CN101065664A - 检测大环内酯的方法与系统 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及检测大环内酯,例如红霉胺和相关化合物的反向高效液相色谱(RP-HPLC)方法和系统。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2004年5月6日提交的美国系列号60/568,639的优先权,其内容全文纳入本文作为参考。
发明领域
本发明涉及检测与定量大环内酯,例如红霉胺(erythromycylamine)和相关化合物的分析方法与系统,包括反相高效液相(RP-HPLC)和光度检测。
发明背景
大环内酯是用于治疗各种细菌感染的抗生素家族。大环内酯的化学特征在于14到16个原子和一般至少一个糖、氨基糖或相关部分组成的大环内酯环结构。据信,大环内酯与细菌50S核糖体上的两个位点结合导致转移RNA解离与肽连接终止,从而抑制了细菌蛋白质合成。红霉素是于1952年发现的第一个大环内酯类抗生素并且很快进入临床使用。红霉素和早期的衍生物(例如,不同的盐和酯)的一般特征在于对大多数革兰阳性细菌,特别是链球菌具有抑菌或杀菌活性,以及对呼吸道病原体具有良好活性。已证实大环内酯对许多呼吸道感染安全有效,并可用于青霉素过敏的患者。
大环内酯一般在非常低的波长范围(例如,<220nm)具有紫外(UV)吸收,这接近光度检测方法的极限。红霉素(结构见下文)的美国药典国家处方集(USP-NF)的法定试验方法包括利用215nm紫外检测以L21固定相(反相,刚性,球状苯乙烯-二乙烯基苯共聚物,5到10μm粒径)进行的RP-HPLC(参见,例如2000年1月1日出版的USP-NF的第663-665页)。事实上,许多还原的红霉素衍生物和相关分子,例如9-(S)-红霉胺(或PA2794,结构见下文)在远低于215nm具有最大紫外吸收带(UVmax)。例如,9-(S)-红霉胺的UVmax发生在约191nm,这接近标准光度检测方法的短波长极限。因此,例如电化学检测的替代检测方法是有吸引力的(参见,例如Whitaker等,J.Liq.Chromatogr.,(1988),11(14),3011-20;Pappa-Louisi等,J.Chromatogr.,B:Biomed.Sci.Appl.,(2001),755(1-2);Kees等,J.Chromatogr.,A(1998),812(1+2),287-293;Hedenmo等,J.Chromatogr.,A(1995),692(1+2),161-6;Daszkowski等,J.Liq.Chromatogr.Relat.Technol.,(1999),22(5),641-657和Dubois等,J.Chromatogr.,B: Biomed.Sci.Appl.,(2001),753(2),189-202)。然而,这些替代方法通常不适用于必须在质控环境中进行的试验,例如药物释放和稳定性研究的有关试验。为检测和定量所检验的化合物,例如活性药物成分,光度检测仍是较佳且广为接受的方法。
红霉素 9-(S)-红霉胺
因为当联用HPLC分析时光度检测明显优于=其它检测方法,目前需要适当地设计利用紫外检测方法检测并定量低波长吸收的分子,例如大环内酯类抗生素的试验(方法)。本文所述的方法和系统有助于满足这个与其它需求。
发明简述
本发明提供了检测在约180nm到约220nm的紫外-可见范围具有最大吸收的大环内酯的方法,包括:
a)将含有所述大环内酯的样品施加至外部配有检测波长为约180nm到约220nm的紫外(UV)检测器的反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱;
b)用含有离子对试剂的流动相洗脱所述样品;和
c)用紫外检测器监测柱流出液以检测位于检测波长的吸收峰或透射峰(transmission peak),该峰对应于该大环内酯。
在一些实施方案中,所述大环内酯在约180nm到约200nm的紫外-可见范围具有最大吸收。在其它实施方案中,所述大环内酯是9-(S)-红霉胺。
在一些实施方案中,检测波长是约190nm到约210nm,约197nm到约205nm,或约200nm。
在一些实施方案中,该离子对试剂包括C4-C12烷基磺酸盐,例如1-辛磺酸钠。在其它实施方案中,流动相中该离子对试剂的浓度是约10mM到约30mM。
在一些实施方案中,该流动相还含有例如硫酸盐或磷酸盐的缓冲液。在其它实施方案中,该流动相的pH为约1到4,例如约为3。
在一些实施方案中,该流动相可随大环内酯的洗脱进程而含有不同含量的水、有机溶剂和缓冲液。在其它实施方案中,该流动相在洗脱时程中在检测波长上保持基本恒定的吸光度。
在一些实施方案中,该流动相在大于约205nm的吸光度可忽略不计。在其它实施方案中,该流动相在200nm的吸光度低于约0.5。在还有其它的实施方案中,该流动相在200nm的吸光度低于约0.1。
在一些实施方案中,本发明方法还包括通过比较该大环内酯相应的峰面积与标准品(的峰面积)来定量该大环内酯。
在一些实施方案中,本发明方法还包括利用紫外检测器检测位于检测波长的一种或多种其它吸收峰或透射峰来监测柱的流出液,从而检测样品中存在的杂质,其中所述一种或多种其它的峰的峰面积大于该大环内酯峰面积的0.05%并对应于一种或多种杂质。
在一些实施方案中,本发明还提供通过以下步骤测定样品纯度的方法:i)利用紫外检测器检测位于检测波长的一种或多种其它吸收峰或透射峰来监测柱的流出液,其中所述一种或多种其它的峰对应于一种或多种杂质;和ii)测定检测器所检测到的峰的特性来计算样品中的杂质含量。
本发明还提供了检测9-(S)-红霉胺的方法,包括:
a)将含有所述9-(S)-红霉胺的样品施加至外部配有检测波长为约200nm的紫外(UV)检测器的C18反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱;
b)用含有水、乙腈、1-辛磺酸钠和硫酸盐缓冲液的流动相洗脱所述样品;和
c)用所述紫外检测器监测柱的流出液以检测位于检测波长的吸收峰或透射峰,所述峰对应于所述9-(S)-红霉胺。
本发明还提供了检测大环内酯的系统,包括:
a)包括以下部分的反相高效液相色谱柱(RP-HPLC):
i)包含反相固体载体的固定相;
ii)含有以下物质的流动相:
1)离子对试剂;
2)缓冲液;
3)水;和
4)乙腈,其中该流动相在200nm的吸光度小于约0.5;和
b)紫外(UV)检测器。
附图简述
图1显示了在实施例1所述条件下进行的9-(S)-红霉胺RP-HPLC试验的示例性色谱图。
图2显示了流动相中离子对试剂(1-辛磺酸钠)的浓度对本发明的9-(S)-红霉胺RP-HPLC试验的影响。例如,所示色谱图的中心部分证实了试验条件对主要组分的峰分离(程度)的影响。
图3显示了流动相pH对本发明的9-(S)-红霉胺RP-HPLC试验的影响。
发明详述
本发明特别提供了检测与定量在紫外区具有主要分光光度吸收的大环内酯和/或相关分子的方法和系统。在一些实施方案中,这些方法包括在反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱上操作含有大环内酯或相关分子的样品。利用低紫外吸收的流动相洗脱该样品从而可在短波长处检测大环内酯和/或任何分开的杂质。该流动相也可含有离子对试剂以增加通常为极性的大环内酯在反相柱上的保留时间。
本发明(所述)的大环内酯包括任何已知的抗生素或其它大环内酯和它们的衍生物。典型的大环内酯的特征在于12-、14-或16-元大环内酯核心结构。大环内酯是本领域广为知晓的,其详细描述于,例如全文纳入本文作为参考的《大环内酯类抗生素》(Macrolide Antibiotics),Satoshi Omura编,AcademicPress,Inc.,Orlando,Florida,1984。在一些实施方案中,所述大环内酯具有相对不佳的紫外-可见(UV-VIS)吸收分布,例如,在UV-VIS范围(约100nm到约900nm)中显示最大吸收在波长约180nm到约220nm,约180nm到约200nm,或约180nm到约195nm。在其它实施方案中,该大环内酯在UV-VIS范围中的最大吸收在波长约188、约189、约190、约191、约192、约193、约194、约195、约196、约197、约198、约199、约200、约201、约202、约203、约204或约205nm。
适用于本文所述方法和系统检测的大环内酯还可以包含至少一个易于质子化或去质子化以形成能与离子对试剂配对的带电荷大环内酯的部分。在一些实施方案中,该大环内酯可含有中性、碱性部分,其中相应的游离部分(其中H代替了该大环内酯分子的剩余部分)具有低于约10、低于约8、低于约5或低于约4的pKb。一些示范性的中性、碱性部分包括NH2、烷基胺(例如NHMe、NHEt等)、二烷基胺(例如NMe2、NEt2等)、环状胺(例如哌啶基、吗啉基等)等。
本发明方法和系统可检测的代表性大环内酯包括,例如9-(S)-红霉胺、9-(R)-红霉胺、红霉素、红霉素腙、红霉素、9-亚氨基红霉素、红霉素肟、红霉素B、红霉素腙B、9-亚氨基红霉素B、红霉胺B、红霉素腙丙酮加合物(aduct)、9-羟基亚氨基红霉素、氢氧化红霉胺、9-羟基亚氨基红霉素B、氢氧化红霉胺B、红霉胺C、红霉胺D、阿奇霉素、甲基红霉素、迪利霉素、三乙酰竹桃霉素、它们的衍生物等。
其它合适的大环内酯含有不超过一个的sp或sp2杂化碳或氮原子。具有这种特征的大环内酯的例子包括红霉胺、红霉胺B、氢氧化红霉胺、氢氧化红霉胺B、红霉胺C、氢氧化红霉胺C、红霉胺D、氢氧化红霉胺D等。
在一些实施方案中,该大环内酯是9-(S)-红霉胺。
本发明的流动相可以是能有效地洗脱所需大环内酯、将该大环内酯与可能的杂质分开进而在检测波长光度检测该大环内酯的任何液体组分的混合物。在一些实施方案中,该流动相在约205nm以上的吸光度(例如,用分光光度计在1cm光程上检测)可忽略不计。“忽略不计”指吸光度约为0.02或更低。在其它实施方案中,该流动相在检测波长的吸光度(例如,用分光光度计在1cm光程上检测)低于约0.5、低于约0.3或低于约0.1。
该流动相可含水、有机溶剂或它们的混合物。可以使用与水混溶且不干扰在检测波长检测大环内酯的任何合适的有机溶剂。在一些实施方案中,该有机溶剂是乙腈。流动相可含有0到100%(v/v)水和0到100%(v/v)的有机溶剂。在一些实施方案中,该流动相含有约5到约75、约10到约60、或约20到约50%(v/v)的有机溶剂。
在一些实施方案中,该流动相还含有缓冲液以将溶液稳定于所需pH。可以使用不干扰在检测波长检测大环内酯的任何缓冲液。在一些实施方案中,该缓冲液是磷酸盐或硫酸盐缓冲液。在其它实施方案中,该缓冲液是硫酸盐缓冲液。缓冲液浓度可以是,例如约0.1mM到约1000mM。在一些实施方案中,缓冲液浓度是约1mM到约500mM、约5mM到约100mM或约10mM到约30mM。
流动相可以具有任何pH,只要大环内酯足够稳定从而可用本发明方法和系统检测。在一些实施方案中,pH是约1到约4。在其它实施方案中,pH是约3。
在一些实施方案中,该流动相含有离子对试剂,例如有助于将该大环内酯保留在反相柱上的盐。在流动相溶液中相当稳定,能与大环内酯的带电荷形式(例如,质子化或去质子化)形成离子对且不干扰该大环内酯的洗脱或检测的任何离子对试剂均合适。各种合适的离子对试剂可购得,利用这些试剂的HPLC技术为本领域所熟知。离子对试剂的一些例子包括烷基磺酸盐,例如包括1-辛磺酸钠的(C4-C12烷基)磺酸盐。流动相中离子对试剂的浓度可以是约0.1mM到约1000mM。在一些其它实施方案中,离子对浓度是约1mM到约500mM、约5mM到约100mM或约10mM到约30mM。在一些实施方案中,该离子对浓度是约12mM到约15mM。
流动相可以等度洗脱或梯度洗脱流过HPLC柱。在施加梯度流动相的实施方案中,该流动相由两种或多种不同的洗脱剂溶液的混合物构成,其比例随洗脱的进程而变化。例如,在洗脱期间,该流动相可含有含量可变的水、有机溶剂、缓冲液和离子对试剂。可以调节组分含量的变化从而使洗脱期间梯度流动相在检测波长的吸光度维持基本恒定。也可调节组分含量的变化来优化峰形、洗脱时间、大环内酯与杂质的分离(程度)和其它参数。
在一些实施方案中,通过用一种洗脱剂溶液或两种洗脱剂溶液的混合物进行洗脱来改变流动相的组成,所述每种溶液的水、有机溶剂、缓冲液和离子对试剂的含量不同。在一些实施方案中,第一种洗脱剂溶液含有约10到约30%(v/v)的有机溶剂,约70到约90%(v/v)的水,约10到约20mM的离子对试剂和约10到约15mM的缓冲液,第二种洗脱剂溶液含有约40到约60%(v/v)的有机溶剂,约40到约60%(v/v)的水,约8到约15mM的离子对试剂和约8到约12mM的缓冲液。在其它实施方案中,第一种洗脱剂溶液含有约20%(v/v)的有机溶剂,约80%(v/v)的水,约15mM的离子对试剂和约13mM的缓冲液,第二种洗脱剂溶液含有约50%(v/v)的有机溶剂,约50%(v/v)的水,约12mM的离子对试剂和约10.5mM的缓冲液。在洗脱期间的任一时间点,流动相可以完全由两种洗脱剂溶液的一种或该两种溶液的混合物构成。
固定相可以由任何反相固体载体介质构成,该介质与流动相联用可检测大环内酯并将其与可能的杂质分开。在一些实施方案中,该固定相含有C8到C18基质。在其它实施方案中,该固定相是C18基质。
为将样品引入(HPLC)柱,可将其稀释成稀释样品。稀释样品的大环内酯浓度是约1到约10mg/mL。样品稀释剂可由Bis-Tris(例如,约20到约100mM、约30到约70mM或约50mM的Bis-Tris)缓冲的水构成,其pH为约6到8,或约7。
监测柱的流出液的紫外检测器可包括能检测紫外波长通过液体样品的吸收或透射的任何分光光度计。可将检测器调谐至洗脱期间恒定的检测波长。在一些实施方案中,在约190nm到约210nm,约197nm到约205nm或约200nm的波长检测流出液。在一些实施方案中,检测波长约200nm。
可在各种温度和压力,包括室温和环境压力下根据本发明方法和系统洗脱大环内酯。在一些实施方案中,在约10到约45,10到约30,约15到约25或约20℃的恒温进行洗脱。例如,可通过在柱外装上冷凝器将温度维持在室温以下。也可在空气或惰性气氛中进行洗脱。
可通过比较认为含有对应于大环内酯的峰的色谱图与在同一条件下操作的显示大环内酯已知样品的峰的色谱图来证实对大环内酯的检测。例如,在参比峰的约0.2分钟内出现的样品峰可认为得到证实。也可通过比较对应于大环内酯的峰的面积与含量已知的大环内酯参比样品(标准品)所得色谱图中峰的面积来定量样品中大环内酯的含量。
本发明还提供了通过本文所述检测方法检测大环内酯并利用紫外检测器检测一个或多个检测波长处的其它吸收峰或透射峰来监测柱的流出液从而测定含有大环内酯的样品纯度的方法,其中所述的其它峰对应于除所检测的大环内酯外样品中存在的化合物,例如杂质(如其它大环内酯)。在一些实施方案中,可识别大于所检测的大环内酯峰面积的约0.05%的相应杂质峰。此外,可通过测定峰性质,包括例如峰高和/或峰面积来评估样品纯度。例如,可通过测定每种所检测杂质的总峰面积(例如,大环内酯的峰面积加上杂质的峰面积)百分比来评估纯度。
本发明也包括包含上述部件的组件的系统。例如,本发明的系统可包括a)包含以下部分的反相高效液相色谱柱(RP-HPLC):i)含有反相固体载体介质的固定相;和ii)上述流动相;和b)紫外(UV)检测器。
参考文献证实本领域技术人员熟知操作或优化本发明的HPLC试验的其它参数,例如其内容全文纳入本文作为参考的Snyder等,《实用HPLC方法开发》(Practical HPLC Method Development),第二版,Wiley,New York,1997。
通过具体的实施例更详细地描述了本发明。提供以下实施例是出于说明性目的,不是要以任何方式限制本发明。本领域的技术人员不难理解可以改变或改进各种非关键参数而得到基本相同的结果。
实施例
实施例1
检测红霉胺并测定纯度的HPLC试验
总体描述
将9-(S)-红霉胺(印度,Alembic Ltd.生产)溶解于50mM Bis-Tris缓冲液来制备用于HPLC分析的测试样品。Bis-Tris用于稳定9-(S)-红霉胺样品中通常发现的杂质。利用流动相中的1-辛磺酸钠作为离子对物质在反相柱上进行该样品溶液的HPLC分析。通过在200nm用紫外吸光度检测组分。如果样品色谱图中观察到的峰在参比标准品色谱图中所观察到主峰的±0.2分钟内,证实样品中存在9-(S)-红霉胺。如果样品色谱图中未在参比标准品色谱图中所观察到主峰的±0.2分钟内观察到有峰,证实样品中不存在9-(S)-红霉胺。比较样品色谱图中9-(S)-红霉胺峰面积与9-(S)-红霉胺参比溶液色谱图的峰面积来测定9-(S)-红霉胺百分比(重量/重量试验值)。杂质以色谱图中的保留时间和总面积百分比表示。
仪器
以下根据生产商的使用说明操作的仪器用于获得HPLC色谱图。性能相当的仪器可替换。
真空脱气器:Waters 2690
泵:Waters 2690
注射器:Waters 2690
·50∶50体积比的乙腈和水的混合液作为针头洗涤液
·100μL注射环(injection loop)
预柱:装有ODS盒的Phenomenex Security Guard(P/N AJO-4287)
柱:Phenomenex柱,C18(2),150mm×4.6mm,5μm(P/N00F-4252-E0)。
·以柱标记所示洗脱剂流动的方向装柱,将其放置于维持在20±1℃的Jones色谱柱冷凝器/加热器中。
·不用时将柱保存在70∶30(v/v)的乙腈∶水中。
检测器:Waters 2487双波长检测器。
·波长=200nm
柱冷凝器:7955型Jones Chromatography
·温度设置在20±1℃。
数据系统:Perkin-Elmer Nelson Turbochrom数据系统,6.2.1版。
测试样品和参比溶液的制备
测试样品和参比溶液保存不超过36小时。
测试样品:将两份60±6mg的测试样品称取入25-mL容量瓶来制备9-(S)-红霉胺API(活性药物成分)测试样品溶液。重量记录到最接近的0.01mg。向每瓶中加入20mL样品稀释剂B(见下文)。超声处理样品直至完全溶解。向超声浴(sonication bath)中加入冰以维持温度低于15℃。加入样品稀释剂B(见下文)将溶液补足至25mL体积。
参比标准溶液:将两份60±6mg的9-(S)-红霉胺参考标准品称取入25-mL容量瓶来制备9-(S)-红霉胺参考标准(溶液)。重量记录到最接近的0.01mg。向每瓶中加入20mL样品稀释剂B(见下文)。超声处理样品直至完全溶解。向超声浴中加入冰以维持温度低于15℃。加入样品稀释剂B(见下文)将溶液补足至25mL体积。将一个容量瓶标记为#1,另一个标记为#2。
灵敏度标准溶液:将100.0μL参比标准溶液#1移液至100mL容量瓶中,用样品稀释剂A补足体积来制备灵敏度标准溶液。
工作溶液
样品稀释剂A:
50mM Bis-Tris(Sigma)
pH 7.4。
样品稀释剂B:
50mM Bis-Tris(Sigma)
pH 7.0。
洗脱剂A:
20%乙腈(HPLC级,Fisher)
15mM 1-辛磺酸钠(Fluka)
13mM Na2SO4(Sigma)
pH 3.1
洗脱剂B:
50%乙腈(HPLC级,Fisher)
12mM 1-辛磺酸钠(Fluka)
10.5mM Na2SO4(Sigma)
pH 3.1
HPLC分析
按照以下参数进行样品分析。
流速:1.0mL/分钟
注射体积:20μL
操作时间:40分钟
波长:200nm
将数据系统设置为每秒采集1点,采集时间为40分钟。
按照下表I的顺序注射空白液、参比标准液和测试样品。
表I
注射 | 测试 |
空白液 | 系统平衡和试剂的合格性(acceptability) |
参比标准液#1 | 仪器精度柱的校验与合格性 |
空白液 | 系统平衡 |
灵敏度标准液 | 试验灵敏度 |
参比标准液#2 | 准确性,标准制品的确认 |
测试样品 | 样品分析 |
参比标准液#1 | 标准品的校验与一致性 |
空白液 | 继续洗柱(carryover) |
每次操作按照下表II施加梯度流动相。
表II
时间(分钟) | 洗脱剂A%(v/v) | 洗脱剂B%(v/v) |
0 | 70 | 30 |
1 | 70 | 30 |
20 | 30 | 70 |
26 | 30 | 70 |
27 | 0 | 100 |
31 | 0 | 100 |
33 | 70 | 30 |
40 | 70 | 30 |
证实样品中存在9-(S)-红霉胺
确定色谱图中的主峰在参比标准溶液色谱图中主峰的0.2分钟以内证明有9-(S)-红霉胺存在。
计算杂质含量
检查一式两份制品的色谱图,积分峰面积并计算平均值。根据下式计算杂质含量(纯度):
杂质含量=(Ai×100)/(∑[Ai]+Ap)
其中:
Ai是杂质峰的面积;
Ap是9-(S)-红霉胺的峰面积;和
∑[Ai]是所有大于0.05%的杂质峰的面积和。
实施例2
检测波长的改变对9-(S)-红霉胺HPLC分析的峰面积%的影响
表IIIa-IIIc比较了紫外检测波长为197、200和203nm的9-(S)-红霉胺的HPLC数据。按照实施例1所述的方法进行这些试验,除了检测波长不同(表IIIa和IIIc)。观察到有双峰的0.94和1.24的相对保留时间。9-(S)-红霉胺的相对保留时间(Rel.R.T.)设置为1.00。
表IIIa
检测波长为197nm时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.34 | 0.65 | 0.79 | 0.84 | 0.89 | 0.94 | 1.00 | 1.11 | 1.15 | 1.24 | 1.46 | 1.74 | 1.78 | 1.91 |
第一次试验 | 0.04 | 0.09 | 1.31 | 0.42 | 0.12 | 0.60 | 95.22 | 0.11 | 0.37 | 0.82 | 0.03 | 0.14 | - | 0.05 |
第二次试验 | - | 0.11 | 1.25 | 0.36 | 0.12 | 0.58 | 95.72 | 0.22 | 0.39 | 0.92 | - | 0.18 | 0.14 | 0.06 |
第三次试验 | 0.04 | 0.08 | 1.36 | 0.48 | 0.16 | 0.62 | 95.25 | 0.09 | 0.36 | 0.69 | 0.07 | 0.14 | 0.15 | 0.06 |
平均值 | 0.04 | 0.09 | 1.31 | 0.42 | 0.13 | 0.60 | 95.40 | 0.14 | 0.37 | 0.81 | - | 0.12 | 0.15 | 0.06 |
STD | 0.00 | 0.02 | 0.06 | 0.06 | 0.02 | 0.02 | 0.28 | 0.07 | 0.02 | 0.12 | - | 0.03 | 0.01 | 0.01 |
表IIIb
检测波长为200nm时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.34 | 0.65 | 0.79 | 0.84 | 0.89 | 0.94 | 1.00 | 1.11 | 1.15 | 1.24 | 1.46 | 1.74 | 1.78 | 1.91 |
第六次试验 | 0.06 | 0.06 | 1.26 | 0.4 | 0.16 | 0.86 | 95.38 | 0.06 | 0.35 | 0.87 | 0.04 | 0.06 | 0.13 | 0.07 |
第七次试验 | 0.05 | 0.07 | 1.25 | 0.42 | 0.13 | 0.85 | 95.27 | 0.11 | 0.39 | 0.90 | 0.06 | 0.07 | 0.15 | 0.06 |
第八次试验 | 0.06 | 0.06 | 1.26 | 0.44 | 0.17 | 0.81 | 95.48 | 0.05 | 0.30 | 0.86 | 0.08 | 0.07 | 0.13 | 0.07 |
平均值 | 0.06 | 0.06 | 1.26 | 0.42 | 0.15 | 0.84 | 95.38 | 0.07 | 0.35 | 0.88 | 0.06 | 0.07 | 0.14 | 0.07 |
STD | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.02 | 0.02 | 0.03 | 0.11 | 0.03 | 0.05 | 0.02 | 0.02 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
表IIIc
检测波长为203nm时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.34 | 0.65 | 0.79 | 0.84 | 0.89 | 0.94 | 1.00 | 1.11 | 1.15 | 1.24 | 1.46 | 1.74 | 1.78 | 1.91 |
第九次试验 | 0.08 | 0.07 | 1.27 | 0.45 | - | 0.93 | 95.34 | 0.08 | 0.37 | 1.03 | 0.07 | 0.05 | 0.18 | - |
第十次试验 | 0.08 | 0.06 | 1.25 | 0.52 | 0.19 | 1.01 | 94.86 | 0.15 | 0.43 | 1.10 | 0.08 | - | 0.17 | - |
第十一次试验 | 0.08 | 0.07 | 1.25 | 0.48 | 0.12 | 0.93 | 95.14 | 0.07 | 0.21 | 1.01 | 0.08 | 0.10 | 0.45 | - |
平均值 | 0.08 | 0.07 | 1.26 | 0.48 | 0.16 | 0.96 | 95.11 | 0.10 | 0.34 | 1.05 | 0.08 | 0.08 | 0.27 | - |
STD | 0.00 | 0.01 | 0.01 | 0.04 | 0.05 | 0.05 | 0.24 | 0.04 | 0.11 | 0.05 | 0.01 | 0.04 | 0.16 | - |
相对保留时间为0.94和1.24的杂质峰的面积百分比确实显示了一定的波长依赖性;然而检测波长的改变对大多数杂质的估计几乎无影响。
实施例3
离子对试剂的浓度对9-(S)-红霉胺HPLC分析的峰面积%的影响
表IVa-IVe比较了1-辛磺酸钠浓度为15/12、14/11、16/13、16/11、14/13mM(洗脱剂A/洗脱剂B)时的HPLC数据。按照实施例1所述的方法进行这些试验,除了离子对试剂的浓度不同。9-(S)-红霉胺的相对保留时间(Rel.R.T.)设置为1.00。符号“dp”指观察到双峰,“sh”指观察到肩峰。
表IVa
离子对浓度为15/12mM时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.33 | 0.64 | 0.79 | 0.84 | 0.89 | 0.94sh | 1.00 | 1.10 | 1.15 | 1.25 | 1.44 | 1.73 | 1.77 | 1.91 |
第十二次试验 | 0.05 | 0.07 | 1.25 | 0.40 | 0.16 | 0.77 | 95.27 | 0.06 | 0.35 | 0.87 | 0.06 | 0.10 | 0.13 | 0.06 |
第十三次试验 | 0.05 | 0.07 | 1.25 | 0.40 | 0.13 | 0.76 | 95.25 | 0.11 | 0.39 | 0.87 | 0.06 | 0.11 | 0.15 | - |
第十四次试验 | 0.05 | 0.06 | 1.26 | 0.43 | 0.17 | 0.79 | 95.49 | 0.06 | 0.33 | 0.84 | 0.08 | - | 0.07 | - |
平均值 | 0.05 | 0.07 | 1.25 | 0.41 | 0.15 | 0.77 | 95.34 | 0.08 | 0.36 | 0.86 | 0.07 | 0.11 | 0.12 | 0.06 |
STD | 0.00 | 0.01 | 0.01 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.13 | 0.03 | 0.03 | 0.02 | 0.01 | 0.01 | 0.04 | - |
表IVb
离子对浓度为14/11mM时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.34 | 0.66 | 0.79 | 0.85 | 0.90 | 0.95 | 1.00 | 1.12 | 1.16 | 1.24dp | 1.46 | 1.73 | 1.78 | 1.90 |
第十五次试验 | 0.06 | 0.08 | 1.31 | 0.44 | 0.13 | 0.73 | 95.63 | 0.08 | 0.21 | 0.89 | 0.05 | 0.07 | 0.11 | 0.10 |
第十六次试验 | 0.07 | 0.08 | 1.27 | 0.46 | 0.15 | 0.77 | 95.26 | 0.15 | 0.32 | 0.96 | 0.08 | 0.07 | 0.11 | 0.12 |
第十七次试验 | 0.06 | 0.07 | 1.28 | 0.47 | 0.13 | 0.72 | 95.17 | 0.10 | 0.44 | 1.05 | 0.08 | 0.11 | 0.11 | 0.09 |
平均值 | 0.06 | 0.08 | 1.29 | 0.46 | 0.14 | 0.74 | 95.35 | 0.11 | 0.32 | 0.97 | 0.07 | 0.08 | 0.11 | 0.10 |
STD | 0.01 | 0.01 | 0.02 | 0.02 | 0.01 | 0.03 | 0.24 | 0.04 | 0.12 | 0.08 | 0.02 | 0.02 | 0.00 | 0.02 |
表IVc
离子对浓度为16/13mM时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.33 | 0.62 | 0.79 | 0.83 | 0.88 | 0.93dp | 1.00 | 1.09 | 1.15 | 1.24 | 1.43 | 1.72 | 1.77 |
第十八次试验 | 0.05 | 0.06 | 1.32 | 0.48 | 0.13 | 0.78 | 95.31 | 0.10 | 0.33 | 0.92 | 0.07 | 0.05 | 0.17 |
第十九次试验 | 0.05 | 0.07 | 1.23 | 0.36 | 0.10 | 0.80 | 95.65 | 0.16 | 0.37 | 0.96 | 0.06 | 0.05 | 0.15 |
第二十次试验 | 0.05 | 0.09 | 1.31 | 0.48 | 0.16 | 0.84 | 95.36 | 0.08 | 0.35 | 0.94 | 0.06 | - | 0.16 |
平均值 | 0.05 | 0.07 | 1.29 | 0.44 | 0.13 | 0.81 | 95.44 | 0.11 | 0.35 | 0.94 | 0.06 | 0.05 | 0.16 |
STD | 0.00 | 0.02 | 0.05 | 0.07 | 0.03 | 0.03 | 0.18 | 0.04 | 0.02 | 0.02 | 0.01 | 0.00 | 0.01 |
表IVd
离子对浓度为16/11mM时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.33 | 0.64 | 0.79 | 0.84 | 0.89 | 0.94sh | 1.00 | 1.10 | 1.15 | 1.25 | 1.44 | 1.71 | 1.76 | 1.89 |
第二十一次试验 | 0.05 | 0.08 | 1.27 | 0.49 | 0.12 | 0.80 | 95.07 | 0.14 | 0.43 | 1.00 | 0.07 | 0.09 | 0.16 | 0.06 |
第二十二次试验 | 0.05 | 0.08 | 1.27 | 0.48 | 0.13 | 0.81 | 95.19 | 0.10 | 0.38 | 1.01 | 0.07 | 0.06 | 0.15 | 0.07 |
第二十三次试验 | 0.04 | 0.07 | 1.25 | 0.47 | 0.11 | 0.81 | 95.20 | 0.13 | 0.39 | 0.99 | 0.06 | 0.05 | 0.16 | 0.05 |
平均值 | 0.05 | 0.08 | 1.26 | 0.48 | 0.12 | 0.81 | 95.15 | 0.12 | 0.40 | 1.00 | 0.07 | 0.07 | 0.16 | 0.06 |
STD | 0.00 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.07 | 0.02 | 0.03 | 0.01 | 0.01 | 0.02 | 0.01 | 0.01 |
表IVe
离子对浓度为14/13mM时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.34 | 0.64 | 0.79 | 0.84 | 0.89 | 0.94sh | 1.00 | 1.10 | 1.16 | 1.25 | 1.44 | 1.73 | 1.78 | 1.92 |
第二十四次试验 | 0.06 | 0.10 | 1.28 | 0.45 | 0.14 | 0.82 | 95.45 | 0.05 | 0.34 | 0.93 | 0.07 | 0.05 | 0.15 | 0.06 |
第二十五次试验 | 0.07 | 0.05 | 1.27 | 0.42 | 0.08 | 0.73 | 95.50 | 0.07 | 0.30 | 1.02 | 0.07 | 0.07 | 0.15 | 0.08 |
第二十六次试验 | 0.06 | 0.08 | 1.27 | 0.42 | 0.09 | 0.79 | 95.62 | 0.07 | 0.34 | 0.95 | - | 0.06 | 0.14 | 0.07 |
平均值 | 0.06 | 0.08 | 1.27 | 0.43 | 0.10 | 0.78 | 95.52 | 0.06 | 0.33 | 0.97 | 0.07 | 0.06 | 0.15 | 0.07 |
STD | 0.01 | 0.03 | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.05 | 0.09 | 0.01 | 0.02 | 0.05 | 0.00 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
总体上,当离子对试剂平均浓度在整个操作期间升高或降低时,保留时间增加或减少。以相反方向改变离子对试剂浓度使得基线向上或向下倾斜。利用浓度为16/13 mM组合的流动相浓度,最后洗脱的杂质峰的保留时间延伸太长导致其检测不可靠。另外,在所测试的所有条件下,相对保留时间和峰面积一致。在一些情况中,随着流动相组成改变,观察到部分重叠峰分开或合并。
实施例4
pH对9-(S)-红霉胺HPLC分析的峰面积%的影响
表Va-Vc比较了pH 2.9、3.1和3.3时的HPLC数据。按照实施例1所述的方法进行这些试验,除了pH不同。9-(S)-红霉胺的相对保留时间(Rel.R.T.)设置为1.00。符号“dp”指观察到双峰,“sh”指观察到肩峰。未观察到pH对峰面积有影响。
表Va
pH 2.9时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.30 | 0.64 | 0.80 | 0.83 | 0.89 | 0.93dp | 1.00 | 1.08 | 1.14 | 1.21 | 1.39 | 1.64 | 1.68 | 1.79 |
第二十七次试验 | 0.06 | - | 1.30 | 0.50 | 0.14 | 0.83 | 95.04 | 0.04 | 0.31 | 0.78 | 0.05 | 0.08 | 0.11 | 0.06 |
第二十八次试验 | 0.06 | 0.02 | 1.32 | 0.48 | 0.12 | 0.75 | 95.38 | 0.03 | 0.31 | 0.78 | 0.05 | 0.06 | 0.15 | 0.07 |
第二十九次试验 | 0.07 | 0.02 | 1.28 | 0.46 | 0.12 | 0.73 | 94.73 | 0.04 | 0.28 | 0.79 | 0.06 | - | 0.11 | 0.06 |
平均值 | 0.06 | 0.02 | 1.30 | 0.48 | 0.13 | 0.77 | 95.05 | 0.04 | 0.30 | 0.78 | 0.05 | 0.07 | 0.12 | 0.06 |
STD | 0.01 | 0.00 | 0.02 | 0.02 | 0.01 | 0.05 | 0.33 | 0.01 | 0.02 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.02 | 0.01 |
表Vb
pH 3.1时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.30 | 0.64 | 0.80 | 0.83 | 0.89 | 0.93dp | 1.00 | 1.09 | 1.14 | 1.22 | 1.40 | 1.65 | 1.69 | 1.80 |
第三十次试验 | 0.06 | 0.08 | 1.29 | 0.58 | 0.17 | 0.93 | 94.28 | 0.08 | 0.34 | 1.00 | 0.06 | 0.07 | 0.18 | 0.08 |
第三十一次试验 | 0.08 | 0.06 | 1.30 | 0.59 | 0.14 | 0.87 | 94.24 | 0.15 | 0.38 | 1.02 | 0.11 | 0.05 | 0.17 | 0.09 |
第三十二次试验 | 0.06 | 0.04 | 1.27 | 0.45 | 0.07 | 0.76 | 94.79 | 0.08 | 0.36 | 1.04 | 0.05 | 0.05 | 0.17 | 0.07 |
平均值 | 0.07 | 0.06 | 1.29 | 0.54 | 0.13 | 0.85 | 94.44 | 0.10 | 0.36 | 1.02 | 0.07 | 0.06 | 0.17 | 0.08 |
STD | 0.01 | 0.02 | 0.02 | 0.08 | 0.05 | 0.09 | 0.31 | 0.04 | 0.02 | 0.02 | 0.03 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
表Vc
pH 3.3时不同相对保留时间的峰面积%
Rel.R.T. | 0.30 | 0.64 | 0.80 | 0.83 | 0.88 | 0.93dp | 1.00 | 1.09 | 1.12 | 1.22 | 1.39 | 1.64 | 1.68 | 1.80 |
第三十三次试验 | 0.04 | 0.06 | 1.37 | 0.61 | 0.17 | 0.84 | 94.17 | 0.08 | 0.30 | 0.99 | 0.07 | 0.05 | 0.18 | 0.14 |
第三十四次试验 | 0.04 | 0.06 | 1.33 | 0.58 | 0.14 | 0.81 | 94.72 | 0.09 | 0.38 | 0.96 | 0.06 | 0.06 | 0.12 | 0.03 |
第三十五次试验 | 0.04 | 0.02 | 1.33 | 0.60 | 0.10 | 0.87 | 94.59 | 0.05 | 0.22 | 0.98 | 0.07 | 0.06 | 0.19 | 0.03 |
平均值 | 0.04 | 0.05 | 1.34 | 0.60 | 0.14 | 0.84 | 94.49 | 0.07 | 0.30 | 0.98 | 0.07 | 0.06 | 0.16 | 0.07 |
STD | 0.00 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.04 | 0.03 | 0.29 | 0.02 | 0.08 | 0.02 | 0.01 | 0.01 | 0.04 | 0.06 |
实施例5
柱温对9-(S)-红霉胺HPLC分析的峰面积%的影响
按照实施例1所述的方法进行测试试验,除了柱温不同(18、20和22℃)。未观察到在该温度范围内温度对峰面积有明显影响。然而,降低柱温使峰的分离程度更好并使9-(S)-红霉胺的峰变窄。
实施例6
溶液浓度对9-(S)-红霉胺HPLC分析的峰面积%的影响
按照实施例1所述的方法进行测试试验,除了9-(S)-红霉胺的样品浓度不同(0.9、1.2和1.4mg/mL)。在该浓度范围内样品浓度对9-(S)-红霉胺的定量估算没有明显影响。
应该理解,为明晰起见而描述于独立的实施方案中的本发明的某些特征也可以组合到一个实施方案中。相反,为简明起见而描述于一个实施方案中的本发明的各种特征也可以单独提供或可合适地再组合。
除了本文所述的之外,本领域的技术人员从上述内容可明白本发明的各种改进形式。这种改进形式也要包含在附加的权利要求的范围内。本申请引用的各参考文献全文纳入本文作为参考。
Claims (20)
1.检测在约180nm到约220nm的紫外-可见范围具有最大吸光度的大环内酯的方法,包括:
a)将含有所述大环内酯的样品施加至外部配有检测波长为约180nm到约220nm的紫外(UV)检测器的反相高效液相(RP-HPLC)柱;
b)用含有离子对试剂的流动相洗脱所述样品;和
c)用所述紫外检测器监测柱的流出液以检测位于所述检测波长的吸收峰或透射峰,所述峰对应于所述大环内酯。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述大环内酯在约180nm到约200nm的紫外-可见范围具有最大吸光度。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述大环内酯是9-(S)-红霉胺。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述检测波长是约190nm到约210nm。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述检测波长是约197nm到约205nm。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述离子对试剂含有(C4-C12烷基)磺酸盐。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述离子对试剂含有1-辛磺酸钠。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相还含有缓冲液。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述缓冲液是磷酸盐或硫酸盐缓冲液。
10.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相的pH约为1到4。
11.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相在所述大环内酯的洗脱时程中在所述紫外检测器的检测波长上保持基本恒定的吸光度。
12.如权利要求11所述的方法,其特征在于,所述流动相在高于205nm的吸光度可忽略不计。
13.如权利要求1所述的方法,其特征在于,还包括通过将所述峰的面积与标准品的面积进行比较来定量所述大环内酯。
14.如权利要求1所述的方法,其特征在于,还包括利用所述紫外检测器检测位于所述检测波长的一种或多种其它吸收峰或透射峰来监测柱的流出液,从而检测所述样品中存在的杂质,所述一种或多种其它峰的峰面积大于所述大环内酯峰面积的0.05%并对应于一种或多种杂质。
15.如权利要求1所述的方法,其特征在于,还包括通过以下步骤来测定所述样品的纯度:
i)利用所述紫外检测器检测位于所述检测波长的一种或多种其它吸收峰或透射峰来监测柱的流出液,所述一种或多种其它峰对应于一种或多种杂质;和
ii)测定所述检测器所检测到的峰的特性来计算所述样品中的杂质含量。
16.如权利要求15所述的方法,其特征在于,所述特性是峰面积或峰高。
17.如权利要求15所述的方法,其特征在于,所述测定通过以下步骤进行:i)测定所检测的每种杂质和所述大环内酯的峰面积;和ii)计算所述大环内酯的峰面积相对于总的峰面积的百分比。
18.如权利要求15所述的方法,其特征在于,所述一种或多种其它吸收峰或透射峰的峰面积大于所述大环内酯峰面积的0.05%。
19.一种检测9-(S)-红霉胺的方法,包括:
a)将含有所述9-(S)-红霉胺的样品施加至外部配有检测波长为约200nm的紫外(UV)检测器的C18反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱;
b)用含有水、乙腈、1-辛磺酸钠和硫酸盐缓冲液的流动相洗脱所述样品;和
c)用所述紫外检测器监测柱的流出液以检测位于检测波长的吸收峰或透射峰,所述峰对应于所述9-(S)-红霉胺。
20.一种检测大环内酯的系统,包括:
a)包括以下部分的反相高效液相色谱柱(RP-HPLC):
i)包含反相固体载体的固定相;
ii)含有以下物质的流动相:
1)离子对试剂;
2)缓冲液;
3)水;和
4)乙腈,其中所述流动相在200nm的吸光度小于0.5;和
b)紫外(UV)检测器。
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Cited By (1)
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