ES2206478T3 - Composiciones carcinostaticas que contienen cis-oxaliplatino y otra u otras sustancias carcinostaticas compatibles. - Google Patents
Composiciones carcinostaticas que contienen cis-oxaliplatino y otra u otras sustancias carcinostaticas compatibles.Info
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Abstract
SE PRESENTA AQUI DENTRO UN PROCESO PARA ADMINISTRAR DE FORMA COMPATIBLE UNA SUSTANCIA CARCINOSTATICA CON CIS-OXALATO (1R,2RDIAMINOCICLOHEXANO) PT (II), O UN CIERTO COMPLEJO DE PLATINO, Y UNA SUSTANCIA CARCINOSTATICA QUE SE PUEDE UTILIZAR EN EL PROCESO ARRIBA INDICADO. LA COMBINACION DE LA SUSTANCIA CARCINOSTATICA, POR EJEMPLO, 5-FLUORURACIL Y EL COMPLEJO DE PLATINO ANTEDICHO DE LA PRESENTE INVENCION FOMENTAN LA PROPIEDAD CONTRA EL CANCER DE LA SUSTANCIA CARCINOSTATICA.
Description
Composiciones carcinostáticas que contienen
cis-oxaliplatimo y otra u otras sustancias
carcinostáticas compatibles.
La presente invención se refiere a un proceso
para administrar de forma compatible sustancias carcinostáticas y a
sustancias carcinostáticas administrables de forma compatible, y
especialmente a un proceso para administrar de forma compatible
sustancias carcinostáticas en el que el efecto sinérgico aparece
por administración compatible, a sustancias carcinostáticas
administrables de forma compatible utilizables en la práctica del
anterior proceso y a una sustancia carcinostática mezclada y
preparada al mezclar estas sustancias carcinostáticas. La presente
invención se refiere además a un proceso para inspeccionar
rápidamente las sustancias carcinostáticas.
Generalmente, una sustancia carcinostática se
administra de forma compatible con otra sustancia carcinostática
para elevar su eficacia y para evitar que las células tumorales
adquieran una resistencia contra un medicamento. No obstante, no ha
existido ningún método especial para seleccionar adecuadamente la
sustancia administrable. La sustancia administrable se ha
seleccionado dependiendo de la experiencia de un médico clínico
teniendo en cuenta las consideraciones generales de que \code{1}
una sustancia administrable sea también eficaz cuando se utilice
por sí misma y que \code{2} un efecto colateral no se superponga
con el de la sustancia administrable.
El documento
WO-A-94 12 193 describe la
administración conjunta de oxaliplatino junto con la sustancia
carcinostática cisplatino. Se obtuvo un efecto terapéutico óptimo
sin presentar efectos colaterales acumulativos.
El documento "Oxaliplatin" Drugs Fut., vol.
19, nº 6, 1994, páginas 606-607, XP002094672, el
documento de Lévi et al., J. Natl. Cancer Inst., vol. 86, nº 21,
(1994), páginas 1608-1617 y el documento de Mathé G.
et al.: Biomed. & Pharmacother., vol. 43, 1989, páginas
237-250, describen estudios preclínicos que
utilizan oxaliplatino en regímenes de combinación con la sustancia
carcinostática 5-FU
(5-fluorouracilo) para el tratamiento de cáncer
colorrectal.
En la célula con tumor se obtiene una reacción
para recuperarse del daño inducido por un medicamento (sustancia
carcinostática), y si el mecanismo de recuperación no se produce de
forma suficiente, la célula tumoral llega a extinguirse. No
obstante, para conseguir la extinción se requiere un cierto periodo
de tiempo (necesidad de administración adicional). Cuando se
utilizan de forma compatible dos o más tipos de sustancias
carcinostáticas, puede tener lugar una reacción biológica celular
(efecto sinérgico) que no puede ser reconocida en la administración
individual, y en este caso pueden aparecer de forma competitiva las
acciones diferenciadas de las respectivas sustancias
carcinostáticas (no elucidadas completamente). Para elucidar el
anterior mecanismo son necesarias varias administraciones
realizadas en condiciones diferentes tales como la dosificación de
los agentes compatibles y el tiempo de dosificación.
El presente inventor ha desarrollado una técnica
razonable en relación con la administración compatible de
sustancias carcinostáticas (CANCER CHEMOTHERAPY: Challenge for the
Future, vol. 4, 1989; Molecular Biology of DNA Topoisomerases,
Proceedings of the International Symposium on DNA Topoisomerases in
Chemotherapy, 1991), y ha demostrado el efecto de la administración
compatible de las diversas sustancias carcinostáticas. No obstante,
la combinación de la sustancia carcinostática que produce el efecto
sinérgico es deficiente de manera que el efecto satisfactoriamente
compatible de las sustancias carcinostáticas no se puede obtener
fácilmente.
Los medicamentos se dividen en líneas generales
según los medios de administración en dos grupos uno de los cuales
se refiere a la administración a través de una inyección
intravenosa y el otro se refiere a la administración peroral. La
mayoría de sustancias carcinostáticas convencionales de platino se
administran peroralmente de manera que al paciente se le asigna una
responsabilidad considerable.
Al mismo tiempo, una célula desde que nace hasta
que muere está realizando varios cambios morfológicos especialmente
un cambio del núcleo. Es interesante monitorizar los cambios
morfológicos en relación con la biología molecular. Para llevar a
cabo esta monitorización, generalmente se utiliza un microscopio de
manera que se observa visualmente la condición de la célula. No
obstante, en esta observación por microscopio utilizada
normalmente, los cambios morfológicos en el interior de la célula
no se pueden monitorizar de manera que se ha propuesto la
utilización de colorantes fluorescentes.
No obstante, el colorante fluorescente destruye
la célula después de haberse unido a la célula de manera que la
observación continua de los cambios morfológicos de la célula viva
puede resultar imposible aunque se pueda observar la morfosis de la
célula en el momento de utilizar el colorante fluorescente.
Para superar este inconveniente, el presente
inventor había investigado varios tipos de colorante fluorescente
para proponer el
4',6-diamidino-2-fenilindol
\cdot 2HCl (al que en lo sucesivo se hace referencia como
"DAPI") como colorante fluorescente que se puede utilizar para
observar continuamente los cambios morfológicos de células vivas sin
extinguir las células incluso si se une a la célula [Artículo en el
General Meeting of Japan Cancer Institute (Julio, 1990) página 390,
1946].
\newpage
Por otro lado, entre los cambios morfológicos la
división celular es un fenómeno especialmente interesante, y el
proceso de la división celular se clasifica y divide en una
división profase, una división metafase, una división anafase y una
división telofase. Las Figs. 1 a 9 muestran sucesivamente las
condiciones de la división celular desde la división profase en el
momento del inicio de la división celular hasta la telofase de la
división celular. Los lados izquierdos de las figuras respectivas
son microfotografías de 1500 aumentos de la división celular
tomadas sin utilizar colorante fluorescente. Entre ellas, las Figs.
1 a 3 muestran las células de la división profase, las Figs. 4 a 6
muestran las células de la división metafase, la Fig. 7 muestra las
células de la división anafase y las Figs. 8 y 9 muestran las
células de la división telofase.
Las células de las Figs. 1 a 9 están en las
condiciones de la división celular, aunque solamente las células de
las Figs. 6 a 9 se pueden reconocer como que están en la división
celular a través de la observación habitual por microscopio que
utiliza muestras fijadas por medio de un fijador. Las células de
las Figs. 1 a 5 no se pueden reconocer únicamente a través de la
observación habitual por microscopio.
El reconocimiento sencillo de si la célula está o
no en la condición de la división celular es importante no
solamente con fines científicos sino también con el objeto de
confirmar la eficacia de los diversos medicamentos.
No obstante, tal como se ha mencionado, entre las
diversas fases de la división celular, las condiciones de división
de las células en la división profase y en el periodo que va desde
la primera mitad hasta el comienzo de la segunda mitad de la
división metafase no se pueden reconocer a través de la observación
habitual por microscopio de manera que es imposible el estudio
detallado de las mismas.
La aparición frecuente de los diversos cánceres
en órganos exige desarrollos fundamentales de sustancias
antitumorales o sustancias carcinostáticas, y en estos desarrollos,
es esencial llevar a cabo rápidamente la inspección de la eficacia
de las sustancias carcinostáticas (prueba de sensibilidad) para
reducir los gastos de desarrollo.
La anterior prueba de inspección se divide en
líneas generales en dos métodos. Un primer método consiste
esencialmente en cultivar células tumorales, cultivando las células
tumorales en un tubo de ensayo con sustancias carcinostáticas y
juzgando el grado de extinción después de la extinción de las
células, y un segundo método consiste esencialmente en inyectar o
administrar peroralmente sustancias carcinostáticas a un animal al
que se le han trasplantado células tumorales y comparar el número
de días de supervivencia de los animales para juzgar la eficacia de
las sustancias carcinostáticas.
La determinación de la eficacia de las sustancias
carcinostáticas no se puede realizar antes de la extinción de las
células o la muerte de los animales en cada uno de los métodos
anteriores y normalmente se requieren entre una y cuatro semanas
para la determinación de manera que no solo es imposible una
determinación rápida sino que también aumentan los gastos para
continuar con la prueba.
Aunque el presente inventor ha propuesto un
método para inspeccionar más rápidamente la eficacia de medicamentos
(boletín publicado de patente japonesa nº
58-184547), en el método del tubo de ensayo y en el
método con animales, para la determinación se requieren,
respectivamente, no menos de cuatro días y entre siete y cuatro
semanas.
Además en estos métodos, únicamente se pone de
manifiesto la eficacia de medicamentos o el efecto de extinción y no
se puede especificar cómo funciona la sustancia carcinostática para
extinguir las células cancerígenas (mecanismo).
Aunque el método anterior que utiliza DAPI como
colorante fluorescente ha posibilitado la observación visual del
proceso de extinción celular por medio de la sustancia
carcinostática mientras se mantienen las células vivas, no se puede
confirmar la eficacia de la sustancia carcinostática sin la
observación de la extinción celular en dicho proceso de manera que
se requieren entre tres y seis días.
A la vista de los anteriores inconvenientes, un
objetivo de la presente invención es proporcionar un proceso para
administrar de forma compatible cis-oxalato
(1R,2R-diaminociclohexano) Pt (II) (al que en lo
sucesivo se le hace referencia como
"\ell-OHP") que es una sustancia
carcinostática nueva con una o más sustancias carcinostáticas
existentes.
Otro objetivo de la presente invención es
proporcionar el proceso anterior en el que se propone la
combinación óptima de las sustancias carcinostáticas.
Un objetivo adicional de la presente invención es
proporcionar un proceso para administrar de forma compatible un
complejo nuevo de platino con una o más sustancias carcinostáticas
existentes para elevar adicionalmente la propiedad anticancerígena
de una sustancia carcinostática uno de cuyos componentes
principales es el anterior complejo de platino.
Todavía otro objetivo de la presente invención es
proporcionar un proceso para distinguir fácilmente células no
solamente en la división anafase y la división telofase dentro de
la división celular sino también en la división profase y la
división metafase y para observar su morfosis.
Todavía otro objetivo de la presente invención es
proporcionar un proceso para inspeccionar la eficacia de sustancias
carcinostáticas utilizando el anterior proceso de distinción de las
células.
Un primer aspecto de la presente invención es un
proceso para administrar de forma compatible una sustancia
carcinostática que comprende la administración compatible de uno o
más agentes compatibles seleccionados de un grupo consistente en
cisplatino, carboplatino, 5-fluorouracilo (al que en
lo sucesivo se hace referencia como "5-FU"),
tegaful, carmoful, doxifluridina, uracilo, irinotecano,
adriamicina, etopósido, mitomicina, mitoxisantrona y bleomicina con
\ell-OHP.
Un segundo aspecto de la presente invención es
una sustancia carcinostática seleccionada de un grupo consistente
en cisplatino, carboplatino, 5-FU, tegaful,
carmoful, doxifluridina, uracilo, irinotecano, adriamicina,
etopósido, mitomicina, mitoxantrona y bleomicina que se pueden
administrar de forma compatible con \ell-OHP.
Esta sustancia carcinostática se puede preparar simplemente
mezclando el cisplatino o similares y el \ell-OHP
o realizando un enlace de coordinación entre ellos.
Un tercer aspecto de la presente invención es un
proceso para administrar de forma compatible una sustancia
carcinostática que comprende la administración compatible de uno o
más agentes compatibles seleccionados de un grupo consistente en
cisplatino, vincristina, carboplatino, 5-FU,
tegaful, carmoful, doxifluridina, uracilo, irinotecano,
adriamicina, etopósido, mitomicina, mitoxantrona y bleomicina con
un complejo de platino que presenta una Fórmula I [en esta Fórmula,
una Fórmula II es una diamina seleccionada de un grupo consistente
en 1,2-cicloalcano (C_{5} a C_{7}) diamina {su
estéreoestructura es cis-(R,S-),
trans-d(1S,2S-) o
trans-\ell (1R,2R-)} que presenta una Fórmula
III, 2-aminometilciclohexilamina {su
estéreoestructura es cis-\ell (R,R-),
cis-d(S,S-), trans-\ell
(R,S-) o trans-d(S,R-)} que presenta una
Fórmula IV y 1,1-diaminometilciclohexano,
0-feniléndiamina, etiléndiamina o propiréndiamina
que presenta una Fórmula V, y una Fórmula VI es un ligando que
forma un anillo de cinco o seis miembros coordinado con
Pt(IV) en coordinación 0-0, y X es un
alquilo alifático o un alquilo aromático que tiene de C_{1} a
C_{10}].
Un cuarto aspecto de la presente invención es una
sustancia carcinostática que comprende el agente compatible y el
complejo de platino del tercer aspecto.
Un quinto aspecto de la presente invención es un
proceso para observar la división celular que comprende la adición
de un colorante fluorescente a las células a observar, la unión del
colorante fluorescente con cada célula, y la observación de las
células con un microscopio para clarificar la condición de división
celular.
Un sexto aspecto de la presente invención es un
proceso para inspeccionar rápidamente una sustancia carcinostática
que comprende la adición de un colorante fluorescente y una
sustancia carcinostática a inspeccionar a una pluralidad de células
cancerígenas que se han cultivado, la continuación de la
cultivación, la medición del número de las células en el periodo de
división que aparecen en la pluralidad de las células cancerígenas
y la inspección del efecto de la sustancia carcinostática.
Según el primer aspecto de la presente invención,
tal como se muestra en los Ejemplos posteriores, las
administraciones compatibles, a las células tumorales, del
\ell-OHP y las sustancias carcinostáticas
existentes presentan, en casi todos los casos, un efecto aditivo de
extinción de las células tumorales y, en la mayoría de los casos,
presentan un efecto sinérgico.
El aumento del efecto de extinción de las células
tumorales obtenido por la administración compatible de las
sustancias carcinostáticas es notablemente significativo
especialmente en los márgenes que compiten con el ritmo de
multiplicación de las células tumorales, e incluso un ligero aumento
del efecto de extinción puede fomentar notablemente el efecto
terapéutico.
El aumento del efecto de extinción según el
proceso anterior de administración compatible de las sustancias
carcinostáticas se realiza de manera que resulta trascendental
seleccionando adecuadamente la combinación de las sustancias
carcinostáticas de modo que este proceso puede contribuir
considerablemente a la mayoría de terapias contra el cáncer.
El \ell-OHP y el agente
compatible se pueden administrar simultáneamente o cualquiera de
ellos se puede añadir después del otro, y la planificación temporal
de la administración se puede determinar dependiendo de la
combinación.
No obstante, para reducir la carga de
responsabilidad del paciente y del médico, es deseable la
administración simultánea, y un agente compatible especialmente
eficaz es el 5-FU cuyo efecto producido por su
administración simultánea es dos veces un valor esperado.
La sustancia carcinostática administrable de
forma compatible de acuerdo con el segundo aspecto posee el efecto
terapéutico notable contra el cáncer según se ha mencionado en
relación con el primer aspecto.
Es preferible, en el caso de la combinación de
las sustancias carcinostáticas preferentemente administradas de
forma simultánea, la formación de un gránulo o la preparación de
una ampolla para inyección con la mezcla del
\ell-OHP y uno o más agentes compatibles ya que se
puede evitar la tarea de la administración compatible.
Según el tercer aspecto de la presente invención
similar al primer aspecto, las administraciones compatibles, a las
células tumorales, del complejo de platino que presenta una Fórmula
VII y las sustancias carcinostáticas existentes presentan, en casi
todos los casos, un efecto aditivo de extinción de las células
tumorales y, en la mayoría de los casos, presentan un efecto
sinérgico.
La sustancia carcinostática administrable de
forma compatible según el cuarto aspecto posee el efecto
terapéutico notable contra el cáncer según se ha mencionado en
relación con el tercer aspecto.
El quinto aspecto de la presente invención
permite la observación visual de las células divididas bajo la
división profase y la división metafase las cuales son difíciles de
observar visualmente, añadiendo el colorante fluorescente que se
puede unir a células comunes y células cancerígenas bajo el cultivo
y uniendo el colorante a dichas células, y en otras palabras,
permite la observación no solamente de la forma de la célula
dividida sino también del cambio de un cromosoma de manera que se
posibilita la observación de dicha célula dividida bajo la división
profase y la división metafase en las que muy ocasionalmente se
puede producir un cambio externo.
Según este método de observación, se puede contar
de forma precisa el número de las células bajo la división celular
de entre una gran cantidad de células de manera que se puede
calcular un porcentaje de las células bajo la división celular con
respecto a la totalidad de las células.
Si la sustancia carcinostática a inspeccionar
presenta el mismo número de las células bajo la división celular
que el de un control que no tiene ninguna sustancia carcinostática,
dicha sustancia carcinostática a inspeccionar no posee ninguna
propiedad antitumoral. Por otro lado, si dicha sustancia presenta un
número menor o mayor que el del control, la sustancia
carcinostática a inspeccionar posee la propiedad antitumoral de
manera que se puede juzgar la eficacia como sustancia
carcinostática contando el número de las células bajo la división
celular y comparando el número con el del control.
Las Figs. 1 a 3 son microfotografías de 1500
aumentos de células en la profase de la división celular.
Las Figs. 4 a 6 son microfotografías de 1500
aumentos de células en la metafase de la división celular.
La Fig. 7 es una microfotografía de 1500 aumentos
de células en la anafase de la división celular.
Las Figs. 8 y 9 son microfotografías de 1500
aumentos de células en la telofase de la división celular.
En las Figs. 1 a 9, los lados izquierdos de las
mismas son los correspondientes sin colorante fluorescente y los
lados derechos son los correspondientes con colorante
fluorescente.
La Fig. 10 es un diagrama que muestra una
planificación temporal de la administración compatible de agentes
compatibles y \ell-OHP en el Ejemplo 1.
La Fig. 11 es un diagrama que muestra valores
calculados de efectos de extinción en las condiciones respectivas
de administración compatible de agentes compatibles y
\ell-OHP en el Ejemplo 1.
La Fig. 12 es un gráfico que muestra cambios en
el tiempo de ritmos de extinción de células tumorales cuando se
utiliza individualmente OR 36-3 en el Ejemplo
Comparativo 1.
La Fig. 13 es un gráfico que muestra cambios en
el tiempo de ritmos de extinción de células tumorales cuando se
administra de forma compatible OR 36-3 con
vincristina en el Ejemplo 2.
La Fig. 14 es un gráfico que muestra cambios en
el tiempo de ritmos de extinción de células tumorales cuando se
administra de forma compatible OR 36-3 con
cisplatino en el Ejemplo 3.
La Fig. 15 es un gráfico que muestra una relación
entre un tiempo de cultivo y un porcentaje de células divididas en
una prueba de inspección para sustancias carcinostáticas en el
Ejemplo 4.
El ritmo de multiplicación de células tumorales
es mayor que el de una célula común de manera que si el efecto de
extinción de la sustancia carcinostática contra las células
tumorales es sustancialmente el mismo o menor que el ritmo de
multiplicación, dicha sustancia únicamente puede retrasar el avance
del cáncer y no se puede esperar una terapia fundamental. La
sustancia carcinostática posee su propia dosificación óptima e
incluso si se administra una cantidad de la sustancia carcinostática
mayor que la dosificación óptima, el efecto de extinción no aumenta
proporcionalmente y únicamente se espera un aumento ligero. Por
otra parte, aparece más severamente un efecto negativo debido a los
daños de las células comunes inducidos por la dosificación elevada
de manera que raramente se espera un aumento del efecto terapéutico
por medio de la dosificación elevada de la sustancia carcinostática
individual.
La administración compatible de las sustancias
carcinostáticas llevada a cabo convencionalmente amplia la
posibilidad de la terapia contra el cáncer superando la limitación
de la dosificación elevada de la sustancia carcinostática
individual. Aunque el mecanismo no se ha elucidado suficientemente,
la utilización de la combinación específica puede introducir la
posibilidad de aumentar notablemente el efecto de extinción de las
células tumorales. Es decir, la utilización de una sustancia
carcinostática A y una sustancia carcinostática B puede introducir
un efecto que es igual al total de un efecto de extinción de la
utilización de la sustancia carcinostática individual A y de un
efecto de extinción de la utilización de la sustancia
carcinostática individual B (efecto aditivo) o que es mayor que el
anterior efecto total (efecto sinérgico).
La sustancia carcinostática es insuficiente
solamente para retrasar el avance del cáncer y es deseable la
extinción completa de las células tumorales. Para conseguir esta
extinción, se requiere extinguir las células tumorales más
rápidamente que el ritmo de multiplicación de las células tumorales,
y teóricamente las células tumorales finalmente se extinguen de
forma completa incluso cuando el ritmo de extinción de las células
tumorales por medio de la sustancia carcinostática es ligeramente
mayor que el ritmo de multiplicación de las mismas. No obstante,
debido al peligro de la transferencia de las células tumorales y de
la administración de la sustancia carcinostática tóxica a un
paciente durante un periodo prolongado de tiempo, se ha solicitado
la realización de una sustancia carcinostática que pueda extinguir
las células tumorales en un periodo breve de tiempo. Para conseguir
esta realización, es esencial la combinación de dos o más
sustancias carcinostáticas de forma sinérgica que aumenta el efecto
de extinción de las células tumorales, y la aparición de la
combinación de las sustancias carcinostáticas que tiene el efecto
sinérgico contribuye decisivamente a la quimioterapia actual contra
el cáncer.
Aunque el mecanismo de extinción de las células
tumorales por medio de la administración compatible de las
sustancias carcinostáticas no se ha elucidado todavía
completamente, los efectos de la administración en las fases
respectivas después de la administración compatible o los efectos
que dependen del tiempo después de la administración compatible
permiten proporcionar información estratégica nueva con respecto a
la extinción de las células tumorales que no se puede producir
convencionalmente simplemente confirmando la vida y la muerte de
las células tumorales.
El primer y segundo aspectos de la presente
invención proponen la combinación de las sustancias carcinostáticas
que tienen especialmente el efecto sinérgico o que tienen por lo
menos el efecto aditivo, y utilizan \ell-OHP que
presenta una Fórmula I como sustancia carcinostática objetivo que se
administra de forma compatible con una o más sustancias
carcinostáticas existentes. La administración compatible de forma
sinérgica o aditiva mejora la propiedad anticancerígena del
\ell-OHP.
Los presentes inventores han intentado medir los
efectos de la extinción de células tumorales producidos por la
administración compatible de 15 tipos de sustancias carcinostáticas
existentes (agentes compatibles) que incluyen cisplatino,
carboplatino, 5-FU, tegaful, carmoful,
doxifluridina, uracilo, irinotecano, adriamicina, etopósido,
mitomicina, mitoxantrona, bleomicina, vincristina y vindecina y del
\ell-OHP (agente objetivo, Fórmula VII). Además de
la simple administración compatible también se han investigado un
método de administración (administración simultánea, administración
por adición) y una dosificación (administración en grandes
cantidades, administración en pequeñas cantidades).
En la evaluación del efecto de extinción de las
células tumorales de las respectivas combinaciones, se calcula un
puro efecto de extinción producido por la administración compatible
del agente compatible y el \ell-OHP restando un
efecto de extinción de un control (no se utiliza ninguna sustancia
carcinostática).
El efecto de administración de forma compatible
se calcula utilizando una ecuación \code{1} descrita
posteriormente. Cuando el valor (%) calculado por esta ecuación
está entre 85 y 115%, el efecto de administración compatible se
evalúa como un efecto aditivo. Cuando el valor está por debajo del
85%, se evalúa de manera que está por debajo del efecto aditivo.
Cuando el valor está por encima del 115%, se evalúa como un efecto
sinérgico. El \pm15% es un límite de fiabilidad o un error de
medición.
Como consecuencia, tal como se describirá de
forma detallada posteriormente, los ocho agentes compatibles, es
decir, cisplatino, 5-FU, irinotecano, adriamicina,
etopósido, mitomicina, mitoxantrona y bleomicina producen el efecto
aditivo o el efecto sinérgico con independencia del método de
administración y la dosificación en casi todos los casos.
Especialmente, los efectos compatibles del cisplatino y el
5-FU son notables y la combinación del
5-FU y el \ell-OHP es la más
adecuada. Por otro lado, los dos agentes compatibles, es decir, la
vincristina y la vindecina producen el efecto aditivo en el mejor
de los casos.
En la administración compatible del cisplatino y
el \ell-OHP, se pueden obtener los efectos
sinérgicos en todos los casos cuando el cisplatino y el
\ell-OHP se administran simultáneamente y el
\ell-OHP se administra antes que el cisplatino, y
dependiendo de las condiciones, los efectos de extinción de las
células tumorales son dos veces el valor esperado (efecto
aditivo).
En la administración compatible del
5-FU y el \ell-OHP, se pueden
obtener los efectos sinérgicos en casi todas las condiciones de
administración con independencia del método de administración y la
dosificación del 5-FU, y de forma similar al caso
anterior del cisplatino, se puede obtener el efecto de extinción de
las células tumorales que es dos veces el valor esperado. De entre
los agentes compatibles investigados, se puede obtener el efecto más
excelente en la combinación anterior, y el 5-FU es
el más recomendable como agente compatible con el
\ell-OHP.
En la administración compatible del irinotecano y
el \ell-OHP, los efectos sinérgicos se pueden
obtener en todas combinaciones cuando el \ell-OHP
se añade posteriormente.
En la administración compatible de la adriamicina
y el \ell-OHP, los efectos sinérgicos se pueden
obtener en casi todas las combinaciones cuando el
\ell-OHP se añade posteriormente.
En la administración compatible del etopósido y
el \ell-OHP, los efectos sinérgicos se pueden
obtener en casi todas las combinaciones cuando el
\ell-OHP se añade posteriormente.
En la administración compatible de la mitomicina
y el \ell-OHP, los efectos sinérgicos se pueden
obtener en la mayoría de las combinaciones cuando el
\ell-OHP se administra antes que la
mitomicina.
En la administración compatible de la
mitoxantrona y el \ell-OHP, los efectos
sinérgicos se pueden obtener en todas combinaciones cuando se
utiliza una cantidad pequeña de la mitoxantrona y el
\ell-OHP se añade posteriormente.
\newpage
En la administración compatible de la bleomicina
y el \ell-OHP, los efectos sinérgicos se pueden
obtener en la mayoría de las combinaciones cuando el
\ell-OHP se añade posteriormente en un tercer día
y un cuarto día.
En el carboplatino, el tegaful, el carmoful, la
doxifluridina y el uracilo se espera obtener el mismo efecto o
ligeramente menor que el del cisplatino y del 5-FU.
También se espera que el efecto compatible del
\ell-OHP y un medicamento individual del
5-FU o la composición (mezcla del tegaful y el
uracilo) sea similar al del 5-FU y el
\ell-OHP.
Dos o más de estos agentes compatibles eficaces
se pueden utilizar de forma compatible con el
\ell-OHP así como un agente compatible se utiliza
individualmente con el \ell-OHP, y se puede
esperar un efecto adicional por medio de la anterior administración
compatible.
En la administración compatible de la vincristina
y el \ell-OHP, no se pueden obtener efectos
sinérgicos en todas las combinaciones y los efectos aditivos se
pueden obtener en la mayoría de las combinaciones.
En la administración compatible de la vindecina y
el \ell-OHP, no se pueden obtener efectos
sinérgicos en la totalidad de las 14 combinaciones y los efectos
aditivos se pueden obtener en solamente tres combinaciones de manera
que la vindecina es la peor de entre los agentes compatibles
inspeccionados.
Tal como se ha mencionado, el efecto compatible
se ve influido no solamente por el tipo de agente compatible sino
también por la dosificación y la planificación temporal de la
administración. Aunque no existe ningún estándar claro en relación
con la dosificación, la influencia clara de la planificación
temporal de la administración se aplica al efecto de los respectivos
agentes compatibles. Aunque en la mayoría de los casos se obtiene
un efecto que es aproximadamente dos veces el valor esperado cuando
la administración del \ell-OHP es anterior y el
cisplatino se añade posteriormente, el efecto sinérgico se obtiene
solamente en una combinación y un efecto inferior al efecto
sinérgico se obtiene en tres combinaciones cuando la administración
del cisplatino es anterior.
Cuando a un paciente se le administra una
medicina, la administración simultánea es más preferible que la
administración con periodo de retardo ya que la carga de
responsabilidad para el paciente y un médico es mayor en la
administración con periodo de retardo. El 5-FU
produce un efecto del 180% o el 150% del valor esperado en la
administración simultánea, y es evidente en relación con esto que
es preferible la combinación del 5-FU y el
\ell-OHP. En la presente invención, la
administración simultánea incluye un caso en el que se administran
simultáneamente una pluralidad de sustancias carcinostáticas sin
periodo de retardo y otro caso en el que se administran
continuamente una pluralidad de sustancias carcinostáticas con un
ligero periodo de retardo por medio de procedimientos de
administración independientes, y los otros casos se incluyen en la
administración con periodo de retardo.
Aunque en los Ejemplos posteriores del primer y
el segundo aspectos de la presente invención, la administración
compatible se llevó a cabo únicamente sobre células tumorales de
leucemia, se espera que el proceso de administración y la sustancia
carcinostática mezclada puedan presentar el efecto sinérgico y el
efecto aditivo en otros cánceres de órganos.
La administración de la sustancia carcinostática
se puede llevar a cabo peroralmente o a través de una inyección, la
vagina, el ano o por aplicación en la piel. Cuando el efecto se
produce por la administración simultánea del
\ell-OHP y el agente compatible, ambos agentes se
pueden mezclar y se pueden constituir en una pastilla o se pueden
almacenar en una ampolla para inyección. Como alternativa a la
mezcla, el \ell-OHP y el agente compatible se
pueden integrar por medio de un enlace químico y se pueden añadir a
la pastilla o almacenar en la ampolla. Cuando es preferible la
administración con periodo de retardo, el
\ell-OHP y el agente compatible se preparan por
separado y en primer lugar se administra uno de ellos y el otro se
añade posteriormente.
Según el tercer y cuarto aspectos de la presente
invención, se propone la combinación de sustancias carcinostáticas
que presentan por lo menos el efecto aditivo en la que un complejo
de platino que presenta la Fórmula I se utiliza como sustancia
carcinostática objetivo y se administra de forma compatible con una
o más sustancias carcinostáticas existentes. El efecto
anticancerígeno en el complejo de platino aumenta de forma
sinérgica o aditiva por medio de la administración compatible de
manera que se espera una gran contribución a la terapia contra el
cáncer por medio de la administración compatible.
En la Fórmula I, la Fórmula II es una diamina
seleccionada de un grupo consistente en
1,2-cicloalcano (C_{5} a C_{7}) diamina {su
estéreoestructura es cis-(R,S-),
trans-d(1S,2S-) o
trans-\ell (1R,2R-)} que presenta una Fórmula
III, 2-aminometilciclohexilamina {su
estéreoestructura es cis-\ell (R,R-),
cis-d(S,S-), trans-\ell
(R,S-) o trans-d(S,R-)} que presenta una
Fórmula IV y 1,1-diaminometilciclohexano,
0-feniléndiamina, etiléndiamina o propiréndiamina
que presenta una Fórmula V, y la Fórmula VI es un ligando que forma
un anillo de cinco o seis miembros coordinado con Pt(IV) en
coordinación 0-0, por ejemplo, una Fórmula VIII,
una Fórmula IX, una Fórmula X, una Fórmula XI, una Fórmula XII y
una Fórmula XIII, y X es un alquilo alifático o un alquilo
aromático que tiene de C_{1} a C_{10}].
En la presente invención, se intenta la medición
de los efectos de extinción de células tumorales producidos por la
administración compatible de las sustancias carcinostáticas
existentes (agentes compatibles) que incluyen cisplatino,
carboplatino, 5-FU, tegaful, carmoful,
doxifluridina, uracilo, irinotecano, adriamicina, etopósido,
mitomicina, mitoxantrona, bleomicina, vincristina y vindecina y del
complejo de platino (agente objetivo).
La evaluación se lleva a cabo según los mismos
procedimientos de los anteriores primer y segundo aspectos.
Como consecuencia, se clarifica que se obtiene el
efecto sinérgico por la administración compatible del complejo de
platino con el cisplatino o con la vincristina.
En el quinto y sexto aspectos de la presente
invención, se utiliza el colorante fluorescente que se une a
células sin extinguir las células para generar fluorescencia. Como
dicho colorante fluorescente, se puede utilizar el mencionado DAPI.
Aunque el DAPI es conocido de por sí, la utilización para la
observación de la división celular mientras se mantienen las células
vivas es desconocida. Los presentes inventores han investigado
colorantes fluorescentes tales como el Hoechst 33258, el naranja de
acridina y el amarillo de acridina diferentes al DAPI. Su toxicidad
es demasiado fuerte para mantener la célula viva.
Cuando el DAPI que es un colorante fluorescente
se cultiva con células comunes o cancerígenas, el DAPI se une al
núcleo de la célula para generar fluorescencia. La célula unida con
el DAPI clarifica más el estado del núcleo de la célula en el
momento de la división celular. Los lados de la derecha de las Figs.
1 a 9 son microfotografías de las células unidas con el DAPI bajo
los mismos estados de la división celular que los de los lados de la
izquierda de las Figs. 1 a 9 en los que las células no están unidas
con el colorante fluorescente.
En las microfotografías del lado derecho de las
Figs. 1 a 9, por medio de la fluorescencia se pueden reconocer los
estados celulares no solamente en la última parte de la división
metafase (Fig. 6), en la división anafase (Fig. 7) y en la división
telofase (Figs. 8 y 9) sino también en la división profase (Figs. 1
a 3) y desde el comienzo hasta la mitad de la división metafase
(Figs. 4 y 5).
Aunque con el microscopio común se puede observar
solamente el cambio de morfosis acompañado por el cambio externo de
la célula, la célula en la división profase y en la división
metafase que no viene acompañada por los cambios externos se puede
observar y reconocer según el quinto aspecto de la presente
invención ya que la división cromosómica en la célula viva también
es reconocida.
A continuación, se describirá un proceso de
inspección de una sustancia carcinostática que utiliza el proceso
anterior de observación de la división celular.
La primera razón por la que una célula tumoral o
cancerígena es maligna es porque la célula cancerígena se multiplica
libremente. Por consiguiente, si la administración de la sustancia
carcinostática detiene la multiplicación de las células
cancerígenas, esto significa que la sustancia administrada funciona
realmente como una sustancia carcinostática.
Después de preparar por cultivo una cierto número
de células cancerígenas, a dichas células cancerígenas se les añade
una sustancia carcinostática. Se cuenta el número de las células
bajo la división celular en los respectivos tiempos de medición
mientras se continúa con el cultivo. Como la división celular no se
produce continuamente y, por ejemplo, se produce una vez al día
aproximadamente durante 30 minutos, el recuento individual de las
células divididas no puede determinar de forma precisa la eficacia
de la sustancia carcinostática. Por consiguiente, la eficacia de la
sustancia carcinostática se puede inspeccionar contando el número de
las células bajo división celular de entre un cierto número (por
ejemplo, mil) de células varias veces, comparando dicho número con
el del primer recuento mencionado o el recuento previo de las mismas
e interpretando el progreso de la división celular por medio del
aumento o la reducción de la anterior comparación.
Si el DAPI se añade con la sustancia
carcinostática durante este procedimiento, se puede realizar el
recuento preciso del número de las células divididas ya que se
pueden reconocer las células bajo cualquier fase de la división
celular.
Cuando el número de las células divididas
disminuye como consecuencia de la comparación entre los valores de
medición, se determina que la multiplicación de las células
cancerígenas se retrasa, o que se consigue la función de la
sustancia carcinostática. Por otro lado, cuando el número de las
células divididas aumenta en comparación con el control, se
determina la realización de una cierta función de la sustancia
carcinostática.
Aunque la administración de la sustancia
carcinostática retrasa la división celular ya que la sustancia
carcinostática común funciona de manera que retrasa la división
celular, una cierta sustancia carcinostática funciona de manera que
detiene la división adicional de las células bajo división celular
para detener la multiplicación de dichas células bajo división
celular de manera que presenta su propiedad antitumoral. En el caso
de esta sustancia carcinostática, el número de las células bajo
división celular aumenta demostrando la existencia de la propiedad
antitumoral.
Aunque se describirán Ejemplos de la presente
invención, no se considera que estos Ejemplos limitan la presente
invención.
La célula tumoral objetivo era una célula de cepa
de leucocitos humanos (RPMI-8402 de Gibuko K. K.).
A estas células se les añadió suero sanguíneo de un embrión vacuno
(15%, Gibuko K. K.) para preparar un líquido de flotación con
células cuyo número de células era 10^{5}/ml en una botella de
cultivo (nombre comercial: Sumiron de Sumitomo Bakelite o., Ltd.)
que tiene un volumen de 5 ml. Se prepararon una gran cantidad de las
botellas de cultivo que tenían el líquido de flotación con células
en su interior, y se llevaron a cabo los siguientes experimentos
mientras se seleccionaba un tipo de agente compatible de entre
cisplatino, 5-FU, irinotecano, adriamicina,
etopósido, mitomicina, mitoxantrona, bleomicina, vincristina y
vindecina. En la Fig. 10 se muestran las planificaciones temporales
de los controles (sin adición de medicamentos, con adición de
solamente el \ell-OHP y adición de solamente un
agente compatible, y especificados en los siguientes puntos (1) a
(4)) y de la administración compatible del agente compatible y el
\ell-OHP.
(1) No se añadió ningún medicamento
(control).
(2) Se añadió solamente el
\ell-OHP en el segundo día.
(3) Se añadió una cantidad grande de agentes
compatibles en el primer día (1 \mug/ml del cisplatino, 10
\mug/ml del 5-FU, 0,05 \mug/ml de la adriamicina
y 1 \mug/ml del etopósido, y con fines comparativos, 0,05
\mug/ml de la vincristina y 0,05 \mug/ml de la vindecina). La
cantidad de adición del irinotecano se fijó en 10 \mug/ml, y la
cantidad de adición del \ell-OHP era 5
\mug/ml.
(4) Se añadió una cantidad pequeña de agentes
compatibles en el primer día (0,5 \mug/ml del cisplatino, 5
\mug/ml del 5-FU, 0,01 \mug/ml de la adriamicina
y 0,5 \mug/ml del etopósido, y con fines comparativos, 0,01
\mug/ml de la vincristina y 0,01 \mug/ml de la vindecina). La
cantidad de adición del irinotecano se fijó en 10 \mug/ml, y la
cantidad de adición del \ell-OHP era 1
\mug/ml.
(5) En el primer día se añadieron simultáneamente
el \ell-OHP y una cantidad grande (la misma que la
del punto anterior (3) y así sucesivamente en los siguientes puntos)
de los agentes compatibles.
(6) En el primer día se añadieron simultáneamente
el \ell-OHP y una cantidad pequeña (la misma que
la del punto anterior (4) y así sucesivamente en los siguientes
puntos) de los agentes compatibles.
(7) El primer día se añadió el
\ell-OHP y el segundo día se añadió una cantidad
grande de los agentes compatibles.
(8) El primer día se añadió el
\ell-OHP y el segundo día se añadió una cantidad
pequeña de los agentes compatibles.
(9) El primer día se añadió el
\ell-OHP y el tercer día se añadió una cantidad
grande de los agentes compatibles.
(10) El primer día se añadió el
\ell-OHP y el tercer día se añadió una cantidad
pequeña de los agentes compatibles.
(11) El primer día se añadió el
\ell-OHP y el cuarto día se añadió una cantidad
grande de los agentes compatibles.
(12) El primer día se añadió el
\ell-OHP y el cuarto día se añadió una cantidad
pequeña de los agentes compatibles.
(13) El primer día se añadió una cantidad grande
de los agentes compatibles y el segundo día se añadió el
\ell-OHP.
(14) El primer día se añadió una cantidad pequeña
de los agentes compatibles y el segundo día se añadió el
\ell-OHP.
(15) El primer día se añadió una cantidad grande
de los agentes compatibles y el tercer día se añadió el
\ell-OHP.
(16) El primer día se añadió una cantidad
pequeña de los agentes compatibles y el tercer día se añadió el
\ell-OHP.
(17) El primer día se añadió una cantidad grande
de los agentes compatibles y el cuarto día se añadió el
\ell-OHP.
(18) El primer día se añadió una cantidad pequeña
de los agentes compatibles y el cuarto día se añadió el
\ell-OHP.
En los experimentos respectivos, se añadió un 5%
de gas de ácido carbónico al líquido de flotación el cual se cultivó
durante seis días a 37ºC. El número de células extintas por un
número fijo de células (1000 células) se midió después de 24 horas
(segundo día), 48 horas (tercer día), 72 horas (cuarto día), 96
horas (quinto día), 120 horas (sexto día) y 144 horas (séptimo día)
a partir de una primera administración de un medicamento (primer
día). La medición se llevó a cabo sacando una muestra del líquido de
cultivo, poniendo la muestra en una placa de observación de muestras
(ZOG-1, Elecon Kagaku K. K.), observando las
células con un microscopio invertido de 1500 aumentos equipado con
un aparato de fluorescencia (Nikon Corporation) y contando el número
de las células extintas por cada 1000 células. El recuento de las
células extintas se llevó a cabo tres veces por experimento y se
calcularon su porcentaje y la desviación típica.
A partir de estos valores de medición, se
calcularon las respectivas eficacias compatibles (OE, relación entre
el valor esperado y el valor de medición) utilizando la siguiente
ecuación \code{1}.
OE \ (%) = A/[C_{0} +
(B-C_{1}) + (D-C_{2})] \ X \ 100 \
\code{1}
En la ecuación, A es un valor de medición del
número de células extintas al séptimo día, obtenido por medio de la
administración simultánea, C_{0} es el valor (%) de las células
extintas al séptimo día del control del anterior punto (1), B es el
efecto (%) de extinción de las células durante un periodo en el que
las células se dejaron expuestas al \ell-OHP,
C_{1} es el efecto (%) de extinción de las células del anterior
punto (2) durante el mismo periodo que el de B, D es el efecto de
extinción de las células durante un periodo en el que las células se
dejaron expuestas al agente compatible, y C_{2} es el efecto (%)
de extinción de las células del anterior punto (3) durante el mismo
periodo que el de D.
Los valores calculados para los respectivos
agentes compatibles se resumieron en la Fig. 11.
En la Fig. 11, \medbullet, \blacktriangle y
\blacksquare designan la administración de los agentes
compatibles en cantidades grandes, \medcirc, \Delta y,
\square designan la administración de los agentes compatibles en
cantidades pequeñas, \medbullet y \medcirc designan la
administración simultánea, \blacktriangle y \Delta designan la
administración en primer lugar del \ell-OHP,
\blacksquare y \square designan la administración en primer
lugar del agente compatible, y los índices 2 a 4 designan el día en
el que se añadió el agente.
Se observaron los mismos efectos de los
respectivos agentes compatibles que los correspondientes
mencionados anteriormente. Estos efectos se resumieron en la Tabla
1. En la Tabla, \medbullet, \medcirc y \Delta designan
respectivamente el efecto sinérgico, el efecto aditivo y por debajo
del efecto aditivo.
Ejemplo Comparativo
1
La célula tumoral objetivo era una célula de cepa
de leucocitos humanos (RPMI-8402). Las células se
dejaron flotar en una botella de cultivo (nombre comercial: Sumicron
de Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) que contenía un líquido de cultivo
(PRMI-1640, Gibuko K. K.) que contenía suero
sanguíneo de un embrión vacuno (15%, Gibuko K. K.) el cual se
cultivó durante seis días en un aparato de cultivo que tenía un 15%
de gas de ácido carbónico mantenido a 37ºC (tipo taher, tipo
CPD-170, Hirasawa K. K.). Los medicamentos a
inspeccionar se añadieron a la botella de cultivo con una
concentración parecida a la utilizada clínicamente.
Los nombres y las concentraciones de los agentes
utilizados en este Ejemplo fueron 100, 50, 10, 5 y 1 \mug/ml de
OR36-3 (Fórmula XIV), 0,01 y 0,05 \mug/ml de
vincristina (VCR) y 5 y 2 \mug/ml de cisplatino.
Los líquidos de cultivo se sacaron de las
respectivas botellas de cultivo como muestra para calcular el número
de células extintas cada 24 horas. Los porcentajes, las desviaciones
típicas y la OE de las células extintas se calcularon según los
procedimientos del Ejemplo 1.
Los efectos se investigaron utilizando solamente
las cantidades respectivas de 10 y 5 \mug/ml del OR
36-3 como única sustancia carcinostática. Como
consecuencia, los efectos extintos de la misma fueron 10, 7 y 2% en
este orden, y se puso de manifiesto que con una concentración de
OR-36-3 no menor que 10 \mug/ml
se podían obtener efectos deficientes. No obstante, se pudo observar
el denominado efecto de germinación en la mayoría de las células
seis horas después de la adición de 10 \mug/ml. La mayor parte de
este efecto desapareció un día después del inicio del cultivo, y
como rasgo característico este efecto que se observó raramente en la
inspección de otros medicamentos no continuó existiendo después de
seis días. Se supuso que el OR 36-3 poseía una
función de derivación de un cambio interno (modificación) que no
condujo a la extinción de la célula.
A continuación, para confirmar el efecto de
extinción del OR 36-3 a concentraciones elevadas,
los efectos de extinción se midieron cada 24 horas durante seis
días después del inicio mientras se cultivaban los líquidos de
cultivo que contenían las células tumorales que tenían las
concentraciones respectivas de OR 36-3 de 100, 50,
10, 5 y 0 (control) \mug/ml. Los resultados se muestran en la
Fig. 12.
El OR 36-3 presentaba el efecto
claro de extinción con las concentraciones de 50 y 100 \mug/ml tal
como se muestra en la Fig. 12.
En las mismas condiciones que las del Ejemplo
Comparativo 1 se cultivaron la vincristina sola (concentraciones
de 0,05 y 0,01 \mug/ml) y los cuatro tipos de las
administraciones compatibles del OR 36-3 y la
vincristina (las concentraciones del OR 36-3 y la
vincristina eran 10 y 0,05 \mug/ml, 10 y 0,01 \mug/ml, 5 y 0,05
\mug/ml y 5 y 0,01 \mug/ml) a diferencia del OR
36-3 solo (concentraciones de 10 o 5 \mug/ml) y el
control del Ejemplo Comparativo 1 y se midieron sus efectos de
extinción. Los resultados se mostraron en la Fig. 13. A partir de la
Fig. 13 es evidente que el OR 36-3 que no
presentaba el efecto claro de extinción con la concentración no
mayor que 50 \mug/ml presentaba un ritmo de extinción de
aproximadamente el 60% después de seis días incluso con una
concentración de 5 \mug/ml (\square - y \Delta- en la Fig.
13) cuando el OR 36-3 se administraba de forma
compatible con la vincristina. Aunque los efectos de extinción de
\blacktriangle - y \blacktriangle··· en la Fig. 13 eran
similares a los de la vincristina sola, el aumento claro de los
efectos de extinción obtenidos por la administración compatible se
produjeron en las otras concentraciones y los otros intervalos de
días. Esto sugiere la posibilidad de que el OR 36-3
el cual no posee el efecto de extinción por sí mismo refuerza el
efecto de extinción contra células de otra sustancia carcinostática
por medio de un ligero efecto de modificación incluso aunque la
modificación de las células por sí misma por parte del OR
36-3 no posea el efecto de extinción.
Los ritmos de extinción se midieron según los
mismos procedimientos del Ejemplo 2 excepto que se utilizaron
células madre K 562 (leucemia en médula ósea humana) y sus células
resistentes al cisplatino (K652/CDDP) en lugar de las células de
cepas de leucocitos humanos utilizadas en el Ejemplo Comparativo 1 y
el Ejemplo 2, y se utilizó cisplatino en lugar de la vincristina.
Los resultados se muestran en la Fig. 14.
A partir de la Fig. 14 se pone de manifiesto que
los ritmos de extinción contra las células madre y las células
resistentes por parte de los 5 \mug/ml de cisplatino
(\blacktriangle- y \blacktriangle···) son sustancialmente
iguales entre sí. No obstante, el ritmo de extinción de las células
madre (\Delta -) por parte de los 2 \mug/ml de cisplatino era
aproximadamente dos veces el de las células resistentes
(\Delta···). En otras palabras, las mencionadas células
resistentes al cisplatino no poseían ninguna resistencia contra 5
\mug/ml del cisplatino y se extinguieron al mismo nivel que el de
las células madres mientras que dichas células resistentes al
cisplatino poseían una resistencia dos veces la de las células madre
contra el cisplatino y se extinguieron a un nivel igual al de las
células madre contra 2 \mug/ml del cisplatino.
Por otro lado, 10 \mug/ml del OR
36-3 poseían efectos escasos contra las células
madre y las células resistentes. A continuación, cuando se
utilizaron de forma compatible 5 o 2 \mug/ml del cisplatino con 10
\mug/ml del OR 36-3, se calcularon las eficacias
compatibles después de los seis días con la administración de 5
\mug/ml de manera que resultaron ser 116% y 125% contra las
células madre y las células resistentes, respectivamente, y se
calcularon las correspondientes después de los seis días con la
administración de 2 \mug/ml de manera que resultaron ser 66% y
129% contra las células madre y las células resistentes,
respectivamente.
Por consiguiente, se confirmaron los efectos
compatibles del OR 36-3 y el cisplatino con respecto
a las células madre y a las células resistentes con 5 \mug/ml y
con respecto a las células resistentes con 2 \mug/ml. Esto
significa que la resistencia de las células formada por el
cisplatino desapareció por la administración por adición del OR
36-3. En otras palabras, el OR 36-3
una cantidad del cual es insuficiente para funcionar como sustancia
carcinostática puede reforzar el efecto cuando se administra de
forma compatible con el cisplatino.
Después de colocar 5 ml de un líquido de cultivo
(un líquido preparado añadiendo un 15% de suero sanguíneo de un
embrión vacuno) que contenía, como célula cancerígena objetivo,
10^{5} células/ml de células de cepa de leucocitos humanos
(RPMI-8402) en un frasco de cultivo de flotación
(Sumiron), las células se cultivaron durante seis días en un aparato
de cultivo que contenía un 5% de gas de ácido carbónico a 37ºC. A
los líquidos de cultivo respectivos se añadieron, junto con 1
\mug/ml del DAPI, \code{1} el control (sin adición de la
sustancia carcinostática), \code{2} 5 \mug/ml de CPT
(camptotecina), \code{3} 10 \mug/ml de CPT-11
(iriftecano), \code{4} 0,05 \mug/ml de ADR (adriamicina),
\code{5} 0,05 \mug/ml de DNR (daunomicina), \code{6} 1
\mug/m de etopósido, \code{7} 20 \mug/ml de
MST-16 (sopsoxano), \code{8} 1 \mug/ml de
m-AMSA (amsacrina), \code{9} 1 \mug/ml de
Act-D (actinomicina D), \code{10} 0,1 \mug/ml de
mitoxantrona, \code{11} 20 \mug/ml de 5-FU,
\code{12} 10 \mug/ml de Ara-C
(citosinarabinosida), \code{13} 50 \mug/ml de hidroxiurea,
\code{14} 2 \mug/ml de Afidicolina, \code{15} 10 \mug/ml de
MTX (mesotrexato), \code{16} 0,05 \mug/ml de VCR (vincristina),
\code{17} 0,05 \mug/ml de VDS (vindecina), \code{18} 5
\mug/ml de cisplatino, \code{19} 10 \mug/ml de bleomicina,
\code{20} 10 \mug/ml de MMC (mitomicina C) y (21) 5 \mug/ml
de ciclofospamida (endoxano). Las muestras se muestrearon de los
respectivos líquidos de cultivo después de una hora, cuatro horas,
24 horas y a continuación cada 24 horas después del inicio del
cultivo. Las muestras se evaluaron según los procedimientos de los
Ejemplos precedentes. Los resultados se muestran en un gráfico de la
Fig. 15.
Tal como se muestra en la Fig. 15, de entre las
20 sustancias carcinostáticas, se observaron aumentos notables de
los números de células divididas en \code{16} VDR y \code{17}
VDS en comparación con el control. El aumento del número de células
divididas se observó momentáneamente en el \code{7}
MST-16, aunque dicho número se redujo bruscamente
después del segundo día, y al sexto día todos los ritmos de
aparición de las células divididas de las 20 sustancias
carcinostáticas resultaron por debajo del 1%.
Los ritmos de aparición de las células divididas
de todas las sustancias carcinostáticas excepto para estas tres
sustancias carcinostáticas resultaron por debajo del 1% un día
después del inicio del cultivo y al sexto día la división celular
apenas se inspeccionó.
A partir de estos resultados, es evidente que
casi todas las sustancias carcinostáticas (excluyendo la
\code{16}) redujeron notablemente los números de células
divididas un día después del inicio del cultivo en comparación con
el control, y en otras palabras esto significa que dichas sustancias
redujeron notablemente el número de células cancerígenas que
entraban en la división celular, y por consiguiente clarifica que
las sustancias carcinostáticas respectivas presentaban las
propiedades antitumorales.
En los métodos convencionales del tubo de ensayo
y con animales, ni siquiera se puede presentar una predicción sobre
si una sustancia carcinostática bajo inspección posee una propiedad
antitumoral uno o dos días después del inicio del cultivo. En este
Ejemplo, la propiedad antitumoral de la sustancia carcinostática a
inspeccionar o la eficacia de la sustancia carcinostática se pueden
inspeccionar de forma precisa solamente conociendo el porcentaje,
tal como se pone de manifiesto a partir de la descripción
anterior.
La proporción de las células divididas aumentó
después del inicio del cultivo en las tres sustancias
carcinostáticas mencionadas anteriormente \code{7}, \code{16} y
\code{17}. Según la observación por microscopio, todas las fases
de división de dichas células divididas eran la división profase y
la división metafase, y no se observaban células bajo división
anafase y división telofase. Esto sugiere que las células bajo la
división profase llegaban a la siguiente división metafase pero el
avance sucesivo se detenía, y en otras palabras la división celular
se detenía en la división anafase.
Tal como se ha mencionado, cuando se utiliza el
proceso de observación de la división celular que hace uso del
colorante fluorescente, se puede clarificar el mecanismo de la
división celular y se puede obtener información importante adicional
ya que se pueden monitorizar los cambios de morfosis del núcleo.
Claims (7)
1. Composición carcinostática que comprende
cis-oxalato (1R,2R-diaminociclo-
hexano) Pt (II) en combinación con por lo menos la sustancia
carcinostática irinotecano.
2. Composición carcinostática según la
reivindicación 1, que comprende además, en combinación, uno o más
agentes seleccionados de un grupo consistente en cisplatino,
carboplatino, 5-fluorouracilo, tegaful, carmoful,
doxifluridina, uracilo, adriamicina, etopósido, mitomicina,
mitoxantrona, y bleomicina.
3. Composición carcinostática según la
reivindicación 1, que comprende cis-oxalato
(1R,2R-diaminociclohexano) Pt (II) en combinación
con la sustancia carcinostática irinotecano.
4. Utilización de cis-oxalato
(1R,2R-diaminociclohexano) Pt (II) en la
fabricación de un medicamento para terapia contra el cáncer,
caracterizada porque dicho complejo de platino se debe
administrar en combinación con por lo menos la sustancia
carcinostática irinotecano.
5. Utilización según la reivindicación 4,
caracterizada porque dicho complejo de platino y la
sustancia carcinostática irinotecano se deben administrar además en
combinación con uno o más agentes seleccionados de un grupo
consistente en cisplatino, carboplatino,
5-fluorouracilo, tegaful, carmoful, doxifluridina,
uracilo, adriamicina, etopósido, mitomicina, mitoxantrona y
bleomicina.
6. Utilización según la reivindicación 4,
caracterizada porque dicho complejo de platino se debe
administrar simultáneamente con la sustancia carcinostática
irinotecano.
7. Utilización según la reivindicación 4,
caracterizada porque dicho complejo de platino se debe
administrar antes de administrar la sustancia carcinostática
irinotecano.
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