CN101043883A - (z)－2－氰基－3－羟基－丁－2－烯酸－(4'－三氟甲基苯基)－酰胺用于治疗炎症性肠病的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及式(I)化合物用于治疗患有炎症性肠病、包括克罗恩氏病和溃疡性结肠炎的患者的症状的用途。

Description

(Z)－2－氰基－3－羟基－丁－2－烯酸－(4'－三氟甲基苯基)－酰胺用于治疗炎症性肠病的用途

发明领域

本发明涉及治疗炎症性肠病的方法。尤其是，本发明涉及用(Z)-2-氰基-3-羟基-丁-2-烯酸-(4’-三氟甲基苯基)-酰胺(通常称为特立氟胺)治疗炎症性肠病。

背景技术

(Z)-2-氰基-3-羟基-丁-2-烯酸-(4’-三氟甲基苯基)-酰胺(特立氟胺)具有式I所示的结构：

                            式I

它是改善病情的抗风湿药5-甲基异唑-4-甲酸-(4-三氟甲基)-酰苯胺(通常称为来氟洛米)的一种活性代谢产物。来氟洛米的结构如式II所示。来氟洛米最初以通式的形式公开于1978年5月2日授权的美国第4,087,535号专利中，然后在1981年8月18日授权的美国第4,284,786号专利中具体公开，其中公开了该化合物可用于多发性硬化症的治疗。此外，还描述了在少数硫唑嘌呤耐受不良的患者中成功地将来氟洛米用于治疗克罗恩氏病(Prajapati，D.N.，等人，2001，American Journal of Gastroenterology，96(9)：S305)。本文引用上述两项专利的全文作为参考。

                            式II

在1990年10月23授权的美国第4,965,276号专利中，公开了(Z)-2-氰基-3-羟基-丁-2-烯酸-(4’-三氟甲基苯基)-酰胺(特立氟胺，式I)用于治疗慢性移植物抗宿主疾病的用途。在1997年10月21授权的美国第5,459,163号专利和1997年10月21授权的美国第5,679,709号专利中，公开了用于治疗自体免疫疾病、尤其是红斑狼疮的组合物。本文引用上述两项专利的全文作为参考。特立氟胺显示出在各种各样的免疫细胞和细胞系中可产生抗增殖作用(Cherwinski H.M.，等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.1995；272：460-8；Prakash A.，等人，Drugs 1999；58(6)：1137-66；Bartlett R.R.等人，Agent Action 1991；32(1-2)：10-21)，以及在炎症动物模型中产生抗炎作用(Huang，W-H.等人，Chem.Pharm.Bull.，2003，51(3)：313-314和2004年4月6日授权的美国第6,716,411号专利)。此外，它还抑制二氢乳清酸脱氢酶，该酶是合成嘧啶时必不可少的酶(Bruneau J-M，等人，Biochem.J.1998；36：299-303)。

炎症性肠病(IBD)是用于区分某些病因未知、以胃肠道各部分慢性炎症为特征的一系列相关肠病的总称。代表性的IBD有克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、未确定型结肠炎，以及感染性结肠炎。

克罗恩氏病是一种病因未知的自发性慢性肠炎。这种疾病在20多岁的青年男女中发病最为频繁并会转变为慢性病。它是一种带有纤维变性或溃疡的肉芽肿病变，并可存在于从口腔到肛门的整个消化道内。克罗恩氏病的临床症状是腹痛、一般性不适、腹泻、黑粪症以及潜隐性出血阳性、发烧、体重减轻、贫血、肠梗阻、腹部肿瘤以及腹膜炎。

溃疡性结肠炎是一种病因未知的弥散性非特异性结肠炎症疾病，它攻击粘膜并往往形成糜烂或溃疡。该病变主要在粘膜下发生。此疾病的临床症状是粘状便血、腹痛、便血、水样便、发烧、食欲不振、恶心和呕吐。而且，溃疡性结肠炎可能会伴有关节炎、大肠狭窄和大量出血之类的问题，但它们的发生率并不高。

目前治疗IBD的手段包括抗炎药物、免疫抑制药物以及手术。具有生物活性5-氨基水杨酸(5-ASA)基团的柳氮磺吡啶和相关药物被广泛地用于控制中度的IBD症状及维持缓解状态。严重的炎症经常用皮质类固醇来治疗，有时用ACTH或免疫抑制剂如6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、环孢素以及甲氨蝶呤来治疗。对于严重的慢性IBD最常用的手术治疗是肠切除术以及最终手段结肠造口术，后者只是用于完全治愈溃疡性结肠炎。

通常用于IBD的药物具有严重的副作用，包括恶心、头晕、血液化学变化(包括贫血和白细胞减少)、皮疹以及药物依赖；而手术治疗则是一些极端的过程，往往会深远地改变患者的日常生活。显然，需要有一些新颖的治疗剂，它们能治疗IBD却没有目前治疗手段易于产生的某些副作用。

特立氟胺本身在多发性硬化症临床前模型上显示了有效性，并处于多发性硬化症(MS)治疗的临床试验阶段。MS(R.A.Adams，M.V.Victor和A.H.Ropper eds.，Principles of Neurology，McGraw-Hill，New York，1997，pp.903-921)和IBD障碍(D.K.Poldosky，N.Eng.J.Med.，347，6：417-429)的病理生理学基本上通过T-淋巴细胞介导，T-淋巴细胞的活化是由特立氟胺调节的。而且，某些证据还提示MS与炎症性肠病的部分重叠(PurrmanJ.，等人J.Clin.Gastroenterol.1992，14，1：43-46和Kimura K.Mayo Clin.Proc.2000，75，8：802-806)。

在特立氟胺施用之后，大量特立氟胺进入肠腔。这可能是由于肠肝再循环或穿过肠粘膜的结果。因此，肠粘膜就接触到相对较高量的特立氟胺，就可以在比治疗系统性自体免疫疾病所需的剂量较低的剂量达到治疗效果。GI粘膜完整性的改变可进一步加强局部接触。因此，基于以上讨论和特立氟胺甚至在治疗系统性疾病的剂量条件下仍然具有的良好的安全特点，以及较低的产生胃肠副作用可能性，使得特立氟胺成为一种潜在的用于治疗IBD的药物，所述IBD包括克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、未确定型结肠炎和感染性结肠炎。

发明概述

本发明涉及治疗患者中炎症性肠病的方法，包括施用治疗有效量的式I化合物或其可药用盐以治疗该疾病。

                            式I

发明详述

本文所用的术语具有本说明书所定义的含义。

a)“可药用盐”是指酸加成盐或碱加成盐，无论哪一种都可用本发明化合物制备。

“可药用酸加成盐”是指式I所代表的碱化合物的任何无毒有机或无机酸加成盐。可生成适宜的盐的作为例证的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及酸式金属盐如正磷酸一氢钠和硫酸氢钾。可生成适宜的盐的作为例证的有机酸包括单羧酸、二羧酸和三羧酸。作为例证的有机酸包括，例如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸，苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯基乙酸、肉桂酸、水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、对甲苯磺酸，以及磺酸如甲磺酸和2-羟基乙磺酸。可以形成单酸盐或二酸盐，而且这类盐可以水合形式或基本上无水的形式存在。一般而言，这些化合物的酸加成盐更易溶于水以及各种亲水有机溶剂，而且与其游离的碱形式相比，通常都显示出较高的熔点。

“可药用碱加成盐”是指式I化合物的无毒有机或无机碱加成盐。其实例有碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁或氢氧化钡；氨以及脂肪族、脂环族或芳香族有机胺，如甲胺、三甲胺和甲基吡啶。适宜的盐的选择是很重要的，以防止酯的水解。适宜的盐的选择标准对于本领域技术的人员是已知的。

b)“患者”是指温血动物，例如大鼠、小鼠、狗、猫、豚鼠，以及灵长类，例如人类。

c)“治疗”无论是动词或名词均是指任何治疗过程，包括但不限于暂时地或永久地减轻症状、消除症状的起因，或者预防或减缓症状的出现以及所述障碍或病症的发展。

d)“治疗有效量”是指对于某种障碍或病症的治疗有效的化合物的量。

e)“可药用载体”是无毒溶剂、分散剂、赋形剂、辅助剂或其它物质，它与本发明化合物混合以形成药物组合物，即能给患者施用的剂型。这种载体的一个实例是可药用油，一般用于胃肠外施用。

f)“立体异构体”是区别仅在于它们的原子空间取向不同的个体分子的所有异构体的总称。它包括镜像异构体(对映异构体)，几何(顺/反)异构体，以及具有多个手性中心、非互为镜像的化合物异构体(非对映异构体)。

g)“来氟洛米”是5-甲基异唑-4-甲酸-(4-三氟甲基)-酰苯胺的通用名。

h)“特立氟胺”是(Z)-2-氰基-3-羟基-丁-2-烯酸-(4’-三氟甲基苯基)-酰胺的通用名。

业已公开了式I化合物的合成，它是通过本领域技术人员众所周知的方法而实现的。例如，1996年4月2日授权的美国第5,504,084号专利，以及1999年11月23日授权的美国第5,990,141号专利均公开了合成方法。本文引用上述专利作为参考。美国第5,990,141号专利公开的一种合成方法如方案1所示。

方案1

式I

在方案1的步骤A中，市售的氰基乙酸乙酯与市售的4-三氟甲基苯胺在高温下反应，即得氰基乙酰-(4-三氟甲基)苯胺。在步骤B中，步骤A所得产物被溶于四氢呋喃并与乙腈中的NaH反应，然后再与乙酰氯反应以生成式I的化合物。

因此，按照本发明的实践公开了治疗炎症性肠病的方法，其包括给上述疾病的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其立体异构体，或其可药用盐，任选地与可药用载体组合。

                            式I

在本发明方法的另一实施方案中，所述炎症性肠病是克罗恩氏病。

在本发明方法的另一个实施方案中，所述炎症性肠病是溃疡性结肠炎。

在本发明方法的又一实施方案中，所述炎症性肠病是未确定型结肠炎。

在本发明方法的另一实施方案中，所述炎症性肠病是感染性结肠炎。

在本发明方法的进一步实施方案中，所述治疗有效量化合物的量小于治疗系统性自体免疫疾病所需的量。

在本发明方法的另一实施方案中，所述治疗有效量化合物的量小于约10mg/kg/日。

在本发明方法的又一实施方案中，所述治疗有效量化合物的量为小于1.0mg/kg/日至约10mg/kg/日。

在为罹患上述某种病症的患者进行治疗的过程中，式I的化合物可以任何形式或方式施用而使该治疗有效量化合物可生物利用，包括口服、舌下、含服、皮下、经肌肉、静脉内、经皮、经鼻、经直肠、局部等形式或方式。根据用于所治病症或疾病所选择化合物的具体特点、疾病所处的阶段、患者的状态以及其它相关情况，制备制剂的技术人员能够决定适宜的施用形式或方式。可参阅Remington′s Pharmaceutical Sciences，18thEdition，Mack Publishing Co.(1990)，此处引用作为参考。

本发明化合物可以口服施用，例如以片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬液、溶液、糖浆、糯米纸囊剂、口香糖等形式，并可含有一种或多种以下辅助剂：粘合剂，如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，如淀粉或乳糖；崩散剂，如藻酸、Primogel、玉米淀粉等；润滑剂，如硬脂酸镁或Sterotex；助流剂，如胶态二氧化硅；也可加入甜味剂如蔗糖或糖精，或调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或柑桔香精。当单位剂量形式是胶囊时，除了上述物质之外，它可还含有一种液体载体，如聚乙二醇或脂肪油。其它的单位剂量形式可含有其它各种物质，它们能改变单位剂量的物理形式，例如包衣。所以，片剂或丸剂可用糖、虫胶或其它肠溶包衣剂包衣。除了本发明化合物以外，糖浆还可含有蔗糖作为甜味剂以及某些防腐剂、染料和着色剂以及香料。

本发明的式I化合物也可局部地施用，当如此施用时该载体可适当地含有一种溶液、油膏或凝胶基质。该凝胶基质可含有例如一种或多种矿脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油，稀释剂如水和乙醇；以及乳化剂和稳定剂。

该溶液或混悬液也可包括一种或多种以下的辅助剂：无菌稀释剂，如注射用水、生理盐水、非挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇以及其它合成溶剂；抗菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及调节渗透性的试剂，如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可封装在安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶内。

式I的化合物显示其治疗能力的剂量范围可随疾病的严重性、患者状况、制剂、患者所患的其它疾病状况，以及可能给患者同时服用的其它药物而变化。一般而言，式I的化合物将在约0.001mg/kg患者体重/日至约100mg/kg患者体重/日之间的剂量显示它们的治疗活性。

本文引用本文所述的所有参考文献的全文作为参考。

附图说明

图1显示了以3种不同剂量口服(p.o.)施用时，特立氟胺对大鼠实验性过敏脑脊髓炎(EAE)症状的作用，并与溶媒和地塞米松相比较。

列举以下实例是为了进一步说明本发明。但是，这不应该被解释为是以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

大鼠实验性过敏脑脊髓炎(大鼠EAE)

本实施例说明了一种与MS相关的脑和脊髓炎症(一种与T-细胞相关的自体免疫疾病)的研究方法。参阅Bolton，C.Multr.Scler.1995；1(3)；143-9。

实验性过敏脑脊髓炎(EAE)是一种T-细胞介导的神经系统自体免疫疾病，它是在用全脊髓匀浆或组分(髓磷脂碱蛋白)致敏之后，在易受影响的动物身上发生的。此EAE啮齿动物模型是一种研究在MS患者中观察到的脑和脊髓炎症的适当工具。在啮齿动物中，注射全脊髓或脊髓组分如髓磷脂碱蛋白诱发了一种基于T-淋巴细胞活化的自体免疫反应。临床疾病通常在接种后约第8-10天变得很明显，可观察到从轻微步态失调和尾巴松弛至完全瘫痪和死亡这一广泛的行为异常。通常还出现体重减轻。在存活的动物中，出现自发恢复现象，并伴随大多数运动功能不同程度的恢复。取决于物种、致敏原以及所用的方法，通过EAE模型测试的动物可能会经历单次(急性EAE)或数次(慢性复发的EAE)发作。可采用几种治疗方案：所选择的药物或治疗可分别在免疫接种之前、无症状期间或临床发病期间施用。

动物：

雌性Lewis大鼠，160-220g(Charles River)

抗原：

豚鼠全脊髓(Harlan Biosciences)。

弗氏(Freund’s)完全佐剂H37 Ra[1mg/ml结核分支杆菌H37 Ra](Difco)。

其它抗原：

结核分支杆菌(Difco)。

百日咳杆菌[高温杀死](Difco)。

                抗原制备：(为大约720只动物)

1.称取5g冷冻的豚鼠脊髓。

2.将5g脊髓加入到圆底离心管内的5ml 0.9％生理盐水(1g/ml)中。

3.用Tissue-tech在冰上匀化直至该组织完全粉碎(约5分钟)。

4.加入10ml弗氏完全佐剂H37 Ra并辅以200mg结核分支杆菌(20mg/ml弗氏完全佐剂H37 Ra)。

5.从该离心管将匀浆/佐剂吸入到一支配有18号(18gauge)乳化针的10ml注射器中。

6.在两支30ml玻璃注射器之间进行乳化，直至物料难以通过乳化针(大约5min{油相和水相之间必须不分层})。

7.立即使用或在冰上保存直至需要使用时(不超过30min)(不要冷冻)。

                        实验方案

1.任雌性Lewins大鼠(Charles River)自由摄取食物与水，并应让其适应环境至少3天后再用于实验。

2.首先，给重量为160和220g的大鼠吸入5％异氟烷(Aerrane，FortDodge)、30％O₂、70％N₂O达2-5分钟。

3.然后将大鼠置于循环水加热毯上(Gaymar)(脊背朝上)，并罩上鼻吸器让其自行吸入麻醉气体。将异氟烷浓度降低至2％。

4.在其后爪掌面上皮下注射两次(每次0.1ml)抗原或普通生理盐水。

5.将动物从鼻吸器上移去，称重并编号。

6.任这些大鼠从麻醉状态苏醒并分别置于各自的笼子里。

7.每天观察动物，看是否有EAE发病的迹象(见如下标准)

第0阶段：正常

第1阶段：步态异常和尾巴松弛

第2阶段：一条或两条后腿出现轻微但明确的虚弱现象

第3阶段：一条或两条后腿出现严重的虚弱迹象或轻微的共济失调

第4阶段：严重的后肢轻瘫，后腿活动极少

第5阶段：无后腿活动，截瘫

第6阶段：处于垂死状态，无自发的活动，且呼吸困难。

         前腿受影响程度增加，还可能出现大小便失禁现象

第7阶段：死亡

治疗于免疫接种后第10天开始。由于此模型的疾病症状通常是于接种后第10-11天出现，此刻可被认为是代表MS急性发作的初级阶段。据判断，治疗开始时间的这一推迟比传统上使用的方案更接近于临床情况，传统方案是于接种时施用或甚至在接种之前施用(Teitelbaum D.，等人，ProcNatl Acad Sci USA 1999；96：3842-3847和Brod S.A.，等人，Ann Neurol2000；47：127-131)。

特立氟胺在不同剂量下对大鼠EAE症状的作用如图1所示。该图还包括了地塞米松以作比较。

实施例2

2，4-二硝基苯磺酸(DNBS)诱发的远端结肠炎

本实施例使用2，4-二硝基苯磺酸(DNBS)诱发的远端结肠炎模型(一种炎症性肠病模型)说明了本发明的化合物的抗炎活性。

使用几组每组3只禁食24小时的雄性或雌性大鼠。通过结肠内滴注DNBS(2，4-二硝基苯磺酸，30mg溶于0.5ml乙醇30％)诱发远端结肠炎，然后通过插管缓慢地注入空气(2ml)，以确保溶液留在结肠内。于DNBS滴注之前24小时和2小时口服施用试验物质(30mg/kg)。然后，给该动物每24小时接受一次试验化合物，连续5天。按照化合物给药的模式，单独给予对照组溶媒。于施用最后一剂试验化合物之后24小时，将动物处死，取出每条结肠并称重。从动物结肠重量和体重之间比较的百分数得出结肠重量与体重的比率。相对于溶媒处理的对照组，结肠重量与体重比率下降30％或以上(.+-.30％)则被认为是显著的。参阅C.M.Hogaboam等人Eur.J.Pharmacol.309：261(1996)。

Claims (5)

1.治疗炎症性肠病的方法，该方法包括给所述疾病的患者施用任选地与可药用载体组合的治疗有效量的式I化合物，其立体异构体，或其可药用盐，

                        式I。

2.权利要求1的方法，其中所述的炎症性肠病是克罗恩氏病。

3.权利要求1的方法，其中所述的炎症性肠病是溃疡性结肠炎。

4.权利要求1的方法，其中所述的炎症性肠病是未确定型结肠炎。

5.权利要求1的方法，其中所述的炎症性肠病是感染性结肠炎。

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