CN101011474B - 含制草乌中药乌头碱限量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种高效液相色谱法检测由制草乌、三七、断节参、白云参组方打粉后直接入药制成的口服固体制剂中乌头碱限量的方法。该方法专属性强、准确度和精确度高、最低检测限可以满足检查的需要，操作简便，可有效检测乌头碱限量。
Description
技术领域
本发明涉及高效液相色谱法检测含制草乌中药乌头碱限量的方法，尤其是由制草乌、三七、断节参、白云参组方制成的中药乌头碱限量检测方法。
背景技术
由制草乌、三七、断节参、白云参组方打粉后直接入药制成的中药主要有虎力散、虎力散胶囊、虎力散片等口服固体制剂，乌头碱是其主要毒性成分，采用蒸煮炮制可以去除草乌的毒性。中国药典2005年版一部制草乌项下的炮制方法为取草乌，大小个分开，用水浸泡至内无干心，取出，加水煮至取大个切开内无白心、口尝微有麻舌感时，取出，晾至六成干后切薄片，干燥。吴寿金等报道(现代中草药成分化学，第1版，北京，中国医药科技出版社，2002.5：947～948)草乌煮4小时，乌头碱含量由0.1986％下降至0.1170％，煮12小时下降至0.09010％。郑虎占等报道(中药现代研究与应用，第3卷，第1版，北京，学苑出版社，1998：2568～2594)制草乌毒性低，对心律影响小，抑制呼吸作用弱。尽管草乌经炮制后乌头碱含量显著下降，但对用制草乌打粉后直接入药制成的中药制剂进行乌头碱的限量控制，对于确保药品的安全性具有重要意义。
然而，目前由制草乌、三七、断节参、白云参组方打粉后直接入药制成的中药制剂均未制定乌头碱限量检查标准，也未见相关研究报道，中国药典2005年版一部制草乌药材标准中收载的紫外-可见分光光度法的标准曲线法检查制草乌中酯型生物碱的限量项目，操作复杂、准确性差。
发明目的
提供一种专属性强、准确性和灵敏度高、操作简便的含制草乌中药乌头碱限量检测方法，保障用药安全。
发明内容
为达到以上目的，本发明提供了一种含制草乌中药乌头碱限量检测方法，具体实施方式如下：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钠溶液(39∶61)为流动相；检测波长235nm。理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥至恒重的乌头碱对照品约8mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶液约90ml，超声溶解(40KHZ，120W)，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取25ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取样品细粉约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚50ml与浓氨试液1ml，密塞，摇匀，放置过夜，滤过，药渣加乙醚50ml连续振摇1小时，滤过，药渣用乙醚洗涤2次，每次15ml，滤过，洗液与滤液合并，40℃水浴蒸干，残渣加三氯甲烷25ml使溶解，转入分液漏斗中，用三氯甲烷15ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用0.1mol/L盐酸溶液提取4次，每次20ml，合并酸液，加浓氨试液5ml，再用三氯甲烷提取4次，每次20ml，三氯甲烷液合并，用水20ml振摇洗涤一次，取三氯甲烷液，50℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转入5ml量瓶中，用甲醇分次洗涤容器，洗液并入量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法精密吸取对照品溶液10μl、供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
通过以下验证试验说明本发明方法的可行性：
1.测定波长选择试验
取按上述方法制备的乌头碱对照品溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)在200～400nm波长范围内扫描，乌头碱在233nm波长处有最大吸收，故选择235nm为检测波长。
2.色谱条件与系统适用性试验
选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钠溶液(39∶61)为流动相，流速为1ml/min，柱温为室温，检测波长为235nm，理论板数按乌头碱峰计算为3099。
3.线性关系试验
精密吸取浓度为43.0μg/ml的乌头碱对照品溶液1、3、5、7、9、11μl分别进样，记录色谱图，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程得A＝379389.6C-109.725，r＝0.9999，结果见表1。试验结果表明，乌头碱在0.043～0.473μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
表1乌头碱含量测定线性关系试验结果
4.专属性试验
取缺制草乌的阴性样品照上述乌头碱限量检测方法测定，结果表明，样品中其它成分及辅料对乌头碱的含量测定无干扰，对样品的测定结果无影响，本方法的专属性强。
5.测定溶液的稳定性试验
取乌头碱对照品溶液室温放置，于0、1、2、4小时照上述乌头碱限量检测方法测定，结果见表2。试验结果表明，测定溶液在4小时内稳定。
表2测定溶液的稳定性试验结果
6.精密度试验
取乌头碱对照品溶液，照上述乌头碱限量检测方法分别测定6次，结果见表3。试验结果表明，本方法的精密度良好。
表3精密度试验结果
7.回收率试验
取样品，采用加样回收试验，分别加入不同体积的浓度为43μg/ml的乌头碱对照品溶液，照上述乌头碱限量检测方法测定，结果见表4。试验结果表明，本方法的回收率良好。
表4回收率试验结果表
8.最低检测限试验
取浓度为43×10-2μg/ml的乌头碱对照品溶液，进样2μl，进行最低检测限测定，结果最低检测限为0.86ng。试验结果表明，本方法的最低检测限能满足样品中乌头碱限量检查的要求。
以下检测结果说明本发明方法在由制草乌、三七、断节参、白云参组方直接打粉入药制成的中药乌头碱限量检查的有益效果，结果见表5。
表5乌头碱限量检查结果
表5所述制草乌按中国药典2005年版一部制草乌项下方法炮制。
表5所述虎力散、虎力散胶囊、虎力散片按重量份数配比的原料药材为制草乌180～250，三七20～50，断节参10～30，白云参20～60。虎力散生产方法为取按上述重量份数配比的制草乌、三七、断节参、白云参，粉碎，分装，即得。虎力散胶囊生产方法为取按上述重量份数配比的制草乌、三七、断节参、白云参，粉碎，填充胶囊，即得。虎力散片生产方法为取按上述重量份数配比的制草乌、三七、断节参、白云参，粉碎，加入辅料，制软材，制粒，干燥，整粒，压片，包薄膜衣，包装，即得。
Claims (1)
1.含制草乌中药乌头碱限量检测方法，其特征是用高效液相色谱法检测由制草乌、三七、断节参、白云参组方打粉后直接入药制成的口服固体制剂中乌头碱的限量，色谱条件与系统适用性试验为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以39份乙腈-61份0.025mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相，检测波长235nm，理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备方法为取经五氧化二磷干燥至恒重的乌头碱对照品8mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶液90ml，频率40KHZ、功率120W超声溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取25ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；供试品溶液的制备方法为取样品细粉10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚50ml与浓氨试液1ml，密塞，摇匀，放置过夜，滤过，药渣加乙醚50ml连续振摇1小时，滤过，药渣用乙醚洗涤2次，每次15ml，滤过，洗液与滤液合并，40℃水浴蒸干，残渣加三氯甲烷25ml使溶解，转入分液漏斗中，用三氯甲烷15ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用0.1mol/L盐酸溶液提取4次，每次20ml，合并酸液，加浓氨试液5ml，再用三氯甲烷提取4次，每次20ml，三氯甲烷液合并，用水20ml振摇洗涤一次，取三氯甲烷液，50℃水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转入5ml量瓶中，用甲醇分次洗涤容器，洗液并入量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀；测定法为精密吸取对照品溶液10μl、供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
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