CN101074224A - 一种高含量的egcg的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明将公开一种操作简单、效果明显的从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法。它以茶多酚为原料，经溶解、柱层析、浓缩、结晶、冷冻干燥后得到含量为90％以上的EGCG(HPLC法测定：HighPerformance Liquid Chroma tography，高效液相色谱)。采用本发明公开的制备方法，分离得到的EGCG纯度高、收率高、产量大、过程短，利于工业化生产；采用成熟柱层析技术且避免大量有毒、有机溶剂的使用，避免了环境污染。
Description
技术领域
本发明属于天然产物化学领域，具体的说，涉及一种从茶多酚中得到高含量的EGCG的制备方法。
背景技术
EGCG，即表没食子儿茶素没食子酸酯，是从绿茶中提取的一种成份，它是绿茶主要的活性和水溶性成份，占绿茶毛重的9％-13％；EGCG是绿茶茶多酚的主要组成成分，也是绿茶儿茶素类的主成分，它占绿茶儿茶素类总量的10-15％，儿茶素类包括：没食子酸儿茶素(Gallocatechin，GC)、表没食子酸儿茶素(Epigallocatechin，ECG)、表没食子酸儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子酸儿茶素(EGC)和表儿茶素(EC)等，其中抗氧化活性依次为EC＜ECG＜EGC＜EGCG。因为具有特殊的立体化学结构，EGCG是绿茶中最有效的抗氧化多酚，具有非常强的抗氧化、抗癌、抗突变等活性。抗氧化活性至少是维生素C的100多倍，是维生素E的25倍，能够保护细胞和DNA受损害，这种损害相信与癌症、心脏疾病和其他重大疾病有关，EGCG的这些功效归结于他们对氧自由基的清除能力。EGCG在抗癌和心血管疾病方面担当了重要的角色。此外，它也用作肿瘤多药耐药性的逆转剂，能够改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性。许多研究表明EGCG具有抗自由基DNA损害，抗辐射和紫外线，阻止油脂过氧化，减少血清中低密度胆固醇、超低密度胆固醇和甘油三酯的含量，干扰癌细胞生存所需的信号传递，抑制饮食中的致癌物质，与肠、肝、和肺中的其他酶和抗氧化剂作用共同阻止某些致癌物质的活力，清除自由基，抵御污染、日晒和吸烟的影响，防治皮肤老化和起皱。
由于茶叶中各种多酚组分的化学结构与性质十分相近，极性强，一般方法很难达到对其单体的分离。如申请(专利)号为：01139179.0公开了一种高含量EGCG儿茶素的提取方法，其以普通的黄色茶多酚为原料，在室温、压力范围为0.1～1.0MPa的条件下，经过一系列的无害惰性有机溶剂多步逆流萃取后，调整溶液的pH值在2.5～7.5之间，进行二价或三价金属盐沉淀反应，沉淀经过滤、热水洗涤和酸溶解，用乙酸乙酯萃取，萃取的有机溶剂相再进行水洗脱酸、减压浓缩、重结晶，结晶后的结晶物经过滤、冷冻、双重水洗涤，最后进行冷冻干燥而成。该工艺能得到EGCG有效含量为90％的产品，但该工艺过程较复杂，既有大量有机溶剂的萃取，又有金属盐沉淀反应，并且还涉及重结晶等过程，所需溶剂量大，处理量又小，难以工业化生产。
公开号为CN 1277068A的专利介绍了一种高纯度单体儿茶素的高速逆流色谱分离制备方法，它包括配制构成固定相、流动相的溶剂体系；使逆流色谱仪柱子中充满固定相；然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内；由进样阀进样；根据检测器谱图接收目标成分，所用溶剂体系可以是水、脂肪醇、脂肪醇或脂肪酮；或者是烷烃、脂肪醇、水所构成的两相溶剂体系，以上相为固定相，下相为流动相。目前的逆流色谱技术难以得到含量大于90％的产品，且一次分离样品量小，分离时间长，目前仅处于研究阶段。
综上所述，上述诸多提取方法虽然可以达到较高纯度，但存在的诸多问题限制了它在工业化生产中的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从茶多酚中得到高含量的EGCG的制备方法。
本发明将公开一种操作简单、效果明显的从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法。它以茶多酚为原料，经溶解、柱层析、浓缩、结晶、冷冻干燥后得到高含量的EGCG；采用此制备方法，得到的高含量的EGCG为白色粉末，含量为90％以上(HPLC法测定：HighPerformance Liquid Chromatography，高效液相色谱)。
本发明所述的从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法，所述的原料为EGCG含量为10-40％的茶多酚或茶多酚含量为50％以下的绿茶提取物。
本发明所述的从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法，其步骤如下：
1)将原料置于8-10倍于其重量的纯净水中超声溶解30min；
2)将溶解后的溶液通过柱层析，用树脂进行吸附；
3)用相当于进柱液体体积10-12倍的纯净水清洗树脂；
4)用10-15％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深黄再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱；
5)用20-25％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深再变浅，当流出液颜色接近无色时，可停止洗脱；
6)合并两次收集的流出液，浓缩；
7)在浓缩液中加入少量高含量的EGCG，促进结晶，放置24h，结晶；
8)将结晶物用纯水冲洗、抽滤，再通过冷冻干燥得到粉末状的EGCG。
本发明所述从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法中，柱层析树脂选自型号为D101的大孔吸附树脂、型号为HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附树脂。
本发明所述一种从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法中得到的EGCG为白色粉末，含量为90％以上(HPLC法测定：HighPerformance Liquid Chromatography，高效液相色谱)。
本发明的优点是：
1、生产过程中避免使用氯仿、脂肪醇、烷烃等有毒溶剂、有机溶剂的大量使用，避免了环境污染；
2、工艺上采用成熟的柱层析技术，通过连续两次梯度洗脱来实现，工艺简单、操作方便，避免了工艺复杂的逆流萃取技术、逆流色谱技术，改变了采用柱层析技术得不到高含量EGCG的观点；
3、得到的EGCG纯度高、收率高、产量大、过程短，利于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
1)将原料(EGCG含量为10％的茶多酚，桂林莱茵生物科技股份有限公司生产)置于8倍于其重量的纯净水中超声溶解30min；
2)将溶解后的溶液通过柱层析，用型号为D101的大孔吸附树脂进行吸附；
3)用相当于进柱液体体积10倍的纯净水清洗树脂；
4)用10％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深黄再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱；
5)用20％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深再变浅，当流出液颜色接近无色时，可停止洗脱；
6)合并两次收集的流出液，浓缩；
7)在浓缩液中加入少量高含量的EGCG，促进结晶，放置24h，结晶；
8)将结晶物用纯水冲洗、抽滤，再通过冷冻干燥得到粉末状的EGCG。
实施例2
1)将原料(EGCG含量为40％的茶多酚，无锡太阳绿宝科技有限公司生产)置于10倍于其重量的纯净水中超声溶解30min；
2)将溶解后的溶液通过柱层析，用型号为HP20SS的小粒度合成吸附树脂进行吸附；
3)用相当于进柱液体体积12倍的纯净水清洗树脂；
4)用15％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深黄再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱；
5)用25％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深再变浅，当流出液颜色接近无色时，可停止洗脱；
6)合并两次收集的流出液，浓缩；
7)在浓缩液中加入少量高含量的EGCG，促进结晶，放置24h，结晶；
8)将结晶物用纯水冲洗、抽滤，再通过冷冻干燥得到粉末状的EGCG。
实施例3
1)将原料(茶多酚含量为50％的绿茶提取物，桂林兴达制药厂生产)置于8倍于其重量的纯净水中超声溶解30min；
2)将溶解后的溶液通过柱层析，用型号为SP20SS的小粒度合成吸附树脂进行吸附；
3)用相当于进柱液体体积12倍的纯净水清洗树脂；
4)用15％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深黄再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱；
5)用25％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深再变浅，当流出液颜色接近无色时，可停止洗脱；
6)合并两次收集的流出液，浓缩；
7)在浓缩液中加入少量高含量的EGCG，促进结晶，放置24h，结晶；
8)将结晶物用纯水冲洗、抽滤，再通过冷冻干燥得到粉末状的EGCG。
实施例4
1)将原料(茶多酚含量为30％的绿茶提取物，桂林兴达制药厂生产)置于8倍于其重量的纯净水中超声溶解30min；
2)将溶解后的溶液通过柱层析，用型号为SP20SS的小粒度合成吸附树脂进行吸附；
3)用相当于进柱液体体积12倍的纯净水清洗树脂；
4)用15％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深黄再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱；
5)用25％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深再变浅，当流出液颜色接近无色时，可停止洗脱；
6)合并两次收集的流出液，浓缩；
7)在浓缩液中加入少量高含量的EGCG，促进结晶，放置24h，结晶；
8)将结晶物用纯水冲洗、抽滤，再通过冷冻干燥得到粉末状的EGCG。
Claims (4)
1、一种从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法，使用低含量的茶多酚为原料，经溶解、柱层析、浓缩、结晶、冷冻干燥后得到高含量的EGCG(EGCG为90％以上，HPLC法测定)。
2、如权利要求1所述的一种从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法，包括如下步骤：
1)将低含量的茶多酚置于8-10倍于其重量的纯净水中超声溶解30min；
2)将溶解后的溶液通过柱层析，用树脂进行吸附；
3)用相当于进柱液体体积10-12倍的纯净水清洗树脂；
4)用10-15％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深黄再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱；
5)用20-25％乙醇清洗树脂，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变深再变浅，当流出液颜色接近无色时，可停止洗脱；
6)合并两次收集的流出液，浓缩；
7)在浓缩液中加入少量高含量的EGCG，促进结晶，放置24h，结晶；
8)将结晶物用纯水冲洗、抽滤，再通过冷冻干燥得到粉末状的EGCG。
3、如权利要求1所述的一种从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法，其特征在于：所述的低含量茶多酚为EGCG含量为10-40％的茶多酚或茶多酚含量为50％以下的绿茶提取物。
4、如权利要求2所述的一种从茶多酚中提取高含量的EGCG的制备方法，其特征在于：所述的柱层析，树脂选自型号为D101的大孔吸附树脂、型号为HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附树脂。
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