CN101024604A

CN101024604A - 从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物及其制备方法

Info

Publication number: CN101024604A
Application number: CN 200710038739
Authority: CN
Inventors: 雍克岚; 吕敬慈; 张天宝; 徐鲁荣; 陈旭
Original assignee: University of Shanghai for Science and Technology
Current assignee: Shanghai University; University of Shanghai for Science and Technology
Priority date: 2007-03-29
Filing date: 2007-03-29
Publication date: 2007-08-29
Anticipated expiration: 2027-03-29
Also published as: CN101024604B

Abstract

本发明涉及从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物及其制备方法，属药物植物化学提取工艺技术领域。本发明的特点是采用化学提取工艺及色谱技术从龙血竭中分离纯化新二氢查耳酮化合物。本发明以龙血竭为原料，依次用石油醚、氯仿溶剂提取，将氯仿提取物减压浓缩，经硅胶柱或快速硅胶柱层析及Sephadex LH－20凝胶柱层析分离、制备色谱纯化，最终得到新二氢查耳酮化合物，化学名称为4’－羟基－2’，4－二甲氧基－二氢查耳酮。该化合物外观为黄绿色物质，具有很好的抗血小板聚集的作用，可用作相关治疗药物的组成成分。该化合物结构式见附图。

Description

从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物及其制备方法，属药物植物化学提取工艺技术领域。

背景技术

二氢查耳酮类化合物是一类具有苯并色原酮母核结构的化合物，在植物中分布较广，从菊料、蔷薇料、杜鹃花科、百合科等植物中分离得到多种二氢查耳酮化合物。

二氢查耳酮类化合物是一类重要的生物活性物质，具有抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病、抗菌以及雌激素等作用。

关于从百合科龙血树属植物剑叶龙血树的树脂龙血竭中分离出新的二氢查耳酮及其制备方法，经检索，尚未见报道；也未见有合成该化合物及其工艺的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从百合科龙血树属植物剑叶龙血树的树脂龙血竭中用化学提取工艺及色谱技术分离出新二氢查耳酮化合物的方法。

本发明一种从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物，其特征在于具有以下的分子式和结构式：

分子式为：C₁₇H₁₈O₄

结构式为：

化学名称为：4’-羟基-2’，4-二甲氧基-二氢查耳酮。

本发明一种从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物的制备方法，其特征在于具有以下的工艺过程和步骤：

a.取一定量的龙血竭粉末为原料，用石油醚于索氏抽提器中在70℃抽提8～10小时；将残留物中的石油醚挥干后，再用氯仿于索氏抽提器中在60℃抽提8～12小时，提取液经减压旋转蒸发仪浓缩，并在40℃干燥，得氯仿提取物；

b.将上述氯仿提取物再用甲醇溶解，加入一定量的粒度为200～300目的硅胶，搅拌均匀；待甲醇挥发后，将其研碎，上硅胶柱或快速硅胶柱；用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，即用石油醚-乙酸乙酯的体积比分别为9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9的混合溶剂进行洗脱；取8∶2和/或7∶3和/或6∶4的洗脱部分用减压旋转蒸发仪浓缩，随后在40℃下干燥，得石油醚-乙酸乙酯提取物；

c.将上述提取物再用甲醇溶解后，用Sephadex LH-20凝胶柱层析，并以体积比为1∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱；洗脱溶剂总量为8～10个柱体积；收集过柱后的8～10个馏分，根据硅胶板点样分析结果，将第6～第8个馏分注入高效液相制备色谱仪纯化，弃去杂质峰，收集主成分峰；

d.将上述纯化后所得馏分经旋转蒸发仪浓缩，在40～50℃下干燥后，即得新二氢查耳酮化合物。

上述的制备色谱仪的条件如下：制备色谱柱为Symmetry prep C₁₈(φ19×300mm、7μm)，流动相为甲醇∶乙腈∶水＝5∶30∶65，流速v＝4ml/min，柱温40℃，检测波长280nm。

本发明方法所得的新二氢查耳酮化合物其外观为黄绿色物质，它溶于水、甲醇和氯仿。

抗血小板聚集作用实验证明，在相同浓度下新二氢查耳酮抗血小板聚集作用大于现在常用的抗血小板聚集药物阿司匹林、以及已知的两个龙血竭提取物龙血素B、剑叶龙血素A。实验结果见表1。

表1几种化合物对ADP诱导的健康志愿者血小板聚集的影响

组别	浓度	最大聚集率(％)	N	抑制聚集(％)
组别	浓度	最大聚集率(％)	N	抑制聚集(％)	阴性对照阿司匹林剑叶龙血素A龙血素B4’-羟基-4’，4-二甲氧基二氢查耳酮	-200μg/mL300μg/mL200μg/mL300μg/mL200μg/mL300μg/mL200μg/mL300μg/mL	75±853±11^26±6^56±13^23±7^49±13^8±3^45±8^8±5^**	633333333	-2965256935894089

与阴性对照组比较：^*p＜0.05^**p＜0.01

本发明的新二氢查耳酮具有很好的抗血小板聚集作用，可作为相关冶疗药物的组成成分，用于新药的开发。

具体实施方式

现将本发明的具体实施例叙述于后。

实施例1：取龙血竭粉末(60～80目)96g，用石油醚于索氏抽提器中在70℃抽提8小时；将残留物中石油醚挥干后，用氯仿于索氏抽提器中在60℃抽提10小时，提取液经减压旋转蒸发仪浓缩，并在40℃干燥，得氯仿提取物35g；将氯仿提取物再用甲醇溶解，加入2倍量即70g的硅胶(200～300目)，搅拌均匀，待甲醇挥发后，将其研粹，上硅胶柱(φ10×100cm)；用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，即用石油醚-乙酸乙酯的体积比分别为9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9的混合溶剂进行洗脱；取8∶2洗脱部分用减压旋转蒸发仪浓缩，随后在40℃下干燥，得石油醚-乙酸乙酯提取物5g；将该提取物再用甲醇溶解后，用Sephadex LH-20凝胶柱层析，并以体积比为1∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱；洗脱溶剂总量为9个柱体积；收集过柱后的9个馏分，根据硅胶板点样分析结果，将第7馏分注入高效液相制备色谱仪纯化，弃去杂质峰，收集主成分峰；最后将上述纯化所得馏分经旋转蒸发浓缩，在40℃下干燥后，即得本发明的目标产物70mg。

上述的制备色谱仪的条件如下：制备色谱柱为Symmetry Prep C₁₈(φ19mm×300mm、7μm)，流动相为甲醇∶乙腈∶水＝5∶30∶65，流速v＝4ml/min，柱温40℃，检测波长280nm。

实施例2：取龙血竭粉末(60～80目)96g，用石油醚于索氏抽提器中在70℃抽提8小时；将残留物中石油醚挥干后，用氯仿于索氏抽提器中在60℃抽提8小时，提取液经减压旋转蒸发仪浓缩，并在40℃干燥，得氯仿提取物36g；将氯仿提取物再用甲醇溶解，加入等量即36g的硅胶(200～300目)，搅拌均匀，待甲醇挥发后，将其研粹；然后将其等分成7份，上快速硅胶柱(φ4cm×15cm)；用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，即用石油醚-乙酸乙酯的体积比分别为9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9的混合溶剂进行洗脱；收集合并7份8∶2洗脱部分，用减压旋转蒸发仪浓缩，随后在40℃干燥，得石油醚-乙酸乙酯提取物5.5g；将该提取物再用甲醇溶解后，用Sephadex LH-20凝胶柱层析，并以体积比为1∶1的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱；洗脱溶剂总量为9个柱体积；收集过柱后的9个馏分，根据硅胶板点样分析结果，将第7馏分注入高效液相制备色谱仪纯化，弃去杂质峰，收集主成分峰；最后将上述纯化所得馏分经旋转蒸发仪浓缩，在40℃干燥后，即得本发明的目标产物72mg。

上述两个实施例所得的本发明目标化合物4’-羟基-2’，4-二甲氧基-二氢查耳酮，分子式为C₁₇H₁₈O₄，其外观为黄绿色物质，经UV-VIS、IR、NMR、MS波谱分析所得数据如下：

紫外(MeOH)λ_max(nm)(logε)：203(4.74)，218(4.41)，270(4.40)；红外(KBr)σ_max3391，2935，2838，1658，1599，1509，1465，1259，835cm^-1；EI-MS[M⁺]286(30)，151(31)，150(22)，137(68)，136(26)，135(100)，124(22)，107(31)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)δ：7.96(2H，d，J＝9.0Hz，H-2，6)，6.92(2H，d，J＝9.0Hz，H-3，5)，6.41(1H，d，J＝2.5Hz，H-3’)，6.34(1H，dd，J＝2.5，8.0Hz，H-5’)，7.01(1H，d，J＝8.0，H-6’)，3.87(6H，s，-OCH3)，3.17(2H，t，J＝8.0，H-β)，2.95(2H，t，J＝8.0，H-α)；¹³C-NMR(500MHz，CDCl₃，+TMS)δ：129.0(C-1)，130.6(C-2，6)，113.8(C-3，5)，163.6(C-4)，121.3(C-1’)，158.5(C-2’)，99.5(C-3’)，155.9(C-4’)，106.8(C-5’)，130.6(C-6’)，199.9(C＝O)，55.6(4C-OCH₃)，55.3(2’C-OCH₃)，25.6(C-α)，39.1(C-β)。

由此确定结构式如下：

Claims

1.一种从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物，其特征在于具有以下的分子式和结构式：

分子式为：C₁₇H₁₈O₄

结构式为：

2.一种制备根据权利要求1的从龙血竭中分离纯化的新二氢查耳酮化合物的方法，其特征在于具有以下的工艺过程和步骤：

a.取一定量的龙血竭粉末为原料，用石油醚于索氏抽提器中在70℃抽提8～10小时；，将残留物中石油醚挥干后，再用氯仿于索氏抽提器中在60℃抽提8～12小时，提取液经减压旋转蒸发仪浓缩，并在40℃干燥，得氯仿提取物；

b.将上述氯仿提取物再用甲醇溶解，加入一定量的粒度为200～300目的硅胶，搅拌均匀；待甲醇挥发后，将其研碎，上硅胶柱；用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，即用石油醚-乙酸乙酯的体积比分别为9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9的混合溶剂进行洗脱；取8∶2和/或7∶3和/或6∶4的洗脱部分用减压旋转蒸发仪浓缩，随后在40℃干燥，得石油醚-乙酸乙酯提取物；

d.将上述纯化后所得馏分经旋转蒸发仪浓缩，在40～50℃下干燥后，即得目标化合物4’-羟基-2’，4-二甲氧基-二氢查耳酮。

3.根据权利要求2所述的一种从龙血竭中分离纯化的新二氢耳酮化合物的制备方法，其特征在于所述的制备色谱仪的条件如下：制备色谱柱为Symmetry prepC₁₈(φ19×300mm、7μm)，流动相为甲醇∶乙腈∶水＝5∶30∶65，流速v＝4ml/min，柱温40℃，检测波长280nm。

4.根据权利要求1所述的从龙血竭中分离纯化的新二氢耳酮化合物在治疗血小板聚集疾病中的应用。