CN101080227B - 用于治疗癌症的治疗剂的组合 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于对患有增殖性疾病或者与持续的血管生成有关的疾病的患者进行治疗的联合疗法。用喜树碱衍生物和一种或多种选自微管活化剂；烷化剂；抗肿瘤的抗代谢物；铂化合物；拓扑异构酶II抑制剂；VEGF抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；EGFR激酶抑制剂；mTOR激酶抑制剂；胰岛素样生长因子I抑制剂；Raf激酶抑制剂；单克隆抗体；蛋白酶体抑制剂；HDAC抑制剂；和电离辐射的化疗剂对所述患者进行治疗。

Description

用于治疗癌症的治疗剂的组合
本发明涉及一种使用药物组合来预防或治疗哺乳动物增殖性疾病或与持续的血管生成有关或者由持续的血管生成触发的疾病的方法，所说的药物组合包括：
(a)喜树碱衍生物；和
(b)一种或多种化疗剂。
本发明还涉及包含如下成分的药物组合物：
(a)喜树碱衍生物；
(b)一种或多种化疗剂；和
(c)可药用的载体。
本发明还涉及一种包含如下成分的商业包装或产品：
(a)喜树碱衍生物的药物制剂；和
(b)用于同时、并行、独立或顺序应用的一种或多种化疗剂的药物制剂。
组合伴侣(a)和(b)可以以一种联合单位剂型或者两个独立单位剂型的形式被一起给药、一个接一个地给药或者独立给药。所说的单位剂型也可以是一种固定的组合。
背景技术
喜树碱以及其衍生物是细胞毒性剂，其通过抑制拓扑异构酶I(在临床上验证了的药物靶点，其通常在恶性细胞中过表达)而表现出抗肿瘤活性。喜树碱以及其衍生物通过干扰细胞酶——拓扑异构酶I对超螺旋DNA的解旋而起作用，其触发了导致恶性细胞中细胞凋亡和编程性死亡的事件。
本发明的概述
现在已经令人吃惊地发现，当与其它化疗剂联用时，喜树碱衍生物更为有效。在功效和安全性方面，其既具有协同优点，又具有加和优点。化疗剂与喜树碱衍生物的组合的治疗作用可以产生组合中各组分的较低安全剂量范围。
本发明涉及一种用药物活性剂的组合来预防或治疗哺乳动物(优选人)的增殖性疾病或与持续的血管生成有关或者由持续的血管生成触发的疾病的方法，所说的组合包含：
(a)喜树碱衍生物；和
(b)一种或多种化疗剂。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含：
(a)喜树碱衍生物；
(b)一种或多种化疗剂；和
(c)可药用的载体。
本发明还涉及一种商业包装或产品，其包含：
(a)喜树碱衍生物的药物制剂；和
(b)用于同时、并行、独立或顺序应用的一种或多种化疗剂的药物制剂。
化疗剂
术语“化疗剂”具有覆盖了许多具有不同作用机理的化疗剂的广义含义。这些化疗剂中的一些与喜树碱衍生物的组合可以改善癌症的治疗。通常根据作用机理来对化疗剂进行分类。许多可获得的活性剂是各种肿瘤发育途径的抗代谢物，或者可以与肿瘤细胞的DNA发生反应。
术语“化疗剂”尤其是指除拓扑异构酶I抑制剂或其衍生物外的任何化疗剂。其非限制性地包括一种或多种下面的物质：
i.微管活化剂；
ii.烷化剂；
iii.抗肿瘤的抗代谢物；
iv.铂化合物；
v.拓扑异构酶II抑制剂；
vi.靶向/降低蛋白或脂质激酶活性或蛋白或脂质磷酸酶活性的化合物；
vii.单克隆抗体；
viii.蛋白酶体抑制剂；
ix.HDAC抑制剂；和
x.损害肿瘤细胞的方法，如电离辐射。
这里所用的术语“微管活化剂”涉及微管稳定剂、微管去稳定剂和微管蛋白(microtublin)聚合抑制剂，非限制性地包括紫杉烷类，例如，紫杉醇和多西紫杉醇(docetaxel)；长春花属生物碱，例如，长春碱，尤其是硫酸长春碱；长春新碱，尤其是硫酸长春新碱和长春瑞滨；海绵内酯类；秋水仙碱以及埃坡霉素及其衍生物，例如，埃坡霉素B或其衍生物。紫杉醇以TAXOL的形式进行销售；多西紫杉醇以TAXOTERE的形式进行销售；硫酸长春碱以VINBLASTIN R.P的形式进行销售；硫酸长春新碱以FARMISTIN的形式进行销售。还包括紫杉醇的一般形式以及紫杉醇的各种剂型。紫杉醇的一般形式非限制性地包括盐酸倍他洛尔。紫杉醇的各种剂型非限制性地包括以ABRAXANE；ONXOL，CYTOTAX的形式市售的白蛋白纳米微粒紫杉醇。海绵内酯例如可以如US专利5,010,099中所公开的那样获得。还包括在US专利6,194,181、WO 98/10121、WO 98/25929、WO 98/08849、WO 99/43653、WO 98/22461和WO 00/31247中公开的埃坡霉素衍生物。尤其优选的是埃坡霉素A和/或B。
这里所用的术语“烷化剂”非限制性地包括环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑或亚硝基脲(BCNU或Gliadel)或替莫唑胺(TEMODAR)。环磷酰胺例如可以以其市售形式，例如以CYCLOSTIN的商标进行市售的形式进行给药；异环磷酰胺可以以HOLOXAN的形式进行给药。
术语“抗肿瘤的抗代谢物”非限制性地包括5-氟尿嘧啶(5-FU)；卡培他滨；吉西他滨；DNA脱甲基化剂，如5-氮杂胞苷和地西他滨；甲氨蝶呤；依达曲沙；和叶酸拮抗剂，例如但不仅限于培美曲塞。卡培他滨例如可以以其市售形式，例如以XELODA的商标进行市售的形式进行给药；吉西他滨可以以GEMZAR的形式进行给药。
这里所用的术语“铂化合物”非限制性地包括卡铂、顺铂(cisplatin)、顺铂(cisplatinum)、奥沙利铂、沙铂和铂试剂，如ZD0473。卡铂例如可以以其市售的形式，例如CARBOPLAT的形式进行给药；奥沙利铂可以以ELOXATIN的形式进行给药。
这里所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”非限制性地包括蒽环类抗生素，如多柔比星，包括脂质体制剂，例如，CAELYX；柔红霉素，包括脂质体制剂，例如DAUNOSOME；表柔比星；伊达比星和奈莫柔比星；蒽醌类米托蒽醌和洛索蒽醌；和鬼臼毒素木脂素类(podophillotoxines)依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷以ETOPOPHOS的形式进行销售；替尼泊苷以VM 26-BRISTOL的形式进行销售；柔比星以ADRIBLASTIN或ADRIAMYCIN的形式进行销售；表柔比星以FARMORUBICIN的形式进行销售；伊达比星以ZAVEDOS的形式进行销售；米托蒽醌以NOVANTRON的形式进行销售。
这里所用的术语“靶向/降低蛋白或脂质激酶活性或蛋白或脂质磷酸酶活性的化合物；或者其它抗血管生成化合物”非限制性地包括蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，例如，
i.靶向、降低或抑制血管内皮生长因子(VEGF)受体活性的化合物，如靶向、降低或抑制VEGF活性的化合物，尤其是抑制VEGF受体的化合物，非限制性地例如7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物；BAY43-9006；在WO 00/09495中公开的异喹啉化合物，如(4-叔-丁基-苯基)-(4-吡啶-4-基甲基-异喹啉-1-基)-胺；
ii.靶向、降低或抑制血小板衍生生长因子(PDGF)受体活性的化合物，如靶向、降低或抑制PDGF受体活性的化合物，尤其是抑制PDGF受体的化合物，例如，N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如，伊马替尼(imatinib)、SU101、SU6668和GFB-111；
iii.靶向、降低或抑制成纤维细胞生长因子(FGF)受体活性的化合物；
iv.靶向、降低或抑制胰岛素样生长因子受体1(IGF-1R)活性的化合物，如靶向、降低或抑制IGF-IR活性的化合物，尤其是抑制IGF-1R受体的化合物。这些化合物非限制性地包括WO 02/092599中所公开的化合物以及其衍生物，4-氨基-5-苯基-7-环丁基-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物；
v.靶向、降低或抑制Trk受体酪氨酸激酶族活性的化合物；
vi.靶向、降低或抑制Axl受体酪氨酸激酶族活性的化合物；
vii.靶向、降低或抑制c-Met受体活性的化合物；
viii.靶向、降低或抑制Ret受体酪氨酸激酶活性的化合物；
ix.靶向、降低或抑制Kit/SCFR受体酪氨酸激酶活性的化合物；
x.靶向、降低或抑制C-kit受体酪氨酸激酶(PDGFR族的一部分)活性的化合物，如靶向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶族活性的化合物，尤其是抑制c-Kit受体的化合物，例如，伊马替尼；xi.靶向、降低或抑制c-Abl族成员以及其基因融合产物，例如，BCR-Abl激酶的活性的化合物，如靶向、降低或抑制c-AbI族成员以及其基因融合产物活性的化合物，例如，N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如，伊马替尼、PD180970、AG957、NSC 680410或得自ParkeDavis的PD173955；或BMS354825；
xii.靶向、降低或抑制蛋白激酶C(PKC)成员和丝氨酸/丝氨酸激酶的Raf族成员、MEK、SRC、JAK、FAK、PDK和Ras/MAPK族成员、或PI(3)激酶族成员、或与PI(3)-激酶有关的激酶族成员、和/或细胞周期蛋白依赖性激酶族(CDK)成员活性的化合物，并且尤其是在US专利5,093,330中公开的星形孢碱衍生物，例如，米哚妥林；另一些化合物的实例包括例如，UCN-01；沙芬戈；BAY43-9006；苔藓抑素(Bryostatin)1；哌立福辛；依莫福新；RO 318220和RO 320432；GO 6976；Isis 3521；LY333531/LY379196；异喹啉化合物，如WO 00/09495中公开的化合物；FTIs；PD184352或QAN697，一种P13K抑制剂；
xiii.靶向、降低或抑制蛋白-酪氨酸激酶活性的化合物，如甲磺酸伊马替尼(GLEEVEC)；酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)或嘧啶基氨基苯甲酰胺以及其衍生物。酪氨酸磷酸化抑制剂优选地是一种低分子量(Mr<1500)化合物，或其可药用的盐，尤其是选自亚苄基丙二腈类或S-芳基苯丙二腈的化合物或二底物(bisubstrate)喹啉类的化合物，更尤其是选自酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810、AG99、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213、酪氨酸磷酸化抑制剂AG1748、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490、酪氨酸磷酸化抑制剂B44、酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映异构体、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 555、AG494、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556的任何化合物；AG957；和adaphostin(4-{[(2，5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410，adaphostin)；
xiv.靶向、降低或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子族(均或杂二聚体形式的EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4)，如靶向、降低或抑制表皮生长因子受体族活性的化合物尤其是抑制EGF受体酪氨酸激酶族成员，例如，EGF受体、ErbB2、ErbB3和ErbB4或者与EGF或EGF相关配体的化合物、蛋白或抗体，并且特别是WO97/02266中进行了一般和具体公开的化合物、蛋白或单克隆抗体，例如，实施例39的化合物，或者EP 0 564 409、WO 99/03854、EP0520722、EP 0 566 226、EP 0 787 722、EP 0 837 063、US专利5,747,498、WO 98/10767、WO 97/30034、WO 97/49688、WO97/38983并且尤其是WO 96/30347中的化合物，例如，被称为CP358774的化合物，WO 96/33980中的化合物，例如，化合物ZD 1839；和WO 95/03283中的化合物，例如，化合物ZM105180，例如，曲妥单抗(HERCEPTIN)、西妥昔单抗、Iressa、OSI-774、CI-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3、和{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺、埃罗替尼和吉非替尼。埃罗替尼可以以其市售的形式，例如，TARCEVA的形式进行给药，吉非替尼可以以IRESSA的形式进行给药、对抗表皮生长因子受体的人单克隆抗体(包括ABX-EGFR)；和
xv.靶向、降低或抑制丝氨酸/丝氨酸mTOR激酶的活性/功能的化合物尤其是靶向/抑制mTOR激酶族成员的化合物、蛋白或抗体，例如，RAD、RAD001、CCI-779、ABT578、SAR543、雷帕霉素以及其衍生物/类似物、得自Ariad的AP23573和AP23841、依维莫司(CERTICAN)和西罗莫司。CERTICAN(依维莫司，RAD)是一种在调查研究的预防T-细胞和血管平滑肌细胞增生的新型增殖信号抑制剂。
这里所用的术语“单克隆抗体”非限制性地包括贝伐单抗、西妥昔单抗、曲妥单抗、替伊莫单抗和脱西莫单抗和碘I131。贝伐单抗可以以其市售形式，例如，AVASTIN的形式进行给药；西妥昔单抗可以以ERBITUX的形式进行给药；曲妥单抗可以以HERCEPTIN的形式进行给药；利妥昔单抗可以以MABTHERA的形式进行给药；替伊莫单抗可以以ZEVULIN的形式进行给药；脱西莫单抗和碘I 131可以以BEXXAR的形式进行给药。
这里所用的术语“蛋白酶体抑制剂”包括靶向、降低或抑制蛋白体活性的化合物。靶向、降低或抑制蛋白体活性的化合物非限制性地包括PS-341；MLN 341、硼替佐米或velcade。
这里所用的术语“HDAC抑制剂”指的是抑制组蛋白脱乙酰基酶并具有抗增殖活性的化合物。其非限制性地包括WO 02/22577中所公开的化合物，尤其是N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺；和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺；以及其可药用的盐。还包括辛二酰基苯胺(suberoylanilide)异羟肟酸(SAHA)；[4-(2-氨基-苯基氨基甲酰基)-苄基]-氨基甲酸吡啶-3-基甲基酯以及其衍生物；丁酸、pyroxamide、曲古抑菌素(trichostatin)A、oxamflatin、apicidin、缩酚酸肽、depudecin和trapoxin。
“损害肿瘤细胞的方法”指的是诸如电离辐射之类的方法。上下文的术语“电离辐射”指的是以电磁射线，如X-射线和γ射线；或微粒，如α、β和γ微粒形式发生的电离辐射。电离辐射非限制性地在放疗中被提供并且在现有技术中是已知的。见Hellman，Cancer，第4版，第1卷，Devita等人编辑，第248-275页(1993)。
在给出引用专利申请或科技出版物的各种情况中，特别是在涉及其中各自的化合物权利要求和工作实施例的终产物的情况中，其终产物的主题物质、药物制剂以及权利要求都通过涉及这些出版物而被引入到本申请中作为参考。同样包括其中公开的相应的立体异构体以及相应的结晶变型，例如，溶剂化物和多晶型。被用作这里所公开的组合中的活性成分的化合物可以分别如所引用的文献中所述的那样来进行制备和给药。
用代号、属名或商标名确定的活性剂的结构可以得自标准纲要“TheMerck Index”的现行版本或者得自数据库例如Patents International，例如，IMS World Publications、或者上下文所述的公开物。其相应的内容在这里被引入作为参考。
应当清楚的是，在涉及组分(a)和(b)时还包括所述任何一种活性物质的可药用的盐。如果组分(a)和/或(b)中所包括的活性物质具有例如至少一个碱性中心，则其可以形成酸加成盐。如果需要的话，还可以形成具有另外存在的碱性中心的相应的酸加成盐。具有酸性基团，例如COOH的活性物质可以与碱形成盐。组分(a)和/或(b)中所包括的活性物质或其可药用的盐还可以以水合物的形式进行应用或者可以包括其它结晶用溶剂。7-叔-丁氧基亚氨基甲基-喜树碱是最优选的组合伴侣(a)。
用于本发明的喜树碱衍生物包括US专利6,242,457(其在这里被引入作为参考)中所公开的化合物并且具有下面的式(I)：
Figure S05842979820070618D000091
其中
R1是-C(R5)＝N-O(n)R4，
其中
R4是氢或C1-C8直链或支链烷基或C1-C8直链或支链链烯基或C3-C10环烷基、或C3-C10环烷基C1-C8直链或支链烷基、或C6-C14芳基、或C6-C14芳基C1-C8直链或支链烷基、或杂环基或杂环基C1-C8直链或支链烷基，所说的杂环基团包含至少一个选自氮原子(任选地被C1-C8烷基所取代)和/或氧和/或硫的杂原子；所说的烷基、链烯基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基-烷基、杂环基或杂环基烷基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素、羟基、酮基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、苯基、氰基、硝基、-NR6R7(其中R6和R7相同或不同并且是氢、C1-C8直链或支链烷基)；-COOH基团或其可药用的酯、或-CONR8R9(其中R8和R9相同或不同并且是氢、C1-C8直链或支链烷基)；苯基，或者R4是C6-C10芳酰基或C6-C10芳基磺酰基，其任选地被一个或多个选自下列的基团所取代：卤素、羟基、C1-C8直链或支链烷基、C1-C8直链或支链烷氧基、苯基、氰基、硝基、-NR10R11，其中R10和R11相同或不同并且是氢、C1-C8直链或支链烷基，或者R4是多氨基烷基；
n是数字1；
R5是氢、C1-C8直链或支链烷基、C1-C8直链或支链链烯基、C3-C10环烷基、C3-C10环烷基C1-C8直链或支链烷基、C6-C14芳基、C6-C14芳基C1-C8直链或支链烷基；
R2和R3相同或不同并且是氢、羟基、C1-C8直链或支链烷氧基；
以及其N1-氧化物、其单一的异构体、其可能的对映异构体、非对映异构体以及相关的混合物、其可药用的盐以及其活性代谢物；前提是当R5、R2和R3是氢时，R4不是氢。
在本发明的范围中，作为C1-C8直链或支链烷基的实例，指的是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和乙酰基以及其可能的异构体，例如，异丙基、异丁基或叔-丁基。
C1-C8直链或支链链烯基的实例有亚甲基、亚乙基、乙烯基、烯丙基、炔丙基(proparyl)、丁烯、戊烯，其中在任选地在存在其它碳-碳不饱和现象的情况下，其碳-碳双键可以位于该烷基链不同的可能位置上，其还可以是支链的并具有允许的同分异构现象。
C3-C10环烷基的实例有环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环辛基和多环基团，例如，金刚烷基。
C3-C10环烷基C1-C8直链或支链烷基的实例有环丙基甲基、2-环丙基乙基、1-环丙基乙基、3-环丙基丙基、2-环丙基丙基、1-环丙基丙基、环丁基甲基、2-环丁基乙基、1-环丁基乙基、3-环丁基丙基、2-环丁基丙基、1-环丁基丙基、环己基甲基、2-环己基乙基、1-环己基乙基、3-环己基丙基、2-环己基丙基、1-环己基丙基、5-环己基戊基、3-环己基戊基、3-甲基-2-环己基丁基、1-金刚烷基乙基、2-金刚烷基乙基和金刚烷基甲基。
C6-C14芳基或C6-C14芳基C1-C8直链或支链烷基的实例有苯基、1-或2-萘基、蒽基、苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、3-苯基丙基、2-蒽基丙基、1-蒽基丙基、萘基甲基、2-萘基乙基、1-萘基乙基、3-萘基丙基、2-萘基丙基、1-萘基丙基、环己基甲基、5-苯基戊基、3-苯基戊基和2-苯基-3-甲基丁基。
杂环基或杂环基C1-C8直链或支链烷基的实例有噻吩基、喹啉基、吡啶基、N-甲基哌啶基、5-四唑基、2-(4，5-二氢噁唑基)、1，2，4-噁二唑烷-3-基-5-酮、嘌呤和嘧啶碱，例如，尿嘧啶，其任选地如上面一般定义中所述的那样被取代。
C6-C10芳酰基的实例有苯甲酰基和萘酰基。
任选地被烷基取代的C6-C10芳基磺酰基的实例有甲苯磺酰基和苯磺酰基。就卤素而言，其指的是氟、氯、溴和碘。
被取代的基团的实例有五氟苯基、4-苯基苄基、2，4-二氟苄基、4-氨基丁基、4-羟基丁基、二甲基氨基乙基和对-硝基苯甲酰基、对-氰基苯甲酰基。
多氨基烷基的实例有-(CH2)m-NR12-(CH2)p-NR13-(CH2)q-NH2，
其中
m和p是2-6的整数；
q是0-6的整数，包括端值；且
R12和R13是C1-C8直链或支链烷基，例如，N-(4-氨基丁基)、2-氨基乙基、N-(3-氨基丙基)-4-氨基丁基和N-[N-(3-氨基丙基)-N-(4-氨基丁基)]-3-氨基丙基。
糖基的实例有6-D-半乳糖基、6-D-葡糖基、D-吡喃半乳糖基，例如可任选地用适宜的缩酮基、亚异丙基对所述糖基进行保护。
在氮原子具有碱性特性的情况中，可药用盐的实例是与可药用的酸形成的盐，其中所述的酸既可以是无机酸，又可以是有机酸，如，例如盐酸、硫酸和醋酸；或者在具有酸性基团如羧基的情况中，所述盐可以是与可药用的碱形成的盐，所述的碱既可以是无机碱，又可以是有机碱，如，例如碱金属和碱土金属氢氧化物；氢氧化铵；胺；并且还可是杂环碱。
R1优选地是-C(R5)＝N-O(n)R4，其中R4优选地是C1-C8直链或支链烷基；且
R2和R3优选地是氢。
十分优选的化合物选自：
7-甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-甲氧基亚氨基甲基-10-羟基喜树碱；
7-(叔-丁氧基羰基-2-丙氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-乙氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-异丙氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-(2-甲基丁氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-叔-丁氧基亚氨基甲基-10-羟基喜树碱；
7-叔-丁氧基亚氨基甲基-10-甲氧基喜树碱；
7-(4-羟基丁氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-三苯基甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-羧基甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-(2-氨基)乙氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-(2-N，N-二甲基氨基)乙氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-烯丙氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-环己氧基亚氨基乙基喜树碱；
7-环己基甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-环辛氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-环辛基甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-苄氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-[(1-苄氧基亚氨基)-2-苯基乙基]喜树碱；
7-(1-苄氧基亚氨基)乙基喜树碱；
7-苯氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-(1-叔-丁氧基亚氨基)乙基喜树碱；
7-对-硝基苄氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-对-甲基苄氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-五氟苄氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-对-苯基苄氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-[2-(2，4-二氟苯基)乙氧基]亚氨基甲基喜树碱；
7-(4-叔-丁基苄氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-(1-金刚烷氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-(1-金刚烷基甲氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-(2-萘氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-(9-蒽基甲氧基)亚氨基甲基喜树碱；
7-环氧乙烷基甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-(6-尿嘧啶)甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-[2-(1-尿嘧啶)乙氧基]亚氨基甲基喜树碱；
7-(4-吡啶基)甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-(2-噻吩基)甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-[(N-甲基)-4-哌啶基]甲氧基亚氨基甲基喜树碱；
7-[2-(4-吗啉基]乙氧基]亚氨基甲基喜树碱；
7-(苯甲酰氧基亚氨基甲基)喜树碱；
7-[(1-羟基亚氨基)-2-苯基乙基)喜树碱；
7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱-N-氧化物；和
7-甲氧基亚氨基甲基喜树碱-N-氧化物。
在本发明一个十分优选的实施方案中，式(I)的喜树碱衍生物具有下面的结构：
Figure S05842979820070618D000131
在US专利6,242,457中公开了式(I)的喜树碱衍生物以及其制备，该专利在这里被全文引入作为参考。
组合
因此，本发明第一方面涉及一种预防或治疗哺乳动物(优选人类患者)的增殖性疾病或由持续的血管生成触发的疾病的方法，其包括用药学有效量的下列物质的组合同时或相继对所述患者进行治疗：
(a)喜树碱衍生物，优选式(I)的喜树碱衍生物；和
(b)一种或多种化疗剂。
本发明另一方面涉及一种药物组合物，其包含下列物质的组合：
(a)喜树碱衍生物，优选式(I)的喜树碱衍生物；和
(b)一种或多种化疗剂。
本发明另一方面提供了一种药物制剂，其包含：
(a)式(I)的喜树碱衍生物；和
(b)一种或多种化疗剂，以及可药用的载体。
在优选的实施方案中，本发明提供了一种药物制剂，其包含：
(a)式(I)的喜树碱衍生物；和
(b)一种或多种选自微管活化剂；烷化剂；抗肿瘤的抗代谢物；铂化合物；拓扑异构酶II抑制剂；VEGF抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；EGFR激酶抑制剂；mTOR激酶抑制剂；胰岛素样生长因子I抑制剂；Raf激酶抑制剂；单克隆抗体；蛋白酶体抑制剂；HDAC抑制剂；和电离辐射的化疗剂。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种药物制剂，其包含：
(a)式(I)的喜树碱衍生物；和
(b)一种或多种选自紫杉醇；多西紫杉醇；埃坡霉素B；替莫唑胺；5-FU；吉西他滨；奥沙利铂；顺铂(cis-铂)；卡铂；多柔比星；{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺；依维莫司；伊马替尼；埃罗替尼、贝伐单抗、西妥昔单抗和velcade的化疗剂。
如上下文所述的那样，组分(a)和(b)的组合、包括使用这两种组分的治疗温血动物的方法、用于同时、独立或相继应用的包含这两种组分的药物组合物、所述组合用于延迟增殖性疾病的进程或者用于治疗增殖性疾病或者用于制备用于这些目的的药物制剂的应用或者包含该类组分(a)和(b)的组合的商品中的任何一种随后也被称为本发明的组合(从而使得该术语指的是这些实施方案中的各方案，因此，在适宜的情况中这些实施方案可以代替该术语)。
同时给药例如可以以一种具有两种或多种活性成分的固定组合的形式进行，或者可以同时给予独立制备的两种或多种活性成分。相继应用(给药)优选指的是在一个时间点给予组合的一种(或多种)组分，在不同的时间点给予其它组分，即以时间上交错的方式进行给药，优选使得该类组合表现出高于单独给予单一化合物的功效(尤其是表现出协同作用)。独立应用(给药)优选指的是在不同的时间点彼此独立地给予所述组合的组分。
还可以是相继、独立和同时给药中的两种或多种的组合，优选使得所述组合的组分药物表现出功效超出以治疗功效不会发生相互作用的足够大的时间间隔独立使用所述组合的组分药物时的功效的联合治疗作用，尤其优选地表现出协同作用。
这里所用的术语“延迟进程”指的是给处于首发症状或继发症状的前期或早期的患者；或者所治疗疾病复发的患者(在该患者中诊断出了相应疾病的前期形式)；或者处于一种情况下的患者(例如，处于医学治疗或者由事故导致的情况下的患者，在该情况下通常可能形成一种相应的疾病)施用所述组合。
“联合治疗有效的”指的是所述化合物以可以在所治疗的温血动物(尤其是人)体内表现出相互作用(优选协同的相互作用)(联合治疗作用)的时间间隔被独立给药(以时间上交错的方式，尤其是以特定顺序的方式给药)。
“药学有效的”优选指的是在治疗学上或者更广义地还指在预防学上可有效对抗增殖性疾病的进程的量。
这里所用的术语“商业包装”或“产品”尤其定义的是一种“各部分的试剂盒”，在该意义上，上面所述的组分(a)(其是喜树碱衍生物)和(b)(其包括一种或多种化疗剂)可以被独立给药或者可以通过使用具有不同数量组分(a)和(b)的不同固定组合来给药，即可以被同时给药或者在不同的时间点被给药。此外，这些术语还包括一种商业包装，其包含(尤其是组合了)作为活性成分的组分(a)和(b)以及用于说明将其同时、顺序(以特定的时间顺序在时间上交错给药，优选的)或者独立应用(较不优选的)以用于延迟增殖性疾病的进程或用于治疗增殖性疾病的说明。然后，所述各部分试剂盒的各部分例如可以被同时给药或按时间顺序交错给药，即所述各部分试剂盒的任何一部分可以在不同的时间点并且以相等或不等的时间间隔被给药。如可以根据标准方法进行测定的那样，所选择的时间间隔十分优选地使得联合使用所述部分时对所治疗疾病的作用高于仅使用组合伴侣(a)和(b)中任何一种时获得的作用。在所述联合制剂中被给药的组合伴侣(a)和组合伴侣(b)的总量的比例可以进行变化，例如为了符合被治疗患者亚群的需要或者可能由于患者的特定疾病、年龄、性别、体重等而具有不同需求的各患者的需要而进行变化。优选地有至少一种有益作用，例如组合伴侣(a)和(b)的作用相互增强，特别是高于加和作用，因此，各联合药物可以使用低于非组合情况下仅用各药物进行治疗的情况中可耐受剂量的剂量，产生另外的有利作用，例如副作用降低或者在组合伴侣(组分)(a)和(b)中的一种或两种处于非有效剂量时可以获得联合治疗作用，并且组合伴侣(a)和(b)十分优选地具有强协同作用。
在使用组分(a)和(b)的联合和商业包装的情况中，还可以进行同时、相继和独立应用的任何组合，即组分(a)和(b)可以在一个时间点被同时给药，然后在其后的时间点可以仅用具有较低机体毒性的一种组分长期每天给药，例如给药3-4周以上，并且随后在其后的时间点仍然可以用其它组分或两种组分的联合进行给药(随后进行对于最佳抗肿瘤作用而言的药物组合治疗)等。
本发明的组合还可以与其它治疗例如手术干预、高温和/或放疗联用。
本发明的药物组合物可以用常规方法来进行制备并且是适于肠例如口服或直肠给药和胃肠外给药于包括人在内的哺乳动物的药物组合物，其仅包含治疗有效量的喜树碱衍生物和至少一种化疗剂或者还包含一种或多种可药用的载体，尤其是适用于肠或胃肠外应用的载体。
所述药物组合物包含约0.00002％至约100％，尤其是在例如即可使用的输注稀释液的情况中包含0.0001-0.02％，或者，例如在注射或输注浓缩物或者尤其是胃肠外制剂的情况中，包含约0.1％至约95％，优选约1％至约90％，更优选约20％至约60％的活性成分(在各种情况中为重量/重量)。本发明的药物组合物例如可以是单位剂型，例如安瓿剂、小瓶、糖锭剂、片剂、输液袋或胶囊。
本发明制剂中所用各组合伴侣的有效量可以根据所用的特定化合物或药物组合物、给药方式、所治疗的情况和所治疗情况的严重程度来进行变化。主治医师、临床医师或本领域普通技术人员可以容易地确定预防、治疗或抑制所述情况的进程所必需的各活性成分的有效量。
在所述化疗剂选自多柔比星、紫杉醇、多西紫杉醇、埃坡霉素以及其衍生物、替莫唑胺、5-FU；吉西他滨、奥沙利铂、卡铂、7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物、异喹啉化合物、RAD001、GLEEVEC、埃罗替尼、贝伐单抗、西妥昔单抗、velcade、N-羟基-3-[4-[[(2-羟基-乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺和4-氨基-5-苯基-7-环丁基-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物、其可药用的盐或溶剂化物；和其可药用的前体药物酯；且所治疗的患者是人的情况中，给药的适宜剂量例如5-FU的适宜给药剂量为每天100-1500mg，例如，200-1000mg/天，如200、400、500、600、800、900或1000mg/天，每天给药一次或两次。5-FU可以以约50-1000mg/m2/天，例如，500mg/m2/天的剂量范围被给药于人。在拓扑异构酶II抑制剂中，多柔比星可以以约10-100mg/m2/天，例如，25或75mg/m2/天的剂量范围被给药于人，例如，可以以单剂量的形式被给药。紫杉醇可以以约50-300mg/m2/天的剂量范围被给药于人。多西紫杉醇可以以约25-100mg/m2/天的剂量范围被给药于人。卡铂可以大约每隔四周以约200-400mg/m2的剂量范围被给药于人。奥沙利铂可以每隔两周以约50-85mg/m2的剂量范围被给药于人。
用于肠或胃肠外给药的联合治疗用药物制剂是例如诸如糖衣片、胶囊或栓剂之类的单位剂型；此外还可以是安瓿剂。如果没有特别表明，则这些制剂是用常规方法来进行制备的，例如是通过常规的混合、制粒、包糖衣、溶解或冷冻干燥方法来进行制备的。应当意识到，因为可以通过使用许多剂量单位来获得所需的有效量，所以各剂型的各剂量中所包含组合伴侣的单位含量本身不一定组成有效量。本领域技术人员能确定所述组合组分的适宜的药学有效量。
所述化合物或其可药用的盐优选地是以片剂、胶囊或糖浆形式的口服药物制剂形式来进行给药的；或者如果适宜的话还可以以胃肠外注射剂的形式来进行给药。
在制备用于口服给药的组合物时，可以使用任何可药用的介质，例如水、二醇类、醇类、矫味剂、防腐剂或着色剂。可药用的载体包括淀粉类、糖类、微晶纤维素类、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
活性成分的溶液以及混悬液，并且尤其是等渗的水溶液或混悬液可用于所述活性成分的胃肠外给药，对于在使用前制备的该类溶液或混悬液而言，例如在冷冻干燥组合物的情况中，其可仅包含活性成分或者还包含可药用的载体，例如甘露醇。所述药物组合物可以被灭菌和/或可以包含赋形剂，例如，防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂，并且是以本身已知的方式来进行制备的，例如，其可以通过常规的溶解或冷冻干燥过程来进行制备。所述溶液或混悬液可以包含增加粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。位于油中的混悬液包含作为油性组分的常用于注射目的的植物油、合成或半合成油。
等渗剂可以选自本领域已知的等渗剂中的任何一种，例如，甘露醇、右旋糖、葡萄糖和氯化钠。可以用水性介质对所述的输液制剂进行稀释。根据所述输液溶液中所需的活性成分浓度来对用作稀释剂的水性介质的量进行选择。输液溶液可以包含静脉内给药制剂中常用的其它赋形剂，如抗氧剂。
本发明还涉及“一种联合制剂”，在本文中，该术语尤其是定义了一种“各部分的试剂盒”，在这种意义上，如上面所定义的组合伴侣(a)和(b)可以被独立给药或者可以用具有不同量的组合伴侣(a)和(b)的不同的固定组合来进行给药，即可以被同时给药或者可以在不同的时间点被给药。然后，所述各部分试剂盒的各部分例如可以被同时给药或按时间顺序交错给药，即所述各部分试剂盒的任何一部分可以在不同的时间点并且以相等或不等的时间间隔被给药。在所述联合制剂中被给药的组合伴侣(a)和组合伴侣(b)总量的比例可以进行变化，例如为了符合被治疗患者亚群的需要或者以患者所经历的任何副作用的严重程度为基础的各患者的需要而进行变化。
本发明尤其是涉及一种联合制剂，其包含：
(a)一种或多种喜树碱衍生物的单位剂型；和
(b)一种或多种化疗剂的单位剂型。
所治疗的疾病
本发明的组合可用于治疗增殖性疾病或与持续的血管生成有关或者由持续的血管生成触发的疾病。
增殖性疾病主要是肿瘤性疾病(或癌症)(和/或任何转移瘤)。本发明的组合物特别是可用于治疗下面的肿瘤：乳癌；肺癌，包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)；胃肠癌，包括食管、胃、小肠、大肠、直肠和结肠癌；神经胶质瘤，包括成胶质细胞瘤；肉瘤，如涉及骨、软骨、软组织、肌肉、血液和淋巴管的肉瘤；卵巢癌；骨髓瘤；女性子宫颈癌；子宫内膜癌；头颈癌；间皮瘤；直肠癌；uteran；膀胱和尿道癌；白血病；前列腺癌；皮肤癌；和黑素瘤。具体地讲，本发明的组合物特别是适用于治疗：
i.乳腺肿瘤；肺部肿瘤，例如，非小细胞型肺部肿瘤，包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)；胃肠肿瘤，例如，直肠结肠肿瘤；或泌尿生殖器肿瘤，例如前列腺肿瘤；卵巢癌；神经胶质瘤，包括成胶质细胞瘤；
ii.用其它化疗剂难以治疗的增殖性疾病；或者
iii.由于多重耐药性而用其它化疗剂难以治疗的肿瘤。
就本发明的广义而言，增殖性疾病还可以是一种过度增生的情况，如白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
本发明的组合还可用于预防或治疗由持续的血管生成触发的疾病，如卡波济氏肉瘤、白血病或关节炎。
在提及肿瘤、肿瘤疾病、癌或癌症的情况中，还暗指原发器官或组织中和/或任何其它位置中的转移瘤，不管该肿瘤和/或转移瘤位于何处。
与正常细胞相比，所述组合物对增生迅速的细胞，特别是人癌症细胞，例如癌性肿瘤中的细胞具有选择性毒性或者更高的毒性，所述化合物具有显著的抗增殖作用并且促进了分化，例如细胞周期停滞和细胞凋亡。
参考下面的实施例来进一步对本发明进行定义，这些实施例详细描述了所述化合物、本发明的组合物和组合以及其效用。对本领域技术人员显而易见的是，可以在不脱离本发明目的和利益的情况下对材料和方法进行许多变化。并不是要用这些实施例对上面或下面所定义的本发明的范围进行限制。
实施例1：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和奥沙利铂的组合
体内实验操作
试验系统：肿瘤模型使用雌性CD1nu/nu小鼠。
动物数：176(每种肿瘤模型88只)
A2780肿瘤模型：将人卵巢癌细胞(2x106)皮下植入到雌性小鼠的右侧胁腹，在肿瘤注射后3天用下面的药物对7-8只小鼠/组进行处理。
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.28mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/w，3-7天)
3.奥沙利铂7mg/10ml/kg和4.7mg/10ml/kg，i.p.(q4dx2，第3、7天)。
4.联合组：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+奥沙利铂：0.28+7，0.28+4.7，0.19+7，0.19+4.7。
5.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.19mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/wx2w，3-7天，10-14)。
6.奥沙利铂7mg/10ml/kg，i.p.(q7dx2，第3、10天)。
7.联合组：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+奥沙利铂0.19+7。
在给予7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱前1小时给予所述药物。
数据分析
在装订在有编号的记录本上的适宜表格中记录所有的原始数据，用计算机系统对其进行存储和处理。使用公式TV(mm3)＝长度(mm)x宽度(mm)2]/2，其中所述的宽度和长度分别是各肿瘤的最短和最长直径。用下面的公式来计算LCK(log10细胞杀伤)：(T-C)/3.32xDT，其中T-C分别是治疗(T)和对照(C)肿瘤达到所确定的体积所需的平均时间(以天为单位)，并且DT是对照肿瘤倍增的时间。CR被定义为在治疗结束后肿瘤消失持续至少10天。根据Romanelli等人(1998)的方法对7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同活性剂的组合的作用进行评估。1(加和作用)或更低的R指数表明不存在协同作用。协同作用被定义为高于1的任何R值。R是由所预期和所观察到的T/C％值来进行计算的。
A2780卵巢癌：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱在0.28mg/kg的MTD下在肿瘤体积抑制方面表现出有效的抗肿瘤活性(TVI＝100％)，CR＝8/8且LCK>2。7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱与奥沙利铂的组合对相同肿瘤的活性与以单一活性剂形式进行应用时7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的活性相当，但是其在60天时有一些完全响应者(complete responders)。与奥沙利铂[B](i.p.，q4dx2，+3)联用的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/w，+3)对A2780卵巢癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000221
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4CR＝在最后的治疗后的完全响应(complete response)。5LCK＝log10细胞杀伤。DT＝2.1天。在第+60天，以下小鼠没有肿瘤损害：4.7+0.19(1/8)，7+0.19(1/8)。
实施例2：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和多西紫杉醇的组合
体内实验操作
试验系统：肿瘤模型使用雌性CD1nu/nu小鼠。
动物数：176(每种肿瘤模型88只)
将MCF-7人乳癌雌激素依赖性细胞(5x106)植入到雌性小鼠的右侧胁腹中，在此之前给所述小鼠植入17β-雌二醇的缓释小丸(0.72mg/丸)。在肿瘤细胞接种前一天将这些小丸放置到中间肩胛骨区域中。在肿瘤注射后6天用下面的药物对8只小鼠/组进行处理：
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.28mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kgp.o.(qdx5/w，3-7天)
3.多西紫杉醇20mg/10ml/kg和13.3mg/10ml/kg i.p.(q3-4dx2，第3、7天)。
4.联合组7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+多西紫杉醇：0.28+20，0.28+13.3，0.19+20，0.19+13.3。
将A2780/DDP人铂耐受的卵巢癌细胞(2x106)植入到雌性小鼠的右侧胁腹中。在肿瘤注射后3天将8只小鼠/组用下面的药物进行处理。
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.28mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kgp.o.(qdx5/w，3-7天)
3.多西紫杉醇20mg/10ml/kg和13.3mg/10ml/kg，i.p.(q4dx2，第3、7天)
4.联合组7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+多西紫杉醇：0.28+20，0.28+13.3，0.19+20，0.19+13.3。
将NCI-H460人非小细胞肺癌细胞(3x106)植入到雌性小鼠的右侧胁腹中。在肿瘤注射后3天将8只小鼠/组用下面的药物进行处理：
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.28mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kgp.o.(qdx5/w，3-7天)
3.多西紫杉醇20mg/10ml/kg和13.3mg/10ml/kg i.p.(q4dx2，第3、7天)
4.联合组7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+多西紫杉醇：0.28+20，0.28+13.3，0.19+20，0.19+13.3.
在肿瘤注射后将7只小鼠/组用下面的药物处理3天：
1.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.19mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/wx2w，3-7，10-14天)
2.多西紫杉醇20mg/10ml/kg，i.p.(q7dx2，第3、10天)
将DU145人前列腺癌细胞(3x106)皮下接种到雄性小鼠的右侧胁腹中。在肿瘤注射后14天用下面的药物对8只小鼠/组进行处理：
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.25mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/w，第14-18天)
3.多西紫杉醇20mg/10ml/kg和13.3mg/10ml/kg，i.p.(q4dx2，第14-18天)
4.联合组7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+多西紫杉醇：0.19+13.3，0.25+13.3。
在肿瘤注射后14天还用下面的药物对8只小鼠/组进行处理：
1.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.17mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/wx3w，第14-18，21-25，28-32天)
2.多西紫杉醇20mg/10ml/kg，i.p.，(q7dx3，第14、21、28天)。
3.联合组：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+多西紫杉醇0.17+20。
数据分析
在装订在有编号的记录本上的适宜表格中记录所有的原始数据，用计算机系统对其进行存储和处理。使用公式TV(mm3)＝长度(mm)x宽度(mm)2]/2，其中所述的宽度和长度分别是各肿瘤的最短和最长直径。用下面的公式来计算LCK(log10细胞杀伤)：(T-C)/3.32xDT，其中T-C分别是治疗(T)和对照(C)肿瘤达到所确定的体积所需的平均时间(以天为单位)，和DT是对照肿瘤的倍增时间。CR被定义为在治疗结束后肿瘤消失持续至少10天。根据Romanelli等人(1998)，Cancer Chemother.Pharmacol.41，385-390的方法对7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同的活性剂的组合的作用进行评估。1(加和作用)或更低的R指数表明不存在协同作用。协同作用被定义为高于1的任何R值。R是由所预期和所观察到的T/C％值来进行计算的。
MCF-7雌激素依赖性乳癌：根据给药方案qdx5以0.28mg/kg(MTD)口服给药的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱表现出有效的抗肿瘤活性(TVI＝70％)，在最后一次治疗后的32天，8只小鼠中有1只没有肿瘤损害。在相同的肿瘤模型中，在20mg/kg的MTD下，i.p.q4dx2的多西紫杉醇表现出与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的抗肿瘤活性相当的抗肿瘤活性(TVI＝73％)并且CR＝1/8。当将处于各自MTD下的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和多西紫杉醇联合时，观察到了很强的毒性(7/8的小鼠死亡)，而在其亚最优剂量(0.19+13.3mg/kg)下，其在肿瘤体积抑制和完全响应数增加方面表现出协同的相互作用(R＝9.5)。
与多西紫杉醇[B](i.p.，q3-4dx2，+6)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/w，+6)对MCF-7人乳癌的抗肿瘤活性。
Figure S05842979820070618D000251
在肿瘤注射后6天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4LCK＝log10细胞杀伤。5CR＝完全响应。DT＝18.9天。R＝7.5(0.28+13.3)；R＝9.5(0.19+13.3)；R＝1.3(0.19+20)。
A2780/DDP铂-耐受的卵巢癌：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱在大约0.28mg/kg(qdx5/w)的最大耐受剂量下仅有微弱的效果(TVI＝46％)。多西紫杉醇(20mg/kg，i.p.，q4dx2)在MTD下表现出与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的抗肿瘤作用相当的抗肿瘤作用。7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱与多西紫杉醇的组合对这种肿瘤模型的作用是加和作用。
与多西紫杉醇[B](i.p.，q4dx2，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/w，+3)对A2780/DDP铂-耐受的卵巢癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000261
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4LCK＝log10细胞杀伤。DT＝1.7天。R＝1.06(13.3+0.19)；0.48(20+0.19)；1.09(13.3+0.28)；0.88(20+0.28)。
NCI-H460NSCLC：与多西紫杉醇(20mg/kg，i.p.q4dx2)(TVI＝63％并且在最后一次治疗后10天8只小鼠中有1只具有完全响应)相比，7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(0.28mg/kg，p.o.，qdx5)表现出很强的抗肿瘤作用(TVI＝94％)。7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱与多西紫杉醇的相互作用是加和或协同作用，其取决于所述剂量方案。
与多西紫杉醇[B](i.p.，q4dx2，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱IA](p.o.，qdx5/w，+3)对NCI-H460非小细胞肺癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000271
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4CR＝在最后的治疗后的完全应答。5LCK＝log10细胞杀伤。DT＝2.9天。R＝1.5(13.3+0.19)；1.3(20+0.19)；1.15(13.3+0.28)；0.44(20+0.28)。
DU145前列腺癌：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱在大约0.25mg/kg(qdx5/w)的最大耐受剂量下表现出与以20mg/kg，q4dx2的MTD i.p.给药的多西紫杉醇的活性(TVI为53％)相当的活性。多西紫杉醇的亚最优剂量与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(13.3和0.19mg/kg)的组合产生了协同的相互作用。当7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱以0.17mg/kg的亚最优剂量与20mg/kg，i.p.(q7dx3)的多西紫杉醇联合给药3周时，其在完全响应(3/8)和LCK的增加方面对肿瘤生长产生了协同作用。
与多西紫杉醇[B](i.p.，q4dx2，+14)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/w，+14)对DU145前列腺癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000272
Figure S05842979820070618D000281
在肿瘤注射后14天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4CR＝在最后的治疗后的完全应答。5LCK＝log10细胞杀伤。DT＝10.7天。R＝1.92(13.3+0.19)；1.06(13.3+0.25)。
实施例3：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和紫杉醇的组合
体内实验操作
试验系统：肿瘤模型使用雌性CD1nu/nu小鼠。
动物数：176(每种肿瘤模型88只)
将得自体外细胞培养物的NCI-H460人肺癌细胞以3x106个细胞/100μl/小鼠的数量皮下注射到CD1裸鼠的右侧胁腹中。在肿瘤注射后第3、10、17天，将小鼠用紫杉醇静脉内给药3次。在肿瘤移植后3天开始通过口服途径将7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱给药3个周期(qdx5/w)。在其它小鼠组中，用相同的给药方案将7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱与紫杉醇联合口服给药。在NCI-H460肿瘤模型中进行的治疗是在下面每组8只小鼠的组中进行的：
1.载体
2.50mg/15ml/kg，紫杉醇i.v.给药(3，10，17)
3.33.3mg/15ml/kg，紫杉醇i.v.给药(3，10，17)
4.25mg/15ml/kg，紫杉醇i.v.给药(3，10，17)
5.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.25mg/10ml/kg，p.o.(3-7)，(10-14)，(17-21)
6.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.125mg/10ml/kg，p.o.(3-7)，(10-14)，(17-21)
7.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.08mg/10ml/kg，p.o.(3-7)，(10-14)，(17-21)
8.紫杉醇+7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(33.3+0.125)
9.紫杉醇+7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(33.3+0.08)
10.紫杉醇+7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(25+0.125)
11.紫杉醇+7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(25+0.08)
为了对药物对人异种移植物的抗肿瘤活性进行评估，通过每两周一次地用游标卡尺测量肿瘤直径来对肿瘤体积进行评估。使用公式TV(mm3)＝[长度(mm)x宽度(mm)2]/2，其中所述的宽度和长度分别是各肿瘤的最短和最长直径。当小鼠的肿瘤达到大约2g的体积时，通过颈脱位法将这些动物处死。
数据分析
在装订在有编号的记录本上的适宜表格中记录所有的原始数据，用计算机系统对其进行存储和处理。使用公式TV(mm3)＝长度(mm)x宽度(mm)2]/2，其中所述的宽度和长度分别是各肿瘤的最短和最长直径。用下面的公式来计算LCK(log10细胞杀伤)：(T-C)/3.32x DT，其中T-C分别是治疗(T)和对照(C)肿瘤达到所确定的体积所需的平均时间(以天为单位)，和DT是对照肿瘤的倍增时间。CR被定义为在治疗结束后肿瘤消失持续至少10天。根据Romanelli等人(1998)的方法对7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同的活性剂的组合的作用进行评估。1(加和作用)或更低的R指数表明不存在协同作用。协同作用被定义为高于1的任何R值。R是由所预期和所观察的T/C％值来进行计算的。
NCI-H460肿瘤模型：在肿瘤接种后3天开始，根据q7dx3的给药方案i.v.给药的50mg/kg的紫杉醇的耐受剂量能使肿瘤生长降低(T/C％＝38.6)，其平均重量降低较少，为6％。根据相同的给药方案i.v.给药的其它两个低剂量——33.3mg/kg和25mg/kg(其分别为MTD的2/3和1/2)也有效。所估算的T/C％分别为36.8和55.2。所述NCI-H460肿瘤对单独使用的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱很容易发生响应，这是因为给药5天，给药3个周期的0.25mg/kg和0.125mg/kg的剂量都可以降低肿瘤体积，其将肿瘤体积分别降低约99％和90％(T/C％为1.5和9.9)。这些剂量未产生与毒性有关的死亡(8只小鼠中没有小鼠死亡)或者体重降低。根据相同给药方案给药的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的较小剂量(0.08mg/kg)也是有效的(T/C％＝59.5％)。当将各药物的亚最优剂量联合时(0.125mg/kg的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和33.3或25mg/kg的紫杉醇)，该联合组对肿瘤生长的抑制比用单一活性剂7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱治疗获得的抑制作用更高(T/C％为2.2和2.5％)，R指数值分别为1.6和2.2。这些治疗在小鼠体内未产生毒性。7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的较低剂量(0.08mg/kg)与紫杉醇的两个亚最优剂量(33.3和25mg/kg，i.v.)的组合也产生了1.3和2.1的R指数值。
与紫杉醇[B](i.v.，q7dx3，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/w，+3)对NCI-H460 NSCLC的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000301
1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3治疗小鼠的TW/对照小鼠的TW x100。
实施例4：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和卡铂的组合
体内实验操作
试验系统：肿瘤模型使用雌性CD1nu/nu小鼠。
动物数：176(每种肿瘤模型88只)
将A2780/DDP人铂耐受的卵巢癌细胞(2x106)植入到雌性小鼠的右侧胁腹中。在肿瘤注射后3天将8只小鼠/组用下面的药物进行处理。
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.28mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kgp.o.(qdx5/w，3-7天)
3.卡铂50mg/10ml/kg和33.3mg/10ml/kg，i.p.(q4dx2，第3、7天)
4.联合组7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+卡铂：0.28+50，0.28+33.3，0.19+50，0.19+33.3。
将A2780卵巢癌细胞(2x106)皮下植入到雌性小鼠的右侧胁腹中。在肿瘤注射后3天将7-8只小鼠/组用下面的药物进行处理。
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.28mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/w，3-7天)
3.卡铂50mg/10ml/kg和33.3mg/10ml/kg，i.p.(q4dx2，第3、7天)
4.联合组：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+卡铂：0.28+50，0.28+33.3，0.19+50，0.19+33.3..
5.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.19mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/wx2w，3-7，10-14天)。
6.卡铂50mg/10ml/kg，i.p.(q7dx2，第3、10天)。
7.联合组：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+卡铂0.19+50。
将NCI-H460人非小细胞肺癌细胞(3x106)植入到雌性小鼠的右侧胁腹中。在肿瘤注射后3天将8只小鼠/组用下面的药物进行处理：
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.28mg/10ml/kg和0.19mg/10ml/kgp.o.(qdx5/w，3-7天)
3.卡铂50mg/10ml/kg和33.3mg/10ml/kg，i.p.(q4dx2，第3、7天)
4.联合组：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+卡铂：0.28+50，0.28+33.3，0.19+50，0.19+33.3。
在肿瘤注射后3天也用下面的药物对7只小鼠/组进行处理：
1.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.19mg/10ml/kg，p.o.(qdx5/wx2w，3-7，10-14天)
2.卡铂50mg/10ml/kg，i.p.(q7dx2，第3，10天)
在所有的联合组中，在给予7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱前1小时给予所述药物。
为了对这些药物对人异种移植物的抗肿瘤活性进行评估，通过每两周一次地用游标卡尺对肿瘤直径进行测量来对肿瘤体积进行评估。使用公式TV(mm3)＝[长度(mm)x宽度(mm)2]/2，其中所述的宽度和长度分别是各肿瘤的最短和最长直径。当小鼠的肿瘤达到大约2g的体积时，通过颈脱位法将这些动物处死。
数据分析
在装订在有编号的记录本上的适宜表格中记录所有的原始数据，用计算机系统对其进行存储和处理。使用公式TV(mm3)＝长度(mm)x宽度(mm)2]/2，其中所述的宽度和长度分别是各肿瘤的最短和最长直径。用下面的公式来计算LCK(log10细胞杀伤)：(T-C)/3.32x DT，其中T-C分别是治疗(T)和对照(C)肿瘤达到所确定的体积所需的平均时间(以天为单位)，和DT是对照肿瘤的倍增时间。CR被定义为在治疗结束后肿瘤消失持续至少10天。根据Romanelli等人(1998)的方法对7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同的活性剂的组合的作用进行评估。1(加和作用)或更低的R指数表明不存在协同作用。协同作用被定义为高于1的任何R值。R是由所预期和所观察的T/C％值来进行计算的。
A2780/DDP铂-耐受的卵巢癌肿瘤模型：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱在大约0.28mg/kg(qdx5/w)的最大耐受剂量下具有微弱的功效(TVI＝46％)并且表现出与卡铂(50mg/kg，i.p.，q4dx2)的活性相当的活性(TVI＝34％)。当将7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱与卡铂联合时，发现其具有加和至协同的相互作用。
与卡铂[B](i.p.，q4dx2，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/w，+3)对A2780/DDP铂-耐受的卵巢癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000331
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4LCK＝log10细胞杀伤。DT＝1.7天。R＝0.9(33+0.19)；0.71(50+0.19)；1.35(33+0.28)；0.94(50+0.28)。
A2780卵巢癌肿瘤模型：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱在0.28mg/kg的MTD下在肿瘤体积抑制方面表现出有效的抗肿瘤活性(TVI＝100％)，CR＝8/8和LCK>2。当将其与33.3mg/kg，i.p.，q4dx2的亚最优剂量的卡铂联合时，观察到LCK增加，表明在治疗结束后对肿瘤生长的抑制作用可持续较长时间。当将卡铂(50mg/kg，q7dx2)与给药两周的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(0.19mg/kg，qdx5/wx2w)联合时，可以获得相似的结果，因为获得了较高的LCK。
与卡铂[B](i.p.，q4dx2，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱IA](p.o.，qdx5/w，+3)对A2780卵巢癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000341
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4CR＝在最后的治疗后的完全应答。5LCK＝log10细胞杀伤。DT＝2.1天。在第+60天，下面的小鼠没有肿瘤损害：33.3+0.19(1/8)，50+0.19(2/8)，33.3+0.28(5/8)，50+0.28(3/6)。
与卡铂[B](i.p.，q7dx2，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/wx2w，+3)对A2780卵巢癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000342
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4CR＝在最后的治疗后的完全应答。5LCK＝log10细胞杀伤。DT＝2.1天。在第+60天，下面的小鼠没有肿瘤损害：0.19(4/7)，50(1/7)，50+0.19(7/7)。
在NCI-H460 NSCLC肿瘤模型中，与具有中等抗肿瘤作用(TVI＝59％)的50mg/kg，i.p.q4dx2，(MTD)的卡铂相比，7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(0.28mg/kg，p.o.，qdx5)表现出强抗肿瘤作用(TVI＝94％)。当将亚最优剂量的卡铂(33.3mg/kg)与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱(0.28mg/kg)联合时，观察到了协同作用(R＝3)，因为TVI达到了100％，并且在肿瘤移植后10天，8只小鼠中有3只小鼠没有肿瘤损害。因为其超出了两种药物单独给药时的功效，所以发现用这种类型的联合具有治疗益处。发现用其它剂量的组合具有加和作用。将根据qdx5/wx2w的给药方案以0.19mg/kg的剂量给药的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱与50mg/kg，i.p.，q7dx2的卡铂联合给药也可以产生协同作用(R＝1.9)。
与卡铂[B](i.p.，q4dx2，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱IA](p.o.，qdx5/w，+3)对NCI-H460非小细胞肺癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000351
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4CR＝在最后的治疗后的完全应答。5LCK＝log10细胞杀伤。DT＝2.9天。R＝1.2(33.3+0.19)；1.7(50+0.19)；3(33.3+0.28)；0.82(50+0.28)。
与卡铂[B](i.p.，q7dx2，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/wx2w，+3)对NCI-H460非小细胞肺癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000361
在肿瘤注射后3天开始进行治疗。1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。4CR＝在最后的治疗后的完全应答。5LCK＝log10细胞杀伤。DT＝2.9天。R＝1.86(50+0.19)
实施例5：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和多柔比星的组合
体内实验操作
试验系统：肿瘤模型使用BALB/c nu/nu小鼠。
MDA MB 435S人乳癌细胞(从工作储备液VPStock 044传代4代)得自ATCC(Rockville，MD，USA)并将其在添加了10％FCS和青霉素-链霉素(终浓度为50IU/mL，50μg/mL)的RPMI 1640细胞培养基中进行培养。通过胰酶消化来对这些细胞进行收集，将其在HBSS中洗涤两次并用台盼蓝对其进行计数以辨别有活力的细胞。然后，将这些细胞重新混悬于HBSS中并将其调整至1x107个细胞/mL的终浓度。为了进行接种，用酒精充分清洗注射部位并将针通过皮肤插入到位于动物右肩下的皮下空间中，向其中排放100μL的细胞(1x106)。在接种后30天，达到了可接受的肿瘤体积。
将7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱每周口服(p.o.)给药5次，既将其单独(即作为单一疗法)给药，又将其与多柔比星联合给药。将多柔比星(单独或者与Gimatecan联合)通过尾静脉每周静脉内(i.v.)给药3次。
1.载体
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱0.29mg/kg，0.17mg/kg和，0.09mg/kgp.o.(qdx5/w)
3.多柔比星50mg/10ml/kg和4.5mg/kg，2.97mg/kg，1.49mg/kg，i.v.((qdx3/w))
4.联合组：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+多柔比星：0.17+2.97，0.17+1.49，0.17+0.45，0.09+2.97，0.09+1.49，0.09+2.97，0.03+2.97，0.03+1.49，0.03+0.45
数据分析
用配对t-检验来测定从第0天至第13天第14和15组以及第0天至第20天所有其它组的体重变化差异(表4)。所有的计算都是用SigmaStat3.0进行的。用单侧ANOVA法来进行肿瘤体积差异的统计学计算。
在MDA MB 435S人乳癌中，与多柔比星联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱表现出加和至协同的抗肿瘤活性。在B 0.29+A0.07组中的协同活性最显著，在该组中，无效的单一活性剂剂量提供了48％T/C的联合活性。
与多柔比星[B](i.v.，qdx3/w，+3)联合的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱[A](p.o.，qdx5/w，+3)对MDA MB435S人乳癌的抗肿瘤活性
Figure S05842979820070618D000371
Figure S05842979820070618D000381
1药物治疗所引起的体重损失％。2死亡/进行治疗的小鼠。3与对照肿瘤相比治疗肿瘤的肿瘤体积抑制％。
实施例6：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和顺铂的组合
体外实验操作
细胞培养和细胞毒性试验
NCI-H460非小细胞肺癌(NSCLC)得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，A549(NSCLC)、HT-29结肠腺癌、A2780和A2780/Dx、A2780/DDP卵巢癌得自Istituto Nazionale Tumori，米兰，意大利。使这些细胞在包含10％胎牛血清(GIBCO)和50μg/ml硫酸庆大霉素(SIGMA)的RPMI 1640(GIBCO)中进行生长。为了测定化疗剂对细胞生长的作用，将这些细胞在大约10％的融合下接种到96-孔组织培养板(Corning)中并使之附着和恢复至少24小时。然后，向各孔中单独加入不同浓度的单独或者彼此联合的药物。将这些板培养2小时，然后对其进行洗涤，然后将其在没有药物的情况下再培养72小时。将其它板用药物顺序进行处理(用一种药物处理2小时，然后用其它药物处理72小时)。然后，通过用Skehan P等人(1990)J.Natl.Cancer Inst.82，1107-1112所述的方法用磺酰罗丹明(sulforhodamine)B(SRB)染色来测定存活细胞的数目。
数据分析
用Drewinko等人(1976)Cancer Biochem.Biophys.1：187-195的分析方法来测定7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同药物之间的相互作用。该分析是如下那样进行的：(SFaxSFb/SFa+SFb)/100，其中Sfa是7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的存活分数，SFb是化疗剂的存活分数。所示的值表示下面的作用：值>1表示协同作用，<1表示拮抗作用，＝1表示加和作用。
NCI-H460非小细胞肺癌：当将该细胞同时或顺序与其接触时，所述组合表现出加和的细胞毒性作用(R指数为1)。
A549非小细胞肺癌：当将该细胞同时与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和顺铂接触时或者先用顺铂，然后用7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱相继进行处理时，其表现出加和的细胞毒性作用(R指数为1)。当将A549细胞顺序与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱，然后与顺铂进行接触时，观察到一种协同的细胞毒性作用(R值为1.2-1.3)。
A2780卵巢癌：当将该细胞同时或顺序与其接触时，所述组合表现出一种加和的细胞毒性作用(R指数为1)。
A2780/DDP(铂耐受的)卵巢癌：当将细胞同时与顺铂和7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱接触或顺序与顺铂，然后与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱接触时，所述组合表现出一种加和的细胞毒性作用(R指数为1)。当将A2780/DDP细胞顺序与7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱，然后与顺铂接触时，观察到一种协同的细胞毒性作用(R值为1.2)。
给药方案：(A)7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+顺铂
(B)首先用7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱，然后用顺铂
(C)首先用顺铂，然后用7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱
实施例7：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和替莫唑胺的组合
实施例8：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和伊马替尼的组合
体外实验操作
细胞培养和细胞毒性试验
A549非小细胞肺癌、A375黑素瘤、786-O肾细胞腺癌SKOV3卵巢腺癌、786-O肾细胞腺癌、PANC-1胰腺上皮样癌、U266B1骨髓瘤、SW620结肠直肠腺癌、HeLa宫颈癌和MIA PaCa-2胰腺癌得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。将所选择的细胞系以每孔1,000-2,000个细胞(对于附着细胞系而言)和每孔10,000-20,000个细胞(对于悬浮细胞系而言)的细胞计数为基础，用适宜的培养基进行稀释，以每孔100ul稀释的细胞将这些细胞涂到96孔板中。4.使这些细胞在恒温器中在37摄氏度，5％CO2和85％湿度下生长过夜，然后用药物对其进行处理。各化合物的稀释液是由DMSO溶液制得的。这些稀释液通常以EC50为中心并且可以是6或9种稀释液，这些稀释液覆盖与化合物接触时的细胞的全部剂量响应。对所述两种化合物的组合而言，制备第三个稀释物系列。对于该系列中的每一个稀释点而言，使用各化合物固定的比例。使这些细胞同时与所述化合物接触72小时，然后用Envision(PerkinElmer)微量培养板读数器，利用Alamar Blue荧光(ex535，em590)对各孔的增殖数量进行测量。
数据分析
由增殖抑制百分比来确定7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同药物之间的相互作用，所述增殖抑制百分比被定义为各孔的终点测定值除以对照孔的比值。然后，如Chou和Talay(Chou T-C，Talalay，P.剂量-作用关系的定量分析：多种药物或酶抑制剂的联合作用(Quantitative analysis ofdose-effect relationships：the combined effects of multiple drugs or enzymeinhibitors).Adv.Enzyme Regulation1984；22：27-55)所述的那样测定25、50和75％作用水平的联合指数(CI)。<1的CI表示协同的细胞毒性作用，CI＝1表示加和的细胞毒性作用，CI>1表示拮抗的细胞毒性作用。
A549非小细胞肺癌：与伊马替尼联合时，根据所用的药物浓度表现出从协同至拮抗的活性谱。
SKOV3卵巢腺癌：与伊马替尼联合时，如CI值<1所示的那样，其表现出一种协同的细胞毒性作用。
786-O肾细胞腺癌：与伊马替尼联合时，如CI值<1所示的那样，其表现出一种协同的细胞毒性作用。
MIA PaCa-2胰腺癌：与伊马替尼联合时，如CI值<1或＝1(其取决于所用的药物浓度)所示的那样，其表现出一种协同或加和的细胞毒性作用。
A375黑素瘤：与伊马替尼联合时，如CI值<1或＝1(其取决于所用的药物浓度)所示的那样，其表现出一种协同或加和的细胞毒性作用。
PANC-1胰腺上皮样癌：与伊马替尼联合时，如CI值＝1所示的那样，其表现出一种加和的细胞毒性作用。
Figure S05842979820070618D000411
Figure S05842979820070618D000421
实施例9：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和Velcade的组合
体外实验操作
细胞培养和细胞毒性试验
A549非小细胞肺癌、A375黑素瘤、786-O肾细胞腺癌SKOV3卵巢腺癌、786-O肾细胞腺癌、PANC-1胰腺上皮样癌、U266B1骨髓瘤、SW620结肠直肠腺癌、HeLa宫颈癌和MIA PaCa-2胰腺癌得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。将所选择的细胞系以每孔1,000-2,000个细胞(对于附着细胞系而言)和每孔10,000-20,000个细胞(对于悬浮细胞系而言)的细胞计数为基础，用适宜的培养基进行稀释，以每孔100ul稀释的细胞将这些细胞涂到96孔板中。4.使这些细胞在恒温器中在37摄氏度，5％CO2和85％湿度下生长过夜，然后用药物对其进行处理。各化合物的稀释液是由DMSO溶液制得的。这些稀释液通常以EC50为中心并且可以是6或9种稀释液，这些稀释液覆盖与化合物接触时的细胞的全部剂量响应。对所述两种化合物的组合而言，制备第三个稀释物系列。对于该系列中的每一个稀释点而言，使用各化合物固定的比例。使这些细胞同时与所述化合物接触72小时，然后用Envision(PerkinElmer)微量培养板读数器，利用Alamar Blue荧光(ex535，em590)对各孔的增殖数量进行测量。
数据分析
由增殖抑制百分比来确定7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同药物之间的相互作用，所述增殖抑制百分比被定义为各孔的终点测定值除以对照孔的比值。然后，如Chou和Talay(Chou T-C，Talalay，P.剂量-作用关系的定量分析：多种药物或酶抑制剂的联合作用(Quantitative analysis ofdose-effect relationships：the combined effects of multiple drugs or enzymeinhibitors).Adv.Enzyme Regulation 1984；22：27-55)所述的那样测定25、50和75％作用水平的联合指数(CI)。<1的CI表示协同的细胞毒性作用，CI＝1表示加和的细胞毒性作用，CI>1表示拮抗的细胞毒性作用。
U266B1骨髓瘤：与Velcade联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至拮抗的活性谱。
SKOV3卵巢腺癌：与Velcade联合时，如CI值<1所示的那样，表现出协同的细胞毒性作用。
A375黑素瘤：与Velcade联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至拮抗的活性谱。
MIA PaCa-2胰腺癌：与Velcade联合时，如CI值大约为1所示的那样，表现出加和的细胞毒性作用。
SW620结肠直肠腺癌：与Velcade联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至拮抗的活性谱。
Figure S05842979820070618D000431
实施例10：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和埃坡霉素B的组合
体外实验操作
细胞培养和细胞毒性试验
人非小细胞肺腺癌A549(CCL 185)和卵巢癌SK-OV-3(ATCC HTB77)细胞系得自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Rockville，MD，USA)。人转移的前列腺癌PC-3M得自Dr.I.J.Fidler(MD Anderson Cancer Center，Houston，TX，USA)。细胞培养基和添加物得自Animed/Bioconcept(Allschwil，瑞士)。
将这些细胞用RMI-1640培养基(补加了10％FCS、青霉素(100IU/ml)、链霉素(100μg/ml)和L-谷酰胺(2mM))在37℃下在恒温器中用5％v/v CO2和80％相对湿度的气氛进行培养。通过固定的亚甲蓝染色来对试验化合物对单层细胞增殖的抑制作用进行评估。在第0天，将这些细胞以1.5x103个细胞/孔的密度接种到96-孔微量滴定板中并将其培养过夜。如下那样，在同时以及顺序添加药物的情况下对埃坡霉素B和所述组合伴侣的药物相互作用进行评估。同时进行的药物添加：在第1天，将埃坡霉素B和所述组合伴侣同时加入并在第4天，在培养72小时后对其抗增殖作用进行评估。顺序进行的药物添加，a)“埃坡霉素B位于组合伴侣之前”：在第1天加入埃坡霉素B。在培养24小时后，在第2天通过吸取除去包含药物的培养基并且代之以包含所述组合伴侣的培养基。在再将其培养48小时后，在第4天对抗增殖作用进行评估。顺序进行的药物添加，b)“埃坡霉素B位于组合伴侣之后”：在第1天加入所述的组合伴侣。在培养24小时后，在第2天通过吸取除去包含药物的培养基并且代之以包含埃坡霉素B的培养基。在再将其培养48小时后，在第4天对抗增殖作用进行评估。将埃坡霉素B和所述组合伴侣按照给定的给药方案以固定的比例(倍数和分数)进行试验，所述固定的比例是指在预试验(pilot experiment)中所测定的各单一活性剂IC50的比例。将这些药物在最高的计划浓度下预混合，然后在深孔板中对其进行九个1.5-倍系列稀释。当对单一活性剂的活性进行评估时(其是在各实验中以内部参考物的形式平行地进行的)，用其相应的载体代替所述的组合伴侣。各种情况都是一式两份地存在的。在培养期结束时，将这些细胞用3.3％v/v戊二醛固定，用水洗涤并用0.05％w/v亚甲蓝对其进行染色。在洗涤后，将所述染料用3％HCl进行洗脱并用SpectraMax340分光光度计(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)在665nm下测量光密度。
药物相互作用的联合指数分析
为了用体外细胞生长抑制确定所述药物相互作用的性质(协同，加和或拮抗)，使用以中间剂量作用原理(median dose effect principle)为基础的联合指数方法(Chou TC and Talalay P Advanced Enzyme Regulation 1977；22:27-55)。这种方法考虑单独使用各药物的功效和各药物组合的功效、以及剂量-作用曲线的形状。数学分析(Chou TC，Motzer RJ，Tong Y and BoslGJ Journal of the National Cancer Institute1994；86：1517-1524.)是用商业软件(Calcusyn，Biosoft，UK)进行的。联合指数(CI)是以下面的多重药物作用方程为基础来进行计算的：CI＝(D)1/(Dx)1+(D)2/(Dx)2]。(D)1和(D)2是造成x％细胞生长抑制的组合中药物1和药物2的剂量。(Dx)1和(Dx)2分别是造成x％细胞生长抑制的单独使用的药物1和药物2的剂量。<1的CI表示高于加和作用(协同作用；值越小，协同度越高)，等于1的CI表示加和性，>1的CI表示拮抗作用。CI结果被表示为均值+/-均值的标准偏差(n＝3次独立实验)。
在A549(CCL 185)非小细胞肺腺癌SK-OV-3卵巢癌和PC-3M转移的前列腺癌中，7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和埃坡霉素B的组合在细胞培养物中表现出一种顺序依赖性作用的细胞毒性作用。同时加入产生了拮抗作用，其中根据给药方案给出了加和至协同的细胞毒性作用。
被同时或相继体外给药于A549(肺)、PC-3M(前列腺)和SK-OV-3(卵巢)癌细胞的7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和埃坡霉素B的抗增殖联合指数。
给药方案：(A)7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱+埃坡霉素B
(B)首先给予7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱，然后给予埃坡霉素B
(C)首先给予埃坡霉素B，然后给予7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱
联合指数
Figure S05842979820070618D000461
细胞杀伤(受影响的分数；相当于IC50、IC75和IC90)。将所计算的联合指数(CI)值表示为均值±均值的标准偏差(n＝3次独立实验)。定义：CI＝1表示加和作用。CI<1.0表示协同作用(该值越小，协同度越强)，而CI>1.0表示拮抗作用(该值越高，拮抗程度越强)。a不适用，即由于在所试验的药物范围内细胞作用的范围狭窄(低于50％受影响的分数)，所计算的CI值表现出错误的较大误差范围并且因此未表示出来。
实施例11：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和依维莫司的组合
体外实验操作
细胞培养和细胞毒性试验
A549非小细胞肺癌、A375黑素瘤、786-O肾细胞腺癌SKOV3卵巢腺癌、786-O肾细胞腺癌、PANC-1胰腺上皮样癌、U266B1骨髓瘤、SW620结肠直肠腺癌、HeLa宫颈癌和MIA PaCa-2胰腺癌得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。将所选择的细胞系以每孔1,000-2,000个细胞(对于附着细胞系而言)和每孔10,000-20,000个细胞(对于悬浮细胞系而言)的细胞计数为基础，用适宜的培养基进行稀释，以每孔100ul稀释的细胞将这些细胞涂到96孔板中。4.使这些细胞在恒温器中在37摄氏度，5％CO2和85％湿度下生长过夜，然后用药物对其进行处理。各化合物的稀释液是由DMSO溶液制得的。这些稀释液通常以EC50为中心并且可以是6或9种稀释液，这些稀释液覆盖与化合物接触时的细胞的全部剂量响应。对所述两种化合物的组合而言，制备第三个稀释物系列。对于该系列中的每一个稀释点而言，使用各化合物固定的比例。使这些细胞同时与所述化合物接触72小时，然后用Envision(PerkinElmer)微量培养板读数器，利用Alamar Blue荧光(ex535，em590)对各孔的增殖数量进行测量。
数据分析
由增殖抑制百分比来确定7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同药物之间的相互作用，所述增殖抑制百分比被定义为各孔的终点测定值除以对照孔的比值。然后，如Chou和Talay(Chou T-C，Talalay，P.剂量-作用关系的定量分析：多种药物或酶抑制剂的联合作用(Quantitative analysis ofdose-effect relationships：the combined effects of multiple drugs or enzymeinhibitors).Adv.Enzyme Regulation 1984；22：27-55)所述的那样测定25、50和75％作用水平的联合指数(CI)。<1的CI表示协同的细胞毒性作用，CI＝1表示加和的细胞毒性作用，CI>1表示拮抗的细胞毒性作用。
A549非小细胞肺癌：与依维莫司联合时，如CI值<1所示的那样，表现出协同的细胞毒性作用。
SKOV3卵巢腺癌：与依维莫司联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至加和的活性谱。
PANC-1胰腺上皮样癌：与依维莫司联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至加和的活性谱。
SW620结肠直肠腺癌：与依维莫司联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至加和的活性谱。
Figure S05842979820070618D000481
实施例12：7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)- 苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺的组合
体外实验操作
细胞培养和细胞毒性试验
A549非小细胞肺癌、A375黑素瘤、786-O肾细胞腺癌SKOV3卵巢腺癌、786-O肾细胞腺癌、PANC-1胰腺上皮样癌、U266B1骨髓瘤、SW620结肠直肠腺癌、HeLa宫颈癌和MIA PaCa-2胰腺癌得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。将所选择的细胞系以每孔1,000-2,000个细胞(对于附着细胞系而言)和每孔10,000-20,000个细胞(对于悬浮细胞系而言)的细胞计数为基础，用适宜的培养基进行稀释，以每孔100ul稀释的细胞将这些细胞涂到96孔板中。4.使这些细胞在恒温器中在37摄氏度，5％CO2和85％湿度下生长过夜，然后用药物对其进行处理。各化合物的稀释液是由DMSO溶液制得的。这些稀释液通常以EC50为中心并且可以是6或9种稀释液，这些稀释液覆盖与化合物接触时的细胞的全部剂量响应。对所述两种化合物的组合而言，制备第三个稀释物系列。对于该系列中的每一个稀释点而言，使用各化合物固定的比例。使这些细胞同时与所述化合物接触72小时，然后用Envision(PerkinElmer)微量培养板读数器，利用Alamar Blue荧光(ex535，em590)对各孔的增殖数量进行测量。
数据分析
由增殖抑制百分比来确定7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和不同药物之间的相互作用，所述增殖抑制百分比被定义为各孔的终点测定值除以对照孔的比值。然后，如Chou和Talay(Chou T-C，Talalay，P.剂量-作用关系的定量分析：多种药物或酶抑制剂的联合作用(Quantitative analysis ofdose-effect relationships：the combined effects of multiple drugs or enzymeinhibitors).Adv.Enzyme Regulation 1984；22：27-55)所述的那样测定25、50和75％作用水平的联合指数(CI)。<1的CI表示协同的细胞毒性作用，CI＝1表示加和的细胞毒性作用，CI>1表示拮抗的细胞毒性作用。
A549非小细胞肺癌：与{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺联合时，如CI值<1所示的那样，表现出协同的细胞毒性作用。
SKOV3卵巢腺癌：与{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至拮抗的活性谱。
PANC-1胰腺上皮样癌：与{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至拮抗的活性谱。
SW620结肠直肠腺癌：与{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至拮抗的活性谱。
MIA PaCa-2胰腺癌：与{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺联合时，如CI值<1所示的那样，表现出协同的细胞毒性作用。
A375黑素瘤：与{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺联合时，如CI值<1所示的那样，表现出协同的细胞毒性作用。
HeLa宫颈癌：与{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-((R)-1-苯基-乙基)-胺联合时，根据所用的药物浓度，表现出协同至加和的活性谱。
Figure S05842979820070618D000501

Claims (8)

1.7-叔-丁氧基亚氢基甲基喜树碱和紫杉醇在制备预防或治疗非小细胞肺癌的药物中的用途。
2.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和多西紫杉醇在制备预防或治疗乳癌、前列腺癌或非小细胞肺癌的药物中的用途。
3.一种药物组合物，其包含：
(a)7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱；和
(b)一种或多种选自紫杉醇和多西紫杉醇的微管活化剂。
4.7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱和埃坡霉素B在制备用于顺序应用来预防或治疗增殖性疾病的药物中的应用，其中所述的增殖性疾病选自肺癌、前列腺癌和卵巢癌。
5.权利要求3所述的药物组合物，其中的微管活化剂是紫杉醇。
6.权利要求3所述的药物组合物，其中的微管活化剂是多西紫杉醇。
7.一种联合制剂，其包含：
(a)一个或多个7-叔-丁氧基亚氨基甲基喜树碱的单位剂型；和
(b)一个或多个选自紫杉醇、多西紫杉醇和埃坡霉素B的微管活化剂的单位剂型。
8.权利要求7所述的联合制剂，其中的微管活化剂是埃坡霉素B。
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