CN109561691A - 用于治疗癌症的组合物和方法 - Google Patents

用于治疗癌症的组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109561691A
CN109561691A CN201780049088.8A CN201780049088A CN109561691A CN 109561691 A CN109561691 A CN 109561691A CN 201780049088 A CN201780049088 A CN 201780049088A CN 109561691 A CN109561691 A CN 109561691A
Authority
CN
China
Prior art keywords
interleukin
caspase
cell
stem cell
number embodiment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201780049088.8A
Other languages
English (en)
Inventor
雷蒙德·王
罗伯特·卡梅伦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pacific Institute Of Cardiopulmonary Blood
Original Assignee
Pacific Institute Of Cardiopulmonary Blood
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pacific Institute Of Cardiopulmonary Blood filed Critical Pacific Institute Of Cardiopulmonary Blood
Publication of CN109561691A publication Critical patent/CN109561691A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/208—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4873—Cysteine endopeptidases (3.4.22), e.g. stem bromelain, papain, ficin, cathepsin H
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/22—Cysteine endopeptidases (3.4.22)
    • C12Y304/22062—Caspase-9 (3.4.22.62)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

癌症是涉及异常细胞生长的复杂的一组疾病，有侵入或扩散到身体其他部位的潜力。本文描述了用于治疗癌症的组合物和方法。

Description

用于治疗癌症的组合物和方法
交叉引用
本申请要求于2016年6月7日提交的第62/347,005号美国临时申请的权益，该美国临时申请通过引用以其全文并入本文。
序列表
本申请含有序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并通过引用以其全文并入于此。所述ASCII副本创建于2017年6月2日，命名为49537-701_601_SL.txt，且大小为21,199字节。
背景技术
癌症是涉及异常细胞生长的复杂的一组疾病，有侵入或扩散到身体其他部位的潜力。每年全球有数百万起新发癌症病例。癌症存在许多风险因素，包括肥胖、饮食不良、缺乏体力活动、吸烟、饮酒以及遗传和激素因素。癌症与缺乏正确信号的细胞生长和分裂、即使在给出相反信号的情况下的连续生长和分裂、避免程序性细胞死亡、无限次数的细胞分裂、促进血管构建以及组织侵入和转移形成相关。许多研究致力于改善对疾病的认识，并确定和创造新的治疗方法。
发明内容
在某些实施方案中，本文提供了包含至少一种遗传修饰的干细胞的组合物，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂。在一些实施方案中，所述干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘或人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂具有细胞因子活性。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括白介素。在一些实施方案中，所述白介素包括选自由白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35和白介素-36组成的列表的至少一种白介素。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述凋亡剂由外源信号诱导。在一些实施方案中，所述凋亡剂具有胱天蛋白酶活性。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶包括选自由胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13和胱天蛋白酶-14组成的列表的至少一种胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述组合物进一步包含用于将所述遗传修饰的干细胞施用于肿瘤切除部位的载体。在一些实施方案中，所述载体包括生物聚合物。
在某些实施方案中，本文提供了靶向肿瘤切除部位的癌症的方法，其包括：向肿瘤切除部位引入包含抗肿瘤剂和凋亡剂的组合物，其中所述抗肿瘤剂诱导免疫应答；以及施用外源信号以从所述肿瘤切除部位清除所述组合物。在一些实施方案中，所述组合物在肿瘤切除后立即施用。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、脑癌、膀胱癌、子宫内膜癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌、间皮瘤和黑素瘤中的至少一种。在一些实施方案中，所述癌症是间皮瘤。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂在干细胞中表达。在一些实施方案中，所述干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘或骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂具有细胞因子活性。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括白介素。在一些实施方案中，所述白介素包括选自由白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35和白介素-36组成的列表的至少一种白介素。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述凋亡剂由所述外源信号诱导。在一些实施方案中，所述凋亡剂具有胱天蛋白酶活性。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶包括选自由胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13和胱天蛋白酶-14组成的列表的至少一种胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，全身施用所述外源信号。在一些实施方案中，所述外源信号诱导所述凋亡剂的多聚化。
在某些实施方案中，本文提供了包含至少一种遗传修饰的干细胞的组合物，所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂。在一些实施方案中，所述干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子包括转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
在某些实施方案中，本文提供了诱导受试者的免疫系统靶向癌细胞的方法，其包括向所述受试者体内引入至少一种遗传修饰的干细胞，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂。在一些实施方案中，所述至少一种遗传修饰的干细胞通过注射引入所述受试者。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞进一步包括凋亡剂。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
在某些实施方案中，本文提供了向经历过肿瘤去除手术的受试者引入至少一种遗传修饰的干细胞的方法，所述干细胞包含编码抗肿瘤剂和凋亡剂的核酸。在一些实施方案中，所述癌症是间皮瘤。在一些实施方案中，所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。在一些实施方案中，所述至少一种遗传修饰的干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸是细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。在一些实施方案中，所述手术去除肿瘤。在一些实施方案中，所述手术是胸膜切除术或皮质剥除术。在一些实施方案中，所述至少一种遗传修饰的干细胞通过注射引入所述受试者。在一些实施方案中，所述至少一种遗传修饰的干细胞在手术前、与手术同时、在手术后1周、手术后2周、手术后1个月、手术后2个月、手术后3个月、手术后4个月、手术后5个月、手术后1年、手术后2年、手术后3年、手术后4年或手术后5年引入所述受试者。
在某些实施方案中，本文提供了靶向受试者中的癌细胞以减轻癌症症状的方法，其包括向所述受试者引入至少一种遗传修饰的干细胞，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂，并且其中所述至少一种遗传修饰的干细胞在肿瘤去除后引入。在一些实施方案中，所述癌症是间皮瘤。在一些实施方案中，所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。在一些实施方案中，手术去除肿瘤。在一些实施方案中，所述手术是胸膜切除术或皮质剥除术。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞在手术后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月或15个月通过注射引入。
在某些实施方案中，本文提供了靶向癌症的方法，其包括向有需要的受试者引入至少一种遗传修饰的干细胞，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂。在一些实施方案中，所述癌症是间皮瘤。在一些实施方案中，所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸是细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂转化到干细胞中。在一些实施方案中，所述干细胞是遗传修饰的干细胞。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
在某些实施方案中，本文提供了将至少一种干细胞转化为至少一种遗传修饰的干细胞的方法，其包括用抗肿瘤剂和凋亡剂转化所述干细胞。在一些实施方案中，所述干细胞用病毒转化。在一些实施方案中，所述病毒是腺病毒、慢病毒和腺伴随病毒中的至少一种。在一些实施方案中，所述至少一种遗传修饰的干细胞通过注射引入有需要的受试者。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
在某些实施方案中，本文提供了药剂盒，其包含：遗传修饰的干细胞群体，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂，其中所述遗传修饰的干细胞群体被等分成用于给药的相关药物剂量。在一些实施方案中，所述干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞群体是冷冻的。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞群体是自体的。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞群体是同种异体的。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞群体包含约500,000个细胞/kg至约1,000,000个细胞/kg。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
在某些实施方案中，本文提供了测定至少一种遗传修饰的干细胞在癌症治疗中的治疗潜力的方法，所述干细胞包含抗肿瘤剂和凋亡剂。在一些实施方案中，所述癌症是间皮瘤。在一些实施方案中，所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。在一些实施方案中，所述遗传修饰的干细胞在手术后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月或15个月通过注射引入。在一些实施方案中，所述治疗潜力通过与癌症相关的症状的减少或消除而测定。在一些实施方案中，所述与癌症相关的症状包括胸壁疼痛、胸腔积液、呼吸短促、疲劳、贫血、喘息、嘶哑、咳嗽、痰中带血、咳血、腹痛、腹水、腹部肿块、肠功能问题、体重减轻、静脉血块、血栓性静脉炎、弥散性血管内凝血、黄疸、低血糖、胸腔积液、肺栓塞和严重腹水中的至少一种。
在某些实施方案中，本文提供了通过施用至少一种遗传修饰的干细胞来抑制创伤愈合反应的方法，所述干细胞包含抗肿瘤剂和凋亡剂。在一些实施方案中，所述干细胞是人源干细胞。在一些实施方案中，所述人源干细胞是间充质干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人胎盘。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于人骨髓。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些实施方案中，所述细胞因子是白介素。在一些实施方案中，所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。在一些实施方案中，所述白介素包括白介素-12。在一些实施方案中，所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。在一些实施方案中，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述细胞因子是干扰素。在一些实施方案中，所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。在一些实施方案中，所述细胞因子是转化生长因子β。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂是病毒。在一些实施方案中，所述凋亡剂由核酸编码。在一些实施方案中，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。在一些实施方案中，所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。在一些实施方案中，所述核酸编码细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。在一些实施方案中，所述核酸编码黄素蛋白。在一些实施方案中，所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
附图说明
图1描绘了包含人IL-12和iCasp9基因的腺病毒载体表达盒(Ad.IL.12.iCasp9)。
图2A描绘了从组织中分离间充质干细胞(MSC)的第一示意图。
图2B描绘了从组织中分离间充质干细胞(MSC)的第二示意图。
图3A-图3D描绘了MSC的表型分析的流式细胞术图。
图4描绘了使用细胞分化试验对MSC的表型鉴定。
图5描绘了用Ad.IL.12.iCasp9转化的MSC产生不同细胞因子、趋化因子和其他分子的图。
图6描绘了用新鲜培养基、来自未修饰的MSC的条件培养基(未修饰的+CM)、来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基(腺病毒空壳+CM)和来自用Ad.IL.12.iCasp9转化的MSC的条件培养基(Ad.IL-12.iCasp9+CM)处理的CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。
图7描绘了在新鲜培养基中共培养、与未修饰的MSC共培养(未修饰的+活细胞)、与用腺病毒空壳转化的MSC共培养(腺病毒空壳+活细胞)和与用Ad.IL.12.iCasp9转化的MSC共培养(Ad.IL-12.iCasp9+活细胞)的CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。
图8描绘了用新鲜培养基、来自未修饰的MSC的条件培养基(未修饰的+CM)、来自用腺病毒空壳转染的MSC的条件培养基(腺病毒空壳+CM)和来自用Ad.IL.12.iCasp9转染的MSC的条件培养基(Ad.IL-12.iCasp9+CM)处理的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。
图9描绘了在新鲜培养基中共培养、与未修饰的MSC共培养(未修饰的+活细胞)、与用腺病毒空壳转染的MSC共培养(腺病毒空壳+活细胞)和与用Ad.IL.12.iCasp9转化的MSC共培养(Ad.IL-12.iCasp9+活细胞)的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。
图10描绘了与未转导的MSC相比，用病毒空壳(腺病毒模拟物(Ad.Mock))或Ad.IL-12.iCasp9(Ad.IL-12)转导的人胎盘来源的MSC产生人IL-12的图。Y轴是由细胞分泌的IL-12p70的摩尔数。
图11A-图11B描绘了用病毒空壳(腺病毒模拟物)或Ad.IL-12.iCasp9(Ad.IL-12)转导48小时的人胎盘来源的MSC中人IL-12p70表达的流式细胞术图。
图12描绘了用人胎盘来源的MSC处理的CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。
图13描绘了用人胎盘来源的MSC处理的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。
图14描绘了用人骨髓来源的MSC处理的CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。
图15描绘了用人骨髓来源的MSC处理的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。
具体实施方式
癌症是涉及异常细胞生长的复杂的一组疾病，有侵入或扩散到身体其他部位的潜力。针对癌症驱动物和途径的癌症疗法如放疗和化疗可能取得成功。然而，癌细胞适应这些疗法的能力导致患者的疾病进展。与手术、化疗或放疗不同，免疫疗法刺激免疫系统以识别并杀伤肿瘤细胞。癌细胞通常避免被免疫系统检测到。癌症免疫疗法指导患者的免疫系统表达癌细胞抗原，从而引发身体攻击癌细胞。
本文公开了诸如干细胞的细胞，其选择性地归巢(home)或迁移至损伤、局部缺血或创伤部位，并且被工程化为在该部位诱导先天性免疫应答。该免疫应答可以在引入部位处，例如在肿瘤切除部位处。干细胞还被工程化为在接收到信号或与分子接触时被诱导，以激活触发细胞死亡的凋亡或“自杀”分子，从而在期望时控制细胞增殖或以其他方式清除细胞。
本文进一步描述了包含遗传修饰的干细胞的涉及癌症疗法的方法和组合物。本文考虑的遗传修饰的干细胞通常包含至少一种对宿主细胞具有免疫刺激性的抗肿瘤剂，以及至少一种允许调节遗传修饰的干细胞功能的调节剂，该调节例如通过经由信号分子诱导细胞死亡。
将如本文所述的用至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂转化的遗传修饰的干细胞施用于有需要的受试者。在施用于有需要的受试者后，遗传修饰的干细胞通常归巢至肿瘤部位并优先迁移至组织损伤部位。在一些情况下，抗肿瘤剂增强T细胞活化，从而触发受试者的免疫系统以清除癌细胞。如本文所述的癌症疗法通常促进创伤清除并改变创伤部位，以产生适合免疫应答而不是创伤愈合反应的环境。替代地或组合地，如本文所述的癌症疗法抑制创伤部位处的增殖。
另外，将用至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂转化的遗传修饰的干细胞与手术联合施用于有需要的受试者。手术导致肿瘤的去除，但难以去除或难以检测的癌细胞通常仍然存在。在一些情况下，手术无法去除癌前细胞。在一些情况下，剩余的癌细胞或癌前细胞增殖并促进肿瘤形成。如本文所述的遗传修饰的干细胞可以与手术联合用于治疗癌症。在一些情况下，在手术之前、期间或之后施用遗传修饰的干细胞。遗传修饰的干细胞可以在肿瘤部位施用或全身施用。遗传修饰的干细胞与手术的联合施用可导致不能通过手术去除的癌细胞或癌前细胞的清除。
在一些情况下，包括用至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂转化的遗传修饰的干细胞的癌症疗法与化疗或放疗联合施用于有需要的受试者。在一些情况下，化疗或放疗促进癌细胞的回归(return)。例如，放疗促进癌细胞的转移行为，诸如促进增殖。如本文所述，遗传修饰的干细胞的施用可导致细胞增殖和细胞生长的抑制以及免疫应答的促进。在一些情况下，在化疗或放疗之前、期间或之后施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，遗传修饰的干细胞与化疗或放疗的联合施用导致不能通过化疗或放疗去除的癌细胞的清除。
在一些情况下，在向有需要的受试者施用用至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂转化的遗传修饰的干细胞后，监测癌症进展。监测癌症进展的示例性方法是测量循环血细胞、PET扫描所得的肿瘤大小或创伤愈合中的至少一种。
为了防止潜在的不良反应或者一旦肿瘤大小减小，通常将外源信号施用于有需要的受试者。本文提供了外源信号的施用以调节遗传修饰的干细胞的功能。示例性的外源信号是小分子。通常，外源信号导致遗传修饰的干细胞中的细胞死亡。
方法和组合物
本文描述了用于将肿瘤抑制信号如先天免疫信号递送至特定部位如肿瘤部位的方法和组合物。在一些情况下，该递送包括将编码该信号的一个或多个基因转化到迁移至特定部位如肿瘤部位或肿瘤切除部位的一个或多个细胞中。一旦处于肿瘤部位，如本文所述的方法和组合物可包括刺激免疫应答。在一些情况下，该免疫应答导致靶向和杀伤癌细胞。在刺激免疫应答后，如本文所述的方法和组合物可进一步包括调控或调节生物学功能，如细胞死亡。
本文还描述了涉及表达至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂的遗传修饰的干细胞的方法和组合物。如本文所述的方法和组合物促进创伤清除并改变创伤部位，以产生适合免疫应答而不是创伤愈合反应的环境。已显示促进创伤愈合的机制促进恶性细胞的生长和增殖。通过促进免疫应答而不是创伤愈合反应，受试者的免疫系统被刺激以靶向并杀伤癌细胞，而不是促进其恢复。
本文提供了用于刺激免疫应答的方法和组合物。在一些情况下，刺激免疫应答导致靶向并杀伤癌细胞。用于刺激免疫应答的示例性抗肿瘤剂是细胞因子。在一些情况下，该抗肿瘤剂如细胞因子是免疫刺激性的。在一些情况下，该抗肿瘤剂触发T细胞应答。
细胞因子的使用通常通过刺激免疫应答来提高不同癌症治疗的功效。例如，细胞因子的使用可提高免疫疗法、化疗、放疗或手术的功效。细胞因子是协调免疫系统的细胞之间的通信的分子信使。细胞因子信号传导参与宿主对感染、免疫应答、炎症、创伤、脓毒症、癌症和繁殖的反应。细胞因子由多种细胞产生，包括免疫细胞(如巨噬细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、肥大细胞)、内皮细胞、成纤维细胞和各种基质细胞。细胞因子直接刺激肿瘤部位处的免疫效应细胞和基质细胞，并通过细胞毒性效应细胞增强肿瘤细胞识别。作为非限制性实例，细胞因子包括趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子和肿瘤坏死因子。
本文提供了使用细胞因子刺激免疫应答的方法和组合物。如本文所述的细胞因子是免疫刺激性的。细胞因子包括集落刺激因子(CSF)、转化生长因子(例如，转化生长因子-β)、肿瘤坏死因子(例如，肿瘤坏死因子α)、干扰素和白介素中的至少一种。在一些情况下，抗肿瘤剂是CSF1、CSF2和CSF3中的至少一种。在一些情况下，抗肿瘤剂是p53。在一些情况下，抗肿瘤剂是干扰素，诸如干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω和干扰素-γ。示例性的白介素为白介素-1(IL-1)、白介素-1α(IL-1α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-2(IL-2)、白介素-3(IL-3)、白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-6(IL-6)、白介素-7(IL-7)、白介素-8(IL-8)、白介素-9(IL-9)、白介素-10(IL-10)、白介素-11(IL-11)、白介素-12(IL-12)、白介素-13(IL-13)、白介素-14(IL-14)、白介素-15(IL-15)、白介素-16(IL-16)、白介素-17(IL-17)、白介素-18(IL-18)、白介素-19(IL-19)、白介素-20(IL-20)、白介素-21(IL-21)、白介素-22(IL-22)、白介素-23(IL-23)、白介素-24(IL-24)、白介素-25(IL-25)、白介素-26(IL-26)、白介素-27(IL-27)、白介素-28(IL-28)、白介素-29(IL-29)、白介素-30(IL-30)、白介素-31(IL-31)、白介素-32(IL-32)、白介素-33(IL-33)、白介素-34(IL-34)、白介素-35(IL-35)或白介素-36(IL-36)在一些情况下，细胞因子包括一种或更多种细胞因子或其部分的融合物。例如，细胞因子包括一种或更多种白介素的融合物。
用于本文所述的方法和组合物的示例性白介素是IL-12。IL-12由四个α螺旋的束组成，形成蛋白质IL-12A(p35)和IL-12B(p40)的异二聚体结构。在蛋白质合成后形成活性异二聚体(称为p70)和p40同型二聚体。在一些情况下，IL-12包括白介素或其部分的融合物。在一些情况下，IL-12包括IL-12A与IL-12B的融合物。在一些情况下，IL-12A与IL-12B的摩尔比为至少或约0.25:1、0.5:1、0.75:1、1:1、1:1.25、1:1.5、1:1.75、1:2、1:3、1:4或大于1:4。在一些情况下，IL-12A与IL-12B的摩尔比为至少或约1:1。
细胞因子可用于治疗癌症。在一些情况下，抗肿瘤剂如细胞因子作为重组蛋白、含有抗肿瘤剂的疫苗、编码抗肿瘤剂的载体以及抗体中的至少一种施用。尽管这类施用抗肿瘤剂如细胞因子的方法和组合物诱导应答，但它们在靶向癌症部位方面可能无法令人满意。
本文提供了用于在特定部位刺激免疫应答的方法和组合物。例如，在肿瘤部位或肿瘤切除部位刺激免疫应答。在一些情况下，在创伤部位刺激免疫应答。在一些情况下，细胞或病原体能够归巢到特定部位并诱导免疫应答。可以归巢到特定部位的示例性细胞是干细胞，如MSC。
如本文所述的干细胞归巢到肿瘤部位并引发免疫应答。如本文所述的干细胞是非免疫原性的。本文提供了优先迁移到创伤和损伤部位的干细胞。
符合本申请的干细胞可以是胚胎干细胞、胎儿干细胞和成体干细胞中的至少一种。在一些情况下，干细胞是胚胎干细胞或胎儿干细胞。在一些情况下，干细胞是成体干细胞。干细胞可以是多潜能、多能或寡能干细胞中的至少一种。符合本申请的干细胞可以源自许多不同类型的组织，诸如但不限于骨髓、皮肤(例如，真皮、表皮)、头皮组织、肌肉、脂肪组织、外周血、包皮、骨骼肌、平滑肌等。在一些情况下，干细胞来源于新生儿组织，诸如但不限于脐带组织(例如，脐带、脐带血、脐带血管)、羊膜、胎盘或其他各种新生儿组织(例如，骨髓液、肌肉、脂肪组织、外周血、皮肤、骨骼肌等)。
在一些情况下，干细胞来源于新生哺乳动物细胞，诸如但不限于成纤维细胞、骨髓来源的单个核细胞、骨骼肌细胞、脂肪细胞、外周血单个核细胞、巨噬细胞、神经干细胞、肝细胞、角质形成细胞、口腔角质形成细胞、毛囊真皮细胞、胃上皮细胞、肺上皮细胞、滑膜细胞、肾细胞、皮肤上皮细胞或成骨细胞。有时，干细胞来源于成年哺乳动物细胞，诸如但不限于成纤维细胞、骨髓来源的单个核细胞、骨骼肌细胞、脂肪细胞、外周血单个核细胞、巨噬细胞、神经干细胞、肝细胞、角质形成细胞、口腔角质形成细胞、毛囊真皮细胞、胃上皮细胞、肺上皮细胞、滑膜细胞、肾细胞、皮肤上皮细胞或成骨细胞。
在一些情况下，干细胞是自体的，意指来源于受试者自身的细胞。或者，干细胞是同种异体的，意指来源于具有相似组织类型的另一个受试者。在一些情况下，干细胞适合于患者。在一些情况下，干细胞与局部组织相容。
在一些情况下，干细胞是非人的。非人动物的非限制性实例包括非人灵长类动物、家畜动物、家养宠物和实验室动物。示例性的非人干细胞是小鼠、大鼠、马、绵羊、灵长类动物(例如，黑猩猩、狒狒、大猩猩、猩猩、猴)、狗、猫、猪、驴、兔或任何其他非人动物。
间充质干细胞(MSC)是符合本公开内容的示例性干细胞。MSC由于其肿瘤归巢性质和选择性地迁移至损伤、局部缺血部位和肿瘤微环境的能力而充当治疗剂。肿瘤分泌炎性分子，诸如将MSC募集到肿瘤部位的趋化因子、细胞因子和生长因子。MSC已被证明向炎性分子归巢，该炎性分子例如是由肿瘤分泌的基质细胞衍生因子1-α和血管内皮生长因子。一旦处于肿瘤部位，MSC有时会植入肿瘤基质。实体瘤生长和侵袭产生类似于创伤愈合的环境，这也可诱导MSC迁移至创伤部位。
在一些情况下，从脑、肝、肾、肺、骨髓、肌肉、胸腺、胰腺、皮肤、脂肪组织、胎儿组织、脐带、脐带胶质和胎盘中的至少一种中分离符合本文公开内容的干细胞，诸如MSC或其他干细胞。在一些情况下，该MSC来源于胎盘。在一些情况下，该MSC来源于骨髓。或者，MSC来源于脂肪组织。在一些情况下，MSC来源于脐带血。MSC的示例性细胞表面标志物是CD13、CD29、CD49e、CD54、CD90，而不是CD14、CD31、CD34、CD45、CD49d或CD106。在一些情况下，骨髓来源的MSC分化为骨细胞和软骨细胞。
当干细胞如MSC迁移至癌细胞时，需要调节干细胞以使其执行其预期功能。干细胞如MSC是免疫抑制性的，因为它们具有分泌有免疫调节性质的可溶性介质(例如，IL-10、前列腺素E2)的能力。在一些情况下，干细胞的免疫抑制作用促进肿瘤进展。干细胞还通过响应于在组织损伤部位释放的生长因子和炎性分子而增殖，从而促进未分化的创伤生长。可以进一步修饰如本文所述的干细胞，以调节它们促进肿瘤进展和未分化的创伤生长的能力。
本文描述了用至少一种调节干细胞功能的药剂转化的干细胞。如本文所公开的，修饰干细胞以表达调节剂，使其易响应于外源信号接受调节。在一些情况下，外源信号是小分子、抗体、编码抗体的核酸、抗原结合片段、RNA干扰剂、肽、拟肽、合成配体和适体中的至少一种。在一些情况下，外源信号是热休克、低氧、营养缺乏、金属离子和类固醇中的至少一种。
受调节的示例性干细胞功能是细胞死亡、细胞生长、细胞增殖和细胞迁移。在一些情况下，调节剂调节细胞死亡。本文描述了可以开启和关闭的药剂。在一些情况下，一旦遗传修饰的干细胞靶向肿瘤部位并诱导免疫应答，则通过触发调节剂引起细胞死亡来消除遗传修饰的干细胞。
示例性的外源信号诱导二聚化和随后的细胞死亡。在一些情况下，药物结合域的嵌合蛋白与细胞死亡途径的组分符合读框地融合，以允许在施用小分子后的条件二聚化以及经转化细胞的细胞死亡。替代地或组合地，药物结合域与增殖途径、迁移途径或细胞生长途径的组分符合读框地融合。有时，小分子使诸如FK506结合蛋白(FKBP)、钙依赖磷酸酶A、亲环蛋白、FKPB的FKBP-雷帕霉素结合域、细菌DNA旋转酶的B亚单位、二氢叶酸还原酶或其组合等蛋白质发生二聚化。在一些情况下，小分子引起异聚化。在一些情况下，小分子引起同聚化。在一些情况下，小分子引起多聚化。在一些情况下，小分子引起三聚化。在一些情况下，小分子结合在蛋白质的结构域上并将蛋白质束缚在一起。示例性的小分子是FK1012、FK506、FK506-CsA、FKCsA、雷帕霉素、香豆霉素、赤霉素、HaXS、甲氨蝶呤、AP20187和AP1903。在一些情况下，小分子是AP1903。
外源信号可通过替代机制导致随后的细胞死亡。在一些情况下，代谢地诱导细胞死亡。例如，使用基因指导的酶前药诱导细胞死亡，其中无毒化合物转化为毒性化合物，该毒性化合物导致随后的细胞死亡。可以将无毒化合物转化为毒性化合物的示例性蛋白质包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和胞嘧啶脱氨酶(CD)。HSV-TK可以使核苷类似物如更昔洛韦(ganciclovir)或无环鸟苷发生磷酸化，然后将其掺入DNA中并导致链终止和细胞死亡。
在一些情况下，以抗体介导的机制诱导细胞死亡。在一些情况下，外源信号引起补体/抗体依赖性细胞死亡。示例性的补体/抗体依赖性细胞死亡靶标是CD20、RQR8、c-myc和EGFR。在一些情况下，使用针对干细胞如MSC特有的表面标志物的抗体诱导细胞死亡。
示例性的调节剂是细胞死亡剂。作为非限制性实例，示例性的细胞死亡剂包括胱天蛋白酶、肿瘤坏死因子、黄素蛋白、胸苷激酶、胞嘧啶脱氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶、细胞色素p450酶、羧肽酶、羧酸酯酶、硝基还原酶、辣根过氧化物酶、鸟嘌呤核糖基转移酶、糖苷酶、甲硫氨酸-α-γ-裂合酶和胸苷磷酸化酶。在一些情况下，该细胞死亡剂是凋亡剂。在一些情况下，该凋亡剂通过诱导凋亡来消除细胞。
凋亡剂通常是胱天蛋白酶，作为非限制性实例，诸如胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13和胱天蛋白酶-14。抗肿瘤剂通常是胱天蛋白酶9。在一些情况下，凋亡剂是肿瘤坏死因子，诸如肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β。凋亡剂可以是黄素蛋白(例如，凋亡诱导因子)。
本文提供了涉及用至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂转化的遗传修饰的干细胞的方法和组合物。在一些情况下，使用载体修饰干细胞。在一些情况下，该载体是慢病毒、致癌逆转录病毒、表达质粒、腺病毒、腺伴随病毒、单纯疱疹病毒、转座子、痘苗病毒、人乳头瘤病毒、猿猴免疫缺陷病毒、HTLV、人泡沫病毒、泡沫病毒、哺乳动物B型逆转录病毒、哺乳动物C型逆转录病毒、禽C型逆转录病毒、哺乳动物D型逆转录病毒和HTLV/BLV型逆转录病毒中的至少一种。可以使用来自腺病毒科(Adenoviridae)的禽腺病毒属(Aviadenovirus)、哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)、鸟类腺病毒属(Atadenovirus)、Ichtadenovirus和唾液酸酶腺病毒属(Siadenovirus)之一的腺病毒。在一些情况下，使用在腺病毒科的五个属中发现的血清型。
含有人IL-12和iCasp9的示例性腺病毒载体见图1。在一些情况下，通过插入表达盒来产生病毒载体。可以使用本领域已知的技术将表达盒插入载体中。在一些情况下，使用CRISPR/Cas9系统修饰载体。
在一些情况下，所述表达盒包含至少一种编码多肽的多核苷酸。在一些情况下，所述至少一种多核苷酸编码胱天蛋白酶9。在一些情况下，所述至少一种多核苷酸编码细胞因子。在一些情况下，该细胞因子包括IL-12。在一些情况下，该细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。在一些情况下，该细胞因子包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。例如，所述至少一种多核苷酸编码IL-12p35。在一些情况下，所述至少一种多核苷酸编码IL-12p40。
本文提供了遗传修饰的干细胞，其中融合多肽如包含IL-12的融合多肽通过接头连接。该接头可以连接接近的细胞因子的部分或片段以维持功能性蛋白质。在一些情况下，该功能性蛋白质是组装的IL-12p35与IL-12p40异二聚体的功能等同物。在一些情况下，该接头是柔性接头、刚性接头或可切割接头。示例性的接头包括但不限于弹性蛋白、GS接头、(Gly)8接头(SEQ ID NO:9)、(Gly)6接头(SEQ ID NO:10)、(GGGGS)3接头(SEQ ID NO:11)、(EAAAK)n接头(SEQ ID NO:12)和(XP)n接头。在一些情况下，所述至少一种多核苷酸编码标签。在一些情况下，该标签是血凝素(HA)、FLAG、谷胱甘肽S转移酶(GST)或六聚组氨酸(SEQID NO:13)。在一些情况下，所述至少一种多核苷酸序列编码用于腺病毒复制的一种或多种反向末端重复(ITR)。
本文提供了遗传修饰的干细胞，其中多肽如IL-12的表达或活性处于启动子的控制之下。在一些情况下，该启动子允许多肽诱导免疫应答。在一些情况下，该启动子允许多肽在特定部位诱导免疫应答。例如，该启动子在肿瘤部位或创伤愈合部位是活性的。作为非限制性实例，启动子是巨细胞病毒(CMV)、CAG、H1、U6、突触蛋白、UBC、EF1-α、ALB(1.4)、ApoE/AAT1、CaMKII、ELA1、Enh358MCK、cTNT、GFAP、MBP、SST、TBG、α-MHC、hRPE、mIP1、tMCK、VEGF、Rec-A、Egr-1和WAF-1中的至少一种。启动子通常是CMV。示例性的启动子是人启动子。或者，启动子是非人启动子，诸如小鼠、大鼠、马、绵羊、灵长类动物(例如，黑猩猩、狒狒、大猩猩、猩猩、猴)、狗、猫、猪、驴、兔或任何其他非人动物的启动子。
在一些情况下，选择启动子以使表达盒具有组成型活性。或者，选择启动子以使表达盒以组织特异性方式表达。在一些情况下，启动子对低氧、营养缺乏和放射中的至少一种有反应性。
本文提供了包含遗传修饰的干细胞的方法和组合物，其中所述干细胞在使用前进行表征。在一些情况下，对遗传修饰的干细胞进行分选以鉴别干细胞，诸如MSC。分选的示例性方法是流式细胞术和磁性分选。通常，遗传修饰的干细胞如MSC保留其天然分泌组(secretome)、表面标志物表型和细胞分化能力。在一些情况下，通过高通量多重珠阵列测定干细胞的分泌组。
在一些情况下，根据表面标志物将MSC鉴别或表征为MSC。用于鉴别MSC的示例性表面标志物包括但不限于CD34、CD45、CD11b、CD14、CD79α、CD19α、HLA II类、CD73(5’-核苷酸酶)、CD90(Thy120)、CD105(内皮糖蛋白)、STRO-1、CD271(NGFR)、CD200、神经节苷脂GD2、卷曲蛋白(Frizzled)-9和组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)。在一些情况下，通过流式细胞术、免疫荧光、免疫细胞化学、Western印迹法、蛋白质阵列或定量PCR中的至少一种来测定表达。在一些情况下，根据CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR中的至少一种的低表达以及CD90、CD73和CD105中的至少一种的高表达来鉴别或表征MSC。在一些情况下，MSC群体中CD34、CD11b、CD19、CD45或HLA-DR的表达为至多1％、至多2％、至多3％、至多4％、至多5％、至多6％、至多7％、至多8％、至多9％、至多10％、至多11％、至多12％、至多13％、至多14％、至多15％、至多16％、至多17％、至多18％、至多19％或至多20％。在一些情况下，MSC群体中CD90的表达为至少85％、至少90％、至少95％、至少97.5％或至少99％。在一些情况下，MSC群体中CD90的表达为约85％、约90％、约95％、约97.5％或约99％。在一些情况下，MSC群体中CD73的表达为至少85％、至少90％、至少95％、至少97.5％或至少99％。在一些情况下，MSC群体中CD73的表达为约85％、约90％、约95％、约97.5％或约99％。在一些情况下，CD105的表达为至少85％、至少90％、至少95％、至少97.5％或至少99％。在一些情况下，MSC群体中CD105的表达为约85％、约90％、约95％、约97.5％或约99％。
在一些情况下，通过分化测定将MSC鉴别或表征为MSC。例如，根据MSC分化成软骨细胞、骨细胞和脂肪细胞中的至少一种的能力来鉴别MSC。
本文提供了表达抗肿瘤剂和凋亡剂的遗传修饰的干细胞。在一些情况下，该抗肿瘤剂包括细胞因子如IL-12，用于诱导免疫应答。在一些情况下，该免疫应答由在特定部位如肿瘤部位或肿瘤切除部位分泌一种或多种细胞因子而引起。在一些情况下，该遗传修饰的干细胞分泌IL-12。例如，表达IL-12iCasp9的MSC导致人IL-12(IL-12p70)的分泌增加。在一些情况下，使用腺病毒用IL-12iCasp9转化的MSC显示出显著更高倍数的IL-12p70分泌。在一些情况下，与不表达IL-12p70的MSC相比，由MSC分泌的IL-12p70的量为至少500000、至少750000、至少1000000、至少2000000、至少3000000、至少4000000、至少5000000、至少6000000、至少7000000、至少8000000、至少9000000、至少10000000、至少110000000、至少12000000、至少13000000、至少14000000、至少15000000或大于15000000摩尔。在一些情况下，与不表达IL-12p70的MSC相比，由MSC分泌的IL-12p70的量为约500000至1000000、500000至2000000、500000至3000000、500000至4000000、500000至5000000、500000至6000000、500000至7000000、500000至8000000、500000至9000000、500000至10000000、1000000至2000000、1000000至3000000、1000000至4000000、1000000至5000000、1000000至6000000、1000000至7000000、1000000至8000000、1000000至9000000、1000000至10000000、2000000至3000000、2000000至4000000、2000000至5000000、2000000至6000000、2000000至7000000、2000000至8000000、2000000至9000000、2000000至10000000、3000000至4000000、3000000至5000000、3000000至6000000、3000000至7000000、3000000至8000000、3000000至9000000、3000000至10000000、4000000至5000000、4000000至6000000、4000000至7000000、4000000至8000000、4000000至9000000、4000000至10000000、5000000至6000000、5000000至7000000、5000000至8000000、5000000至9000000、5000000至10000000、6000000至7000000、6000000至8000000、6000000至9000000、6000000至10000000、7000000至8000000、7000000至9000000、7000000至10000000、8000000至9000000、8000000至10000000或9000000至10000000摩尔。
本文提供了使用Ad.IL-12iCasp9转化的MSC，其可以诱导免疫应答，其中该免疫应答包括T细胞的活化。在一些情况下，遗传修饰的MSC促进T细胞增殖。
本文提供了使用Ad.IL-12iCasp9转化的MSC，其表现出增强的肿瘤归巢性质。在一些情况下，使用表达载体如Ad.IL-12iCasp9转化的MSC选择性地迁移至损伤部位和局部缺血部位中的至少一种。在一些情况下，使用Ad.IL-12iCasp9转化的MSC选择性地迁移至肿瘤部位。
本文提供了经遗传修饰以表达抗肿瘤剂的干细胞。在一些情况下，该抗肿瘤剂是IL-12。IL-12通常被表达为单一多肽。由修饰的MSC表达的示例性人IL-12蛋白质序列包括如表1中所示的SEQ ID NO:1。在一些情况下，该IL-12多肽至少包含具有SEQ ID NO:1的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500个氨基酸残基的部分。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:1的10-90％、20-80％、30-70％和40-60％。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:1的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:1的约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约95％。在一些情况下，该IL-12多肽与包含SEQ ID NO:1的序列具有至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:1具有至少或约95％的同源性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:1具有至少或约97％的同源性。在一些实施方案中，该IL-12多肽与SEQID NO:1具有至少或约99％的同源性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:1具有至少或约100％的同源性。
本文提供了经遗传修饰以表达凋亡剂的干细胞。在一些情况下，该凋亡剂是诱导型胱天蛋白酶。在一些情况下，该胱天蛋白酶是胱天蛋白酶9。由修饰的MSC表达的示例性胱天蛋白酶9蛋白质序列包括SEQ ID NO:2或3。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽至少包含具有SEQ ID NO:2或3的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390或400个氨基酸残基的部分。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽包含SEQ ID NO:2或3的10-90％、20-80％、30-70％和40-60％。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽包含SEQ ID NO:2或3的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽包含SEQ ID NO:2或3的约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约95％。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与包含SEQ ID NO:2或3的序列具有至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:2或3具有至少或约95％的同源性。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:2或3具有至少或约97％的同源性。在一些实施方案中，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:2或3具有至少或约99％的同源性。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:2或3具有至少或约100％的同源性。
在一些情况下，由修饰的MSC表达的人IL-12蛋白质序列包括如表2中所示的SEQID NO:4。在一些情况下，该IL-12多肽至少包含具有SEQ ID NO:4的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310或320个氨基酸残基的部分。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:4的10-90％、20-80％、30-70％或40-60％。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQID NO:4的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:4的约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约95％。在一些情况下，该IL-12多肽与包含SEQ ID NO:4的序列具有至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:4具有至少或约95％的同源性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ IDNO:4具有至少或约97％的同源性。在一些实施方案中，该IL-12多肽与SEQ ID NO:4具有至少或约99％的同源性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:4具有至少或约100％的同源性。
在一些情况下，由修饰的MSC表达的人IL-12蛋白质序列包括如表2中所示的SEQID NO:5。在一些情况下，该IL-12多肽至少包含具有SEQ ID NO:5的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240或250个氨基酸残基的部分。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:5的10-90％、20-80％、30-70％或40-60％。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:5的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。在一些情况下，该IL-12多肽包含SEQ ID NO:5的约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约95％。在一些情况下，该IL-12多肽与包含SEQ ID NO:5的序列具有至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:5具有至少或约95％的同源性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:5具有至少或约97％的同源性。在一些实施方案中，该IL-12多肽与SEQ ID NO:5具有至少或约99％的同源性。在一些情况下，该IL-12多肽与SEQ ID NO:5具有至少或约100％的同源性。
在一些情况下，由修饰的MSC表达的人胱天蛋白酶9蛋白质序列包括如表2中所示的SEQ ID NO:6。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽至少包含具有SEQ ID NO:6的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270或280个氨基酸残基的部分。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽包含SEQ ID NO:6的10-90％、20-80％、30-70％或40-60％。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽包含SEQ ID NO:6的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽包含SEQ ID NO:6的约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约95％。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与包含SEQ ID NO:6的序列具有至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:6具有至少或约95％的同源性。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:6具有至少或约97％的同源性。在一些实施方案中，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:6具有至少或约99％的同源性。在一些情况下，该胱天蛋白酶9多肽与SEQ ID NO:6具有至少或约100％的同源性。
表1.氨基酸序列
粗体表示弹性蛋白接头
下划线表示HA标签
表2.氨基酸序列
本文提供了用于治疗用途的包含遗传修饰的干细胞的方法和组合物。在一些情况下，在治疗使用之前，测试遗传修饰的干细胞的无菌性、特异性和活力。该测试可在装运或储存遗传修饰的干细胞之前进行。该测试可在装运或储存遗传修饰的干细胞之后进行。在一些情况下，该方法包括在RNA水平或蛋白质水平上测定MSC中IL-12p70的表达水平。通过本文公开的方法产生的MSC中IL-12p70的表达水平可以是通过传统方法产生/储存/装运的MSC的至少约两倍。通过本文公开的方法产生的MSC中IL-12p70的表达水平可以是通过传统方法产生/储存/装运的MSC的至少约两倍。与通过传统方法产生/储存/装运的MSC相比，MSC中IL-12p70的表达水平可以是至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或大于95％。
本文提供了被转化为表达至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂以治疗癌症的遗传修饰的干细胞的组合物。在一些情况下，使用病毒载体递送系统转化遗传修饰的干细胞。例如，使用腺病毒、腺伴随病毒和慢病毒中的至少一种转化遗传修饰的干细胞。腺病毒载体或其他基于病毒的载体是基因递送的适宜方法，并且是实现长期基因转移的合适工具。病毒载体的优点在于它们可以转导非增殖细胞，并且它们具有低免疫原性。腺病毒载体也不整合到靶细胞的基因组中，从而避免与整合相关的不良事件。在一些情况下，使用非病毒载体递送系统转化遗传修饰的干细胞。非病毒载体递送系统包括但不限于DNA质粒、RNA、裸核酸以及与递送媒介物如脂质体复合的核酸。
在某些实施方案中，本文提供了包装在药剂盒中的包含遗传修饰的干细胞的组合物。在一些情况下，该药剂盒含有用人IL-12和iCasp9转化的遗传修饰的干细胞。该药剂盒可以是单次使用的或可重复使用的。在一些情况下，提供药剂盒以供施用于有需要的受试者。
在一些情况下，药剂盒包含遗传修饰的干细胞群体。在一些情况下，将遗传修饰的干细胞群体按合适的量等分以供施用于有需要的受试者。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的量为至少或约100个细胞、1,000个细胞、10,000个细胞、100,000个细胞、1,000,000个细胞、10,000,000个细胞、100,000,000个细胞、1,000,000,000个细胞或多于10亿个细胞。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的量为至少最少约10,000至100,000、10,000至200,000、10,000至400,000、10,000至600,000、10,000至800,000、10,000至1,000,000、10,000至1,500,000、10,000至2,000,000、100,000至200,000、100,000至400,000、100,000至600,000、100,000至800,000、100,000至1,000,000、100,000至1,500,000、100,000至2,000,000、200,000至400,000、200,000至600,000、200,000至800,000、200,000至1,000,000、200,000至1,500,000、200,000至2,000,000、400,000至600,000、400,000至800,000、400,000至1,000,000、400,000至1,500,000、400,000至2,000,000、600,000至800,000、600,000至1,000,000、600,000至1,500,000、600,000至2,000,000、800,000至1,000,000、800,000至1,500,000、800,000至2,000,000、1,000,000至1,500,000、1,000,000至2,000,000或1,500,000至2,000,000个遗传修饰的干细胞。
将包含遗传修饰的干细胞群体的本文所述药剂盒以合适的剂量施用于有需要的受试者。在一些情况下，用于施用的遗传修饰的干细胞的剂量为约500,000个细胞/kg至约1,000,000个细胞/kg。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的剂量为至少最少约10,000至100,000、10,000至200,000、10,000至400,000、10,000至600,000、10,000至800,000、10,000至1,000,000、10,000至1,500,000、10,000至2,000,000、100,000至200,000、100,000至400,000、100,000至600,000、100,000至800,000、100,000至1,000,000、100,000至1,500,000、100,000至2,000,000、200,000至400,000、200,000至600,000、200,000至800,000、200,000至1,000,000、200,000至1,500,000、200,000至2,000,000、400,000至600,000、400,000至800,000、400,000至1,000,000、400,000至1,500,000、400,000至2,000,000、600,000至800,000、600,000至1,000,000、600,000至1,500,000、600,000至2,000,000、800,000至1,000,000、800,000至1,500,000、800,000至2,000,000、1,000,000至1,500,000、1,000,000至2,000,000或1,500,000至2,000,000个细胞/kg。
在一些情况下，药剂盒包含遗传修饰的干细胞群体，其中将遗传修饰的干细胞等分到相关的药物组合物中以供施用。例如，遗传修饰的细胞以适合于一种或多种给药途径的药学上可接受的制剂(气体、液体、固体或其混合物)提供。在一些情况下，遗传修饰的干细胞以溶液提供。在一些情况下，药学上可接受的组合物包括但不限于与药物施用或者体内接触或递送相容的(水性或非水性)溶液(水性或非水性)、乳液(例如，水包油或油包水)、悬浮液、糖浆、酏剂、分散和悬浮介质、涂层、等渗剂和吸收促进剂或延迟剂。水性和非水性溶剂、溶液和悬浮液可包含悬浮剂和增稠剂。这样的药学上可接受的载体包括(包衣或未包衣的)片剂、(硬或软)胶囊、微珠、粉末、颗粒和晶体。补充的活性化合物(例如，防腐剂、抗细菌剂、抗病毒剂和抗真菌剂)也可掺入该组合物中。
在一些情况下，药剂盒包含遗传修饰的干细胞群体，其中将遗传修饰的干细胞等分到合适的容器中以供施用。例如，将干细胞等分在用于储存通过本文所述方法产生的遗传修饰的干细胞的储存单元或容器中，其中所述储存单元包括内表面，其中该内表面是储存单元与储存在其中的细胞接触的表面。示例性的内表面材料是硬塑料或玻璃。内表面可不存在将会被储存在储存单元内的细胞吸收和/或在该细胞中诱导应答的任何聚合物。内表面可由不被遗传修饰的干细胞或储存在储存单元内的任何细胞吸收的聚合物构成。内表面可不含或基本上不含将会被储存在储存单元内的细胞吸收和/或在该细胞中诱导应答的任何聚合物。内表面可基本上不含将会被储存在储存单元内的细胞吸收和/或在该细胞中诱导应答的任何聚合物。内表面可以至少90％、至少95％、至少98％或至少99％不含在添加细胞和储存介质之后将会被储存在储存单元内的细胞吸收和/或在该细胞中诱导应答的任何聚合物。内表面可以至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％或至少99.9％不含在添加细胞和储存介质之后将会被储存在储存单元内的细胞吸收和/或在该细胞中诱导应答的任何聚合物。
在一些情况下，储存单元适合于在低至-70℃的温度下冷冻。在一些情况下，储存单元适合于在低于-70℃的温度下冷冻。在一些情况下，储存单元适合于在液N2中冷冻。在一些情况下，储存单元适合于在-20℃下冷冻。在一些情况下，储存单元适合于4℃的温度。在一些情况下，储存单元适合于储存一定时间，例如，储存至多1年。在一些情况下，储存单元适合于装运到诊所以供使用。在一些情况下，使用冷冻保护剂如DMSO、甘油、聚乙二醇、丙二醇、丙三醇、聚乙烯吡咯烷酮、山梨糖醇、葡聚糖和海藻糖储存遗传修饰的干细胞。在一些情况下，遗传修饰的干细胞储存至少1天、至少1周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少1年或多于1年。在一些情况下，遗传修饰的干细胞储存至多1天、至多1周、至多1个月、至多2个月、至多3个月、至多4个月、至多5个月、至多6个月、至多7个月、至多8个月、至多9个月、至多10个月、至多11个月、至多1年或多于1年。在一些情况下，本文所述的方法包括将遗传修饰的干细胞在储存单元中储存和/或装运。在一些情况下，方法包括将细胞冷却装运过夜。在一些情况下，方法包括将细胞解冻或加温至37℃(例如，在温水浴中)。
本文提供了用于通过本文所述方法产生的遗传修饰的干细胞的递送单元。用于遗传修饰的干细胞的示例性递送单元包括管、注射器、小瓶、袋、细胞培养板、多孔可溶解包和可以接收细胞的其他装置。在一些情况下，遗传修饰的干细胞被包装在适合于施用于受试者的递送单元中。例如，遗传修饰的干细胞被包装到注射器中，以供皮下、静脉内、肌肉内或腹膜内施用于受试者。在一些情况下，使用遗传修饰的干细胞形成具有药学上可接受的载体如缓冲盐水溶液的药物组合物。
在一些情况下，药剂盒包括被区室化以接纳一个或多个容器如小瓶、管等的载具、包装或容器，每个容器包含将要在本文所述方法中使用的一个单独要素。合适的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器和试管。在其他实施方案中，容器由诸如玻璃或塑料等多种材料形成。
在一些情况下，药剂盒包括一个或多个附加容器，每个附加容器具有从商业和用户角度考虑对于本文所述的应用而言所需要的一种或多种不同材料(诸如试剂，任选地为浓缩形式，和/或装置)。这类材料的非限制性实例包括但不限于缓冲液、引物、酶、稀释剂、过滤器、载具、包装、容器、小瓶和/或管标签(列出内容物)和/或使用说明书，以及具有使用说明的包装插页。任选地也包括一套说明书。在一些情况下，标签处于容器上或与容器相关联。在一些情况下，当构成标签的字母、数字或其他字符附着、模制或蚀刻在容器本身上时，该标签处于该容器上；当标签存在于也容纳容器的接纳器或载具内(例如作为包装插页)时，该标签与该容器相关联。在其他情况下，使用标签来指示内容物将用于具体治疗应用。在一些情况下，标签也指示关于内容物例如在本文所述方法中的使用的指导。
治疗方法
本文描述了涉及癌症疗法的方法和组合物。一些方法包括表达至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂的遗传修饰的干细胞。抗肿瘤剂通常参与调节其在其中表达的个体的免疫应答，从而增强T细胞活性，减少创伤愈合，或两者兼具。调节剂是响应于诸如小分子等信号而诱导凋亡或以其他方式诱导细胞死亡的药剂。本文描述了涉及基于修饰的人MSC的癌症免疫疗法的方法和组合物。MSC的示例性来源是人足月胎盘或成人骨髓。在一些情况下，人IL-12基因被转化到MSC中并促进T细胞活化。如本文所述的方法和组合物促进创伤清除并改变创伤部位，以产生适合免疫应答而不是创伤愈合反应的环境。为了减轻潜在的临床不良反应，遗传修饰的干细胞可含有包含凋亡蛋白质或者其表达或活化导致细胞死亡的其他蛋白质的调节剂。此类蛋白质的实例包括通过其表达或活化诱导细胞死亡的任何蛋白质，诸如DNA酶、RNA酶、蛋白酶、ATP酶、转录抑制剂、翻译抑制剂、细胞周期抑制剂、细胞检查点进展抑制剂、激酶或激酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、细胞或细胞器膜完整性改变酶、呼吸链调节剂，蛋白质折叠、装配、定位或加工的调节剂，或者直接或通过引发细胞自身细胞死亡途径而触发细胞死亡的其他酶。
一些自杀蛋白质被转录地调节，使得它们仅在接收到信号时转录，该信号例如是应激、小分子或诸如存在于愈合的创伤部位等位置信号。
替代地或组合地，一些自杀蛋白质在转录后被调节。转录后调节的实例包括在翻译、定位或活性水平上的调节。例如，一些自杀蛋白质在多聚体形成如同型二聚体或异二聚体形成的水平上被调节。该调节是天然的，或者通过添加可调节的二聚化结构域来实现。二聚化结构域通过例如热休克、冷、磷酸化、位置调节剂的转录，或在一些情况下优选通过施用触发二聚化的小分子来调节。
可通过多聚体形成而调节的示例性自杀蛋白质包括但不限于胱天蛋白酶1、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶6、胱天蛋白酶7、胱天蛋白酶8、胱天蛋白酶9和Fas。在一些情况下，该自杀蛋白质通过蛋白质结构域的二聚化或多聚化来调节，该结构域例如是添加至细胞死亡诱导部分、蛋白质或蛋白质片段的结构域。可以多聚化或二聚化的示例性蛋白质或其结构域包括但不限于FK506结合蛋白(FKBP)、钙依赖磷酸酶A、亲环蛋白、FKPB的FKBP-雷帕霉素结合域、细菌DNA旋转酶的B亚单位、二氢叶酸还原酶和Fas结构域。在一些情况下，该蛋白质或其结构域被修饰，以便易接受与引起多聚化或二聚化和随后的细胞死亡的小分子的结合。例如，FKBP12-F36V包含FKBP结构域，其在残基36处具有苯丙氨酸代替缬氨酸的氨基酸置换，这允许小分子诱导的二聚化。示例性的二聚化蛋白质结构域如表3中所示。
表3.
二聚化蛋白质 二聚化剂
FKBP:FKBP FK1012
FKBP:钙依赖磷酸酶A(CNA) FK506
FKBP:CyP-Fas FKCsA
FKBP:mTOR的FRB结构域 雷帕霉素
GyrB:GyrB 香豆霉素
GAI:GID1 赤霉素
在一些情况下，自杀蛋白质通过将无毒化合物转化为毒性化合物来诱导细胞死亡。在一些情况下，自杀蛋白质使核苷发生磷酸化，该核苷然后掺入DNA中并导致链终止和细胞死亡。在一些情况下，自杀蛋白质包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和胞嘧啶脱氨酶(CD)。
在一些情况下，自杀蛋白质通过抗体介导的机制诱导细胞死亡。在一些情况下，外源信号引起补体/抗体依赖性细胞死亡。示例性的补体/抗体依赖性细胞死亡靶标是CD20、RQR8、c-myc和EGFR。在一些情况下，使用针对干细胞如MSC特有的表面标志物的抗体诱导细胞死亡。
在一些优选的实施方案中，自杀蛋白质由诱导型凋亡信号传导蛋白如胱天蛋白酶-9的自杀基因编码。在一些情况下，胱天蛋白酶-9自杀基因的表达是可诱导的。在一些情况下，胱天蛋白酶-9自杀蛋白质的活性是可诱导的，诸如可由小分子诱导的二聚化诱导。
本文所述的组合物和方法用于治疗癌症。如本文所用的术语“癌症”被定义为表现出不受调节的生长、缺乏分化、局部组织侵袭和转移中的一种或多种的细胞过度增殖，或在其他方面被理解为癌症。
在一些情况下，此处靶向的癌症是可通过手术切除的可触知肿瘤。与本申请一致，如本文所述的癌症治疗针对在手术、化疗或放疗之后剩余的癌细胞。使用本文所述方法和组合物的癌症疗法促进创伤清除并改变创伤部位，以促进免疫应答而不是创伤愈合反应。促进创伤愈合的机制已显示促进恶性细胞的生长和增殖。通过促进免疫应答而不是创伤愈合反应，受试者的免疫系统被刺激以靶向并杀伤癌细胞。使用本文所述的方法和组合物治疗的示例性癌症是乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、脑癌、膀胱癌、子宫内膜癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌和黑素瘤。示例性的癌细胞包括但不限于癌、黑素瘤、白血病、纤维肉瘤、肉瘤、腺癌和神经胶质瘤。
本文提供了用于治疗受试者中的病况的方法，其包括将遗传修饰的干细胞施用于有需要的受试者，其中所述遗传修饰的干细胞以药学上可接受的组合物提供。在一些情况下，所述遗传修饰的细胞以适合于一种或多种给药途径的药学上可接受的制剂(气体、液体、固体或其混合物)提供。在一些情况下，所述遗传修饰的干细胞以溶液提供。在一些情况下，药学上可接受的组合物包括但不限于与药物施用或者体内接触或递送相容的溶液(水性或非水性)、乳液(例如，水包油或油包水)、悬浮液、糖浆、酏剂、分散和悬浮介质、涂层、等渗剂和吸收促进剂或延迟剂。水性和非水性溶剂、溶液和悬浮液可包含悬浮剂和增稠剂。这类药学上可接受的载体包括(包衣或未包衣的)片剂、(硬或软)胶囊、微珠、粉末、颗粒和晶体。补充的活性化合物(例如，防腐剂、抗细菌剂、抗病毒剂和抗真菌剂)也可掺入该组合物中。
在一些情况下，遗传修饰的干细胞作为包含生物聚合物的组合物或制剂提供。在一些情况下，该生物聚合物是可聚合或可交联的材料。示例性的可聚合或可交联材料包括但不限于聚阴离子多糖(例如，透明质酸(HA))、羧甲基纤维素(CMC)、羧甲基直链淀粉(CMA)、软骨素-6-硫酸盐、硫酸皮肤素、皮肤素-6-硫酸盐、藻酸、壳多糖、壳聚糖、纤维蛋白、葡聚糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚(D-)乳酸、聚乙醇酸乳酸(polyglycoliclactic acid)、角蛋白、层粘连蛋白、弹性蛋白、胶原蛋白和其他天然存在的细胞外基质蛋白、明胶、聚对二氧环己酮、聚己内酯及其掺合物和共聚物。在一些情况下，该生物聚合物改善了MSC在目标部位处移入的能力。在一些情况下，该生物聚合物形成支架，在其中装载遗传修饰的干细胞。在一些实施方案中，该支架是生物相容的，并且允许遗传修饰的干细胞迁移至目标部位。在一些情况下，该目标部位是肿瘤部位或受损组织的部位。在一些情况下，在手术去除肿瘤后，腔内施用包含生物聚合物的遗传修饰的干细胞。在一些情况下，在通过化疗或放疗治疗后，施用包含生物聚合物的遗传修饰的干细胞。
本文提供了用于治疗受试者中的病况的方法，其包括将遗传修饰的干细胞施用于有需要的受试者，其中所述干细胞是自体的。在一些情况下，所述干细胞是自体的，因为所述干细胞从同一个体获得。在一些情况下，从受试者中分离自体间充质干细胞，并在施用于受试者之前进行遗传修饰。在一些情况下，从受试者中分离自体间充质干细胞，并在手术、化疗或放疗中的至少一种之前进行遗传修饰。
本文提供了用于治疗受试者中的病况的方法，其包括将遗传修饰的干细胞施用于有需要的受试者，其中所述干细胞是同种异体的。在一些情况下，所述遗传修饰的干细胞是同种异体的，因为所述干细胞从另一个体获得。在一些情况下，将同种异体干细胞施用于有需要的受试者。在一些情况下，同种异体干细胞来源于第三方供体。在一些情况下，第三方供体的同种异体干细胞在治疗前、治疗期间或治疗后从受试者中分离。在一些情况下，分离第三方供体的同种异体间充质干细胞，并在施用于受试者之前进行遗传修饰。在一些情况下，从受试者中分离同种异体间充质干细胞，并在手术、化疗或放疗中的至少一种之前进行遗传修饰。
在一些情况下，分离同种异体或自体干细胞，进行遗传修饰，并直接施用于有需要的受试者。在一些情况下，分离同种异体或自体干细胞，进行遗传修饰，并冷冻直至对有需要的受试者进行治疗。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的组合物在施用于受试者之前被冷冻。术语“冷冻”包括在组合物为固体形式或半固体形式时的温度下的组合物。冷冻可以包括在低于0℃和低于-15℃的温度下的组合物。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的组合物的贮备液在施用于受试者之前被冷冻。在一些情况下，当受试者需要治疗时，解冻遗传修饰的干细胞的组合物。例如，遗传修饰的干细胞的组合物在解冻至少或约5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时或多于10小时内施用于受试者。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的组合物在解冻至多5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时或10小时内施用于受试者。
有时，方法包括在分离和修饰之后施用遗传修饰的干细胞如MSC，而不进行储存或装运。在一些情况下，该方法包括在储存或装运之后施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，该方法包括在分离和修饰后至少1小时、至少2小时、至少6小时、至少12小时、至少24小时、至少1天、至少2天、至少3天、至少5天、至少1周、至少2周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少6个月、至少8个月、至少12个月或更久施用遗传修饰的干细胞。有时，该方法包括在分离和修饰后至多1小时、至多2小时、至多6小时、至多12小时、至多24小时、至多1天、至多2天、至多3天、至多5天、至多1周、至多2周、至多1个月、至多2个月、至多3个月、至多4个月、至多6个月、至多8个月、至多12个月或至多24个月施用遗传修饰的干细胞。
遗传修饰的干细胞的组合物不同地包含至少100个细胞、1,000个细胞、10,000个细胞、100,000个细胞、1,000,000个细胞、10,000,000个细胞、100,000,000个细胞、1,000,000,000个细胞或多于10亿个细胞。遗传修饰的干细胞的组合物不同地包括施用至多约100个细胞、至多约1,000个细胞、至多约10,000个细胞、至多约100,000个细胞、至多约1,000,000个细胞、至多约10,000,000个细胞、至多约100,000,000个细胞、至多约1,000,000,000个细胞或至多约10亿个细胞。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的组合物包括施用至少最少约10,000至100,000、10,000至200,000、10,000至400,000、10,000至600,000、10,000至800,000、10,000至1,000,000、10,000至1,500,000、10,000至2,000,000、100,000至200,000、100,000至400,000、100,000至600,000、100,000至800,000、100,000至1,000,000、100,000至1,500,000、100,000至2,000,000、200,000至400,000、200,000至600,000、200,000至800,000、200,000至1,000,000、200,000至1,500,000、200,000至2,000,000、400,000至600,000、400,000至800,000、400,000至1,000,000、400,000至1,500,000、400,000至2,000,000、600,000至800,000、600,000至1,000,000、600,000至1,500,000、600,000至2,000,000、800,000至1,000,000、800,000至1,500,000、800,000至2,000,000、1,000,000至1,500,000、1,000,000至2,000,000或1,500,000至2,000,000个干细胞。
本文所述的组合物包含合适剂量的遗传修饰的干细胞，以供施用于有需要的受试者。在一些情况下，用于施用的遗传修饰的干细胞的剂量为约500,000个细胞/kg至约1,000,000个细胞/kg。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的剂量为至少最少约10,000至100,000、10,000至200,000、10,000至400,000、10,000至600,000、10,000至800,000、10,000至1,000,000、10,000至1,500,000、10,000至2,000,000、100,000至200,000、100,000至400,000、100,000至600,000、100,000至800,000、100,000至1,000,000、100,000至1,500,000、100,000至2,000,000、200,000至400,000、200,000至600,000、200,000至800,000、200,000至1,000,000、200,000至1,500,000、200,000至2,000,000、400,000至600,000、400,000至800,000、400,000至1,000,000、400,000至1,500,000、400,000至2,000,000、600,000至800,000、600,000至1,000,000、600,000至1,500,000、600,000至2,000,000、800,000至1,000,000、800,000至1,500,000、800,000至2,000,000、1,000,000至1,500,000、1,000,000至2,000,000或1,500,000至2,000,000个细胞/kg。
本文提供了用于治疗受试者中的病况的方法，其包括通过合适的给药途径将遗传修饰的干细胞施用于有需要的受试者。在一些情况下，全身施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，局部施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，通过静脉内、肿瘤部位局部和通过输注中的至少一种施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，在肿瘤部位、肿瘤切除部位或者通过手术或通过化疗去除肿瘤的部位中的至少一处注射遗传修饰的干细胞。或者，当通过手术或针无法接近实体瘤部位时，静脉内输注遗传修饰的干细胞。本文所述的方法可包括将细胞悬浮或混合在用于静脉内(i.v.)给药的溶液(例如，0.9％NaCl溶液)中。在一些情况下，使用腔内输注施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，使用肿瘤内输注施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，通过导管输注遗传修饰的干细胞。在一些情况下，通过导管随时间施用遗传修饰的干细胞。例如，每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或者更频繁或更不频繁地通过导管施用遗传修饰的干细胞。
在一些情况下，遗传修饰的干细胞作为疫苗施用。示例性的疫苗包括但不限于DNA疫苗、肽疫苗、RNA疫苗、病毒疫苗或其组合。在一些情况下，该疫苗包含遗传修饰的干细胞和涉及癌症的抗原多肽。在一些情况下，该疫苗响应于抗原引发抗体介导的免疫应答以靶向癌症。在一些情况下，该疫苗仅包含遗传修饰的干细胞，并且通过遗传修饰的干细胞在癌症部位分泌IL-12引起免疫应答。在一些情况下，该疫苗被配制为适合于一种或多种给药途径的药学上可接受的制剂(气体、液体、固体或其混合物)。在一些情况下，该疫苗通过包括但不限于皮下、皮内、肌肉内、鼻内、静脉内和舌下等途径施用。
在一些情况下，遗传修饰的干细胞的施用重复不超过一次、不超过两次、不超过三次或不超过十次。在一些情况下，遗传修饰的干细胞的施用重复超过一次、超过两次、超过三次或超过十次。可以根据需要经常重复施用遗传修饰的干细胞。
在一些情况下，遗传修饰的干细胞与手术联合使用。例如，在肿瘤手术之前、肿瘤手术期间或肿瘤手术之后施用遗传修饰的干细胞。在一些情况下，遗传修饰的干细胞通过静脉内、肿瘤部位局部和通过输注中的至少一种施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞在肿瘤切除部位或在手术去除肿瘤的部位中的至少一处注射。在一些情况下，在手术前施用遗传修饰的干细胞导致患者中的肿瘤负荷减少。在一些情况下，遗传修饰的干细胞在手术前至多1天、至多2天、至多3天、至多5天或更久施用。有时，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在手术前每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更不频繁地施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在手术前每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更频繁地施用。
在一些情况下，遗传修饰的干细胞的施用与手术联合，或是在手术期间或之后切除肿瘤之后。通常，遗传修饰的干细胞靶向切除的肿瘤周围剩余的癌细胞。在一些情况下，遗传修饰的干细胞在切除肿瘤后至多1天、至多2天、至多3天、至多5天或多于5天施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞在切除肿瘤后一周、两周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、一年、两年、三年、四年、五年或多于五年施用。有时，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在切除后每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更不频繁地施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在切除后每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更频繁地施用。
遗传修饰的归巢细胞如修饰的MSC在化疗之前、化疗期间或化疗之后施用。有时，遗传修饰的干细胞在化疗前至多1天、至多2天、至多3天、至多5天或多于5天施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞在化疗后至多1天、至多2天、至多3天、至多5天或多于5天施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在化疗前或化疗后每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更不频繁地施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在化疗前或化疗后每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更频繁地施用。示例性的化疗包括但不限于环磷酰胺、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、丝裂霉素、多柔比星和米托蒽醌。
在一些情况下，在放疗之前、放疗期间或放疗之后施用遗传修饰的MSC。在一些情况下，遗传修饰的干细胞在放疗前至多1天、至多2天、至多3天、至多5天或多于5天施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞在放疗后至多1天、至多2天、至多3天、至多5天或多于5天施用。有时，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在放疗前或放疗后每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更不频繁地施用。在一些情况下，遗传修饰的干细胞单次施用，或在一段时间内施用，诸如在放疗前或放疗后每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次或更频繁地施用。
作为手术、化疗或放疗的替代，遗传修饰的干细胞与针对免疫检查点的调节剂联合施用。示例性的免疫检查点靶标包括但不限于2B4(CD244)、A2aR、B7H3(CD276)、B7H4(VTCN1)、B7H6、B7RP1、BTLA(CD272)、嗜乳脂蛋白、CD103、CD122、CD137(4-1BB)、CD137L、CD160、CD2、CD200R、CD226、CD26、CD27、CD28、CD30、CD39、CD40、CD48、CD70、CD73、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CEACAM1、CGEN-15049、CTLA-4、DR3、GAL9、GITR、GITRL、HVEM、ICOS、ICOSL(B7H2)、IDO1、IDO2、ILT-2(LILRB1)、ILT-4(LILRB2)、KIR、KLRG1、LAG3、LAIR1(CD305)、LIGHT(TNFSF14)、MARCO、NKG2A、NKG2D、OX-40、OX-40L、PD-1、PDL-1(B7-H1，CD274)、PDL-2(B7-DC，CD 273)、PS、SIRPα(CD47)、SLAM、TGFR、TIGIT、TIM1、TIM3(HAVCR2)、TIM4或VISTA。在一些情况下，免疫检查点调节剂是小分子、抗体、编码抗体的核酸、抗原结合片段、RNA干扰剂、肽、拟肽、合成配体和适体中的至少一种。在一些情况下，施用免疫检查点抑制剂。示例性的免疫检查点抑制剂是Enoblituzumab(例如，MGA271)、伊匹木单抗(例如，BMS-734016，MDX-010)、曲美木单抗(例如，CP-675，CP-675,206)、Lirilumab(例如，BMS-986015，IPH2102)、BMS986016、派姆单抗(例如，MK-3475，SCH 900475)、纳武单抗(例如，BMS-936558，MDX-1106，ONO-4538)、Pidilizumab(例如，CT-011，MDV9300)、阿特珠单抗(例如，MPDL3280A，RG7446，RO5541267)、BMS-936559(例如，MDX-1105)和巴维昔单抗。在一些情况下，遗传修饰的干细胞与免疫疗法如CAR T细胞疗法联合施用。
在一些情况下，包含遗传修饰的干细胞的疗法减少或消除创伤部位处的肿瘤细胞再生长或增殖。在一些情况下，创伤部位是肿瘤已被切除的部位。在一些情况下，创伤是已经受化疗、放疗或免疫疗法的部位。肿瘤细胞再生长或增殖可减少5-95％、10-90％、20-80％、30-70％、40-60％、50-95％、65-85％或75-95％。肿瘤细胞再生长或增殖的减少可以是至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。肿瘤细胞再生长或增殖的减少可以是至少5％。肿瘤细胞再生长或增殖的减少可以是至少10％。肿瘤细胞再生长或增殖的减少可以是至少30％。肿瘤细胞再生长或增殖的减少可以是至少50％。
在一些情况下，在施用遗传修饰的干细胞之前，CD1、IL-2和IL-12中的至少一种被全身下调。在一些情况下，在施用遗传修饰的干细胞之前，CD1、IL-2和IL-12均被全身下调。CD-1、IL-2和IL-12中至少一种的下调可增强干细胞靶向癌细胞或肿瘤的功效。
在一些情况下，涉及遗传修饰的MSC的癌症治疗包括靶向一种或多种细胞因子。在一些情况下，该细胞因子是TNF-α、IL-2、IL-15、IL-18、IFN-α、G-CSF和GM-CSF中的至少一种。靶向细胞因子的示例性方法包括但不限于抗体、激动剂、编码细胞因子的核酸、小分子、肽、拟肽和细胞因子的可溶性形式。
在一些情况下，涉及遗传修饰的MSC的癌症治疗还包括靶向IL-2。靶向IL-2的示例性方法包括IL-2抗体、IL-2受体的激动剂、编码IL-2的核酸、小分子、肽、拟肽或IL-2的可溶性形式。或者，可以对MSC进行遗传修饰以表达IL-12和IL-2中的至少一种。靶向其他细胞因子可与IL-12联合使用、与IL-2联合使用，或作为IL-2和IL-12的替代。
在一些情况下，肿瘤大小通过PET扫描、MRI和CT扫描中的至少一种来确定。有时通过血液检验来测量癌症，以测定全血细胞计数、血液中的蛋白质和血液中的肿瘤标志物中的至少一种。在一些情况下，监测创伤愈合。
通常，一旦肿瘤大小减小，调节剂如凋亡剂就被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小约5％至约10％、约10％至约25％、约25％至约50％、约25％至约95％时，调节剂被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％时，调节剂被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小约5-95％、10-90％、20-80％、30-70％、40-60％、50-95％、65-85％或75-95％时，调节剂被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％时，调节剂被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小至少5％时，调节剂被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小至少10％时，调节剂被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小至少30％时，调节剂被激活。在一些情况下，当肿瘤大小减小至少50％时，调节剂被激活。
在一些情况下，激活调节剂以调节肿瘤部位处的创伤反应。通常，使用化疗或放疗模仿创伤并引起不受调节的细胞生长，从而促进癌症环境。在一些情况下，癌细胞在肿瘤切除周围的部位剩余。通常激活调节剂以调节化疗、放疗或手术部位处的细胞死亡。在一些情况下，在肿瘤部位处调节遗传修饰的干细胞的功能。受调节的示例性干细胞功能是细胞死亡、细胞生长、细胞增殖和创伤。
本文描述了通过向受试者施用外源信号来调节遗传修饰的干细胞的活性的方法。示例性的外源信号是小分子。在一些情况下，通过静脉内、皮下和输注中的至少一种施用外源信号。或者，手术引入、摄入或者局部、经口、颊部或经鼻施用外源信号。在一些情况下，通过导管输注来施用外源信号。外源信号可单次施用，或在一段时间内施用，诸如每天一次、每周多次、每周一次、每两周一次、每月一次、更频繁或更不频繁地施用。
本文提供了通过向受试者施用外源信号来调节遗传修饰的干细胞的活性的方法，其中在引入遗传修饰的干细胞后施用外源信号。在一些情况下，在肿瘤去除后施用外源信号。在一些情况下，通过手术进行肿瘤去除。在一些情况下，通过癌症治疗进行肿瘤去除，该治疗包括但不限于手术、化疗、放疗和免疫疗法。在一些情况下，在肿瘤去除后不早于1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周或超过4周施用外源信号。在一些情况下，在肿瘤去除后至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年或超过4年施用外源信号。
在一些情况下，外源信号是小分子、抗体、编码抗体的核酸、抗原结合片段、RNA干扰剂、肽、拟肽、合成配体和适体中的至少一种。在一些情况下，外源信号是热休克、低氧、营养缺乏、金属离子和类固醇中的至少一种。示例性的小分子是FK1012、FK506、FK506-CsA、FKCsA、雷帕霉素、香豆霉素、赤霉素、HaXS、甲氨蝶呤、AP20187和AP1903。
在一些情况下，以合适的剂量施用外源信号。在一些情况下，治疗有效量或剂量包括约0.01mg/kg至20mg/kg的剂量，例如，0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.03mg/kg、0.04mg/kg、0.05mg/kg、0.06mg/kg、0.07mg/kg、0.08mg/kg、0.09mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.1mg/kg、2.2mg/kg、2.3mg/kg、2.4mg/kg、2.5mg/kg、2.6mg/kg、2.7mg/kg、2.8mg/kg、2.9mg/kg、3mg/kg、3.1mg/kg、3.2mg/kg、3.3mg/kg、3.4mg/kg、3.5mg/kg、3.6mg/kg、3.7mg/kg、3.8mg/kg、3.9mg/kg、4mg/kg、4.1mg/kg、4.2mg/kg、4.3mg/kg、4.4mg/kg、4.5mg/kg、4.6mg/kg、4.7mg/kg、4.8mg/kg、4.9mg/kg、5mg/kg、5.1mg/kg、5.2mg/kg、5.3mg/kg、5.4mg/kg、5.5mg/kg、5.6mg/kg、5.7mg/kg、5.8mg/kg、5.9mg/kg、6mg/kg、6.1mg/kg、6.2mg/kg、6.3mg/kg、6.4mg/kg、6.5mg/kg、6.6mg/kg、6.7mg/kg、6.8mg/kg、6.9mg/kg、7mg/kg、7.1mg/kg、7.2mg/kg、7.3mg/kg、7.4mg/kg、7.5mg/kg、7.6mg/kg、7.7mg/kg、7.8mg/kg、7.9mg/kg、8mg/kg、8.1mg/kg、8.2mg/kg、8.3mg/kg、8.4mg/kg、8.5mg/kg、8.6mg/kg、8.7mg/kg、8.8mg/kg、8.9mg/kg、9mg/kg、9.1mg/kg、9.2mg/kg、9.3mg/kg、9.4mg/kg、9.5mg/kg、9.6mg/kg、9.7mg/kg、9.8mg/kg、9.9mg/kg、10mg/kg、10.1mg/kg、10.2mg/kg、10.3mg/kg、10.4mg/kg、10.5mg/kg、10.6mg/kg、10.7mg/kg、10.8mg/kg、10.9mg/kg、11mg/kg、11.1mg/kg、11.2mg/kg、11.3mg/kg、11.4mg/kg、11.5mg/kg、11.6mg/kg、11.7mg/kg、11.8mg/kg、11.9mg/kg、12mg/kg、12.1mg/kg、12.2mg/kg、12.3mg/kg、12.4mg/kg、12.5mg/kg、12.6mg/kg、12.7mg/kg、12.8mg/kg、12.9mg/kg、13mg/kg、13.1mg/kg、13.2mg/kg、13.3mg/kg、13.4mg/kg、13.5mg/kg、13.6mg/kg、13.7mg/kg、13.8mg/kg、13.9mg/kg、14mg/kg、14.1mg/kg、14.2mg/kg、14.3mg/kg、14.4mg/kg、14.5mg/kg、14.6mg/kg、14.7mg/kg、14.8mg/kg、14.9mg/kg、15mg/kg、15.1mg/kg、15.2mg/kg、15.3mg/kg、15.4mg/kg、15.5mg/kg、15.6mg/kg、15.7mg/kg、15.8mg/kg、15.9mg/kg、16mg/kg、16.1mg/kg、16.2mg/kg、16.3mg/kg、16.4mg/kg、16.5mg/kg、16.6mg/kg、16.7mg/kg、16.8mg/kg、16.9mg/kg、17mg/kg、17.1mg/kg、17.2mg/kg、17.3mg/kg、17.4mg/kg、17.5mg/kg、17.6mg/kg、17.7mg/kg、17.8mg/kg、17.9mg/kg、18mg/kg、18.1mg/kg、18.2mg/kg、18.3mg/kg、18.4mg/kg、18.5mg/kg、18.6mg/kg、18.7mg/kg、18.8mg/kg、18.9mg/kg、19mg/kg、19.1mg/kg、19.2mg/kg、19.3mg/kg、19.4mg/kg、19.5mg/kg、19.6mg/kg、19.7mg/kg、19.8mg/kg、19.9mg/kg或20mg/kg。在一些情况下，调节有效量或剂量预计包括约0.1mg/kg至约4.0mg/kg的剂量。在一些情况下，治疗有效量或剂量大于20mg/kg。
在一些情况下，与单独手术相比，遗传修饰的干细胞与手术的共同治疗减少肿瘤再生长。在一些情况下，与单独化疗治疗相比，遗传修饰的MSC与化疗的共同治疗减少肿瘤再生长。在一些情况下，与单独放射治疗相比，遗传修饰的MSC与放疗的共同治疗减少肿瘤再生长。有时，肿瘤再生长减少约10％至约25％、约10％至约50％、约20％至约95％。在一些情况下，肿瘤再生长减少至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。在一些情况下，肿瘤再生长减少约5-95％、10-90％、20-80％、30-70％、40-60％、50-95％、65-85％或75-95％。在一些情况下，肿瘤再生长减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、76％、80％、85％、90％、95％或大于95％。有时，肿瘤再生长的减少是至少5％。在一些情况下，肿瘤再生长的减少是至少10％。在一些情况下，肿瘤再生长的减少是至少30％。在一些情况下，肿瘤再生长的减少可以是至少50％。
本文针对的癌症可以是复发性和/或难治性癌症。在一些情况下，该癌症是急性癌症或慢性癌症。在一些情况下，该癌症是加速的难治性癌症。在一些情况下，该癌症处于缓解期。在一些情况下，该癌症是I期、II期、III期或IV期癌症。在一些情况下，该癌症是青少年癌症或成年癌症。
如本文所述的癌症治疗可用于治疗肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌或间皮瘤。NSCLC的实例包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌。在一些情况下，间皮瘤是肺和胸腔内层(lining)(胸膜)或腹部内层(腹膜)的癌性肿瘤。在一些情况下，间皮瘤由石棉暴露引起。间皮瘤影响间皮，间皮是覆盖身体的内脏(包括肺、心脏和腹部器官)的保护膜。间皮瘤可以发生于这些部位中的任一处，但是大约75％的情况发生于受到影响的肺内层或胸膜。
如本文所述，涉及包含至少一种抗肿瘤剂和至少一种调节剂的遗传修饰的干细胞的癌症疗法通常用于治疗可触知的肿瘤。或者，如本文所述的方法和组合物用于治疗非肿瘤形成癌症。示例性的非肿瘤形成癌症是血液癌症，作为非限制性实例，诸如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
本文所述的组合物和方法减少或消除与癌症相关的症状。一些这样的症状是本领域已知的，包括但不限于疲劳、体重减轻、发热、疼痛、便秘、腹泻、异常出血以及癌症的其他体征和症状，包括早期死亡。在一些情况下，本文所述的癌症治疗针对间皮瘤，特别是胸膜间皮瘤。与胸膜间皮瘤相关的症状包括但不限于胸壁疼痛、胸腔积液、呼吸短促、疲劳、贫血、喘息、嘶哑、咳嗽、痰中带血、咳血或其组合。在其他情况下，本文所述的组合物和方法减少或消除与腹部间皮瘤相关的症状。与腹部间皮瘤相关的症状包括但不限于腹痛、腹水、腹部肿块、肠功能问题、体重减轻或其组合。在其他情况下，本文所述的组合物和方法减少或消除与严重间皮瘤相关的症状。与严重间皮瘤相关的症状包括但不限于静脉血块、血栓性静脉炎、弥散性血管内凝血、黄疸、低血糖、胸腔积液、肺栓塞、严重腹水或其组合。与癌症相关的症状通常与肿瘤大小和患病率有关。通常，癌症分期越晚，患者体内与癌症相关的症状就越明显。
使用遗传修饰的干细胞的治疗可增加癌细胞死亡。癌细胞死亡可增加约10％至约25％、约10％至约50％、约20％至约90％。癌细胞死亡可增加至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或大于95％。
在一些情况下，使用遗传修饰的干细胞的治疗减小肿瘤大小。有时，肿瘤大小减小至少约10％至约25％、约10％至约50％、约20％至约100％。在一些情况下，肿瘤大小减小至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或大于95％。在一些情况下，肿瘤大小减小5-95％、10-90％、20-80％、30-70％、40-60％、50-95％、65-85％或75-95％。在一些情况下，肿瘤大小减小至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。有时，肿瘤大小的减小是至少5％。在一些情况下，肿瘤大小的减小是至少10％。在一些情况下，肿瘤大小的减小是至少30％。在一些情况下，肿瘤大小的减小可以是至少50％。
在一些情况下，癌症的减少以与未用遗传修饰的干细胞单独治疗或其与手术、化疗或放疗联合治疗的患者相比，长期生存期的提高来衡量。有时，长期生存期提高5-95％、10-90％、20-80％、30-70％、40-60％、50-95％、65-85％或75-95％。在一些情况下，长期生存期提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。
在一些情况下，癌症的减少是癌症转移的减少。癌症转移可减少约5-95％、10-90％、20-80％、30-70％、40-60％、50-95％、65-85％或75-95％。癌症转移的减少可以是至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或大于95％。癌症转移的减少可以是至少5％。癌症转移的减少可以是至少10％。癌症转移的减少可以是至少30％。癌症转移的减少可以是至少50％。
转向附图，观察到以下情况：
图1描绘了腺病毒5载体表达盒。腺病毒5载体含有人IL-12和iCasp9。该表达盒在表达盒的每一端含有两个反向末端重复(ITR)。该表达盒还在iCaspase9基因的上游含有人巨细胞病毒(hCMV)启动子。血凝素(HA)标签在iCaspase9的下游。该表达盒在被接头隔开的IL-12亚单位p40(hIL-12p40)和p35(hIL-12p35)的上游含有hCMV启动子。该接头肽衍生自人弹性蛋白，并且允许生物活性IL-12被表达为单一肽。该图显示了用于转化MSC以表达抗肿瘤剂和凋亡剂的示例性表达盒。
图2A描绘了用于产生源自人骨髓或胎盘的MSC的程序工作流程。分离骨髓或胎盘，并消化组织。然后使细胞混合物在MSC生长培养基中生长2-3周，其中去除不需要的细胞。生长的时间长度可取决于供体。然后扩充纯MSC并冷冻保存。这演示了从组织中分离干细胞以及产生人MSC以供随后的遗传修饰。
图2B描绘了用于产生源自人骨髓或胎盘的MSC的程序工作流程。分离骨髓或胎盘，并消化组织。然后使细胞混合物在MSC生长培养基中生长3-4周，其中去除不需要的细胞。生长的时间长度可取决于供体。然后扩充纯MSC并冷冻保存。这演示了从组织中分离干细胞以及产生人MSC以供随后的遗传修饰。
图3A-图3D描绘了使用表面标志物CD34、CD11b、CD19、CD45、HLA-DR、CD90、CD105和CD73的纯MSC的流式细胞术图。图3A中的图具有103至106的X轴和Y轴。参见图3A，在左上方的Q1(象限1)中发现0.14％的MSC，在右上方的Q2(象限2)中发现1.65％的MSC，在右下方的Q3(象限3)中发现87.5％的MSC，在左下方的Q4(象限4)中发现10.7％的MSC(图3A)。参见图3B，91.5％的细胞表达CD90。图3B中的图具有100至103的X轴和100至104的Y轴。使用标志物CD73和CD105对MSC进行分选(图3C)。图3C中的图具有102至107的X轴和Y轴。参见图3C，在左上方象限的Q5(象限5)中发现0.88％的MSC，在右上方象限的Q6(象限6)中发现99.1％的MSC，在右下方的Q7(象限7)中发现0.020％的MSC，在左下方的Q8(象限8)中发现0.020％的MSC。参见图3D，该图具有100至104的X轴和100至104的Y轴。使用MSC标志物CD73和CD105对MSC进行分选以产生大于99％纯的MSC群体(图3D)。这些图示出了使用在细胞上表达的表面标志物对纯MSC群体的鉴别。
图4描绘了MSC的细胞分化试验的图像。在未分化的MSC(上图)与分化的MSC(下图)之间比较软骨细胞(左图)、骨细胞(中图)和脂肪细胞(右图)(图4)。与未分化的软骨细胞(左上图)、骨细胞(中上图)和脂肪细胞(右上图)相比，分化的软骨细胞(左下图)、骨细胞(中下图)和脂肪细胞(右下图)表现出改变的细胞形态学。通过用与软骨中的糖胺聚糖反应的阿尔新蓝(Alcian Blue)染色来确认分化的软骨细胞(左下图)。通过用与骨中的钙沉积物反应的茜素红(Alizarin Red)染色来确认分化的骨细胞(下中图)。通过用与细胞质内脂质反应的油红-O染色来确认分化的脂肪细胞(右下图)。该图示出了根据MSC分化成软骨细胞、骨细胞和脂肪细胞的能力对MSC的鉴别。
图5描绘了测定人胎盘来源的MSC产生人IL-12(IL-12p70)的图。使用Ad.IL-12p70将MSC转化24小时，其中0感染复数(MOI)(空心三角形)或50MOI(实心圆形)均为24小时。MOI是指病毒颗粒与MSC的比率。X轴描绘EGF、FGF、嗜酸性粒细胞趋化因子、TGFa、G-CSF、FLT-3L、GM-CSF、CXXXC趋化分子、IFN-a2、IFN-G、GRO、IL-10、MCP-3、IL-12p40、MDC、IL-12p70、IL-13、IL-15、sCD40L、IL-17A、IL-1RA、IL-1a、IL-9、IL-1b、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IP-10、MCP-1、MIP-1a、MIP-1b、TNF-a、TNF-b和VEGF。Y轴描绘-0.1至10,000的pg/mL(皮克/毫升)。该图描绘了由MSC分泌的以pg/mL为单位的IL-12p70，如箭头所示，其比未修饰的MSC高约2000倍。该图证明，遗传修饰的MSC分泌高水平的IL-12。
图6描绘了CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。用新鲜培养基、来自未修饰的MSC的条件培养基(未修饰的+CM)、来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基(腺病毒空壳+CM)或来自使用Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的条件培养基(Ad.IL-12.iCasp9+CM)处理细胞。然后通过流式细胞术测定增殖。用来自Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的条件培养基处理导致CD8+T细胞的86.5％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。用新鲜培养基处理的CD8+T细胞表现出49.5％的增殖。用来自未修饰的MSC的条件培养基处理的CD8+T细胞表现出45.1％的增殖。用来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基处理的CD8+T细胞表现出44.6％的增殖。X轴的标度为102至105，Y轴的标度为101至105。该图证明，遗传修饰的MSC向培养基中分泌刺激CD8+T细胞增殖的因子。
图7描绘了与新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的+活细胞)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒空壳+活细胞)或Ad.IL.12iCasp9转化的MSC(Ad.IL-12.iCasp9+活细胞)共培养的CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。CD8+T细胞与Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的共培养物表现出CD8+T细胞的77.4％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。用新鲜培养基处理的CD8+T细胞表现出49.5％的增殖。与未修饰的MSC共培养的CD8+T细胞表现出39.2％的增殖。与用腺病毒空壳转化的MSC共培养的CD8+T细胞表现出34.1％的增殖。X轴的标度为102至105，Y轴的标度为101至105。该图证明，遗传修饰的MSC刺激CD8+T细胞增殖。
图8描绘了用新鲜培养基、来自未修饰的MSC的条件培养基(未修饰的+CM)、来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基(腺病毒空壳+CM)或来自使用Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的条件培养基(Ad.IL-12.iCasp9+CM)处理的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。用来自Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的条件培养基处理导致CD4+T细胞的28.3％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。来自新鲜培养基的CD4+T细胞表现出15.8％的增殖。用来自未修饰的MSC的条件培养基处理的CD4+T细胞表现出15.3％的增殖。用来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基处理的CD4+T细胞表现出15.0％的增殖。X轴的标度为102至105，且标为Comp-PE-A。Y轴的标度为-103至105，且标为Comp-BV421-A。该图证明，遗传修饰的MSC向培养基中分泌刺激CD4+T细胞增殖的因子。
图9描绘了与新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的+活细胞)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒空壳+活细胞)或Ad.IL.12iCasp9转化的MSC(Ad.IL-12.iCasp9+活细胞)共培养的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。CD4+T细胞与Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的共培养物表现出CD4+T细胞的19.4％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。用新鲜培养基处理的CD4+T细胞表现出15.8％的增殖。与未修饰的MSC共培养的CD4+T细胞表现出12.1％的增殖。与用腺病毒空壳转化的MSC共培养的CD4+T细胞表现出10.5％的增殖。X轴的标度为102至105，且标为Comp-PE-A。Y轴的标度为-103至105，且标为Comp-BV421-A。该图证明，遗传修饰的MSC刺激CD4+T细胞增殖。
图10描绘了与未转导的MSC相比，用病毒空壳(腺病毒模拟物)或Ad.IL-12.iCasp9(Ad.IL-12)转导的人胎盘来源的MSC产生人IL-12的图。Y轴是由细胞分泌的IL-12p70的摩尔数，标度为0至1000000摩尔。
图11A-图11B描绘了用病毒空壳(腺病毒模拟物)或Ad.IL-12.iCasp9(Ad.IL-12)转导48小时的人胎盘来源的MSC中人IL-12p70表达的流式细胞术图。用病毒空壳转导的MSC表现出1.3％的增殖(图11A)。用Ad.IL-12转导的MSC表现出97.3％的增殖(图11B)。X轴的标度为100至104，Y轴的标度为100至104。
图12描绘了用人胎盘来源的MSC处理的CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。用新鲜培养基处理的MSC表现出49.6％的增殖。未修饰的MSC表现出39.2％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出34.1％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出77.4％的增殖。X轴的标度为102至105，Y轴的标度为101至105。
图13描绘了用人胎盘来源的MSC处理的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。用新鲜培养基处理的MSC表现出15.8％的增殖。未修饰的MSC表现出12.1％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出10.5％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出19.4％的增殖。X轴的标度为102至105，Y轴的标度为101至105。
图14描绘了用人骨髓来源的MSC处理的CD8+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。用新鲜培养基处理的MSC表现出37.6％的增殖。未修饰的MSC表现出29.6％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出33.8％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出86.1％的增殖。X轴的标度为102至105，Y轴的标度为101至105。
图15描绘了用人骨髓来源的MSC处理的CD4+T细胞的增殖的流式细胞术图。条件包括新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)。用新鲜培养基处理的MSC表现出21.7％的增殖。未修饰的MSC表现出19.6％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出19.4％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出34.7％的增殖。X轴的标度为102至105，Y轴的标度为101至105。
这些图证明，纯的MSC群体可被分离，使用包含IL-12和iCasp9的腺病毒进行遗传修饰，并随后影响T细胞应答。
定义
除非另有定义，否则本文所用的所有技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员所一般理解的相同的含义。
如本文所用的术语“干细胞”是指多细胞生物体的未分化细胞，其能够产生无限多的相同类型的细胞，并且通过分化由其产生某些其他种类的细胞。本申请的多细胞生物体的细胞可以是任何类型的真核细胞，例如哺乳动物细胞，例如狗、猫、牛、绵羊、白鼬或人的细胞。
如本文所用的术语“转化”及其语法等同语是指将外来DNA或其部分引入细胞内的过程。在一些情况下，通过腺病毒、慢病毒或腺伴随病毒进行转化。
术语“腺病毒”或“Ad”是指来自腺病毒科的一组无被膜DNA病毒。除人类宿主外，这些病毒还可以在禽类、牛、猪和犬物种中找到，但不限于此。
如本文所用的术语“抗肿瘤剂”被定义为减小肿瘤大小或消除肿瘤部位的药剂。
如本文所用的术语“凋亡剂”是指促进细胞死亡的药剂。为了控制凋亡剂的作用，凋亡剂优选是可诱导的。
如本文所用，术语“抗体”是指但不限于单克隆抗体、合成抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)(包括双特异性scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab’)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)或其表位结合片段。在一些情况下，抗体是免疫球蛋白分子或免疫球蛋白分子的免疫活性部分。在一些情况下，抗体来源于动物，包括鸟类和哺乳动物。或者，抗体是人或人源化单克隆抗体。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以实现预期应用的本文所述化合物的量，该应用包括但不限于如下定义的疾病治疗。治疗有效量可根据预期应用(体外或体内)或所治疗的受试者而变化，例如受试者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、给药方式等，这可以由本领域普通技术人员容易地确定。具体剂量将根据所选择的特定化合物、要遵循的给药方案、给药时间或将其携带在内的物理递送系统而变化。
如本文所用，“治疗”、“处理”及其语法等同语用来指获得有益或期望结果的途径，该结果包括但不限于治疗益处和/或预防益处。所谓治疗益处是指所治疗的潜在病症的减轻、根除或改善。治疗益处也可以如下实现：与潜在病症相关的一种或多种生理症状减轻、根除或改善，使得在患者中观察到改善，虽然该患者可能仍患有该潜在病症。为了获得预防益处，可以将组合物施用于处于发生特定疾病的风险下的患者，或施用于报告了疾病的一种或多种生理症状的患者，即使可能尚未对该疾病作出诊断。
如本文所用，“化疗”是指使用药物如化学化合物通过杀伤癌细胞或停止癌细胞分裂来停止癌细胞生长的治疗。
如本文所用，术语“放疗”是指涉及高能放射以缩小肿瘤和杀伤癌细胞的疗法。放射源的非限制性实例是X射线、γ射线、中子和质子。
如本文所用的术语“受试者”包括动物界的任何成员，包括人。
如本文所用的术语“蛋白质”是指通过连续肽键连接的氨基酸的任何聚合链，并且通常与“多肽”同义。术语“蛋白质”包括天然或修饰的蛋白质、蛋白质片段、包含非天然氨基酸残基的多肽类似物或其部分。在一些情况下，蛋白质是单体的。在其他情况下，蛋白质是聚合的。在一些情况下，氨基酸序列是天然存在的序列。在其他情况下，氨基酸序列由人进行工程化。氨基酸可以是L-光学异构体或D-光学异构体。多肽可以是至少三个氨基酸的链、拟肽、蛋白质、重组蛋白、(单克隆或多克隆)抗体、抗体片段、单链可变片段(scFv)、抗原、表位、酶、受体、维生素或者其结构类似物或组合。多肽链的长度可以变化。如本文所用，构成多肽的L-对映异构体和D-对映异构体氨基酸的缩写如下：丙氨酸(A，Ala)；精氨酸(R，Arg)；天冬酰胺(N，Asn)；天冬氨酸(D，Asp)；半胱氨酸(C，Cys)；谷氨酸(E，Glu)；谷氨酰胺(Q，Gln)；甘氨酸(G，Gly)；组氨酸(H，His)；异亮氨酸(I，Ile)；亮氨酸(L，Leu)；赖氨酸(K，Lys)；甲硫氨酸(M，Met)；苯丙氨酸(F，Phe)；脯氨酸(P，Pro)；丝氨酸(S，Ser)；苏氨酸(T，Thr)；色氨酸(W，Trp)；酪氨酸(Y，Tyr)；缬氨酸(V，Val)。X或Xaa可表示任何氨基酸。在某些情况下，蛋白质按其活性定义。例如，蛋白质包括与相应的天然蛋白质具有相当的生物学功能或生物学效应的蛋白质。在蛋白质的语境中，这通常意指在使用标准参数的情况下，多核苷酸或多肽包含与相应的天然蛋白质相比具有至少约20％、约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约98％或100％生物学功能的生物学功能或效应。可用于确定蛋白质活性的测定是本领域已知的。
如本文所用，术语“同源性”是指特定核酸或氨基酸序列与另一核酸或氨基酸序列之间的序列同一性百分比。
如本文所用，术语“包括”及其语法等同语说明存在所述特征、整数、步骤、操作、元件和/或组件，但不排除存在或添加一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元件、组件和/或其组。如本文所用，术语“和/或”包括一个或多个相关所列项目的任何和所有组合。
除非在上下文中明确说明或显而易见，否则如本文所用，关于数字或数字范围的术语“约”被理解为意指所述一个和多个数字+/-10％，或者比所列范围值的所列下限低10％以及比所列上限高10％。
援引并入
本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同特别地且单独地指出每一个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。
编号实施方案
编号实施方案1包括一种包含至少一种遗传修饰的干细胞的组合物，所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂。编号实施方案2包括编号实施方案1所述的组合物，其中所述干细胞是人源干细胞。编号实施方案3包括编号实施方案1-2所述的组合物，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案4包括编号实施方案1-3所述的组合物，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案5包括编号实施方案1-4所述的组合物，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案6包括编号实施方案1-5所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案7包括编号实施方案1-6所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂包括细胞因子。编号实施方案8包括编号实施方案1-7所述的组合物，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案9包括编号实施方案1-8所述的组合物，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案10包括编号实施方案1-9所述的组合物，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案11包括编号实施方案1-10所述的组合物，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案12包括编号实施方案1-11所述的组合物，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案13包括编号实施方案1-12所述的组合物，其中所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案14包括编号实施方案1-13所述的组合物，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案15包括编号实施方案1-14所述的组合物，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案16包括编号实施方案1-15所述的组合物，其中所述细胞因子包括转化生长因子β。编号实施方案17包括编号实施方案1-16所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案18包括编号实施方案1-17所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案19包括编号实施方案1-18所述的组合物，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案20包括编号实施方案1-19所述的组合物，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案21包括编号实施方案1-20所述的组合物，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案22包括编号实施方案1-21所述的组合物，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案23包括编号实施方案1-22所述的组合物，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案24包括编号实施方案1-23所述的组合物，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案25包括编号实施方案1-24所述的组合物，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案26包括编号实施方案1-25所述的组合物，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案27包括编号实施方案1-26所述的组合物，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案28包括编号实施方案1-27所述的组合物，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
编号实施方案29包括一种诱导受试者的免疫系统靶向癌细胞的方法，其包括向所述受试者体内引入至少一种遗传修饰的干细胞，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂。编号实施方案30包括编号实施方案29所述的方法，其中所述至少一种遗传修饰的干细胞通过注射引入所述受试者。编号实施方案31包括编号实施方案29-30所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。编号实施方案32包括编号实施方案29-31所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案33包括编号实施方案29-32所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案34包括编号实施方案29-33所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案35包括编号实施方案29-34所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案36包括编号实施方案29-35所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案37包括编号实施方案29-36所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案38包括编号实施方案29-37所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案39包括编号实施方案29-38所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案40包括编号实施方案29-39所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案41包括编号实施方案29-40所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案42包括编号实施方案29-41所述的方法，所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案43包括编号实施方案29-42所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案44包括编号实施方案29-43所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案45包括编号实施方案29-44所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案46包括编号实施方案29-45所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案47包括编号实施方案29-46所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案48包括编号实施方案29-47所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞进一步包括凋亡剂。编号实施方案49包括编号实施方案29-48所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案50包括编号实施方案29-49所述的方法，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案51包括编号实施方案29-50所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案52包括编号实施方案29-51所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案53包括编号实施方案29-52所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案54包括编号实施方案29-53所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案55包括编号实施方案29-54所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案56包括编号实施方案29-55所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案57包括编号实施方案29-56所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案58包括编号实施方案29-57所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
编号实施方案59包括一种向经历过肿瘤去除手术的受试者引入至少一种遗传修饰的干细胞的方法，所述干细胞包含编码抗肿瘤剂和凋亡剂的核酸。编号实施方案60包括编号实施方案59所述的方法，其中所述癌症是间皮瘤。编号实施方案61包括编号实施方案59-60所述的方法，其中所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。编号实施方案62包括编号实施方案59-61所述的方法，其中所述至少一种遗传修饰的干细胞是人源干细胞。编号实施方案63包括编号实施方案59-62所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案64包括编号实施方案59-63所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案65包括编号实施方案59-64所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案66包括编号实施方案59-65所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案67包括编号实施方案59-66所述的方法，其中所述核酸是细胞因子。编号实施方案68包括编号实施方案59-67所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案69包括编号实施方案59-68所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案70包括编号实施方案59-69所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案71包括编号实施方案59-70所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案72包括编号实施方案59-71所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案73包括编号实施方案59-72所述的方法，其中所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案74包括编号实施方案59-73所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案75包括编号实施方案59-74所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案76包括编号实施方案59-75所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案77包括编号实施方案59-76所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案78包括编号实施方案59-77所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案79包括编号实施方案59-78所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案80包括编号实施方案59-79所述的方法，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案81包括编号实施方案59-80所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案82包括编号实施方案59-81所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案83包括编号实施方案59-82所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案84包括编号实施方案59-83所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案85包括编号实施方案59-84所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案86包括编号实施方案59-85所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案87包括编号实施方案59-86所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案88包括编号实施方案59-87所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。编号实施方案89包括编号实施方案59-88所述的方法，其中所述手术去除肿瘤。编号实施方案90包括编号实施方案59-89所述的方法，其中所述手术是胸膜切除术或皮质剥除术。编号实施方案91包括编号实施方案59-90所述的方法，其中所述至少一种遗传修饰的干细胞通过注射引入所述受试者。编号实施方案92包括编号实施方案59-91所述的方法，其中所述至少一种遗传修饰的干细胞在手术前、与手术同时、在手术后1周、手术后2周、手术后1个月、手术后2个月、手术后3个月、手术后4个月、手术后5个月、手术后1年、手术后2年、手术后3年、手术后4年或手术后5年引入所述受试者。
编号实施方案93包括一种靶向受试者中的癌细胞以减轻癌症症状的方法，其包括向受所述试者引入至少一种遗传修饰的干细胞，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂，并且其中所述至少一种遗传修饰的干细胞在肿瘤去除后引入。编号实施方案94包括编号实施方案93所述的方法，其中所述癌症是间皮瘤。编号实施方案95包括编号实施方案93-94所述的方法，其中所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。编号实施方案96包括编号实施方案93-95所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。编号实施方案97包括编号实施方案93-96所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案98包括编号实施方案93-97所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案99包括编号实施方案93-98所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案100包括编号实施方案93-99所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案101包括编号实施方案93-100所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案102包括编号实施方案93-101所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案103包括编号实施方案93-102所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案104包括编号实施方案93-103所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案105包括编号实施方案93-104所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案106包括编号实施方案93-105所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案107包括编号实施方案93-106所述的方法，其中所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案108包括编号实施方案93-107所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案109包括编号实施方案93-108所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案110包括编号实施方案93-109所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案111包括编号实施方案93-110所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案112包括编号实施方案93-111所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案113包括编号实施方案93-112所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案114包括编号实施方案93-113所述的方法，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案115包括编号实施方案93-114所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案116包括编号实施方案93-115所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案117包括编号实施方案93-116所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案118包括编号实施方案93-117所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案119包括编号实施方案93-118所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案120包括编号实施方案93-119所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案121包括编号实施方案93-120所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案122包括编号实施方案93-121所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。编号实施方案123包括编号实施方案93-122所述的方法，其中手术去除肿瘤。编号实施方案124包括编号实施方案93-123所述的方法，其中所述手术是胸膜切除术或皮质剥除术。编号实施方案125包括编号实施方案93-124所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞在手术后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月或15个月通过注射引入。
编号实施方案126包括一种靶向癌症的方法，其包括向有需要的受试者引入至少一种遗传修饰的干细胞，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂。编号实施方案127包括编号实施方案126所述的方法，其中所述癌症是间皮瘤。编号实施方案128包括编号实施方案126-127所述的方法，其中所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。编号实施方案129包括编号实施方案126-128所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案130包括编号实施方案126-129所述的方法，其中所述核酸是细胞因子。编号实施方案131包括编号实施方案126-130所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案132包括编号实施方案126-131所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案133包括编号实施方案126-132所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案134包括编号实施方案126-133所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案135包括编号实施方案126-134所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案136包括编号实施方案126-135所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案137包括编号实施方案126-136所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案138包括编号实施方案126-137所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案139包括编号实施方案126-138所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案140包括编号实施方案126-139所述的方法，其中所述抗肿瘤剂被转化到干细胞中。编号实施方案141包括编号实施方案126-140所述的方法，其中所述干细胞是遗传修饰的干细胞。编号实施方案142包括编号实施方案126-141所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。编号实施方案143包括编号实施方案126-142所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案144包括编号实施方案126-143所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案145包括编号实施方案126-144所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案146包括编号实施方案126-145所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案147包括编号实施方案126-146所述的方法，所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案148包括编号实施方案126-147所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案149包括编号实施方案126-148所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案150包括编号实施方案126-149所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案151包括编号实施方案126-150所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案152包括编号实施方案126-151所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案153包括编号实施方案126-152所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案154包括编号实施方案126-153所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案155包括编号实施方案126-154所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
编号实施方案156包括一种将至少一种干细胞转化为至少一种遗传修饰的干细胞的方法，其包括用抗肿瘤剂和凋亡剂转化所述干细胞。编号实施方案157包括编号实施方案156所述的方法，其中所述干细胞用病毒转化。编号实施方案158包括编号实施方案156-157所述的方法，其中所述病毒是腺病毒、慢病毒和腺伴随病毒中的至少一种。编号实施方案159包括编号实施方案156-158所述的方法，其中所述至少一种遗传修饰的干细胞通过注射引入有需要的受试者。编号实施方案160包括编号实施方案156-159所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。编号实施方案161包括编号实施方案156-160所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案162包括编号实施方案156-161所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案163包括编号实施方案156-162所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案164包括编号实施方案156-163所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案165包括编号实施方案156-164所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案166包括编号实施方案156-165所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案167包括编号实施方案156-166所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案168包括编号实施方案156-167所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案169包括编号实施方案156-168所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案170包括编号实施方案156-169所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案171包括编号实施方案156-172所述的方法，其中所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案172包括编号实施方案156-171所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案173包括编号实施方案156-172所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案174包括编号实施方案156-173所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案175包括编号实施方案156-174所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案176包括编号实施方案156-175所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案177包括编号实施方案156-176所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案178包括编号实施方案156-177所述的方法，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案179包括编号实施方案156-178所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案180包括编号实施方案156-179所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案181包括编号实施方案156-180所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案182包括编号实施方案156-181所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案183包括编号实施方案156-182所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案184包括编号实施方案156-183所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案185包括编号实施方案156-184所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案186包括编号实施方案156-185所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
编号实施方案187包括一种药剂盒，其包含：遗传修饰的干细胞群体，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂，其中所述遗传修饰的干细胞群体被等分成用于给药的相关药物剂量。编号实施方案188包括编号实施方案187所述的方法，其中所述干细胞是人源干细胞。编号实施方案189包括编号实施方案187-188所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案190包括编号实施方案187-189所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案191包括编号实施方案187-190所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案192包括编号实施方案187-191所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞群体是冷冻的。编号实施方案193包括编号实施方案187-192所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞群体是自体的。编号实施方案194包括编号实施方案187-193所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞群体是同种异体的。编号实施方案195包括编号实施方案187-194所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞群体包含约500,000个细胞/kg至约1,000,000个细胞/kg。编号实施方案196包括编号实施方案187-195所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案197包括编号实施方案187-196所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括细胞因子。编号实施方案198包括编号实施方案187-197所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案199包括编号实施方案187-198所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案200包括编号实施方案187-199所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案201包括编号实施方案187-200所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案202包括编号实施方案187-201所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案203包括编号实施方案187-202所述的方法，其中所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案204包括编号实施方案187-203所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案205包括编号实施方案187-204所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案206包括编号实施方案187-205所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案207包括编号实施方案187-206所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案208包括编号实施方案187-207所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案209包括编号实施方案187-208所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案210包括编号实施方案187-209所述的方法，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案211包括编号实施方案187-210所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案212包括编号实施方案187-211所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案213包括编号实施方案187-212所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案214包括编号实施方案187-213所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案215包括编号实施方案187-214所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案216包括编号实施方案187-215所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案217包括编号实施方案187-216所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案218包括编号实施方案187-217所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
编号实施方案219包括一种测定至少一种遗传修饰的干细胞在癌症治疗中的治疗潜力的方法，所述干细胞包含抗肿瘤剂和凋亡剂。编号实施方案220包括编号实施方案219所述的方法，其中所述癌症是间皮瘤。编号实施方案221包括编号实施方案219-220所述的方法，其中所述间皮瘤是恶性胸膜间皮瘤。编号实施方案222包括编号实施方案219-221所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞是人源干细胞。编号实施方案223包括编号实施方案219-222所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案224包括编号实施方案219-223所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案225包括编号实施方案219-224所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案226包括编号实施方案219-225所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案227包括编号实施方案219-226所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案228包括编号实施方案219-227所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案229包括编号实施方案219-228所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案230包括编号实施方案219-229所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案231包括编号实施方案219-230所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案232包括编号实施方案219-231所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案233包括编号实施方案219-232所述的方法，其中所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案234包括编号实施方案219-233所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案235包括编号实施方案219-234所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案236包括编号实施方案219-235所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案237包括编号实施方案219-236所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案238包括编号实施方案219-237所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案239包括编号实施方案219-238所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案240包括编号实施方案219-239所述的方法，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案241包括编号实施方案219-240所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案242包括编号实施方案219-241所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案243包括编号实施方案219-242所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案244包括编号实施方案219-243所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案245包括编号实施方案219-244所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案246包括编号实施方案219-245所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案247包括编号实施方案219-246所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案248包括编号实施方案219-247所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。编号实施方案249包括编号实施方案219-248所述的方法，其中所述遗传修饰的干细胞在手术后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月或15个月通过注射引入。编号实施方案250包括编号实施方案219-249所述的方法，其中所述治疗潜力通过与癌症相关的症状的减少或消除而测定。编号实施方案251包括编号实施方案219-250所述的方法，其中所述与癌症相关的症状包括胸壁疼痛、胸腔积液、呼吸短促、疲劳、贫血、喘息、嘶哑、咳嗽、痰中带血、咳血、腹痛、腹水、腹部肿块、肠功能问题、体重减轻、静脉血块、血栓性静脉炎、弥散性血管内凝血、黄疸、低血糖、胸腔积液、肺栓塞和严重腹水中的至少一种。
编号实施方案252包括一种通过施用至少一种遗传修饰的干细胞来抑制创伤愈合反应的方法，所述干细胞包含抗肿瘤剂和凋亡剂。编号实施方案253包括编号实施方案252所述的方法，其中所述干细胞是人源干细胞。编号实施方案254包括编号实施方案252-253所述的方法，其中所述人源干细胞是间充质干细胞。编号实施方案255包括编号实施方案252-254所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘。编号实施方案256包括编号实施方案252-255所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人骨髓。编号实施方案257包括编号实施方案252-256所述的方法，其中所述抗肿瘤剂由核酸编码。编号实施方案258包括编号实施方案252-257所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括细胞因子。编号实施方案259包括编号实施方案252-258所述的方法，其中所述细胞因子包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案260包括编号实施方案252-259所述的方法，其中所述细胞因子是白介素。编号实施方案261包括编号实施方案252-260所述的方法，其中所述白介素是白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35或白介素-36中的至少一种。编号实施方案262包括编号实施方案252-261所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案263包括编号实施方案252-262所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案264包括编号实施方案252-263所述的方法，其中所述白介素-12的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案265包括编号实施方案252-264所述的方法，其中所述细胞因子是干扰素。编号实施方案266包括编号实施方案252-265所述的方法，其中所述干扰素包括干扰素-α、干扰素-β、干扰素-ε、干扰素-κ、干扰素-ω或干扰素-γ中的至少一种。编号实施方案267包括编号实施方案252-266所述的方法，其中所述细胞因子是转化生长因子β。编号实施方案268包括编号实施方案252-267所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括编码p53蛋白的核酸。编号实施方案269包括编号实施方案252-268所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是病毒。编号实施方案270包括编号实施方案252-269所述的方法，其中所述凋亡剂由核酸编码。编号实施方案271包括编号实施方案252-270所述的方法，其中所述核酸编码诱导型胱天蛋白酶。编号实施方案272包括编号实施方案252-271所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13或胱天蛋白酶-14中的至少一种。编号实施方案273包括编号实施方案252-272所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案274包括编号实施方案252-273所述的方法，其中所述胱天蛋白酶-9的核酸通过腺病毒转化到所述干细胞中。编号实施方案275包括编号实施方案252-274所述的方法，其中所述核酸编码细胞因子。编号实施方案276包括编号实施方案252-275所述的方法，其中所述细胞因子是肿瘤坏死因子。编号实施方案277包括编号实施方案252-276所述的方法，其中所述肿瘤坏死因子包括肿瘤坏死因子α或肿瘤坏死因子β中的至少一种。编号实施方案278包括编号实施方案252-277所述的方法，其中所述核酸编码黄素蛋白。编号实施方案279包括编号实施方案252-278所述的方法，其中所述黄素蛋白包括凋亡诱导因子。
编号实施方案280包括一种包含至少一种遗传修饰的干细胞的组合物，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂。编号实施方案281包括编号实施方案280所述的组合物，其中所述干细胞是人源干细胞。编号实施方案282包括编号实施方案280-281所述的组合物，其中所述干细胞是间充质干细胞。编号实施方案283包括编号实施方案280-282所述的组合物，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘或人骨髓。编号实施方案284包括编号实施方案280-283所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂具有细胞因子活性。编号实施方案285包括编号实施方案280-284所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案286包括编号实施方案280-285所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂包括白介素。编号实施方案287包括编号实施方案280-286所述的组合物，其中所述白介素包括选自由白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35和白介素-36组成的列表的至少一种白介素。编号实施方案288包括编号实施方案280-287所述的组合物，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案289包括编号实施方案280-288所述的组合物，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案290包括编号实施方案280-289所述的组合物，其中所述凋亡剂由外源信号诱导。编号实施方案291包括编号实施方案280-290所述的组合物，其中所述凋亡剂具有胱天蛋白酶活性。编号实施方案292包括编号实施方案280-291所述的组合物，其中所述胱天蛋白酶包括选自由胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13和胱天蛋白酶-14组成的列表的至少一种胱天蛋白酶。编号实施方案293包括编号实施方案280-292所述的组合物，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案294包括编号实施方案280-293所述的组合物，其进一步包含用于施用所述遗传修饰的干细胞的载体。编号实施方案295包括编号实施方案280-294所述的组合物，其中所述载体包括生物聚合物。
编号实施方案296包括一种靶向肿瘤切除部位的癌症的方法，其包括：向肿瘤切除部位引入包含抗肿瘤剂和凋亡剂的组合物，其中所述抗肿瘤剂诱导免疫应答；以及施用外源信号以从有需要的受试者清除所述组合物。编号实施方案297包括编号实施方案296所述的方法，其中所述组合物在肿瘤切除后立即施用。编号实施方案298包括编号实施方案295-297所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、脑癌、膀胱癌、子宫内膜癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌、间皮瘤和黑素瘤中的至少一种。编号实施方案299包括编号实施方案295-298所述的方法，其中所述癌症是间皮瘤。编号实施方案300包括编号实施方案295-299所述的方法，其中所述抗肿瘤剂在干细胞中表达。编号实施方案301包括编号实施方案295-300所述的方法，其中所述干细胞是人源干细胞。编号实施方案302包括编号实施方案295-301所述的方法，其中所述干细胞是间充质干细胞。编号实施方案303包括编号实施方案295-302所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘或骨髓。编号实施方案304包括编号实施方案295-303所述的方法，其中所述抗肿瘤剂具有细胞因子活性。编号实施方案305包括编号实施方案295-304所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括两种或更多种细胞因子的融合物。编号实施方案306包括编号实施方案295-305所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括白介素。编号实施方案307包括编号实施方案295-306所述的方法，其中所述白介素包括选自由白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35和白介素-36组成的列表的至少一种白介素。编号实施方案308包括编号实施方案295-307所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。编号实施方案309包括编号实施方案295-308所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。编号实施方案310包括编号实施方案295-309所述的方法，其中所述凋亡剂由所述外源信号诱导。编号实施方案311包括编号实施方案295-310所述的方法，其中所述凋亡剂具有胱天蛋白酶活性。编号实施方案312包括编号实施方案295-311所述的方法，其中所述胱天蛋白酶包括选自由胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13和胱天蛋白酶-14组成的列表的至少一种胱天蛋白酶。编号实施方案313包括编号实施方案295-312所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。编号实施方案314包括编号实施方案295-313所述的方法，其中全身施用所述外源信号。编号实施方案315包括编号实施方案295-314所述的方法，其中所述外源信号诱导所述凋亡剂的多聚化。
实施例
以下实施例是说明性的，而非限制本文所述的组合物和方法的范围。
实施例1：人间充质干细胞系的产生与表征
分离并消化骨髓或胎盘。然后使细胞混合物在间充质干细胞(MSC)生长培养基中在去除不需要的细胞的情况下生长2-3周(图2A)或生长3-4周(图2B)。扩充纯MSC，并使用MSC上的表面标志物如CD34、CD11b、CD19、CD45、HLA-DR、CD90、CD105和CD73通过流式细胞术进行表型鉴别(图3A-图3D)。针对CD90的表达和CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR表达的缺乏鉴别MSC(图3A-图3B)。在第一个实验中，87.5％的MSC显示出CD90的高表达以及CD34、CD11b、CD19、CD45、HLA-DR的低表达(图3A)。在第二个实验中，91.5％的MSC显示出CD90的高表达以及CD34、CD11b、CD19、CD45、HLA-DR的低表达(图3B)。使用MSC标志物CD73和CD105对MSC进行分选，以产生纯度大于95％的MSC群体(图3C-图3D)。
使用细胞分化试验鉴别纯MSC(图4)。使用分化成软骨细胞、骨细胞和脂肪细胞的能力来鉴别人MSC。在未分化的MSC(上图)与分化的MSC(下图)之间比较软骨细胞(左图)、骨细胞(中图)和脂肪细胞(右图)。如图4中所示，与未分化的软骨细胞(左上图)、骨细胞(中上图)和脂肪细胞(右上图)相比，分化的软骨细胞(左下图)、骨细胞(中下图)和脂肪细胞(右下图)表现出改变的细胞形态学。此外，与未分化的骨细胞(中上图)和脂肪细胞(右上图)相比，分化的骨细胞(中下图)和脂肪细胞(右下图)表现出染色增加。
本实施例图示了从组织中分离MSC并产生纯的MSC群体。根据几种标志物的表达及其分化成软骨细胞、骨细胞和脂肪细胞的能力来鉴别MSC。
实施例2：MSC的IL-12分泌
用含有人IL-12基因和诱导型胱天蛋白酶9基因(iCasp9)的腺病毒载体转化人MSC。以0感染复数(MOI)或50MOI将MSC转化24小时。以pg/mL为单位测定来自MSC的人IL-12(IL-12p70)的量(图5)。除了IL-12p70之外，还测定了几种趋化因子、细胞因子和其他分子(图5)。其中包括EGF、FGF、嗜酸性粒细胞趋化因子、TGFa、G-CSF、FLT-3L、GM-CSF、CXXXC趋化分子、IFN-a2、IFN-G、GRO、IL-10、MCP-3、IL-12p40、MDC、IL-12p70、IL-13、IL-15、sCD40L、IL-17A、IL-1RA、IL-1a、IL-9、IL-1b、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IP-10、MCP-1、MIP-1a、MIP-1b、TNF-a、TNF-b和VEGF(图5)。由MSC分泌的IL-12p70的量比未修饰的MSC高约2000倍。
本实施例证明，用包含人IL-12和iCasp9的腺病毒转化的MSC分泌高水平的IL-12。
实施例3：来自产生IL-12的MSC的条件培养基增强体外增殖
在用来自产生IL-12的MSC的条件培养基(CM)处理后，测定CD8+T细胞和CD4+T细胞的增殖。
如图6中所示，用新鲜培养基、来自未修饰的MSC的条件培养基(未修饰的+CM)、来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基(腺病毒空壳+CM)或来自使用具有人IL-12和iCasp9的腺病毒转化的MSC的条件培养基(Ad.IL-12iCasp9+CM)处理细胞。然后通过流式细胞术测定CD8+T细胞的增殖。用来自Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的条件培养基处理导致CD8+T细胞的86.5％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。来自新鲜培养基的CD8+T细胞表现出49.5％的增殖。用来自未修饰的MSC的条件培养基处理的CD8+T细胞表现出45.1％的增殖。用来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基处理的CD8+T细胞表现出44.6％的增殖。
用来自Ad.IL-12iCasp9转化的MSC的条件培养基也观察到CD4+T细胞的增强的体外增殖(图8)。用新鲜培养基、来自未修饰的MSC的条件培养基(未修饰的+CM)、来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基(腺病毒空壳+CM)或来自使用具有人IL-12和iCasp9的腺病毒转化的MSC的条件培养基(Ad.IL-12iCasp9+CM)处理细胞。用来自Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的条件培养基处理导致CD4+T细胞的28.3％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。来自新鲜培养基的CD4+T细胞表现出15.8％的增殖。用来自未修饰的MSC的条件培养基处理的CD4+T细胞表现出15.3％的增殖。用来自用腺病毒空壳转化的MSC的条件培养基处理的CD4+T细胞表现出15.0％的增殖。
本实施例证明，遗传修饰的MSC向培养基中分泌增加CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖的因子。
实施例4：与Ad.IL-12iCasp9转化的MSC共培养增强体外增殖
与Ad-IL-12iCasp9转化的MSC共培养的细胞表现出增强的体外增殖。
在于新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的+活细胞)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒空壳+活细胞)或Ad.IL.12iCasp9转化的MSC(Ad.IL-12.iCasp9+活细胞)中共培养的细胞中测定CD8+T细胞增殖(图7)。然后通过流式细胞术测定CD8+T细胞的增殖。CD8+T细胞与Ad.IL.12iCasp9转化的MSC的共培养物表现出CD8+T细胞的77.4％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。用新鲜培养基处理的CD8+T细胞表现出49.5％的增殖。与未修饰的MSC共培养的CD8+T细胞表现出39.2％的增殖。与用腺病毒空壳转化的MSC共培养的CD8+T细胞表现出34.1％的增殖。
当在新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的+活细胞)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒空壳+活细胞)或Ad.IL.12iCasp9转化的MSC(Ad.IL-12.iCasp9+活细胞)中共培养时，CD4+T细胞也表现出增加的增殖(图9)。与Ad.IL.12iCasp9转化的MSC共培养的CD4+T细胞表现出CD4+T细胞的19.4％的增殖，这与其他处理条件相比得到增强。用新鲜培养基处理的CD4+T细胞表现出15.8％的增殖。与未修饰的MSC共培养的CD4+T细胞表现出12.1％的增殖。与用腺病毒空壳转化的MSC共培养的CD4+T细胞表现出10.5％的增殖。
本实施例证明，遗传修饰的MSC刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖。
实施例5：产生IL-12的人MSC
对MSC进行遗传修饰，并测定其表达和对增殖的影响。
测定人胎盘来源的MSC的人IL-12(IL-12p70)产生。用病毒空壳(腺病毒模拟物)或Ad.IL-12.iCasp9(Ad.IL-12)将MSC转导48小时。如图10中所示，在未转导的MSC、用病毒空壳(腺病毒模拟物)或Ad.IL-12.iCasp9(Ad.IL-12)转导的MSC中测定由MSC分泌的IL-12p70以摩尔为单位的量。
在人胎盘来源的MSC中测定细胞内人IL-12p70的表达。用病毒空壳(腺病毒模拟物)或Ad.IL-12.iCasp9(Ad.IL-12)将MSC转导48小时，并通过流式细胞术测定人IL-12p70表达。病毒空壳(腺病毒模拟物)的转导导致1.3％的人IL-12p70的MSC表达(图11A)，而Ad.IL-12p70(Ad.IL-12)的转导导致97.3％的IL-12p70的MSC表达(图11B)。
在CD8+T细胞中测定人胎盘来源的IL-12MSC的增殖作用。将细胞与新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)共培养4天。在CD8+T细胞中测定增殖。用新鲜培养基处理的MSC表现出49.6％的增殖。未修饰的MSC表现出39.2％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出34.1％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出77.4％的增殖。参见图12。
在CD4+T细胞中测定人胎盘来源的IL-12MSC的增殖作用。将细胞与新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)共培养4天。在CD4+T细胞中测定增殖。用新鲜培养基处理的MSC表现出15.8％的增殖。未修饰的MSC表现出12.1％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出10.5％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出19.4％的增殖。参见图13。
在CD8+T细胞中测定骨髓胎盘来源的IL-12MSC的增殖作用。将细胞与新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)共培养4天。在CD8+T细胞中测定增殖。用新鲜培养基处理的MSC表现出37.6％的增殖。未修饰的MSC表现出29.6％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出33.8％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出86.1％的增殖。参见图14。
在CD4+T细胞中测定骨髓胎盘来源的IL-12MSC的增殖作用。将细胞与新鲜培养基、未修饰的MSC(未修饰的)、用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)和用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)共培养4天。在CD4+T细胞中测定增殖。用新鲜培养基处理的MSC表现出21.7％的增殖。未修饰的MSC表现出19.6％的增殖。用腺病毒空壳转化的MSC(腺病毒模拟物)表现出19.4％的增殖。用Ad.IL-12转化的MSC(Ad.IL-12)表现出34.7％的增殖。参见图15。
本实施例证明，遗传修饰的MSC刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖。
实施例6：间皮瘤小鼠模型中的遗传修饰的MSC
测试了遗传修饰的MSC在间皮瘤小鼠模型中的作用。
从小鼠骨髓中分离小鼠C57BL/6间充质干细胞(mMSC)并进行培养。用腺病毒转化mMSC以表达小鼠白介素-12(mIL-12)基因。还用腺病毒转化mMSC以表达mIL-12基因和小鼠胱天蛋白酶-9(mCasp-9)基因。遗传修饰的mMSC显示出体外mIL-12的分泌增加。使用由30只在胸腔的间皮内层中具有病灶的小鼠组成的恶性间皮瘤小鼠模型来研究遗传修饰的MSC的作用。向一组10只小鼠注射盐水作为对照。第二组10只小鼠在肿瘤部位注射表达mIL-12的遗传修饰的mMSC。第三组10只小鼠在肿瘤部位注射表达mIL-12和iCasp9的遗传修饰的mMSC。到注射后第24周，注射表达mIL-12的遗传修饰的mMSC的9只小鼠以及注射表达mIL-12和iCasp9的遗传修饰的MSC的9只小鼠存活，而仅有一只注射盐水的小鼠存活。到注射后第24周，一旦肿瘤大小减小，就进一步用药剂处理注射了表达mIL-12和iCasp9的mMSC的小鼠，以激活m-Casp9。
切除并分析来自不同处理组的肿瘤。注射遗传修饰的mMSC的小鼠表现出肿瘤大小减小。肿瘤的免疫细胞化学分析还证明，从注射了遗传修饰的mMSC的小鼠切除的肿瘤中免疫细胞浸润增加，与来自注射盐水的小鼠的肿瘤形成对照。
实施例7：通过手术治疗癌症患者
100名由于石棉暴露而被诊断为患有恶性胸膜间皮瘤(MPM)的患者经历手术以去除恶性肿瘤，并维持进行放疗和化疗。
虽然肿瘤被切除，但癌细胞并未完全去除。放疗和化疗导致创伤反应以及剩余的癌细胞的增殖增加。因此，肿瘤回归，并且到手术后第5年，患者几乎全部具有MPM复发，存活率仅为13％。
实施例8：在手术切除肿瘤后用遗传修饰的干细胞治疗患者
100名由于石棉暴露而被诊断为患有恶性胸膜间皮瘤(MPM)的患者经历手术以去除恶性肿瘤。在手术后一周，通过腔内输注施用表达IL-12和iCasp9的遗传修饰的干细胞，以靶向手术后剩余的癌细胞。
在6个月后，进行PET扫描以确定肿瘤减小。还进行血液检验以确定循环癌细胞的减少。一旦肿瘤显著减少，就施用AP1903以消除遗传修饰的干细胞并防止遗传修饰的干细胞的潜在不良反应。
与单独的手术相比，经受手术和遗传修饰的干细胞治疗的患者表现出较少的癌症复发。遗传修饰的干细胞的施用触发免疫应答并引起在肿瘤切除周围剩余的癌细胞的清除。结果是，在施用遗传修饰的干细胞后，肿瘤部位的增殖和创伤较少，并且癌症肿瘤并不复发。
实施例9：通过免疫疗法治疗癌症患者
一患者被诊断为患有MPM，并且用被编程为靶向患者癌细胞上的抗原的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)进行治疗。到治疗后第5年，接受CAR-T细胞治疗的患者有40％具有MPM复发，存活率为60％。
一患者被诊断为患有MPM，并且用CAR-T细胞和化疗进行治疗。到治疗后第5年，接受化疗和免疫疗法的患者与接受CAR-T细胞治疗的患者相比具有相似的MPM复发和存活率。
一患者被诊断为患有MPM，并且用检查点抑制剂进行治疗。该检查点抑制剂是伊匹木单抗——细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的一种单克隆抗体抑制剂。或者，该检查点抑制剂是纳武单抗——程序性死亡蛋白1(PD-1)的一种单克隆抗体抑制剂。
虽然肿瘤用免疫疗法进行了治疗，但癌细胞并未完全去除。癌细胞能够增殖并且肿瘤复发。用检查点抑制剂治疗的患者也经历了MPM复发。
实施例10：通过免疫疗法和遗传修饰的干细胞治疗癌症患者
一患者被诊断为患有MPM，并且用被编程为靶向患者癌细胞上的抗原的CAR-T细胞进行治疗。在CAR-T细胞治疗后，通过腔内输注施用表达IL-12和iCasp9的遗传修饰的干细胞，以靶向剩余的癌细胞。
在6个月后，进行PET扫描以确定肿瘤减小。还进行血液检验以确定循环癌细胞的减少。一旦肿瘤显著减少，就施用AP1903以消除遗传修饰的干细胞并防止MSC的潜在不良反应。
与单独的免疫疗法相比，经历免疫疗法和遗传修饰的干细胞治疗的患者表现出较少的癌症复发。与单独的CAR-T疗法相比，施用遗传修饰的干细胞引发增强的免疫应答。结果是将癌细胞从患者中清除。
实施例11：用IL-12治疗患者
100名患者被诊断为患有黑素瘤，并且在肿瘤部位接受IL-12重组蛋白注射。患者接受媒介物注射、每次治疗250ng/kg/天的IL-12或500ng/kg/天的IL-12，每3天治疗一次，持续一周。通过PET扫描监测肿瘤大小，接受IL-12注射的肿瘤表现出肿瘤大小减小。相比于注射较低剂量或媒介物的患者，接受较高剂量IL-12的患者显示出肿瘤大小减小更多。与来自接受媒介物注射的患者的活检物相比，经受注射的病灶的活检物显示出更多的T细胞活化和免疫细胞浸润。到手术后第5年，接受IL-12治疗的患者有40％具有MPM复发，存活率为60％。
实施例12：用表达IL-12的遗传修饰的干细胞治疗患者
100名患者被诊断为患有黑色素瘤，并通过腔内输注施用表达IL-12的遗传修饰的干细胞。通过PET扫描监测肿瘤大小，在六个月结束时，肿瘤大小减小。经受注射的病灶的活检物显示出T细胞活化和免疫细胞浸润。用遗传修饰的干细胞治疗的患者表现出激活的免疫应答，并且癌细胞被清除。与接受IL-12注射的患者相比，用表达IL-12的遗传修饰的干细胞治疗的患者表现出较少的副作用，包括较低的死亡发生率。
实施例13：使用遗传修饰的间充质干细胞治疗癌症
本研究的目的在于评价包含来源于成人骨髓的遗传修饰MSC的组合物的潜在功效，该MSC被修饰为在治疗乳腺癌时表达IL-12和iCasp-9基因。通过直接注射到肿瘤部位，将干细胞移植到III期或IV期乳腺癌患者中。
本研究使用总共100名患者。患者合格性列于表4中。对患者进行干细胞收集，并使用腺病毒用人IL-12基因和iCasp-9基因转化干细胞。一天后，患者接受遗传修饰的干细胞的自体干细胞移植。
表4.患者合格性
在接受遗传修饰的干细胞的自体干细胞移植的100名患者中，有85名患者在治疗后6个月显示出减轻的乳腺癌症状和肿瘤生长的显著减少，如通过PET扫描所确定的。一旦肿瘤细胞在患者体内几乎检测不到，就施用AP1903以消除遗传修饰的MSC，以便减轻MSC的潜在临床不良反应。
实施例14：用自体间充质干细胞治疗患者
使用经遗传修饰以表达IL-12和iCasp-9基因的来源于成人骨髓的自体MSC来治疗乳腺癌患者。
本研究使用总共100名患者。从100名患者中各自分离MSC并进行遗传修饰。在手术期间将MSC施用于III期或IV期乳腺癌患者。在肿瘤去除后，在去除部位施用遗传修饰的MSC。
在接受遗传修饰的干细胞的自体干细胞移植的100名患者中，有80名患者在治疗后6个月显示出减轻的乳腺癌症状和肿瘤生长的显著减少，如通过PET扫描所确定的。一旦肿瘤细胞在患者体内几乎检测不到，就施用AP1903以消除遗传修饰的MSC，以便减轻MSC的潜在临床不良反应。
实施例15：用同种异体间充质干细胞治疗患者
使用经遗传修饰以表达IL-12和iCasp-9基因的来源于成人骨髓的同种异体MSC来治疗乳腺癌患者。
本研究使用总共100名患者。解冻经冷冻的遗传修饰的干细胞的组合物，并在手术期间施用于III期或IV期乳腺癌患者。在肿瘤去除后且在解冻10分钟内，在去除部位施用包含遗传修饰的MSC的组合物。
在接受遗传修饰的干细胞的同种异体干细胞移植的100名患者中，多于50％的患者在治疗后6个月显示出减轻的乳腺癌症状和肿瘤生长的显著减少，如通过PET扫描所确定的。一旦肿瘤细胞在患者体内几乎检测不到，就施用AP1903以消除遗传修饰的MSC，以便减轻MSC的潜在临床不良反应。
实施例16：通过IL-2治疗和遗传修饰的干细胞治疗癌症患者
用高剂量白介素-2(IL-2，Proleukin)以及表达IL-12和iCasp-9基因的遗传修饰的干细胞治疗癌症患者。
本研究使用总共100名患者。患者通过静脉内输注全身施用高剂量白介素-2(IL-2，Proleukin)和遗传修饰的干细胞。通过PET扫描监测肿瘤生长数月。一旦肿瘤细胞在患者体内几乎检测不到，就施用AP1903以消除遗传修饰的MSC，以便减轻MSC的潜在临床不良反应。
虽然本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到许多变化、改变和替代。应当理解，在实施本发明的过程中可采用本文描述的本发明实施方案的各种替代方案。以下权利要求书旨在限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
序列表
<110> 太平洋心肺血研究所
<120> 用于治疗癌症的组合物和方法
<130> 49537-701.601
<140>
<141>
<150> 62/347,005
<151> 2016-06-07
<160> 13
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 536
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Cys His Gln Gln Leu Val Ile Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu
1 5 10 15
Ala Ser Pro Leu Val Ala Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val
20 25 30
Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu
35 40 45
Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln
50 55 60
Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys
65 70 75 80
Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val
85 90 95
Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp
100 105 110
Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe
115 120 125
Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp
130 135 140
Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser
165 170 175
Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu
180 185 190
Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile
195 200 205
Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr
210 215 220
Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn
225 230 235 240
Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp
245 250 255
Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr
260 265 270
Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg
275 280 285
Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala
290 295 300
Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser
305 310 315 320
Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
325 330 335
Val Gly Ala Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe
340 345 350
Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met
355 360 365
Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu
370 375 380
Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu
385 390 395 400
Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser
405 410 415
Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys
420 425 430
Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu
435 440 445
Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met
450 455 460
Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile
465 470 475 480
Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln
485 490 495
Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu
500 505 510
Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg
515 520 525
Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser
530 535
<210> 2
<211> 397
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 2
Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met
1 5 10 15
Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro
20 25 30
Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu
35 40 45
Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser
50 55 60
Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro
65 70 75 80
His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Gly
85 90 95
Gly Gly Ser Gly Val Asp Gly Phe Gly Asp Val Gly Ala Leu Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Gly Asn Ala Asp Leu Ala Tyr Ile Leu Ser Met Glu Pro Cys
115 120 125
Gly His Cys Leu Ile Ile Asn Asn Val Asn Phe Cys Arg Glu Ser Gly
130 135 140
Leu Arg Thr Arg Thr Gly Ser Asn Ile Asp Cys Glu Lys Leu Arg Arg
145 150 155 160
Arg Phe Ser Ser Leu His Phe Met Val Glu Val Lys Gly Asp Leu Thr
165 170 175
Ala Lys Lys Met Val Leu Ala Leu Leu Glu Leu Ala Gln Gln Asp His
180 185 190
Gly Ala Leu Asp Cys Cys Val Val Val Ile Leu Ser His Gly Cys Gln
195 200 205
Ala Ser His Leu Gln Phe Pro Gly Ala Val Tyr Gly Thr Asp Gly Cys
210 215 220
Pro Val Ser Val Glu Lys Ile Val Asn Ile Phe Asn Gly Thr Ser Cys
225 230 235 240
Pro Ser Leu Gly Gly Lys Pro Lys Leu Phe Phe Ile Gln Ala Cys Gly
245 250 255
Gly Glu Gln Lys Asp His Gly Phe Glu Val Ala Ser Thr Ser Pro Glu
260 265 270
Asp Glu Ser Pro Gly Ser Asn Pro Glu Pro Asp Ala Thr Pro Phe Gln
275 280 285
Glu Gly Leu Arg Thr Phe Asp Gln Leu Asp Ala Ile Ser Ser Leu Pro
290 295 300
Thr Pro Ser Asp Ile Phe Val Ser Tyr Ser Thr Phe Pro Gly Phe Val
305 310 315 320
Ser Trp Arg Asp Pro Lys Ser Gly Ser Trp Tyr Val Glu Thr Leu Asp
325 330 335
Asp Ile Phe Glu Gln Trp Ala His Ser Glu Asp Leu Gln Ser Leu Leu
340 345 350
Leu Arg Val Ala Asn Ala Val Ser Val Lys Gly Ile Tyr Lys Gln Met
355 360 365
Pro Gly Cys Phe Asn Phe Leu Arg Lys Lys Leu Phe Phe Lys Thr Ser
370 375 380
Val Asp Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Leu Asp
385 390 395
<210> 3
<211> 413
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 3
Met Leu Glu Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg
1 5 10 15
Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met
20 25 30
Leu Glu Asp Gly Lys Lys Val Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro
35 40 45
Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu
50 55 60
Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro
85 90 95
His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Val Asp Gly Phe Gly Asp Val Gly Ala Leu Glu Ser
115 120 125
Leu Arg Gly Asn Ala Asp Leu Ala Tyr Ile Leu Ser Met Glu Pro Cys
130 135 140
Gly His Cys Leu Ile Ile Asn Asn Val Asn Phe Cys Arg Glu Ser Gly
145 150 155 160
Leu Arg Thr Arg Thr Gly Ser Asn Ile Asp Cys Glu Lys Leu Arg Arg
165 170 175
Arg Phe Ser Ser Leu His Phe Met Val Glu Val Lys Gly Asp Leu Thr
180 185 190
Ala Lys Lys Met Val Leu Ala Leu Leu Glu Leu Ala Gln Gln Asp His
195 200 205
Gly Ala Leu Asp Cys Cys Val Val Val Ile Leu Ser His Gly Cys Gln
210 215 220
Ala Ser His Leu Gln Phe Pro Gly Ala Val Tyr Gly Thr Asp Gly Cys
225 230 235 240
Pro Val Ser Val Glu Lys Ile Val Asn Ile Phe Asn Gly Thr Ser Cys
245 250 255
Pro Ser Leu Gly Gly Lys Pro Lys Leu Phe Phe Ile Gln Ala Cys Gly
260 265 270
Gly Glu Gln Lys Asp His Gly Phe Glu Val Ala Ser Thr Ser Pro Glu
275 280 285
Asp Glu Ser Pro Gly Ser Asn Pro Glu Pro Asp Ala Thr Pro Phe Gln
290 295 300
Glu Gly Leu Arg Thr Phe Asp Gln Leu Asp Ala Ile Ser Ser Leu Pro
305 310 315 320
Thr Pro Ser Asp Ile Phe Val Ser Tyr Ser Thr Phe Pro Gly Phe Val
325 330 335
Ser Trp Arg Asp Pro Lys Ser Gly Ser Trp Tyr Val Glu Thr Leu Asp
340 345 350
Asp Ile Phe Glu Gln Trp Ala His Ser Glu Asp Leu Gln Ser Leu Leu
355 360 365
Leu Arg Val Ala Asn Ala Val Ser Val Lys Gly Ile Tyr Lys Gln Met
370 375 380
Pro Gly Cys Phe Asn Phe Leu Arg Lys Lys Leu Phe Phe Lys Thr Ser
385 390 395 400
Val Asp Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Leu Asp
405 410
<210> 4
<211> 328
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Met Cys His Gln Gln Leu Val Ile Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu
1 5 10 15
Ala Ser Pro Leu Val Ala Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val
20 25 30
Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu
35 40 45
Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln
50 55 60
Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys
65 70 75 80
Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val
85 90 95
Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp
100 105 110
Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe
115 120 125
Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp
130 135 140
Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser
165 170 175
Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu
180 185 190
Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile
195 200 205
Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr
210 215 220
Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn
225 230 235 240
Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp
245 250 255
Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr
260 265 270
Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg
275 280 285
Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala
290 295 300
Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser
305 310 315 320
Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser
325
<210> 5
<211> 253
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Met Trp Pro Pro Gly Ser Ala Ser Gln Pro Pro Pro Ser Pro Ala Ala
1 5 10 15
Ala Thr Gly Leu His Pro Ala Ala Arg Pro Val Ser Leu Gln Cys Arg
20 25 30
Leu Ser Met Cys Pro Ala Arg Ser Leu Leu Leu Val Ala Thr Leu Val
35 40 45
Leu Leu Asp His Leu Ser Leu Ala Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro
50 55 60
Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg
65 70 75 80
Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr
85 90 95
Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys
100 105 110
Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu
115 120 125
Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys
130 135 140
Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser
145 150 155 160
Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn
165 170 175
Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn
180 185 190
Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser
195 200 205
Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys
210 215 220
Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala
225 230 235 240
Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser
245 250
<210> 6
<211> 285
<212> PRT
<213> 智人
<400> 6
Gly Ser Gly Gly Phe Gly Asp Val Gly Ala Leu Glu Ser Leu Arg Gly
1 5 10 15
Asn Ala Asp Leu Ala Tyr Ile Leu Ser Met Glu Pro Cys Gly His Cys
20 25 30
Leu Ile Ile Asn Asn Val Asn Phe Cys Arg Glu Ser Gly Leu Arg Thr
35 40 45
Arg Thr Gly Ser Asn Ile Asp Cys Glu Lys Leu Arg Arg Arg Phe Ser
50 55 60
Ser Leu His Phe Met Val Glu Val Lys Gly Asp Leu Thr Ala Lys Lys
65 70 75 80
Met Val Leu Ala Leu Leu Glu Leu Ala Gln Gln Asp His Gly Ala Leu
85 90 95
Asp Cys Cys Val Val Val Ile Leu Ser His Gly Cys Gln Ala Ser His
100 105 110
Leu Gln Phe Pro Gly Ala Val Tyr Gly Thr Asp Gly Cys Pro Val Ser
115 120 125
Val Glu Lys Ile Val Asn Ile Phe Asn Gly Thr Ser Cys Pro Ser Leu
130 135 140
Gly Gly Lys Pro Lys Leu Phe Phe Ile Gln Ala Cys Gly Gly Glu Gln
145 150 155 160
Lys Asp His Gly Phe Glu Val Ala Ser Thr Ser Pro Glu Asp Glu Ser
165 170 175
Pro Gly Ser Asn Pro Glu Pro Asp Ala Thr Pro Phe Gln Glu Gly Leu
180 185 190
Arg Thr Phe Asp Gln Leu Asp Ala Ile Ser Ser Leu Pro Thr Pro Ser
195 200 205
Asp Ile Phe Val Ser Tyr Ser Thr Phe Pro Gly Phe Val Ser Trp Arg
210 215 220
Asp Pro Lys Ser Gly Ser Trp Tyr Val Glu Thr Leu Asp Asp Ile Phe
225 230 235 240
Glu Gln Trp Ala His Ser Glu Asp Leu Gln Ser Leu Leu Leu Arg Val
245 250 255
Ala Asn Ala Val Ser Val Lys Gly Ile Tyr Lys Gln Met Pro Gly Cys
260 265 270
Phe Asn Phe Leu Arg Lys Lys Leu Phe Phe Lys Thr Ser
275 280 285
<210> 7
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 7
Glu Phe Leu Ile Asp
1 5
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 8
Pro Asp Pro Asp Met Ile Arg Tyr Ile Asp Glu Phe Gly Gln Thr
1 5 10 15
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 9
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 10
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 10
Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 11
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 12
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
<210> 13
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成6xHis标签
<400> 13
His His His His His His
1 5

Claims (36)

1.一种包含至少一种遗传修饰的干细胞的组合物，其中所述干细胞被修饰为表达抗肿瘤剂和凋亡剂。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述干细胞是人源干细胞。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述干细胞是间充质干细胞。
4.如权利要求3所述的组合物，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘或人骨髓。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂具有细胞因子活性。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂包括两种或更多种细胞因子的融合物。
7.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂包括白介素。
8.如权利要求7所述的组合物，其中所述白介素包括选自由白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35和白介素-36组成的列表的至少一种白介素。
9.如权利要求7所述的组合物，其中所述白介素包括白介素-12。
10.如权利要求9所述的组合物，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。
11.如权利要求1所述的组合物，其中所述凋亡剂由外源信号诱导。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述凋亡剂具有胱天蛋白酶活性。
13.如权利要求12所述的组合物，其中所述胱天蛋白酶包括选自由胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13和胱天蛋白酶-14组成的列表的至少一种胱天蛋白酶。
14.如权利要求12所述的组合物，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。
15.如权利要求1所述的组合物，其进一步包含用于将所述遗传修饰的干细胞施用于肿瘤切除部位的载体。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述载体包括生物聚合物。
17.一种靶向肿瘤切除部位的癌症的方法，其包括：
a.向所述肿瘤切除部位引入包含抗肿瘤剂和凋亡剂的组合物，其中所述抗肿瘤剂诱导免疫应答；以及
b.施用外源信号以从所述肿瘤切除部位清除所述组合物。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述组合物在肿瘤切除后立即施用。
19.如权利要求17所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、脑癌、膀胱癌、子宫内膜癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌、间皮瘤和黑素瘤中的至少一种。
20.如权利要求17所述的方法，其中所述癌症是间皮瘤。
21.如权利要求17所述的方法，其中所述抗肿瘤剂在干细胞中表达。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述干细胞是人源干细胞。
23.如权利要求21所述的方法，其中所述干细胞是间充质干细胞。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述间充质干细胞来源于人胎盘或骨髓。
25.如权利要求21所述的方法，其中所述抗肿瘤剂具有细胞因子活性。
26.如权利要求17所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括两种或更多种细胞因子的融合物。
27.如权利要求17所述的方法，其中所述抗肿瘤剂包括白介素。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述白介素包括选自由白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12、白介素-13、白介素-14、白介素-15、白介素-16、白介素-17、白介素-18、白介素-19、白介素-20、白介素-21、白介素-22、白介素-23、白介素-24、白介素-25、白介素-26、白介素-27、白介素-28、白介素-29、白介素-30、白介素-31、白介素-32、白介素-33、白介素-34、白介素-35和白介素-36组成的列表的至少一种白介素。
29.如权利要求27所述的方法，其中所述白介素包括白介素-12。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述白介素-12包括IL-12p40与IL-12p35的融合物。
31.如权利要求17所述的方法，其中所述凋亡剂由所述外源信号诱导。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述凋亡剂具有胱天蛋白酶活性。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述胱天蛋白酶包括选自由胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-2、胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-4、胱天蛋白酶-5、胱天蛋白酶-6、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-8、胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-10、胱天蛋白酶-13和胱天蛋白酶-14组成的列表的至少一种胱天蛋白酶。
34.如权利要求32所述的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶-9。
35.如权利要求17所述的方法，其中全身施用所述外源信号。
36.如权利要求17所述的方法，其中所述外源信号诱导所述凋亡剂的多聚化。
CN201780049088.8A 2016-06-07 2017-06-07 用于治疗癌症的组合物和方法 Pending CN109561691A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662347005P 2016-06-07 2016-06-07
US62/347,005 2016-06-07
PCT/US2017/036332 WO2017214262A1 (en) 2016-06-07 2017-06-07 Compositions and methods for treating cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109561691A true CN109561691A (zh) 2019-04-02

Family

ID=60482092

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780049088.8A Pending CN109561691A (zh) 2016-06-07 2017-06-07 用于治疗癌症的组合物和方法

Country Status (5)

Country Link
US (2) US10201592B2 (zh)
EP (1) EP3462883B1 (zh)
CN (1) CN109561691A (zh)
AU (1) AU2017277499B2 (zh)
WO (1) WO2017214262A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111358938A (zh) * 2020-03-30 2020-07-03 温州肯恩大学(Wenzhou-KeanUniversity) 人干扰素-ε与干扰素-γ组合药及用途

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3009123A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Oncosec Medical Incorporated Plasmid constructs for heterologous protein expression and methods of use
US10201592B2 (en) 2016-06-07 2019-02-12 The Pacific Heart, Lung, & Blood Institute Compositions and methods for treating mesothelioma post-surgery
CA3059634A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Senti Biosciences, Inc. Combinatorial cancer immunotherapy
US11844834B2 (en) * 2018-02-02 2023-12-19 Sl Vaxigen, Inc. Vaccine adjuvant
CN108795853B (zh) * 2018-05-28 2021-08-24 天津博雅秀岩生物技术有限公司 制备犬胎膜间充质干细胞的方法和犬胎膜间充质干细胞
EP3866813A4 (en) 2018-10-17 2022-08-03 Senti Biosciences, Inc. COMBINATORY CANCER IMMUNOTHERAPY
US11419898B2 (en) 2018-10-17 2022-08-23 Senti Biosciences, Inc. Combinatorial cancer immunotherapy
SG11202105472QA (en) * 2018-12-11 2021-06-29 Oncosec Medical Inc Multigene construct for immune-modulatory protein expression and methods of use
CN116479022A (zh) * 2018-12-12 2023-07-25 中南大学 一种重组car19-il24基因、慢病毒载体、car19-il24-t细胞及应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101272798A (zh) * 2005-09-29 2008-09-24 亚洲大学校产学协力团 基因修饰以表达自杀基因的骨髓间充质干细胞用于治疗癌症的用途
CN102695517A (zh) * 2009-04-13 2012-09-26 埃普塞斯有限责任两合公司 经改造的间充质干细胞和用其治疗肿瘤的方法
CN104160027A (zh) * 2012-02-01 2014-11-19 浦项工科大学校产学协力团 同时表达十二聚体trail及hsv-tk自杀基因的载体及利用其的抗癌干细胞治疗剂
US20160129110A1 (en) * 2013-03-14 2016-05-12 Autoimmune Technologies, Llc Immunoprotective primary mesenchymal stem cells and methods

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2552590A1 (en) * 2004-01-05 2005-07-21 Emd Lexigen Research Center Corp. Interleukin-12 targeted to oncofoetal fibronectin
US7964571B2 (en) * 2004-12-09 2011-06-21 Egen, Inc. Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases
JP2017528433A (ja) * 2014-07-21 2017-09-28 ノバルティス アーゲー 低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤とＣＡＲの組み合わせ
US10201592B2 (en) 2016-06-07 2019-02-12 The Pacific Heart, Lung, & Blood Institute Compositions and methods for treating mesothelioma post-surgery

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101272798A (zh) * 2005-09-29 2008-09-24 亚洲大学校产学协力团 基因修饰以表达自杀基因的骨髓间充质干细胞用于治疗癌症的用途
CN102695517A (zh) * 2009-04-13 2012-09-26 埃普塞斯有限责任两合公司 经改造的间充质干细胞和用其治疗肿瘤的方法
CN104160027A (zh) * 2012-02-01 2014-11-19 浦项工科大学校产学协力团 同时表达十二聚体trail及hsv-tk自杀基因的载体及利用其的抗癌干细胞治疗剂
US20160129110A1 (en) * 2013-03-14 2016-05-12 Autoimmune Technologies, Llc Immunoprotective primary mesenchymal stem cells and methods

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CARLOS A. RAMOS ET AL.: ""An Inducible Caspase 9 Suicide Gene to Improve the Safety of Mesenchymal Stromal Cell Therapies"", 《STEM CELLS》 *
JORDI MARTINEZ-QUINTANILLA ET AL.: ""Therapeutic efficacy and fate of bimodal engineered stem cells in malignant brain tumors"", 《STEM CELLS》 *
KHALID SHAH: ""Mesenchymal Stem Cells engineered for Cancer Therapy"", 《ADV DRUG DELIV REV.》 *
徐远明 等: ""间充质干细胞在肿瘤靶向治疗中的应用"", 《国际口腔医学杂志》 *
杜珍武 等: ""人白细胞介素12两个亚基基因 p35、p40拼接的新方法"", 《吉林大学学报（医学版）》 *
赵雯红 等: ""转染IL-12基因的人脐带间充质干细胞对卵巢癌细胞的体外增殖和对裸鼠体内移植瘤的抑制作用"", 《南方医科大学学报》 *
韩瑞发 等: "《肾移植分子免疫基础与临床》", 31 October 2005, 人民军医出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111358938A (zh) * 2020-03-30 2020-07-03 温州肯恩大学(Wenzhou-KeanUniversity) 人干扰素-ε与干扰素-γ组合药及用途
CN111358938B (zh) * 2020-03-30 2023-08-11 温州肯恩大学(Wenzhou-KeanUniversity) 人干扰素-ε与干扰素-γ组合药及用途

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017277499B2 (en) 2022-07-28
US10201592B2 (en) 2019-02-12
EP3462883B1 (en) 2023-08-16
AU2017277499A1 (en) 2019-01-24
US20190183977A1 (en) 2019-06-20
US11103555B2 (en) 2021-08-31
US20170348390A1 (en) 2017-12-07
WO2017214262A1 (en) 2017-12-14
EP3462883A4 (en) 2020-02-26
EP3462883A1 (en) 2019-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109561691A (zh) 用于治疗癌症的组合物和方法
JP7262403B2 (ja) 新規の細胞タグの発現
ES2553421T3 (es) Método y composiciones para el funcionamiento potenciado del efector antitumoral de células T
JP6676759B2 (ja) 抗原特異的ｔｃｒの新規生成
CN110191898A (zh) Cd33特异性嵌合抗原受体
CN108884140A (zh) 修饰的嵌合受体及相关组合物和方法
CN107207616A (zh) 抗cd70嵌合抗原受体
US11230698B2 (en) Cytokine receptor genes and the use thereof to enhance therapy
CN101896191A (zh) 用于输送到xcr1阳性细胞中的系统及其用途
KR20160120335A (ko) 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법
BG61080B1 (bg) Модифициран биологичен материал
ES2927220T3 (es) Composiciones y procedimientos de módulos suicidas
CN107523546A (zh) 一种高效稳定表达抗体的nk细胞及其用途
CN114835781A (zh) Wtn多肽及其在检测、治疗癌症中的用途
JP2009507827A5 (zh)
KR20220052987A (ko) Ebv 유래 항원에 특이적인 tcr 작제물
CN104961833B (zh) 一种人源NKp80-Fc融合蛋白及其制备方法和在肿瘤治疗中的应用
WO2024109906A1 (zh) 一种融合多肽及其用途
Lim et al. Host cell in vivo production of the synthetic drug anti–CD25/IL‐10 using minicircle vector
AU2018281316B2 (en) Expression of novel cell tags
Topping et al. Head and neck tumour immunology: basic concepts and new clinical implications
JP2024515064A (ja) 新規方法
TW202237825A (zh) 針對同種異體細胞療法的通用嵌合抗原受體表現之免疫細胞
Erdei et al. Re.: a letter of nomination for Prof Stipan Jonjić

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination