CN101121922B - 酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗dna病毒和促肝细胞生长的用途 - Google Patents
酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗dna病毒和促肝细胞生长的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101121922B CN101121922B CN2006100891942A CN200610089194A CN101121922B CN 101121922 B CN101121922 B CN 101121922B CN 2006100891942 A CN2006100891942 A CN 2006100891942A CN 200610089194 A CN200610089194 A CN 200610089194A CN 101121922 B CN101121922 B CN 101121922B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yeast cell
- preparation
- juice
- brewing yeast
- cultivated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 title claims description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 15
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 title abstract description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title abstract description 12
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title abstract description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 title abstract description 6
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 5
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 34
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 27
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 7
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 7
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010019837 Hepatocellular injury Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000437 hepatocellular injury Toxicity 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 abstract description 5
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 abstract description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 abstract 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 description 10
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 102000002734 Collagen Type VI Human genes 0.000 description 2
- 108010043741 Collagen Type VI Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000009795 fibrotic process Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 206010019692 hepatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007866 hepatic necrosis Effects 0.000 description 1
- 210000000208 hepatic perisinusoidal cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000029052 metamorphosis Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
Abstract
本发明公开了酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗DNA病毒和促肝细胞生长的用途，属于生物医药领域。酿酒酵母细胞培养分泌液，采用以下方法制备：挑取酿酒酵母单克隆菌落，接种于5ml的PD培养液中，30℃振摇过夜；取1毫升转接到500毫升的PD培养液中，28-30℃振摇40-60小时；用0.2微米的滤膜过滤除菌即得。本发明的优点是：本发明意想不到地发现经过PD培养基培养和纯化后的酿酒酵母细胞培养液具备显著的抗DNA病毒和促肝细胞生长的作用，为治疗乙型肝炎和肝损伤性疾病提供了新的治疗药物。
Description
技术领域
本发明涉及酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗DNA病毒和促肝细胞生长的用途，属于生物医药领域。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)属于DNA病毒，其造成的急慢性肝炎、肝坏死及肝细胞癌对人类健康危害极大，每年死于肝癌的人数达100万以上。以往由于HBV受宿主范围狭窄和缺乏体外培养系统的限制，阻碍了抗HBV药物的研究。近年来，随着HBV DNA转染细胞系的相继建立，为抗HBV药物筛选提供了必要的条件。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种具有药用价值的酿酒酵母细胞培养分泌液。
本发明要解决的第二个技术问题是提供这种酿酒酵母细胞培养分泌液的制备方法。
本发明要解决的第三个技术问题是提供这种酿酒酵母细胞培养分泌液抗DNA病毒和促肝细胞生长的用途。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
酿酒酵母细胞培养分泌液，采用以下方法制备：挑取酿酒酵母单克隆菌落，接种于5ml的PD培养液中，30℃振摇过夜；取1毫升转接到500毫升的PD培养液中，28-30℃(优选28℃)振摇40-60小时(优选48小时)；用0.2微米的滤膜过滤除菌即得。
所述PD培养液的配方和制法为：水解乳蛋白10-20克；葡萄糖5-15克；氯化钠7-12克；溶于灭菌水1000毫升；高压8磅40分钟灭菌。调PH值7-8。
最优选的配方为：水解乳蛋白15克；葡萄糖10克；氯化钠9克；溶于灭菌水1000毫升。调PH值7.5。
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC1001，培养温度为28～30℃。我们还发现其他来源的酿酒酵母也具有本发明公开的作用。
酿酒酵母细胞培养分泌液的制备方法，挑取酿酒酵母单克隆菌落，接种于5ml的PD培养液中，30℃振摇过夜；取1毫升转接到500毫升的PD培养液中，28-30℃(优选28℃)振摇40-60小时(优选48小时)；用0.2微米的滤膜过滤除菌即得。
所述PD培养液的配方和制法为：水解乳蛋白10-20克；葡萄糖5-15克；氯化钠7-12克；溶于灭菌水1000毫升；高压8磅40分钟灭菌。调PH值7-8。本发明可以扩大规模进行生产，例如使用工业化生产工艺，则培养基的用量和接种量均有适当比例的增加。
最优选的配方为：水解乳蛋白15克；葡萄糖10克；氯化钠9克；溶于灭菌水1000毫升。调PH值7.5。
酿酒酵母细胞培养分泌液具有抗DNA病毒的作用，可以用来制备治疗DNA感染引起的疾病的药物。所述DNA病毒包括疱疹病毒、乳头状瘤病毒、肝炎病毒等，其中肝炎病毒为乙型肝炎病毒(HBV)。
本发明提供的酿酒酵母细胞培养分泌液还具有促肝细胞生长的作用，尤其可促进和修复人为造成的肝细胞机械性损伤，可以用来制备治疗肝细胞损伤相关疾病的药物。
本发明药效学试验采用HBV DNA全基因组的重组质粒转染人的肝癌细胞HepG2获得的2215细胞，该细胞能向培养上清中稳定的分泌HBsAg和HBeAg及完整的HBV颗粒，是目前国内外公认的用于体外筛选抗HBV药物较理想的实验模型。
本发明采用2215细胞测定酿酒酵母细胞培养液的毒性反应，证实该分泌液不仅没有毒性作用，反而还对还具有促进作用，这可能是由于酿酒酵母细胞培养分泌液抑制了HBV DNA的复制而使2215细胞趋向正常细胞所致。当酿酒酵母细胞培养液稀释1∶1000或1∶2000时对2215细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制率分别为52.11％和59.85％，提示本发明在体外达到一定浓度时有较好的抗HBV活性。
以含有酿酒酵母细胞培养液的培养液培养大鼠原代肝细胞的实验证明，本发明具有促肝实质细胞生长，延长培养时间，维持细胞正常形态和抑制肝细胞纤维化等作用。
本发明的优点是：本发明意想不到地发现经过PD培养基培养和简单纯化后的酿酒酵母细胞培养分泌液具备显著的抗DNA病毒和促肝细胞生长的作用，为治疗乙型肝炎和肝损伤性疾病提供了新的治疗药物。
下面结合较佳实施方式对本发明作进一步说明，凡依照本发明公开内容所作的本领域任何等同替换，均属于本发明的保护范围。
具体实施方式
实施例1.制备酵母细胞培养分泌液
一.材料
PD培养基：水解乳蛋白15克(购于北京双旋微生物培养基制品厂)
葡萄糖10克(北京博大生物科技有限公司)
氯化钠9克(北京博大生物科技有限公司)
溶于灭菌水1000毫升，高压8磅40分钟灭菌。PH值7.5。
酿酒酵母CICC1001(购于中国工业微生物菌种保藏管理中心)
二.方法
挑取酿酒酵母单克隆菌落，接种于5ml的PD培养液中，30℃振摇过夜；取1毫升转接到500毫升的PD培养液中，28℃振摇48小时；用0.2微米的滤膜过滤除菌即得。
实施例2.体外抗病毒试验
一.材料
酵母细胞培养分泌液：按实施例1方法制备，进行10倍浓缩。
人肝癌2215细胞(2.2.15细胞)：美国西奈山大学医学院生化科赠送北京医科大学第一医院傅希贤教授转赠。
培养液：DMEM，内含380μg/mlG418(美国GIBCO公司)青、链霉素各100IU/ml，
10％无支原体小牛血清(购于杭州四季青生物工程材料研究所)0.3％谷氨酰胺，pH值7.0左右。
二.方法
1.2215细胞分泌HBsAg和HBeAg规律的测定：
将2215细胞按1×105个/ml接种培养瓶(10ml/瓶)，每隔3天换液并收集上清液，置-20℃保存，共收8次，然后同时检测各上清液中的HBsAg和HBeAg。
2.细胞毒性试验：
培养至单层的2215细胞分别用酿酒酵母细胞培养分泌液和DEME培养液共同培养5天(其中，酿酒酵母细胞培养分泌液与DEME培养液的体积比分别为1∶10，1∶50，1∶100，1∶200)，同时设不含该分泌液的DMEM培养液培养细胞作为对照，每日在光学显微镜下观察细胞形态变化，取无细胞毒性作用的最低稀释度为抗HBV的起始浓度。
3.酿酒酵母细胞培养分泌液抗HBV活性试验：
2215细胞以1×105个/ml分瓶培养9天后用酿酒酵母细胞培养分泌液和DEME培养液共同继续培养5天，收集细胞上清液测定HBsAg。以抑制率大于50％为有效抑制浓度。
三.结果
1.2215细胞分泌HBsAg和HBeAg规律的测定：
试验表明2215细胞在接种后的第3天即可从培养上清中检测出HBsAg和HBeAg，而且HBeAg的值略高，当培养到第9天时，两种抗原的分泌量出现高峰，并在15天后缓慢下降，见表1所示。
表1：2215细胞分泌HBsAg和HBeAg规律的
2.细胞毒性试验：
以不同稀释度的酿酒酵母细胞培养分泌液和DEME培养液共同培养2215细胞5天后，未见细胞出现不良反应，出乎意料的是，用加入酿酒酵母细胞培养分泌液的DEME培养基培养的细胞，其形态、立体感、致密度均优于未加该分泌液的。
3.酿酒酵母细胞培养分泌液抗HBV活性试验：
结果见表2，表明酿酒酵母细胞培养分泌液对2215细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制率与酿酒酵母细胞培养分泌液的浓度呈正相关。
表2：酿酒酵母细胞培养液对2215细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制率(％)
实施例3.酿酒酵母细胞培养分泌液促肝细胞生长及抑制肝纤维化细胞的作用
一.材料
成年雄性Wistar大鼠，体重200±20g，本院实验动物中心提供，
IV型胶原酶，SIGMA公司产品，
培养液：DMEM，内含380μg/mlG418(美国GIBCO公司)青、链霉素各100IU/ml，
10％无支原体小牛血清(购于杭州四季青生物工程材料研究所)0.3％谷氨酰胺，pH值7.0左右。
二.方法
1.分离肝细胞：肝细胞的分离和培养大鼠肝细胞分离方法采用原位二步灌注法。取Wistar大鼠，用0.5％戊巴比妥钠麻醉，固定，无菌处理后开腹。门静脉插管。灌注先经37℃水浴并通氧气的无Ca2+、Mg2+离子的Hanks液，以洗去肝中血液。待肝颜色变白后，换用经37℃水浴并通氧气的0.02％的IV型胶原酶继续灌注。约10min后取出肝脏，碎过滤离心700rpm/min3次。将细胞悬浮于含10％无支原体小牛血清的DMEM中。计数后，以1×105个/ml接种培养瓶，于37℃含5％ CO2的孵箱中培养。
2.培养和观察：用含不同浓度的酿酒酵母细胞培养液培养鼠肝细胞(酿酒酵母细胞培养分泌液与DEME培养液的体积比分别为1∶10，1∶50，1∶100，1∶200)，每隔4天换液，每日镜检比较细胞生长情况。
三.结果
镜检结果表明，酿酒酵母细胞培养分泌液具有促肝细胞贴壁、生长和维持细胞正常形态及延长培养时间等作用，尤其在人为造成肝细胞机械性损伤(吸管用力吹打)后，酿酒酵母细胞培养液可有效促进肝细胞修复和再生。此外，酿酒酵母细胞培养分泌液对肝贮脂细胞有明显的抑制作用，延缓了肝细胞的纤维化过程。
Claims (5)
1.酿酒酵母细胞培养分泌液的制备方法，其特征在于：挑取酿酒酵母单克隆菌落，接种于5ml的PD培养液中，30℃振摇过夜；取1毫升转接到500毫升的PD培养液中，28-30℃振摇40-60小时；用0.2微米的滤膜过滤除菌即得；
PD培养液的组方和制法为：水解乳蛋白10-20克；葡萄糖5-15克；氯化钠7-12克；溶于灭菌水1000毫升；高压8磅40分钟灭菌，pH值为7-8。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母细胞培养分泌液的制备方法，其特征在于：所述PD培养液的组方和制法为：水解乳蛋白15克；葡萄糖10克；氯化钠9克；溶于灭菌水1000毫升，pH值为7.5。
3.根据权利要求1或2所述的酿酒酵母细胞培养分泌液的制备方法，其特征在于：所述酿酒酵母购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC 1001。
4.权利要求1制备的酿酒酵母细胞培养分泌液在制备治疗乙型肝炎病毒引起的疾病的药物的用途。
5.权利要求1制备的酿酒酵母细胞培养分泌液在制备治疗肝细胞损伤相关疾病的药物中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2006100891942A CN101121922B (zh) | 2006-08-08 | 2006-08-08 | 酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗dna病毒和促肝细胞生长的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2006100891942A CN101121922B (zh) | 2006-08-08 | 2006-08-08 | 酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗dna病毒和促肝细胞生长的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101121922A CN101121922A (zh) | 2008-02-13 |
| CN101121922B true CN101121922B (zh) | 2010-11-10 |
Family
ID=39084421
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2006100891942A Expired - Fee Related CN101121922B (zh) | 2006-08-08 | 2006-08-08 | 酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗dna病毒和促肝细胞生长的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101121922B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5883780B2 (ja) * | 2010-03-26 | 2016-03-15 | アサヒグループホールディングス株式会社 | 酵母の培養方法 |
| CN109517748A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-03-26 | 吉林大学 | 黑色食物小分子肽在修复肝损伤中的医用用途 |
-
2006
- 2006-08-08 CN CN2006100891942A patent/CN101121922B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 李桃生等.通过原生质体融合改建酵母细胞的研究II，酿酒酵母与糖化酵母种间融合杂种的发酵生物学研究.杭州大学学报第14卷 第3期.1987,第14卷(第3期),第336页第三部分第6行. |
| 李桃生等.通过原生质体融合改建酵母细胞的研究II,酿酒酵母与糖化酵母种间融合杂种的发酵生物学研究.杭州大学学报第14卷 第3期.1987,第14卷(第3期),第336页第三部分第6行. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101121922A (zh) | 2008-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103483040B (zh) | 冬虫夏草规模化液体深层发酵用培养基及其发酵生产方法 | |
| CN102559828B (zh) | 一种通过微生物转化黄芪总皂苷制备黄芪甲苷的方法 | |
| CN110305798A (zh) | 一株曲霉菌的用途及由该曲霉菌制备的化合物及其用途 | |
| CN111803533A (zh) | 降血糖、降血脂组合物、制备方法及其应用 | |
| CN113564212A (zh) | 一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法 | |
| CN106047713A (zh) | 一株嗜松篮状菌菌株Li‑93及其应用 | |
| CN109749941B (zh) | 蝉拟青霉发酵培养基、蝉拟青霉发酵制备麦角甾醇的方法 | |
| CN102220281A (zh) | 一种肝细胞与Kupffer细胞共培养体系及其应用 | |
| CN101121922B (zh) | 酿酒酵母细胞培养分泌液制备方法及其抗dna病毒和促肝细胞生长的用途 | |
| CN109588319A (zh) | 一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分的方法 | |
| CN104140323A (zh) | 一种适用于牛樟芝液体发酵的培养基制作方法 | |
| CN102018751A (zh) | 抗肝炎天然药物复方制剂及其制备方法和应用 | |
| CN103740614B (zh) | 一株高产雷帕霉素的游动放线菌诱变菌株 | |
| CN101928671A (zh) | 一种链格孢属菌及其发酵人参茎叶总皂苷制备人参皂苷Rg3的方法 | |
| CN102363796A (zh) | 一种微生物发酵转化生产甘草次酸的方法 | |
| CN105087635A (zh) | 一种诱导三分三毛状根的方法 | |
| CN101914452B (zh) | 石杉碱甲高产菌株tcm-01 | |
| CN104278070A (zh) | 一种提高桑黄液体发酵产物中麦角甾醇含量的方法 | |
| CN101407767A (zh) | 一种通过发酵生产冬虫夏草的方法 | |
| CN104404103B (zh) | 一种提高马齿苋多糖的方法及该方法制备的发酵液 | |
| CN108034681A (zh) | 利用悬浮培养的地黄茎形成层干细胞生产梓醇的方法 | |
| CN113773985A (zh) | 提高中药多糖得率并调节皮肤屏障及免疫的枯草芽孢杆菌 | |
| CN103222479B (zh) | 盐屋链霉菌代谢产物在防治菜豆炭疽病菌中的应用 | |
| CN108977368A (zh) | 一种生产虫草菌粉的固体培养基及生产虫草菌粉的方法 | |
| CN105624075B (zh) | 一种肋生盐弧菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Mao Panyong Inventor after: Bai Bingke Inventor after: Liu Hong Inventor after: Hu Yan Inventor after: Xin Shaojie Inventor after: Li Jin Inventor after: Gao Rong Inventor after: Shen Honghui Inventor after: Wang Zhijie Inventor after: Hou Jun Inventor before: Mao Panyong Inventor before: Liu Hong |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: MAO PANYONG LIU HONG TO: MAO PANYONG LIU HONG HU YAN XIN SHAOJIE LI JIN GAO RONG SHEN HONGHUI WANG ZHIJIE HOU JUN BAI BINGKE |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20101110 Termination date: 20210808 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |