白原。因此，TPO是临床血液病学家/移植者的重要的细胞因子：为动员、扩增和体外干细胞扩增以及定向前体细胞用于自体和异体移植[von dem Borne，A.E.G.Kr.等人.，(1998)Thrombopoietin：it′s role inplatelet disorders and as a new drug in clinical medicine.In Bailliers Clin.Hematol.June：11(2)，427-45]。
除了TPO对造血作用的影响，这个潜在的生长因子为多种拮抗剂起始血小板，并调节血小板-细胞外基质的相互作用。虽然它自己不造成血小板聚集，TPO上调ADP诱导的聚集，特别是聚集的第二波，上调粒(ADP、ATP、5-羟色胺等)的释放和血栓素B2的产生，增加血小板粘附于胶原和加强剪切诱导的血小板聚集。TPO还刺激PMN活化，诱导IL-8释放和起始氧代谢产生，可能增强抗菌防御。
临床的研究提示TPO在理解和治疗多种血液状态的价值。有原发性再生障碍性贫血(AA)的病人，升高的TPO水平甚至持续到免疫抑制治疗之后的缓解期，提示一种造血缺陷。TPO在其它形式的再生障碍性血小板减少症也升高，但不在升高的血小板破坏的疾患。显然，TPO生成的反应性提高在破坏性的血小板减少症的情况下是不足够的。因此，TPO对再生障碍性和破坏性血小板减少症都是一种治疗选择。
血小板生成因子有重要的临床意义，以防止和/或治疗病理或治疗引起的血小板减少症，以及作为血小板输血的替代物。对被评价的细胞因子，除了边际性潜在的IL-11，所有的被认为不适合临床应用。TPO广泛地被相信成为治疗血小板减少症的细胞因子选择。重组人TPO(Genentech)最近上市，使精确的药物动力学测定和临床试验成为可能。因此，TPO的潜在应用包括支持疗法(化/放疗后、骨髓和干细胞移植后)，血液疾病(AA、脊髓发育不良、先天性和获得性血小板减少症)、肝脏疾病、输液(血小板的扩增、收集、动员和储藏)以及手术(包括肝脏移植)的领域。特别的兴趣是为脊髓发育不良的TPO/EPO/G-CSF鸡尾酒疗法，为外周血干细胞动员的G-CSF和TPO的联合应用，以及TPO为收集CD 34+细胞和为高级血小板重建的巨核细胞体外扩增的潜在应用。重组人G-CSF也上市了(Filgrastim，Amgen，Inc.USA)。然而，与其它在临床使用考虑的造血因子相似，TPO和G-CSF昂贵，并在治疗有效水平是潜在抗原的。因此，有利的是拥有一种安全、经济和容易获得的血小板生成和粒细胞生成的刺激因子，能增加TPO和G-CSF的活性。
严重急性呼吸器官综合症(SARS)：
在2003年春25个多国家严重急性呼吸器官综合症的世界性爆发，和报道的SARS-相关的死亡，使注意集中在可疑的感染源，SARS-CoV冠状病毒(Rota等人，Sciencexpress 1 May 2003)。SARS-CoV感染的证据在全世界的SARS病人中有记载，SARS-CoV感染在呼吸样品有检出，SARS病人的恢复期血清含有抗SARS抗体。目前，没有发现预防或治疗SARS-CoV感染的治疗法。
由于没有有效的疫苗或药物，目前SARS的流行威胁达到破坏程度，与其它通过呼吸道传播的感染性疾病的流行相似，例如1918年的流感流行和麻疹流行。正如许多卫生官员强调的，控制流行的关键是阻断感染的传播。因此，除了对公共卫生设施的大量需要，发展预防和/或治疗SARS的方法是最重要的。
酪蛋白的α、κ、和β片段：
酪蛋白的αS1片段能通过多种方法从乳蛋白获得[D.G.Schmidth andT.A.J.Paynes(1963)，Biochim.，Biophys.Acta，78：492；M.P.Thompson andC.A.Kiddy(1964)，J.Dairy Sci.，47：626；J.C.Mercier等人.(1968)，Bull.Soc.Chim.Biol.50：521]，酪蛋白的αS1片段的全氨基酸序列由J.C.Mercier等确定(1971)(Eur.J.Biochem.23：41)。牛酪蛋白的αS1片段的基因组和编码序列已经用重组DNA技术克隆和测序[D.Koczan等人.(1991)，Nucl.Acids Res.19(20)：5591；McKnight，R.A.等人.(1989)，J.Dairy Sci.72：2464-73]。酪蛋白的αS1片段的N末端片段的溶蛋白性裂解和识别已有报道[J.C.Mercier等人.(1970)，Eur.J.Biochem.16：439；P.L.H.McSweeney等人.(1993)，J.Dairy Res.，60：401]，如其肠吸收和这样的片段在摄食全乳蛋白后在哺乳动物血浆中的出现[Fiat，A.M.等人.(1998)Biochimie，80(2)：2155-65]。Meisel，H.和Bockelmann，W.[(1999)，Antonie Van Leeuwenhoek，76：207-15]，在通过乳酸菌消化α和β酪蛋白片段的肽库中发现免疫肽、酪激肽(casokinin)和酪吗啡(casomorphin)的氨基酸序列。特别有趣的是酪蛋白的α和κ片段的C-末端部分显示抗聚集和血栓溶解活性[Chabance，B.等人.(1997)，Biochem.Mol.Biol.Int.42(1)77-84；Fiat AM.等人.(1993)，J.Dairy Sci.76(1)：301-310]。
牛αS2-、β-和κ-酪蛋白的编码序列也被克隆(Groene等人，Gene 1993；123：187-93，Stewart等人，Mol.Biol Evol.1987：4：231-41，and Stewart等人，Nucl Acids Res 1984；12：3895-907)。αS2-酪蛋白的编码序列有许多Alu-样反转录子序列，并且虽然基因的组织与αS1酪蛋白基因相似，序列分析显示它更与β-酪蛋白-编码基因接近。β-酪蛋白的特点是有许多丝氨酸残基簇，其在磷酸化后能与磷酸钙反应和分开磷酸钙(Stewart等人，Mol BiolEvol.1987；4：231-43)。κ-酪蛋白是更小的多肽，它的氨基酸和核酸序列(Alexander等人，Eu.J.Biochem 1988；178：395-401)显示其与钙敏感酪蛋白基因家族进化上不相关。在消化道中，κ-酪蛋白分离成一种不溶的肽(对位-κ酪蛋白)和一种可溶的亲水糖肽(酪蛋白巨肽(caseinomacropeptide))，其在消化效率中显示活性，防止新生儿对摄入蛋白的超敏反应，并抑制胃的细菌性病原体(Malkoski等人，Antimicrob Agents Chemother，2001；45：2309-15)。
早先的研究记载潜在生物活性肽加密于αS1-酪蛋白的N-末端、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的氨基酸序列中，但没有提及这些蛋白片段的应用、特定的序列或确定的合成肽，单独或联合，以增强造血、防止病毒感染或调节自身免疫疾病的发展。
本发明成功克服目前已知本领域的短处，通过提供肽和其的联合以治疗人类疾病，其中肽是从αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的N-末端衍生的，单独或联合使用，没有可测试到的毒性并在多种病理适应症有高的疗效。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供预防或治疗自身免疫或感染疾病或疾患的方法，所述方法通过给药于需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该自身免疫或感染性疾病或疾患选自由病毒疾病、病毒感染、AIDS、和HIV感染组成的组。
根据本发明的另一个方面，提供了一种方法，以预防或治疗血液疾病或疾患，所述方法通过给药于需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该血液疾病或疾患选自由血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、可用红细胞生成素治疗的疾患、和可用血小板生成素治疗的疾患组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面，提供调节血细胞(blood cell)形成的方法，所述方法通过给药于需要调节的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，调节血细胞形成选自由诱导造血作用、诱导造血干细胞(hematopoietic stem cell)增殖、诱导造血干细胞增殖和分化、诱导巨核细胞生成、诱导红细胞生成、诱导白细胞生成、诱导血小板生成、诱导浆细胞增殖、诱导树突细胞增殖和诱导巨噬细胞增殖组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面提供增强外周血干细胞动员的方法，所述方法通过给药于需要的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗代谢疾病或疾患的方法，所述方法通过给药于需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该代谢疾病或疾患选自由NIDDM、IDDM、糖尿、高血糖、高脂血症、和高胆固醇血症组成的组。
根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的方法，所述方法通过给药于需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
仍然根据本发明的另一个方面，提供提高血细胞刺激因子效应的方法，所述方法通过给药于需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该血细胞刺激因子选自由血小板生成素，红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面，提供在清髓受体增加捐献的血液干细胞集群的方法，所述方法通过在捐献和向受体移植供体血液干细胞前，给药于捐献血液干细胞的供体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，所述方法进一步包括在给受体移植血液干细胞前，用血细胞刺激因子处理捐献的血细胞，该血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面，提供在清髓受体增加捐献血液干细胞集群的方法，所述方法通过在给受体输入捐献的血液干细胞前，给药捐献液血干细胞的供体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，所述方法进一步包括在捐献和向受体移植血液干细胞前，用血细胞刺激因子处理供体，该血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面，提供在清髓受体增加血液干细胞集群的方法，所述方法通过在给受体移植血液干细胞前，以治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合处理该血液干细胞而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，所述方法进一步包括，在给受体移植血液干细胞前，用血细胞刺激因子处理该血液干细胞，该血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗与SARS感染源相关的疾患的方法，所述方法通过给药于需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该SARS感染因素是一种冠状病毒。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该冠状病毒是SARS-CoV。
根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗细菌性疾病或疾患的方法，所述方法通过给药于需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该肽是通过αS1酪蛋白断裂衍生的片段。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合是合成的肽。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合，其有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白或其组合衍生的肽组合是肽混合物。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽组合是嵌合肽，其包括以共价键连接的至少两个从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，该嵌合肽包括第一αS1酪蛋白肽，其有如SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白肽，其有如SEQ ID NO：1-33和434-4000任一列出的序列。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，所述方法进一步包括给药于需要其的主体有效量的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，所述方法进一步包括给药于需要其的主体有效量的红细胞生成素、血小板生成素或粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。
根据本发明的一个方面，提供预防或治疗自身免疫或感染性疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从αS1酪蛋白N末端部分衍生的肽和药学上可接受的载体。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该自身免疫或感染性疾病或疾患选自由病毒疾病、病毒感染、AIDS、和HIV感染组成的组。
根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗血液疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该血液疾病或疾患选自由血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、可用红细胞生成素治疗的疾患、和可用血小板生成素治疗的疾患以及可用粒细胞集落刺激因子治疗的疾患组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面，提供调节血细胞形成的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该调节血细胞形成选自由诱导造血作用、诱导造血干细胞增殖、诱导造血干细胞增殖和分化、诱导巨核细胞生成、诱导红细胞生成、诱导白细胞生成、诱导血小板生成、诱导粒细胞生成、诱导浆细胞增殖、诱导树突细胞增殖和诱导巨噬细胞增殖组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面，提供增强外周血干细胞动员的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗代谢疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该代谢疾病或疾患选自由NIDDM、IDDM、糖尿、高血糖、高脂血症、和高胆固醇血症组成的组。
仍然根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗由自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
仍然根据本发明的另一个方面，提供提高血细胞刺激因子作用的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，该血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
根据本发明的另一个方面，提供在清髓受体中增强捐献的血液干细胞集群的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据本发明的另一个方面，提供在清髓受体中增强血液干细胞集群的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
仍然根据本发明的另一个方面，提供治疗或预防适应症的药物组合物，所述适应症选自由自身免疫疾病或疾患、病毒疾病、病毒感染、血液疾病、血液缺陷、血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、高脂血症、高胆固醇血症、糖尿、高血糖、糖尿病、AIDS、HIV-1、辅助T-细胞紊乱、树突细胞缺陷、巨噬细胞缺陷、包括血小板、淋巴细胞、浆细胞以及中性粒细胞紊乱的造血干细胞紊乱、前白血病疾患(pre-leukemiccondition)、白血病疾患、由化疗或放疗引起的免疫系统紊乱、由于治疗免疫缺陷和细菌感染疾病引起的人免疫系统紊乱组成的组，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据本发明的另一个方面，提供治疗或预防适应症的药物组合物，所述适应症选自由血液疾病、血液缺陷、血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、树突细胞缺陷、巨噬细胞缺陷、包括血小板、淋巴细胞、浆细胞以及中性粒细胞紊乱的造血干细胞紊乱、前白血病疾患、白血病疾患、骨髓增生异常综合症、非骨髓恶性肿瘤、再生障碍性贫血和骨髓不足组成的组，所述药物组合物包括作为活性成分的血细胞刺激因子和从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
根据本发明的一个方面，提供纯化的肽，其有一种氨基酸序列，其选自由SEQ ID NO：1-33组成的组。
根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，其包括纯化的肽和药学上可接受的载体，该纯化的肽有一种氨基酸序列，其选自由SEQ IDNO：1-33组成的组。
根据本发明的另一个方面，提供纯化的嵌合肽，其包括以共价键连接的至少两个从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
仍然根据本发明的另一个方面，提供包括纯化的嵌合肽和药学上可接受的载体的药物组合物，该纯化的嵌合肽包括以共价键连接的至少两个从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该嵌合肽包括第一αS1酪蛋白肽，其有如SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白肽，其有如SEQ ID NO：1-33和434-4000任一列出的序列。
仍然根据本发明的另一个方面，提供包括血细胞刺激因子的药物组合物，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组，联合纯化的肽，其有一种氨基酸序列，其选自由SEQ ID NO：1-33组成的组，以及药学上可接受的载体。
仍然根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗与SARS感染因素相关的疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，该SARS感染因素是冠状病毒。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，该冠状病毒是SARS-CoV。
根据本发明的另一个方面，提供预防或治疗细菌感染的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，所述肽是通过αS1酪蛋白断裂的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的片段。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合是合成的肽。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽组合是肽的混合物。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽组合是嵌合肽，其包括以共价键连接的至少两个从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，该嵌合肽包括第一αS1酪蛋白肽，其有如SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白肽，其有如SEQ ID NO：1-33和434-4000任一列出的序列。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，所述药物组合物进一步包括作为活性成分的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，所述药物组合物进一步包括作为活性成分的血小板生成素、红细胞生成素或粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。
仍然根据本发明的另一个方面，提供酪蛋白蛋白水解的水解产物的低温处理的方法，所述方法通过获得包括蛋白水解酶的酪蛋白蛋白水解的水解产物，冷却酪蛋白蛋白水解的水解产物以钝化蛋白水解酶，调节酪蛋白的蛋白水解产物的pH到酸性pH，过滤酸性酪蛋白的蛋白水解产物，收集滤出液，进一步酸化滤出液以沉淀从天然酪蛋白得到的蛋白，分离和收集沉淀物，调节沉淀物的pH到碱性pH以不可逆地钝化蛋白水解酶；并调节沉淀物的pH到pH7-9而起作用，由此在低温下处理酪蛋白蛋白水解产物。
根据本发明的另一个方面，根据上述方法，提供在低温下处理的酪蛋白蛋白水解产物。
根据后面描述的本发明优选实施方式中的进一步特征，步骤b包括冷却到大约10℃。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，步骤c中的调节pH包括加入酸至2％(w/v)的酸，并且步骤d的进一步酸化滤出液包括加入更多的酸至大约10％(w/v)的酸。
仍然根据后面描述的本发明优选实施方式的进一步特征，步骤f的碱性pH至少是pH9。
本发明成功克服目前已知构造的短处，通过提供肽以治疗人类疾病，其中肽是从αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的N末端部分衍生的，单独或联合使用，没有可测试到的毒性并有高的疗效。
附图说明
本发明在此描述，只是通过例子并参考附图。现在在细节上对图有特别参考，这里强调细节的举出是通过例子，并且目的只是本发明优选的实施方式的说明性的讨论，并且提供是因为认为那些是最有用的和容易理解的本发明的原理和概念方面的描述。考虑到此，没有试图显示对本发明的基本理解没有必要的本发明的结构细节，参入到图的描述对本领域的技术人员是明显的，本发明的几种形式是怎样付诸实施的。
在图中：
图1描述通过从天然酪蛋白得到的肽在孵育的小鼠骨髓细胞中对自然杀伤(NK)细胞活性的刺激作用。在有或无100μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽的孵育中，培养的小鼠骨髓细胞对35S标记的YAC靶细胞的裂解，通过从YAC细胞释放到培养上清液的占总放射活性的部分表示(％释放35S)。图1代表效应子与靶细胞的比为25∶1和50∶1时NK的活性。
图2a和2b描述用从天然酪蛋白得到的肽在培养的人外周血干细胞(PBSC)中对自然杀伤(NK)细胞活性的刺激作用。没有用(0μg)或用递增的浓度(5-500μg/ml)的从天然酪蛋白得到的肽孵育中，用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)处理的供体来的培养的人PBSC对35S标记的K562靶细胞的裂解，是通过从K562细胞释放到培养上清液的占总放射活性的部分表示(％释放35S)。图2代表从同个病人得到的两个血液样品的NK活性，孵育于不同的效应子：靶细胞的比(100∶1和50∶1)。图2b代表从正常和受侵袭的供体得到的血液样品的NK活性，孵育于100∶1的效应子∶靶细胞的比。方块代表100∶1的效应子∶靶细胞的比，菱形代表50∶1的效应子：靶细胞的比。
图3a-3c描述从天然酪蛋白得到的肽对来自培养的人外周血干细胞(PBSC)的自然杀伤(NK)细胞和T-淋巴(T)细胞增殖的刺激作用。在有或无从天然酪蛋白得到的肽的孵育中，来自粒细胞集落刺激因子处理的供体的培养的PBSC的NK和T细胞的增殖，是用结合抗CD3/FITC荧光素抗T细胞抗体UCHT1，或抗CD56/RPE荧光素抗NK细胞抗体MOC-1(DAKOA/S Denmark)的细胞百分数(％)表示。对照是FITC和RPE-共轭的抗小鼠IgG抗体。图3a代表用(肽)或不用(对照)100μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽孵育10天后，结合荧光素抗体CD56(5个独立样品)的培养的人PBSC的百分数。图3b代表用(肽)或不用(对照)100μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽孵育14天后，结合荧光素抗CD3(T细胞)抗体的培养的人PBSC的百分数。图3c代表用(肽)或不用(对照)100μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽孵育28天后，结合荧光素抗CD3(T细胞)抗体、和同时结合CD3和CD56(T和NK样细胞)抗体的培养的人PBSC的百分数。
图4描述从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽对来自培养的人外周血干细胞(PBSC)的自然杀伤(NK)细胞活性的刺激作用。在不用(0μg)或用浓度递增的(10-500μg/ml)从酪蛋白衍生的合成的肽孵育的培养的人PBSC(来自乳腺癌病人)对35S标记的K562靶细胞的裂解，是通过从K562细胞释放到培养上清液的占总放射活性的部分表示(％释放)。肽代表αS1酪蛋白的N末端部分的前1-10(1a，菱形)、1-11(2a，方块)和1-12(3a，三角)氨基酸的N末端序列。
图5a-5c描述从天然酪蛋白得到的肽对多种来源的培养的人类细胞增殖的促进作用。用浓度递增的从天然酪蛋白得到的肽孵育培养的人类细胞14-21天后的增殖，是通过[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷掺入进每个样品的量表示。图5a代表用或不用(对照)50-600μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽孵育人外周血干细胞的2个样品(PBSC 1，方块，孵育15天；和PBSC 2，菱形，孵育20天)的标记物掺入。图5b代表用或不用(对照)50-600μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽孵育培养的人骨髓细胞21天后[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷的掺入。骨髓是由缓解的癌症病人(自体BM，封闭的方块、BM 1，三角、和BM 2，开放的方块)或健康志愿者(正常BM，菱形)捐献。图5c代表用或不用(对照)50-600μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽孵育培养的人脐带血细胞14天后[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷的掺入。脐带血分别由2个捐献者供给(C.B.1，三角、C.B.2，方块)。
图6显示一种表格，其描述来自人骨髓和脐带血的血祖细胞的增殖对用从天然酪蛋白得到的肽孵育的反应。反映培养细胞增殖的相对细胞数×104/ml，是通过如后面实施例部分的描述确定的。从健康志愿者(骨髓)和来自正常出生的脐带血(脐带血)得到的骨髓在生长因子和AB血清存在下用或不用浓度递增的从天然酪蛋白得到的肽(25-500μg/ml)培养13天(脐带血)和14天(骨髓)。
图7显示一种表格，其描述体外用从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽孵育对来自小鼠骨髓祖细胞的CFU-GEMM集落中的巨核细胞、红细胞、浆细胞和树突细胞(分类计数)相对分布的影响。通过从小鼠骨髓细胞生长的肉眼可见的集落来细胞计数，准备方法类似CFU-GEMM集落。细胞在由造血因子和25μg或更多的酪蛋白衍生的合成的肽的条件下培养14天。分类计数是通过每种细胞类型占总细胞的百分数表示。
图8描述用从天然酪蛋白得到的肽的治疗对清髓、骨髓移植的小鼠外周血白细胞重建的刺激作用。细胞计数代表白细胞的数量(×104/ml，当在血细胞计数器中计数)。小鼠(n＝6/组)接受亚致死剂量的放射并在一天后接受同基因骨髓移植(106细胞/小鼠)，并在一天后静脉注射1 mg/受体的从天然酪蛋白得到的肽(肽：方块)或1mg/受体的人血清白蛋白(对照：菱形)。
图9描述用从天然酪蛋白得到的肽的治疗对清髓、骨髓移植的小鼠血小板重建的刺激作用。血小板(PLT)计数代表血小板的数量(×106/ml，当在血细胞计数器中计数)。在第一天小鼠(n＝7或10/组)接受致死剂量的放射并接受同基因骨髓移植(106细胞/小鼠)，并静脉注射1mg/受体的从天然酪蛋白得到的肽(肽：菱形)或1mg/受体的人血清白蛋白(对照：方块)。
图10a-10f描述当用荧光显微镜记录时，FITC-共轭的从天然酪蛋白得到的肽在培养的人T-淋巴细胞中的穿透和核吸收。如后面实施例部分描述的，Sup-T1细胞用100μg/ml的FITC-共轭的从天然酪蛋白得到的肽培养。在表明的时间，细胞洗去标记，在福尔马林中固定并制备以用激光扫描共聚焦显微镜观察和记录。图10a到10f是连续的孵育时间中选择的细胞图，显示FITC-共轭的从天然酪蛋白得到的肽穿透Sup-T1细胞的细胞膜(图10a、10b)并在细胞核中聚集(图10c-10f)。
图11显示一种表格，其描述用从天然酪蛋白得到的肽培养对Sup-T1淋巴细胞的细胞增殖的刺激作用。Sup-T1细胞(5000/孔)用递增浓度的从天然酪蛋白得到的肽(50-1000μg/ml)培养，在表明的培养后的时间在它们的孔中计数，并用[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷标记18小时。增殖指数是用从天然酪蛋白得到的肽培养的细胞的平均[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷的摄入(三重样品)与没有用从天然酪蛋白得到的肽(对照)培养的细胞的掺入的比值。
图12显示一种表格，其描述从天然酪蛋白得到的肽对CEM淋巴细胞的HIV-1感染的抑制作用。如后面实施例部分描述的，CEM细胞或者与用从天然酪蛋白得到的肽预孵育3小时后(3小时)的HIV-1病毒接触，或者用递增浓度(50-1000μg/ml)的从天然酪蛋白得到的肽预孵育表明的小时数后(24和48小时)与HIV-1病毒接触。如后面实施例部分描述的，在感染后15天，细胞被计数数量并通过p24抗原分析法分析HIV-1感染的严重度。对照培养物是IF：CEM细胞没有用从天然酪蛋白得到的肽预处理就接触HIV-1病毒，和UIF：CEM细胞培养在没有从天然酪蛋白得到的肽的相同条件并且没有与HIV-1病毒接触。
图13显示一种表格，其描述从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽对CEM淋巴细胞的HIV-1感染的抑制作用。如后面实施例部分描述的，CEM细胞与HIV-1病毒接触，其用不同浓度的(10-500μg/ml)从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽(1P、3P和4P)预孵育3小时(肽存在)。如后面实施例部分描述的，在感染后7天，细胞被计数数量并通过p24抗原分析法分析HIV-1感染的严重度。对照培养物(IF)是CEM细胞接触HIV-1病毒，该病毒没有用从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽预处理，和UIF：CEM细胞培养在没有从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽的相同条件并且没有与HIV-1病毒接触。
图14描述从天然酪蛋白得到的肽对雌性非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠中I型(IDDM)糖尿病的预防作用。在治疗后365天中间隔地检测雌性NOD小鼠的糖尿，所述雌性NOD小鼠接受每周一次(三角)或两次(方块)100μg从天然酪蛋白得到的肽5周注射(总共5或10次注射)和未处理的对照。所有的对照发展了糖尿并接着死亡。
图15描述从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽对雌性C57BI/6小鼠中饮食引起的高胆固醇血症/高脂血症的减少作用。总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)通过每个样品混合两只(2)小鼠的血分析，样品来自高胆固醇血症/高脂血的小鼠，其接受(IP)酪蛋白衍生的肽B、C、2a或3P治疗，或没有治疗(对照)。“正常”样品代表没有喂食引起动脉粥样化饮食的对照小鼠。
图16显示一种表格，其描述注射从天然酪蛋白衍生的肽对癌症病人的造血刺激作用。如前面所述，从或者正在或已经接受化疗的5个女性癌症病人得到的外周血被计数总白细胞(WBC，x103)、血小板(PLT，x106)、红细胞(RBC，x103)和血红蛋白(gm/dl)，在肌内注射从天然酪蛋白衍生的肽之前(n)或之后(n+...)。病人1关于G.T.；病人2关于E.C.；病人3关于E.S.；病人4关于J.R.和病人5关于D.M.。
图17描述从天然酪蛋白得到的肽对伴有急性髓细胞性白血病(M-1)的抗血小板病人的血小板生成的刺激作用。血小板重建用外周血血小板含量(PLT，x106/ml)的变化来表示，在肌内注射(如后面实施例部分描述的)100mg从天然酪蛋白得到的肽后如前面所述在表明的间隔计数。
图18描述从天然酪蛋白得到的肽对伴有急性髓细胞性白血病(M-2)的抗血小板病人的血小板生成的刺激作用。血小板重建用外周血血小板含量(PLT，x106/ml)的变化来表示，在肌内注射(如后面实施例部分描述的)100mg从天然酪蛋白得到的肽后如前面所述在表明的间隔计数。
图19显示一种表格，其描述从αS1-、αS2-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽孵育对小鼠骨髓祖细胞的CFU-GM集落中粒细胞和单核细胞集落形成的造血因子刺激作用的协同作用。通过从小鼠骨髓细胞生长的肉眼可见的集落来细胞计数，准备方法类似前面描述的CFU-GEMM集落。细胞孵育14天于造血因子细胞因子(IL-3)和集落刺激因子(G-CSF)，以及25μg或更多的从酪蛋白衍生的合成的肽(J)，其代表αS1-酪蛋白的氨基酸1-22(SEQ ID No.21)、或30-4，其代表αS1-酪蛋白的氨基酸1-6(SEQ IDNo.5)，单独或联合使用。集落形成(CFU)的刺激作用是用种植的105MNC中每个集落的髓细胞数表示的。注意暴露于G-CSF、IL-3和任一从酪蛋白衍生的合成的肽的培养物中髓细胞形成的协同增加。
图20显示一种表格，其描述从αS1-、αS2-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽孵育对人骨髓祖细胞的CFU-GM集落中粒细胞和单核细胞集落形成的造血因子刺激作用的协同作用。通过从人骨髓细胞生长的肉眼可见的集落来细胞计数，准备方法类似前面描述的CFU-GEMM集落。细胞孵育于造血因子细胞因子(IL-3)和集落刺激因子(G-CSF)，以及25μg或更多的从酪蛋白衍生的合成的肽：肽J，其代表αS1-酪蛋白的氨基酸1-22(SEQ IDNO.21)，或β-酪蛋白，其代表β-酪蛋白的氨基酸193-208(SEQ ID No.28)。人骨髓祖细胞暴露于酪蛋白衍生的肽14天。集落形成(CFU)的刺激作用是用种植的105MNC中每个集落的髓细胞数表示的。注意暴露于G-CSF、IL-3和从β-酪蛋白和αS1-酪蛋白N末端片段衍生的合成的肽的培养物中髓细胞形成的协同增加(用100μg/ml的肽J＞50％，用300μg/ml的合成的β-酪蛋白＞30％)。
图21显示一种表格，其描述用从αS1-、αS2-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽培养对小鼠骨髓祖细胞的CFU-GEMM集落中巨核细胞生成的影响。通过从小鼠骨髓细胞生长的肉眼可见的集落来细胞计数，准备方法类似前面描述的CFU-GEMM集落。细胞孵育14天于25μg或更多的从酪蛋白衍生的合成的肽：合成的β-酪蛋白(SEQ ID NO：28)、合成的κ-酪蛋白(SEQ IDNO：30)、以及从酪蛋白衍生的合成的肽，其代表αS1-酪蛋白的氨基酸1-22(J)(SEQ ID No.21)。巨核细胞形成的刺激作用是用巨核细胞百分比表示的(分类计数)。注意从αS1-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽对早期(E.MK)巨核细胞形成的显著作用。
图22显示一种表格，其描述用从αS1-、αS2-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽体外培养对小鼠骨髓祖细胞的GEMM集落生长的作用。通过从小鼠骨髓细胞生长的肉眼可见的集落来细胞计数，准备方法类似前面描述的CFU-GEMM集落。细胞孵育8天于造血因子、和25μg/ml合成的β-酪蛋白(193-208)(SEQ ID NO：28)或合成的κ-酪蛋白(106-127)(SEQ ID NO：30)、或两个合成肽(β+κ)的联合。集落形成的刺激作用是用CFU-GEMM的数量与对照相比表示的。注意合成的β-和合成的κ-酪蛋白肽对GEMM集落形成的显著影响，以及合成的β-和合成的κ-酪蛋白联合的协同作用。
图23显示一种表格，其描述用合成的肽[β-酪蛋白(193-208)(SEQ IDNO：28)和κ-酪蛋白(106-127)(SEQ ID NO：30)]和合成的αS1-酪蛋白[肽J，(SEQ ID NO：21)，其代表α-S1酪蛋白氨基酸1-22]治疗对清髓的、骨髓移植的小鼠血小板重建的刺激作用。细胞计数代表血小板的数量(×103/mm3，如在库尔特粒度仪中计数的)。小鼠(n＝5/组)接受亚致死放射并在一天后接受同基因骨髓移植(3×106细胞/小鼠)，并在一天后静脉注射1mg/受体的合成的β-酪蛋白；合成的κ-酪蛋白或合成的肽J(SEQ ID NO：21)，其代表α-S1酪蛋白氨基酸1-22，或1mg/受体的人血清白蛋白(对照)。注意清髓10天后合成的β-酪蛋白、κ-酪蛋白和合成的肽J对血小板重建的强的作用(＞25％的增加)。
图24描述用从αS1-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽治疗对清髓的、骨髓移植的小鼠外周血白细胞重建的刺激作用。细胞计数代表白细胞的平均值(/ml，如在血细胞计数器中计数的)。小鼠(n＝5/组)接受亚致死放射并在一天后接受同基因骨髓移植(3×106细胞/小鼠)，并在一天后静脉注射1mg/受体的用凝胶过滤制备的从天然酪蛋白衍生的α-S1或κ肽(α-S11-23和κ106-169)、从α-S1酪蛋白衍生的合成的肽(SEQ ID NO：21)或β酪蛋白(193-208，SEQ ID NO：28)，或1mg/受体的人血清白蛋白(白蛋白)。注意在重建后5天和7天时从αS1-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽对白细胞重建的显著增强作用。
图25描述用从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽联合治疗对清髓的、骨髓移植的小鼠外周血白细胞重建的刺激作用。细胞计数代表白细胞的平均值(×104/ml，如在血细胞计数器中计数的)。小鼠(n＝5/组)接受亚致死放射并在一天后接受同基因骨髓移植(106细胞/小鼠)，并在一天后静脉注射1mg/受体的从αS1-酪蛋白(J，SEQ ID NO：21)或β-酪蛋白(193-208，SEQ IDNO：28)衍生的合成的肽，以及其联合[α-S1-(J)和β酪蛋白每个0.5mg]或盐制剂(Saline)。注意在重建后10和12天从αS1-和β酪蛋白衍生的肽的联合对白细胞重建的显著增强作用。
图26a-26i是表格，其描述代表性系列的嵌合肽，其包括αS1-酪蛋白(SEQ ID NO：25)和β-酪蛋白(SEQ ID NO：28)的N-末端序列的氨基酸序列。
优选实施方式的描述
本发明关于从乳酪蛋白的αS1-、αS2-、β-或κ-酪蛋白片段序列衍生的或与它们相似的生物活性肽，包括其的组合物以及应用其的方法，例如用于刺激和增强免疫应答、防止病毒感染、常化血清胆固醇水平、和刺激造血作用。酪蛋白衍生肽是无毒的，并能用于治疗和预防例如免疫病理、高胆固醇血症、血液疾病和病毒相关的疾病。
本发明的原理和操作参考图和附随的描述可理解得更好。
在详细解释本发明的至少一个实施方式前，应理解本发明是不限于后面的描述或作为例子的实施例的细节的应用。本发明能以其它实施方式或通过多种方式实践或执行。应理解这里所用的措辞和术语是为了描述的目的而不应作为限制。
如在此所用，术语“治疗”基本包括抑制、减缓或逆转疾病的进程，和/或基本改善疾病的临床症状。
如在此所用，术语“预防”基本包括预防疾病临床症状的出现。
如在此所用，术语“肽”包括天然的肽(或者是降解产物、合成地合成的肽或重组肽)和肽模拟物(peptido-mimetics)(典型地为合成地合成的肽)，例如类肽和半类肽，其是肽的类似物，其可能有例如修饰，其使肽在体内更稳定。这样的修饰包括但不限于环化、N末端修饰、C末端修饰、肽键修饰、主链修饰和残基修饰，肽键修饰包括但不限于CH2-NH、CH2-S、CH2-S＝O、O＝C-NH、CH2-O、CH2-CH2、S＝C-NH、CH＝CH、或CF＝CH。制备肽模拟物化合物的方法在本领域是很已知的，并且被详细说明，例如在Quantitative Drug Design，C.A.Ramsden Gd.，Chapter 17.2，F.ChoplinPergamon Press(1992)中，其被并入作为参考，如同在此详述。这方面的进一步细节提供在后面。
因此根据本发明的肽可以是环肽。环化可通过例如酰胺键形成获得，例如通过在链中不同的部位(-CO-NH或-NH-CO键)掺入谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、赖氨酸(Lys)、鸟氨酸(Orn)、二氨基酪(Dab)酸、二氨基丙(Dap)酸。主链对主链的环化可通过修饰的氨基酸的掺入而获得，修饰的氨基酸的公式为H-N((CH2)n-COOH)-C(R)H-COOH或H-N((CH2)n-COOH)-C(R)H-NH2，其中n＝1-4，并且进一步其中R是氨基酸的任何天然或非天然的支链。
通过两个半胱氨酸残基的掺入形成S-S键而环化也是可能的。更多的支链对支链的环化可通过公式-(-CH2-)n-S-CH2-C-的相互作用键的形成而获得，其中n＝1或2，其是可能的，例如通过掺入半胱氨酸(Cys)或同半胱氨酸(homoCys)并用它的自由SH基团与例如溴代乙酰化的Lys、Orn、Dab或Dap反应。
肽内的肽键可被取代，例如被N-甲基化键(-N(CH3)-CO-)、酯键(-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-)、酮基甲基化键(-CO-CH2-)、α-氮杂(α-aza)键(-NH-N(R)-CO-)，其中R是任意烷基，例如甲基、卡巴键(carba bonds)(-CH2-NH-)、羟基乙烯键(-CH(OH)-CH2-)、硫代酰胺键(-CS-NH-)、烯双键(-CH＝CH-)、反式酰胺(retro amide)键(-NH-CO-)、肽衍生键(-N(R)-CH2-CO-)，其中R是“正常”的侧链，天然地连接在碳原子上。
这些修饰可发生在肽链的任何键，并且同时可是多个(2-3)。
天然的芳香氨基酸，Trp、Tyr和Phe，可被取代用于合成的非天然酸例如TIC、naphthylelanine(Nol)、Phe的环甲基化衍生物、Phe或甲基-Tyr的卤代衍生物。
以下的表1-2列举所有天然发生的氨基酸(表1)和非传统的或修饰的氨基酸(表2)。
表1
氨基酸 3字母缩写  单字母符号
丙氨酸 Ala  A
精氨酸 Arg  R
天冬酰胺 Asn  N
天门冬氨酸 Asp  D
半胱氨酸 Cys  C
谷氨酰胺 Gln  Q
谷氨酸 Glu  E
甘氨酸 Gly  G
组氨酸 His  H
异亮氨酸 Iie  I
亮氨酸 Leu  L
赖氨酸 Lys  K
甲硫氨酸 Met  M
苯丙氨酸 Phe  F
脯氨酸 Pro  P
丝氨酸 Ser  S
苏氨酸 Thr  T
色氨酸 Trp  W
酪氨酸 Tyr  Y
缬氨酸 Val  V
任意如以上的氨基酸 Xaa  X
表2
非传统氨基酸   代码 非传统氨基酸 代码
α-丁氨酸 Abu  L-N-甲基丙氨酸 Nmala
α-氨基-α-甲基丁酸 Mgabu  L-N-甲基精氨酸 Nmarg
环丙氨酸- Cpro  L-N-甲基天冬酰胺 Nmasn
羧化物  L-N-甲基天冬氨酸 Nmasp
异丁氨酸 Aib  L-N-甲基半胱氨酸 Nmcys
氨基降冰片基(norbornyl)- Norb  L-N-甲基谷氨酰胺 Nmgin
羧化物  L-N-甲基谷氨酸 Nmglu
环己基丙氨酸 Chexa  L-N-甲基组氨酸 Nmhis
环戊丙氨酸 Cpen  L-N-甲基异亮氨酸 Nmile
D-丙氨酸 Dal  L-N-甲基亮氨酸 Nmleu
D-精氨酸 Darg  L-N-甲基赖氨酸 Nmlys
D-天门冬氨酸 Dasp  L-N-甲基甲硫氨酸 Nmmet
D-半胱氨酸 Dcys  L-N-甲基正亮氨酸 Nmnle
D-谷氨酰胺 Dgln  L-N-甲基正缬氨酸 Nmnva
D-谷氨酸 Dglu  L-N-甲基鸟氨酸 Nmorn
D-组氨酸 Dhis  L-N-甲基苯丙氨酸 Nmphe
D-异亮氨酸 Dile  L-N-甲基脯氨酸 Nmpro
D-亮氨酸 Dieu  L-N-甲基丝氨酸 Nmser
D-赖氨酸 Dlys  L-N-甲基苏氨酸 Nmthr
D-甲硫氨酸 Dmet  L-N-甲基色氨酸 Nmtrp
D-鸟氨酸 Dorn  L-N-甲基酪氨酸 Nmtyr
D-苯丙氨酸 Dphe  L-N-甲基缬氨酸 Nmval
D-脯氨酸 Dpro  L-N-甲基乙基甘氨酸 Nmetg
D-丝氨酸 Dser  L-N-甲基叔丁酰甘氨酸 Nmtbug
D-苏氨酸 Dthr  L-正亮氨酸 Nle
D-色氨酸 Dtrp  L-正缬氨酸 Nva
D-酪氨酸 Dtyr  α-甲基-氨基异丁酸 Maib
D-缬氨酸 Dval  α-甲基-γ-氨基丁酸 Mgabu
D-α-甲基丙氨酸 Dmala  α-甲基环己基丙氨酸 Mchexa
D-α-甲基精氨酸 Dmarg  α-甲基环戊丙氨酸 Mcpen
D-α-甲基天冬酰胺 Dmasn  α-甲基-α-萘基(napthyl)丙氨酸 Manap
D-α-甲基天冬氨酸 Dmasp  α-甲基青霉胺 Mpen
D-α-甲基半胱氨酸 Dmcys  N-(4-氨基丁基)甘氨酸 Nglu
D-α-甲基谷氨酰胺 Dmgln  N-(2-氨基乙基)甘氨酸 Naeg
D-α-甲基组氨酸 Dmhis  N-(3-氨基丙基)甘氨酸 Norn
D-α-甲基异亮氨酸 Dmile  N-氨基-α-甲基丁酸 Nmaabu
D-α-甲基亮氨酸 Dmleu  α-萘基(napthyl)丙氨酸 Anap
D-α-甲基赖氨酸 Dmlys  N-苯甲基甘氨酸 Nphe
D-α-甲基甲硫氨酸 Dmmet  N-(2-氨甲酰基乙基)甘氨酸 Ngln
D-α-甲基鸟氨酸 Dmorn  N-(氨甲酰基甲基)甘氨酸 Nasn
D-α-甲基苯丙氨酸 Dmphe  N-(2-羧基乙基)甘氨酸 Nglu
D-α-甲基脯氨酸 Dmpro  N-(羧基甲基)甘氨酸 Nasp
D-α-甲基丝氨酸 Dmser  N-环丁基甘氨酸 Ncbut
D-α-甲基苏氨酸 Dmthr  N-环庚基甘氨酸 Nchep
D-α-甲基色氨酸 Dmtrp  N-环己基甘氨酸 Nchex
D-α-甲基酪氨酸 Dmty  N-环癸基甘氨酸 Ncdec
D-α-甲基缬氨酸 Dmval  N-环十二基(dodecl)甘氨酸 Ncdod
D-α-甲基丙氨酸 Dnmala  N-环辛基甘氨酸 Ncoct
D-α-甲基精氨酸 Dnmarg  N-环丙基甘氨酸 Ncpro
 D-α-甲基天冬酰胺 Dnmasn  N-环十一基甘氨酸 Ncund
 D-α-甲基天冬氨酸 Dnmasp  N-(2，2-二苯乙基)甘氨酸 Nbhm
 D-α-甲基半胱氨酸 Dnmcys  N-(3，3-二苯丙基)甘氨酸 Nbhe
 D-N-甲基亮氨酸 Dnmleu  N-(3-吲哚基(indolyly)乙基)甘氨酸 Nhtrp
 D-N-甲基赖氨酸 Dnmlys  N-甲基-γ-氨基丁酸 Nmgabu
 N-甲基环己基丙氨酸 Nmchexa  D-N-甲基甲硫氨酸 Dnmmet
 D-N-甲基鸟氨酸 Dnmom  N-甲基环戊丙氨酸 Nmcpen
 N-甲基甘氨酸 Nala  D-N-甲基苯丙氨酸 Dnmphe
 N-甲基氨基异丁酸 Nmaib  D-N-甲基脯氨酸 Dnmpro
 N-(1-甲基丙基)甘氨酸 Nile  D-N-甲基丝氨酸 Dnmser
 N-(2-甲基丙基)甘氨酸 Nile  D-N-甲基丝氨酸 Dnmser
 N-(2-甲基丙基)甘氨酸 Nleu  D-N-甲基苏氨酸 Dnmthr
 D-N-甲基色氨酸 Dnmtrp  N-(1-甲基乙基)甘氨酸 Nva
 D-N-甲基酪氨酸 Dnmtyr  N-甲基α-萘基(napthyl)丙氨酸 Nmanap
 D-N-甲基缬氨酸 Dnmval  N-甲基青霉胺 Nmpen
 γ-丁氨酸 Gabu  N-(对羟苯基)甘氨酸 Nhtyr
 L-t-丁酰甘氨酸 Tbug  N-(硫代甲基)甘氨酸 Ncys
 L-乙基甘氨酸 Etg 青霉胺 Pen
 L-同苯丙氨酸 Hphe  L-α-甲基丙氨酸 Mala
 L-α-甲基精氨酸 Marg  L-α-甲基天冬酰胺 Mash
 L-α-甲基天冬氨酸 Masp  L-α-甲基叔丁基甘氨酸 Mtbug
 L-α-甲基半胱氨酸 Mcys  L-甲基乙基甘氨酸 Metg
 L-α-甲基谷氨酰胺 Mgln  L-α-甲基谷氨酸 Mglu
 L-α-甲基组氨酸 Mhis  L-α-甲基同苯丙氨酸 Mhphe
 L-α-甲基异亮氨酸 Mile  N-(2-甲基硫代乙基)甘氨酸 Nmet
 D-N-甲基谷氨酰胺 Dnmgln  N-(3-胍基丙基)甘氨酸 Narg
 D-N-甲基谷氨酸 Dnmglu  N-(1-羟基乙基)甘氨酸 Nthr
 D-N-甲基组氨酸 Dnmhis  N-(羟基乙基)甘氨酸 Nser
 D-N-甲基异亮氨酸 Dnmile  N-(咪唑基乙基)甘氨酸 Nhis
 D-N-甲基亮氨酸 Dnmleu  N-(3-吲哚基乙基)甘氨酸 Nhtrp
 D-N-甲基赖氨酸 Dnmlys  N-甲基-γ-氨基丁酸 Nmgabu
 N-甲基环己基丙氨酸 Nmchexa  D-N-甲基甲硫氨酸 Dnmmet
 D-N-甲基鸟氨酸 Dnmorn  N-甲基环戊丙氨酸 Nmcpen
 N-甲基甘氨酸 Nala  D-N-甲基苯丙氨酸 Dnmphe
 N-甲基氨基异丁酸 Nmaib  D-N-甲基脯氨酸 Dnmpro
 N-(1-甲基丙基)甘氨酸 Nile  D-N-甲基丝氨酸 Dnmser
 N-(2-甲基丙基)甘氨酸 Nleu  D-N-甲基苏氨酸 Dnmthr
 D-N-甲基色氨酸 Dnmtrp  N-(1-甲基乙基)甘氨酸 Nval
 D-N-甲基酪氨酸 Dnmtyr  N-甲基-萘基(napthyl)丙氨酸 Nmanap
 D-N-甲基缬氨酸 Dnmval  N-甲基青霉胺 Nmpen
γ-氨基丁酸 Gabu  N-(对羟苯基)甘氨酸 Nhtyr
 L-叔丁基甘氨酸 Tbug  N-(硫代甲基)甘氨酸 Ncys
 L-乙基甘氨酸 Etg  青霉胺 Pen
 L-同苯丙氨酸 Hphe  L-α-甲基丙氨酸 Mala
 L-α-甲基精氨酸 Marg  L-α-甲基天冬酰胺 Masn
 L-α-甲基天冬氨酸 Masp  L-α-甲基叔丁基甘氨酸 Mtbug
 L-α-甲基半胱氨酸 Mcys  L-甲基乙基甘氨酸 Metg
 L-α-甲基谷氨酰胺 Mgln  L-α-甲基谷氨酸 Mglu
 L-α-甲基组氨酸 Mhis  L-α-甲基同苯丙氨酸 Mhphe
 L-α-甲基异亮氨酸 Mile  N-(2-甲基硫代乙基)甘氨酸 Nmet
 L-α-甲基亮氨酸 Mleu  L-α-甲基赖氨酸 Mlys
 L-α-甲基甲硫氨酸 Mmet  L-α-甲基正亮氨酸 Mnle
 L-α-甲基正缬氨酸 Mnva  L-α-甲基鸟氨酸 Morn
 L-α-甲基苯丙氨酸 Mphe  L-α-甲基脯氨酸 Mpro
 L-α-甲基丝氨酸 Mser  L-α-甲基苏氨酸 Mthr
 L-α-甲基缬氨酸 Mtrp  L-α-甲基酪氨酸 Mtyr
 L-α-甲基亮氨酸 MvalNnbhm  L-N-甲基同苯丙氨酸 Nmhphe
 N-(N-(2，2-二苯乙基) N-(N-(3，3-二苯丙基)
氨甲酰基甲基-甘氨酸 Nnbhm 氨甲酰基甲基(1)甘氨酸 Nnbhe
 1-羧基-1-(2，2-联二苯乙基氨)环丙烷 Nmbc
根据本发明的肽可以自身的形式或是例如蛋白的一部分，以及是展示细菌和展示噬菌体的展示部分。本发明的肽也可是化学修饰的，以提供活性的二聚体或多聚体，在一个多肽链中或共价交联的链中。
另外，根据本发明的肽包括至少两个，任选地至少三个，任选地至少四个，任选地至少五个，任选地至少六个，任选地至少七个，任选地至少八个，任选地至少九个，任选地至少十个，任选地至少十一个，任选地至少十二个，任选地至少十三个，任选地至少十四个，任选地至少十五个，任选地至少十六个，任选地至少十七个，任选地至少十八个，任选地至少十九个，任选地至少二十个，任选地至少二十一个，任选地至少二十二个，任选地至少二十三个，任选地至少二十四个，任选地至少二十五个，任选地至少二十六个，任选地在二十七个和六十之间，或更多氨基酸残基(在此也可互换地称作氨基酸)。
相应地，如在此所用的术语“氨基酸”或“氨基酸(复数形式)”是可以理解包括20种天然发生的氨基酸；体内经常在翻译后被修饰的那些氨基酸，包括例如羟脯氨酸、磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸；以及其它稀有氨基酸，包括但不限于2-氨基己二酸、羟赖氨酸、异锁链(赖氨)素、正缬氨酸、正亮氨酸和鸟氨酸。进一步，术语“氨基酸”包括D-和L-氨基酸。
如在此所用的短语“从α、β-或κ-酪蛋白衍生的”，指如此术语在此定义的肽，例如α、β-或κ-酪蛋白的分裂产物(在此指从天然酪蛋白得到的肽)，根据α、β-或κ-酪蛋白的氨基酸序列化学合成的合成的肽(在此指从酪蛋白衍生的合成的肽)，与αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白类似(同源)的肽，例如以一个或多个氨基酸取代为特征的肽，例如但不限于允许的取代，假如保留至少70％，优选地至少80％，更优选地至少90％的相似性，及其功能同族体。术语“同源物”和“功能同源物”意思是肽，其有任何插入、缺失和取代，其不影响肽的生物活性。
如在此所用，术语“从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽及其组合”也指以上提及的肽相互的组合。如在此所用，短语“其组合”指任何以上提及的肽，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的，以混合物联合和/或与一个或多个其它的、不一样的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的嵌合肽。如在此所用，术语“混合物”指非共价联合的肽以相互可变的比例存在，而术语“嵌合肽”指至少两个同样或不一样的肽相互共价粘附。这种粘附可以是任何合适的化学键，直接的或非直接的，如通过肽键、或通过共价键连接介入联结子，例如联结肽或其它化学部分，例如有机聚合物。这样的嵌合肽可连接，通过肽的羧基(C)或氨基(N)末端的连接，或通过内部化学基团的连接，例如直的、分支的或环的支链、内部碳原子或氮原子，以及类似的。依据本发明优选的实施方式，嵌合肽包括从α-S1酪蛋白的N末端衍生的肽，如SEQID NO：1-25中的任何一个列出的，通过羧基(C)末端与提出的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的SEQ ID NO：1-33和434-4000中的任以列出序列的氨基(N)末端连接。SEQ ID NO：434-4000代表从天然酪蛋白衍生的主要和次要的肽衍生的肽的至少2个氨基酸的所有可能的肽，天然酪蛋白如以下描述的(SEQ ID NO：25、和27-33)。可以理解，在进一步的实施方式中本发明的嵌合肽能包括有氨基酸序列如在SEQ ID NO：1-33和34-4000中列出的肽，其共价结合任何另一个有氨基酸序列如在SEQ ID NO：1-33和34-4000中任一列出的肽的所有可能的排列。这样的嵌合肽容易被鉴别和制备，通过本领域一种通常技术，使用肽合成和/或肽共价连接的方法，从SEQ IDNO：1-33和34-4000列出的氨基酸序列的肽的任何大量或有限数量的组合。这样的嵌合肽的非限定例子包括从α-S1酪蛋白衍生的肽的排列，指定为SEQ ID NO：34-433，在以下的图26中显示，从α-S1酪蛋白衍生的肽如SEQ ID NO：1-25列出的，其共价连接从β-酪蛋白衍生的肽，其如SEQ IDNO：27和28列出的。
本发明的嵌合肽可通过重组方法或可通过化学合成方法生成，例如通过使用固相肽合成技术，以指定的顺序，逐步添加一种或多种氨基酸残基。肽可能需要与其它蛋白联合合成，并随后通过化学裂解分离，或可选择地，肽或多价肽可通过多重复单位合成。肽可包括天然发生的氨基酸残基或也可包括非天然发生的氨基酸残基，例如某些右旋异构体或化学修饰的天然发生的残基。后者残基在例如协助或提供肽构象约束和/或限制是需要的。目标肽合成方法的选择依赖因子例如所需类型、肽的质量和纯度以及生成的容易程度和方便。
本发明的嵌合肽可能首先需要它们的化学修饰以用于体内。目标肽的化学修饰对改进它们的生物活性非常重要。这样化学修饰的嵌合肽在此指为“类似物”。术语“类似物”延伸到本发明的嵌合肽的任何功能化学的或重组的同等物，在最优选的实施方式中特征为它们有至少一种以上提及的生物活性。术语“类似物”在此也用于延伸到从如前面所述的肽衍生的任何氨基酸。
在此预期的嵌合肽的类似物包括但不限于在肽合成过程中支链的修饰、掺入非天然的氨基酸和/或它们的衍生物，以及交联剂的使用，以及对肽或它们的类似物起到构象约束的其它方法。
本发明预期的支链修饰的例子包括氨基基团的修饰例如通过与乙醛反应随后被NaBH4还原而还原烷基；用甲基乙酰亚氨盐脒化；用醋酸酐酰基化；用氰酸盐对氨基基团氨甲酰化；用2，4，6-三硝基苯硫酸(TNBS)对氨基基团三硝基苯化；用琥珀酸酐和四氢邻苯二甲酸酐对氨基基团酰基化；用吡哆醛-5′-磷酸随后用NaBH4还原对赖氨酸吡醇羟乙基化。
精氨酸残基的胍基可通过用试剂例如2，3-丁二酮、苯乙二醛和乙二醛形成杂环缩合物而修饰。
羧基基团可通过碳化二亚胺活化而修饰，其通过O-非环尿素(acylisourea)形成，而后顺序根据例如相应的酰胺衍生。
水合磺基(sulphydryl)可通过例如用碘乙酸或碘乙酰胺的羧甲基化；对磺丙氨酸的过氧甲酸氧化；用其它巯基化合物形成混合的二硫化物；与马来酰亚胺、马来酸酐或马来酰亚胺的其它取代物反应；用4-氯汞苯甲酸、4-氯汞苯硫酸、苯汞氯化物、2-氯汞-4-硝基酚以及其它汞制剂形成汞的衍生物；在碱性pH与氰酸盐氨甲酰化的方法修饰。
色氨酸残基可被修饰，例如与2-羟基-5-硝基苄基溴化物或苯磺卤化物反应，吲哚环的N-溴代琥珀酰亚胺化或烷化而氧化。在另一方面，酪氨酸残基可用四硝基甲烷硝化形成3-硝基酪氨酸衍生物而改变。
组氨酸残基的咪唑环的修饰可通过与碘乙酸衍生物的烷基化或与焦碳酸二乙酯的N-乙酯化而完成。
在肽合成中掺入非天然氨基酸和衍生物的例子包括但不限于，使用正亮氨酸、4-氨基丁酸、4-氨基-3-羟基-5-苯戊酸、6-氨基己酸、叔丁基甘氨酸、正缬氨酸、苯基甘氨酸、鸟氨酸、肌氨酸、4-氨基-3-羟基-6-甲基辛酸、2-噻吩基丙氨酸和/或氨基酸的右旋异构体。
如在此所用，短语“从αS1酪蛋白N末端片段衍生的”指如此术语的肽，是在此定义为例如αS1酪蛋白的裂解产物(在此指从天然酪蛋白得到的肽)、根据αS1酪蛋白N末端片段的氨基酸序列化学合成的合成的肽(在此指从酪蛋白衍生的合成的肽)、与αS1酪蛋白N末端片段相似的肽(类似物)，例如以一个或多个氨基酸取代为特征的肽，例如但不限于保留取代，假如保留至少70％、优选至少80％、更优选地90％的相似性，及其结构同源性。术语“类似物”和“功能类似物”如在此所用意思是肽，其有任何插入、缺失和取代，并不影响肽的生物活性。
如在此所用，短语“从α、β-或κ-酪蛋白衍生的”指肽，如此术语在此定义的，例如α、β-或κ-酪蛋白的裂解产物(在此指从天然酪蛋白得到的肽)、根据α、β-或κ-酪蛋白的氨基酸序列化学合成的合成的肽(在此指从α、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽)、与α、β-或κ-酪蛋白相似的肽(类似物)，例如以一个或多个氨基酸取代为特征的肽，例如但不限于保留取代，假如保留至少70％、优选至少80％、更优选地90％的相似性，及其结构同源性。术语“类似物”和“功能类似物”如在此所用意思是肽，其有任何插入、缺失和取代，并不影响肽的生物活性。
如在此所用，术语“α-酪蛋白”、“β-酪蛋白”和“κ-酪蛋白”指哺乳动物的“αS1-酪蛋白”、“αS2-酪蛋白”、“β-酪蛋白”和“κ-酪蛋白”，哺乳动物包括但不限于家畜哺乳动物(例如奶牛、绵羊、山羊、母马、骆驼、鹿和水牛)、人类和海洋哺乳动物。以下提供了已知序列的αS1-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的目录，通过它们的GenBank(NCBI)AccessionNo和来源鉴别：αS1酪蛋白：CAA26982(Ovis aries(绵羊))、CAA51022(Capra hircus(山羊))、CAA42516(Bos taurus(牛))、CAA55185(Homo sapiens(人类))、CAA38717(Sus scrofa(猪))、P09115(兔子)和097943(Camelus dromedurius(骆驼))；β-酪蛋白：NP 851351(Bostaurus(牛))、NP 058816(Rattus norvegicus(大鼠))、NP 001882(Homosapiens(人类))、NP 034102(Mus musculus(小鼠))、CAB39313(Caprahircus(山羊))、CAA06535(Bubalus bubalis(水牛))、CAA38718(Sus scrofa(猪))、BAA95931(Canis familiaris(狗))、和CAA34502(Ovis aires(绵羊))；κ-酪蛋白：NP 776719(Bos taurus(牛))、NP113750(Rattus norvegicus(大鼠))、NP 031812(Mus musculus(小鼠))、NP 005203(Homo sapiens(人类))和AAM12027(Capra hircus(山羊))。
如在此所用，术语“N末端部分”指从αS1-酪蛋白的前60个氨基酸衍生的αS1-酪蛋白的M个氨基酸，其中M是2和60之间的任何整数(包括整数2和60)。优选地，术语指αS1-酪蛋白的第一个M氨基酸。
如前所述，本发明的肽可通过从奶提取而获得，或通过固相肽合成，其是本领域技术人员的标准方法。本发明肽的纯化通过标准技术实施，其对本领域技术人员是已知的，例如高效液相色谱法(HPLC)、在刚性纤维素膜(微孔(Millipore))上透析过滤和凝胶过滤。乳酪蛋白断裂以获得本发明的肽可用多种酶和/或化学方法起作用，如后面所述。
如后面进一步详细描述和在实施例部分示范，本发明的肽有多种治疗作用。在实施例部分，提供多种分析，本领域的一名普通技术人员用其能测试根据本发明的教导为特定的治疗效果设计的肽。任何在此描述的肽本身给药或配制到一种药物组合物，其用于治疗或预防疾病。这样的组合物包括作为活性成分的在此所述的任何肽和药学上可接受的载体。
如在此所用，“药物组合物”指一种或多种在此所述的肽和其它化学成分例如药物合适载体和辅料的制剂。药物组合物的目的是协助给药复合物到有机体。
以下，术语“药学上可接受的载体”指载体或稀释剂，其不引起对有机体显著的刺激，不消除给药的复合物的生物活性和性质。没有限制，载体的例子是丙二醇、盐、乳剂和有机溶剂与水的混合物。在此，术语“辅料”指添加到药物组合物的插入物质，以促进复合物的给药。没有限制，辅料的例子包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖和多种形式的淀粉、纤维素衍生物、明胶、蔬菜油和聚乙二醇。
药物制剂和给药的技术可参考“Remington′s Pharmaceutical Sciences，”Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版。
合适的给药途径包括例如口腔、直肠、跨粘膜、经皮肤、肠内或胃肠外递送，包括肌内、皮下和髓内注射、以及鞘内、直接心室内、静脉、腹膜内、鼻内或眼内注射。
本发明的药物组合物可通过本领域熟知的过程生产，例如通过传统的混合、溶解、粒化、糖衣片制作、磨细、乳化、包入胶囊、包埋或冻干方法。
根据本发明的应用的药物组合物因此可通过传统方式按配方制造，其使用一种或多种包括辅料和辅件的药学上可接受的载体，其有利于活性肽加工成制剂，其可用于药物上。合适的制剂依赖于给药途径的选择。
对于注射，本发明的肽可按配方制造于水溶液，优选地在生理相容性缓冲液中例如Hank′s溶液、Ringer′s溶液，或含有或不含有机溶剂例如丙二醇、聚乙二醇的生理盐缓冲液。对于跨粘膜的给药，渗透剂用于制剂。这样的渗透剂通常是本领域已知的。
对于口服，肽可容易地按配方制造，通过联合活性肽与本领域熟知的药学上可接受的载体。这样的载体使本发明的肽按配方制造成片剂、药丸、糖衣片、胶囊、液体、胶、糖浆剂、膏剂、混悬液、以及类似物，用于病人口服。用于口服的药理学制剂可使用固体辅料，可选择地磨碎所得混合物，和处理粒料混合物，如果期望在加入合适的辅件后，得到片剂或糖衣片核心。合适的辅料特别是填充剂例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇、或山梨醇；纤维素制剂例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、碳甲基纤维素钠(sodiumcarbomethylcellulose)；和/或生理可接受多聚体例如聚乙烯吡咯酮(PVP)。如果期望，崩解剂可被加入，例如交联的聚乙烯吡咯酮、琼脂或海藻酸或其盐例如海藻酸钠。
合适的包被提供给糖衣片核心。为此，浓缩的糖溶液可使用，其中可选择性地包括阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯胶、聚乙二醇、二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可加入片剂或糖衣片的涂覆以鉴别或标记活性成分剂量的不同组合。
能用于口服的药物组合物，包括由明胶形成的推合(push-fit)胶囊、以及由明胶和增塑剂例如丙三醇或山梨醇形成的软的、封闭的胶囊。推合胶囊可包括活性成分与填充剂例如乳糖、粘合剂例如淀粉、润滑剂例如滑石或硬脂酸镁、和可选择地稳定剂的混合。在软胶囊中，活性肽可溶解于或悬浮于合适的液体，例如脂肪油、液状石蜡、或液体聚乙二醇。另外，可加入稳定剂。所有口服制剂应该在适合所选的给药途径的剂量。
对口腔含化给药法，组合物可采用以传统方式按配方制造的片剂或糖锭的形式。
对于吸入给药的，根据本发明的肽通常以喷雾剂形式递送，使用合适的推进剂例如氟利昂、三氯氟甲烷、二氯-四氟乙烷或二氧化碳，从压缩的包装或喷雾器呈现。在受压力的气溶胶的情况，通过提供阀以递送计量的剂量确定剂量单位。用于吸入剂或吹入器的例如明胶的胶囊或药筒可按配方制造成包括复合物和合适的粉剂基质例如乳糖或淀粉的混合粉剂。
在此描述的肽可按配方制造用于胃肠外给药例如通过快速浓注(bolus injection)或连续输注。注射制剂可以以单位剂量的形式呈现例如在安瓿中或在多剂量容器中，可选择地添加防腐剂。组合物可是混悬液、溶液或乳剂，在含油或含水的运载工具中，并且可以包括配制剂例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
用于胃肠外给药的药物组合物包括水溶解形式的活性制剂的水溶液。另外，活性肽的悬浮液可如合适的油注射悬浮液制备。合适的亲脂溶剂或运载工具包括脂肪油例如芝麻油或合成的脂肪酸酯例如油酸乙酯、甘油三酯或脂质体。含水注射悬浮液可包括增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。可选择地，悬浮液也可以包括合适的稳定剂或增加肽溶解度的试剂，以允许制备高浓度的溶液。
另外，活性成分可以是粉剂的形式以在使用前与合适的载体例如除菌、无热原的水构建。
本发明的肽也可以以直肠组合物按配方制造，例如栓剂或保留灌肠剂，使用例如传统的栓剂基质例如可可脂或其它甘油酯。
在此描述的药物组合物也可以包括合适的胶相载体或辅料的固体。这样的载体或辅料的例子包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、多种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和多聚体例如聚乙二醇。
本领域的普通技术人员能容易地确定优选的剂量和任何本发明的肽的剂量方法。
根据本发明的教导，对于任何肽的使用，治疗有效量也指治疗有效剂量，其可通过细胞培养分析或动物体内分析而起始估计。例如，在动物模型中按配方制造，以获得循环浓度范围，其包括在细胞培养中确定的IC50或IC100。这样的信息可用于在人类更精确地确定有用剂量。起始剂量也可从体内数据推测。运用这些起始指导方针，本领域的普通技术人员能确定在人类的有效剂量。
而且，在此描述的肽的毒性和治疗效果能通过在细胞培养或试验动物的标准制药程序而确定，例如通过确定LD50和ED50。毒性和治疗效果的剂量比例是治疗指数，可以用LD50和ED50的比例表示。显示高治疗指数的肽是优选的。从这些细胞培养分析和动物研究获得的数据能用于配制对人类使用无毒的剂量范围。这样的肽的剂量优选地位于循环浓度的范围内，其包括ED50并且毒性小或无毒性。根据使用的剂量形式和给药途径，剂量在这个范围内是可变化的。确切的制剂、给药途径和剂量能够由单独的医生依据病人的情况而选择(参见例如Fingl等1975年在ThePharmacological Basis of Therapeutics中第1章，第1页)。
剂量和间隔可单独调节以提供活性成分足以维持疗效的血浆水平。通常病人的口服剂量范围从约1-1000mg/kg/给药，一般从约10-500mg/kg/给药，优选地大约20-300mg/kg/给药，和最优选地大约50-200mg/kg/给药。在一些情况，治疗有效血清水平可通过每天多次给药获得。在口服或选择吸收情况中，药物的有效的局部浓度可能和血浆浓度无关。本领域的普通技术人员不用过多的实验就能够优化治疗有效的局部剂量。
根据待治疗疾患的严重程度和响应性，剂量也能是缓慢释放的组合物的单个给药，治疗的时间从几天到几周或直到有效痊愈或获得病情的减轻。
组合物给药的量当然依赖被治疗的个体、病情的严重程度，给药的形式、开处方的医生的判断等。
本发明的组合物如果期望可以呈现在包装或分配器装置中，例如FDA认可的药盒，其可包括含有活性成分的一种或多种单位剂量形式。包装可包括金属或塑料箔，例如发泡药包(blister pack)。包装或分配器装置可附带给药指导。包装或分配器也可以附带一种关于包装物通知，由管理药物制造、使用或销售的政府机构出据的表单，该通知反映机构对组合物形式或人类或兽类给药的许可。例如这样的通知可能是美国食品与药物管理局对处方药批准的标记或批准的产品插入。按配方制造在相容的药物载体中的包括本发明的肽的组合物也可以被制备、放置于合适的容器中，并且标记治疗或预防适应的疾患或预期事件的诱导。标签上的合适指示可以包括治疗和/或预防自身免疫疾病或疾患、病毒疾病、病毒感染、细菌感染、血液疾病、血液缺陷、血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、可用红细胞生成素治疗的疾患、可用血小板生成素治疗的疾患、高脂血症、高胆固醇血症、糖尿、高血糖、糖尿病、AIDS、HIV-1感染、冠状病毒或SARS感染、辅助T-细胞紊乱、树突细胞缺陷、巨噬细胞缺陷、造血干细胞紊乱包括血小板、淋巴细胞、浆细胞和中性粒细胞紊乱、造血干细胞增殖、造血干细胞增殖和分化、前白血病疾患、白血病疾患、化疗或放疗引起的免疫系统紊乱、和治疗免疫缺陷疾病引起的人免疫系统紊乱。
根据本发明的药物组合物可有用于维持和/或恢复血液系统组成，平衡血细胞计数，平衡血液中代谢产物的水平，包括糖、胆固醇、钙、尿酸、尿素以及酶例如碱性磷酸酶。进一步，本发明的药物组合物可有用于诱导血细胞增殖，调节白和/或红细胞的细胞计数，特别是增加白和/或红细胞的细胞计数，提高血红蛋白的血液水平以及调节血小板的计数。
如在此所用，术语“平衡”与某些生理参数水平有关，意思是改变提到的参数的水平，并带它们到接近正常值。如在此所用，术语“调节”与生理过程有关例如血细胞形成，是指在所述过程质量和/或数量的改变的影响，包括但不限于增加和降低频率、特征、持续时间、结果、量值、循环性质、以及类似的。这样的调节的例子是αS1-酪蛋白和β-酪蛋白增加巨核细胞增殖、树突细胞增殖，G-CSF对CFU-GM集落生长的影响，如以下描述的。可以理解，在本发明优选的实施方式的内容中，这样的生理的和代谢参数的“平衡”和/或“调节”包括修正生物响应，所以从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽单独或相互联合能是“生物响应修饰因子”。
如在此所用，术语“正常值”与生理参数有关，意思是在健康人类或动物的数值的范围内的数值。然而，可以理解名义上“健康的”个体有在传统认为正常的数值范围内或接近的生理参数数值，能从这样的生理参数进一步“平衡”和“调节”中获益，接近其的优化。
在特别优选的实施方式，本发明的肽用于治疗和预防血液疾病或疾患，和平衡红细胞、白细胞、血小板的计数和血红蛋白的水平。本发明的药物组合物可用于活化血细胞增殖。
另外，药物组合物可用于治疗和/或预防造血干细胞异常，包括血小板、淋巴细胞、浆细胞、树突细胞和中性粒细胞紊乱，以及在前白血病和白血病疾患和血小板减少症中的缺陷和功能障碍。
进一步，药物组合物可用于调节血细胞形成，包括治疗和/或预防细胞增殖疾病。关于这一点，值得注意本发明的药物组合物的优势在于在化疗和放疗过程中刺激免疫应答，减轻负面影响，减少化疗和放疗引起的呕吐并促进更快恢复。
仍然进一步，本发明的药物组合物可用于在治疗与免疫缺陷有关的疾病例如HIV和自身免疫疾病过程中刺激人免疫应答。
本发明的组合物也可以试图用于兽医。
本发明的药物组合物可用于治疗和/或预防例如包括异常血细胞水平的病症，包括造血干细胞产生和分化的病症，治疗红细胞、血小板、淋巴细胞、树突细胞、巨噬细胞和/或中性粒细胞紊乱，治疗前白血病和白血病疾患和治疗血小板减少症。本发明的药物组合物可用于治疗细胞增殖疾病和包括免疫缺陷的疾病例如HIV和自身免疫疾病。进一步，本发明的药物组合物可用于在化疗和放疗过程中调节免疫应答，例如减少化疗相关引起的呕吐。
当还原本发明到实用时，惊讶地发现本发明的肽添加其它造血生长因子对人造血干细胞增殖和分化的协同作用。值得注意的意义是本发明的肽对红细胞生成素介导的红细胞系的集落形成的增强作用，对G-CSF介导的刺激骨髓细胞中粒细胞巨噬细胞集落形成(CFU-GM)的增强作用，以及对剂量依赖的血小板生成素(TPO)诱导的巨核细胞增殖的增强作用。G-CSF目前用于在供体动员骨髓造血祖细胞，作为多种白血病和癌症治疗的成分(参见例如属于Benoit等的美国专利No：6,624,154和属于Bissery等的6,214,863)和作为干细胞和祖细胞细胞操作的细胞生长培养基的成分(参见例如属于Pykett等的美国专利No：6,548,299)。重组人(rh)G-CSF，商品名为Neupogen(Filgrastim，Amgen Inc.，USA)已经批准医疗使用用于中性白细胞减少和粒细胞减少症相关的适应症，例如AIDS白细胞减少和发热的中性白细胞减少，呼吸和其它感染(Kolls等人，Resp.Res.2000；2：9-11)以及在非骨髓恶性肿瘤的化疗步骤中。重组人(rh)EPO目前被批准治疗适应症例如肾性贫血、早产贫血、癌症和AIDS相关的贫血、以及预先选择的手术治疗(Sowade，B等人.Int J Mol Med 1998；1：305)。
因此，在一个优选的实施方式中，血液疾病或疾患，例如血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、可用红细胞生成素治疗的疾患、可用血小板生成素治疗的疾患、或者可用G-CSF治疗的疾患，通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而治疗。
进一步根据本发明，提供了增强红细胞生成素、血小板生成素、或G-CSF作用的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。在一个优选的实施方式中，所述方法进一步包括给药血细胞刺激因子，例如红细胞生成素、血小板生成素、和G-CSF。
血小板生成素是早期作用细胞因子，有重要的多系作用：单独TPO，或与其它早期作用细胞因子联合能够(i)对祖细胞促进活性和抑制凋亡；(ii)调节造血干细胞的产生和功能；(iii)触发休眠多能细胞的细胞分裂；(iv)诱导多系分化和(v)增加多系集落的形成包括粒细胞、红细胞、巨噬细胞、和巨核细胞(MK，CFU-GEMM)。而且，TPO刺激粒细胞/单核细胞、巨核细胞和红系集落的更有限的祖细胞的产生，刺激早期人骨髓和巨核细胞对纤维结合蛋白和纤维蛋白素原的粘附。G-CSF作用相似，但对粒系细胞特异，而EPO刺激红细胞和红细胞祖细胞的发育。因此，TPO、EPO和G-CSF对临床血液病学家/移植者是重要的细胞因子：用于自体和异体移植的干细胞和定向祖细胞的动员、增殖和体外扩增。还有，给药TPO和G-CSF于健康的血小板供体已经用于增加提取产量。然而临床使用TPO、EPO和G-CSF治疗是复杂的，由于重组人细胞因子rhTPO、EPO和G-CSF相对昂贵以及重复给药TPO、EPO和G-CSF的潜在抗原性，当然还有其它考虑。
用这样的血细胞刺激因子，例如TPO、EPO和G-CSF，以及本发明的肽的综合疗法，或者与包括二者的药物组合物在一起，或者单独，能提供对靶细胞增殖和功能的细胞因子效应的不昂贵的、证明无毒的提高。在这样的联合中，本发明的肽可用于治疗除了以上提到的疾患以外的疾病，例如骨髓增生异常综合症(MDS)、非骨髓恶性肿瘤、再生障碍性贫血和肝衰竭的并发症。用本发明的肽预处理血小板供体，单独或与TPO和G-CSF联合，可能甚至进一步增加提取产量的效率。
因此，根据本发明，提供了预防或治疗血液疾病或疾患的方法，例如可用血小板生成素治疗的疾患、可用红细胞生成素治疗的疾患、和可用G-CSF治疗的疾患，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
进一步根据本发明，提供了增强血小板生成素、红细胞生成素、和G-CSF效应的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
进一步根据本发明，提供了调节血细胞形成的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的药物组合物而起作用，药物组合物包括有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其的单独组合、或与血细胞刺激因子联合，例如以上描述的血小板生成素、红细胞生成素、和G-CSF。
在一个优选的实施方式中，调节血细胞形成包括诱导造血作用、诱导造血干细胞增殖、诱导造血干细胞增殖和分化、诱导巨核细胞生成、诱导红细胞生成、诱导白细胞生成、诱导血小板生成、诱导浆细胞增殖、诱导树突细胞增殖和诱导巨噬细胞增殖。仍然在更优选的实施方式中，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合是合成的肽，单独或与其它不同的以上描述的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽联合。
进一步根据本发明，提供了治疗血液疾病或疾患的药物组合物，血液疾病或疾患例如可用血小板生成素治疗的疾患、可用红细胞生成素治疗的疾患、和可用G-CSF治疗的疾患，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，提供了增强血细胞刺激因子效应的药物组合物，血细胞刺激因子例如血小板生成素、红细胞生成素和G-CSF，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，提供了调节血细胞形成的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其的单独组合、或与血细胞刺激因子联合，例如血小板生成素、红细胞生成素、和G-CSF以及药学上可接受的载体。
在优选的实施方式中，调节血细胞形成包括诱导造血作用、诱导造血干细胞增殖、诱导造血干细胞增殖和分化、诱导巨核细胞生成、诱导红细胞生成、诱导白细胞生成、诱导血小板生成、诱导浆细胞增殖、诱导树突细胞增殖、和诱导巨噬细胞增殖。体内和体外检测血细胞形成的调节的方法，是本领域熟知的，并且在以下的实施例部分详述。
在许多医学步骤中需要从骨髓到外周循环的干细胞动员。例如对增殖疾病例如癌症的化疗或放疗的准备中，病人的干细胞首先从骨髓动员，通常通过G-CSF，然后收集用于后面的重建。相似的，在异源的干细胞重建中，提取前供体用因子处理以动员干细胞到外周循环。动员干细胞到外周循环的方法是本领域熟知的(参见例如属于Baumann等的美国专利申请No：6,162,427，合并在此作为参考)。
当还原本发明到实践时，发现在体内和体外从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合增强和刺激造血细胞的增殖。因此根据本发明，提供了增强外周干细胞动员的方法，通过给药需要其的主体治疗有效量的药物组合物而起作用，药物组合物包括有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其的单独组合、或与血细胞刺激因子联合，例如以上描述的血小板生成素、红细胞生成素、和G-CSF。
进一步根据本发明，提供了治疗或预防选自由血液疾病、血液缺陷、血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、树突细胞缺陷、巨噬细胞缺陷、造血干细胞紊乱包括血小板、淋巴细胞、浆细胞和中性粒细胞紊乱、前白血病疾患、白血病疾患、骨髓增生异常综合症、非骨髓恶性肿瘤、再生障碍性贫血和骨髓不足组成的组的适应症的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的血细胞刺激因子例如血小板生成素、红细胞生成素或G-CSF与从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合的联合以及药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，提供了一种药物组合物，其包括血细胞刺激因子和纯化的肽以及药学上可接受的载体，肽有选自由SEQ ID NO：1-33组成的组的氨基酸序列。在一个优选的实施方式中，血细胞刺激因子是TPO、EPO或G-CSF。
进一步根据本发明，提供了增强供体血干细胞在清髓受体中的集落化的方法，所述方法通过在植入供体血干细胞于受体之前，用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合处理捐献血干细胞的供体而起作用。
进一步根据本发明，提供了增强供体血干细胞在清髓受体中的集落化的方法，所述方法通过在植入供体血干细胞于受体之前，用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合处理捐献的血干细胞而起作用。
进一步根据本发明，提供了增强血干细胞在清髓受体中的集落化的方法，所述方法通过在植入血干细胞于受体之前，用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合处理血干细胞而起作用。在一个优选的实施方式中，在供给或植入造血干细胞于受体之前，血干细胞供体、或血干细胞、或捐献的血干细胞被进一步用血细胞刺激因子例如血小板生成素、红细胞生成素或G-CSF处理。在另一个优选的实施方式中，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合与其它相同或不同的肽或从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽联合。
进一步根据本发明，提供了增强供体血干细胞在清髓受体的集落化的药物组合物，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，提供了增强血干细胞在清髓受体的集落化的药物组合物，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
在一个优选的实施方式中，药物组合物进一步包括血细胞刺激因子例如血小板生成素、红细胞生成素或G-CSF。在另一个优选的实施方式中，从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合与从相同或不同的α、β-或κ-酪蛋白衍生的一种肽或多种肽联合。
本发明进一步涉及抗菌药物组合物，其包括作为活性成分的至少一个本发明的肽，并涉及本发明的肽作为抗菌剂的用途。
如在后面的实施例部分详述的，本发明的肽和包括本发明的肽作为活性成分的药物组合物能用于治疗和预防血细胞疾病、细胞增殖疾病、包括免疫缺陷的疾病和自身免疫疾病。
因此根据本发明，提供了预防或治疗自身免疫或感染性疾病或疾患的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
在一个实施方式中，自身免疫或感染性疾病或疾患是病毒疾病、病毒感染、AIDS和HIV感染。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗血小板减少症的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗各类血细胞减少症的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗粒细胞减少症的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。
当还原本发明到实践时，惊讶地发现给药从αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽有效地防止糖尿病症状在有遗传因素的NOD小鼠中的发病，并且在有家族性的高胆固醇血症和甘油三酯症(triglyceridemia)人类受体中以及在动物模型中都平衡血液化学值。因此根据本发明，提供了预防或治疗代谢疾病或疾患的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合而起作用。在优选的实施方式中，代谢疾病或疾患是非胰岛素依赖的糖尿病、胰岛素依赖的糖尿病、糖尿、高血糖、高脂血症、和/或高胆固醇血症。
如在此所用，术语“代谢疾病或疾患”指从机体代谢的内环境平衡的一种或多种偏离，如用机体中可测量的某些生理参数的异常水平来表示。这样的生理参数可以是例如荷尔蒙水平、电解质水平、血糖水平、酶水平、以及类似的。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽，单独或与其它血细胞刺激因子例如血小板生成素、红细胞生成素或G-CSF联合而起作用。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗自身免疫或感染性疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。在优选的实施方式中，疾病或疾患是病毒疾病、病毒感染、AIDS、和/或HIV感染。在进一步优选的实施方式中，本发明的肽是作为附加治疗给药的，与更多的对抗病毒或其它感染的治疗联合，或在病毒感染后例如在HIV和AIDS治疗中防止发病或降低疾病症状的严重程度。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗代谢疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。在优选的实施方式中，代谢疾病或疾患是非胰岛素依赖的糖尿病、胰岛素依赖的糖尿病、糖尿、高血糖、高脂血症、和/或高胆固醇血症。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的方法，所述方法通过给药需要其的主体治疗有效量的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽，单独或与其它血细胞刺激因子例如血小板生成素、红细胞生成素或G-CSF联合而起作用。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗自身免疫或感染性疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽，单独或联合其它相同或不同的α、β-或κ-酪蛋白的肽，以及药学上可接受的载体。在优选的实施方式中，疾病或疾患是病毒疾病、病毒感染、AIDS、和/或HIV感染。在进一步优选的实施方式中，本发明的肽是作为附加治疗给药的，与更多的对抗病毒或其它感染的治疗联合，或在病毒感染后例如在HIV和AIDS治疗中防止发病或降低疾病症状的严重程度。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗代谢疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。在优选的实施方式中，代谢疾病或疾患是非胰岛素依赖的糖尿病、胰岛素依赖的糖尿病、糖尿、高血糖、高脂血症、和/或高胆固醇血症。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的方法，所述药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗自身免疫疾病的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗病毒疾病的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防病毒感染的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导造血作用的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导造血干细胞增殖的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导造血干细胞增殖和分化的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导巨核细胞生成的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导红细胞生成的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导白细胞生成的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导血小板生成的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导浆细胞增殖的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导树突细胞增殖的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合诱导巨噬细胞增殖的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗血小板减少症的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗各类血细胞减少症的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗粒细胞减少症的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗高脂血症的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗胆固醇血症的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗糖尿的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗糖尿病的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗AIDS的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗HIV感染的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合治疗可用血小板生成素治疗的疾患的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合增强血小板生成素的作用的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合增强外周血干细胞动员的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合增加供体血干细胞在清髓受体中的集落化的用途。
进一步根据本发明，公布了应用从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合增加造血干细胞在清髓受体中的集落化的用途。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗自身免疫疾病的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗病毒疾病的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗病毒感染的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或酪蛋白的组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导造血作用的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导造血干细胞增殖的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导造血干细胞增殖和分化的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导巨核细胞生成的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导红细胞生成的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导白细胞生成的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导血小板生成的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导浆细胞增殖的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导树突细胞增殖的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物诱导巨噬细胞增殖的用途，药物组合物作为活性成分包括从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗血小板减少症的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗各类血细胞减少症的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗粒细胞减少症的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗高脂血症的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗胆固醇血症的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗糖尿的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗糖尿病的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗AIDS的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗HIV感染的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，公布了药物组合物预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的用途，药物组合物包括作为活性成分的从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合和药学上可接受的载体。
进一步根据本发明，提供了纯化的肽，其有选自由SEQ ID NO：1-33组成的组的氨基酸序列。
进一步根据本发明，提供了药物组合物，其包括纯化的肽和药学上可接受的载体，纯化的肽有选自由SEQ ID NO：1-33组成的组的氨基酸序列。
本发明进一步涉及治疗的方法，其包括给药包括从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合的药物组合物。当还原本发明到实践，发现从αS1酪蛋白衍生的肽和从β-酪蛋白衍生的肽的联合，在小鼠骨髓重建后对增加白细胞增殖，与单独地给药单个肽相比，更有效(参见图25)。在一个实施方式中，肽组合包括肽混合物。在优选的实施方式中，肽组合包括共价连接的嵌合肽，如前所述。
本发明进一步涉及抗病毒药物组合物，其包括作为活性成分的至少一个本发明的肽，并且涉及本发明的肽作为抗病毒剂的用途。当还原本发明到实践，发现从天然酪蛋白得到的肽具有有效的免疫调节活性，其完全没有任何显示出的副作用。
如以下实施例部分详细描述的，从天然酪蛋白得到的肽能刺激多种造血干细胞的增殖，并且有效增强白细胞和血小板的重建，即使在完全抗血小板输液的病人。从天然酪蛋白得到的肽在完全抗其它形式(包括rhIL-3和rhIL-6)的可能对增强血小板重建有作用的治疗的病人是有效的。从天然酪蛋白得到的肽是有效的免疫调节剂，其能增强不同造血干细胞的造血过程，对白细胞(WBC)、血小板重建和刺激NK活性有有力影响。
因此，根据本发明的进一步方面，提供了治疗或预防与SARS传染源相关的疾患的方法，所述方法包括通过给药需要其的主体治疗有效量的从αS1酪蛋白N末端部分衍生的肽。
进一步根据本发明，提供了预防或治疗与SARS传染源相关的疾患的药物组合物，药物组合物包括作为活性成分的从αS1酪蛋白N末端部分衍生的肽和药学上可接受的载体。在优选的实施方式中，SARS传染源是冠状病毒。在最优选的实施方式中，冠状病毒是SARS-CoV。
本领域的一名普通技术人员可以理解，从天然酪蛋白得到的肽的组合物对预防和/或治疗与SARS传染源相关的疾患的效力能被体外实验和临床试验评价。最近，Rota等(Sciencexpress，1 May 2003，参见www.sciencexpress.org)报道SARS-CoV病毒的特征，以及Vero细胞中SARS-CoV的成功的体外生长和分离。因此例如以下对HIV-1描述的，在暴露于SARS传染源之前和之后，Vero细胞能够被暴露于从天然酪蛋白得到的肽的组合物，并且感染的程度能够被确定，例如使用本领域熟知的方法，通过测量病毒特异性的转录子、蛋白产物或病毒体的生成。
如以上详述的，酪蛋白的αS2、β和κ-片段已显示包括有有利的生物性质的肽。可以理解从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽与其它相同或不同的酪蛋白衍生肽(例如αS2、β或κ-酪蛋白)的联合，能对造血的、免疫的、EPO-、TPO-、G-CSF-介导的、抗病毒的和其它从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽已经显示有作用的过程的调节和增强有协同影响。因此进一步根据本发明，提供了药物组合物，其包括从α、β-或κ-酪蛋白衍生的肽与其它从α、β-或κ-酪蛋白衍生的相同或不同的肽的联合，其中所述的联合是肽的混合物或嵌合肽。
当还原本发明到实践，为了在低温处理酪蛋白水解产物，低温方法被采用。在消化酪蛋白后为钝化和除去蛋白酶的新方法是非常快速和容易的，并且没有传统的使用热钝化的方法的不期望的不利。用冷却和碱性化替代高热(＞75℃)钝化步骤，获得有效的和绝对的蛋白酶的钝化，对肽无害。
因此根据本发明进一步的方面，提供了低温处理酪蛋白蛋白水解的水解产物的方法，所述方法通过获得包括蛋白水解酶的酪蛋白蛋白水解的水解产物，冷却酪蛋白蛋白水解的水解产物以钝化蛋白水解酶，调节酪蛋白蛋白水解产物的pH到酸性pH，过滤酸性的酪蛋白白水解产物并收集滤出液而起作用。在蛋白裂解消化后，批量冷却酪蛋白水解产物的方法是本领域(参见例如来自印度新德里的BioGenTek的工业发酵罐和生物反应温度控制系统)和乳制品工业中(大和小体积应用的合适的热交换系统是商业上广泛可以得到的)熟知的。
滤出液然后被进一步地酸化以沉淀从天然酪蛋白得到的蛋白，分离并收集，并且之后沉淀物的pH用例如NaOH的碱调节到碱性pH，以不可逆地钝化蛋白水解酶。钝化蛋白水解酶后，沉淀物的pH被再次用酸调节，例如用HC1调节到pH7-9，从而在低温处理酪蛋白蛋白水解产物。在优选的实施方式中，酪蛋白水解产物被冷却到约10℃，最优选的到8-10℃。通过添加冷的TCA和在低于10℃的温度离心维持温度在10℃。
在进一步的实施方式中，通过添加酸到2％(w/v)酸调节pH到酸性pH，滤出液的进一步酸化通过添加酸到约10％(w/v)酸而起作用。在优选的实施方式中，沉淀物的碱性pH用碱调节到至少pH9、优选地pH10、最优选地pH13。在优选的实施方式中，碱性pH被维持15分钟以上，更优选的30分钟以上，在最优选的实施方式中1小时以上。冷却和碱性处理之后残留蛋白水解活性的检测能用于确定优选的碱性处理范围。
如在此所用，术语“大约”指包括从大于所示数值20％到小于20％的范围。因此短语“大约10℃”如在此所用包括从8℃到12℃的温度范围。类似地，“大约10％(w/v)的酸”包括含酸从8％w/v到12％w/v的范围。
本发明成功克服目前已知结构的短处，通过提供肽以治疗人类疾病，其中肽是从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的，单独或与其它相同或不同的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽联合使用，没有可测试到的毒性并有高的疗效。
本发明更多的目标、优势、和新特征在检查了后面的实施例后对本领域的一名普通技术人员会变得明显，实施例不预期作为限制。另外，以上描述的和后面权利要求部分中声明的每个不同的实施方式和本发明的方面在后面的实施例中找到实验支持。
实施例
现在参考以下实施例，其与以上的描述一起以非限制的形式解释本发明。
材料和实验方法
从天然酪蛋白得到的肽的制备：牛奶的酪蛋白部分被分离，如Hipp等描述的(1952)，同前，或以商用酪蛋白提供，用凝乳酶(也称为凝乳酶(rennin))(20ng/ml)在30℃过度蛋白水解消化。当反应完全时，溶液被加热以钝化酶，并且消化产物用有机酸、乙酸或三氯乙酸酸化沉淀为副酪蛋白。副酪蛋白通过离心被分离，并且含感兴趣的肽片段的上清液部分被更高的酸浓度再次沉淀为酪蛋白杀细胞粒体(caseicidin)。所得的酪蛋白杀细胞粒体在被再次悬浮、透析和中和后被低压冻干。所得的粉末制剂如下所述测量生物活性，并且用HPLC分离作肽分析。
可选择地，酪蛋白杀细胞粒体能通过冷却和碱化处理制备。在酪蛋白的消化后，反应混合物被立即冷却到10℃以下并且冷的TCA(三氯乙酸)被加入以获得2％TCA溶液。溶液在10℃以下的温度1370Xg离心分离。
上清液被移去并过滤。更多的冷却的TCA被加入以维持10％-12.5％的TCA溶液。溶液在10℃以下的温度1370Xg离心。沉淀物被移去并溶解于水以及用例如NaOH的强碱碱化，以增加水解产物的pH到pH9-13。溶液维持在碱性pH从15分钟到1小时。而后，溶液通过添加例如HC1的酸而酸化到pH7-9。所得的肽的混合物被进一步分割并通过在葡聚糖柱(例如Sephadex)上凝胶过滤而纯化，如在此所述，或通过在一系列硬膜上透析过滤而纯化，例如使用有10kDa截面的第一透析过滤装置和有3 kDa截面的第二透析过滤装置(Millipore，Billerica，MA，美国)。
从天然酪蛋白得到的肽的HPLC分析：如前面所述，从天然酪蛋白得到的肽以两个步骤通过HPLC分析。开始，低压冻干的酪蛋白的消化产物用有0.1％三氟乙酸的水溶液(w/w)-乙腈梯度的反相C18分离。根据在214 nm的UV吸收检出。这之后，样品用带有电喷射源的HPLC-质谱(MS)分析。质量计算代表电离的肽样品的质量，如从滞留时间得到的。分离后，肽的氨基酸组成用气相微序列器(Applied Biosystems 470A)确定。
从天然酪蛋白得到的肽的一些制剂的分析产生如下的结果：典型地观察到8个肽峰，其中3个主峰有17.79、19.7、23.02的Rt值以及5个次峰有12.68、14.96、16.50、21.9和25.1的Rt值，其中的Rt值分别代表分子质量2764、6788、1880、2616、3217、2333、6708和6676 Da。在Rt17.79(对应2，764 Da)23氨基酸的肽的主峰代表αS1酪蛋白的氨基酸1-23，其有序列RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLRF(SEQ ID NO：22，参见McSweeny等，1993，对于αS1酪蛋白的全序列，同上。)其它肽是来自β-样酪蛋白前体的208-224位、αS1酪蛋白的16-37位和αS2样酪蛋白前体的197-222位。也呈现了其它肽。从天然酪蛋白得到的肽被进一步用HPLC-MS(C-18树脂)分析和用MS/MS测序以及Edman降解。使用的柱子是Vydac C-18，采用一种梯度洗脱，梯度从2％CH3CN，0.1％TFA开始并通过增加修饰因子(CH3CN中2％H2O，0.1％TFA)到在80分钟时80％而继续。采用带Qtof2(Micromass，英国)进行质谱分析，使用纳米喷射附件。
Edman降解采用Perkin Elmer(Applied Biosystems Division)492(procise)微序列器系统。进一步HPLC-MS也采用C-12树脂。从天然酪蛋白得到的肽的分析揭示3个主要成分：
i)代表αS1酪蛋白N末端部分的肽，对应处理的肽的1-23氨基酸(SEQID NO：22)。分子量2764道尔顿。
ii)代表对应β-酪蛋白的193-209氨基酸(SEQ ID NO.27)的肽。分子量1880道尔顿。
iii)代表对应κ-酪蛋白的106-169氨基酸(SEQ ID NO.29)的肽。分子量6708道尔顿。发现κ-酪蛋白有两种形式：磷酸化形式和非磷酸化形式。磷酸化的肽的分子量是6789道尔顿。进一步鉴定出已知的κ-酪蛋白的变异体，其分子量是6676 Da(非磷酸化的)。鉴定出3个少量成分：
i)代表αS1酪蛋白N末端部分的肽，对应修饰的肽的1-22氨基酸(SEQID NO：21)。分子量2616道尔顿。
ii)代表对应αS1酪蛋白的165-199氨基酸(SEQ ID NO.31)的肽。分子量3918道尔顿。
iii)代表对应αS2酪蛋白的182-207氨基酸(SEQ ID NO.32)的肽。分子量3217道尔顿。
iv)代表对应αS2酪蛋白的189-207氨基酸(SEQ ID NO.33)的肽。分子量2333道尔顿。
也检测到少量代表β-酪蛋白N末端部分的肽，和牛酪蛋白的其它部分。
从天然酪蛋白得到的肽的凝胶过滤：
如上所述制备的从天然酪蛋白得到的肽，用Pharmacia的Superdex75凝胶过滤柱根据分子量而分离。制备分离使用的洗脱缓冲液是NH4HCO3，pH＝8。得到以下纯化的片段：代表αS1酪蛋白N末端的1-23位氨基酸(SEQID NO.22)的肽，代表κ-酪蛋白的106-169位氨基酸(SEQ ID NO.29)的第二肽。不希望被单个假设所限制，一种对从天然酪蛋白得到的肽由HPLC、HPLC MS和凝胶过滤方法分析之间明显的不一致的解释是凝胶过滤延缓特别的混合肽的组分的倾向。
从酪蛋白衍生的合成的肽：对应αS1酪蛋白的N末端2-26氨基酸增长长度的肽由以色列海法的NoVetide Ltd.合成，纯度＞95％(HPLC)。质量控制包括：HPLC、质谱法(EI)、氨基酸分析和肽成分(Peptide Content)。以下的表3提供了这些肽的序列：
表3
 识别  序列(N末端-C末端)  氨基酸数量  SEQIDNO：
 74  RP  2  1
 1P  RPK  3  2
 2P  RPKH  4  3
 3P  RPKHP  5  4
 4P  RPKHPI  6  5
 5P  RPKHPIK  7  6
 Y  RPKHPIKH  8  7
 X  RPKHPIKHQ  9  8
 1a  RPKHPIKHQG  10  9
 2a  RPKHPIKHQGL  11  10
 3a  RPKHPIKHQGLP  12  11
 A  RPKHPIKHQGLPQ  13  12
 B  RPKHPIKHQGLPQE  14  13
 C  RPKHPIKHQGLPQEV  15  14
 D  RPKHPIKHQGLPQEVL  16  15
 E  RPKHPIKHQGLPQEVLN  17  16
 F  RPKHPIKHQGLPQEVLNE  18  17
 G  RPKHPIKHQGLPQEVLNEN  19  18
 H  RPKHPIKHQGLPQEVLNENL  20  19
 I  RPKHPIKHQGLPQEVLNENLL  21  20
 J  RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLR  22  21
 K  RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLRF  23  22
 L  RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLRFF  24  23
 M  RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLRFFV  25  24
 N  RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLRFFVA  26  25
 β193-208  YQEPVLGPVRGPFPII  16  28
 κ106-127  MAIPPKKNQDKTEIPTUITIAS  22  30
在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠中的青少年(I型，IDDM)糖尿病
从天然酪蛋白得到的肽：NOD小鼠是研究自身免疫疾病和人类青少年糖尿病通用的模型。6周大的雌性NOD小鼠接受每周或一次或两次的100μg的从天然酪蛋白得到的肽注射，总共5或10次治疗。对照小鼠不接受治疗。病情的严重程度根据糖尿确定，糖尿用Combi测试棒测量[Gross，D.J.等人.(1994)，Diabetology，37：1195]。结果用365天周期内每个样品中无糖尿小鼠的百分数表示。
从酪蛋白衍生的合成的肽：在另一个实验，6周大的雌性NOD小鼠接受每周两次的100μg的从酪蛋白衍生的合成的肽注射总共10次治疗，或3次注射每次1mg相隔3天总共3次治疗。对照小鼠不接受治疗。结果用不同治疗组中健康小鼠的数量表示。
腹膜内的葡萄糖耐量试验(IPGTT)：葡萄糖耐量试验是研究哺乳动物中葡萄糖代谢和糖尿病倾向的确定方法。接受从酪蛋白衍生的合成的肽25周后，对葡萄糖负荷的反应用腹膜内的葡萄糖耐量试验来评价。葡萄糖注射由1g/kg体重组成。在试验前(0分钟)和负载后60分钟取血确定血糖值。血浆葡萄糖水平用Glucose Analyzer 2(Beckman Instruments，Fullerton，CA)确定并以mmol/L表示。正常值不超过140mmol/L。
自然杀伤(NK)细胞增殖的刺激：
来源于人外周血造血干细胞(PBSC)：G-CSF治疗主体的PBSC在FICOLL梯度上被分离，用含10％FCS和谷氨酰胺的RPMI-1640培养液冲洗2次，种植到1.5ml孔，如显示的，其有或没有从天然酪蛋白得到的肽或从酪蛋白衍生的合成的肽(0-500μg/ml)。孵育2天后细胞被分析自然杀伤活性，通过测量从35S-标记的K562靶细胞(NEG-709A，185.00 MBq，2.00mCi EASYTAGth甲硫氨酸，L-[35S]43.48 TBq/mmol，1175.0 Ci/mmol，0.488ml，美国波士顿)释放的放射性。2个浓度的效应细胞(2.5×105细胞/孔和5×105细胞/孔)与每个孔5×103的靶细胞(效应细胞：靶细胞的比例分别是50∶1和100∶1)孵育在U形底96孔组织培养皿中。细胞在37℃、5％CO2、95％空气中培养5小时并用1000pm离心5分钟而沉淀。测量50μl上清液中释放的35S。
来源于小鼠骨髓(BM)细胞：从4只没有治疗过的BALB/c和C57B1/6小鼠收集骨髓。通过用25计量注射针注射培养液从小鼠的前肢和后肢的长骨收集骨髓。吸取的细胞用RPMI 1640冲洗，在血细胞计数器中计数并活细胞染色(20μl的细胞在380μl的乙酸/胎盘兰(trypan blue)中)，之后种植于培养瓶，以2-5×106细胞/ml于RPMI-1640中，其包含10％胎牛血清、抗生素和谷氨酰胺、有或没有100μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽。细胞培养于37℃、5％CO2、95％空气12-15天，通过在1500rpm离心10分钟收集、计数、种植于U形底孔，与51Cr(铬-51，740 MBq，2.00 mCi活性)或35S(NEG-709A，185.00MBq，2.00mCi EASYTAGth甲硫氨酸，L-[35S]43.48 TBq/mmol，1175.0 Ci/mmol，0.488ml，美国波士顿)标记的小鼠淋巴瘤(YAC)细胞以或者25∶1或者50∶1效应细胞：靶细胞的比例在一起。NK活性用无细胞上清液的放射性百分比表示。
人类细胞在培养中的增殖：外周血(PB)从健康或感染的病人收集。在血浆取出之前感染的病人只接受G-CSF的补充治疗。骨髓从认为健康的病人或通过吸引术化疗后在恢复期的感染病人收集。脐带血从正常分娩中收集。不同来源的人类细胞在FICOLL梯度上被分离，用RPMI-1640培养液冲洗2次，并以所示浓度种植到0.2ml的平底组织培养孔，如所示有或没有从天然酪蛋白得到的肽或有或没有从酪蛋白衍生的合成的肽。所有治疗，包括对照，重复3次。细胞增殖用3HT掺入测量：在孵育显示的天数后放射性的脱氧胸腺嘧啶苷被加入[脱氧胸腺嘧啶苷(甲基-[3H])比放射性5Ci/ml 37 MBq/ml，ICN Corp.]。然后细胞被标记孵育16-20小时、收集和用培养液冲洗。掺入的放射性用β闪烁计数器测量。
K562白血病和结肠癌细胞系的增殖：结肠和K562是生长在培养中的肿瘤细胞建立的系。两种细胞系都在培养瓶中37℃、5％CO2、95％空气生长，收集并用培养液冲洗，然后种植在组织培养孔中，以4×105细胞(K562)/孔或3×103细胞(结肠)/孔。向孔加入从天然酪蛋白得到的肽，以指示的浓度，如前面所述在孵育9天(K562)或3天(结肠)后加入标记的脱氧胸腺嘧啶苷。收集和测量放射性的摄取如前面所述。
在人类外周血干细胞(PBSC)中用荧光抗体检测NK细胞和T细胞的增殖：来源于接受G-CSF治疗的人类主体的外周血干细胞(PBSC)通过血浆取出法收集，在FICOLL梯度上分离，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液冲洗两次，并在培养瓶中37℃、5％CO2、95％空气、有或没有所示浓度的从天然酪蛋白得到的肽中培养。用从天然酪蛋白得到的肽孵育10、14或28天后，检测T细胞(CD3表面抗原)和NK细胞(CD56表面抗原)的存在，通过直接免疫荧光，使用抗CD3荧光抗体(CD3/FITC克隆UHCT1)、抗CD56荧光抗体(CD56/RPE克隆MOC-1)(DAKO A/S，丹麦)以及用小鼠IgGl/RPE和IgGl/FITC抗体作为对照。荧光标记的细胞的检出使用荧光激活细胞分选术(FACS)完成。
来源于骨髓(BM)的细胞在培养中造血作用的刺激
来源于小鼠骨髓细胞的多潜能集落(CFU-GEMM)中巨核细胞的增殖：来源于8-12周大的C3H/HeJ小鼠的原代骨髓细胞(1×105/ml)在无血清的甲基纤维素-IMDM培养液、37℃、5％CO2、95％空气中生长8-9天。适于多潜能集落(CFU-GEMM)生长的培养液包括1％BSA(Sigma)、10-4M硫代甘油(Sigma)、2.8×10-4M人转铁蛋白(TF，Biological industries，以色列)、10％WEHI-CM作为IL-3的来源以及2单位/ml红细胞生成素(rhEPO，R&D Systems，Minneapolis)。8-9天后使用Olympus暗视野显微镜计数集落。用微量吸移管挑起它们、细胞离心并用May-Grunwald-Giemsa染色以分类计数。每个标本计数至少700个细胞。
CFU-GEMM中树突细胞的增殖：来源于原代骨髓细胞多能(CFU-GEMM)集落被收集、染色和计数树突细胞，如上分析巨核细胞增殖所述的。每个标本计数至少700个细胞。
CFU-GEMM中浆细胞的增殖：来源于原代骨髓细胞多能(CFU-GEMM)集落被收集、染色和计数浆细胞，如上分析巨核细胞增殖所述的。每个标本计数至少700个细胞。
CFU-GEMM中巨噬细胞的增殖：来源于原代骨髓细胞多能(CFU-GEMM)集落被收集、染色和计数巨噬细胞，如上分析巨核细胞增殖所述的。每个标本计数至少700个细胞。
CFU-GEMM中红细胞的增殖：来源于原代骨髓细胞多能(CFU-GEMM)集落被收集、染色和计数红细胞，如上分析巨核细胞增殖所述的。每个标本计数至少700个细胞。
CFU-GEMM中多形核细胞(PMN)的增殖：来源于原代骨髓细胞多能(CFU-GEMM)集落被收集、染色和计数多形核细胞，如上分析巨核细胞增殖所述的。每个标本计数至少700个细胞。
来源于人骨髓和脐带血细胞的巨核细胞和红细胞生成细胞的增殖：从明显健康的人得到的骨髓样品用Histopaque-107(Sigma Diagnostics)通过密度梯度分离以获得纯的单核细胞(MNC)群体。集落分析在包括终浓度0.92％甲基纤维素(4000 centripase powder，Sigma Diagnostic)，再水化于Iscoves modified Dulbecco′s培养液，其包含36mM的碳酸氢钠(Gibco)、30％胎牛血清(FBS)(Hyclone)、0.292mg/ml谷氨酰胺、100U/ml盘尼西林和0.01mg/ml链霉素(Biological Industries，Beit Haemek)的平板培养液中完成。从正常分娩得到的脐带血如上所述收集和制备。
包含105MNC/ml的集落分析培养液重复3次种植于24孔组织培养皿(Greiner)的孔中，0.33ml/孔。培养物孵育于37℃、5％CO2、95％空气和55％相对湿度，有或没有指示浓度的从天然酪蛋白得到的肽或从酪蛋白衍生的合成的肽。14天后计数皿上包括多于50个细胞的集落数。巨核细胞用直接免疫荧光鉴别，使用高特异的兔抗体以识别人血小板糖蛋白以及连接FITC的羊抗兔IgG。添加的生长因子包括15ng/ml粒细胞集落刺激因子(leucomax)(GM-CSF)(Sandoz Pharma)、以及5％vol./vol.的人植物血凝素-m(Difco Lab)-诱导的条件培养液(CM)以诱导粒细胞巨噬细胞集落(CFU-GM)的发育。使用红细胞生成素(EPO)2 U/ml以诱导红系集落的形成(红系突发形成单位-BFU-E)。
可选择地，来自志愿者供体或正在进行自体骨髓移植的病人的人骨髓细胞在包含10-1000μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽的培养液中预培养，在半固体琼脂上生长，并在治疗后7或14天计数粒细胞-巨噬细胞造血集落(GM-CFU)。
来自健康人类供体的正常骨髓细胞中的巨核细胞生成的测量，或者通过不含或包含100μg/ml的从天然酪蛋白得到的肽的液体培养(RPMI-1640添加10％人AB血清、谷氨酰胺和抗生素)的样品中计数巨核细胞的数量，或在甲基纤维素分析中分析集落的形成。2×105骨髓细胞被种植在有标准生长因子联合有或没有从天然酪蛋白得到的肽存在的情况下。在甲基纤维素分析中，巨核细胞在种植14天后用倒置显微镜计数。
使用从天然酪蛋白得到的肽的临床试验：在一系列试验中，包含50mg的从天然酪蛋白得到的肽的单个剂量被肌内给药给人类主体，以3个长效药剂在2小时的过程中。临床参数在指定的间隔监测。在其它试验中，在不同治疗和/或缓解阶段的肿瘤或代谢病人接受一次或两次从天然酪蛋白得到的肽，并监测外周血细胞计数的变化。
抑制人类淋巴细胞的体外HIV感染：
肽：肽(或者是从天然酪蛋白得到的肽或者是从酪蛋白衍生的合成的肽(长度2-26氨基酸，参见表3)以低压冻干的粉末提供)悬浮于RPMI完全培养液并以终浓度50-1000μg/ml添加到细胞培养。
细胞：几种新鲜分离的人类细胞(原代细胞)和细胞系已知是对体外HIV-1感染敏感的，尽管基本任何呈现即使是低表面水平的CD4分子的细胞能被认为是HIV-1感染的潜在靶细胞。两种通常使用的人类细胞系选择CEM和Sup-T1，它们对HIV-1感染高敏感。
CEM是人类T4-类淋巴母细胞细胞系，最初由G.E.Foley等[(1965)，Cancer 18：522]从有急性成淋巴细胞性白血病的4岁大白种女性的外周血血沉棕黄层衍生的。这些细胞被连续地维持在培养液悬液中，并且已经被广泛地用于感染性、抗病毒剂和中和抗体分析。
Sup-T1是人类T-类淋巴母细胞细胞系从有非霍奇金T-细胞淋巴瘤的8岁大男性的胸膜腔积液分离的[Smith，S.D.等人.[(1984)Cancer Research44：5657]。细胞表达高水平的表面CD4并对研究细胞融合、细胞病变效应和HIV-1感染性有用。Sup-T1细胞在富集培养基悬浮生长。
培养液：细胞生长于富含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和2mM盘尼西林-链霉素(GIBCO)的RPMI-1640完全培养液。
病毒：使用的HIV病毒株是HIV-1IIIB，最初命名为HTLV-IIIB。有AIDS或相关疾病的几个病人的外周血浓缩培养液被用以在H-9细胞建立永久有效感染。这亚型的B病毒在人类T-细胞中有高的复制能力。病毒滴度是储液中5.38ng/ml。
FITC-标记的肽：有激发/发射最大值大约分别494/520nm的FITCF-1300(异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate)、异构体I、Sigma(F25o-2)St.Louis，MI，USA)被使用。活性胺荧光素衍生物可能是最通用的荧光衍生剂以共价标记蛋白。FITC-连接的从天然酪蛋白得到的肽是通过共价结合FITC到赖氨酸的氨基而制备的。
HIV-1 P24抗原捕获分析：HIV-1 p24抗原捕获分析试剂盒用于计量HIV-1 p24的核心抗原，其与细胞内病毒产生的程度按比例关联。试剂盒从AIDS Vaccine program of the SAIC-NCI-Frederick Cancer ResearchInstitute，P.O.Box B，Frederick，M.D 21702，USA购买并且包括用对HIV-1p24的单克隆抗体包被的96孔板、第一抗体-兔抗HIV p24血清、第二抗体-羊抗兔IgG(H+L)过氧化物酶连接的抗体、TMB过氧化物酶的底物系统以及裂解的HIV-1 p24标准物。HIV-1 p24抗原捕获分析用Organon-TechnicaELISA酶标仪以650nm为参考在450nm读取分析。
HIV-1 P24抗原捕获ELISA：HIV感染用间接酶免疫测定测量，其在组织培养液中检出HIV-1 p24核心抗原。组织培养上清与第一抗体兔抗HIV-1 p24抗原反应并通过过氧化物酶连接的羊抗兔IgG显示。反应通过加入4N H2SO4而终止，其中发展的颜色的强度与组织培养上清中HIV-1抗原存在的量是按比例的。
生物意外危险等级 3(BL-3)实验室：所有病毒产物分离物和感染物、HIV-1感染细胞的组织培养、p24抗原包括上清收集物以及p24抗原捕获ELISA在BL-3实验室进行并根据NIH和CDC(USA)制定的生物安全实践(bio safety practices)。
流式细胞计量术：FACSort细胞分类器(Becton & Dickinson，San Jose，CA.USA)被使用(i)在用HIV-1感染前确定CD4阳性的CEM和sup-T1细胞批的百分比以保证每次实验相同的感染程度；和(ii)检出锚定FITC连接的从天然酪蛋白得到的肽于它们的细胞质和细胞核的T细胞。
CO2保温箱：为了带有HIV-1的细胞的病毒培养产生，用从天然酪蛋白得到的肽预处理的细胞和病毒以及进一步与HIV-1孵育的细胞在实验过程中被保持在增湿的CO2保温箱。
培养的人类CD4细胞的HIV感染：为了较长的孵育，细胞(CEM，Sup-T1)被用多种浓度递增的从天然酪蛋白得到的肽(50-1000μg/ml)或从酪蛋白衍生的合成的肽(10-500μg/ml)预孵育24(对合成和天然的肽)和48(只对天然的肽)小时之后HIV-IIIIB(终浓度45μg/ml)被加入每个孔。为了较短的孵育(3小时)，HIV-1IIIB被用肽预孵育3小时之后加入到组织培养皿中的细胞(5000细胞/孔)。对照是IF(感染的，与HIV-1和没有与肽培养的细胞)、UIF(非感染的，没有与HIV-1和没有与肽培养的细胞)和UIF+Ch((非感染的+从天然酪蛋白得到的肽，细胞在有从天然酪蛋白得到的肽{50-1000μg/ml}存在下培养)以测量从天然酪蛋白得到的肽和从酪蛋白衍生的合成的肽对细胞活性和生长的影响。在感染(P24抗原培养上清收集的那天)后7、10和14天细胞被计数生存能力和增殖率。细胞和组织培养上清(培养液)被收集并立即在1/10体积的10％Triton X-100中裂解。这些样品进一步在37℃孵育1小时并在-80℃保存到检测p24抗原。
共聚焦显微镜：Zeiss LSM 410共聚焦激光扫描系统附加到TW ZeissAxiovert 135M倒置显微镜，应用激光扫描共聚焦显微镜技术，被用于检测FITC连接的肽进入细胞的穿透。T细胞与FITC连接的从天然酪蛋白得到的肽在37℃、5％CO2、95％空气的保温箱孵育，之后细胞被用磷酸缓冲液(PBS)冲洗3次以除去未结合的FITC-肽。细胞用3.8％福尔马林固定10分钟，用PBS冲洗2次并重新悬浮于50-100μl的PBS，然后在显微镜下观察。从不同孵育时间点(15分钟、30分钟、1小时、1.5小时和3小时)的显示在它们的细胞质和细胞核中FITC-从天然酪蛋白得到的肽的不同的量的细胞的被选择的图像被保存在3.5″Zip驱动器(230MB)上并用Photoshop软件图像处理。
[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷掺入测试：为了测试从天然酪蛋白得到的肽对T细胞增殖的影响，多种浓度的从天然酪蛋白得到的肽(10mg/ml储液于RPMI中)被加入培养于96平底微孔皿(5000细胞/孔)的Sup-T1细胞，如在HIV-1感染Sup-T1细胞所述。细胞被计数并且它们的生存能力通过胎盘兰排除法确定。它们用[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷在每个时间点(3、7、10和14天)标记18小时(过夜)并收集在玻璃纤维滤膜上以读取放射性(掺入进细胞DNA的[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷与细胞增殖的程度成比例)。
从天然酪蛋白得到的肽在正常、清髓和移植受体小鼠和豚鼠中的毒性：肌内或静脉注射上至每公斤动物5,000mg从天然酪蛋白得到的肽被单剂量或以3个剂量给药给正常动物。使用了多种株，包括BALB/c、C3H/HeJ和非肥胖型糖尿病小鼠。小鼠或者在处死和尸体解剖前监测10个月(毒性分析)或观察到200天(存活率)。豚鼠接受单次肌内注射每只动物20mg从天然酪蛋白得到的肽。15天后它们被处死并病理检查。
骨髓移植受体小鼠白细胞和血小板重建：BALB/c小鼠被亚致死放射，放射源与皮肤70cm，剂量50cGy/分钟，总共600cGy。放射的小鼠如前面所述用同基因骨髓重建并在24小时后每只动物静脉注射1 mg从天然酪蛋白得到的肽、从酪蛋白衍生的合成的肽(13-26氨基酸，参见以上的表3)、或人血清白蛋白(对照)，遵从双盲程序。白细胞重建根据在治疗后显示的间隔从6到12天收集外周血以计数细胞来确定。血小板重建根据在治疗后显示的间隔从6到15天收集眶后的网状组织(retro orbital plexus)到装有EDTA的管中以计数细胞来确定。
在更多系列的实验中，CBA小鼠被致死放射(900 cGy)，如前面所述用BM细胞重建并用从天然酪蛋白得到的肽或人血清白蛋白治疗。血小板重建如上述的测定。
在第三系列的实验中，小鼠被放射(800 cGy)、重建和在移植后第4、5、6和7天每天腹膜内注射1.0mg从酪蛋白衍生的合成的肽(肽3a和4P，分别代表αS1酪蛋白N末端的前6和12个氨基酸-参见上面的表3)。血小板重建在移植后第10和12天测定。
在第四系列的实验中，F1小鼠被放射(750 cGy)，用同基因骨髓重建，并在24小时后静脉注射1mg/小鼠的从酪蛋白衍生的合成的肽，其代表β-酪蛋白的氨基酸193-208和αS1酪蛋白N末端的氨基酸1-22。另外，2组小鼠每组用αS1酪蛋白1-23位的天然片段和代表κ-酪蛋白氨基酸相应于106-169(SEQ ID NO.30)的从天然κ-酪蛋白衍生的肽的片段治疗。在移植后的第5、7、10和12天进行WBC计数。
骨髓移植受体小鼠的重建和供体小鼠骨髓细胞增殖的增长：
C57B1/6小鼠被致死放射，放射源与皮肤70cm，剂量50cGy/分钟，总共900cGy。放射的小鼠用同基因骨髓细胞重建，同基因骨髓细胞来自或者在收集骨髓的前一天用1mg/动物的从天然酪蛋白得到的肽或者用盐(对照)处理的小鼠，遵从双盲程序。在一个实验中小鼠存活率被检测18天。在另一个实验中小鼠在8天后被处死以及监测脾集落。
从酪蛋白衍生的合成的肽显著降低胆固醇的水平：
在7周大雌性C57B1/6j小鼠中从酪蛋白衍生的合成的肽降低胆固醇水平的能力在喂食引起动脉粥样化饮食后被评价。小鼠被分成8组。一个对照组被喂食正常的饮食。第二个对照组被喂食改良的Thomas Hartroft的饮食其包括胆酸盐(#TD 88051：Teklad，Madison，WI)[Gerber，D.W.等人，Journal of Lipid Research.42，2001]。其余的实验组都被喂食改良的ThomasHartroft的饮食。在饮食一周后，血清胆固醇值显著提高并且从酪蛋白衍生的合成的肽以1mg/小鼠被腹膜内注射，一周之后第二次注射0.1mg。
胆固醇的血水平依据基于Roeschlou & Allin酶方法的RocheCholesterol Assay(胆固醇测定)(Roche，Inc.，德国)确定。
实验结果
来自天然酪蛋白的肽：源于观察，凝结的奶偶尔不支持细菌的生长，一种有杀菌性质的酪蛋白片段被从乳蛋白分离(属于Katzirkatchalsky等的美国专利No.3,764,670)。从天然酪蛋白蛋白水解衍生的天然的肽通过酸性沉淀酪蛋白蛋白水解消化物的溶解部分、透析和冷冻干燥而制备。当在长期储存后检测生物活性，注意到这样的天然的肽制品当冷冻干燥和在4℃储存时至少24个月保留活性(体外和体内)。
低温处理从天然酪蛋白得到的肽：依据传统方法的酪蛋白水解产物的制备例如Hill等描述的，需要高温(＞75℃)钝化蛋白水解酶，一种耗时的过程，引起生产从天然酪蛋白得到的肽所需的大量蛋白水解酶的不可逆的变性，以及对水解产物自身潜在的未知影响。当还原本发明到实践，惊讶地发现产生从天然酪蛋白得到的肽的蛋白水解过程能被更有效地终止，通过新的、简单的方法，包括冷却、碱化处理、和之后的酸化。
在代表性的制剂中，以及比较低温处理和传统的热处理，如上述制备的1.7％的酪蛋白溶液用蛋白水解酶(例如凝乳酶(也称作凝乳酶(renin))或是晶状凝乳酶或是非动物来源的商业凝乳酶。其它蛋白水解酶如胃蛋白酶也可以使用)蛋白水解。
每ml的1.7％的酪蛋白溶液加入20ng的酶。酪蛋白蛋白水解消化在30℃、14.5小时后完全。
在反应完全时，反应混合物被立即冷却到10℃以下，用冷的TCA(三氯乙酸)制成2％，并维持在10℃以下。在移去和过滤所得的上清液后，其仍然包含从天然酪蛋白得到的肽的大部分，上清液在冷的TCA中制成10-12.5％，并在10℃以下1370xg离心。
包括从天然酪蛋白得到的肽的所得的沉淀物被移去并溶解于H2O中并用碱性溶液制成强碱性(pH9-13)。所述溶液被保持在这个碱性pH从15分钟到1个小时，而后用HCl酸化到终pH在pH7-9之间。肽的进一步纯化如上所述用凝胶过滤或透析过滤完成。
惊讶地观察到维持溶液在碱性pH(pH9-13之间)足够长的时间(从15分钟到1个小时)完全终止酶的活性并造成其不可逆的变性。
为了鉴别从天然酪蛋白得到的肽中包含的活性肽，如上所述低压冻干的制剂用高效液相色谱(HPLC)分割。所有低压冻干的样品的分析显示相似的滞留时间资料，带有如前面所述的内容物。
因此，从天然酪蛋白制剂得到的天然的肽的主要成分是αS1酪蛋白N末端片段、代表β-酪蛋白片段的肽(SEQ ID NO.27)、和代表κ-酪蛋白片段的肽(SEQ ID NO.30)。鉴别的次要成分是αSl酪蛋白N末端部分的片段，代表一种进一步不同的αS1酪蛋白片段的肽(SEQ ID NO.31)、代表αS2酪蛋白片段的肽(SEQ ID NO.32)、和代表一种进一步不同的αS2酪蛋白片段的肽(SEQ ID NO.33)。
从天然酪蛋白得到的肽对啮齿动物和人类是无毒的：在小鼠、大鼠、豚鼠和人类志愿者对从天然酪蛋白得到的肽的大剂量的短期和长期影响的大量研究证明制剂无毒性、致畸性或不良副反应。在一个系列的测试中，代表设想的有效剂量7000倍的从天然酪蛋白得到的肽的单个剂量被肌内给药给小鼠。小鼠治疗14天后的标准的尸体病理检查揭示对内部器官无毒作用或其它异常。相似的在豚鼠中的毒性检测揭示从天然酪蛋白得到的肽的单个20mg的肌内剂量在2周后无异常。在另一系列的实验中，从天然酪蛋白得到的肽的大剂量给药给健康的小鼠在2周后对多种造血参数没有影响，包括白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、电解质、葡萄糖和其它。第三系列的实验测试在小鼠和大鼠重复100mg/kg体重的大剂量2周后揭示没有过敏性的、延迟的表皮的或过敏反应并且尸体检查中没有病理影响。当检测从天然酪蛋白得到的肽对放射、骨髓重建的BALB/c和C3H/HeJ小鼠的长期存活的影响时，治疗小鼠的存活率(27只BALB/c和C3H/HeJ的18只；66％)明显高于白蛋白治疗的对照的存活率(26只BALB/c和C3H/HeJ的4只；15％)。用从天然酪蛋白得到的肽治疗的小鼠的标准的致畸试验[细节参见例如Drug Safety in Pregnancy，Folband Dakes，p.336，Elsevier；Amsterdam，NewYork，Oxford(1990)]揭示所述肽对任何发育参数没有影响。
与在啮齿动物中测试没有毒性或副反应相似，从天然酪蛋白得到的肽当给药给人类时也是安全的。给7个健康志愿者肌内注射从天然酪蛋白得到的肽之前、之后7天以及在过程中比较血和尿样揭示没有任何临床参数的变化。没有观察到任何其它负面影响。
因此大剂量和长期用从天然酪蛋白得到的肽治疗啮齿动物揭示没有明显的毒性的、病理的、超敏反应、产生畸形的、血清学的或任何其它负面影响。而且，从天然酪蛋白得到的肽给药给放射的小鼠，处在短期和长期的并发症危险中，证明在200-300天中显著的存活优势。这些以及接受从天然酪蛋白得到的肽注射的健康人类志愿者没有任何不期望的影响清楚地显示胃肠外给药的肽的安全性。
移植受体小鼠骨髓的重建：当C57B1/6小鼠被致死放射和用同基因骨髓重建，同基因骨髓来自在收集骨髓前1天用1mg/动物的从天然酪蛋白得到的肽处理或不处理的小鼠，接受处理小鼠骨髓的放射小鼠的生存率远超过接受没有处理小鼠骨髓的放射小鼠的生存率(接受处理小鼠骨髓的放射小鼠的生存率是放射后10天，18只的15只；而接受用盐处理的对照小鼠骨髓的放射小鼠的生存率是放射后10天，17只的4只)。接受处理小鼠骨髓的放射小鼠的脾包括大约2-3倍于接受用盐处理的对照小鼠骨髓的放射小鼠的脾的集落(1-5个集落与0-3个集落相比)。
从天然酪蛋白得到的肽刺激淋巴细胞的增殖：自然杀伤(NK)和细胞毒T细胞对免疫系统防止感染性病源和肿瘤细胞的侵入是关键的，通过活性的细胞毒性和免疫调节淋巴因子的分泌。免疫妥协(compromise)例如在AIDS中或在化疗后导致异常、弱化的T或NK细胞活性。当来自BALB/c和C57BI/6小鼠的正常小鼠骨髓细胞在100μg/ml从天然酪蛋白得到的肽存在下培养，观察到在两个效应细胞：靶细胞比例组的NK活性的明显提高。而且，比较两组揭示清楚的剂量响应关系。在25∶1的效应细胞：靶细胞的比率平均NK活性从13.93％提高到30.77％以及在50∶1的效应细胞：靶细胞的比率平均NK活性从13.68％提高到44.05％(图1)。相似的实验使用粒细胞集落刺激因子-治疗的供体的人外周血干细胞，显示更显著的、浓度依赖的从天然酪蛋白得到的肽对靶细胞裂解的刺激。
在第一套实验中(图2a)，从一个病人获得的血样被测试NK活性并以两个效应细胞：靶细胞的比例与浓度递增的从天然酪蛋白得到的肽孵育。对照只测到4％35S的释放，对照是非治疗的PBSC培养。在最低的肽浓度(5μg/ml)发现几乎同样的放射性百分比(4％)。然而，在更高的肽浓度，在范围10-100μg/ml，效应细胞：靶细胞比例100∶1检测到10.8-14.9％35S的释放和效应细胞：靶细胞比例50∶1为8.3-14.5％35S的释放(图2a)。
当来自正常(病人1)和感染的(病人2-6)人类供体的PBS细胞与浓度递增的从天然酪蛋白得到的肽孵育时，检测到感染病人的NK细胞活性显著地增加。因此，虽然从天然酪蛋白得到的肽对正常病人NK细胞活性影响很小(病人1，13-15％35S释放的增长)，但是来自乳腺癌和非霍杰金淋巴瘤病人(例如病人3和4)的PBS细胞显示明显的、剂量依赖的NK细胞活性的增长(分别为3.5-10.8％35S；12.2-19.1％35S)(图2b)。
从天然酪蛋白得到的肽刺激CD56表面抗原阳性的(NK)细胞的增殖：在另一系列的实验中，来自5个接受G-CSF治疗的人类供体的外周血干细胞(PBSC)被与从天然酪蛋白得到的肽一起孵育10、14或28天，然后分析CD56抗原的存在。有时候在来自所有供体的肽治疗的细胞检测到明显的CD56抗原增长，除了一个(病人1)。代表性的反应在图3a中描述：在有或没有从天然酪蛋白得到的肽的条件下孵育10天后，CD56表面抗原阳性的(NK)细胞的存在被用直接荧光染色检测。综上，在有从天然酪蛋白得到的肽条件下孵育增加CD56阳性染色的细胞平均百分比从对照组的0.64％到治疗后的2.0％(图3a)。
从天然酪蛋白得到的肽刺激CD3表面抗原阳性的(T)细胞的增殖：从天然酪蛋白得到的肽对来自5个主体的PBS细胞中的CD3表面抗原阳性(T)细胞增殖的影响通过直接免疫荧光测定。在除了一个病人(病人4)的所有病人，用从天然酪蛋白得到的肽孵育14天显著增加T细胞的增殖，有些增加了多于5倍。总之，CD3阳性染色的细胞的平均百分数从对照组的19.45％增长到治疗组的35.54％(图3b)。
从天然酪蛋白得到的肽刺激CD56和CD3(NK/T细胞)阳性细胞的增殖：在更多的实验中，来自7个病人的PBSC用从天然酪蛋白得到的肽孵育28天，对NK/T细胞(CD56和CD3表面抗原阳性)增殖的影响通过直接免疫荧光测定。用从天然酪蛋白得到的肽孵育刺激T细胞增殖在一些疾患(病人6)5倍以上，而CD3阳性(T-)细胞的平均百分数从对照组的2.08％增长到治疗组的6.49％。CD56和CD3表面抗原都阳性(NK/T)的细胞的数量从对照组的1.1％增长到治疗组的4.3％(图3c)。因此从天然酪蛋白得到的肽刺激来自正常小鼠和人的血细胞前体的T-淋巴细胞和自然杀伤细胞的增殖。明显地，从天然酪蛋白得到的肽的最大的免疫刺激影响是对起始低T-和NK细胞水平的人类供体的作用(图3a-c)。
从酪蛋白衍生的合成的肽体外刺激人类淋巴细胞的增殖：当用代表αS1酪蛋白前3-26残基衍生的合成的肽孵育来自健康和癌症病人的人类PBSC(见以下)，观察到NK细胞活性明显的增长。靶细胞裂解最大的是(比对照高3-5倍以上)在非何杰金淋巴瘤和乳腺癌病人的PBSC培养物中，其用少到10μg/ml的包括αS1酪蛋白前9个或更多残基的肽孵育2天后(图4)。在相同的条件下，测试的肽对来自正常人类供体的PBSC培养物中NK活性没有明显的影响。因此，即使是低浓度的包括αS1酪蛋白N末端序列的最先10个残基的肽对来自癌症病人的细胞在体外能够选择性地刺激淋巴细胞的增殖。
当用代表αS1酪蛋白最先3个氨基酸的从酪蛋白衍生的合成的肽孵育来自患有造血疾病的人类供体的PBS细胞时观察到相似的对NK细胞活性的刺激。用肽孵育PBS细胞增加靶细胞裂解到非治疗的对照的2到8倍以上。5个测试的病人，3个对25μg/ml的肽浓度响应，一个对100μg/ml的肽浓度响应和一个对250μg/ml的肽浓度响应。5个病人的3个对25μg/ml响应。用代表αS1酪蛋白最先3个氨基酸的合成的肽处理来自健康人类供体的PBSC培养物对其中的NK活性没有观察到有显著的影响，证明酪蛋白衍生肽刺激人类淋巴细胞的选择性。
对人类血细胞前体的造血作用的刺激：
血细胞前体分化成多种血细胞：巨噬细胞、单核细胞、粒细胞、淋巴细胞、红细胞和巨核细胞。祖细胞富集于骨髓，但也发现于在粒细胞集落刺激因子治疗后的外周血(PBSCs)，和新鲜的脐带血。当从天然酪蛋白得到的肽以递增浓度(50-600μg/ml)加入到人骨髓、PBSC和脐带血培养物，通过[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷掺入测量到细胞增殖的提高(图5a-5c)。在培养15天后人PBSC的增殖被300μg/ml影响最大(图5a)。注意到用从天然酪蛋白得到的肽(600μg/ml，图5c)孵育14天后(而不是7天后)对培养中脐带血细胞甚至有更大的影响(在[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷掺入实验中3-4倍的增加)。来自4个供体中的3个的培养的人骨髓细胞也对从天然酪蛋白得到的肽(300μg/ml)在孵育21天后(图5b)有强反应(掺入增加3-5倍)。因此，从天然酪蛋白得到的肽刺激来源于骨髓以及其它来源的人血细胞前体的增殖。有趣地，用高浓度(高到500μg/ml)的从天然酪蛋白得到的肽在相似的条件下孵育培养的人K562(慢性髓细胞性白血病)和结肠(结肠癌)细胞系没有[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷掺入的影响。因此，从天然酪蛋白得到的肽体外刺激人血细胞前体的增殖，但不是癌瘤细胞的生长。
从酪蛋白得到的肽刺激巨核细胞生成：
从天然酪蛋白得到的肽刺激培养的小鼠骨髓细胞巨核细胞前体的增殖：多核的巨核细胞源于骨髓的原始干细胞，发育成巨细胞并且每个巨核细胞产生数千个血小板。血小板对血块形成是关键的并且血小板减少症是清髓条件下的主要考虑(化疗或放疗后)。
早期的骨髓细胞培养物能够被诱导形成CFU-GM(粒细胞和单核细胞)集落和CFU-GEMM(粒细胞、红细胞、巨噬细胞和巨核细胞)集落，其包括更多的血细胞类型。集落计数反映特定前体的增殖，细胞数量反映增殖率以及分化细胞计数反映哪种特定的细胞系发育了[Patenkin，D.等人.(1990)，Mol.Cel.Biol.10，6046-50]。用红细胞生成素和IL-3添加25μg/ml从天然酪蛋白得到的肽孵育培养的小鼠骨髓细胞8天增加CFU-GEMM数是对照的2.5倍，CFU-GEMM中的每个集落的相对细胞数增加3倍。在一系列相似的实验中，添加从天然酪蛋白得到的肽到骨髓细胞，其用红细胞生成素和条件培养液孵育(参见材料和实验方法)，刺激了早期和晚期巨核细胞百分数的浓度依赖的增加(没有肽15％巨核细胞，到有500μg/ml从天然酪蛋白得到的肽50％巨核细胞)。因此用从天然酪蛋白得到的肽处理8天显著增加早期小鼠骨髓培养物中巨核细胞形成和发育。
在一系列相似的实验中，合成的αS1-、αS2-、β-或κ-酪蛋白，单独或联合，刺激培养的早期小鼠骨髓细胞中GEMM集落的增殖。如上制备的以及暴露于25μg/ml从β-(SEQ ID NO.28)或κ-(SEQ ID NO.30)酪蛋白衍生的合成的肽的小鼠骨髓细胞中GEMM集落的计数在孵育8天后与非处理的(0μg/ml)对照集落相比很大地增加(＞100％)(图22)。惊讶地，两个肽的联合对GEMM集落形成有更大的影响。暴露小鼠早期骨髓细胞于从β-(SEQ ID NO.28)和κ-(SEQ ID NO.30)酪蛋白(β+κ)衍生的肽优选浓度的联合出乎意料引起GEMM增殖很大提高的影响(＞350％，图22)。因此，α、β-或κ-酪蛋白-酪蛋白衍生的肽的联合比各自单独更有效刺激GEMM增殖。
从酪蛋白衍生的合成的肽刺激培养的小鼠骨髓细胞中巨核细胞前体的增殖：
与上面和后面的实验条件相似，代表αS1酪蛋白最先5-24个氨基酸的从酪蛋白衍生的合成的肽增加早期和晚期巨核细胞的百分比从没有合成肽的15％到有25μg/ml合成肽的40％以上(图7)。用代表最先5、6、11、12、17、18、19、20、21和24个氨基酸的合成的酪蛋白衍生肽处理8天显著刺激巨核细胞形成和早期小鼠骨髓培养物的发育的增加。其它从αS1酪蛋白衍生的合成的肽观察到有刺激作用，尽管温和但是可评估的。
在相似的实验食物疗法，代表β-酪蛋白(SEQ ID NO.28)的氨基酸193-208、κ-酪蛋白(SEQ ID NO.30)的氨基酸106-127和αS1酪蛋白(SEQ IDNO.21)的氨基酸1-22的合成的肽都刺激早期、晚期和所有巨核细胞形成和早期小鼠骨髓培养物的发育的提高。总体上巨核细胞增殖的增加高于对照21％、32％和57％，分别在添加了合成的κ-酪蛋白(SEQ ID NO.30)、β-酪蛋白(SEQ ID NO.28)和αS1酪蛋白(SEQ ID NO.21)的细胞中观察到(图21)。
从天然酪蛋白得到的肽刺激培养的人骨髓细胞中巨核细胞生成：当100μg/ml从天然酪蛋白得到的肽在相似的条件下加入来自健康供体的人骨髓细胞培养物，CFU-GM集落形成在有或没有另外的刺激因子(GM-CSF，CM)的条件下增加。从天然酪蛋白得到的肽在红细胞生成素存在的情况下也刺激红细胞形成集落。用血小板生成素(TPO)处理人骨髓细胞刺激巨核细胞(MK)集落形成。添加300μg/ml从天然酪蛋白得到的肽到TPO处理的细胞在MK集落增殖中刺激了2倍以上的增加(没有肽16个集落/2×105细胞，有从天然酪蛋白得到的肽35个集落/2×105细胞)。
在其它造血因子存在的情况下，例如红细胞生成素、人IL-3、hSCF和AB血清，用从天然酪蛋白得到的肽孵育14天，刺激来自人骨髓细胞CFU-GEMM集落接近3倍的增长(用500μg/ml从天然酪蛋白得到的肽158个集落，只用因子68个集落)，但对培养的脐带血CFU-GEMM形成作用小一些(1.5倍)。培养的人骨髓和脐带血集落中的相对细胞数计数反映巨核细胞细胞增殖对25μg/ml从天然酪蛋白得到的肽的反应(参见图6中的表格)。因此用从天然酪蛋白得到的肽孵育培养的人早期骨髓和脐带血细胞刺激定向巨核细胞和红细胞集落的发育和增殖。明显地，在刺激巨核细胞生成中TPO和从天然酪蛋白得到的肽的协同作用提示这种潜在的造血生长因子在从酪蛋白衍生的肽的刺激性质的机制中的可能作用，以及进一步提示通过从天然酪蛋白得到的肽起作用的、TPO介导的大范围的相似的增加的可能性。
从天然酪蛋白得到的肽和合成的从天然酪蛋白得到的肽有助于红细胞生成素(EPO)在培养的人骨髓细胞的影响：从酪蛋白衍生的天然和合成的肽对培养的人骨髓细胞红细胞增殖的影响在与上述巨核细胞生成所列出的条件相同的条件下评价。当在有EPO存在的情况下加入50-300μg/ml从天然酪蛋白得到的肽或100μg/ml从酪蛋白衍生的合成的肽(F，表3，SEQ ID NO：18)刺激红细胞前体的增殖(BFU-E集落的出现)是单独用EPO处理的骨髓细胞的1.5(合成的肽)到4倍。因此，从天然酪蛋白得到的肽及其合成的衍生物起作用以促进EPO刺激红细胞生成的影响，并且因而可用于提高大范围的临床重要的EPO介导的影响。
从酪蛋白衍生的合成的肽刺激小鼠CFU-GEMM中树突细胞的增殖：从酪蛋白衍生的合成的肽对小鼠初期骨髓细胞中树突细胞增殖的影响在与上述刺激巨核细胞所列出的条件相同的条件下评价。代表αS1酪蛋白最先的2、3、5、6、7、9、11、12、16、23、24和26个氨基酸的从酪蛋白衍生的合成的肽刺激树突细胞的增殖，从总细胞的2.2％到23％，与没有用从酪蛋白衍生的合成的肽孵育的细胞样品中的0.1-0.2％树突细胞相比(图7)。
从酪蛋白衍生的合成的肽刺激小鼠CFU-GEMM中浆细胞的增殖：从酪蛋白衍生的合成的肽对小鼠初期骨髓细胞中浆细胞增殖的影响在与上述刺激巨核细胞所列出的条件相同的条件下证实。代表αS1酪蛋白最先的2、3、5、7、11、16、1 7、1 8、19、20、21、22、23和24和26个氨基酸的从酪蛋白衍生的合成的肽显著刺激浆细胞的增殖，从总细胞的1.5％到12.3％，与没有从酪蛋白衍生的合成的肽的总细胞的0.3％相比(图7)。
从酪蛋白衍生的合成的肽刺激CFU-GEMM中巨噬细胞的增殖：从酪蛋白衍生的合成的肽对小鼠初期骨髓细胞中巨噬细胞的增殖的影响在与上述刺激巨核细胞所列出的条件相同的条件下证实。用代表αS1酪蛋白最先的7、9、16、和23个氨基酸的从酪蛋白衍生的合成的肽显著刺激巨噬细胞的增殖，从对照的总细胞的大约17％到用从酪蛋白衍生的合成的肽孵育的接近总细胞30％(图7)。
从酪蛋白衍生的合成的肽刺激CFU-GEMM中红细胞的增殖：从酪蛋白衍生的合成的肽对小鼠初期骨髓细胞中红细胞的增殖的影响在与上述刺激巨核细胞所列出的条件相同的条件下证实。用代表αS1酪蛋白最先的4个氨基酸(SEQ ID NO.3)的从酪蛋白衍生的合成的肽显著刺激红细胞的增殖，从对照的总细胞的大约53％到用从酪蛋白衍生的合成的肽孵育的接近总细胞71％(图7)。
从酪蛋白衍生的合成的肽刺激CFU-GEMM中多形核(PMN)细胞的增殖：从酪蛋白衍生的合成的肽对小鼠初期骨髓细胞中多形核(PMN)细胞的增殖的影响在与上述刺激巨核细胞所列出的条件相同的条件下显示。用代表αS1酪蛋白最先3、6、7、9、16以及更多，多到包括26个氨基酸的合成肽孵育细胞，明显地刺激PMN的增殖，从未孵育对照的总细胞的1.6％到用从酪蛋白衍生的合成的肽孵育细胞的2.9％和14.9％之间(图7)。
从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽刺激CFU-GM中粒细胞生成(GM)细胞的增殖：如以上提及的，CFU-GM(粒细胞和单核细胞)集落，以及CFU-GEMM(粒细胞、红细胞、巨噬细胞和巨核细胞)集落的形成和扩增组成骨髓中造血祖细胞分化的早期事件的一种。从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽对小鼠初期骨髓细胞中粒细胞和巨噬细胞的增殖的影响在与上述刺激巨核细胞所列出的条件相同的条件下证实，有添加的细胞因子IL-3和粒细胞刺激因子(G-CSF)。用代表氨基酸1-22(J，SEQ ID NO.21)和1-6(30-4，SEQ ID NO.5)的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽单独或联合孵育小鼠骨髓祖细胞，当一起添加G-CSF(在G-CSF存在的情况下对“30-4”和“J”分别增加18％和25％)(图19)，显著地刺激粒细胞的增殖。
从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽的类似的影响在对来自人骨髓祖细胞的粒细胞和巨噬细胞的增殖中被观察到。惊讶地，给药从α-酪蛋白(″J″，SEQ ID NO：21)或β-酪蛋白(SEQ ID NO：28)衍生的合成的肽分别增加G-CSF对粒细胞生成刺激作用分别＞50％(100μg″J″)和30％(300μg“β”)(图20)。因此，从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的合成的肽或其联合有效地增加粒细胞生成因子例如G-CSF对骨髓造血祖细胞分化和增殖的影响。
从天然酪蛋白得到的肽在放射和骨髓移植后体内刺激造血作用：清髓治疗可能引起危及生命的血小板和白细胞的减少，其能持续即使给药血细胞和生长因子。以下证实放射和骨髓移植后从天然酪蛋白得到的肽的影响。
从天然酪蛋白得到的肽在小鼠同基因骨髓移植后增加白细胞和血小板重建：当亚致死放射(600 cGy)、最小骨髓重建时，BALB/c小鼠(n＝12)在骨髓细胞重建后一天通过静脉注射接受1mg/小鼠的从天然酪蛋白得到的肽，与接受人血清白蛋白的对照相比注意到在治疗后第4、6和15天显著增加外周血白细胞(图8)。治疗和对照放射、骨髓移植的小鼠的外周血的血小板计数都相同的抑制到治疗后的8天。然而，到13天用从天然酪蛋白得到的肽治疗的小鼠的优势被注意到，显示显著的增长超过人血清白蛋白治疗的对照，其在15天变得更明显(图9)。因此，从天然酪蛋白得到的肽在用有限数量的骨髓细胞移植后增强血小板和白细胞的重建。预期在优化的而不是有限数量的骨髓细胞的重建中会进一步增加。
进一步，在另一系列相似的实验中，发现部分纯化(用1 kDa截断的膜透析过滤)制备的从天然酪蛋白得到的肽，其包括从天然αS1-和β-酪蛋白得到的肽，显著增强放射、骨髓移植小鼠血小板重建(比对照高出约25％)。
从酪蛋白衍生的合成的肽在小鼠同基因骨髓移植后增强白细胞重建：当亚致死放射(600 cGy)、最小骨髓重建时，BALB/c小鼠(每个合成的肽n＝5，在对照组中n＝10)在骨髓重建后一天通过腹膜内注射接受1mg/小鼠的从酪蛋白衍生的合成的肽(长度13-26个氨基酸，参见表3)，观察到白细胞重建的明显的提高。与接受人血清白蛋白的对照(第10天：1.67×106细胞/ml；第12天：4.64×106细胞/ml)相比，注意到有15个(第10天：1.72×106细胞/ml；第12天：6.54×106细胞/ml)和22个(第10天：2.74×106细胞/ml；第12天：5.20×106细胞/ml)氨基酸(参见表3)的肽在10-14天的周期中外周血白细胞计数的显著增加。因此，从酪蛋白衍生的合成的肽增强用有限数量的骨髓细胞移植后的白细胞重建。
在一系列相似的实验中，F1小鼠(n＝5小鼠/组)，如前面所述已经被亚致死放射(750 cGy)和骨髓重建，在重建后一天单独或联合接受静脉注射的1mg从αS1-(SEQ ID NO.21)、β-(SEQ ID NO.28)、或κ-酪蛋白(SEQ IDNO：434)衍生的合成的肽，或接受从天然αS1-或κ-酪蛋白衍生的肽。外周血白细胞计数(图24)清楚地证实从天然αS1-或κ-酪蛋白衍生的肽和从αS1-、β-、或κ-酪蛋白衍生的合成的肽两种肽对早期白细胞重建(移植后5和7天)的强刺激作用。
当还原本发明到实践，发现从α-、β-、或κ-酪蛋白衍生的肽的联合比等量的单个肽显著地更有效。用优化剂量的从αS1-(SEQ ID NO.21)和β-酪蛋白(SEQ ID NO.28)衍生的合成的肽联合治疗的小鼠比单独的单组分的从αS1-或β-酪蛋白衍生的合成的肽刺激白细胞重建到显著更高的程度(图25)。
从酪蛋白衍生的合成的肽在小鼠同基因骨髓移植后增强血小板重建：为了证实从酪蛋白衍生的合成的肽增强在造血干细胞培养中巨核细胞增殖的观察到的能力(参见图6和7)，研究了体内肽对血小板重建的影响。当致死放射(800cGy)、最小骨髓重建的小鼠(每组n＝5)接受100μg/小鼠合成的肽4P和3a(长度分别6和12个氨基酸-参见表3)每天4次腹膜内注射(移植后4-7天)，观察到比非治疗的对照血小板重建的明显的增加。在移植后10和12天注意到两种肽对血小板计数的明显增加。用肽4P治疗在移植后12天增加计数29％(872×103/ml与676×103/ml对照组比较)，而用肽3a治疗在移植后10天增加计数35.5％(229×103/ml与169×103/ml对照组比较)，移植后12天增加13.5％(622×103/ml与461×103/ml对照组比较)。因此，同样的从酪蛋白衍生的合成的肽增加体外巨核细胞增殖和体内骨髓移植后血小板重建。
在更多系列相似的实验中，亚致死放射(750 cGy)和最小骨髓重建(3×106细胞)的F1小鼠接受静脉注射的1mg从酪蛋白衍生的合成的肽，显示血小板计数的显著增高。接受代表β-酪蛋白氨基酸193-208(SEQ IDNO.28)和代表κ-酪蛋白氨基酸106-127(SEQ ID NO.30)的合成的肽，在移植后10天与那些非治疗对照小鼠相比，分别增加血小板计数32％和26％。骨髓接受小鼠，用代表αS1-酪蛋白氨基酸1-22(SEQ ID NO.21)(″J″)的合成的肽治疗，在移植后10天显示相似的对血小板重建的增强(图23)。
从天然酪蛋白得到的肽体外抑制T淋巴细胞细胞系被HIV-1病毒感染
从天然酪蛋白得到的肽穿透进入T淋巴细胞：为研究从天然酪蛋白得到的肽的免疫刺激和抗病毒影响机制，易感染的Sup-T1和CEM培养的人T细胞在体外感染HIV-1病毒之前用从天然酪蛋白得到的肽处理。荧光显微镜揭示FITC-连接的从天然酪蛋白得到的肽(100μg/ml)穿透Sup-T1细胞，当如前面所述孵育时(图10a-f)。在15分钟后在细胞质中观察到少量标记(图10a-b)。在30分钟(图10c-d)在细胞质中观察到更多的标记，核摄取的很少。孵育1小时以后(图10e-f)在细胞质中观察到FITC-连接的从天然酪蛋白得到的肽，但它们多数集中在细胞核。通过流式细胞计量术分析Sup-T1细胞证实在孵育5分钟后标记的从天然酪蛋白得到的肽的增加的摄入。
从天然酪蛋白得到的肽增强人类淋巴细胞增殖：培养液中从天然酪蛋白得到的肽的存在引起在14天的过程中Sup-T1细胞计数的增加。观测到50 μg/ml从天然酪蛋白得到的肽在第7天有最大的细胞数的增加(42％)，对1000μg在第10天(30％)以及对600μg(32％)在孵育第14天(没有显示数据)。测量培养细胞的[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷的掺入，提供反映细胞数量增长的增殖指数，注意到600μg/ml从天然酪蛋白得到的肽在第10天以及50μg/ml在第14天(图11)有最明显的影响。第14天的增殖指数的降低可能反映细胞过度生长和营养物的耗尽。
从酪蛋白衍生的合成的肽增强人类淋巴细胞增殖：培养液中从酪蛋白衍生的合成的肽(所有的肽列在表3)的存在引起在10天的过程中Sup-T1细胞计数的增加。对所有合成的肽增加是相似的。观察到250μg/ml和500μg/ml代表最先9个氨基酸(分别为80％和33％)的肽对感染细胞淋巴细胞数量最大的增加(没有显示数据)。
从天然酪蛋白得到的肽抑制HIV-1感染人类淋巴细胞：易感染的CEM淋巴细胞在与HIV-1孵育前用从天然酪蛋白得到的肽(50-1000μg/ml)预处理24或48小时，或暴露于用从天然酪蛋白得到的肽预处理3小时的HIV-1，与非处理的对照相比显示增高的细胞增殖和降低的病毒感染水平。感染后15天细胞计数和HIV-1 p24抗原分析揭示在用600-1000μg/ml从天然酪蛋白得到的肽孵育病毒3 小时后抑制病毒感染100％以及用50和600μg/ml肽孵育细胞24小时后分别抑制98％和99％(与非感染的对照UIF的细胞数比较)。更长时间的孵育没有发现更有效(图12)。尽管浓度递增的从天然酪蛋白得到的肽在感染后3和24小时增加细胞增殖，在生长最快的培养物中病毒感染被最明显地抑制。发现在HIV-1感染前用从天然酪蛋白得到的肽预处理的Sup-T1细胞甚至更明显增加的细胞增殖和HIV-1感染的抑制(平均病毒感染的抑制对病毒预处理3小时的、细胞预处理24和48小时的分别为96.7％、88.7％和95.7％)(没有显示)。因此，从天然酪蛋白得到的肽穿透培养的人类淋巴细胞和它们的细胞核，增强细胞生长以及显著降低CD4细胞对HIV-1感染的易感性。如此，从天然酪蛋白得到的肽被期望有用于防止HIV感染和感染后治疗HIV感染的和AIDS病人。
从酪蛋白衍生的合成的肽抑制HIV-1感染人类淋巴细胞：从酪蛋白衍生的合成的肽抑制HIV-1感染人类淋巴细胞的能力在以上列出的相同条件下使用CEM-淋巴细胞而证实。易感染的CEM淋巴细胞在与HIV-1孵育前用从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽(50-1000μg/ml)预处理24或48小时，或暴露于用从αS1-酪蛋白衍生的合成的肽预处理3小时的HIV-1，与非处理的对照相比显示增高的细胞增殖和降低的病毒感染水平。用代表αS1-酪蛋白最先3个氨基酸的合成的肽孵育24或48小时赋予在与HIV-1孵育后显著程度的抗感染。淋巴细胞数量在处理细胞中是1.29×106(100μg/ml)和2.01×106(500μg/ml)对比于HIV-1感染的对照1.06×106(图13)。在同一细胞中HIV-1感染的水平，其通过感染后7天的HIV-P24抗原分析，在肽处理的细胞中(用100μg/ml和500μg/ml分别为0.17和0.14ngP24抗原/ml)显著降低，对比于非处理的对照(0.52ng p24抗原/ml)。
同样，显著的HIV-1感染抑制在暴露于用代表αS1-酪蛋白最先5个氨基酸的合成的肽预处理(3小时)的病毒的CEM细胞中观察到。
用10和25μg肽3P/ml孵育的培养物的细胞计数分别是1.17×106和1.26×106，对比于HIV-1感染的对照1.06×106。
感染后7天的HIV-P24抗原分析揭示在处理的培养物中HIV-1感染水平的明显降低(对10和25μg/ml分别为0.26和0.18ng p24抗原/ml，对比于对照的0.52ng p24抗原/ml)。
同样，用代表αS1-酪蛋白最先6个氨基酸的从酪蛋白4P衍生的合成的肽预孵育病毒3小时对CEM淋巴细胞对HIV-1感染的易感性有显著的影响。
细胞数量在浓度为25和250 μg/ml情况下受影响最大(分别1.26×106，和1.59×106，对比于感染的对照值1.06×106)。
感染后7天的HIV-P24抗原分析揭示剂量依赖的病毒颗粒的降低，对比于非处理的、感染的对照培养物(图13)。因此，通过从天然酪蛋白得到的肽提供给淋巴细胞防止HIV-1的感染的防护被保留在代表少到αS1-酪蛋白最先5个N-末端氨基酸中。
从天然酪蛋白得到的肽防止非肥胖型(NOD)小鼠糖尿的发展：非肥胖型(NOD)小鼠自发地发展青少年(I型，IDDM)糖尿病，造成胰脏β细胞炎症并最终导致疾病和死亡的一种自身免疫疾患。雌性NOD小鼠十分易感染，早在5周大就显示巨噬细胞侵袭胰岛间隙基质的迹象。5周一周一次或两次注射100μg从天然酪蛋白得到的肽(总共5或10次注射)完全有效防止与疾病发病和过程有关的糖尿。不迟于200天，100％非治疗的对照小鼠(n＝5)变成糖尿病并随后死亡，而治疗的小鼠(n＝10)保持100％血糖正常，在365天所有的依然存活(图14)。因此，从天然酪蛋白得到的肽有效防止遗传上易感小鼠对抗自身免疫炎症疾患的发病。
从酪蛋白衍生的合成的肽防止非肥胖型(NOD)小鼠糖尿的发展：
从酪蛋白衍生的合成的肽对NOD小鼠糖尿发展的预防作用在上面列出的相同的条件下显示，除了小鼠接受只是5周一周两次注射100μg从酪蛋白衍生的合成的肽。这些实验的结果呈现在以下的表4中：
表4
合成肽对NOD小鼠中IDDM的影响
肽衍生物代码 健康/总数* 尿糖 IPGT测试
0分钟(负荷前)  60分钟负荷后
 Y(SEQ ID NO：7) 1/5 阴性 121  138
 X(SEQ ID NO：8) 3/5 阴性 94  114
阴性 104  119
阴性 141  114
 1a(SEQ ID NO：9) 1/5 阴性 88  106
 2a(SEQ ID NO：10) 4/5 阴性 215  183
阴性 112  119
阴性 95  107
阴性 159  204
 3a(SEQ ID NO：11) 3/5 阴性 135  137
阴性 205  197
阴性 201  211
 A(SEQ ID NO：12) 2/5 阴性 134  164
阴性 105  107
 B(SEQ ID NO：13) 2/5 阴性 130  117
阴性 130  97
 D(SEQ ID NO：15) 2/5 阴性 99  108
阴性 130  136
 I(SEQ ID NO：20) 2/5 阴性 324  没有测试
阴性 124  138
 J(SEQ ID NO：21) 3/5 阴性 166  没有测试
阴性 193  没有测试
阴性 186  没有测试
 K(SEQ ID NO：22) 2/5 阴性 116  143
阴性 443  没有测试
 Chay-13 2/5 阴性 123  130
阴性 111  111
 Chay-13 2/5 阴性 128  116
阴性 113  125
 对照 0/5
腹膜内注射1g/kg体重葡萄糖后0分钟和60分钟从眶旁网状组织取血。血浆葡萄糖水平用Glucose Ahalyzer 2(Beckman Instruments，Fullerton，CA)确定并表示为mmol/L。
*健康和良好的＝尿中没有发现糖。
糖尿＝＞1000mg/dL。
IPGTT用6只健康雌性对照小鼠完成：0分钟-110mmol/L；
60分钟-106mmol/L血糖。
代表最先9个(X)(SEQ ID NO.8)、11个(2a)(SEQ ID NO.10)和12个(3a)(SEQ ID NO.11)氨基酸的从酪蛋白衍生的合成的肽以及αS1-酪蛋白更长的链对预防与疾病的发病和过程相关的糖尿是高度有效的。
用从酪蛋白衍生的合成的肽的治疗作用在25周后评价。在那时，非治疗对照组(n＝5)的所有5只小鼠变得糖尿病，如由直接的(＞1000mg/dl)糖尿存在提示的(表4)。
用代表αS1-酪蛋白N末端的最先9个(9)氨基酸的合成的肽治疗的NOD小鼠5只中的3只(3/5)没有发现糖尿。用αS1-酪蛋白N末端的最先11个(11)氨基酸的合成的肽注射组的NOD小鼠5只中的4只(4/5)没有发现糖尿。
在有糖尿检出的肽治疗的小鼠的组中，与非治疗的对照糖尿发病(数据没有显示)相比发病通常明显推迟(3-5周)，提示即使当不完全时肽的明显保护效应。
更短的从酪蛋白衍生的合成的肽的保护效应也在NOD小鼠中研究。在更多系列与上面所述相似的实验中，给药代表αS1-酪蛋白最先3个(1P)和4个(2P)N末端氨基酸的肽有效预防治疗小鼠糖尿的发病(在16周分析)，而非治疗的对照已经全部变得糖尿病(100％糖尿)(数据没有显示)。
在25周后进行的葡萄糖耐量(IPGT)测试，健康和良好的NOD小鼠、用最先9个氨基酸(SEQ ID NO.8)合成的酪蛋白衍生肽注射的组没有显示葡萄糖代谢异常的迹象(葡萄糖负载前和60分钟后正常的血糖值)。
在用代表αS1-酪蛋白N末端的最先11个氨基酸(2a)(SEQ ID NO.10)衍生的合成的肽治疗的组中，引起静止的血浆葡萄糖水平在5只小鼠的2只略微提高(215和159mmol/L)，并且在负载后60分钟保持轻度的提高(183和204mmol/L)，提示轻度糖尿病倾向。其它2只小鼠在测试的过程中保持正常的糖尿范围(表4)。
在另一套实验中，在基本相同的条件下，小鼠接受从αS1-酪蛋白N末端的最先15个氨基酸(C)(SEQ ID NO.14)或最先19个氨基酸(G)(SEQ IDNO.18)衍生的合成的肽、或PBS对照注射3次每次1mg间隔3天。在用肽C(SEQ ID NO.14)治疗的小鼠中，在25周5只中的3只没有发现糖尿，并且对葡萄糖负载(IPTG测试)的响应血葡萄糖值是正常的(＜120；101，113，102)。在用肽G(SEQ ID NO.18)治疗的小鼠中，5只中的2只没有发现糖尿，对葡萄糖负载(IPTG)的响应血值在120以下。通常正常的IPGTT结果反映健康的、存活的肽治疗的小鼠没有糖尿(表4)。代表只是数个αS1-酪蛋白N末端氨基酸的合成的肽以及从天然酪蛋白衍生的肽显著降低有遗传因素的NOD小鼠对自身免疫糖尿病疾病的易感性。
酪蛋白衍生的合成的肽显著降低血总胆固醇水平(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)：腹膜内给药从酪蛋白衍生的合成的肽引起血脂(HDL、LDL和TC)值在实验高胆固醇血症小鼠中的显著降低。在致动脉粥样化的Thomas Hartroft饮食1周后，小鼠的血胆固醇水平升至318mg/dl的水平。
在每只小鼠用1mg从酪蛋白衍生的合成的肽治疗1周后，与对照组相比[TC：分别308和279mg/dl；HDL：分别42.5mg/dl和41mg/dl以及LDL：分别247mg/dl和221mg/dl对比于饮食诱导的高胆固醇血症-/高脂血的对照组393mg/dl(TC)、54.5mg/dl(HDL)和326mg/dl(LDL)](图15)，用代表αS1-酪蛋白最先5个氨基酸(3P)(SEQ ID NO.4)和11个氨基酸(2a)(SEQ ID NO.10)的从酪蛋白衍生的合成的肽治疗的组有明显降低的TC、HDL和LDL值。因此，代表αS1-酪蛋白N末端最先少数氨基酸的合成的肽在单次、腹膜内给药后一周内有效降低实验诱导的高脂血症和高胆固醇血症。
从天然酪蛋白得到的肽的临床试验：
病人接受1、2、或3次肌内注射50mg从天然酪蛋白得到的肽，如显示的每次治疗分成3个长效药剂。
从天然酪蛋白得到的肽刺激癌症病人的造血作用：6个已经接受或正在接受化疗的癌症病人的血液学特征如显示的在给药从天然酪蛋白得到的肽之前和之后被测定。特别注意分别代表血小板生成、白细胞生成、和红细胞生成的血小板(PLT)、白细胞(WBC)、红细胞(RBC)和血红蛋白(HGB)值的变化。
G.T.(女性病人，病人1)：病人有卵巢癌，进行子宫切除之后化疗。她在手术后2个月和之后2个半月接受两次肌内注射从天然酪蛋白得到的肽。在第一次和第二次给药从天然酪蛋白得到的肽之间没有化疗。从第一次注射后6天、第二次注射后7天和13天的血液检测反映血小板和WBC组分相当的增加以及RBC的增加(图16)。
E.C.(女性病人，病人2)：在1983年病人经历过对小叶癌的根治性乳房切除术，并且6年后遭受了胃转移。在开始化疗前3天她接受一次肌内注射(以3个长效药剂)从天然酪蛋白得到的肽的注射，并且第二次在化疗后的10天。虽然从化疗后10和16天的血液计数提示缓解的通常化疗后会遇到的受抑制的血液学特征，注意到从天然酪蛋白得到的肽最显著的影响是化疗前第一次注射后3天(图16)。
E.S.(女性病人，病人3)：病人遭受首次在1987年发现的乳腺癌的大范围转移传播。2年后她接受第一次肌内注射从天然酪蛋白得到的肽，并且在23天后接受第二次。在这段时期没有给药更多的治疗。血液检测提示在第一次治疗后7天PLT很强的增加并且在第二次治疗后7天RBC和WBC的显著增加。
J.R (女性病人，病人4)：病人的诊断是乳腺癌伴有骨转移。她在开始化疗前8天接受一次肌内注射从天然酪蛋白得到的肽，并且14天后另外一次。最显著的影响在化疗诱导的抑制后WBC水平的快速恢复中清楚看到(图16)。
D.M.(女性病人，病人5)：病人遭受肝癌并伴有大范围转移传播。她在接受化疗前10、8、和6天接受3次肌内注射从天然酪蛋白得到的肽。第二系列的注射在化疗后10、12、和14天开始。虽然注意到血液学特征显著的影响是在化疗前的第一系列注射后，但最大的改进是看见在第二系列从天然酪蛋白得到的肽的注射后受抑制的化疗后值快速回到正常的细胞计数(图16)。
因此，给药从天然酪蛋白得到的肽于癌症病人得到改进的血液学特征，特别是增加红细胞生成、白细胞生成和血小板生成，并且能调节和缩短化疗诱导的血液组分抑制的时间。
从天然酪蛋白得到的肽刺激有抗血小板减少症的移植受体的血小板生成：延长的抗输液的血小板减少症并伴有严重出血发作，可能是骨髓移植危及生命的并发症，特别当传统的治疗是无效的时候。有严重抗血小板减少症的2个病人用从天然酪蛋白得到的肽治疗。
M-1(女性病人)：32岁病人遭受急性髓细胞性白血病处于自体干细胞移植后完全缓解期。她已经经历了2种危及生命的出血发作，包括肺出血和软腭大阻塞血肿。在移植后114多天，血小板计数是rhIL-3、rhIL-6、静脉γ-球蛋白和重组红细胞生成素的折射。2次50 mg从天然酪蛋白得到的肽(每次治疗分成3种长效药剂)肌内治疗后，她的疾患立即改善。伴随着血小板计数快速回到正常，用力和屈膝(patechyae)时她的远肢出血的情况退却，她能够继续行走，并且返回国外她的家，没有并发症或副反应。
M-2(男性病人)：30岁病人遭受急性髓细胞性白血病处于自体干细胞移植后第二个完全缓解期，显示完全的抗血小板计数和大量的胃肠道出血发作。他需要每天输液浓缩细胞，已经发展了白蛋白过少症，并且失去对rhIL-3、rhIL-6和γ-球蛋白大量治疗的响应。在移植后86天2次每次50mg从天然酪蛋白得到的肽以3种长效药剂肌内治疗后，观察到快速的血小板重建(图18)和逐渐的不连续的出血。不需要进一步的治疗，并且现在病人有正常的血小板计数、完全没有症状。
因此，两次以0.7-1.0mg/kg体重肌内注射从天然酪蛋白得到的肽的一种过程，每次分成3种长效药剂，对快速重建血小板计数和消除遭受长期的、抗输液的血小板减少症伴有危及生命的出血发作的病人的相关的临床症状的消失是有效的。
从天然酪蛋白得到的肽减少家族性高脂血症中甘油三酯和总胆固醇：
M.S.(女性病人)：病人是38岁的女性有高脂血症的家史。在用从天然酪蛋白得到的肽治疗之前，血液化学特征揭示升高的总胆固醇(321mg/dl)、甘油三酯(213mg/dl；正常范围45-185mg/dl)以及升高的LDL-胆固醇(236.4mg/dl；正常范围75-174mg/dl)。在单次给药50mg从天然酪蛋白得到的肽(以3个肌内长效药剂)后一个月高脂血症被稳定了：总胆固醇降低到270mg/dl、甘油三酯是165mg/dl以及LDL-胆固醇是201mg/dl，仍然高于正常范围但比治疗前值显著降低。没有给药更多的治疗。因此，用从天然酪蛋白得到的肽治疗在人类用其它方式未治疗的高脂血症中快速引起显著降低是有效的。
从天然酪蛋白得到的肽在隐性出血的情况中刺激正常血红蛋白症(normoglobinemia)：
D.G.(男性病人)：病人是75岁的男性遭受贫血和低血红蛋白症(hypoglobinemia)(抑制的RBC、HGB、HCT、MCH和MCHC)伴随大量隐性出血。接受一次肌内注射50 mg从天然酪蛋白得到的肽(以3种长效药剂)后一个月，观察到贫血的显著降低。2个月后，RBC接近正常值(4.32代替3.44 M/μl)，HGB增加(11.3代替8.9g/dl)以及HCT、MCH和MCHC都改善到接近正常值，尽管隐性出血的持续。因此，一次注射从天然酪蛋白得到的肽好像能刺激红细胞生成和减少与人类失血联系的贫血。
可以理解本发明的某些特点，为了清楚，描述于不同的实施方式的内容中，也可以在单个实施方式中联合提供。相反地，本发明的多个特点，为了简练，描述于单个实施方式的内容中，也可以分开的或以任何合适的亚联合提供。
尽管本发明已经与其特别的实施方式联合描述，修正和变更对本领域的技术人员是明显的。相应的，预期包含包括在附加的权利要求的精神和宽的范围中的所有这样的选择、修正和变更。在此详述中提及的所有的出版物、专利、专利申请和用使用号码识别的序列在此以它们的整体作为参考并入本详述，到达同样的程度好像每个单独的出版物、专利、专利申请或序列被特别地和单独地被显示以通过参考在此并入。另外，引用或识别本申请的任何参考不应该解释为这样的参考作为本发明的以前的技术是可以得到的许可。
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Claims (221)

1.一种预防或治疗自身免疫或感染的疾病或疾患的方法，所述方法包括给药于需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述自身免疫或感染的疾病或疾患选自由病毒疾病、病毒感染、AIDS和HIV感染组成的组。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
9.一种预防或治疗血液疾病或疾患的方法，所述方法包括给药于需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述血液疾病或疾患选自由血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、可用红细胞生成素治疗的疾患和可用血小板生成素治疗的疾患组成的组。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
12.根据权利要求9所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
13.根据权利要求9所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
14.根据权利要求9所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
15.根据权利要求9所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
17.根据权利要求9所述的方法，进一步包括给药给于需要预防或治疗的主体有效量的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
18.一种调节血细胞形成的方法，所述方法包括给药于需要调节的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述调节血细胞形成选自由诱导造血作用、诱导造血干细胞增殖、诱导造血干细胞增殖和分化、诱导巨核细胞生成、诱导红细胞生成、诱导白细胞生成、诱导血小板生成、诱导浆细胞增殖、诱导树突细胞增殖以及诱导巨噬细胞增殖组成的组。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
21.根据权利要求18所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
22.根据权利要求18所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
23.根据权利要求18所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
24.根据权利要求18所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
26.根据权利要求18所述的方法，进一步包括给药给需要调节的所述主体有效量的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
27.一种增强外周血干细胞动员的方法，所述方法包括给药给需要的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
29.根据权利要求27所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
30.根据权利要求27所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
31.根据权利要求27所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
32.根据权利要求27所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
34.根据权利要求27所述的方法，进一步包括给药给需要的所述主体有效量的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
35.一种预防或治疗代谢疾病或疾患的方法，所述方法包括给药需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述代谢疾病或疾患选自由NIDDM、IDDM、糖尿、高血糖、高脂血症和高胆固醇血症组成的组。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
39.根据权利要求35所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
40.根据权利要求35所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
41.根据权利要求35所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
43.一种预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的方法，所述方法包括给药给需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
45.根据权利要求43所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
46.根据权利要求43所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
47.根据权利要求43所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
48.根据权利要求43所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
50.根据权利要求43所述的方法，进一步包括给药给需要预防或治疗的所述主体有效量的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
51.一种增加血细胞刺激因子作用的方法，所述方法包括给药给需要的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
53.根据权利要求51所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
54.根据权利要求51所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
55.根据权利要求51所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
56.根据权利要求51所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
57.根据权利要求51所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
59.根据权利要求51所述的方法，进一步包括给药给需要的主体有效量的红细胞生成素、血小板生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。
60.一种增加供体血干细胞在清髓受体中集落的方法，所述方法包括在捐献和在受体中植入供体血干细胞前用治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合注入供体血干细胞的供体。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
62.根据权利要求60所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
63.根据权利要求60所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
64.根据权利要求60所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
65.根据权利要求60所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
67.根据权利要求60所述的方法，进一步包括在捐献和在受体中植入供体血干细胞前用血细胞刺激因子注入所述供体，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
68.一种增加供体血干细胞在清髓受体中集落的方法，所述方法包括在受体中植入供体血干细胞前用治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合处理所述供体血干细胞。
69.根据权利要求68所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
70.根据权利要求68所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
71.根据权利要求68所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
72.根据权利要求68所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
73.根据权利要求68所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
75.根据权利要求68所述的方法，进一步包括在受体中植入供体血细胞前用血细胞刺激因子处理所述供体血细胞，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
76.一种增加血干细胞在清髓受体中集落的方法，所述方法包括在受体中植入血干细胞前用从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合处理所述血干细胞。
77.根据权利要求76所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
78.根据权利要求76所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
79.根据权利要求76所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
80.根据权利要求76所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
81.根据权利要求76所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
83.根据权利要求76所述的方法，进一步包括在受体中植入血干细胞前用血细胞刺激因子处理所述血干细胞，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
84.一种预防或治疗与SARS传染源关联的疾患的方法，所述方法包括给药给需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
85.根据权利要求84所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
86.根据权利要求84所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
87.根据权利要求84所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
88.根据权利要求84所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
89.根据权利要求84所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
90.根据权利要求89所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
91.根据权利要求84所述的方法，其中所述SARS传染源是冠状病毒。
92.根据权利要求91所述的方法，其中所述冠状病毒是SARS-CoV。
93.一种预防或治疗细菌引起的疾病或疾患，所述方法包括给药给需要预防或治疗的主体治疗有效量的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合。
94.根据权利要求93所述的方法，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
95.根据权利要求93所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
96.根据权利要求93所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
97.根据权利要求94所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
98.根据权利要求94所述的方法，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
99.根据权利要求98所述的方法，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
100.一种预防或治疗自身免疫或感染的疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
101.根据权利要求100，其中所述自身免疫或感染的疾病或疾患选自由病毒疾病、病毒感染、AIDS和HIV感染组成的组。
102.根据权利要求100所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
103.根据权利要求100所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
104.根据权利要求100所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
105.根据权利要求100所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
106.根据权利要求100所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
107.根据权利要求106所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
108.一种预防或治疗血液疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
109.根据权利要求108所述的药物组合物，其中所述血液疾病或疾患选自由血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、可用红细胞生成素治疗的疾患、和可用血小板生成素治疗的疾患以及可用粒细胞集落刺激因子治疗的疾患组成的组。
110.根据权利要求108所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
111.根据权利要求108所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
112.根据权利要求108所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
113.根据权利要求108所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
114.根据权利要求108所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
115.根据权利要求114所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
116.根据权利要求108所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
117.一种调节血细胞形成的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
118.根据权利要求117所述的药物组合物，其中所述调节血细胞形成选自由诱导造血作用、诱导造血干细胞增殖、诱导造血干细胞增殖和分化、诱导巨核细胞生成、诱导红细胞生成、诱导白细胞生成、诱导血小板生成、诱导浆细胞增殖、诱导树突细胞增殖以及诱导巨噬细胞增殖组成的组。
119.根据权利要求117所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
120.根据权利要求117所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
121.根据权利要求117所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
122.根据权利要求117所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
123.根据权利要求117所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
124.根据权利要求123所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
125.根据权利要求117所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
126.一种增强外周血干细胞动员的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
127.根据权利要求126所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
128.根据权利要求126所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
129.根据权利要求126所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
130.根据权利要求126所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
131.根据权利要求126所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
132.根据权利要求131所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
133.根据权利要求126所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
134.一种预防或治疗代谢疾病或疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
135.根据权利要求134所述的药物组合物，其中所述代谢疾病或疾患选自由NIDDM、IDDM、糖尿、高血糖、高脂血症、和高胆固醇血症组成的组。
136.根据权利要求134所述的药物组合物，根据权利要求117所述的药物组合物，其中所述从αS1酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
137.根据权利要求134所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
138.根据权利要求134所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
139.根据权利要求135所述的药物组合物，其中所述从α-β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
140.根据权利要求135所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
141.根据权利要求140所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
142.一种预防或治疗与自体骨髓或外周血干细胞移植(ASCT)或同种异体骨髓移植(BMT)支持的化放疗的清髓剂量相关的疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
143.根据权利要求142所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
144.根据权利要求142所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
145.根据权利要求142所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
146.根据权利要求142所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
147.根据权利要求142所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
148.根据权利要求147所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
149.根据权利要求142所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
150.一种提高血细胞刺激因子作用的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
151.根据权利要求150所述的药物组合物，其中所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
152.根据权利要求150所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
153.根据权利要求150所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
154.根据权利要求150所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
155.根据权利要求150所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
156.根据权利要求150所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
157.根据权利要求156所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
158.根据权利要求150所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血小板生成素、红细胞生成素或粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。
159.一种增加清髓受体中供体血干细胞集落的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
160.根据权利要求159所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
161.根据权利要求159所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
162.根据权利要求159所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
163.根据权利要求159所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
164.根据权利要求159所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
165.根据权利要求164所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
166.根据权利要求159所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血小板生成素、红细胞生成素或粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。
167.一种增加清髓受体中供体血干细胞集落的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
168.根据权利要求167所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
169.根据权利要求167所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
170.根据权利要求167所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
171.根据权利要求167所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
172.根据权利要求167所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
173.根据权利要求172所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
174.根据权利要求167所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血小板生成素、红细胞生成素或粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。
175.一种治疗或预防适应症的药物组合物，所述适应症选自由自身免疫疾病或疾患、病毒疾病、病毒感染、血液疾病、血液缺陷、血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、高脂血症、高胆固醇血症、糖尿、高血糖、糖尿病、AIDS、HIV-1、辅助T-细胞紊乱、树突细胞缺陷、巨噬细胞缺陷、包括血小板、淋巴细胞、浆细胞的造血干细胞紊乱和中性粒细胞紊乱、前白血病疾患、白血病疾患、由化疗或放疗引起的免疫系统紊乱、由治疗免疫缺陷和细菌感染的疾病引起的人免疫系统紊乱组成的组，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
176.根据权利要求175所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
177.根据权利要求175所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
178.根据权利要求175所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
179.根据权利要求175所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
180.根据权利要求175所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
181.根据权利要求180所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
182.根据权利要求175所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
183.一种治疗或预防适应症的药物组合物，所述适应症选自由血液疾病、血液缺陷、血小板减少症、各类血细胞减少症、粒细胞减少症、树突细胞缺陷、巨噬细胞缺陷、包括血小板、淋巴细胞、浆细胞的造血干细胞紊乱和中性粒细胞紊乱、前白血病疾患、白血病疾患、骨髓增生异常综合症、非骨髓恶性肿瘤、再生障碍性贫血和骨髓不足组成的组，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受载体。
184.根据权利要求183所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
185.根据权利要求183所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
186.根据权利要求183所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
187.根据权利要求183所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
188.根据权利要求183所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
189.根据权利要求188所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
190.根据权利要求183所述的药物组合物，其中所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
191.一种纯化的肽，其有选自由SEQ ID NO：1-33组成的组的氨基酸序列。
192.一种纯化的嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
193.根据权利要求192所述的嵌合肽，其包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
194.一种药物组合物，其包括一种纯化的嵌合肽和药学上可接受的载体，所述嵌合肽有选自由SEQ ID NO：1-33组成的组的氨基酸序列。
195.一种药物组合物，其包括纯化的嵌合肽以及药学上可接受的载体，所述嵌合肽包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
196.根据权利要求195所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
197.一种药物组合物，其包括血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子与纯化的肽和药学上可接受的载体联合，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组，所述纯化的肽有选自由SEQ ID NO：1-33组成的组的氨基酸序列。
198.一种药物组合物，其包括血细胞刺激因子与纯化嵌合肽的组合，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组，所述嵌合肽包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
199.根据权利要求198所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
200.一种预防或治疗与SARS传染源关联疾患的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受的载体。
201.根据权利要求200所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
202.根据权利要求200所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
203.根据权利要求200所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
204.根据权利要求200所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
205.根据权利要求200所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
206.根据权利要求205所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
207.根据权利要求200所述的药物组合物，进一步包括作为活性成分的血细胞刺激因子，所述血细胞刺激因子选自由血小板生成素、红细胞生成素和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组成的组。
208.根据权利要求200所述的药物组合物，其中所述SARS传染源是冠状病毒。
209.根据权利要求208所述的药物组合物，其中所述冠状病毒是SARS-CoV。
210.一种预防或治疗细菌感染的药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽或其组合以及药学上可接受载体。
211.根据权利要求210所述的药物组合物，其中所述的肽是通过αS1酪蛋白断裂从αS1酪蛋白N末端部分衍生的片段。
212.根据权利要求210所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽是合成的肽。
213.根据权利要求210所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽有如SEQ ID NO：1-33之一列出的序列。
214.根据权利要求210所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽的组合是肽的混合物。
215.根据权利要求210所述的药物组合物，其中所述从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽组合是嵌合肽，其包括至少2个共价连接的从α-、β-或κ-酪蛋白衍生的肽。
216.根据权利要求215所述的药物组合物，其中所述嵌合肽包括第一αS1酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-25之一列出的序列，共价连接到第二酪蛋白的肽，其有SEQ ID NO：1-33和434-4000中任何一个列出的序列。
217.一种酪蛋白蛋白水解的水解产物的低温处理的方法，所述方法括：
a)获得包括蛋白水解酶的酪蛋白蛋白水解的水解产物；
b)冷却所述酪蛋白蛋白水解的水解产物以钝化所述蛋白水解酶；
c)调节所述酪蛋白蛋白水解产物的pH到酸性pH；
d)过滤所述酸性酪蛋白的蛋白水解产物，收集滤出液，进一步酸化所述滤出液以沉淀从天然酪蛋白得到的蛋白；
e)分离和收集所述沉淀物；
f)调节所述沉淀物的pH到碱性pH以不可逆地钝化所述蛋白水解酶；以及
g)调节所述沉淀物的pH到pH7-9；
由此在低温下处理所述酪蛋白蛋白水解产物。
218.根据权利要求217所述的方法，其中步骤b包括冷却到大约10℃。
219.根据权利要求217所述的方法，其中步骤c的所述调节所述pH包括加入酸到2％(w/v)的酸，而步骤d的所述进一步酸化所述滤出液包括加入更多的酸到大约10％(w/v)的酸。
220.根据权利要求217所述的方法，其中步骤f的所述碱性pH至少是pH9。
221.根据权利要求217所述方法在低温处理得到的酪蛋白蛋白水解产物。
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