CN101028317A - 地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种已知中药地耳草(田基黄)的医药新用途，即地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用。发明人通过大量的动物筛选实验证实，地耳草及其提取物对多种肾炎及肾功能不全如腺嘌呤所致小鼠肾功能衰竭、氯化汞致日本大耳白兔慢性肾炎等具有良好的防治作用，不仅为已知中药地耳草提供了一种新的医药用途，也为广大肾炎及肾功能不全患者提供了一种新的治疗途径。

Description

地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种已知中药地耳草在制备防治疾病的药物中的新应用。

背景技术

肾炎是由多种病因引起的一组肾小球疾病，临床可表现为蛋白尿、血尿、水肿、高血压等。肾炎种类很多，最常见的有急性(肾小球)肾炎、慢性(肾小球)肾炎、肾盂肾炎等。一旦患上肾炎，若控制不当，随着病情的发展，会逐渐出现肾功能减退、肾功能障碍等，轻则丧失劳动力，影响患者的正常工作和学习生活；重则失去生命，严重危害人类健康。

急、慢性肾小球肾炎，是发生于双侧肾脏肾小球的变态反应性疾病，目前尚无特效药物治疗，基本以对症治疗和控制并发症为主。对症治疗常采用噻嗪类利尿剂、血管扩张药、神经节阻滞剂、钙离子通道阻滞剂，以及青霉素或大环内酯类等抗菌素等。

肾盂肾炎是病原微生物侵入肾盂、肾间质和肾实质所引起的炎症性病变，其治疗也常选择抗菌药物，如磺胺甲基异哑唑、或增效联磺片、或先锋霉素IV、或氨苄青霉素、先锋必等，或者联合用药。

肾功能不全又称肾衰竭，是由多种原因引起的，肾小球严重破坏，使身体在排泄代谢废物和调节水电解质、酸碱平衡等方面出现紊乱的临床综合症候群。分为急性肾功能不全(急性肾衰)和慢性肾功能不全(慢性肾衰)。预后严重，也是威胁生命的主要病症之一。

肾功能不全可分为以下四期：一期，肾功能储备代偿期；因为肾脏储备代偿能力很大，临床上肾功能虽有所减退，但其排泄代谢产物及调节水、电解质平衡能力仍可满足正常需要，临床上并不出现明显症状。二期，肾功能不全期；病人可以出现贫血，疲乏无力，体重减轻，精神不易集中等。三期，肾功能衰竭期，又称氮质血症期；患者易疲劳，乏力，注意力不能集中等症状加剧，贫血明显，夜尿增多，血肌酐、尿素氮上升明显，并常有酸中毒。四期，尿毒症期或肾功能不全终末期；有严重临床症状，如剧烈恶心、呕吐，尿少，浮肿，恶性高血压，重度贫血，皮肤瘙痒，口有尿臊味等。

肾功能不全的一般治疗包括饮食调养、营养治疗、机体内环境稳定的维持及对症治疗等。治疗方法主要包括纠正代谢性酸中毒、纠正水和电解质平衡失调、血液净化疗法、蛋白合成激素治疗，以及肾脏移植等。

目前，中医在治疗肾脏疾病方面的研究获得了很大进展，采用适宜的中药治疗肾脏疾病，一方面疗效明显，不易复发，另一方面，无痛苦、无毒副作用、费用低，因而越来越受到临床医生及众多肾脏病患者的青睐。

地耳草(田基黄)Hypericum japonicum Thunb.，始载于《生草药性备要》、《植物名实图考》，为藤黄科Gguifera小草本植物，主要分布于江西、福建、湖南、广东、广西、四川等地。为我国南方地区常用民间草药，其药用部位为干燥全草。含黄酮类、内酯(香豆精)、鞣质、蒽醌、氨基酸、酚类等物质，主要含槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷及槲皮素-7-鼠李糖苷等。味苦、甘，性凉，具有清热解毒、消肿止痛的功能。可用于急慢性肝炎、泄泻、痢疾、毒蛇咬伤、疮疖痈肿、跌打损伤等。

已有文献报道地耳草在保肝、抑菌、止血、抗疟、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、提高免疫功能等方面的作用，但尚没有将其用于治疗肾炎及肾功能不全的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种已知中药地耳草的医药新用途，即地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用。

发明人通过大量的动物筛选实验证实，地耳草对多种肾炎及肾功能不全具有良好的防治作用。

本发明所述的地耳草(田基黄)来自藤黄科植物地耳草Hypericumjaponicum Thunb.的干燥全草。可以是地耳草的原生药材，也可以是地耳草的提取物。

上述地耳草的提取物以有机溶剂提取物为佳；进一步优选为醇提取物。

上述地耳草的醇提取物，可以按照下述方法制备(也可采用其它药剂学上常用的提取方法制备)：

将地耳草药材用30％-90％的醇回流提取1-5次，一次1-3小时，提取液经粗滤后合并，减压浓缩至比重1.01-1.20，离心，取上层液再浓缩至小体积(1ml约含2g原生药材)，上已处理好的聚酰胺柱或大孔树脂柱，上样流速可控制为约1ml/分钟；分别用大量的去离子水、5-30％醇、及50-95％醇洗脱，用浓硫酸定性鉴别，收集呈阳性反应的醇洗脱液，减压浓缩并真空干燥后，即得到主要含黄酮类物质的地耳草醇提取物。

上述制备方法中所述的大孔树脂柱，采用非极性或弱极性大孔树脂，如D101型、HPD450型、HPD600型、D141型、X-5型、AB-8型大孔树脂等。

上述地耳草的原生药材或地耳草的提取物，加上药学上可接受的载体，可以制成胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂及注射剂等药剂学上可以接受的任意一种剂型。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：发明人通过大量的动物筛选实验证实，地耳草及其提取物对多种肾炎及肾功能不全如腺嘌呤所致小鼠肾功能衰竭、氯化汞致日本大耳白兔慢性肾炎等具有良好的防治作用，不仅为已知中药地耳草提供了一种新的医药用途，也为广大肾炎及肾功能不全患者提供了一种新的治疗途径。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。

但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均包括在本发明的范围内。

实施例1

本实施例为以地耳草原生药材直接制备的药物：

取中药地耳草原生药材，即地耳草Hypericum japonicum Thunb.的干燥全草，净制后按常规方法粉碎，过筛，制成粒度60-200目的地耳草细粉，装入胶囊，灭菌，分装即成。

实施例2

本实施例为地耳草醇提取物A的制备：

将地耳草药材截成2-3厘米长的段，用30％的乙醇回流提取三次，每次2小时，提取液经滤布粗滤后合并，减压浓缩至比重约1.20，2-5℃冷藏24小时以上，离心，取上层液再浓缩至小体积(1ml约含2g原生药材)，放冷，上已处理好的AB-8大孔树脂柱，上样流速1ml/分钟；分别用大量的去离子水、5-30％乙醇、及50-95％乙醇洗脱，用浓硫酸定性鉴别，收集呈阳性反应的乙醇洗脱液，减压浓缩并真空干燥后，即得到主要含黄酮类物质的地耳草醇提取物A，其收率大于1％，总黄酮含量为62％。

实施例3

本实施例为地耳草醇提取物B的制备：

将地耳草药材截成2-3厘米长的段，用90％的乙醇回流提取三次，第一次3小时，第二、三次分别1小时，提取液经滤布粗滤后合并，减压浓缩至比重约1.01，2-5℃冷藏24小时以上，离心，取上层液再浓缩至小体积(1ml约含2g原生药材)，放冷，上已处理好的聚酰胺柱，上样流速1ml/分钟；分别用约15倍柱体积量的去离子水、及60％-95％的乙醇洗脱，用浓硫酸定性鉴别，收集呈阳性反应的乙醇洗脱液，减压浓缩并真空干燥后，即得到主要含黄酮类物质的地耳草醇提取物B，其收率大于1％，总黄酮含量为71％。

上述实施例2和3所制得地耳草乙醇提取物中总黄酮的含量采用中华人民共和国药典2005版一部照紫外-可见分光光度法(附录V A)所述方法测定计算而得。

实施例4

本实施例为地耳草水提取物C的制备：

将地耳草药材剪成2-5mm的段，加15倍的水，浸泡过夜后，煮沸提取1.5小时后，滤过，滤液备用；滤渣再加10倍水，煮沸提取1小时后，滤过，滤液备用；滤渣再加8倍水，煮沸提取1小时后，滤过，滤液备用；合并三次滤液，冷藏12小时以上，滤过，滤液浓缩，滤液浓缩至约1∶1(1ml约含1g原生药材)，即得地耳草水提取物C。

实施例5

本实施例为地耳草醇提取物D的制备：

将地耳草药材剪成2-5mm的段，加15倍的50％的乙醇，浸泡2小时后，回流提取1.5小时后，滤过，滤液备用；滤渣再加10倍50％的乙醇，回流提取1小时后，滤过，滤液备用；滤渣再加8倍，50％的乙醇，回流提取1小时后，滤过，滤液备用；合并三次滤液，静置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并体积达5∶1(5ml约含1g原生药材)，加脱脂棉适量搅拌脱叶绿素后，继续浓缩，滤液浓缩至1∶1(1ml约含1g原生药材)，即得地耳草醇提取物D。

实施例6

本实施例为上述实施例2-5制得的地耳草醇提取物A、地耳草醇提取物B、地耳草水提取物C、以及地耳草醇提取物D对腺嘌呤所致小鼠肾功能衰竭的治疗作用：

1.实验仪器、试剂、材料

动物：健康合格昆明种雄性小鼠。体重21.74±0.5四川省实验动物专业委员会养殖场。

药品及试剂：地耳草醇提取物A、地耳草醇提取物B、地耳草水提取物C、地耳草醇提取物D(分别简称为提取物A、提取物B、提取物C、提取物D，下同)，发明人自制(分别为按照上述实施例2，3，4，5的方法制得)。

腺嘌呤：成都科龙化工试剂厂  批号：061201。

全自动生化分析仪 型号：TMS-1024日本TOKYO BOEKI公司。

电子分析天平 型号：AB204-Z梅特勒一托利多仪器。

2.实验方法

2.1分组

将60只健康昆明雄性小鼠分为空白组、提取物A组、提取物B组、提取物C组、提取物D组、模型组，每组10只。

2.2给药剂量、时间、途径

(1)提取物A、提取物B，分别按0.2g/kg配制成悬浮液备用；提取物C、提取物D，分别按12ml/kg配制成溶液备用。

(2)腺嘌呤：按300mg/kg配制成悬浮液备用。

(3)药物连续给药13天后眼眶取血，腺嘌呤连续给药3次，每天1次。

(4)以上药物均以小鼠灌胃的方式给药。

2.3造模

取除空白组外的其它各组小鼠，将配制好的腺嘌呤悬浮液按0.1ml/只灌胃，连续给药3次，每天一次。

2.4实验观察指标

模型组和药物组动物饲养至13天后。(药物组同时给药)眼眶取血，分离血清，送检生化指标尿素氮和肌酐。试验结束时，处死动物解剖观察小鼠双侧肾脏组织的变化。

3.数据统计处理方法

使用SPSS13.0软件整理分析数据。

4.实验结果

实验结果见表一。

表一  慢性肾衰动物治疗作用结果-对血清肌酐(Bun， x±sd，mmol/l)和

           尿素氮(Crea， x±sd，μmol/l)的影响

组别	样品数量	Bun	Crea
				空白组	10	5.83±0.63**	35.2±10.47**
模型组	10	16±11.66	56.78±19.09
				提取物A组	10	6.75±3.41**	12.56±12.1**
提取物B组	10	5.64±1.49**	15.86±7.87**
				提取物C组	10	8.64±3.23**	23.32±15.33**
提取物D组	10	6.42±1.79**	18.72±13.45**

注：与模型组比较，^**表示p＜0.01

通过表一数据分析，模型组肌酐(Bun)和尿素氮(Crea)与空白组比较有显著性差异，说明造模成功。药物组与模型组相比肌酐(Bun)和尿素氮(Crea)有显著性差异，与空白组相比变化不大，说明提取物A、B、C、D对肾衰和慢性肾功能不全有明显的治疗作用。

实施例7

本实施例为上述实施例2、3、5制得的地耳草醇提取物A、地耳草醇提取物B、地耳草醇提取物D对氯化汞致日本大耳白兔慢性肾炎的治疗作用：

1.实验动物及实验仪器、试剂、材料

日本纯种大耳白兔 一级 共14只体重：2.0±0.5kg雄性。

动物来源：四川省医学科学院实验动物研究所。

许可证号：SCXK-(川)2004-14。

药品及试剂：地耳草醇提取物A、地耳草醇提取物B、地耳草醇提取物D(分别简称为提取物A、提取物B、提取物D，下同)：发明人自制(分别为按照上述实施例2，3，5的方法制得)。

全自动生化分析仪 型号：TMS-1024i日本TOKYO BOEKI公司。

电子分析天平 型号：AB204-Z梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司。

氯化汞(MC)批号：05112，生产单位：贵州省铜仁化学试剂厂。配制方法：配制成1％溶液(10mg溶于1ml蒸馏水中)。

2.实验方法

2.1造模

取检疫合格的19只日本大耳白兔，每只兔肌肉注射1％MC 0.2ml/kg，每周3次，共2周。2周后从兔耳缘静脉取血，并收集兔尿液进行生化学检测肌酐，尿素氮及尿中总蛋白，确定模型是否成立。

2.2动物分组

经检测分析，19只动物造模后尿蛋白均明显升高，说明肾单位对血中蛋白的滤过或重吸收均发生了明显的病理反应，符合本模型的大致特点。以计算机按体重完全随机法将上述19只日本大耳白兔分为4组，分别为模型对照组(4只)，提取物A组(5只)，提取物B组(5只)，提取物D组(5只)。

2.3给药剂量、体积及途径设置

剂量设置依据：根据临床拟用剂量为依据，按体表面积折算成兔日用剂量。

提取物A和提取物B给药剂量：0.8g/kg；提取物D给药剂量：剂量3ml/kg。给药途径：灌胃给药。

2.4实验观察指标

实验动物分别于实验前和实验后隔周经耳静脉采血，取上清液测量尿蛋白。试验结束时，处死动物后取双侧肾组织10％福尔麻林固定，行HE染色，做病理学检查。

3.数据统计处理方法

使用SPSS13.0软件整理分析数据。

4.实验结果

实验结果见表二。

表二  慢性肾炎动物治疗作用实验结果-对尿蛋白的影响( x±sd，g/L)

组别	样本数	造模前血清尿蛋白	造模后血清尿蛋白	给药2周后血清
					模型对照组	4	11.34±3.52	23.64±4.80	23.55±11.13
提取物A组	5	12.05±6.62	28.20±9.22	4.19±3.19**
					提取物B组	5	16.51±3.48	25.70±9.54	3.02±3.18**
提取物D组	5	17.82±3.48	29.73±9.89	4.55±3.42**

注：与模型组比较，**表示p＜0.01

通过表二数据分析，日本大耳白兔在肌肉注射氯化汞(造模前)前，尿蛋白各组间比较无明显差异，在慢性肾小球肾炎疾病中尿蛋白为最常见的临床病理表现，本次试验动物造模成功后，尿蛋白均造模前有明显升高(造模前兔尿液中含一定量的蛋白符合年幼兔的生理特征)，呈病理性改变，符合慢性肾小球肾炎发病的特点，说明氯化汞所致的双相性自身免疫性肾炎动物模型成立。经生理盐水，地耳草醇提取物A、B和D组对应组模型动物2周灌胃后，提取物A、B和D组尿中蛋白明显下降，与模型组比较有显著性差异。

综上所述，通过本次初步动物药效学试验证明。地耳草提取物对降低模型动物尿蛋白，治疗慢性肾小球肾炎有较好的效果。

实施例8

本实施例为上述实施例2-4制得的地耳草醇提取物A、地耳草醇提取物B、地耳草水提取物C对氯化汞致小鼠肾功能衰竭的治疗作用。

1.实验仪器、试剂、材料

动物：健康合格昆明雄性小鼠。体重17±0.5g四川省实验动物专业委员会养殖场提供。

药品及试剂：药品及试剂：地耳草醇提取物A、地耳草醇提取物B、地耳草水提取物C(分别简称为提取物A、提取物B、提取物C，下同)：发明人自制(分别为按照上述实施例2，3，4的方法制得)。

氯化汞：贵州铜仁化学试剂厂 批号：060809。

2.实验方法

2.1动物分组

将60只健康昆明雄性小鼠分为空白组、提取物A组、提取物B组、提取物C组、和模型组，每组12只。

2.2给药剂量、时间、途径：

(1)提取物A和提取物B：按0.2g/kg配制成悬浮液备用。

(2)提取物C：按12ml/kg配制成生药溶液备用。

(3)氯化汞：按6mg/kg氯化贡将配制成水液体液备用。

(4)提取物A、提取物B、提取物C，连续给药9天后眼眶取血 氯化汞连续给药2次，每天1次。

(5)提取物A、提取物B、和提取物C，均以小鼠灌胃的方式给药，氯化汞以腹腔注射给药。

2.3造模

取除空白组外的其它各组小鼠，将配制好的氯化汞液按0.2ml/只灌胃，连续给药2次，每天一次。9天后眼眶取血，离心取血清，进行生化学检肌酐和Bun，确定造模是否成功。

2.4实验观察指标

经检测造模动物生化指标及解剖观察的结果符合肾衰指标，造模成功。

3.数据统计处理方法

使用SPSS13.0软件整理分析数据。

4.实验结果

实验结果见表三。

表三  急性肾衰动物治疗作用结果-对血清肌酐(Bun， x±sd，mmol/l)和

              尿素氮(Crea， x±sd，μmol/l)的影响

组别	样品数量	Bun	Crea
				空白组	12	7.25±1.42	42.75±9.85
模型组	12	21.01±10.22**	71.63±17.21**
				提取物A组	12	6.98±2.52**	20.77±13.11**
提取物B组	12	7.52±2.27**	23.86±8.76**
				提取物C组	12	13.47±5.76*	36.85±11.56**

与模型组比较，^**表示p＜0.01，^*表示p＜0.05

通过表三数据分析，模型组肌酐(Bun)和尿素氮(Crea)与空白组比较有显著性差异，说明造模成功。药物组与模型组相比肌酐(Bun)和尿素氮(Crea)有显著性差异，与空白组相比变化不大，说明药物提取物A和提取物B、提取物C对急性肾衰有明显的治疗作用。

Claims (7)

1.地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用，其特征在于：所述的地耳草是地耳草原生药材或者地耳草提取物。

3.根据权利要求2所述的地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用，其特征在于：所述的地耳草提取物是地耳草的有机溶剂提取物。

4.根据权利要求3所述的地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用，其特征在于：所述的地耳草的有机溶剂提取物是地耳草的醇提取物。

5.根据权利要求4所述的地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用，其特征在于：所述的地耳草的醇提取物是通过下述方法制得的物质：

将地耳草药材用30％-90％的醇回流提取1-5次，一次1-3小时，提取液经粗滤后合并，减压浓缩至比重1.01-1.20，离心，取上层液再浓缩至小体积，放冷，上已处理好的聚酰胺柱或大孔树脂柱；分别用大量的去离子水、5-30％醇、及50-95％醇洗脱，用浓硫酸定性鉴别，收集呈阳性反应的醇洗脱液，减压浓缩并真空干燥后，即得到主要含黄酮类物质的地耳草醇提取物。

6.根据权利要求5所述的地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用，其特征在于：所述的大孔树脂是非极性或弱极性大孔树脂。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的地耳草在制备防治肾炎及肾功能不全的药物中的应用，其特征在于：将所述的地耳草原生药材或地耳草提取物，加上药学上可接受的载体，制成药剂学上可以接受的任意一种剂型。