CN107764906A - 一种加米霉素的含量检测方法 - Google Patents

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张许科
张晓会
姚路路
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Abstract

本发明提供一种加米霉素含量的测定方法，包括高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用紫外检测器进行定量分析，可用于加米霉素原料、加米霉素注射液、加米霉素口服液和加米霉素可溶性粉的含量分析，具有基线更加平稳，峰型好，峰响应值高，灵敏度好的优点。

Description

一种加米霉素的含量检测方法
技术领域
本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种加米霉素的含量检测方法，该方法可用于对加米霉素原料、加米霉素注射液、加米霉素口服液或加米霉素可溶性粉的质量进行综合评价。
背景技术
加米霉素(Gamithromycin)属于第二代大环内酯类氮杂7α类抗生素，不溶于水，在高温条件下稳定，对光不敏感，重结晶后只有一种构型，主要用于治疗溶血性巴斯德菌、出血败血性巴斯德菌和嗜组织菌等细菌病原体导致的牛感染性疾病，具有吸收快、体内残留低、体内分布广、安全性高等优点，且暂无不良反应报道，在兽医临床具有广泛的应用前景。
加米霉素紫外吸收为末端吸收，最大吸收波长为200nm，现有技术采用DVD检测器或者蒸发光散射检测器，这两种检测器成本高，不能广泛被使用，另外检测灵敏度低，难以准确定量。
发明内容
为解决上述问题，本发明采用以下技术方案：
一种加米霉素的含量检测方法，该方法为高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用紫外检测器进行定量分析。其色谱条件为：流动相由0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.0～11.0)与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的50％～70％；流速为1.0～2.0mL/min；柱温为30～50℃；检测波长为205～220nm。样品浓度为0.5～2mg/mL，进样体积为10～20μL。
优选的，上述加米霉素的含量检测方法，所述色谱条件为流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.5)-乙腈(40:60)；流速为1.0mL/min；柱温为35℃；检测波长为205nm。
优选的，上述加米霉素的含量检测方法，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的长度规格为150-250mm；进一步优选的，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的规格为：长度150mm，内径4.6mm，填料粒径5μm。
上述加米霉素的含量检测方法，通过外标法对加米霉素样品中加米霉素进行定量。
上述检测方法应用于加米霉素原料、加米霉素注射液、加米霉素口服液或加米霉素可溶性粉。
本发明的有益效果：
本发明以乙腈和磷酸二氢钾溶液的混合物作为流动相并以三乙胺作为pH调节剂，解决了基线噪音大的问题，基线更加平稳，峰型好，峰响应值高，灵敏度好。
该方法经过精密度试验、灵敏度试验和加样回收率试验等方法学验证，结果表明其精密度好、灵敏度高、准确性好。
附图说明
附图1为加米霉素对照品的液相色谱图
附图2为加米霉素注射液的液相色谱图
附图3为加米霉素口服液的液相色谱图
附图4为加米霉素可溶性粉的液相色谱图
具体实施方式
下面将结合实施例和附图进一步详细说明本发明。
实施例1：
1.1.仪器设备及原材料
e2695高效液相色谱仪，配备2489型紫外检测器，Empower色谱工作站，美国Waters公司；
乙腈(HPLC级，Thermo Fisher公司)；磷酸二氢钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；三乙胺(高效液相色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；加米霉素对照品(含量：99.6％，洛阳惠中兽药有限公司)；加米霉素注射液(规格：100ml：15g，洛阳惠中兽药有限公司)；水为超纯水。
1.2.色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters XBridge C18柱(150mm×4.6mm，5μm))，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.5)-乙腈(40:60，v/v)；流速为1.0mL/min；检测波长为205nm；柱温为35℃；进样体积为20μL。
1.3.供试品溶液的制备
分别精密称取加米霉素对照品18.89mg、19.92mg至10ml量瓶中，加流动相适量超声溶解，用流动相定容至刻度，摇匀。
分别精密称取加米霉素注射液163.45mg、159.56mg至10ml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀。
1.4.检测限、定量限测定
精密称取加米霉素对照品适量，加流动相溶解并稀释制成一定浓度，逐步稀释后进样20μL，以信噪比S/N＝3、S/N＝10测定，测得加米霉素定量限为132ng、检测限为56ng。
1.5.进样精密度试验
取加米霉素对照品溶液，连续进样测定6次，考察峰面积及保留时间的变化情况。结果见表1。
表1进样精密度试验结果
结果表明，进样精密度良好。
1.6.加样回收率试验
精密称取加米霉素注射液适量(相当于加米霉素10mg)，9份，置10mL量瓶中，分别加入80％、100％、120％的对照品，加流动相稀释至刻度，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，进行回收率测定，结果见表2。
表2回收率试验结果
由上表可知，回收率在98.32～100.08之间，平均回收率为99.2％，说明方法准确度良好。
1.7.加米霉素注射液含量的计算方法如下：
Cx＝f平均×Ax×供试品稀释倍数×相对密度/供试品称样量/标示量×100％；
其中，f＝对照品称样量×Cs/对照品稀释倍数/As；
根据上述方法，计算出加米霉素注射液的平均含量为100.2％。
实施例2：
2.1.仪器设备及原材料
e2695高效液相色谱仪，配备2489型紫外检测器，Empower色谱工作站，美国Waters公司；
乙腈(HPLC级，Thermo Fisher公司)；磷酸氢二钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；氢氧化钾(分析纯，天津市永大化学试剂有限公司)；加米霉素对照品(含量：99.6％，洛阳惠中兽药有限公司)；水为超纯水。
2.2.色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters XBridge C18柱(150mm×4.6mm，5μm))，流动相为0.025mol/L磷酸氢二钾溶液(pH值8.2)-乙腈(30:70，v/v)；流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；柱温为35℃；进样体积为20μL。
2.3.检测限、定量限测定
精密称取加米霉素对照品适量，加流动相溶解并稀释制成一定浓度，逐步稀释后进样20μL，以信噪比S/N＝3、S/N＝10测定，测得加米霉素定量限为228ng、检测限为91ng。
实施例3：
3.1.仪器设备及原材料
e2695高效液相色谱仪，配备2489型紫外检测器，Empower色谱工作站，美国Waters公司；
乙腈(HPLC级，Thermo Fisher公司)；磷酸二氢钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；三乙胺(高效液相色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；加米霉素对照品(含量：99.6％，洛阳惠中兽药有限公司)；加米霉素(洛阳惠中兽药有限公司)；水为超纯水。
3.2.色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters XBridge C18柱(150mm×4.6mm，5μm))，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.5)-乙腈(40:60，v/v)；流速为1.0mL/min；检测波长为205nm；柱温为35℃；进样体积为20μL。
3.3.供试品溶液的制备
分别精密称取加米霉素对照品19.95mg、18.96mg至10ml量瓶中，加流动相适量超声溶解，用流动相定容至刻度，摇匀。
分别精密称取加米霉素20.04mg、19.86mg至10ml量瓶中，加流动相适量超声溶解，用流动相定容至刻度，摇匀。
3.4.加米霉素含量的计算方法如下：
Cx＝f平均×Ax×供试品稀释倍数/供试品称样量×100％；
其中，f＝对照品称样量×Cs/对照品稀释倍数/As；
根据上述方法，计算出加米霉素的平均含量为99.7％。
实施例4：
4.1.仪器设备及原材料
e2695高效液相色谱仪，配备2489型紫外检测器，Empower色谱工作站，美国Waters公司；
乙腈(HPLC级，Thermo Fisher公司)；磷酸二氢钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；三乙胺(高效液相色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；加米霉素对照品(含量：99.6％，洛阳惠中兽药有限公司)；加米霉素口服液(规格：100ml：15g，洛阳惠中兽药有限公司)；水为超纯水。
4.2.色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters XBridge C18柱(150mm×4.6mm，5μm))，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.5)-乙腈(40:60，v/v)；流速为1.0mL/min；检测波长为205nm；柱温为35℃；进样体积为20μL。
4.3.供试品溶液的制备
分别精密称取加米霉素对照品19.73mg、19.69mg至10ml量瓶中，加流动相适量超声溶解，用流动相定容至刻度，摇匀。
分别精密称取加米霉素口服液163.31mg、162.58mg至10ml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀。
4.4.加米霉素口服液含量的计算方法如下：
Cx＝f平均×Ax×供试品稀释倍数×相对密度/供试品称样量/标示量×100％；
其中，f＝对照品称样量×Cs/对照品稀释倍数/As；
根据上述方法，计算出加米霉素口服液的平均含量为99.8％。
实施例5：
5.1.仪器设备及原材料
e2695高效液相色谱仪，配备2489型紫外检测器，Empower色谱工作站，美国Waters公司；
乙腈(HPLC级，Thermo Fisher公司)；磷酸二氢钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；三乙胺(高效液相色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；加米霉素对照品(含量：99.6％，洛阳惠中兽药有限公司)；加米霉素可溶性粉(规格：100g：15g，洛阳惠中兽药有限公司)；水为超纯水。
5.2.色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters XBridge C18柱(150mm×4.6mm，5μm))，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.5)-乙腈(40:60，v/v)；流速为1.0mL/min；检测波长为205nm；柱温为35℃；进样体积为20μL。
5.3.供试品溶液的制备
分别精密称取加米霉素对照品19.96mg、20.04mg至10ml量瓶中，加流动相适量超声溶解，用流动相定容至刻度，摇匀。
分别精密称取加米霉素可溶性粉137.56mg、135.81mg至10ml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀。
5.4.加米霉素可溶性粉含量的计算方法如下：
Cx＝f平均×Ax×供试品稀释倍数/供试品称样量/标示量×100％；
其中，f＝对照品称样量×Cs/对照品稀释倍数/As；
根据上述方法，计算出加米霉素可溶性粉的平均含量为101.2％。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种加米霉素的含量检测方法，其特征在于，所述的方法为高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用紫外检测器进行定量分析，色谱条件为：流动相由0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.0～11.0)与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的50％(v/v)～70％(v/v)；流速为1.0～2.0mL/min；柱温为30～50℃；检测波长为205～220nm。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(用三乙胺调pH值至8.5)-乙腈(40:60)；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；检测波长为205nm。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的长度规格为150mm～250mm。
4.根据权利要求1-3所述的检测方法，其特征在于，所述的检测方法为外标法。
5.根据权利要求1-4所述的检测方法，其特征在于，所述的检测方法应用于加米霉素原料、加米霉素注射液、加米霉素口服液或加米霉素可溶性粉。
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