CN102778514B - 一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种测定盐酸美克洛嗪片有关物质的稳定性指示性分析方法。盐酸美克洛嗪为第一代哌嗪类抗组胺剂，适用于晕动症引起恶心、呕吐、头晕的治疗和预防并对前庭疾病引起的眩晕也有效。本发明采用高效液相色谱法对盐酸美克洛嗪片有关物质进行测定，可用于盐酸美克洛嗪片的质量控制。

Description

一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法

技术领域

本发明涉及一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

有关物质检查是药品质量控制的重要指标。建立起准确测定杂质的检验方法尤其重要，要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，及其对分析方法的筛选与验证。盐酸美克洛嗪片在美国药典32版有收录。美国药典32版中收载此品种，制剂中有关物质检测方法主要存在以下两个问题1.在流动相比例发生微小改变时，该活性成分保留时间相对变化较大；2.该方法中设置流速为2.0ml/min，样品溶液浓度较大，对仪器，色谱柱损害较大且需要流动相的量很大。

发明内容

本发明的目的是提供一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法。

本发明盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法是采用高效液相色谱法，其色谱条件为：色谱柱为苯基柱，规格为250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：A为甲醇，B为pH 7.0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0→5.0min，A为80%；5.0→35.0min，A由80%变为95%；35.0→35.01min，A由95%变为80%；35.01→45.0min，A为80%；流速1.0 ml/min；检测波长：225 nm；柱温为30℃；理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000；

测定方法：本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为60-90%，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，静置取上层液体滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，加稀释剂溶解制成1ml中含10μg盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20μl，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20％～30％，取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。

本发明中所使用色谱柱可以为通用的苯基柱，优选为型号为Kromasil 100-5 Phenyl的色谱柱。

本发明中样品溶液配制过程中用到的稀释剂为流动相A和B混合溶液，其中A为60-90%，A的比例优选为80%。

本发明所述梯度洗脱中流动相的百分比和稀释剂中的百分比均为常温下的体积比。

为证实该方法准确可靠，重复性好，能够用于控制盐酸美克洛嗪片的有关物质，进行如下方法学验证：

1．仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪，Shimadzu  LC-20AT；色谱工作站，Shimadzu  LC Solution；分析天平，梅特勒托利多；pH计，梅特勒托利多。

1.2 试药

盐酸美克洛嗪片，自制，制剂配方为盐酸美克洛嗪：50.0g、微晶纤维素PH102：40.0g、乳糖Flowlac100：320g、预交化淀粉：20g、磷酸氢钙：50g、PEG6000：7.5g、硬脂酸镁：7.5g、微粉硅胶：5.0g，工艺采用粉末直接压片法；盐酸美克洛嗪对照品，USP；甲醇，色谱纯；其它均为分析纯。

2．方法

2.1检测波长的选择

经二极管阵列检测器采集光谱图分析，可显示各主要峰在200～400 nm之间吸收光谱，选择各杂质峰及主峰均有较强吸收的波长作为检测波长。

2.2流动相条件考察

实验中分别以甲醇-磷酸盐缓冲溶液、甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲溶液等不同浓度、不同比例的流动相系统进行等度和梯度洗脱试验，比较上述各条件下的色谱图，选择分离效果最佳、时间尽可能短的流动相条件。

2.3色谱柱的选择

选择十八烷基键合硅胶为填料（L1）的型号为Phenomenex Gemini C18和苯基键合硅胶为填料（L11）的型号为Kromasil 100-5 Phenyl的色谱柱，按照确定的色谱条件分别进行试验。以主峰与杂质峰及主要杂质间分离状况为指标，考察不同类型的色谱柱对分离效果的影响。

2.4专属性试验

专属性试验

酸破坏：取本品细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50 mg），置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声10min后加1mol/L盐酸10ml，放置80℃水浴中2小时，取出并冷至室温，用1mol/L氢氧化钠溶液中和，加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

碱破坏：取本品细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50mg），置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声10min后加1mol/L氢氧化钠10ml，放置60℃水浴中2小时，取出并冷至室温，用1mol/L盐酸溶液中和，加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

光照破坏：取本品细粉适量置扁称量瓶中，于强光（照度4500lx±500lx）下照射10天。取细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50mg），置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声10min，冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

高温破坏：取本品细粉适量置扁称量瓶中，于60℃烘箱中放置10天。取细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50mg），置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声10min,冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

氧化破坏：取本品细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50mg），置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声10min，加H₂O₂(3%)10ml，于室温放置24小时，加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

高湿破坏：取本品细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50mg）置50ml容量瓶中，于湿度为75%±5%的环境中放置10天。加15ml稀释剂超声10min，冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

辅料干扰试验：取按处方配比不含盐酸美克洛嗪的细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50mg），置50ml容量瓶中，加适量稀释剂超声10min，冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

2.5检测限

取对照品溶液，采用逐级稀释法，依次进样。当信噪比（S/N）约为3时，此对应的盐酸美克洛嗪的量为检测限。

2.6溶液稳定性试验

依法配制的供试品溶液和对照品溶液，在0、2、4、6、8、12、24h时测定，分别计算相对标准偏差，考察其稳定性。

2.7重复性

取同一批盐酸美克洛嗪片制备6份供试品溶液，分别进样测定并记录色谱图及峰面积，计算相对标准偏差。

2.8耐用性试验

缓冲盐的pH值变化：将缓冲盐溶液的pH分别调为6.8、7.0、7.2，依法测定同一溶液。

柱温变化：将柱温分别设置为28℃、30℃、32℃，依法测定同一溶液。

流速变化：将流速分别设置为0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min，依法测定同一溶液。

2.9样品测定

取本品依法测定有关物质，记录色谱图。

2.10与美国药典方法对比试验

分别采用美国药典描述的方法和本发明提供的方法，测定同一溶液（以酸破坏、碱破坏、氧化破坏后盐酸美克洛嗪样品溶液为例）记录色谱图。

3.结果

3.1经二极管阵列检测器采集紫外-可见光谱图分析，杂质峰在225 nm均有较强吸收，故检测波长选为225 nm。参见图1-图9。

3.2根据不同流动相条件下色谱图分析，确定甲醇-磷酸盐缓冲溶液为流动相的梯度洗脱条件。不同流动相的色谱图见图10-图14。

3.3以主峰与杂质峰及主要杂质间分离状况为指标，根据不同类型的色谱柱对分离效果，选择Kromasil 100-5 Phenyl色谱柱。色谱图见图14-图15。

3.4酸破坏、碱破坏、氧化破坏、高温破坏、光照破坏、高湿破坏、辅料干扰试验色谱图见图16-图22。

破坏性试验图谱表明，本方法可有效分离盐酸美克洛嗪的各种杂质，且辅料没有干扰。

3.5当信噪比（S/N）约为3时，盐酸美克洛嗪的最低检出限为0.65ng，色谱图见图23。

3.6溶液稳定性结果见表1，可见样品溶液和对照溶液在24h内的稳定。

表 1  溶液稳定性实验结果

3.7重复性试验结果见表2，可见本方法重复性良好。

表2  重复性试验结果

	1	2	3	4	5	6	RSD（%）
								有关物质(%)	0.18	0.18	0.19	0.18	0.18	0.18	2.2

3.8耐用性试验结果见表3，可见本方法耐用性良好。

表3  耐用性试验结果

缓冲液pH	6.8	7.0	7.2	RSD (%)
					有关物质(%)	0.19	0.18	0.19	3.1
柱温	28℃	30℃	32℃	RSD (%)
					有关物质(%)	0.18	0.18	0.19	3.1
流速（ml/min）	0.9	1.0	1.1	RSD (%)
					有关物质(%)	0.18	0.18	0.19	3.1

3.9样品测定结果见表4，色谱图见图24。

表4样品测定结果

批号	100401	100402	100403	RSD(%)
					有关物质(%)	0.18	0.19	0.19	3.1

3.10采用美国药典描述的方法测定酸破坏、碱破坏、氧化破坏后盐酸美克洛嗪样品溶液，色谱图见图25-图27。与采用本发明提供的方法得到的色谱图（图16-图18）进行对比发现：图16-图18中杂质峰时间分布合理，分离度高，检测杂峰数量多，峰形尖且运行时间短。

4.结论

本发明提供了一种用于测定盐酸美克洛嗪片有关物质的稳定性指示性的分析方法，该方法专属性好，简单经济，准确度高，符合制剂质量控制的要求，可有效控制盐酸美克洛嗪片的有关物质，可用于盐酸美克洛嗪片的质量控制和稳定性研究。

本发明能有效的控制盐酸美克洛嗪片的有关物质的含量，而且可以缩短检验时间，减轻对仪器、色谱柱的损失，降低检测成本，满足企业生产的需要。2010版药典中收载此品种，制剂中有关物质检测未放入质量标准中，且原料的有关物质检测采用的是薄层色谱法，不能准确的测定有关物质含量。

附图说明：

图1 盐酸美克洛嗪对照品紫外-可见光谱图。

图2 保留时间为4.8分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图3 保留时间为6.6分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图4 保留时间为7.4分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图5 保留时间为8.7分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图6 保留时间为10.2分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图7 保留时间为14.1分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图8 保留时间为28.6分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图9 保留时间为30.8分钟的有关物质紫外-可见光谱图。

图10 盐酸美克洛嗪片色谱图（流动相为乙腈：甲醇：磷酸缓冲液-330:330:340等度洗脱）。

图11 盐酸美克洛嗪片色谱图（流动相为乙腈：甲醇：磷酸缓冲液-340:340:320等度洗脱）。

图12 盐酸美克洛嗪片色谱图（流动相为乙腈：甲醇：磷酸缓冲液-325:325:350等度洗脱）。

图13 盐酸美克洛嗪片色谱图（流动相为甲醇：磷酸缓冲液-88:12等度洗脱）。

图14 盐酸美克洛嗪片色谱图（流动相为甲醇：磷酸缓冲液依法梯度洗脱，Kromasil 100-5 Phenyl柱）。

图15盐酸美克洛嗪片色谱图（流动相为甲醇：磷酸缓冲液依法梯度洗脱，Phenomenex Gemini C18柱）。

图16 1mol/L盐酸破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图。

图17 1mol/L氢氧化钠破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图。

图18 3%双氧水氧化破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图。

图19 60℃高温破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图。

图20光照破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图。

图21 75%±5%高湿破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图。

图22盐酸美克洛嗪空白片辅料实验色谱图。

图23盐酸美克洛嗪最低检出限实验色谱图。

图24盐酸美克洛嗪片有关物质测定色谱图。

图25 1mol/L盐酸破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图（usp方法）。

图26 1mol/L氢氧化钠破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图（usp方法）。

图27 3%双氧水氧化破坏后盐酸美克洛嗪片色谱图（usp方法）。

具体实施方式

实施例1

色谱条件为：色谱柱为Kromasil 100-5苯基色谱柱，规格为250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：A为甲醇，B为pH 7.0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0→5.0min，A为80%；5.0→35.0min，A由80%变为95%；35.0→35.01min，A由95%变为80%；35.01→45.0min，A为80%；流速1.0ml/min；检测波长：225 nm；柱温为30℃；理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000；

测定方法：本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为80%，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，加稀释剂溶解制成1ml中含10μg盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20μl，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20％～30％，取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。

结果评价：依此方法对方法进行评价和样品检测结果如下：

最相邻峰分离度	溶液稳定性(RSD%)	重复性(RSD%)	样品测定(%)
				1.3	2.9	2.2	0.18

实施例2

色谱条件为：色谱柱为Crest Phenyl苯基柱，规格为250mm×4.6 mm，5 μm；流动相：A为甲醇，B为pH7.0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0→5.0min，A为80%；5.0→35.0min，A由80%变为95%；35.0→35.01min，A由95%变为80%；35.01→45.0min，A为80%；流速1.0ml/min；检测波长：225 nm；柱温为30℃；理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000；

测定方法：本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为60%，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，加稀释剂溶解制成1ml中含10μg盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20μl，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20％～30％，取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。

结果评价：依此方法对方法进行评价和样品检测结果如下：

最相邻峰分离度	溶液稳定性(RSD%)	重复性(RSD%)	样品测定(%)
				1.1	3.0	2.2	0.18

实施例3

色谱条件为：色谱柱为YMC-Pack苯基色谱柱，规格为250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：A为甲醇，B为pH7.0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0→5.0min，A为80%；5.0→35.0min，A由80%变为95%；35.0→35.01min，A由95%变为80%；35.01→45.0min，A为80%；流速1.0ml/min；检测波长：225 nm；柱温为30℃；理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000；

测定方法：本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为90%，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，加稀释剂溶解制成1ml中含10μg盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20μl，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20％～30％，取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。

结果评价：依此方法对方法进行评价和样品检测结果如下：

最相邻峰分离度	溶液稳定性(RSD%)	重复性(RSD%)	样品测定(%)
				1.2	3.3	3.1	0.18

Claims (3)

1.一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法，该方法采用高效液相色谱法，色谱柱为苯基柱，规格为250 mm×4.6 mm，5 μm；其特征在于所述高效液相色谱法的色谱条件为：流动相：A为甲醇，B为pH7.0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0→5.0min，A为80%；5.0→35.0min，A由80%变为95%；35.0→35.01min，A由95%变为80%；35.01→45.0min，A为80%；流速1.0ml/min；检测波长：225 nm；柱温为30℃；理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000；

测定方法：本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为60-90%，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，静置取上层液体滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，加稀释剂溶解制成1ml中含10μg盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20μl，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20％～30％，取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于色谱柱为Kromasil 100-5苯基色谱柱。

3.根据权利要求1或2任一项所述的测定方法，其特征在于所述稀释剂为流动相A和B混合溶液，其中A为80%。