CN101057909A - 一种具有多项保健功能的组合物及其配制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有活血化瘀、缓解体力、脑力疲劳和增强缺氧耐受力的组合物，其特征在于：它由虫草、参、茶叶和银杏叶组成，其中各组成物的重量百分比含量为：虫草5－80％，参5－80％，茶叶5－80％，银杏叶5－80％；本组合物可由富含以上活性物质的银杏叶提取物、茶叶提取物、参提取物和虫草提取物替换，其提取物的加入量为原配方中原料的加入量与此提取物提取得率的乘积；当本组合物全部由提取物组成时，其中各组成物的重量百分比含量为：虫草提取物10－60％，参提取物5－60％，茶叶提取物10－60％，银杏叶提取物5－60％。该组合物在推荐服用量下，具有显著的活血化瘀、缓解体力疲劳和增强缺氧耐受力等保健作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物及其配制方法，属于保健品的配制类。
技术背景
把用于医疗作用的中药材配伍成具有食疗作用的保健品，我国从七十年代后期开始，就已经开始尝试着这样做了，对于没有疾病但身体处于亚健康状况的人来说，是一种极大的福音，而且很受国人的欢迎，如生命一号、心源素、昂立多邦等，就是采用中药材，配制成治疗人类身体处于某种亚健康状况的保健品，盛行于市场。将医用药材开发成为人们日常能食用的保健品，其食用价值也愈来愈被国内外学者深入研究所证明。
本发明人观察到现代人在快节奏的生活、工作、学习环境中，因为生活、工作压力的不断加大，人们体质适应力下降，在上班一族中，疲劳现象普遍存在，怎样帮助这些易感疲劳的人们缓解疲劳、快速恢复体力，发明人想到了利用具有活性元素的中药用药材配伍成食用保健品的方法，可以使人们服用之后有效缓解疲劳、快速恢复体力，享受工作、生活带来的快乐。
根据疲劳现象的类型不同，发明人将疲劳分为体力型疲劳和脑力型疲劳两种。体力型疲劳多见于体力劳动者及大量运动者，在繁重的体力劳动或过强的体育运动时，此时全身肌肉处于高度紧张状态，产生大量代谢废物(如乳酸、疲劳毒素等)堆积于体内，并随血液循环到全身(包括大脑)，当过度疲劳时，表现为手脚酸软无力，全身体能明显下降。另一种疲劳，主要见于脑力劳动者，由于长时期进行复杂的脑力劳动，大量消耗能量，招致大脑血液和氧气供应不足，削弱了脑细胞的正常功能，表现为头昏脑胀，记忆力下降，注意力涣散，失眠多梦等。由此可见，在疲劳形成过程中，缺氧往往也起到重要甚至决定性作用。因此在开发缓解体力疲劳的保健品过程中，选择使用了一些活血化瘀中药材，以增强人体心脑血管功能，加快血液循环，提高人体的缺氧耐受力，开发出一种具有缓解体力疲劳和提高缺氧耐受力双重功能的保健产品。
发明内容
本发明的目的：旨在运用传统中医药食疗理论，提供一种能缓解疲劳，增强缺氧耐受力，快速恢复体能的保健产品，通过生理活性物质和抗氧化性物质的补充，调节身体各部分疲劳器官，帮助人们在体能和体质上适应当代社会生活快节奏的运转，达到抗疲劳等保健目的。
这种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物，它由中药材银杏叶、茶叶、参和虫草组成；其中银杏叶占5～80％重量份、茶叶占5～80％重量份、参占5～80％重量份、虫草占5～80％重量份。
上述组合物的主要活性物质包括：银杏叶中的银杏酮酯、茶叶中的茶多酚(或儿茶素)、参多糖和总皂苷以及虫草多糖和腺苷等，所以配方中的银杏叶、茶叶、参和虫草可以由富含以上活性物质的银杏叶提取物、茶叶提取物、人参提取物和虫草提取物替换，其提取物的加入量为原配方中原料的加入量与此提取物提取得率的乘积；当上述组合物全部用四味原料各自提取物银杏酮酯、茶多酚(或儿茶素)、参提取物(多糖、皂苷)和虫草提取物(多糖、腺苷)配制，则该组合物各组份的重量百分比含量分别是：虫草提取物10～60％，参提取物10～60％，茶叶提取物(茶多酚)5～60％，银杏提取物(银杏酮酯)5～60％。
所述的虫草是冬虫夏草、蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被毛孢和北虫草中的一种。
所述的参是指五加科植物人参、西洋参和三七中的一种。
该组合物中的提取物是由上述原料混合后经水提、醇提、或水提醇沉的提取方法获得的粗提取物，或者在上述粗提物的基础上通过溶剂萃取或上柱分离法得到的原料有效部位。
该组合物中的提取物是由上述原料单独经水、水醇混合溶液提取获得各自的提取物后混合而成。
该组合物也可以由分别从上述原料中提取的有效部位群银杏酮酯、茶多酚(或儿茶素)、参提取物(多糖、皂苷)和虫草提取物(多糖、腺苷)直接配制而成。
其最终的产品是以常规工艺制成的颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液体制剂。
其制作方法是将符合质量及规格要求的虫草、参、茶叶和银杏叶或他们的提取物按照各自的配比混合，在混合机内混合均匀后即可封装成产品。
这种组合物属纯天然中药制剂，在本产品推荐服用量下，能起到缓解体力疲劳和增强机体缺氧耐受力的保健作用。经对该保健食品功能学动物检验表明，其优点在于：疗效显著，在推荐剂量下能有效提高机体的抗疲劳能力和耐缺氧能力，具有摄食普通食物补充抗疲劳和抗氧化类物质所难以达到的效果；安全性高，按急性毒性分级标准判定，属无毒类产品，无任何副作用，不诱导細胞突变，是安全可靠的保健产品；口服制剂，生物利用度高、适应性强，容易吸收且携带、使用方便。
具体实施方式
这种组合物，由虫草、参、茶叶以及银杏叶组成，其中各组成物的重量百分数含量为：虫草粉5-80％，参粉5-80％，茶叶5-80％，银杏叶5-80％；其中的虫草、参、茶叶以及银杏叶可由富含活性物质的银杏叶提取物、茶叶提取物、人参提取物和虫草提取物替换，其提取物的加入量为原配方中原料的加入量与此提取物提取得率的乘积；本组合物也可以全部由从上述原料中提取的有效部位群银杏酮酯、茶多酚(或儿茶素)、参提取物(多糖、皂苷)和虫草提取物(多糖、腺苷)直接配制，则该组合物各组份的重量百分比含量分别是：虫草提取物10～60％，参提取物10～60％，茶叶提取物(茶多酚)5～60％，银杏提取物(银杏酮酯)5～60％。
实施例1
取银杏叶80kg、人参5kg、茶叶10kg和蝙蝠蛾被毛孢5kg，粉碎成细粉，混合均匀，灌装胶囊。
实施例2
取银杏叶40kg、三七10kg、茶叶30kg和蝙蝠蛾拟青霉20kg，粉碎成细粉，混合均匀，按常规片剂制备工艺制成片剂。
实施例3
取银杏叶10kg、西洋参80kg、茶叶5kg和冬虫夏草5kg，粉碎成细粉，混合均匀，按常规颗粒剂制备工艺制成颗粒剂。
实施例4
取银杏叶5kg、人参5kg、茶叶80kg、北虫草10kg，粉碎成粗粉，加入10倍、8倍、6倍量水分别煎煮1.5小时、1小时、1小时，过滤，取三次滤液合并，浓缩，灌装成口服液。
实施例5
取银杏叶5kg、茶叶5kg、西洋参10kg、蝙蝠蛾被毛孢80kg，单味原料分别加入10倍、8倍、6倍量煎煮1.5小时、1小时、1小时，过滤，取三次滤液合并，浓缩，干燥，单独粉碎成干浸膏粉四份，混合均匀，分装成散剂。
实施例6
取蝙蝠蛾拟青霉30kg粉碎成细粉；另取三七20kg、茶叶30kg、银杏叶20kg，分别加入6倍、4倍、3倍量60％乙醇水溶液回流提取1.5小时、1小时、1小时，过滤，取三次滤液合并，浓缩，干燥，粉碎成干浸膏粉。将蝙蝠蛾拟青霉细粉与干浸膏粉混合均匀，灌装成胶囊。
实施例7
取人参10kg、北虫草20kg碎成细粉。另取银杏叶40kg用70％乙醇水溶液提取得银杏叶提取物8.9kg；取茶叶30kg用沸水提取得茶叶提取物9.8kg，将人参粉、北虫草粉、银杏叶提取物和茶叶提取物混合均匀，灌装成胶囊。
实施例8
取银杏叶30kg。另取人参30kg沸水提取得人参提取物11.8kg；取北虫草20kg沸水提取得人参提取物5.6kg；取茶叶20kg用沸水提取得茶叶提取物7.3kg，将银杏叶粉、茶叶提取物、人参提取物和北虫草提取物混合均匀，灌装胶囊。
实施例9
取银杏提取物5kg、西洋参提取物25kg、蝙蝠蛾拟青霉提取物10kg和茶叶提取物60kg，混合均匀，按常规片剂制备工艺制成片剂。
实施例10
取银杏酮酯60kg、人参提取物10kg、北虫草提取物20kg和茶多酚10kg，混合均匀，按常规颗粒剂制备工艺制成颗粒剂。
实施例11
取银杏提取物20kg、三七提取物5kg、蝙蝠蛾被毛孢提取物60kg和茶叶提取物15kg，混合均匀，按常规粉剂制备工艺制成粉剂。
实施例12
取银杏酮酯10kg、人参提取物60kg、冬虫夏草提取物10kg和茶多酚20kg，混合均匀，溶解、过滤，分装成口服液。
以下对组合物各味原料的成份、功能作用分别作一阐述：
虫草包括天然冬虫夏草、从天然冬虫夏草中分离出来的蝙蝠蛾被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉以及从蛹虫草中分离出来的北虫草经生物发酵培养加工成虫草菌丝体或子实体。虫草的主要有效成份——虫草多糖、甘露醇、腺苷、虫草素。虫草具有调节免疫功能、抗疲劳、抗辐射、降血糖等生理功能，能有效分解肌肉中的疲劳物质，提高运动能力的作用。
参包括五加科植物人参、西洋参和三七，其主要成分为皂苷和多糖，具有抗疲劳、耐缺氧、抗衰老，集治疗和保健于一体的作用，能加强细胞代谢能力，提高机体免疫功能。
茶叶的主要功效成分为茶多酚(儿茶素)，属于黄烷醇化合物的复合体，具有很强的生理活性：抗氧化延缓衰老、抗疲劳、抗病毒、辅助抑制肿瘤、降糖降脂和减肥。
银杏叶有效成分为银杏酮酯，包括银杏黄酮苷和银杏内酯二类活性成分，具有扩张血管、促进血液循环、降血脂、抗氧化、消除自由基、抗衰老、美容、保护脑和神经组织等多种生理功能。
本组合物制造工艺方法简单，首先，将虫草和参粉碎。然后，按药材重量百分比配制，称取5～80％虫草粉，5-80％参粉，5-80％茶叶粉，5-80％银杏叶粉，放入混合器内混合均匀，灌装胶囊，包装。
其中，所述的茶叶粉料可用茶叶多酚提取物替代，所述的银杏叶粉料可用银杏叶酮酯提取物替代，所述的虫草粉料可用虫草提取物替代，所述的参粉料可用参提取物替代。
这种组合物(以下简称活力素胶囊)的质量标准和保健功能如下：
一、质量标准
活力素胶囊的质量控制项目和指标要求见表1。
表1活力素胶囊的质量控制项目和指标
| 项目 | 指标 | ||
| 腺苷 | mg/100克 | ≥ | 50 |
| 三七皂苷R1 | mg/100克 | ≥ | 150 |
| 人参皂苷Rg1 | mg/100克 | ≥ | 700 |
| 人参皂苷Rb1 | mg/100克 | ≥ | 700 |
| 净含量(60粒/瓶) | g | 18.0 | |
| 净含量(12粒×2板/盒) | g | 5.2 | |
| 净含量负偏差 | ％ | ≤ | 9.0 |
| 崩解时限 | min | ≤ | 30.0 |
| 水分 | ％ | ≤ | 8.0 |
| 灰分 | ％ | ≤ | 10.0 |
| 铅(以Pb计) | mg/kg | ≤ | 1.5 |
| 砷(以As计) | mg/kg | ≤ | 1.0 |
| 汞(以Hg计) | mg/kg | ≤ | 0.3 |
| 六六六 | mg/kg | ≤ | 0.1 |
| 滴滴涕 | mg/kg | ≤ | 0.1 |
| 菌落总数 | cfu/g | ≤ | 1000 |
| 大肠菌群 | MPN/100g | ≤ | 40 |
| 霉菌总数 | cfu/g | ≤ | 25 |
| 酵母菌总数 | cfu/g | ≤ | 25 |
| 沙门氏菌 | 不得检出 | ||
| 志贺氏菌 | 不得检出 | ||
| 溶血性链球菌 | 不得检出 | ||
| 金黄色葡萄球菌 | 不得检出 | ||
二、毒性试验
这种活力素胶囊经浙江省医学科学院进行的急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸变试验、Ames试验及大鼠30天喂养试验，其结果如下：
(一)小鼠毒性试验
1.样品性状及处理：
活力素胶囊由上海新康制药厂提供。胶囊内容物为黄褐色粉末，色泽均匀，无结块，无杂质，研磨过55目筛备用，人体推荐量为1.8g/人/天。实验时以1％羧甲基纤维素作溶媒配制成不同浓度的样品液供使用。
2.实验动物和检测条件：
实验用ICR小鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级，医学实验动物合格证号为SCXK(浙)2003-0001，医学实验动物设施合格证号为SYXK(浙)2005-0074。实验用SD大鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级，医学实验动物合格证号为SCXK(浙)2003-0001，医学实验动物设施合格证号为SYXK(浙)2005-0074。
实验动物饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14925-2001。检测环境条件，温度范围20-25℃，相对湿度范围60-70％。实验动物实验前在动物房环境中适应3天。
3.实验方法：
3.1大鼠急性经口毒性试验：
3.1.1实验动物：选用健康、成熟、体重180-220gSD大鼠20只，雌雄各半。
3.1.2剂量和给药方法：按最大耐受量试验方法设20.0g/kg体重剂量组，称取样品100g，以1％羧甲基纤维素作溶媒配制成200ml混悬液。雌雄各10只。大鼠灌肠前停食16小时，按20ml/kg体重灌胃容量分二次灌胃，间隔6小时。
3.1.3观察指标：给药后，观察大鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。
3.2小鼠急性经口毒性试验：
3.2.1实验动物：选用健康、成熟，体重18-22gICR小鼠20只，雌雄各半。
3.2.2剂量和给药方法：按最大耐受量试验方法设20.0g/kg体重剂量组，称取样品100g，以1％羧甲基纤维素作溶媒配制成200ml混悬液。雌雄各10只。大鼠灌肠前停食16小时，按20ml/kg体重灌胃容量分二次灌胃，间隔6小时。
3.2.3观察指标：给药后，观察小鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。
3.3Ames实验：
3.3.1实验菌株：选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌，共四株，即TA97a、TA98、TA100、TA102。由上海劳动卫生职业病研究所提供，经生物学鉴定合格后进行实验。
3.3.2剂量选择及阳性对照物：实验采用平板掺入法。称取样品0.50g以蒸馏水溶解至10.0ml，隔水煮沸30分钟灭菌，实验时以灭菌蒸馏水梯度稀释至各剂量。用TA100菌株的非代谢活化系统进行预实验，结果在剂量为5000μg/皿时未出现明显的增菌和抑菌现象，故正式试验时选择试验浓度为8、40、200、1000、5000μg/皿五个剂量组，外加空白对照，溶剂对照和阳性对照组(9-氨基吖2.7-二氨基芴、叠氨钠、2-乙酰氨基芴、丝裂霉素C、1.8-二羟基蒽醌)，每种菌株每个测试浓度设三皿平行，在加和不加S9条件下进行试验。重复测试一次。
3.3.3观察指标：直接计数培养基上各种菌株的回变菌落数。
3.4小鼠骨髓细胞微核试验：
3.4.1实验动物：实验用ICR小鼠由浙江省实验动物中心提供，体重25-28g。
3.4.2剂量和给药方法：小鼠随机分2.5、5.0、10.0g/kg体重三个剂量组，分别称取样品2.5、5.0、10.0g，以1％羧甲基纤维素作溶媒分别配制成20ml混悬液。一个阴性对照组(1％羧甲基纤维素)和一个阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg体重)，每组10只。雌雄各半。小鼠按20ml/kg体重灌胃容量间隔24小时灌胃2次，于第二次灌胃后6小时脱臼处死。取胸骨骨髓制成骨髓片，甲醇固定，Giemasa染色。
3.4.3观察指标：镜检时每只动物计数1000个嗜多染红细胞，计算微核千分率及PCE/RBC值。
3.5小鼠精子畸形试验：
3.5.1实验动物：实验用ICR小鼠由浙江省实验动物中心提供，体重25-30g雄性小鼠50只。
3.5.2剂量和给药方法：设样品为2.5、5.0、10.0g/kg体重三个剂量组，分别称取样品2.5、5.0、10.0g，以1％羧甲基纤维素作溶媒分别配制成40ml混悬液。一个阴性对照组(1％羧甲基纤维素)和一个阳性对照组(丝裂霉素C 1.5mg/kg体重)，每组10只。样品按20ml/kg体重灌胃容量以灌胃方式给予，连续5天，每天一次，对照组也相同处理。于首次灌胃后第35天脱臼处死。每组随机选取5只小鼠分别取两侧附睾，制成吸滤液直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1％伊红染色。
3.5.3观察指标：高倍镜下观察精子形态并计数，每只小鼠计数完整精子1000条，计算精子畸形发生率(％)。
4.实验结果：
4.1大鼠急性经口毒性试验：
大鼠死亡情况见表2。实验期间，各大鼠均未见明显症状，也无死亡。活力胶囊对雌雄大鼠经口MTD均大于20.0g/kg体重，属无毒类。
表2活力素胶囊大鼠急性毒性死亡情况
| 性别 | 死亡情况(死亡数/组鼠数) | MTD(k/kg) | |
| 大鼠 | 雌性雄性 | 0/100/10 | ＞20.0＞20.0 |
4.2小鼠急性经口毒性试验
小鼠死亡情况见表3。实验期间，各小鼠均未见明显症状，也无死亡。活力胶囊对雌雄小鼠经口MTD均大于20.0g/kg体重，属无毒类。
表3活力素胶囊小鼠急性毒性死亡情况
| 性别 | 死亡情况(死亡数/组鼠数) | MTD(k/kg) | |
| 小鼠 | 雌性雄性 | 0/100/10 | ＞20.0＞20.0 |
4.3Ames试验：
各菌株回变菌落数见表4、表5。从试验结果可见，不同浓度受试物在加和不加S9条件下的回变菌落与阴性对照组相近似，而阳性对照回变菌落数均高于阴性对照回变菌落数2倍以上。活力素胶囊Ames试验检测结果为阴性。
表4庆康牌活力素胶囊Ames平板掺入试验结果
| 受试物 | 剂量(ug/mL) | 回变菌落数(X±SD) | |||||||
| TA97a | TA98 | TA100 | TA102 | ||||||
| -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| 活力素胶囊 | 空白对照溶剂对照84020010005000 | 118.7±19.7120.3±14.6126.7±20.8127.7±10.6133.3±9.9120.3±15.9118.0±11.0 | 178.7±14.3178.0±17.1182.0±13.7174.0±6.2174.1±14.0175.0±15.1172.3±14.6 | 36.0±4.032.0±2.632.0±3.635.7±2.134.7±4.232.0±3.533.0±2.6 | 43.7±5.041.7±2.941.3±4.941.7±3.544.0±3.443.0±4.443.7±4.2 | 124.0±12.2138.7±11.4121.0±14.1127.3±13.7133.0±16.1134.7±17.2129.7+12.0 | 176.7±17.9169.0±8.9179.3±16.0171.3±18.1176.3±11.5184.0±1.08178.7+14.0 | 240.0±8.7254.0±12.2258.1±17.4258.3±25.8259.0±15.1257.7±14.6280.0+13.9 | 318.0±11.1305.0±12.1294.7±8.3302.3±15.1311.3±15.03.3.3±18.4320.0±24.2 |
| 9AA2.7AFNaN32AAFMMC1.8HAQ | 25201.5100.525 | 1340.0±192.9///// | ///1620.0±190.8// | /348.7±28.0//// | ///1213.3±166.5// | //1300.0±144.2/// | ///1340.0±211.7// | ////167303±257.9/ | /////1226.7±140.5 |
表5 庆康牌活力素胶囊Ames平板掺入试验重复试验结果
| 受试物 | 剂量(ug/mL) | 回变菌落数(X±SD) | |||||||
| TA97a | TA98 | TA100 | TA102 | ||||||
| -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| 活力素胶囊 | 空白对照溶剂对照84020010005000 | 123.7±14.0119.0±13.7116.3±7.5116.0±17.4126.0±19.1123.3±11.4128.7±15.5 | 168.0±12.5172.7±20.4168.1±17.8177.7±14.4178.7±7.6166.6±9.2169.7±14.2 | 32.0±3.531.7±2.531.3±4.232.7±4.134.0±3.631.7±2.131.7±4.0 | 44.3±4.743.7±4.942.3±2.540.3±3.244.3±2.146.7±3.245.7±4.7 | 130.0±14.4127.3±16.8135.3±7.0133.3±14.7128.0±12.0129.3±18.6142.7±18.0 | 171.3±17.2176.0±6.0193.3±16.2183.7±10.7177.3±11.7178.7±14.0178.0±11.1 | 243.3±14.2247.3±11.4245.3±7.0244.0±17.1247.3±10.1252.7±8.3272.0±18.3 | 306.3±14.5300.0±15.9309.3±13.3295.7±16.9308.0±12.0309.3±18.9332.0±12.5 |
| 9AA2.7AFNaN32AAFMMC1.8HAQ | 25201.5100.525 | 1496.7±138.7//// | ///1613.3±133.2// | /325.3±18.6//// | ///1213.3±117.2// | //1396.7±180．1// | ///1630.0±165.2// | ////1740.0±177.8/ | /////1203.3±140.1 |
9AA：9-氨基吖啶 2.7AF：2.7-二氨基芴 NaN3：叠氮钠
2AAF：2-乙酰氨基芴 MMC：丝裂霉素C 1.8HAQ：1.8二羟基葸醌
4.4小鼠骨髓细胞微核试验：
庆康牌活力素胶囊对小鼠微核率的影响见表6。用卡方检验统计，雌雄各剂量组与阴性对照组比较，微核千分率均无显著性差异，而阳性对照组微核率则明显高于阴性对照组，其差异有极显著性差异(P＜0.01)。表明庆康牌活力素胶囊对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显影响，检测结果为阴性。
表6庆康牌活力素胶囊对小鼠微核率的影响
| 性别 | 组别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 嗜多染红细胞数 | 微核细胞数 | 微核率(‰) | PCE/RBC |
| 雌 | 阴性对照活力素胶囊环磷酰胺 | 0.02.55.010.00.04 | 55555 | 50005000500050005000 | 978798 | 1.81.41.61.419.6* | 1.081.101.091.120.95 |
| 雄 | 阴性对照活力素胶囊环磷酰胺 | 0.02.55.010.00.04 | 55555 | 50005000500050005000 | 81098105 | 1.62.01.81.621.0* | 1.071.031.051.060.93 |
注：*P＜0.01(与阴性对照组比)
4.5小鼠精子畸形试验：
庆康牌活力素胶囊对小鼠畸形发生率的影响见表7。各剂量组与阴性对照组比较，小鼠精子畸形发生率无显著性差异，而阳性对照组则明显高于阴性对照组，其差别有极显著性差异(P＜0.01)，表明庆康牌活力素胶囊对小鼠精子畸形发生率未见明显影响，检测结果为阴性。
表7庆康牌活力素胶囊对小鼠精子畸形发生率的影响
| 组别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 观察精子数 | 畸形精子数 | 小计 | 畸变率(％) | ||||||
| 无定形 | 无钩 | 折叠 | 胖头 | 香蕉 | 双头 | 双尾 | ||||||
| 活力素胶囊MMC | 0.02.55.010.00.0015 | 55555 | 50005000500050005000 | 86848381252 | 743327 | ///// | 1///18 | ////5 | ///2 | ///// | 94888684304 | 1.881.761.721.686.08* |
注：MMC丝裂霉素C *P＜0.01(与阴性对照组比)
5小结：
庆康牌活力素胶囊食品安全性毒理学评价试验：第一阶段大、小鼠经口急性毒性最大耐受量(MTD)，雌雄两性别均大于20.0g/kg体重，按急性毒性分级标准判定，该样品属无毒类；第二阶段Ames试验结果为阴性，小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验结果均为阴性。提示在本次实验条件下，该样品未显示有突变性。
(二)对大鼠的毒性试验
1.实验试验目的：了解短期经口接触受试物对大鼠的毒性作用。
2.材料与方法
2.1受试物 活力素胶囊由上海新康制药厂提供，胶囊内容物为黄褐色粉末状，色泽均匀、无结块、无杂质。人体推荐量为1.8g/人/天。
2.2试验动物 浙江省实验动物中心提供的清洁级健康、断乳、体重70-90g的SD大鼠80只，雌雄各半。医学试验动物合格证号SCXK(浙)2003-0001，医学实验动物设施环境合格证号SYXK(浙)2005-0074。
2.3动物饲养环境 室温20～25℃，相对湿度60～70％，单笼饲养。
2.4基础饲料 由浙江省实验动物中心提供。
2.5试验方法
2.5.1给受试物方式 按不同剂量要求拌入饲料，自由进食。
2.5.2剂量设计 设以人体推荐量的25、50、100倍为低、中、高三个剂量组，即活力素胶囊0.75、1.5、3.0g/kg体重三个剂量组，另设一个阴性对照组。
2.5.3操作步骤
2.5.3.1样品配制
0.75g/kg体重组：90g样品掺入到11910g基础饲料混匀，饲料总量12000g；1.5g/kg体重组：180g样品掺入到11820g基础饲料混匀，饲料总重12000g；3.0g/kg体重组：360g样品掺入到11640g基础饲料混匀，饲料总量12000g。
2.5.3.2动物分组与测试指标
实验大鼠按体重随机分成4组，每组20只，雌雄各半。实验大鼠自由进食、饮水，观察并记录动物的一般表现、行为、中毒症状和死亡情况。每周记录体重和进食并计算食物利用率。实验期末禁食过夜，摘取眼球取血，断头处死，对每只大鼠进行脏器大体观察，并取肝脏、肾脏、脾脏、睾丸称重及计算脏体比，同时进行血象、血生化检查，留取肝脏、肾脏、脾脏、胃、十二指肠、睾丸及卵巢进行病理组织学观察。血象采用Abacus全自动血液分析仪进行测定。血生化检查取血清用Liasys全自动生化分析仪进行测定。脏器石蜡切片，H-E染色。
2.6数据处理 计算各个观察指标的平均数和标准差，并进行t检验。
3.实验结果
3.1一般观察：实验期间，各剂量组实验大鼠未见异常症状和体征，也无死亡。
3.2活力素胶囊对试验大鼠体重的影响：结果见表8。
各剂量组雌性和雄性大鼠的体重增长情况良好，与阴性对照组比，均无显著性差异。
表8 活力素胶囊对大鼠体重的影响
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 始重(g) | 第一周(g) | 第二周(g) | 第三周(g) | 第四周(g) |
| 雌性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 76.1±5.276.1±4.875.9±6.276.3±4.2 | 119.7±6.2118.2±7.4118.3±4.3119.7±6.7 | 151.9±13.1151.3±11.0152.8±5.8153.2±7.5 | 177.8±12.7177.8±11.1176.3±8.0176.7±11.1 | 198.0±17.7200.8±12.3197.8±11.0198.5±12.9 |
| 雄性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 75.4±5.475.4±4.975.4±5.875.6±4.6 | 126.5±9.2124.2±6.8123.3±5.3124.5±6.6 | 182.2±13.6179.9±11.9177.8±5.5176.5±8.7 | 235.4±14.3231.5±14.1227.5±13.2225.1±11.8 | 280.0±15.8276.4±14.8277.0±15.5274.8±16.1 |
3.3活力素胶囊对大鼠的增重、进食量及食物利用率的影响：结果见表9、表10，各剂量组雌性和雄性实验大鼠的增重、进食量及食物利用率与阴性对照相近，与阴性对照组比较均无显著性差异。
表9活力素胶囊对大鼠的增重、进食量及食物利用率的影响
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 增重(g) | 进食量(g) | 食物利用率(％) |
| 雌性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 121.9±14.4124.7±10.3121.9±14.7122.2±12.5 | 512.0±22.6520.2±16.0518.1±18.5513.4±22.4 | 23.75±1.8923.94±1.4323.50±2.4823.77±1.82 |
| 雄性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 208.6±14.0201.0±12.4201.6±14.0199.2±12.6 | 633.6±26.8629.2±26.4631.9±24.5613.3±33.9 | 32.3±1.9231.93±1.0831.87±1.1732.49±1.44 |
表10活力素胶囊对大鼠每周进食量(g)、食物利用率(g)的影响
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 第一周 | 第二周 | ||
| 进食量 | 利用率 | 进食量 | 利用率 | |||
| 雌性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 104.7±5.3104.5±4.2106.2±5.4105.4±6.6 | 41.57±2.7240.24±2.8339.83±2.9541.09±2.84 | 129.4±7.5130.1±6.4135.5±3.2130.8±5.7 | 24.69±4.4725.32±2.9925.41±4.9025.57±3.35 |
| 雄性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 112.9±8.1111.1±5.0108.5±6.1108.0±6.6 | 45.20±2.2343.93±1.8944.24±3.1045.33±1.51 | 147.5±10.7146.3±7.1149.2±5.0143.8±8.6 | 37.73±2.0537.98±2.7636.52±1.4436.20±1.63 |
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 第三周 | 第四周 | ||
| 进食量 | 利用率 | 进食量 | 利用率 | |||
| 雌性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 138.5±5.6139.3±6.0137.0±9.6137.1±9.4 | 18.64±2.1218.93±3.6416.97±3.5117.00±2.98 | 139.4±12.0146.3±5.9139.4±8.5140.1±10.1 | 14.22±3.6915.68±2.2115.32±3.9115.41±4.88 |
| 雄性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 174.3±8.9174.8±9.2175.9±10.4168.4±10.2 | 30.53±3.3729.49±1.5628.13±3.8128.86±1.55 | 198.9±8.1197.0±8.8198.3±7.4193.1±9.8 | 22.31±5.1422.77±3.3724.92±1.8425.76±2.71 |
3.4活力素胶囊对实验大鼠血象的影响：结果见表11。
雌性和雄性试验大鼠各剂量组的血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类均在正常范围。活力素胶囊对实验大鼠血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类未见明显影响。
表11活力素胶囊对大鼠血象的影响
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 血红蛋白(g/L) | 红细胞(×1012/L) | 红细胞(×109/L) | 白细胞分类(％) | ||
| 淋巴 | 中性 | 其它 | ||||||
| 雌性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 165.90±8.92169.90±3.48166.80±6.36169.80±4.85 | 7.97±0.418.38±0.518.19±0.617.78±0.45 | 9.80±2.009.28±2.838.08±2.558.84±0.84 | 71.6077.6975.1077.30 | 21.2516.2419.0616.59 | 7.076.065.836.10 |
| 雄性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 167.40±7.44172.10±6.57171.60±4.50173.30±7.23 | 8.77±0.639.08±0.429.22±0.389.23±0.55 | 12.79±1.8813.70±2.3913.98±1.2613.34±2.67 | 75.2880.6382.6278.42 | 18.9915.0213.9316.99 | 5.744.373.444.58 |
3.5活力素胶囊对实验大鼠血生化的影响：结果见表12、表13。
对照组与各剂量组雌性和雄性实验大鼠的血液生化指标均在正常范围。活力素胶囊对实验大鼠血生化未见明显影响。
表12活力素胶囊对大鼠血生化的影响(1)
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | ALT(IU/L) | AST(IU/L) | TP(g/L) | ALB(g/L) | Chol(mmol/L) |
| 雌性 | 00.751.53 | 10101010 | 65.25±16.6060.77±14.1766.42±12.6663.01±6.64 | 172.32±34.00152.76±17.06190.32±21.99170.99±34.33 | 61.63±2.7063.16±2.1662.83±3.3863.37±2.03 | 34.70±1.2035.21±1.3635.91±1.5336.28±0.67 | 2.09±0.132.03±0.212.11±0.232.26±0.26 |
| 雄性 | 00.751.53 | 10101010 | 78.81±10.1379.28±14.4374.40±10.0783.75±10.54 | 185.00±14.67191.66±27.57187.76±21.70183.52±21.01 | 59.39±3.8059.36±1.8259.22±2.2060.87±2.11 | 33.08±1.4333.25±0.4633.37±1.1533.78±1.11 | 1.89±0.191.89±0.221.97±0.251.94±0.34 |
表13活力素胶囊对大鼠血生化的影响(2)
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | TG(mmol/L) | Glu(mmol/L) | Urea(mmol/L) | Cr(mmol/L) |
| 雌性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 0.81±0.150.86±0.150.82±0.170.80±0.21 | 5.60±0.405.79±0.635.19±0.455.43±0.66 | 7.30±1.167.14±1.178.11±1.497.22±1.07 | 51.10±2.5651.70±3.5051.60±5.4648.00±3.37 |
| 雄性 | 0.00.751.53.0 | 10101010 | 0.76±0.120.61±0.160.61±0.200.59±0.17 | 5.27±0.545.33±0.485.14±0.495.22±0.45 | 6.93±1.447.34±1.737.35±0.967.76±1.73 | 44.10±4.9542.50±3.4746.20±5.5344.70±4.52 |
3.6活力素胶囊对实验大鼠脏体比的影响：结果见表14、表15。
剂量组雌性和雄性实验大鼠的脏体比与阴性对照组相近，无明显差异，说明活力素胶囊对实验大鼠的脏体比无明显影响。
表14活力素胶囊对大鼠脏体比的影响
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 肝脏(g) | 肝体比(％) | 肾脏(g) | 肾体比(％) |
| 雌性 | 00.751.53 | 10101010 | 6.52±0.616.61±0.356.60±0.476.42±0.46 | 3.30±0.173.30±0.153.34±0.123.24±0.19 | 1.59±0.131.64±0.141.63±0.161.64±0.12 | 0.80±0.030.82±0.050.82±0.050.83±0.07 |
| 雄性 | 00.751.53 | 10101010 | 9.45±0.719.21±0.679.41±0.389.23±0.51 | 3.38±0.263.33±0.143.40±0.113.36±0.13 | 2.35±0.192.26±0.152.28±0.252.25±0.19 | 0.84±0.090.82±0.040.82±0.060.82±0.07 |
表15活力素胶囊对大鼠脏体比的影响
| 性别 | 剂量(g/kg) | 鼠数 | 脾脏(g) | 脾体比(％) | 睾丸(g) | 睾体比(％) |
| 雌性 | 00.751.53 | 10101010 | 0.46+0.090.45+0.080.42+0.060.47+0.07 | 0.23+0.040.22+0.030.21+0.030.24+0.05 | ---- | ---- |
| 雄性 | 00.751.53 | 10101010 | 0.63+0.130.65+0.100.61+0.080.65+0.12 | 0.23+0.050.23+0.030.22+0.020.24+0.04 | 2.58+0.252.46+0.162.47+0.122.57+0.18 | 0.92+0.080.89+0.040.89+0.050.93+0.06 |
3.7病理组织学观察结果：
实验大鼠大体解剖观察结果均未见异常改变。病理切片镜检发现对照组有3只、高剂量组有2只大鼠肝脏局部肝血窦和/或肝中央静脉轻度充血；对照组有4只、高剂量组有6只大鼠肾脏个别肾间质毛细血管轻度充血；脾脏、卵巢、睾丸、胃、肠均未见异常改变。以上变化对照组与高剂量组比较无生物学意义。活力素胶囊对实验大鼠大体解剖、组织学观察结果未见明显影响。
4.结论
活力素胶囊的大鼠30天喂养实验，未见实验动物出现中毒症状，大体解剖及组织学观察也未见异常病理改变，对大鼠体重、进食量、食物利用率、血象、血生化均无明显影响。本次实验活力素胶囊的大鼠30天喂养实验未观察到有害作用，剂量为3.0g/kg体重。
三、活力素胶囊提高缺氧耐受力功能试验报告
1.材料与方法
1.1样品：活力素胶囊由上海新康制药厂提供，胶囊内容物为黄褐色粉末状，色泽均匀、无结块、无杂质。规格为300mg/粒。人体推荐摄入量为6粒/日，即0.03g/kg BW/d(成人体重以60kg计)。以胶囊内容物为受试样品，用蒸馏水配制成所需浓度的灌胃液。
1.2动物及分组：雄性ICR小鼠120只，清洁级，体重18-22个，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。生产许可证号：SCXK(沪)2003-0003；使用许可证号：SYXK(苏)2002-0130。按体重将动物随机分为12组，每4组用于一项指标的试验，即正常对照组灌胃给予蒸馏水和三个剂量组分别灌胃给予活力素胶囊内容物0.15g/kg BW/d、0.30g/kgBW/d、0.60g/kg BW/d(分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍和20倍)。所有试验动物均食用全价营养配合饲料，饲料来源：江浦振兴试验动物饲料厂，苏动(饲)字第95001号。动物自由摄食、摄水。
1.3器材与试剂：电子天平、250ml磨口瓶、1ml注射器、剪刀、秒表、凡士林、钠石灰和亚硝酸钠。
1.4方法：按中华人民共和国卫生部《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》，提高缺氧耐受力功能检验方法中常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验和急性脑缺血性缺氧实验的规定方法执行。灌胃容量20ml/kg BW/d，每天1次，连续30天。
1.4.1常压耐缺氧实验：于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250ml磨口瓶内(每瓶1只)，用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。
1.4.2亚硝酸钠中毒存活实验：于末次灌胃后1小时，各组动物按220mg/kg BW剂量腹腔注射亚硝酸钠(注射量为10ml/kg BW)，立即计时，记录动物存活时间。
1.4.3急性脑缺血性缺氧实验：于末次灌胃后1小时，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。
1.5数据统计处理方法：实验所得数据用SAS统计软件包中的单因素方差分析进行各实验组间的比较，用Dunnett′s t检验进行各试验组与对照组的比较。
2结果
2.1体重：各组小鼠试验起始(0d)、试验中期(15d)、试验结束(30d)时的体重见表16、表17、表18。经单因素方并有分析表明，各剂量组与对照组间的并有异均无显著意义(p)0.05)，未见活力素胶囊内容物对试验动物体重有影响。
表16各试验组小鼠的初始体重(均值±标准差)
| 组别 | 常压耐缺氧组 | 亚硝酸钠中毒组 | 急性脑缺血性缺氧组 | |||
| 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 20.0±1.119.9±1.120.0±1.119.9±1.0 | 10101010 | 20.0±1.119.8±1.219.9±1.220.0±1.2 | 10101010 | 19.9±1.219.9±0.920.0±1.219.8±1.1 |
表17试验中期各试验组小鼠体重(均值±标准差)
| 组别 | 常压耐缺氧组 | 亚硝酸钠中毒组 | 急性脑缺血性缺氧组 | |||
| 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 33.3±1.533.3±1.433.5±1.733.6±1.4 | 10101010 | 33.8±1.133.3±1.833.9±1.733.5±1.6 | 10101010 | 33.9±1.333.9±1.334.0±1.334.2±1.3 |
表18试验末期各试验组小鼠体重(均值±标准差)
| 组别 | 常压耐缺氧组 | 亚硝酸钠中毒组 | 急性脑缺血性缺氧组 | |||
| 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | |
| 正常对照组 | 10 | 37.7±1.2 | 10 | 38.0±1.7 | 10 | 37.8±1.9 |
| 低剂量组中剂量组高剂量组 | 101010 | 37.3±2.138.1±2.037.9±1.7 | 101010 | 38.2±1.638.6±2.138.3±1.6 | 101010 | 38.1±1.238.2±1.838.5±1.5 |
2.2小鼠常压耐缺氧实验：结果见表19。经单因素方差分析，各组常压耐缺氧时间均值的差异显著(F＝3.07，P＜0.05)。经Dunnett′s t试验，活力素胶囊内容物高剂量组常压耐缺氧时间的均值与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。说明活力素胶囊内容物在0.60g/kg BW/d(相当于人体摄入量的20倍)的剂量时，具有延长常压缺氧小鼠存活时间的作用。
表19活力素胶囊内容物对常压缺氧小鼠存活时间的影响(均值±标准差)
| 组别 | 动物数(只) | 存活时间(min)a |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 24.19±3.6327.31±2.128.88±2.0*29.22±1.7* |
a各试验组间单因素方差分析，F＝3.07，P＜0.05
*与正常对照组比较差异有显著性，，P＜0.05
2.3亚硝酸钠中毒存活实验：结果见表20
表20活力素胶囊内容物对亚硝酸钠中毒小鼠存活时间的影响(均值±标准差)
| 组别 | 动物数(只) | 存活时间(min)a |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 21.83±3.1023.25±3.6126.80±3.74*29.41±4.86* |
a各试验组间单因素方差分析，F＝7.83，P＜0.01
*与正常对照组比较差异有显著性，P＜0.05
经单因素方差分析，各组亚硝酸钠中毒存活时间均值的差异显著(F＝7.83，，P＜0.01)。经Dunnett′s t检验，活力素胶囊内容物中、高两个剂量组亚硝酸钠中毒存活时间的均值与正常对照组比较差异显著(P＜0.05)。说明活力互胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，具有延长亚硝酸钠中毒小鼠存活时间的作用。
2.4急性脑缺血性缺氧实验：结果见表21。经单因素方差分析，各组急性脑缺血性缺氧喘气时间均值的差异显著(F＝3.06 P＜0.05)。经Dunnett′s t检验，活力素胶囊内容物高剂量组急性脑缺血性缺氧喘气时间的均值与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。说明活力素胶囊内容物在0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的20倍)的剂量时，具有延长急性脑缺血性缺氧小鼠喘气时间的作用。
表21活力素胶囊内容物对急性脑缺血性缺氧小鼠喘气时间的影响(均值±标准差)
| 组别 | 动物数(只) | 存活时间(min)a |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 21.1±3.022.0±2.422.4±3.024.6±2.3* |
a各试验组间单因素方差分析，F＝3.06，P＜0.05
*与正常对照组比较差异有显著性，P＜0.05
3结论
3.1经灌胃给予小鼠0.15g/kg BW/d、0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d活力素胶囊内容物(相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍)时，对实验小鼠的体重未见明显影响。
3.2小鼠常压耐缺氧实验结果表明，活力素胶囊内容物在0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的20倍)的剂量时，具有延长常压缺氧小鼠存活时间的作用。
3.3亚硝酸钠中毒存活实验结果表明，活力素胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kgBW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，具有延长亚硝酸钠中毒小鼠存活时间的作用。
3.4急性脑缺血性缺氧实验结果表明，所试活力素胶囊内容物在0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的20倍)的剂量时，具有延长急性脑缺血性缺氧小鼠喘气时间的作用。
根据《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》中“提高缺氧耐受力功能检验方法”的判定标准，上海新康制药厂送检的活力素胶囊，具有提高缺氧耐受力功能的作用。
四、活力素胶囊缓解体力疲劳功能试验报告
1材料与方法
1.1样品：上海新康制药厂送检的活力素胶囊，内容物为黄褐色粉末，规格为300mg/粒。人体推荐摄入量为6粒/日，即0.03g/kg BW/d(成人体重以60kg计)。以胶囊内容物为受试样品，用蒸馏水配制成所需浓度的灌胃液。
1.2动物及分组：雄性ICR小鼠共160只，清洁级体重18～22g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。生产许可证号：SCXK(沪)2003-0003；使用许可证号：SYXK(苏)2002-0130，按体重将动物随机分为16组，每4组用于一项指标的试验，即正常对照组灌胃给予蒸馏水和三个剂量组分别灌胃给予活力素胶囊内容物0.15g/kg BW/d、0.30g/kgBW/d、0。60g/kg BW/d(分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍和20倍)。所有试验动物均食用全价营养配合饲料，饮料来源：江浦振兴试验动物饲料厂，苏动(饲)字第95001号，动物自由摄食、摄水。
1.3仪器与试剂
1.3.1仪器：游泳箱(50cm×50cm×40cm)、722型分光光度计、水浴锅、J9-2II型秒表、SL-1001型电子称。
1.3.2试剂：血清尿素测定试剂盒、肝糖原测定试剂盒、全血乳酸测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，生产批号分别为20060208、20060205和20060214。
1.4方法按中华人民共和国卫生部《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》，缓解体力疲劳功能检验方法中负重游泳试验、血清尿素测定(二乙酰-肟法)、肝糖原测定(蒽酮法)和血乳酸测定的规定方法执行。灌胃容量20ml/kg BW/d。第天1次，连续30天。
1.4.1负重游泳试验：末次给予受试物30min后，置小鼠在游泳箱中游泳，水深30cm，水温25℃±0℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠自游泳开始至死亡时间，作为小鼠游泳时刻。
1.4.2血清尿素测定(二乙酰-肟法)：末次给受试物30min后，在温度为30℃±0℃的水中不负重游泳90min，休息60min后，摘眼球采血0.5ml(不加抗凝剂)。待血液凝固后离心取血清，用南京建成生物工程研究所生产的尿素测定试剂盒进行测定。
1.4.3肝糖原测定(蒽酮法)：末次给样30min后处死动物，取肝脏，按南京建成生物工程研究所生产的试剂盒说明书进行肝糖原的测定。
1.4.4血乳酸测定：末次给予动物样品30min后用毛细玻璃管眼球内眦静脉采血20μl，用南京建成生物工程研究所生产的全血乳酸测定试剂盒进行乳酸含量的测定。动物采血后不负重在温度为30℃±0℃的水中游泳10min后停止，立即采血20μl测定血乳酸，休息20min后再各采血20μl进行血乳酸测定。
1.5数据统计处理方法：实验所得数据用SAS统计软件包中的单因素方差分析进行各实验组间的比较，用Dunnett′s t检验进行各试验组与对照组的比较。
2结果
2.1体重：各组小鼠试验起始、试验中期(15d)、试验结束(30d)时的体重见表22、表23、表24。经单因素方差分析表明，各剂量组与对照组间的差异均无显著差异(P＞0.05)，未见活力素胶囊内容物对试验动物体重有影响。
表22各试验组小鼠的初始体重(均值±标准差)
| 组别 | 游泳组 | 尿素组 | 肝糖原组 | 血乳酸组 | ||||
| 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 19.9±1.120.2±1.020.1±1.320.1±1.0 | 10101010 | 20.0±1.119.8±1.220.1±1.220.0±1.1 | 10101010 | 20.0±1.120.1±1.220.2±1.120.2±1.3 | 10101010 | 19.9±1.220.0±1.119.9±1.219.8±1.1 |
表23试验中期各试验组小鼠体重(均值±标准差)
| 组别 | 游泳组 | 尿素组 | 肝糖原组 | 血乳酸组 | ||||
| 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 33.8±1.533.9±1.534.1±1.434.1±0.9 | 10101010 | 33.4±1.833.2±1.433.8±1.932.7±2.0 | 10101010 | 33.4±1.032.8±1.233.5±1.833.2±1.7 | 10101010 | 33.5±1.634.0±2.033.6±1.333.8±1.2 |
表24试验未期各试验组小鼠体重(均值±标准差)
| 组别 | 游泳组 | 尿素组 | 肝糖原组 | 血乳酸组 | ||||
| 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | 动物数(只) | 体重(g) | |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 38.1±2.138.7±2.238.2±1.838.2±1.8 | 10101010 | 38.3±1.938.2±1.938.3±2.638.0±2.4 | 10101010 | 38.5±1.738.1±2.238.9±2.339.2±1.9 | 10101010 | 38.1±2.438.9±2.438.6±1.538.6±2.0 |
均值的差异2.2小鼠负重游泳试验：结果见表25，经单因素方差分析各组负重游泳时间有显著性(F＝12.56，P＜0.01)。经Dunnett′s t检验，活力素胶囊内容物中、高剂量组负重游泳时间的均值与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。说明活力素胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，具有延长小鼠负重游泳时间的作用。
表25活力素胶囊内容物对小鼠负重游泳时间的影响
| 组别 | 动物数(只) | 负重游泳时间(min)a |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 4.73±1.135.41±1.057.68±1.44*7.65±1.72* |
a各试验组间单因素方差分析，F＝12.56，P＜0.01
*与正常对照组比较差异有显著性，P＜0.05
2.3血清尿素测定：各组动物血清尿素测定结果见表26，经单因素方差分析各组血清尿素均值的差异有显著性(F＝8.60，P＜0.01)。经Dunnett′s t检验，活力素胶囊内容物中、高剂量组尿素均值差异有显著性(P＜0.05)。说明活力素胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，可减少运动后小鼠血清尿素的产生。
表26活力素胶囊内容物对运动后小鼠血清尿素的影响(均值±标准差)
| 组别 | 动物数(只) | 血清尿素(mmol/L)a |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 10.19±1.029.47±1.018.56±1.16*8.01±0.96* |
a各试验组间单因素方差分析，F＝8.60，P＜0.01
*与正常对照组比较差异有显著性，P＜0.05
2.4肝糖原测定 测定结果见表27，经单因素方差分析，各组动物肝糖原均值的差异显著(F＝14.44，P＜0.01)。经Dunnett′s t检验，活力素胶囊内容物中、高剂量组肝糖原均值与正常对照比较差异显著(P＜0.05)。说明活力素胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kgBW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，具有增加小鼠糖原储备或减少糖原消耗的作用。
表27活力素胶囊内容物对小鼠肝糖原的影响(均值±标准差)
| 组别 | 动物数(只) | 肝糖原(mg/g肝组织)a |
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 6.91±0.967.27±0.848.56±1.05*9.60±1.22* |
a各试验组间单因素方差分析，F＝14.44，P＜0.01
*与正常对照组比较差异有显著性，P＜0.05
2.5血乳酸测定 各组小鼠安静时、游泳后即刻血乳酸水平、休息后血乳酸水平及血乳酸曲线下面积见表28。经单因素方差分析，各组小鼠血乳酸曲线下面积的均值无显著性差异(F＝0.42，P＞0.05)。说明活力素胶囊内容物在0.15g/kg BW/d、0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍)的剂量时，对运动后小鼠血乳酸的产生未见明显影响。
表28活力素胶囊内容物对小鼠游泳前后血乳酸水平及
曲线下面积的影响(均值±标准差)
| 组别 | 动物数(只) | 血乳酸变化 | |||
| A(mmol/L) | B(mmol/L) | C(mmol/L) | 曲线下面积a | ||
| 正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 10101010 | 4.52±0.424.45±0.444.51±0.364.52±0.43 | 6.97±0.456.76±0.476.77±0.506.65±0.72 | 5.40±0.425.38±0.585.21±0.485.19±0.56 | 184.2±11.1177.5±14.1176.2±13.5174.2±18.0 |
A游泳前的血乳酸；B游泳后即刻血乳酸；C游泳后休息20min的血乳酸
a各试验组间单因素方差分析，F＝0.42，P＞0.05
3结论
3.1经灌胃给予小鼠0.15g/kg BW/d、0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d活力素胶囊内容物(相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍)时，对实验小鼠的体重未见明显影响。
3.2小鼠负重游泳试验结果表明，活力素胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，具有延长小鼠负重游泳时间的作用。
3.3血清尿素测定结果表明，所试活力素胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，可减少运动后小鼠血清尿素的产生。
3.4肝糖原测定结果表明，所试活力素胶囊内容物在0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的10倍、20倍)的剂量时，具有增加小鼠糖原储备或减少糖原消耗的作用。
3.5血乳酸测定结果表明，活力素胶囊内容物在0.15g/kg BW/d、0.30g/kg BW/d和0.60g/kg BW/d(相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍)的剂量时，对运动后小鼠血乳酸的产生未见明显影响。
根据《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》中“缓解体力疲劳功能检验方法”的判定标准，上海新康制药厂送检的活力素胶囊，具有缓解体力疲劳功能的作用。
五、活血化瘀作用的研究
1材料与方法
1.1样品：上海新康制药厂送检的活力素胶囊，内容物为黄褐色粉末，规格为300mg/粒。人体推荐摄入量为6粒/日，即0.03g/kg BW/d(成人体重以60kg计)。以胶囊内容物为受试样品，用蒸馏水配制成所需浓度的灌胃液。
1.2动物及分组：大白鼠共50只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。生产许可证号：SCXK(沪)2003-0003；按体重将动物随机分为5组，正常对照组灌胃给予蒸馏水和三个剂量组分别灌胃给予活力素胶囊内容物0.15g/kg BW/d、0.30g/kg BW/d、0.60g/kg BW/d(分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍和20倍)。所有试验动物均食用全价营养配合饲料，动物自由摄食、摄水。
1.3模型确立：大鼠用25％乌拉坦麻醉，打开腹腔分离出下腔静脉并结扎，关腹。2h后重新打开腹腔，在距结扎处2cm剪下下腔静脉，倾出血栓。
1.4实验结果：实验结果见表29，结果表明活力素胶囊具有抑制血栓形成功能，即具有活血作用。
表29活力素胶囊对模型大鼠静脉血栓形成的影响
| 组别 | 剂量(g提取物kg-1) | 动物数(n) | 血栓湿重(x±s，mg) | 血栓干重(x±s，mg) |
| 空白对照活力素大剂量活力素中剂量活力素小剂量阿司斯匹林 | 00.60.30.150.30 | 1010101010 | 18.0±3.695.6±2.52**8.8±3.34**9.9±4.81**5.0±2.81** | 6.0±2.101.8±1.04**2.8±1.29**3.3±1.66**1.9±0.77** |
注：与空白对照组比较，*表示p＜0.05，**表示p＜0.01
Claims (12)
1、一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物及其制作方法，其特征在于：它的原料为银杏叶、茶叶、参和虫草，其中银杏叶占5～80％重量份、茶叶占5～80％重量份、参占5～80％重量份、虫草占5～80％重量份。
2、如权利要求1所述的一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物，其特征在于：所述的部分原料由银杏叶、茶叶、参和虫草的提取物替换，其用量为原料用量与提取物提取得率之积。
3、如权利要求1所述的一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物，其特征在于：所述的原料全部由银杏叶、茶叶、参和虫草的提取物替换，则各提取物组份的重量百分比含量分别是：虫草提取物10～60％，参提取物5～60％，茶叶提取物10～60％，银杏提取物5～60％。
4、如权利要求3所述的一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物，其特征在于：所述的提取物是由上述原料混合后经水提、醇提、或水提醇沉的提取方法获得的粗提取物，或者在上述粗提物的基础上通过溶剂萃取或上柱分离法得到的原料有效部位。
5、如权利要求4所述该组合物中的粗提物为水提取物、水醇提取物或水提醇沉提取物中的一种。
6、如权利要求4所述该组合物中的有效部位群为虫草多糖、参多糖、参总皂苷、茶多酚(儿茶素)、银杏酮酯。
7、如权利要求1所述的一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物，其特征在于：所述的虫草是蝙蝠蛾拟青霉、蝙蝠蛾被毛孢和北虫草中的一种。
8、如权利要求1所述的一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物，其特征在于：所述的参是指五加科植物人参、西洋参和三七中的一种。
9、如权利要求1所述的一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的组合物，其特征在于：该组合物的制备工艺为：将各味原料粉碎，称量配料，提取，浓缩，干燥，提取物粉碎，总混，分装胶囊。
10、如权利要求9所述的该组合物为四味原料合并后提取得到混合提取物。
11、如权利要求9所述的该组合物为四味原料分别提取得到的提取物总混而成。
12、如权利要求1所述的一种具有活血化瘀、抗疲劳和耐缺氧功能的活力素胶囊，其特征在于：其最终的产品是以常规工艺制成的颗粒剂、片剂、胶囊剂、粉剂或口服液。
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Granted publication date: 20101215 Termination date: 20171205 |
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