CN104447668A - 一种用氢键型大孔树脂制备高纯度egcg的方法 - Google Patents

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魏敏杰
靳鑫
刘明妍
高华
姚维范
毛瑞琨
杨时伦
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • C07D311/60—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2
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Abstract

本发明提供一种用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其目的在于以往的制备过程中存在有毒化学试剂不能保证药品安全、不适于大规模生产等方面存在的问题一种用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：(1)称取绿茶，加入适量蒸馏水，加热60~80℃提取，得绿茶提取液；(2)绿茶提取液直接用氢键型大孔吸附树脂吸附，用10-20％的乙醇水进行洗脱除杂质，继续用30％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(3)得到的洗脱液浓缩冻干，进行重结晶，得成品。本方法技术路线操作简单、大孔树脂可再生利用，成本更低、更绿色环保、分离效率更高，更适合EGCG的工业化生产。

Description

一种用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法
技术领域
本专利涉及的是一种可用做制药工业原料药的制备方法，具体涉及的是高纯度EGCG的制备方法。
背景技术
绿茶是东亚国家常用的对健康有益的饮料，在中国古代也作为传统的中药使用。 EGCG为儿茶素家族的一员，是绿茶中含量最大的多酚类化合物。 EGCG拥有大量酚羟基在医疗领域，食品领域，化妆品领域经常被用作的天然抗氧化剂。药理实验显示EGCG具有多种生物活性，包括它的抗氧化，抗炎，抗突变，抗癌，以及抗由HIV病毒的作用。最近，我们研究小组发现，EGCG可以治疗由β-淀粉样蛋白（Aβ）肽和神经元损失阿尔茨海默氏病。因此，EGCG成为治疗阿尔茨海默氏症的一个非常有前景的前体化合物，越来越受到人们的关注。目前，EGCG仅以小批量在市场销售，并且价位很高。所以，安全，低成本，高效率和简单易行的从绿茶中得到EGCG的技术成为市场急切的需求。
近年来文献报道关于从绿茶中制备EGCG的方法主要有溶剂萃取法和离子沉淀法，但是，这些方法需要用到大量的有机溶剂和无机盐的。尽管，化学合成可以得到高纯度的EGCG，但因为不可避免的用到有毒化学试剂和对环境的污染而不能保证食品安全或药品安全。仅限于样品的上样量的限制，Sephadex LH-20，β-环糊精（β-CD）的键合硅胶，交联琼脂糖凝胶和反相ODS对EGCG的分离是不适合用于大规模工业生产。目前，也有一些文献报道，超临界二氧化碳萃取，HSCC色谱法和模拟移动床色谱法对EGCG的纯化开发，然而，这些方法共同的缺陷是需要高成本的特殊的实验仪器。
发明内容
本发明提供一种用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其目的在于以往的制备过程中存在有毒化学试剂不能保证药品安全、不适于大规模生产等方面存在的问题。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：
(1)称取绿茶，加入适量蒸馏水，加热60~80℃提取，得绿茶提取液；
(2)绿茶提取液直接用氢键型大孔吸附树脂吸附，用10-20％的乙醇水进行洗脱除杂质，继续用30％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
(3)得到的洗脱液浓缩冻干，进行重结晶，得成品。
步骤（2）中所述氢键型大孔吸附树脂为非极性树脂、弱极性树脂、中等极性树脂、极性树脂。
步骤（2）中所述氢键型大孔吸附树脂型号选自HPD-200、D-101、X-5、AB-8、HPD-722、HPD-400、HPD-750、DM130、HPD-600、NKA-9、ADS-7、HPD-826、ADS-17。
步骤（1）中蒸馏水与绿茶的体积质量比为20:1。
步骤(3) 中所述的重结晶的溶剂系统为乙醇/ 水/ 乙酸的混合溶剂系统，其比例为乙醇/ 水/ 乙酸(1 ∶ 9 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(2 ∶ 8 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(3 ∶ 7∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(4∶ 6∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(5 ∶ 5 ∶ 1)，乙醇/ 水/乙酸(6 ∶ 4 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(7 ∶ 3 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(8 ∶ 2 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(9 ∶ 1 ∶ 1) 中的一种。
本发明的优点：
氢键型大孔吸附树脂是20 世纪70 年代末发展起来的一类有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂，最早用于废水处理、化学工业、分析化学、临床检定和治疗等领域。大孔吸附树脂具有表面积大，键合基团的多样性，操作简捷，纯化效率高，稳定性高，环境友好，易再生，较低的成本和溶剂消耗的优势，近年来在中药及中药复方化学成分的提取、分离纯化，制剂工艺改革、制剂质量分析等方面有了较广泛的应用研究。氢键型大孔吸附树脂具有其独特的吸附性能，通过范德华力，氢键吸附和分子筛作用从水溶液中富集和分离的一些次生代谢产物或天然产物，特别适用于本发明。
该方法技术路线操作简单、大孔树脂可再生利用，成本更低、更绿色环保、分离效率更高，更适合EGCG的工业化生产。
附图说明：
图1 为本发明中树脂筛选结果图；
图2 为本发明EGCG提取物的高效液相色谱图；
图3 为本发明EGCG粗品的高效液相色谱图；
图4 为本发明EGCG产品的高效液相色谱图。
具体实施方式：下面通过实施例对本发明加以具体描述，但本发明的技术方案并不仅局限于以下的这些实施例。
本发明中高效液相测定方法如下：
使用仪器类型：高效液相色谱洗脱方式：梯度洗脱；
检测器：紫外检测器 仪器型号：Agilent 1200；
检测波长：278nm 进样量：20μL 流速：1mL/min；
柱温：30℃ 柱型号：Diamonsil C18 柱（150mm×4.6mm, 5μm）；
积分方法：面积归一法。
液相色谱梯度洗脱流程：
时间 (min) 甲醇 (A) 0.8%冰醋酸水 (B)
0 10 90
1 15 85
11 18 82
21 21 79
51 70 30
实施例1
取绿茶500g，加入10L水，加热至60℃进行提取，提取1小时，提取3次，提取液加入到处理好的HPD-826氢键型大孔吸附树脂柱进行吸附，用5 BV 的水洗脱，弃去，再用5 BV 20％的乙醇水洗脱，回收溶剂，残渣弃去，接着用10 BV 30％乙醇水洗脱，收集30％洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到EGCG粗品10.69g，如图3所示；该粗品用乙醇:水:乙酸（9:1:1）进行重结晶，得EGCG 6.94g，经HPLC 分析EGCG 的含量为98.60％，如附图4 所示。
实施例2
取绿茶500g，加入20L水，加热至70℃进行提取，提取2小时，提取3次，提取液加入到处理好的HPD-200氢键型大孔吸附树脂柱进行吸附，用5BV 的水洗脱，弃去，再用5 BV20％的乙醇水洗脱，回收溶剂，残渣弃去，接着用10 BV 30％乙醇水洗脱，收集30％洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到EGCG 粗品15.85g，该粗品用乙醇:水:乙酸（8:2:1）进行重结晶，得EGCG 9.12g，经HPLC 分析EGCG 的含量为98.32％。
实施例3 
取绿茶500g，加入15L水，加热至80℃进行提取，提取3小时，提取3次，提取液加入到处理好的DM130氢键型大孔吸附树脂柱进行吸附，用5BV 的水洗脱，弃去，再用5BV20％的乙醇水洗脱，回收溶剂，残渣弃去，接着用15 BV25％乙醇水洗脱，收集25％洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到EGCG 粗品15.21g，该相品用乙醇:水:乙酸（8:2:1）进行重结晶，得EGCG 9.73g，经HPLC 分析EGCG 的含量为98.10％。
实施例4
取绿茶500g，加入10L水，加热至70℃进行提取，提取4小时，提取2次，提取液加入到处理好的ADS-17氢键型大孔吸附树脂柱进行吸附，用5BV 的水洗脱，弃去，再用5BV10％的乙醇水洗脱，回收溶剂，残渣弃去，接着用30％乙醇水洗脱，收集30％洗脱液(5BV)，减压浓缩，冷冻干燥，得到EGCG 粗品14.47g，该粗品用乙醇:水:乙酸（9:1:1）进行重结晶，得EGCG 9.01g，经HPLC分析EGCG 的含量为98.17％。
实施例5
取绿茶500g，加入20L水，加热至60℃进行提取，提取2小时，提取2次，提取液加入到处理好的X-5氢键型大孔吸附树脂柱进行吸附，用5BV 的水洗脱，弃去，再用5BV 10％的乙醇水洗脱，回收溶剂，残渣弃去，接着用30％乙醇水洗脱，收集30％洗脱液(5BV)，减压浓缩，冷冻干燥，得到黄芩苷粗品14.81g，该粗品用乙醇:水:乙酸（7:3:1）进行重结晶，得EGCG 9.11g，经HPLC分析EGCG 的含量为98.10％。
通过测试，氢键型大孔吸附树脂为非极性树脂、弱极性树脂、中等极性树脂、极性树脂都试用本发明，但选自HPD-200、HPD-826、D-101、DM130、ADS-17、X-5为最佳。
重结晶的溶剂系统选择也很重要，选择的比例为乙醇/ 水/ 乙酸(1 ∶ 9 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(2 ∶ 8 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(3 ∶ 7∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(4∶ 6∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(5 ∶ 5 ∶ 1)，乙醇/ 水/乙酸(6 ∶ 4 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(7 ∶ 3 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(8 ∶ 2 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(9 ∶ 1 ∶ 1) ，有明显效果。

Claims (5)

1.一种用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：
(1)称取绿茶，加入适量蒸馏水，加热60~80℃提取，得绿茶提取液；
(2)绿茶提取液直接用氢键型大孔吸附树脂吸附，用10-20％的乙醇水进行洗脱除杂质，继续用30％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
(3)得到的洗脱液浓缩冻干，进行重结晶，得成品。
2.根据权利要求1 所述的用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其特征在于：步骤（2）中所述氢键型大孔吸附树脂为非极性树脂、弱极性树脂、中等极性树脂、极性树脂。
3.根据权利要求1 所述的用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其特征在于：步骤（2）中所述氢键型大孔吸附树脂型号选自HPD-200、D-101、X-5、AB-8、HPD-722、HPD-400、HPD-750、DM130、HPD-600、NKA-9、ADS-7、HPD-826、ADS-17。
4.根据权利要求1 所述的用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其特征在于：步骤（1）中蒸馏水与绿茶的体积质量比为20:1。
5.根据权利要求1 所述的用氢键型大孔树脂制备高纯度EGCG的方法，其特征在于：步骤(3) 中所述的重结晶的溶剂系统为乙醇/ 水/ 乙酸的混合溶剂系统，其比例为乙醇/ 水/ 乙酸(1 ∶ 9 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(2 ∶ 8 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(3 ∶ 7∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(4∶ 6∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(5 ∶ 5 ∶ 1)，乙醇/ 水/乙酸(6 ∶ 4 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(7 ∶ 3 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(8 ∶ 2 ∶ 1)，乙醇/ 水/ 乙酸(9 ∶ 1 ∶ 1) 中的一种。
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