CN101111154B - 联合免疫基因疗法和化学疗法用于治疗癌症和过度增生性疾病 - Google Patents

联合免疫基因疗法和化学疗法用于治疗癌症和过度增生性疾病 Download PDF

Info

Publication number
CN101111154B
CN101111154B CN2005800475870A CN200580047587A CN101111154B CN 101111154 B CN101111154 B CN 101111154B CN 2005800475870 A CN2005800475870 A CN 2005800475870A CN 200580047587 A CN200580047587 A CN 200580047587A CN 101111154 B CN101111154 B CN 101111154B
Authority
CN
China
Prior art keywords
tumor
pharmaceutical composition
interleukin
treatment
ppc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN2005800475870A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101111154A (zh
Inventor
J·G·费威尔
M·马塔尔
J·赖斯
D·H·刘易斯
K·安瓦尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Expression Genetics Inc
Original Assignee
Expression Genetics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Expression Genetics Inc filed Critical Expression Genetics Inc
Publication of CN101111154A publication Critical patent/CN101111154A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101111154B publication Critical patent/CN101111154B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/664—Amides of phosphorus acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/208—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0085—Brain, e.g. brain implants; Spinal cord
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Dermatology (AREA)

Abstract

用于治疗哺乳动物癌症或过度增生性疾病的药物组合物，其包含核酸、基因递送聚合物和至少一种附加的化学治疗药，以及使用该药物组合物用于通过肿瘤内、腹膜内或全身注射治疗哺乳动物癌症或过度增生性疾病的方法。

Description

联合免疫基因疗法和化学疗法用于治疗癌症和过度增生性疾病
发明领域
本发明涉及用于治疗哺乳动物癌症或过度增生性疾病的包含核酸、基因递送聚合物和至少一种附加的化学治疗药的药物组合物。本发明还涉及治疗哺乳动物癌症或过度增生性疾病的方法，其包括通过肿瘤内、腹膜内或全身注射将癌细胞或任何其它的过度增生性细胞与所述组合物接触。
发明背景
癌症是世界多个地方最常见的死亡原因并且每年全球诊断出超过二百五十万个癌症病例。我们对癌症分子生物学理解的最新进展表明癌症是因受累的细胞异常增殖所致的遗传性疾病。癌症治疗家目前专注于这样的治疗策略，其涉及允许外源递送的基因在肿瘤环境中表达的携带遗传信息的大分子，而非治疗性蛋白质本身。据信基因疗法以多种对于常规方法而言不可能的方式为癌症患者提供治疗益处。常规的小分子药物通常通过与细胞靶标非特异性地相互作用发挥功能，产生不想要的副作用并且不治疗疾病的根本原因。过去数年已引进的蛋白质药物具有其固有局限性，原因在于它们迅速降解和需要常常导致不想要的副作用的高剂量。基因疗法在单次注射后使用身体自身的细胞装置以在特定组织和细胞内产生持续治疗性水平的蛋白质，因此提供了患者愿意配合的安全和有效的治疗方法。
常用的癌症基因疗法策略包括通过1)局部注射、2)局部-区域注射或3)全身注射实现的免疫疗法、细胞消除(cell ablation)和抗血管生成。癌症免疫疗法是通过刺激抗癌细胞的免疫系统而对抗癌症的有效方法。免疫细胞因子通过使免疫细胞激活、成熟和分化在宿主免疫反应发展中发挥重要作用。已经针对人的多种癌症和癌症的动物模型测试了数种细胞因子。见Hum Gene Ther.，1998，第9卷，2223；Gene Ther.1999，第6卷，833；CancerGene Ther.2000，第7卷，1156；J.Control Rel.2003，第87卷，177；和CancerRes.，2002，第62卷，4023。白细胞介素12(IL-12)是在人癌症治疗中显示巨大前景的免疫刺激性细胞因子。见The Oncologist，1996，第1卷，88。IL-12是由两条共价连接的链p35和p40组成的70kD异二聚体。IL-12的生物学效应包括通过静息和激活的CD4+T细胞、CD8+T细胞以及天然杀伤(NK)细胞诱导IFN-γ的产生。IL-12还增强激活的T细胞和NK细胞的增殖、增加NK细胞/淋巴因子激活的杀伤细胞的裂解活性并促进特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应。
在动物模型中，已经证实重组IL-12诱导明显的T细胞介导性抗肿瘤效应，引起已建立的肿瘤退化，随后是全身性免疫记忆。见The Oncologist，1996，第1卷，88。然而，重组IL-12的全身施用已经在数个实验性试验和初步人类试验中引起剂量限制性毒性。见Lab Invest.，1994，第71卷，862；Science，1995，第270卷，908；J.Interferon Cytokine Res.，1995，第14卷，335。在最近的人临床试验中也观察到伴随腹膜内施用重组IL-12的剂量限制性毒性。Clin.Cancer Res.，2002，第8卷，3686。可在肿瘤位置局部提供治疗水平IL-12的基因递送方法可以具有产生抗癌反应而不引起全身毒性的优点。
病毒性和非病毒性基因递送系统均已经在癌症动物模型中用于IL-12基因递送。病毒性方法因对毒性担心具有严重的实用局限性，对毒性的担心主要因为增加的癌症发生率和宿主系统对病毒抗原的强烈免疫反应。因非病毒性基因递送系统具有较弱的毒性，故对其开发存在巨大兴趣。已经证实使用非病毒性基因递送系统聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用于递送IL-12以治疗肾癌(Renca)和结肠细胞癌(CT26)。见Gene Ther.，1999，第6卷，833。当肿瘤经受该基因治疗时，肿瘤表现出IL-12蛋白质疗法的全部特征，例如增加的NK细胞、CD4和CD8T细胞浸润、伴随增加主要组织相容性复合体(MHC)I类分子的表达。IL-12基因递送可良好地得到耐受并且对同时携带Renca和CT26肿瘤的动物高度有效。排斥肿瘤的小鼠同样从随后的攻击中受到保护，这提示存在长效的全身免疫。官能化的且毒性更低的水溶性脂质聚合物(WSLP)已经测试用于递送IL-12基因至CT26结肠癌肿瘤。见Mahato等，Mol.Ther.，2001，第4卷，130。IL-12质粒(pIL-12)治疗以及WSLP(pIL-12/WSLP)治疗比裸DNA产生更高水平的肿瘤内基因表达。
此外，细胞因子IL-12产生的次级效应，即IFN-γ和氧化氮(NO)水平在WSLP治疗的肿瘤中与裸DNA相比较高。单次注射pIL-12/WSLP复合体对肿瘤生长和动物存活产生次优效应，而重复递送产生更好的功效，这表明该系统递送不充分。J.Control Release 2003，第87卷，177。类似地，肿瘤内注射在另一种聚合物载体PAGA中的IL-12质粒仅产生CT26肿瘤的部分抑制。见Gene Ther.，2002，第9卷，1075。这些结果确定需要更有效的递送系统。尽管在早期的临床前试验中它们的效力不足，聚合物基因载体出色的分子灵活性允许用于开发复杂修饰和新官能化迫切需要的更有效的基因递送系统。
已经广泛认识到采用单一治疗策略对抗癌症通常因该疾病的多因素性质而无效。组合多于一种药物以使抗癌反应最大化目前逐渐得到广泛应用。见Gene Ther.，2000，第11卷，1852。已经证实IL-12基因疗法和IFN-α基因疗法间存在协同关系。以这两种基因共治疗Renca肿瘤引起100％肿瘤排斥，其比通过单独用IL-12(58％)或IFN-α(25％)的治疗取得的肿瘤排斥反应更高。类似地，用联合基因疗法治疗CT26肿瘤显示50％的排斥率，其分别比从IL-12和IFN-α单独治疗中取得的17％和0％排斥率高。通过联合疗法治疗的肿瘤当与经单独的基因疗法处理的肿瘤相比显示对肿瘤增加的NK细胞和CD8T细胞浸润。将甲基鸟苷-DNA-甲基转移酶(MGMT)基因转移至干细胞，同时进行化学疗法，保护了正常细胞免受化学疗法作用并减少化学疗法的全身毒性。Nature Reviews Cancer 2004，第4卷，296。
此外，联合基因疗法增加肿瘤中抗原呈递细胞(APC)上的CD40分子数至高于以单独治疗所取得的水平。APC上CD40增加的上调与抗原呈递更高的活化状态相关。见Nature，1998，第393卷，480；Nature，1998，第393卷，474和Nature，1998，第393卷，478。类似的增加在mRNA水平上对趋化因子IP-10和TCA-3观察到。联合基因疗法因此协同性地增强抗肿瘤免疫并且发现该效应在肿瘤再攻击研究中是长效的。类似的联合基因疗法研究已经由其它小组报道。见Laryngoscope 2001，第111卷，815。建立的肿瘤分别以pIFN-α/PVP、pIL-2/脂类或pIL-12/PVP单独处理或其组合处理。与其它两种疗法相比，pIFN-α/PVP组合在与单独治疗相比时显著地提高抗肿瘤效应。在另一项使用相同肿瘤模型的研究中，已经证实用pIL-12/PVP和pIL-2/脂类的联合治疗与单独治疗相比产生显著更高的抗肿瘤效应。见Arch.Otolaryngol Head Neck Surg，2001，第127卷，1319。
在另一项研究中，肿瘤内注射线型聚氮丙啶(PEI)与抗癌基因和促生长素抑制素受体亚型2(sst2)的聚复合体(polyplexes)产生对胰肿瘤的生长和转移至肺的显著抑制。Curr Opin Biotechnol，2002，第13卷，128。肿瘤中PEI介导性递送sst2引起凋亡增加以及活化胱天蛋白酶-3和聚(ADP-核糖)途径。持续递送DNA/PEI的聚复合体至实体瘤产生比大丸剂递送所实现的更高表达。Gene Ther.，1999，第10卷，1659。树状聚合物(dendrimers)通过Fas-L和HSV-I胸苷激酶的肿瘤内基因转移分别用于抑制胰癌和肝细胞癌。见Gene Ther.，2003，第10卷，434和Gene Ther.，2000，第7卷，53。
使用细胞毒药物和细胞因子的化学-免疫疗法提供用于改善肿瘤性疾病治疗的新方法。已经在鼠L1210白血病模型中研究了IL-12蛋白质与环磷酰胺、紫杉醇、顺铂或阿霉素组合的治疗功效。见Int.J.Cancer，1998，第77卷，720。单独以IL-12或上述化学治疗剂之一治疗L1210白血病产生中度抗白血病效果。IL-12与环磷酰胺或紫杉醇的组合与单独给予这些药物相比不引起抗白血病效果增加。然而。IL-12与阿霉素的组合增加抗白血病效果，与此同时IL-12与顺铂的组合具有中度的增强效果。
然而在鼠黑素瘤MmB16模型中，IL-12+紫杉醇的组合比单独治疗更有效。Cancer Lett，1999，第147卷，67。也已经检验了与亚德里亚霉素、环磷酰胺或5-FU组合的IL-12蛋白质在MB-49膀胱癌和B16黑素瘤中的抗肿瘤功效。见，Clin.Cancer Res.，1997，第3卷，1661。与化学疗法组合，IL-12施用增加抗肿瘤活性，而不引起额外的毒性。在通过IL-12或环磷酰胺难以治疗的小鼠肉瘤MCA207中，重组IL-12与环磷酰胺的组合比单独治疗产生更好的抗肿瘤反应。J.Immunol，1998，第160卷，1369。在小鼠乳腺瘤中，包含静脉内紫杉醇化学疗法和肿瘤内IL-12基因疗法(IL-12/WSLP)的联合疗法比单独治疗更有效。见Molecular Therapy，2004，第9卷，829。联合疗法的益处取决于紫杉醇的递送载体。当紫杉醇制剂在聚合物制剂中时，观察到紫杉醇和IL-12基因疗法间的协同性相互作用。作为比较，与一种广泛用于癌症治疗的紫杉醇制剂-CremophorEL
Figure GSB00000579017800051
的组合没有协同性，这表明观察到的益处是制剂特异性的。
为从涉及基因疗法的联合方法中实现想要的结果，重要的是选择适宜的基因递送系统。在前述的组合实验中所用的基因递送系统(MolecularTherapy，2004，第9卷，829)是水溶性脂质聚合物PEI-胆固醇(WSLP)。在本发明中，我们描述结构上区别于WSLP的一类新聚合物载体(PEG-PEI-胆固醇)，因为它含有设计旨在改善基因递送系统的药物代谢动力学、安全性和功效的亲水聚合物和与膜相互作用的配体(例如，胆固醇)，以单独或与化学治疗剂组合促进抗癌基因的转染活性的多种几何构型排布。肿瘤组织中与WSLP相比的PPC的转染活性优势在图1和图2中显示。
临床上已经检验了两种化学治疗剂的组合或者化学治疗剂与细胞因子的组合。虽然这些组合已经产生更明显的肿瘤退化，但是长期存活的益处微不足道并且细胞毒性已经成为问题。这归咎于伴随化学疗法和重组蛋白疗法的固有全身毒性。必须设计新的和更有效的联合方法以改善未来的癌症治疗。在本发明中，我们描述了用于治疗癌症的新的联合方法，包括以聚合物载体递送的基于核酸的治疗法和至少一种化学治疗剂。
发明简述
本发明提供用于癌症治疗的包含核酸、基因递送聚合物和至少一种药剂的药物组合物。此外，本发明还提供用于通过体内(in vivo)施用包含核酸、基因递送聚合物和至少一种药剂的药物组合物，抑制哺乳动物中肿瘤细胞生长和转移的方法。
核酸是选自质粒DNA、siRNA、有义RNA、反义RNA和核酶中的一员。质粒DNA是含有如此DNA序列的基因表达系统，该DNA序列编码选自白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-7、白细胞介素-12、白细胞介素-15、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞刺激因子、抗血管生成剂、肿瘤抑制基因、胸苷激酶、eNOS、iNOS、p53、p16、TNF-α、Fas-配体、突变的癌基因、肿瘤抗原、病毒抗原或细菌抗原的抗癌或抗增殖蛋白。质粒DNA还可以编码shRNA分子，所述shRNA分子设计为旨在抑制参与肿瘤细胞或其它过度增生性细胞生长或维持的蛋白质。质粒DNA可以同时编码治疗性蛋白质和一种或多种shRNA。此外，所述组合物的核酸还可以是质粒DNA与包括有义RNA、反义RNA或核酶的合成RNA的混合物。
基因递送聚合物是阳离子型聚合物或非缩合型聚合物。阳离子型聚合物选自聚赖氨酸、聚氮丙啶、聚氮丙啶(PEI)的官能化衍生物、聚甲基吖丙啶、氨基糖苷-聚胺、二脱氧-二氨基-b-环糊精、精胺和亚精胺。适用于本发明的阳离子型基因递送聚合物的一个实例是包含PEI主链、脂类和亲水聚合物间隔区的PEI衍生物，其中脂类是胆固醇、胆固醇衍生物、C12至C18脂肪酸或脂肪酸衍生物，直接地结合至聚氮丙啶主链或共价地结合至聚乙二醇间隔区，该间隔区随后通过可生物相容的键结合至PEI。本发明的阳离子型基因递送聚合物还可以包含靶向部分，包括抗体或抗体片段、细胞受体、生长因子受体、细胞因子受体、叶酸、转铁蛋白、表皮生长因子(EGF)、胰岛素、脱唾液酸血清类黏蛋白、甘露糖-6-磷酸(单核细胞)、甘露糖(巨噬细胞、某些B细胞)、Lewisx和唾液酰Lewisx(内皮细胞)、N-乙酰基乳糖胺(T细胞)、半乳糖(结肠癌细胞)和凝血调节蛋白(小鼠肺内皮细胞)、融合剂如多粘菌素B和血凝素HA2、抗溶酶体剂、核定位信号(NLS)如T-抗原、脱唾液酸糖蛋白、低密度脂蛋白、白细胞介素、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、干细胞因子、促红细胞生成素、乳糖、和其任意组合等。另一种基因递送聚合物是非缩合型聚合物，选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚(丙交酯共乙交酯)(PLGA)以及PLGA和PEG的三单元共聚物。基因递送聚合物还可以是非缩合型聚合物。此类非缩合型聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆、聚谷氨酸、明胶、聚磷酸酯、丝-弹性蛋白样水凝胶、琼脂糖水凝胶、脂微管、聚(丙交酯共乙交酯)以及聚乙二醇连接的聚(丙交酯共乙交酯)。
在前述组合物的一个实施方案中，药剂是选自紫杉烷类、铂、阿霉素、环磷酰胺、托泊替康、卡莫司汀(BCNU)或其组合的化学治疗药。尤其优选紫杉醇、卡铂、托泊替康、吉西他滨和其任意组合。
在前述组合物的另一个实施方案中，药剂是选自CD20抗体、HER2/neu抗体、抗VEGF抗体、表皮生长因子受体抗体和其放射性同位素缀合物的抗癌抗体。
本发明还提供用于通过肿瘤内、腹膜内、气管内、颅内或全身施用包含核酸、核酸递送聚合物和至少一种附加的化学治疗药的药物组合物治疗哺乳动物癌症的方法。哺乳动物癌症选自卵巢、乳腺、脑、头和颈、肝、肺、前列腺、肾、结肠、胰、甲状腺、膀胱、腹腔、胸腔和皮肤的原发性或转移性肿瘤。核酸和基因递送聚合物在药剂施用之前或之后通过肿瘤内、腹膜内、气管内或口服或全身施用加以施用。例如，在某些情况下，优选在药剂(例如，化学疗法)之前施用核酸(例如，pIL-12DNA/聚合物)，因为这将有效地增强瘤对药剂的敏感性并促进抗癌反应。在另一情况下，优选在基因递送(例如，pIL-12/PPC)之前给予药剂(例如，化学疗法)以允许药剂引起肿瘤破坏以及释放待由治疗性基因(例如，pIL-12/聚合物)稍后利用的肿瘤抗原，用于激发针对目的癌的高度特异且强烈的治疗反应。
以所述药物组合物(核酸加上基因递送聚合物和一种或多种化学治疗剂)治疗肿瘤导致肿瘤缩小和寿命延长。根据本发明方法的基因疗法(核酸和基因递送聚合物)与化学疗法(化学治疗剂)的联合产生相加效果和/或协同效果。将本发明方法的功效定义为，但不限于肿瘤大小的缩减或肿瘤密度的减少、淋巴细胞计数的增加或中性细胞计数的增加或存活的改善或以上全部。此外，根据本发明方法的基因疗法(核酸和基因递送聚合物)与化学疗法(化学治疗剂)的联合降低化学治疗剂毒性并逆转肿瘤对化学疗法的抗性。毒性在本文中定义为对临床观察到的治疗相关的任意不利效果，包括但不限于异常血液学或血清化学或器官毒性。此外，根据本发明方法的基因疗法(核酸和基因递送聚合物)与次优剂量的化学疗法(化学治疗剂)的组合增强抗癌效果至如此水平，其等于或高于以优化剂量的化学治疗剂所取得的水平，但具有更少毒性。
在所述的联合疗法中，核酸是选自质粒DNA、siRNA、有义RNA、反义RNA和核酶中的一员。核酸可以是含有如此DNA序列的基于质粒的基因表达系统，该DNA序列编码选自白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-7、白细胞介素-12、白细胞介素-15、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞刺激因子、抗血管生成剂、肿瘤抑制基因、胸苷激酶、eNOS、iNOS、p53、p16、TNF-α、Fas-配体、突变的癌基因、肿瘤抗原、病毒抗原或细菌抗原的抗癌蛋白质或抗增殖蛋白质。质粒DNA还可以编码shRNA分子，所述shRNA分子设计为旨在抑制参与肿瘤细胞或其它过度增生性细胞生长或维持的蛋白质。质粒DNA可以同时编码治疗性蛋白质和一种或多种shRNA。此外，所述组合物的核酸还可以是质粒DNA与合成RNA的混合物。基因递送聚合物是阳离子型聚合物或非缩合型聚合物。阳离子型聚合物选自聚赖氨酸、聚氮丙啶、聚氮丙啶(PEI)的官能化衍生物、聚甲基吖丙啶、氨基糖苷-聚胺、二脱氧-二氨基-b-环糊精、精胺和亚精胺。适用于本发明的阳离子型基因递送聚合物的一个实例是包含聚氮丙啶(PEI)主链、脂类和聚乙二醇间隔区的聚氮丙啶衍生物，其中脂类直接地结合至聚氮丙啶主链或共价地结合至聚乙二醇间隔区，该间隔区随后通过可生物相容的键结合至PEI。本发明的阳离子型基因递送聚合物还可以包含靶向部分，包括抗体或抗体片段、细胞受体、生长因子受体、细胞因子受体、叶酸、转铁蛋白、表皮生长因子(EGF)、胰岛素、脱唾液酸血清类黏蛋白、甘露糖-6-磷酸(单核细胞)、甘露糖(巨噬细胞、某些B细胞)、Lewisx和唾液酰Lewisx(内皮细胞)、N-乙酰基乳糖胺(T细胞)、半乳糖(结肠癌细胞)和凝血调节蛋白(小鼠肺内皮细胞)、融合剂如多粘菌素B和血凝素HA2、抗溶酶体剂、核定位信号(NLS)如T-抗原等。基因递送聚合物是非缩合型聚合物，其选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚(丙交酯共乙交酯)(PLGA)以及PLGA和PEG的三单元共聚物。化学治疗药是选自紫杉烷类、铂、阿霉素、环磷酰胺、托泊替康、卡莫司汀(BCNU)或其组合的成员。尤其优选紫杉醇、卡铂、托泊替康、吉西他滨和其任意组合。
在前述方法的另一个实施方案中，药剂是选自CD20抗体、HER2/neu抗体、抗VEGF抗体、表皮生长因子受体抗体和其放射性同位素缀合物的抗癌抗体。
本发明还提供通过肿瘤内、腹膜内、气管内、颅内或全身施用包含基于质粒的基因表达系统和基因递送聚合物的药物组合物用于治疗哺乳动物癌症或过度增生性疾病的方法，其中所述药物组合物不含化学治疗药。哺乳动物癌症选自卵巢、乳腺、脑、头和颈、肝、肺、前列腺、肾、结肠、胰、甲状腺、膀胱、腹腔、胸腔和皮肤的原发性或转移性肿瘤。核酸是基于质粒的含有如此DNA序列的基因表达系统，该DNA序列编码选自白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-7、白细胞介素-12、白细胞介素-15、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞刺激因子、抗血管生成剂、肿瘤抑制基因、胸苷激酶、eNOS、iNOS、p53、p16、TNF-α、Fas-配体、突变的癌基因、肿瘤抗原、病毒抗原或细菌抗原的抗癌或抗增殖蛋白。质粒DNA还可以编码shRNA分子，所述shRNA分子设计为旨在抑制参与肿瘤细胞或其它过度增生性细胞生长或维持的蛋白质。质粒DNA可以同时编码治疗性蛋白质和一种或多种shRNA。此外，所述组合物的核酸还可以是质粒DNA与合成RNA的混合物。
所述组合物的基因递送聚合物是阳离子型聚合物或非缩合型聚合物。阳离子型聚合物选自聚氮丙啶、聚氮丙啶(PEI)的官能化衍生物、聚甲基吖丙啶、氨基糖苷-聚胺、二脱氧-二氨基-b-环糊精、精胺和亚精胺。适用于本发明的阳离子型基因递送聚合物的一个实例是包含聚氮丙啶(PEI)主链、脂类和聚乙二醇间隔区的聚氮丙啶衍生物，其中脂类是胆固醇、胆固醇衍生物、C12至C18脂肪酸或脂肪酸衍生物，直接地结合至聚氮丙啶主链或共价地结合至聚乙二醇间隔区，该间隔区随后通过生物可容纳的键结合至PEI。本发明的阳离子型基因递送聚合物还可以包含靶向部分，包括抗体或抗体片段、细胞受体、生长因子受体、细胞因子受体、叶酸、转铁蛋白、表皮生长因子(EGF)、胰岛素、脱唾液酸血清类黏蛋白、甘露糖-6-磷酸(单核细胞)、甘露糖(巨噬细胞、某些B细胞)、Lewisx和唾液酰Lewisx(内皮细胞)、N-乙酰基乳糖胺(T细胞)、半乳糖(结肠癌细胞)和凝血调节蛋白(小鼠肺内皮细胞)、融合剂如多粘菌素B和血凝素HA2、抗溶酶体剂、核定位信号(NLS)如T-抗原、脱唾液酸糖蛋白、低密度脂蛋白、白细胞介素、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、干细胞因子、促红细胞生成素、乳糖、和其任意组合等。另一种基因递送聚合物是非缩合型聚合物，选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚(丙交酯共乙交酯)(PLGA)以及PLGA和PEG的三单元共聚物。以所述药物组合物(核酸加上基因递送聚合物以及一种或多种化学治疗剂)治疗肿瘤导致肿瘤缩减和寿命延长。所述药物组合物中聚乙二醇与聚氮丙啶的摩尔比在0.1∶1至500∶1的范围内；脂类与聚氮丙啶的摩尔比在0.1∶1至500∶1的范围内；基因递送聚合物与靶向部分的摩尔比在1∶0.1至1∶100的范围内；所述核酸与所述基因递送聚合物以基因递送聚合物中的氮摩尔对DNA中的磷酸摩尔为0.1∶100至100∶1的摩尔比复合。
附图简述
图1显示基因递送聚合物PEG-PEI-胆固醇(PPC)和水溶性脂质聚合物PEI-Chol(WSLP)之间在基因转移功效上的差异。将受试聚合物与萤光素酶质粒复合并肿瘤内施用至4T1乳腺肿瘤。此后24小时在肿瘤组织内定量萤光素酶表达。
图2显示增加PEG-PEI-Chol中的PEG∶PEI比率对基因通过肿瘤内施用质粒/PPC复合体转移至4T1实体瘤的功效的影响。将以不同PEG∶PEI比率合成的PPC聚合物与萤光素酶质粒复合并肿瘤内施用至4T1乳腺肿瘤。24小时后在肿瘤组织内定量萤光素酶表达。
图3显示IL-12基因通过肿瘤内施用(A)pmIL-12/PPC复合体转移至乳腺实体瘤和通过腹膜内注射(B)pmIL-12/PPC复合体转移至腹膜弥散性卵巢肿瘤(ID8肿瘤)。将PPC与小鼠IL-12基因表达质粒(pmIL-12)复合并肿瘤内施用至4T1乳腺肿瘤以及腹膜内施用至携带ID8腹膜肿瘤的小鼠。IL-12水平24小时后在4T1肿瘤内以及在1、2、3和7日后在携带ID8肿瘤的动物的腹水内定量。
图4显示腹膜内施用pmIL-12/PPC后IFN-γ产生的时间过程。PPC与小鼠IL-12基因表达质粒(pmIL-12)复合并腹膜内施用至携带ID8腹膜肿瘤的小鼠。IFN-γ水平在1、2、3和7日后在腹水内定量。
图5显示通过腹膜内施用pmIL-12/PPC复合体对腹膜弥散性卵巢肿瘤的剂量依赖性抑制。以多种DNA剂量制备的pmIL-12/PPC复合体腹膜内施用至携带腹膜弥散性ID8肿瘤的小鼠。对动物定期称重以评估治疗对肿瘤载量的影响，并记录存活数据。
图6显示通过腹膜内施用pmIL-12/PPC复合体的携带腹膜弥散性卵巢肿瘤的小鼠的存活改善。
图7显示通过腹膜内施周pmIL-12/PPC复合体的携带腹膜弥散性结肠直肠肿瘤的小鼠的存活改善。pmIL-12/PPC复合体腹膜内施用至携带肿瘤的小鼠。监测试验动物和对照动物的存活。
图8显示通过腹膜内施用pmIL-12/PPC复合体的携带GL-261神经胶质瘤的小鼠的存活改善。pmIL-12/PPC复合体在肿瘤植入时施用至颅腔。监测试验动物和对照动物的存活。
图9显示通过肿瘤内施用pmIL-12/PPC复合体对皮下鳞状细胞癌的抑制。pmIL-12/PPC复合体在肿瘤植入后6-7日肿瘤内施用至皮下SCCVII肿瘤并且治疗每周重复一次持续4周。为评估治疗功效，定期测量肿瘤大小。
图10显示通过包含腹膜内pmIL-12/PPC和静脉内紫杉醇的联合疗法对腹膜弥散性卵巢肿瘤的抑制。pmIL-12/PPC复合体在植入肿瘤细胞21日后通过腹膜内注射施用。7日后重复pmIL-12/PPC治疗。紫杉醇在首次基因注射前一日静脉内施用仅一次。监测试验动物和对照动物的存活。
图11显示通过包含腹膜内pmIL-12/PPC和吉西他滨化学疗法的联合疗法对腹膜弥散性ID8卵巢肿瘤的抑制。携带肿瘤的小鼠在肿瘤植入14日后以腹膜内吉西他滨治疗并且治疗每周重复一次共4次治疗。首次pmIL-12/PPC治疗在肿瘤植入17日后通过腹膜内注射给予并每周重复一次共4次治疗。监测试验动物和对照动物的存活。
图12显示包含腹膜内pmIL-12/PPC和卡铂/紫杉醇化学疗法的联合疗法对腹膜弥散性卵巢肿瘤的抑制。化学疗法治疗在肿瘤植入15日后开始，卡铂每周给予一次持续4周并且紫杉酚每隔一周给予一次共2次治疗。首次pmIL-12/PPC治疗在肿瘤植入18日后通过腹膜内注射给予并且每周重复一次共4次治疗。监测试验动物和对照动物的存活。
图13显示通过肿瘤内施用pmIL-12/PPC复合体和环磷酰胺化学疗法对SCCVII肿瘤的抑制。pmIL-12/PPC复合体在肿瘤植入6-7日后肿瘤内施用至皮下SCCVII肿瘤并且每周重复一次共4周。环磷酰胺在基因注射前一日静脉内施用并且在14日后重复。为评估治疗功效，定期测量肿瘤大小。
图14显示通过肿瘤内施用pmIL-12/PPC复合体和BCNU化学疗法对GL261神经胶质瘤的抑制。pmIL-12/PPC复合体在肿瘤植入时施用至颅腔。BCNU作为Gliadel糯米纸囊剂(wafer)在肿瘤植入5日后施用。监测试验动物和对照动物的存活。
图15显示IL-12/PPC基因疗法添加至低剂量卡铂/紫杉醇化学疗法没有增加毒性。作为比较，用高剂量卡铂/紫杉醇化学疗法的治疗引起30％比例的治疗相关性死亡。化学疗法治疗在肿瘤植入15日后开始，卡铂每周给予一次持续4周并且紫杉酚每隔一周给予一次共2次治疗。首次pmIL-12/PPC治疗在肿瘤植入18日后通过腹膜内注射给予并且每周重复一次共4次治疗。整个治疗循环重复三次。监测试验动物和对照动物的存活。
发明详述
在公开和描述本组合物及用于递送生物活性剂的方法之前，应当理解本发明不限于本文中公开的具体设置、方法步骤和材料。还应当理解本文中采用的术语仅用于描述具体实施方案的目的并且不意图是限制性的，因此本发明的范围仅受附带的权利要求书及其等效物限制。
必须指出如本说明书及所附权利要求书中所用，单数形式“一个”和“该”包括复数称谓，除非上下文清楚地说明。因此，对含有“一个二硫键”的聚合物的称谓包括对两个或多个如此二硫键的称谓，对“一个配体”的称谓包括对一个或多个如此配体的称谓以及对一种药物的称谓包括对两种或多种如此药物的称谓。
在描述本发明并要求本发明的权利时，将使用与以下描述的定义相一致的如下术语。
“转染”应当意指核酸从对细胞为外在的环境转运至内部的细胞环境，尤其指细胞浆和/或细胞核。不受任何具体理论束缚，应当理解可以将核酸包封于一种或多种阳离子型聚合物/核酸复合体中或黏附至此复合体或由其携带后递送至细胞。特定的转染实例为将核酸递送至细胞核。核酸包括DNA和RNA以及其合成性同类物。此类核酸包括错义、反义、无义以及产生蛋白质的核苷酸，控制蛋白质、肽和核酸产生的开启和关闭和调节速率的核苷酸。尤其，它们可以是，但不限于基因组DNA、cDNA、mRNA、tRNA、rRNA、杂交序列或合成性或半合成性序列，并且其为天然来源的或人工来源的。此外，核酸可以在大小上变化，范围从寡核苷酸至染色体。这些核酸可以是人的、动物的、植物的、细菌的、病毒的或合成性来源。它们可以由本领域技术人员所知的任何技术获得。
如本文中所用，术语“药剂”或“药物”或任何其它类似术语意指适用于通过本领域先前已知方法和/或本发明中所教授方法施用的任何化学的或生物的物质或化合物，其引起所需要的生物学的或药物学的效果，该效果可以包括但不限于(1)具有对生物的预防性效果并防止不想要的生物学效果如阻止感染，(2)缓解由疾病引起的病症，例如缓解因疾病所致的疼痛或炎症，和/或(3)或者缓解、减少或完全消除来自生物中的疾病。效果可以是局部的，如提供局部麻醉效果，或它可以是全身性的。
本发明本身不涉及新药物或新类型的生物活性剂。相反，本发明涉及可生物相容的阳离子型共聚物组合物以及使用如此组合物用于递送基因或其它生物活性剂的方法，其中所述的其它生物活性剂在目前技术领域存在或可能稍后确立作为活性剂并且适用于通过本发明递送。此类物质包括广泛类型的通常递送至身体的化合物。通常，这包括但不限于：核酸，如DNA、RNA和寡核苷酸；抗感染药如抗生素和抗病毒药；镇痛药和镇痛药组合；食欲抑制药；驱蠕虫药；抗关节炎药；平喘药；抗惊厥药；抗抑郁药；抗糖尿病药；止泻药；抗组胺药；抗炎药；抗偏头痛制剂；止恶心药；抗肿瘤药；抗震颤麻痹药；止痒药；抗精神药；退热药；解痉药；抗胆碱能药；拟交感神经药；黄嘌呤衍生物；心血管制剂包括钾通道、钙通道阻滞剂、β-阻滞剂、α-阻滞剂和抗心律失常药；抗高血压药；利尿药和抗利尿药；血管舒张药包括全身神经、心神经、周围神经和脑神经、中枢神经系统的兴奋剂、血管抑制药；咳嗽和感冒制剂，包括减充血药；激素，如雌二醇和其它固醇类，包括皮质类固醇；催眠药；免疫抑制药；肌肉松弛药；副交感神经阻滞药；精神兴奋剂；镇静药和安定药。通过本发明的方法，可以递送例如处于离子化的、非离子化的、游离碱、酸加成盐等所有形式的药物，同样可以递送高分子量或低分子量药物。对于待递送生物活性剂的属或种类的唯一限制是可以迅速通过常规实验确定的官能度的限制。
如本文中所用，术语“可生物相容的”或“生物降解”定义为将物质通过溶解化水解或通过生物形成的存在物(entities)转化为复杂性较低的中间产物或终产物，其中存在物可以是生物的酶或其它产物。
如本文中所用，“有效量”意指核酸或生物活性剂的量，其足以提供所需的局部或全身效果和并以任何医学治疗的合理风险/损益比实施。
如本文中所用“肽”意指任何长度的肽并且包括蛋白质。术语“多肽”和“寡肽”用于本文中而无任何具体大小限制的意思，除非说明具体的大小。可以利用的代表性肽选自催产素、血管升压素、肾上腺皮质激素、表皮生长因子、促乳素、促黄体素释放素或黄体生成素释放激素、生长激素、生长激素释放因子、胰岛素、促生长素抑制素、胰高血糖素、干扰素、胃泌素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃素(urogastroine)、肠促胰液素、降钙素、脑啡肽、内啡肽、血管紧张素、肾素、缓激肽、杆菌肽、多粘菌素、黏菌素、短杆菌酪肽、短杆菌肽及合成的类似物、修饰物和其药学活性片段、单克隆抗体和可溶性疫苗。对可以利用的肽或蛋白质药物的唯一限制是官能度的限制。
如本文中所用，糖的“衍生物”例如包括糖的酸形式，例如糖醛酸，糖的胺，例如半乳糖胺；糖的磷酸酯，例如甘露糖-6-磷酸等。
如本文中所用，“施用”和类似术语意指递送组合物至正在接受治疗的个体以致该组合物能够在全身循环，其中组合物结合至靶细胞并通过内吞作用摄入。因此组合物优选地全身施用至个体，一般通过皮下、肌内、经皮、静脉内或腹膜内途径。用于此用途的注射剂可以制备为常规形式，作为液体溶液或混悬液，或为这样的固体形式，其适用于在注射前制备为液体中的溶液或混悬液，或制备为乳剂。可用于施用的合适赋形剂包括例如水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等；以及根据需要，少量辅料如湿润剂或乳化剂、缓冲剂等。
如本文中所用，“功效”和类似术语意指肿瘤的消失或肿瘤大小的缩减或肿瘤密度的降低或淋巴细胞计数的增加或嗜中性细胞计数的增加或存活改善或以上全部。
如本文中所用，“毒性”定义为临床观察到的任意的治疗相关的不利效果，包括但不限于异常的血液学或血清化学结果或器官毒性。
新的癌症治疗策略集中在允许经外源递送的基因在肿瘤环境中表达的携带遗传信息的递送性大分子，而不是治疗性蛋白质本身。与病毒性递送系统相比，认为利用非病毒性基因递送系统的方法更安全，但是现存聚合物系统的实际应用因为效率低并不令人满意。最近公开了一项策略，从而通过胆固醇的共价结合形成水溶性脂质聚合物(WSLP)增强低分子量PEI的基因转染效率。见Mol Ther.，2001，4，130。用WSLP明显比通过未修饰的PEI更好地转移IL-12基因至实体瘤，并且引起更显著的肿瘤抑制。
本发明提供新的聚合物系统PEG-PEI-胆固醇(PPC)，其与WSLP(PEI-胆固醇)不同在于它含有PEG部分并且在肿瘤中产生显著较高的转染效率(图1)。设计添加PEG旨在增强生物环境中核酸/聚合物复合体的稳定性以克服现有技术(WSLP)的缺陷。此外，添加PEG链允许配体掺入至PPC链以改善递送的组织选择性。例如在现有技术(WSLP)中直接连接于PEI主链的胆固醇部分可以从PEI主链进一步延伸以产生更灵活的几何形状用于细胞受体相互作用。控制每单位PEI主链的PEG分子数目对于实现转染活性的最佳强化重要。如图2中所示，肿瘤基因转移的幅度取决于不同PPC成分、PEG、PEI和胆固醇之间的比率。组合物的优选范围是在固定的胆固醇含量时PEG∶PEI摩尔比率2-4。PEI和胆固醇间的最佳比率是1∶0.5至1∶1。以治疗性基因检验PPC促进基因转移至肿瘤的能力。含有小鼠IL-12基因的表达质粒(pmIL-12)与PPC以11∶1氮(N)对磷酸(P)比率(N∶P比率)复合并且肿瘤内施用至具有4T1实体瘤的小鼠或腹膜内施用至具有腹膜弥散性卵巢肿瘤的小鼠。
在两种肿瘤模型中，IL-12基因转移表现为IL-12水平的增加(图3)。在携带腹膜肿瘤的小鼠中，治疗后IL-12水平在24小时内升高并且在7日内降低至基线。IL-12作用的动力学与IL-12作用的下游媒介IFN-γ的升高密切相关(图4)。IFN-γ水平的升高如所预期略微延迟并且在7日后仍然高于基线。这些数据表明包含IL-12表达质粒和PPC的组合物能够在不同肿瘤类型中并通过不同施用途径表明IL-12基因转移。通过pmIL-12/PPC介导的IL-12基因转移具有治疗显著性，因为它引起肿瘤生长的显著抑制。
在具有腹膜弥散性卵巢肿瘤的小鼠内，腹膜内施用DNA剂量为10-250μg的pmIL-12/PPC复合体(N∶P比率11∶1)以剂量依赖性方式显著地减少肿瘤载量(图5)并改善存活(图6)。还在结肠直肠癌中观察到pmIL-12/PPC(N∶P比率11∶1)的治疗效果。与未治疗的动物相比，在具有腹膜弥散性结肠直肠癌的小鼠中腹膜内施用25μg的pmIL-12/PPC复合体显著地延长其存活(图7)。通过pmIL-12/PPC的IL-12基因转移的抗癌功效还在肿瘤内施用后的实体瘤内观察到。图8显示肿瘤内注射pmIL-12/PPC对GL261脑肿瘤生长的影响。通过局部递送pIL-12/PPC复合体(N∶P比率11∶1)对小鼠GL261神经胶质瘤颅内植入物的治疗显著地增强存活。在具有皮下植入的头和颈鳞状细胞癌的小鼠内，每周一次持续四周肿瘤内施用pmIL-12/PPC复合体产生显著的肿瘤生长速率抑制(图9)。还在卵巢肿瘤和乳腺肿瘤内观察到pmIL-12/PPC复合体的抗癌效果。
本发明的组合物(核酸和基因递送聚合物)当体内施用时未产生不利的副作用。例如，没有与腹膜内或皮下施用pmIL-12/PPC相关的化合物相关的死亡或临床中毒迹象。pmIL-12/PPC在每只动物10μg、50μg和250μg剂量上在雄性和雌性小鼠中得到良好耐受。IP和SC剂量组内动物的组织病理学检查表明没有因pmIL-12/PPC所致的全身毒性证据，轻微炎症在位于或接近于注射部分的器官中明显，但是在一个月恢复时间期间消退。这些结果证实当通过不同施用模式给予时，用于癌症治疗的核酸/聚合物组合物有效地对抗类型广泛的癌症，并且体内重复递送不引起严重毒性。
已经广泛认识到抗癌症的单独治疗策略通常因该疾病的多因素性质无效。人们正日益认识到联合多于一种药物以使抗癌反应最大化的益处。尽管临床前数据令人鼓舞，然而迄今已检验的化学-化学组合或化学-细胞因子组合的临床成功因化学治疗药和重组细胞因子蛋白质的固有毒性仍不令人满意。这证明需要更安全的化学-免疫疗法方法以克服蛋白质毒性并改善功效。在本发明中，我们联合化学治疗剂与局部施用至肿瘤部位的抗癌基因的基因递送以改善治疗安全性和功效。安全和有效的抗癌基因局部递送与标准化学治疗剂的联合将增强抗癌反应和患者存活，不引起毒性。该联合疗法将减少化学疗法剂量并且增加肿瘤对化学疗法的敏感性。在本发明中，已经证实包含与阳离子型基因递送聚合物复合的抗癌基因和至少一种附加的化学治疗药的药物组合物比单独施用基因疗法或化学疗法更有效。此外当通过不同的施用途径给予时，联合疗法有效地对抗类型广泛的癌症，并且不对个体治疗引起毒性。
联合疗法的抗癌反应针对植入腹膜腔的卵巢肿瘤展示。静脉内施用紫杉醇
Figure GSB00000579017800181
(8mg/Kg)或腹膜内施用pmIL-12质粒(25-100μg)/PPC复合体(N∶P比率11∶1)在携带肿瘤的小鼠中引起肿瘤的减少和改善的存活。pmIL-12/PPC治疗比紫杉醇治疗更有效。联合IL-12基因和紫杉醇疗法产生比单独治疗更大的治疗反应(图10)。当IL-12基因疗法与另一种化学治疗剂吉西他滨
Figure GSB00000579017800182
联合时，观察到联合疗法在卵巢癌上的类似效果(图11)。当与pmIL-12/PPC治疗同时使用时，吉西他滨的抗癌活性显著增强。研究了IL-12基因疗法与两种化学治疗剂的混合物的联合。如图12中所示，当与单独的IL-12疗法或单独的化学疗法比较时，IL-12基因疗法与卡铂
Figure GSB00000579017800183
/紫杉醇混合物联合引起增强的存活。IL-12基因疗法加至次优剂量的卡铂/紫杉醇增强了类似于用高化学疗法剂量实现的治疗功效(图12)，不引发毒性。
在实体瘤内也观察到通过联合疗法对抗癌反应的改善。例如在头和颈的皮下鳞状细胞癌中，静脉内施用化学治疗剂环磷酰胺(150mg/kg)显著地减少肿瘤生长，但是未完全抑制肿瘤生长(图13)。肿瘤内仅注射pmIL-12/PPC引起约30％的肿瘤生长抑制。相对于单独治疗，环磷酰胺加pmIL-12/PPC的联合疗法引起肿瘤生长的完全抑制。完全排斥率从用环磷酰胺的仅10％明显地增加至用环磷酰胺加pmIL-12/PPC复合体的55％。在GL261脑肿瘤中单次肿瘤内注射次优剂量(1.5μg)的pmIL-12/PPC复合体未显著地增强动物的存活率。然而，该次优剂量的pmIL-12/PPC与化学治疗剂BCNU(
Figure GSB00000579017800184
wafer)的联合在存活率上产生显著增强(图14)。
采用高剂量化学疗法的癌症治疗伴随严重的毒性。为检验IL-12/PPC加至低剂量化学疗法是否引起治疗相关性毒性，携带腹膜弥散性卵巢肿瘤的小鼠以IL-12/PPC和低剂量化学疗法的三个治疗循环处理并监测毒性征兆。直接比较以三个循环高剂量化学疗法治疗处理的动物。如图15中所示，高剂量化学疗法组的50％因治疗相关性毒性死亡(即在达到40克之前)，而IL-12/PPC+低剂量化学疗法组没有一只动物死于治疗毒性。这些结果表明用于癌症的常规化学疗法(高剂量)的毒性可以通过降低化学疗法剂量并加入更安全和有效的IL-12基因疗法而显著减少。
这些数据显示了包含IL-12质粒和新型基因递送聚合物的组合物的抗癌功效及该组合物用单种化学治疗剂或化学治疗剂混合物的加强。联合方法提供这样的方法，通过该方法增强次优剂量的化学疗法方案的功效，而不增加毒性。
如下实施例将使本领域技术人员更清楚地理解如何实施本发明。应当理解，尽管结合本发明优选的具体实施方案，本发明已经得到描述，然而随后的实施方案意在说明而非限制本发明的范围。本发明的其它方面对于与本发明有关的本领域技术人员将显而易见。
实施例1
通过局部施用pIL-12/PPC复合体将IL-12基因转移至腹膜弥散性肿瘤或皮下肿瘤
检测了局部递送pIL-12/PPC复合体以在携带皮下肿瘤和腹膜弥散性肿瘤的小鼠中产生IL-12水平的能力。对于皮下肿瘤研究，雌性BALB/c小鼠(7周龄，14-18克)在左腹侧和右腹侧分别以1×106个4T1细胞作皮下(sc)注射。肿瘤达到约60mm3的肿瘤大小后，以含有6μg DNA的pmIL-12/PPC复合体注射它们。小鼠在24小时后处死并收获它们的肿瘤用于通过ELISA分析mIL12。注射后24小时肿瘤中的mIL-12水平示于图3A。
对于腹膜肿瘤研究，雌性C57/BL6小鼠以500μl体积内的5×106个ID8细胞作腹膜内(ip)注射。当肿瘤负荷(小鼠重量)达到约20克(注射细胞后～21日)时，治疗开始。小鼠于500μl体积内的11∶1氮(N)对磷酸(P)比率(N∶P比率)的单剂量pmIL-12/PPC作腹膜内注射。腹水在小鼠经pmIL-12/PPC治疗后的1、2、3和7日从携带肿瘤的动物中取出。mIL-12和IFN-γ的水平通过ELISA测定并对总腹水进行归一化。结果表明在腹水中观察到显著水平的mIL-12，治疗后1日达峰值水平，治疗后7日水平下跌至接近基线(图3B)。类似地观察到IFN-γ的水平升高，但峰值水平相对于IL-12水平在时间上推迟(3天峰值)并且在治疗后至7日下跌但仍显著地高于基线水平(图4)。
实施例2
通过腹膜内施用pIL-12/PPC复合体治疗腹膜弥散性卵巢肿瘤
小鼠以500μl体积内的5×106个ID8细胞作腹膜内注射。当肿瘤负荷(小鼠重量)达到约20克(注射细胞后～21日)时，治疗开始。小鼠于500μl体积内的以11∶1N∶P比率与PPC复合的10-250μg的pIL-12作腹膜内注射，每周一次持续三周。小鼠在研究期间定期称重。重量增加明显因提供间接评估疾病进展和肿瘤负荷的腹水聚集引起。pmIL-12/PPC治疗引起肿瘤负荷的剂量依赖性抑制(图5)以及动物存活延长(图6)。
实施例3
通过腹膜内施用pIL-12/PPC复合体治疗腹膜弥散性结肠直肠肿瘤
小鼠以500μl体积内的0.1×106个CT26细胞作腹膜内注射。治疗在肿瘤植入1日后开始。小鼠于500μl体积内的以11∶1N∶P比率与PPC复合的50μg pmIL-12或与LPPC6复合的25μg pIL-12作腹膜内注射，每周一次持续五周。LPPC6是一分子mPEG和6分子胆固醇分别与之结合的15KD线型聚氮丙啶。如图7中所示，在这种高度侵入性肿瘤模型中pmIL-12/PPC和pmIL-12/LPPC6治疗在存活上产生超过未治疗对照的显著改善。
实施例4
通过肿瘤内施用pIL-12/PPC复合体治疗脑癌
局部递送pmIL-12/PPC复合体的效果在小鼠神经胶质瘤模型中检验。肿瘤通过颅内注射1×105个GL261神经胶质瘤细胞植入小鼠大脑皮层，同时共注射pmIL-12/PPC复合体。监视动物的任何神经毒性征兆并根据需要进行尸检，以证实死亡原因是颅内肿瘤。存活使用Kaplan-Meier存活分析作图。以质粒剂量范围2.5-30μg单次颅内注射施用的pmIL-12/PPC复合体受到良好耐受，因为未观察到明显的不利效果。以质粒剂量15μg单次注射的pmIL-12/PPC复合体在动物存活方面产生显著增强(图8)。
实施例5
通过肿瘤内施用pIL-12/PPC复合体治疗头颈癌
检验局部施用pIL-12/PPC复合体对皮下植入的鳞状细胞(SCCVII)癌生长的影响。将100μl中的4×105个鳞状癌细胞在雌性CH3小鼠(6-9周龄，17-22克)的右侧腹部皮下植入。mIL-12质粒与PPC以11∶1N∶P比率复合并在肿瘤植入后约11日开始以50μl注射体积内的25μg DNA剂量局部施用至肿瘤，每周一次持续4周。使用治疗组的12小鼠并使用卡尺量具每周两次监测肿瘤生长。如图9中所示，肿瘤内施用pmIL-12/PPC复合体产生部分的但显著的肿瘤生长抑制。
实施例6
pIL-12/PPC加紫杉醇联合疗法用于治疗腹膜弥散性卵巢肿瘤
腹膜内IL-12基因疗法与紫杉醇化学疗法联合以增强对小鼠中弥散性卵巢肿瘤的治疗反应。小鼠以500μl体积内的5×106个ID8细胞作腹膜内注射。当肿瘤负荷(小鼠重量)达到约20克(注射细胞后～21日)时，治疗开始。小鼠于500μl体积内的以11∶1N∶P比率与PPC复合的25μgpmIL-12作腹膜内注射。基因疗法在七日后重复，形成每个研究总共两次注射(第1日、第8日)。紫杉醇
Figure GSB00000579017800211
以8mg/kg剂量在注射体积250μl中通过静脉内注射施用仅一次(第0日)。对于联合疗法，基因疗法和化学疗法治疗均如上所述给予。动物定期称重以评估基因疗法对肿瘤负荷的影响。仅腹膜内注射pmIL-12/PPC复合体导致腹膜肿瘤负荷的显著减少。pmIL-12/PPC复合体对肿瘤负荷的抑制略高于紫杉醇对肿瘤负荷的抑制。IL-12基因疗法加至紫杉醇导致紫杉醇对肿瘤负荷作用和存活的改善(图10)。
实施例7
pIL-12/PPC加吉西他滨的联合疗法用于治疗腹膜弥散性卵巢癌
评估了IL-12基因疗法与吉西他滨
Figure GSB00000579017800212
联合的功效。吉西他滨属于一组通用的称作抗代谢剂的化学疗法药物。吉西他滨用于治疗胰癌、乳腺癌(与紫杉醇一起)和肺癌(与顺铂一起)，并且目前正在临床评估抗卵巢癌的用途。对于本项研究，小鼠(C57BL/6)以500μl体积内的2.5×106个ID8细胞作腹膜内注射以诱导弥散性肿瘤形成。在肿瘤植入14日后，吉西他滨以250μl体积内的150mg/kg剂量腹膜内施用。治疗每周重复，总共四次治疗。从肿瘤植入17日后开始，所选择的小鼠组于500μl体积内的以11∶1N∶P比率与PPC复合的25μg IL-12质粒作腹膜内注射。质粒施用每周重复，总共四次治疗。与两种单一疗法的任一疗法相比，IL-12基因疗法与吉西他滨化学疗法的联合疗法显著地改善生存(图11)。
实施例8
pIL-12/PPC加卡铂/紫杉醇联合疗法用于治疗腹膜弥散性卵巢癌
用于卵巢癌的一线化学疗法一直是铂剂(卡铂、顺铂)和紫杉醇。因此，我们有兴趣评估与卡铂/紫杉醇化学疗法方案联合的IL-12基因疗法的用途。小鼠(C57BL/6)以500μl体积内的2.5×106个ID8细胞作腹膜内注射。化学疗法治疗在肿瘤植入15日后开始。卡铂施用是250μl中的40mg/kg(高剂量)或以250μl中的15mg/kg(低剂量)腹膜内施用并且紫杉醇
Figure GSB00000579017800222
以250μl中的8mg/kg(高剂量)给予或以250μl中的3mg/kg(低剂量)腹膜内给予。卡铂每周给予一次共4次治疗，并紫杉醇每2周给予1次共2次治疗。当相同日给予卡铂和紫杉醇时，首先施用紫杉醇并且此后2小时施用卡铂。从肿瘤植入18日后开始，所选组中的小鼠于500μl体积内的以11∶1N∶P比率与PPC复合的25μg IL-12质粒作腹膜内治疗。质粒施用每周重复共四次治疗。在治疗方案结束后，监测动物的存活。结果显示IL-12基因疗法和低剂量卡铂/紫杉醇化学疗法均产生类似的存活结果(图12)。相反，当低剂量化学疗法与IL-12基因疗法联合时，功效提高到与高剂量化学疗法治疗方案几乎相同的水平。能够使用与低剂量化学疗法联合的IL-12基因疗法以在维持治疗功效同时使用较低的化学疗法剂量使毒性最小化，这是有利的。这将有效地允许患者在化学疗法治疗方案上维持延伸的时间段，为更明显加强的治疗反应提供机会。
实施例9
pIL-12/PPC加环磷酰胺联合疗法用于治疗头和颈癌
联合肿瘤内IL-12基因疗法与环磷酰胺
Figure GSB00000579017800223
化学疗法以在头和颈癌内增强治疗反应。100μl中的4×105个鳞状癌细胞(SCCVII)在雌性CH3小鼠(6-9周龄，17-22克)右腹侧皮下植入。在环磷酰胺治疗前五日(肿瘤植入后约11日)，将mIL-12质粒以11∶1N∶P比率与PPC复合并以50μl注射体积中的25μg DNA剂量局部施用至肿瘤，每周1次，持续四周。环磷酰胺疗法以125μl注射体积中的200mg/kg剂量单独地或与pIL-12基因疗法联合作静脉内施用。环磷酰胺疗法14日后重复，形成每项研究总共2次注射。对于联合疗法，基因疗法和化学疗法治疗均如上所述给予。使用治疗组的12只小鼠并使用卡尺量具每周两次监测肿瘤生长。如图13中所示，单独地肿瘤内施用pmIL-12/PPC复合体或静脉内注射环磷酰胺仅产生部分的肿瘤生长抑制，而它们的联合则产生完全抑制。与单独用化学疗法治疗的动物对照(10％)，存在用联合疗法治疗的以更高百分比完全排斥肿瘤的动物(55％)。
实施例10
通过肿瘤内pIL-12/PPC和BCNU联合疗法治疗脑癌
局部递送单独的或与BCNU
Figure GSB00000579017800231
联合的pmIL-12/PPC复合体的效果在小鼠神经胶质瘤模型中检验。
Figure GSB00000579017800232
糯米纸囊剂是亚硝基脲家族的化学治疗剂卡莫司汀或BCNU的聚合物制剂。通过颅内注射1×105个GL261神经胶质瘤细胞将肿瘤植入小鼠大脑皮层，同时共注射pmIL-12/PPC复合体。在肿瘤植入5日后，含有10％BCNU的
Figure GSB00000579017800233
在顶骨内板下植入。监视动物的任何神经毒性征兆并根据需要进行尸检，以证实死亡原因是颅内肿瘤。存活使用Kaplan-Meier存活分析作图。单次颅内注射质粒剂量范围为2.5-30μg的pmIL-12/PPC复合体受到良好耐受，因为未观察到明显的不利效果。单次注射1.5μg质粒剂量的pmIL-12/PPC复合体未增强存活率。然而，该次优剂量pmIL-12/PPC与BCNU的联合显著地增强存活(图14)。源于联合疗法的存活增强在此模型中高于历史上单独以BCNU所达到的存活增强(数据未显示)。
实施例11
比较IL-12/PPC加低剂量卡铂/紫杉醇联合疗法与高剂量卡铂/紫杉醇联合疗法的毒性
本申请人先前已经证实IL-12/PPC与低剂量卡铂(15mg/kg)和紫杉醇(3mg/kg)疗法的联合产生类似于高剂量卡铂(40mg/kg)和紫杉醇(8mg/kg)化学疗法的抗癌功效(实施例8，图12)。在本实施例中，检验IL-12/PPC加低剂量联合化学疗法的毒性是否比高剂量化学疗法低。与先前实施例中所用的仅一次治疗循环相比，以三次治疗循环将IL-12/PPC+低剂量化学疗法或高剂量化学疗法施与携带腹膜弥散性卵巢肿瘤的小鼠。将如此的动物死亡视为治疗相关的死亡，其为在达到40克体重界限(因疾病进展处死动物的标准)前出现的动物死亡并且在尸体剖检中未显现明显肿瘤负荷。小鼠(C57BL/6)以500μl体积内的2.5×106个ID8细胞作腹膜内注射。化学疗法治疗在肿瘤植入15日后开始。卡铂施用是在250μl中的40mg/kg(高剂量)或在250μl中的15mg/kg(低剂量)并且紫杉醇
Figure GSB00000579017800242
施用是在250μl中的8mg/kg(高剂量)或以250μl中的3mg/kg(低剂量)作腹膜内施用。卡铂每周给予一次共4次治疗，并且紫杉醇每2周给予1次共2次治疗。在治疗日，首先施用紫杉醇并且此后2小时施用卡铂。从肿瘤植入18日后开始，所选组中的小鼠于500μl体积内以11∶1N∶P比率与PPC复合的100μg IL-12质粒作腹膜内治疗。质粒施用每周重复共四次治疗。整个治疗循环重复三次(共12周)，并且监测动物的存活。如图15中所示，与IL-12/PPC+低剂量化学疗法组中、单纯的低剂量化学疗法组或IL-12/PPC治疗组中的0％治疗相关性死亡相比，高剂量化学疗法组的30％死于治疗相关性毒性(即在达到40克前)。这些结果表明与高剂量化学疗法方案比较，IL-12/PPC与低剂量化学疗法的联合产生相对较少的治疗相关性死亡，但产生相似的抗癌功效(图12)。
应当理解以上所述实施方案仅说明本发明的应用原理。可以衍生众多的修改和替代性实施方案而不脱离本发明的精神和范围并且随后的权利要求书意图覆盖此类修改和调整。因此，尽管本发明已经在附图中得到展示并结合目前认为是最实用和优选的本发明实施方案如上得以具体而详细地描述，对于本领域一般技术人员而言显而易见可以进行众多修改而不脱离本发明地原理和概念。

Claims (16)

1.用于治疗癌症或过度增生性疾病的药物组合物，其包含基于质粒的基因表达系统和基因递送聚合物，其中所述基因递送聚合物包括与脂类和聚乙二醇共价连接的聚氮丙啶主链，且其中所述药物组合物不含化学治疗药。
2.权利要求1所述的药物组合物，其中所述基于质粒的基因表达系统是编码选自如下的蛋白质的DNA质粒：白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-7、白细胞介素-12、白细胞介素-15、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、抗血管生成剂、胸苷激酶、p53、IP10、p16、TNF-α、Fas-配体、肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原或其任意组合。
3.权利要求1所述的药物组合物，其中所述基于质粒的基因表达系统是编码白细胞介素-12的DNA质粒。
4.权利要求1所述的药物组合物，其中所述基于质粒的基因表达系统是编码多于一种蛋白质的单种DNA质粒，所述的多于一种蛋白质选自白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-7、白细胞介素-12、白细胞介素-15、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、抗血管生成剂、胸苷激酶、p53、IP10、p16、TNF-α、Fas-配体、肿瘤抗原、病毒抗原和细菌抗原的任意组合。
5.权利要求1所述的药物组合物，其中聚氮丙啶具有分子量100-500,000道尔顿的线型构型或分支构型。
6.权利要求1所述的药物组合物，其中脂类和聚乙二醇均通过共价键直接地连接至聚氮丙啶主链。
7.权利要求1所述的药物组合物，其中脂类通过聚乙二醇间隔区连接至聚氮丙啶主链。
8.权利要求1所述的药物组合物，其中聚乙二醇具有50至20,000道尔顿之间的分子量。
9.权利要求1所述的药物组合物，其中脂类是胆固醇、胆固醇衍生物、C12至C18脂肪酸或脂肪酸衍生物。
10.权利要求1所述的药物组合物，其中聚乙二醇与聚氮丙啶的摩尔比在0.1∶1至500∶1的范围内。
11.权利要求1所述的药物组合物，其中脂类与聚氮丙啶的摩尔比在0.1∶1至500∶1的范围内。
12.权利要求1所述的药物组合物，其中聚氮丙啶还包含靶向部分，其中靶向部分直接连接至聚氮丙啶主链或通过聚乙二醇连接体连接。
13.权利要求12所述的药物组合物，其中靶向部分选自转铁蛋白、脱唾液酸糖蛋白、抗体、抗体片段、低密度脂蛋白、白细胞介素、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、干细胞因子、促红细胞生成素、表皮生长因子(EGF)、胰岛素、脱唾液酸血清类黏蛋白、甘露糖-6-磷酸、甘露糖、Lewisx和唾液酰Lewisx、N-乙酰基乳糖胺、叶酸、半乳糖、乳糖和凝血调节蛋白、融合剂如多粘菌素B和血凝素HA2、抗溶酶体剂、核定位信号(NLS)和其任意组合。
14.权利要求12所述的药物组合物，其中基因递送聚合物与靶向部分的摩尔比在1∶0.1至1∶100的范围内。
15.权利要求1所述的药物组合物，其中所述基于质粒的基因表达系统与所述基因递送聚合物以基因递送聚合物中的氮摩尔对DNA中的磷酸摩尔为0.1∶100至100∶1的摩尔比复合。
16.权利要求12所述的药物组合物，其中所述基于质粒的基因表达系统与所述基因递送聚合物以基因递送聚合物中的氮摩尔对DNA中的磷酸摩尔为0.1∶100至100∶1的摩尔比复合。
CN2005800475870A 2004-12-09 2005-11-17 联合免疫基因疗法和化学疗法用于治疗癌症和过度增生性疾病 Active CN101111154B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US63504204P 2004-12-09 2004-12-09
US60/635,042 2004-12-09
US11/261,931 US7964571B2 (en) 2004-12-09 2005-10-28 Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases
US11/261,931 2005-10-28
PCT/US2005/041935 WO2006062723A2 (en) 2004-12-09 2005-11-17 Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101111154A CN101111154A (zh) 2008-01-23
CN101111154B true CN101111154B (zh) 2013-03-27

Family

ID=36578384

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2005800475870A Active CN101111154B (zh) 2004-12-09 2005-11-17 联合免疫基因疗法和化学疗法用于治疗癌症和过度增生性疾病

Country Status (10)

Country Link
US (3) US7964571B2 (zh)
EP (2) EP2444498A1 (zh)
JP (3) JP5704788B2 (zh)
CN (1) CN101111154B (zh)
AT (1) ATE540121T1 (zh)
AU (1) AU2005314468B2 (zh)
CA (1) CA2590160C (zh)
ES (1) ES2380107T3 (zh)
HK (1) HK1117345A1 (zh)
WO (1) WO2006062723A2 (zh)

Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8062891B2 (en) 2003-10-24 2011-11-22 Gencia Corporation Nonviral vectors for delivering polynucleotides to plants
EP1687017B1 (en) 2003-10-24 2013-03-06 Gencia Corporation Methods and compositions for delivering polynucleotides
US20090123468A1 (en) 2003-10-24 2009-05-14 Gencia Corporation Transducible polypeptides for modifying metabolism
US8133733B2 (en) 2003-10-24 2012-03-13 Gencia Corporation Nonviral vectors for delivering polynucleotides to target tissues
US8507277B2 (en) 2003-10-24 2013-08-13 Gencia Corporation Nonviral vectors for delivering polynucleotides
US7964571B2 (en) 2004-12-09 2011-06-21 Egen, Inc. Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases
US20120269886A1 (en) 2004-12-22 2012-10-25 Nitto Denko Corporation Therapeutic agent for pulmonary fibrosis
SI2730277T1 (sl) 2004-12-22 2020-07-31 Nitto Denko Corporation Nosilec zdravila in komplet za nosilec zdravila za zaviranje fibroze
US9572886B2 (en) 2005-12-22 2017-02-21 Nitto Denko Corporation Agent for treating myelofibrosis
DK2121048T3 (en) 2007-02-19 2015-11-23 Marinepolymer Tech Inc Hemostatic compositions and therapeutic regimens
TWI407971B (zh) 2007-03-30 2013-09-11 Nitto Denko Corp Cancer cells and tumor-related fibroblasts
WO2008137066A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-13 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Use of compacted nucleic acid nanoparticles in non-viral treatments of ocular diseases
US20080312174A1 (en) * 2007-06-05 2008-12-18 Nitto Denko Corporation Water soluble crosslinked polymers
US9144546B2 (en) 2007-08-06 2015-09-29 Clsn Laboratories, Inc. Nucleic acid-lipopolymer compositions
JP2010539245A (ja) 2007-09-14 2010-12-16 日東電工株式会社 薬物担体
JP5279235B2 (ja) * 2007-11-05 2013-09-04 国立大学法人 岡山大学 抗癌剤耐性癌において抗癌剤増強作用を有する癌細胞死誘導剤
WO2010017328A2 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Rgo Biosciences Llc Cyclodextrin conjugates
CA2759098A1 (en) * 2009-04-14 2010-10-21 Smith Holdings, Llc Methods and compositions for the treatment of medical conditions involving cellular programming
WO2011119853A1 (en) * 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA3162352A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Modernatx, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
CN102784398B (zh) * 2011-05-16 2014-06-18 南京大学 内皮抑素作为递送系统和化学合成的rna干扰分子组成的组合物及应用
WO2012155328A1 (zh) * 2011-05-16 2012-11-22 南京大学 包含内皮抑素和rna干扰分子的组合物及其应用
US9693957B2 (en) 2011-07-08 2017-07-04 The University Of North Carolina At Chapel Hill Metal bisphosphonate nanoparticles for anti-cancer therapy and imaging and for treating bone disorders
JP5904483B2 (ja) * 2011-09-06 2016-04-13 国立大学法人 長崎大学 研磨剤を含有する核酸導入剤
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9428535B2 (en) 2011-10-03 2016-08-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
AU2013243946A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of membrane proteins
WO2014063128A1 (en) * 2012-10-20 2014-04-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer cell trap
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
ITMI20122270A1 (it) * 2012-12-31 2014-07-01 Giovanni Mogna Terapia di supporto ai trattamenti di chemioterapia per i tumori, per la sindrome da immunodeficienza acquisita e per le leucemie.
JP2016504050A (ja) 2013-01-17 2016-02-12 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 細胞表現型の改変のためのシグナルセンサーポリヌクレオチド
EP2968391A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US9784730B2 (en) 2013-03-21 2017-10-10 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Nanoparticle for targeting brain tumors and delivery of O6-benzylguanine
PL3019619T3 (pl) 2013-07-11 2022-01-10 Modernatx, Inc. Kompozycje zawierające syntetyczne polinkleotydy kodujące białka powiązane z crispr i syntetyczne sgrna oraz sposoby ich stosowania
US20160194625A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
US20160194368A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
CA2926218A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
CN105705143A (zh) * 2013-11-08 2016-06-22 达娜-法勃肿瘤研究所公司 用于体内试剂递送的核酸纳米结构
GB201322626D0 (en) * 2013-12-19 2014-02-05 Immutep S A Combined preparations for the treatment of cancer
CA2955250A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
US10806694B2 (en) 2014-10-14 2020-10-20 The University Of Chicago Nanoparticles for photodynamic therapy, X-ray induced photodynamic therapy, radiotherapy, radiodynamic therapy, chemotherapy, immunotherapy, and any combination thereof
US10206871B2 (en) 2014-10-14 2019-02-19 The University Of Chicago Nanoparticles for photodynamic therapy, X-ray induced photodynamic therapy, radiotherapy, chemotherapy, immunotherapy, and any combination thereof
DK3326641T3 (da) 2015-04-22 2019-09-30 Curevac Ag Rna-holdig sammensætning til behandling af tumorsygdomme
US11414694B2 (en) 2016-03-11 2022-08-16 Children's Medical Center Corporation Nucleic acid nanoswitch catenanes
CN109310702A (zh) 2016-05-20 2019-02-05 芝加哥大学 用于化学疗法、靶向疗法、光动力疗法、免疫疗法和它们的任何组合的纳米颗粒
CN109561691A (zh) 2016-06-07 2019-04-02 太平洋心肺血研究所 用于治疗癌症的组合物和方法
EP3468581A1 (en) 2016-06-13 2019-04-17 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
WO2018026880A2 (en) 2016-08-02 2018-02-08 President And Fellows Of Harvard College Crisscross cooperative self-assembly
US11560600B2 (en) 2016-09-08 2023-01-24 North Carolina State University Methods for diagnosis of Pseudoperonospora cubensis infection and selection of plant resistance genes to the same
EP3605625B1 (en) * 2017-03-31 2021-04-28 FUJIFILM Corporation Piezoelectric body membrane, piezoelectric element, and piezoelectric element manufacturing method
WO2018232502A1 (en) * 2017-06-20 2018-12-27 Rjh Biosciences Inc. TRANSFECTION REAGENTS FOR NUCLEIC ACID ADMINISTRATION
CN111194232B (zh) 2017-08-02 2023-01-31 芝加哥大学 纳米级金属有机层和金属有机纳米片
CN111432836A (zh) 2017-09-05 2020-07-17 转矩医疗股份有限公司 治疗性蛋白质组合物及其制备和使用方法
TW202122084A (zh) * 2019-10-02 2021-06-16 美商卡凡恩公司 用於治療神經毒性之方法及材料
EP4326328A1 (en) * 2021-04-20 2024-02-28 Purdue Research Foundation Immunofunctional carrier, methods of uses, and composition matters as an antitumor immunotherapy
WO2024054855A1 (en) * 2022-09-07 2024-03-14 Imunon, Inc. Il-12 gene therapy and anti-vegf combination for treating cancer

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002022174A1 (en) * 2000-09-14 2002-03-21 Expression Genetics, Inc. A novel cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent
WO2003008555A2 (en) * 2001-07-19 2003-01-30 Expression Genetics, Inc. Cellular targeting poly(ethylene glycol)-grafted polymeric gene carrier

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4121982A (en) 1978-02-03 1978-10-24 American Chemical & Refining Company Incorporated Gold alloy plating bath and method
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
JP3078107B2 (ja) 1992-04-07 2000-08-21 日本原子力研究所 放射性廃棄物の減容処理方法
JP3347381B2 (ja) 1993-01-27 2002-11-20 協和醗酵工業株式会社 ペットフード
JP2950520B2 (ja) 1993-04-02 1999-09-20 アンティキャンサー インコーポレーテド 毛胞に有益な配合物を送達する方法
US5393335A (en) 1993-04-23 1995-02-28 Ppg Industries, Inc. Starch-oil sizing for glass fibers
AU4690596A (en) 1994-12-30 1996-07-24 Chiron Viagene, Inc. Nucleic acid condensing agents with reduced immunogenicity
FR2730637B1 (fr) 1995-02-17 1997-03-28 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations
US6410046B1 (en) 1996-11-19 2002-06-25 Intrabrain International Nv Administering pharmaceuticals to the mammalian central nervous system
US5955415A (en) 1997-08-04 1999-09-21 Lever Brothers Company, Division Of Conopco, Inc. Detergent compositions containing polyethyleneimines for enhanced peroxygen bleach stability
DE69939740D1 (de) 1998-05-20 2008-11-27 Expression Genetics Inc Laktose oder galaktose-polyethylen glykol-gepfropfte poly-l-lysin als genträger
CN1433478A (zh) 1999-12-30 2003-07-30 诺瓦提斯公司 用于基因治疗的新的胶体合成载体
CA2409932A1 (en) * 2000-06-01 2001-12-06 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Combination of a mutant herpes virus and a chemotherapeutic agent for the treatment of cancer
US20040142474A1 (en) * 2000-09-14 2004-07-22 Expression Genetics, Inc. Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent
EP1326645A1 (de) 2000-10-09 2003-07-16 Bayer Aktiengesellschaft Komplexe zur einführung von nukleinsäuren in zellen
JP2006517790A (ja) 2003-01-09 2006-08-03 インヴィトロジェン コーポレーション ポリペプチド−核酸複合体の細胞の送達および活性化
US8057821B2 (en) 2004-11-03 2011-11-15 Egen, Inc. Biodegradable cross-linked cationic multi-block copolymers for gene delivery and methods of making thereof
US7964571B2 (en) 2004-12-09 2011-06-21 Egen, Inc. Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases
US7740880B2 (en) 2006-03-03 2010-06-22 University Of Utah Research Foundation Polymeric carrier for delivery of small interfering RNA

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002022174A1 (en) * 2000-09-14 2002-03-21 Expression Genetics, Inc. A novel cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent
WO2003008555A2 (en) * 2001-07-19 2003-01-30 Expression Genetics, Inc. Cellular targeting poly(ethylene glycol)-grafted polymeric gene carrier

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006062723A2 (en) 2006-06-15
ES2380107T3 (es) 2012-05-08
JP2014169305A (ja) 2014-09-18
EP1827101A4 (en) 2009-04-29
CN101111154A (zh) 2008-01-23
JP2008523061A (ja) 2008-07-03
CA2590160C (en) 2018-05-22
US20140186375A1 (en) 2014-07-03
EP1827101B1 (en) 2012-01-04
US8623837B2 (en) 2014-01-07
EP2444498A1 (en) 2012-04-25
CA2590160A1 (en) 2006-06-15
WO2006062723A3 (en) 2006-08-17
AU2005314468A1 (en) 2006-06-15
HK1117345A1 (en) 2009-01-16
ATE540121T1 (de) 2012-01-15
US20060127482A1 (en) 2006-06-15
JP5704788B2 (ja) 2015-04-22
US20110218231A1 (en) 2011-09-08
JP2012188430A (ja) 2012-10-04
US7964571B2 (en) 2011-06-21
EP1827101A2 (en) 2007-09-05
AU2005314468B2 (en) 2011-03-17
US9468687B2 (en) 2016-10-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101111154B (zh) 联合免疫基因疗法和化学疗法用于治疗癌症和过度增生性疾病
Irvine et al. Enhancing cancer immunotherapy with nanomedicine
Riley et al. Delivery technologies for cancer immunotherapy
Egilmez et al. In situ tumor vaccination with interleukin-12-encapsulated biodegradable microspheres: induction of tumor regression and potent antitumor immunity
Velpurisiva et al. Nanoparticle design strategies for effective cancer immunotherapy
Xie et al. Immunoengineering with biomaterials for enhanced cancer immunotherapy
WO2021104088A1 (zh) 一种纳米颗粒载药系统及其制备方法和应用
JP2017523781A (ja) アンタゴニストｉｃ ｐｄ−１アプタマー及びその癌治療関連用途への応用
Densmore Advances in noninvasive pulmonary gene therapy
Ohe et al. Combination effect of vaccination with IL2 and IL4 cDNA transfected cells on the induction of a therapeutic immune response against Lewis lung carcinoma cells
CN101426529A (zh) Peg-聚（原酸酯）接枝共聚物和药物组合物
WO1998016246A9 (en) Cytokine enhanced immunotherapy for brain tumors
WO1998016246A1 (en) Cytokine enhanced immunotherapy for brain tumors
Egilmez et al. Controlled-release particulate cytokine adjuvants for cancer therapy
CN102038958A (zh) 一种纳米粒子组合物及其应用
JP6702938B2 (ja) アンタゴニストｉｃ ｃｔｌａ−４アプタマー及びその免疫活性増強への応用
US20220241321A1 (en) Dimeric cpg oligonucleotides for use in modulating immune responses
Shaha et al. Locoregional drug delivery for cancer therapy: Preclinical progress and clinical translation
CN117695242A (zh) 环二核苷酸自组装纳米粒子及其制备和应用
Weeratna et al. Potential use of CpG ODN for cancer immunotherapy
Hsu et al. Interleukin-2 secretion by KHT sarcoma cells leads to loss of their vaccine potential

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1117345

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1117345

Country of ref document: HK