CN101012472A - 高f值蛋清寡肽的制备方法 - Google Patents

高f值蛋清寡肽的制备方法 Download PDF

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高F值蛋清寡肽的制备方法，它涉及一种保健食品的加工方法。本发明解决了目前高F值寡肽的F值低和产品收率低的问题。本发明按下列反应进行：a.原料预处理；b.蛋白质水解，蛋白质水解由第一步水解和第二步水解两步组成；c.活性炭吸附；d.脱盐。本发明制得产品的分子量为300～1000，F值大于20，游离氨基酸占高F值蛋清寡肽质量百分比小于10％。本发明具有工艺简单、操作方便、周期短和收率高的优点。本发明制得高F值蛋清寡肽具有保肝护肝的作用。本发明产品的收率大于60％。

Description

高F值蛋清寡肽的制备方法
技术领域
本发明涉及一种保健食品的加工技术。
背景技术
高F值氨基酸制剂由于其保肝护肝功能被广泛应用。临床医药上最常见的高F值氨基酸制剂制备方法如下：(1)采用纯净结晶的氨基酸按一定比例配制而成；(2)将食物蛋白经酸或碱水解成氨基酸混合物后再进行中和、过滤、脱色、纯化、浓缩、调配等工序制成高F值氨基酸制剂。(1)中的方法制得的高F值氨基酸制剂只适合于静脉注射，不能口服，由于高渗透压不利于胃肠吸收。(2)中的方法即蛋白酶水解法制备高F值寡肽混合物的技术一般如下：食物蛋白经预处理后一步水解暴露芳香族氨基酸，二步水解去除芳香族氨基酸而得成品；此法制得产品成本低廉，反应条件温和，营养成分破坏较少，安全性高，而且由于寡肽在胃肠吸收方面的优越性，此类产品作为口服剂将有良好的应用前景。目前对此方面的研究主要集中在以玉米黄粉、大豆蛋白、乳清蛋白、酪蛋白为原料，这些原料的产物肽风味差、颜色差、口感不好、分子量大，产品收率小于60％。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前高F值寡肽的F值低和产品收率低的问题，而提供一种高F值蛋清寡肽的制备方法。本发明高F值蛋清寡肽的制备方法的步骤如下：
a.原料预处理：清洗蛋，然后打蛋分离出蛋清，然后向蛋清加水使蛋清内蛋白质的质量百分比浓度为3％～11％，再将稀释蛋清液倒入反应釜中，在80～100℃条件下加热5～30分钟，得到变性蛋清；
b.蛋白质水解：第一步水解：搅拌步骤a得到的变性蛋清，将温度降至40℃～70℃，再调节变性蛋清的pH值为7.0～9.0，然后加入2％～8％的变性蛋清内蛋白质质量的蛋白酶A，在pH值为7.0～9.0、不断搅拌条件下进行水解1～6小时；水解结束后调节pH值为4.0～6.0，然后加热到80～100℃，反应5～30分钟灭蛋白酶A的活性，再冷却至室温后离心分离20～40分钟，收集上清液；第二步水解：先将第一步水解得到的上清液pH值调节为6.0～8.0，在40～60℃条件下，加入2％～8％的上清液蛋白质质量的蛋白酶B，在pH值为2.0～4.0、不断搅拌条件下进行水解2～6小时，然后加热到80～100℃，反应5～30分钟灭蛋白酶B的活性，再冷却至室温后离心分离5～30min，收集上清液；
c.活性炭吸附：将经步骤b中第二步水解收集的上清液pH值调解为2.0～6.0、再在10℃～40℃条件下、按活性炭与上清液的质量比1∶6～1∶20加入活性炭，吸附100～150min，吸附后经过滤、离心分离得到蛋清高F值寡肽混合液；
d.脱盐：将阴、阳离子交换树脂装柱，取蛋清高F值寡肽混合液以6～12倍柱体积/小时的流速通过阳、阴离子交换树脂，得到高F值蛋清寡肽。
本发明制得产品的分子量为300～1000，F值大于20，游离氨基酸占高F值蛋清寡肽质量百分比小于10％，它是由高含量的支链氨基酸和低含量的芳香族氨基酸组成的小肽体系，无苦味、无异味、透明、淡黄色、低粘性、低致敏性、无高渗性的溶液。本发明产品的收率大于60％。本发明制得高F值蛋清寡肽具有保肝护肝的作用。
本发明具有工艺简单、操作方便、周期短和收率高的优点。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式高F值蛋清寡肽制备方法的步骤如下：
a.原料预处理：清洗蛋，然后打蛋分离出蛋清，然后向蛋清加水使蛋清内蛋白质的质量百分比浓度为3％～11％，再将稀释蛋清液倒入反应釜中，在80～100℃条件下加热5～30分钟，得到变性蛋清；
b.蛋白质水解：第一步水解：搅拌步骤a得到的变性蛋清，将温度降至40℃～70℃，再调节变性蛋清的pH值为7.0～9.0，然后加入2％～8％的变性蛋清内蛋白质质量的蛋白酶A，在pH值为7.0～9.0、不断搅拌条件下进行水解1～6小时；水解结束后调节pH值为4.0～6.0，然后加热到80～100℃，反应5～30分钟灭蛋白酶A的活性，再冷却至室温后离心分离20～40分钟，收集上清液；第二步水解：先将第一步水解得到的上清液pH值调节为6.0～8.0，在40～60℃条件下，加入2％～8％的上清液蛋白质质量的蛋白酶B，在pH值为2.0～4.0、不断搅拌条件下进行水解2～6小时，然后加热到80～100℃，反应5～30分钟灭蛋白酶B的活性，再冷却至室温后离心分离5～30min，收集上清液；
c.活性炭吸附：将经步骤b中第二步水解收集的上清液pH值调解为2.0～6.0、再在10℃～40℃条件下、按活性炭与上清液的质量比1∶6～1∶20加入活性炭，吸附100～150min，吸附后经过滤、离心分离得到蛋清高F值寡肽混合液；
d.脱盐：将阴、阳离子交换树脂装柱，取蛋清高F值寡肽混合液以6～12倍柱体积/小时的流速通过阳、阴离子交换树脂，得到高F值蛋清寡肽。
本实施方式中产品收率大于60％。
本实施方式制得产品的分子量为300～1000，F值(F值为支链氨基酸与芳香族氨基酸的摩尔比)大于20，游离氨基酸占高F值蛋清寡肽质量百分比小于10％，本实施方式制得产品是由高含量的支链氨基酸和低含量的芳香族氨基酸组成的小肽体系，无苦味、无异味、透明、淡黄色、低粘性、低致敏性、无高渗性的溶液。
具体实施方式二：本实施方式在步骤a中蛋清内蛋白质的质量百分比浓度为5％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式在步骤a中蛋清内蛋白质的质量百分比浓度为8％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式在步骤a中第一步的蛋白酶A加入量为上清液蛋白质质量的2％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式在步骤a中第一步的蛋白酶A加入量为上清液蛋白质质量的3％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式在步骤a中第一步的蛋白酶A加入量为上清液蛋白质质量的5％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式七：本实施方式在步骤a中第一步水解使用的蛋白酶A为风味蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶1398中的一种或几种的混合。其它与具体实施方式一相同。
本实施方式中蛋白酶A为几种时按任意比例混合。
具体实施方式八：本实施方式在步骤a中的第一步水解使用风味蛋白酶对步骤a变性蛋白进行水解。其它与具体实施方式七相同。
具体实施方式九：本实施方式在步骤b中第二步的蛋白酶B加入量为上清液蛋白质质量的2％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十：本实施方式在步骤b中第二步的蛋白酶B加入量为上清液蛋白质质量的3％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十一：本实施方式在步骤b中第二步的蛋白酶B加入量为上清液蛋白质质量的5％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十二：本实施方式在步骤b中第二步水解应用的蛋白酶B为肌动蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶中的一种或几种的混合。其它与具体实施方式一相同。
本实施方式中蛋白酶B为几种时按任意比例混合。
具体实施方式十三：本实施方式在步骤b中的第二步水解使用木瓜蛋白酶对第一步水解得到的上清液进行水解。其它与具体实施方式十相同。
具体实施方式十四：本实施方式在步骤c中活性炭与上清液的质量比1∶10。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十五：本实施方式在步骤c中活性炭与上清液的质量比1∶13。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十六：本实施方式在步骤c中活性炭与上清液的质量比1∶15。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十七：本实施方式在步骤d中阴离子交换树脂为强碱性笨乙烯系阴离子交换树脂。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十八：本实施方式的强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂为D201、201×4、201×7、D290或D296。其它与具体实施方式十七相同。
具体实施方式十九：本实施方式在步骤d中阳离子交换树脂为强酸性笨乙烯系阳离子交换树脂。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式二十：本实施方式的强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂为D072、D061、732或AMBERJET1200F。其它与具体实施方式十九相同。
对本发明制备的高F值蛋清寡肽进行分子量测定，方法和结果如下：
分子量测定采用凝胶色谱法。凝胶选用Sephdex-G25，产物加样量0.1ml，洗脱液为浓度0.1mol/L、pH值7.0的磷酸盐缓冲液，流速1ml/min。分子量标准品为苯丙氨酸(分子量168)、还原型谷胱甘肽(分子量307.7)、氧化型谷胱甘肽(分子量613)、溶菌酶(分子量14000)。标准品苯丙氨酸、还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽及溶菌酶的洗脱液出峰体积分别为：60.2ml、52.4ml、47.6ml、21.2ml，蛋清水解产物的洗脱液出峰体积为49.2ml，由此得水解产物的分子量在300～1000之间。
对本发明具体实施方式一制备的高F值蛋清寡肽用氨基酸自动分析仪进行分析，结果见表1：高F值蛋清寡肽的组成氨基酸和游离氨基酸的种类与占高F值蛋清寡肽质量百分比含量。
表1
  氨基酸名称     组成氨基酸     游离氨基酸
  CYSMETASPTHRSERGLUGLYALAVALILELEUTYRPHELYSHISARG     0.090.311.490.220.420.670.170.290.580.441.51-0.160.570.110.27     0.03-0.040.060.020.050.040.040.07-0.11-0.070.040.03-
PRO合计     0.157.46     -0.60
通过对表1中氨基酸的组成分析可得游离氨基酸占高F值蛋清寡肽质量百分比为8.04％，寡肽的F值为：
Figure A20071007174700091
按下面公式计算高F值寡肽的得率为62％。
Figure A20071007174700092

Claims (10)

1、一种高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于该方法由以下步骤完成：
a.原料预处理：清洗蛋，打蛋分离出蛋清，然后向蛋清加水使蛋清内蛋白质的质量百分比浓度为3％～11％，再将稀释蛋清液倒入反应釜中，在80～100℃条件下加热5～30分钟，得到变性蛋清；
b.蛋白质水解：第一步水解：搅拌步骤a得到的变性蛋清，将温度降至40℃～70℃，再调节变性蛋清的pH值为7.0～9.0，然后加入变性蛋清内蛋白质质量的2％～8％的蛋白酶A，在pH值为7.0～9.0、不断搅拌条件下进行水解1～6小时；水解结束后调节pH值为4.0～6.0，然后加热到80～100℃，反应5～30分钟灭蛋白酶A的活性，再冷却至室温后离心分离20～40分钟，收集上清液；第二步水解：先将第一步水解得到的上清液pH值调节为6.0～8.0，在40～60℃条件下，加入2％～8％的上清液蛋白质质量的蛋白酶B，在pH值为2.0～4.0、不断搅拌条件下进行水解2～6小时，然后加热到80～100℃，反应5～30分钟灭蛋白酶B的活性，再冷却至室温后离心分离5～30min，收集上清液；
c.活性炭吸附：将经步骤b中第二步水解收集的上清液pH值调解为2.0～6.0、再在10℃～40℃条件下、按活性炭与上清液的质量比1∶6～1∶20加入活性炭，吸附100～150min，吸附后经过滤、离心分离得到蛋清高F值寡肽混合液；
d.脱盐：将阴、阳离子交换树脂装柱，取蛋清高F值寡肽混合液以6～12倍柱体积/小时的流速通过阳、阴离子交换树脂，得到高F值蛋清寡肽。
2、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤a中蛋清内蛋白质的质量百分比浓度为5％。
3、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤a中蛋清内蛋白质的质量百分比浓度为8％。
4、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤a中第一步的蛋白酶A加入量为上清液蛋白质质量的3％。
5、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤a中第一步水解使用的蛋白酶A为风味蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶1398中的一种或几种的混合。
6、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤b中第二步的蛋白酶B加入量为上清液蛋白质质量的3％。
7、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤b中第二步水解应用的蛋白酶B为肌动蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶中的一种或几种的混合。
8、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤c中活性炭与上清液的质量比1∶13。
9、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤d中阴离子交换树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂。
10、根据权利要求1所述的高F值蛋清寡肽的制备方法，其特征在于在步骤d中阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂。
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Owner name: JILIN HOUDE FOODS CO., LTD.

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Inventor after: Wang Shuhui

Inventor after: Zhao Ying

Inventor after: Sun Bo

Inventor after: Wang Xibo

Inventor before: Chi Yujie

Inventor before: Zhao Ying

Inventor before: Sun Bo

Inventor before: Wang Xibo

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Address after: 136600 Dongliao County Industrial Park in Jilin Province

Patentee after: JILIN HOUDE FOOD Co.,Ltd.

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Patentee before: JILIN JINYI FOOD Co.,Ltd.

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Address after: 136200 Nankang street, Jilin, Liaoyuan

Patentee after: Wang Shuhui

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Application publication date: 20070808

Assignee: JILIN HOUDE FOOD Co.,Ltd.

Assignor: Wang Shuhui

Contract record no.: 2014220000039

Denomination of invention: Preparation of high F value egg white oligopeptide with product yield greater than 60%

Granted publication date: 20100915

License type: Exclusive License

Record date: 20140807

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Effective date of registration: 20160907

Address after: 136200 Jilin city of Liaoyuan Province modern agricultural science and Technology Industrial Park (Dongliao Liao Feng highway 216 kilometers)

Patentee after: JILIN HOUDE FOOD Co.,Ltd.

Address before: 136200 Nankang street, Jilin, Liaoyuan

Patentee before: Wang Shuhui

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Patentee after: HOUDE FOOD Co.,Ltd.

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