CN1857602A - 活力源制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种活力源制剂的质量控制方法，包括活力源制剂中麦冬、人参皂苷、五味子、黄芪的鉴别、乌头碱的限量检查和人参皂苷的含量测定。这些鉴别、限量检查和含量测定方法既可以单独用于活力源制剂的质量控制，又可以将其中的两种或两种以上方法结合起来用于活力源制剂的质量控制，可分别在活力源制剂的质量标准中采用。采用本发明可以有效地控制并提高活力源制剂的质量，保证活力源制剂的临床疗效稳定可靠，减少活力源制剂的不良反应。

Description

活力源制剂的质量控制方法

技术领域

本发明涉及药物的一种质量控制方法，具体来说涉及活力源制剂的成分鉴别、限量检查和含量测定的方法。

背景技术

活力源口服液及活力源片是临床使用较为广泛的一种中成药，采用人参茎叶总皂苷25份，黄芪50份，麦冬240份，五味子120份，附片5份等5味原料制成，具有益气养阴，强心益肾的功能，适用于气阴两虚心肾两亏的健忘失眠，记忆力减退，冠心病、慢性肝炎、糖尿病及更年期综合症而见上述证候者。其药品标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准(中药成方制剂)第17册185页(对比文件1)及186页(对比文件2)。中国专利200410046737(对比文件3)提到了多种活力源制剂，中国专利200510051496(对比文件4)也介绍了活力源滴丸及其制备方法。

但在这些对比文件中，除了对比文件1的活力源口服液和对比文件2的活力源片提供了人参茎叶总皂苷中的一种成分人参皂苷Re的一种鉴别方法之外，均没有提供制剂中人参茎叶总皂苷的其它成分以及黄芪、麦冬、五味子、附片等原料药的鉴别检查方法或限量检查方法，也没有提供制剂有效成分的含量测定方法，因此不能很好地控制所制得制剂的质量，影响了产品质量的提高，不能很好地保证活力源制剂的临床疗效。对比文件1和对比文件2的另一不足之处是，在对人参皂苷Re进行鉴别时，用正丁醇提取的次数太多，增加了溶剂的消耗量；对比文件2在对人参皂苷Re进行鉴别时，样品的有效成分加水溶解也不完全，因而影响了鉴别检查的效果。

发明内容

本发明的目的是提供活力源制剂的质量控制方法，包括制剂中一种以上原料药的鉴别方法、限量检查方法、有效成分的含量测定方法，以便能有效地控制并提高所制得制剂的质量，保证活力源制剂的临床疗效稳定可靠。

本发明的另一个目的是改进人参皂苷Re的鉴别方法，减少溶剂的消耗量，提高检验的可靠性。

本发明所提出的质量控制方法包括活力源制剂中麦冬、人参皂苷、五味子、黄芪的鉴别、乌头碱的限量检查和人参皂苷的含量测定，这些鉴别、限量检查和含量测定方法既可以单独用于活力源制剂的质量控制，又可以将其中的两种或两种以上方法结合起来用于活力源制剂的质量控制。

本发明是通过下列技术方案来实现的：

1、麦冬的鉴别检查

取制剂样品适量，在酸性水中加热回流，回流液用乙醚提取，提取液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材适量，同上制成对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-吡啶-水或甲酸乙酯-吡啶-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。而采用相同的方法制成的缺麦冬的阴性对照液色谱中，在此相应位置上无对应斑点。因此此方法具有较强的专属性和灵敏性。

具体的检查条件是：取约相当于含麦冬0.2～2g的药物制剂适量，其中液体制剂浓缩或加水至20～60ml，固体制剂加水20～60ml；样品加盐酸2～4ml，置水浴中加热回流0.5～1.5小时，取出，放冷，离心，取上清液移至分液漏斗中，用乙醚提取2～4次，每次10～20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材0.5～2g，加水20～60ml，加盐酸2～4ml，置水浴中加热回流0.5～1.5小时，取出，放冷，离心，取上清液移至分液漏斗中，用乙醚提取2～4次，每次10～20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，取以上两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-吡啶-水(1～4∶1～2∶1～4)或甲酸乙酯-吡啶-水(1～4∶1～2∶1～4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

2、人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re的鉴别检查

取制剂样品适量，其中固体制剂溶解后过滤；样品用水饱和的正丁醇提取，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re对照品适量，加正丁醇或甲醇制成对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。缺人参茎叶总皂苷的阴性对照无干扰，鉴别具有较强的专属性和灵敏性。

具体的检查条件是：取约相当于含人参茎叶总皂苷0.06～0.6g的药物制剂适量，其中固体制剂研细，加水20～200ml，超声使溶解，滤过；取所得滤液10～40ml或取液体制剂，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2～3次，每次5～20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇5～30ml使溶解，作为供试品溶液。取人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re对照品适量，加正丁醇或甲醇制成每1ml含1～5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述几种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(55～75∶25～45∶5～15)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％～15％的硫酸乙醇溶液，在100～110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。

3、五味子的鉴别检查

取制剂样品适量，加三氯甲烷加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材，同上法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸或石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺五味子的阴性对照液色谱中，在此相应位置上无对应斑点，因此此方法具有较强的专属性和灵敏性。

具体的检查条件是：取约相当于含五味子0.2～2g的药物制剂适量，其中液体制剂蒸干；样品加三氯甲烷10～30ml，加热回流20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材0.5～2g，加三氯甲烷10～30ml，加热回流20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(10～20∶2～10∶1～2)或石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸(10～20∶1～3∶1～2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4、黄芪的鉴别检查

取制剂样品适量，加甲醇加热回流提取，提取液蒸干，残渣加水使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取，提取液水浴蒸干，用稀甲醇溶解，加于中性氧化铝柱上，用稀甲醇洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液。用硅胶G薄层板，分别以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液和三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水放置的下层溶液为展开剂，展开，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在日光和紫外光下检视，供试品色谱在与黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。

具体的检查条件是：取约相当于含黄芪0.6g的制剂样品适量，其中液体制剂蒸干；样品加甲醇加热回流提取，提取液滤过，蒸干，残渣加饱和食盐水超声使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取，合并提取液，水浴蒸干，用30％～50％甲醇溶解，加于中性氧化铝柱上，用30％～50％甲醇洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液。用硅胶G薄层板，以三氯甲烷-甲醇-水(55～75∶25～45∶5～15)的下层溶液或三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(5～15∶10～30∶5～20∶3～8)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在日光和紫外光下检视，供试品色谱在与黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。

5、乌头碱的限量检查

活力源制剂的处方中有附片，附片含有乌头碱。为确保用药安全，对本品中的乌头碱含量进行了考察。取制剂样品适量，加乙醚振摇，再加氨试液振摇，放置，分取醚层，蒸干，加无水乙醇使溶解，作为供试品溶液。取乌头碱对照品，加无水乙醇制成对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-乙醇或甲苯-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。

具体的检查条件是：取约相当于含附片0.1～1g的药物制剂适量，其中液体制剂蒸干；样品置具塞锥形瓶中，加乙醚150～200ml，振摇10～20分钟，加氨试液10～20ml，振摇30～40分钟，放置2～3小时，分取醚层，蒸干，加无水乙醇0.5～1ml使溶解，作为供试品溶液。另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-乙醇(4～8∶2～6∶1～2)或甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(12～16∶2～6∶1～2)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点，样品中乌头碱的量应小于所含附片重量的0.033％。

6、人参皂苷的含量测定

照高效液相色谱法测定。用十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.08％磷酸或乙腈-0.05％磷酸为流动相，检测波长203±2nm，以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re为对照品；取制剂样品适量，加入三氯甲烷加热回流，滤过，残渣挥去三氯甲烷，放冷，加甲醇超声处理，滤过，即得供试品溶液；精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

具体的测定条件是：

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.08％磷酸(18～25∶75～82)或乙腈-0.05％磷酸(8～12∶30～50)；检测波长：203±2nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品：人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re对照品。

精密量取约相当于含人参茎叶总皂苷0.02～0.2g的液体制剂蒸干，用15～40ml三氯甲烷转移至具塞锥形瓶中，或取固体制剂研细，混匀，取约相当于含人参茎叶总皂苷0.02～0.2g的量，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷15～40ml；样品加热回流20～40分钟，滤过，将具塞锥形瓶中的残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇15～40ml，称定重量，超声处理15～45分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

优选的测定条件是：

填充剂：辛烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.08％磷酸(21～23∶77～79)；检测波长：203±2nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品：人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re对照品，溶剂为甲醇。

精密量取约相当于含人参茎叶总皂苷0.02～0.2g的液体制剂蒸干，残渣研细，用15～40ml三氯甲烷定量转移至具塞锥形瓶中，或取固体制剂研细，混匀，取约相当于含人参茎叶总皂苷0.02～0.2g的量，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷15～40ml；样品加热回流20～40分钟，滤过，将具塞锥形瓶中的残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇15～40ml，称定重量，超声处理15～45分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.2～0.8μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

测得制剂中人参皂苷Rg1的量不得少于所含人参茎叶总皂苷量的6.5％或测得制剂中人参皂苷Re的量不得少于所含人参茎叶总皂苷量的21.5％，或/和测得制剂中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量不得少于所含人参茎叶总皂苷量的28％。

经过试验及验证证明，本发明鉴别检查的方法简单、可靠，而在采用相同的方法制成的阴性对照液的色谱中，相应位置上无对应斑点，因此具有较强的专属性和灵敏性。限量检查的方法也比较简单、可靠，具有较强的专属性和灵敏性。

在含量测定的方法中，所用的流动相乙腈-0.08％磷酸与通常使用的乙腈-0.05％磷酸相比较，分离人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的保留时间缩短，减少了测定所消耗的时间；含量测定无干扰，分离度好，进样精密度和稳定性均较好，线性范围、重复性试验、加样回收试验等均能满足含量测定的要求。

由于进行了系统的研究，本发明不但能使用较少的溶剂鉴别活力源制剂的人参皂苷Re，还在对比文件1和对比文件2的基础上增加了麦冬、人参皂苷Rg1、五味子、黄芪的鉴别、乌头碱的限量检查和人参皂苷的含量测定，这些质量控制方法可分别在活力源制剂的质量标准中采用。采用本发明的方法能更好地控制活力源制剂的内在质量，保证活力源制剂的疗效稳定可靠，减少活力源制剂的不良反应。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的详细说明：

图1是供试品溶液在以乙腈-0.05％磷酸(99∶400)为流动相时的HPLC图谱。

图2是供试品溶液在以乙腈-0.08％磷酸(21∶79)为流动相时的HPLC图谱。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步阐述本发明的质量控制方法，但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下的实施例，凡是基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明要求保护的范围。

实施例1：活力源片剂的质量控制

麦冬的鉴别：取对比文件2的活力源片，除去糖衣，取细粉1.2g，加水40ml，加硫酸2ml，置水浴中加热回流1小时，取出，放冷，离心，取上清液移至分液漏斗中，用乙醚提取3次，每次15ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，加水40ml，同上自“加盐酸3ml”起，制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，取以上两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-吡啶-水(2∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

用另一展开系统进行验证，以甲酸乙酯-吡啶-水(2∶1∶2)为展开剂，展开，置紫外光灯(365nm)下检视，也可检出与麦冬对照药材相应的色谱斑点。

参考《中国药典》2000年版一部麦冬项下原药材的薄层鉴别方法进行了活力源制剂中麦冬的鉴别，但未找出有鉴别意义的特征斑点。

实施例2：活力源口服液的质量控制

人参皂苷的含量测定：

色谱条件与系统适用性试验：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.08％磷酸(21∶79)为流动相；检测波长203nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg、0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取对比文件1的活力源口服液50ml，蒸干，用25ml三氯甲烷定量转移至100ml具塞锥形瓶中，加热回流30分钟，滤过，将具塞锥形瓶中的残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率40KHz)30分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每ml含人参皂苷Rg1和人参皂苷Re总量不得少于0.35mg。

实施例3：活力源片的质量控制

(1)人参皂苷的鉴别：取对比文件2的活力源片，除去糖衣，研细，取细粉3g，加水100ml，超声使溶解，滤过，取滤液20ml置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，每次15ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Re对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。

(2)五味子的鉴别：取对比文件2的活力源片，除去糖衣，研细，取细粉3g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1g，同上法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

用另一展开系统进行验证，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，也可检出与五味子对照药材相应的色谱斑点。

(3)麦冬的鉴别：取对比文件2的活力源片，除去糖衣，研细，取细粉1g，加水50ml，加盐酸2ml，置水浴中加热回流1小时，取出，放冷，离心，取上清液移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，加水50ml，同上自“加盐酸2ml”起，制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，取以上两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-吡啶-水(3∶2∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

(4)含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05％酸(10∶40)为流动相；检测波长203nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg、0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取对比文件2的活力源片，除去糖衣，研细，混匀，取约0.8g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷30ml，加热回流25分钟，滤过，将具塞锥形瓶中的残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇30ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率40KHz)40分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.6μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法  精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含人参皂苷Rg1不得少于1.63mg，含人参皂苷Re不得少于5.37mg。

实施例4：活力源胶囊的质量控制

活力源胶囊的制备：取人参茎叶总皂苷25g，黄芪50g，麦冬240g，五味子120g，附片5g，其中人参茎叶总皂苷粉碎成细粉，备用；黄芪、麦冬、附片加水煎煮2次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加3倍量乙醇，沉淀，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度1.10～1.15(60℃)；五味子加水煎煮2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加3倍量乙醇，沉淀，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度1.10～1.15(60℃)，与上述药液合并。以人参茎叶总皂苷粉、淀粉78g、微粉硅胶156g作底料，喷入上述浸膏进行一步制粒，干燥，整粒，装胶囊2000粒，包装，即得。一次口服2粒，一日2～3次。

(1)人参皂苷的鉴别：取本品内容物3g，加水150ml，超声使溶解，滤过，取滤液30ml置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇15ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg₁对照品和人参皂苷Re对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(60∶30∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以12％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。

(2)五味子的鉴别：取本品内容物3g，加三氯甲烷25ml，加热回流25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1g，同上法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)麦冬的鉴别：取本品内容物2g，加水40ml，加盐酸3ml，置水浴中加热回流1小时，取出，放冷，离心，取上清液移至分液漏斗中，用乙醚提取3次，每次15ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，加水40ml，同上自“加盐酸3ml”起，制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，取以上两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲酸乙酯-吡啶-水(2∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

(4)乌头碱的限量检查：

供试品溶液的制备：取本品120粒的内容物，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚180ml，振摇12分钟，加氨试液15ml，振摇35分钟，放置2小时，分取醚层，蒸干，加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版(附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-乙醇(6.4∶3.6∶1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。结果在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上未出现斑点。

为确保检测结果的准确，试验中选用甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上也未出现斑点。

(5)含量测定：照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.08％磷酸(20∶80)为流动相；检测波长203nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg、0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取装量差异项下的内容物，研细，混匀，取约0.75g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷20ml，加热回流35分钟，滤过，将具塞锥形瓶中的残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇30ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率40KHz)30分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.8μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法  精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含人参皂苷Rg1不得少于0.82mg，人参皂苷Re不得少于2.68mg，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re总量不得少于3.5mg。

实施例5：颗粒剂的质量控制

活力源颗粒的制备：取人参茎叶总皂苷25g，黄芪50g，麦冬240g，五味子120g，附片5g，其中人参茎叶总皂苷、黄芪分别粉碎成细粉，备用；麦冬、五味子、附片加水煎煮2次，第一次3小时，11倍量水，第二次2小时，9倍量水，合并煎液，滤过，滤液采用三效减压浓缩的方法(温度：一效93℃，二效82℃，三效73℃；真空度：一效-0.02Mpa，二效-0.04Mpa，三效-0.06Mpa)浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)，备用；以人参茎叶总皂苷粉、黄芪粉以及淀粉2400g、微粉硅胶250g作底料，在喷雾压力为0.08～0.09Mpa、物料温度为70～75℃、进风温度为95～98℃、出风温度为85～86℃的条件下喷入上述浸膏进行一步制粒，干燥，分装1000袋，即得。一次口服1袋，一日2～3次。

(1)人参皂苷的鉴别：取本品15g，研细，加水150ml，超声使溶解，滤过，取滤液30ml置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇6ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(70∶40∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。

(2)五味子的鉴别：取本品15g，研细，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1g，同上法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(18∶8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)麦冬的鉴别：取本品10g，研细，加水50ml，加盐酸3ml，置水浴中加热回流1.5小时，取出，放冷，离心，取上清液移至分液漏斗中，用乙醚提取4次，每次15ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，加水40ml，同上自“加盐酸3ml”起，制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，取以上两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲酸乙酯-吡啶-水(2∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

(4)黄芪的鉴别：取本品内容物30g，加甲醇60ml加热回流提取1小时，提取液滤过，蒸干，残渣加饱和食盐水30ml超声使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并提取液，水浴蒸干，用40％甲醇50ml溶解，加于中性氧化铝柱(100～120目，10g，10mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液。用硅胶G薄层板，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液或三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(10∶20∶11∶5)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光和紫外光(365nm)下检视，供试品色谱在与黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。

(5)含量测定：

照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.08％磷酸(24∶76)为流动相；检测波长203nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg、0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品，研细，混匀，取约5g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷35ml，加热回流35分钟，滤过，将具塞锥形瓶中的残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇35ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率40KHz)30分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法  精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每袋含人参皂苷Rg1的量不得少于1.63mg。

实施例6：含量测定的色谱条件选择

参考《中国药典》2000年版一部中人参原药材含量测定项下人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量测定的条件，选用

色谱系统一  色谱柱    SUPELCOSIL^TM LC-8     25cm×4.6mm，5μm

            流动相    乙腈-0.05％磷酸(99∶400)

            柱温      35℃

            流速      1.00ml/min

            检测波长  203nm

在此色谱条件下样品中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re峰彼此分离较好，与其它成分峰能达到基线分离，但主峰保留时间较长，见附图1。

色谱系统二  色谱柱    SUPELCOSIL^TM LC-8   25cm×4.6mm，5μm

            流动相    乙腈-0.08％磷酸(21∶79)

            柱温      35℃

            流速      1.00ml/min

            检测波长  203nm

在此色谱条件下流动相为乙腈-0.08％磷酸(21∶79)，供试品中主峰保留时间提前近3分钟，而人参皂苷Rg1和人参皂苷Re峰仍然有较好的分离，与其它成分峰也能达到基线分离，见附图2。通过在该色谱系统下的考察，对照品溶液、供试品溶液的谱图中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re有较好的峰形；供试品溶液的谱图中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re峰与其它峰得到较好的分离，分离度R＞1.5，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re峰的理论板数＞2500，且所需用的分析时间缩短。

Claims (10)

1、活力源制剂的质量控制方法，其特征在于：采用薄层色谱法对制剂中一种以上的原料药进行鉴别检查或限量检查，采用高效液相色谱法测定制剂中人参皂苷的含量。

2、根据权利要求1的质量控制方法，其特征在于对制剂中的麦冬用薄层色谱法按如下条件进行鉴别检查：用在酸性水中加热回流后乙醚提取的方法制备供试品溶液和对照药材溶液，展开剂为醋酸乙酯-吡啶-水或甲酸乙酯-吡啶-水。

3、根据权利要求2的质量控制方法，其特征在于对制剂中的麦冬用薄层色谱法按如下条件进行鉴别检查：

a、供试品溶液的制备：取药物制剂，其中液体制剂浓缩或加水至20～60ml，固体制剂加水20～60ml；样品加盐酸2～4ml，置水浴中加热回流，取出，放冷，离心，取上清液用乙醚提取，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；

b、对照药材溶液的制备：取麦冬对照药材，加水20～60ml，加盐酸2～4ml，置水浴中加热回流，取出，放冷，离心，取上清液用乙醚提取，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为对照药材溶液；

c、薄层板：硅胶G薄层板；

d、展开剂：醋酸乙酯-吡啶-水(1～4∶1～2∶1～4)或甲酸乙酯-吡啶-水(1～4∶1～2∶1～4)；

e、显色：置紫外光灯下检视。

4、根据权利要求1的质量控制方法，其特征在于对制剂中的人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re用薄层色谱法按如下条件进行鉴别检查：

a、供试品溶液的制备：取药物制剂，其中固体制剂研细，加水，超声使溶解，滤过；取所得滤液或取液体制剂，用水饱和的正丁醇提取2～3次，每次5～20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；

b、对照品：人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re对照品；

c、薄层板：硅胶G薄层板；

d、展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(55～75∶25～45∶5～15)的下层溶液；

e、显色：硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰。

5、根据权利要求1的质量控制方法，其特征在于对制剂中的黄芪用薄层色谱法按如下条件进行鉴别检查：

a、供试品溶液的制备：取药物制剂，其中液体制剂蒸干；样品加甲醇加热回流提取，提取液滤过，蒸干，残渣加饱和食盐水使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取，合并提取液，蒸干，用30％～50％甲醇溶解，加于中性氧化铝柱上，用30％～50％甲醇洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；

b、对照品：黄芪甲苷对照品；

c、薄层板：硅胶G薄层板；

d、展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(55～75∶25～45∶5～15)的下层溶液或三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(5～15∶10～30∶5～20∶3～8)10℃以下放置的下层溶液；

e、显色：硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰，在日光和紫外光下检视。

6、根据权利要求1的质量控制方法，其特征在于对制剂中的五味子用薄层色谱法按如下条件进行鉴别检查：

a、供试品溶液的制备：取药物制剂，其中液体制剂蒸干；样品加三氯甲烷加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；

b、照药材溶液的制备：取五味子对照药材，加三氯甲烷加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为对照药材溶液；

c、薄层板：硅胶GF₂₅₄薄层板；

d、展开剂：石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(10～20∶2～10∶1～2)或石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸(10～20∶1～3∶1～2)；

e、显色：置紫外光灯下检视。

7、根据权利要求1的质量控制方法，其特征在于对制剂中的人参皂苷的含量用高效液相色谱法按如下条件进行测定：

a、填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.08％磷酸(18～25∶75～82)或乙腈-0.05％磷酸(8～12∶30～50)；检测波长：203±2nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000；

b、对照品：人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re对照品；

c、供试品溶液的制备：精密量取液体制剂，蒸干，用三氯甲烷转移至具塞锥形瓶中，或取固体制剂研细，混匀，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷；样品加热回流，滤过，残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇，称定重量，超声处理，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

8、根据权利要求7的质量控制方法，其特征在于对制剂中的人参皂苷的含量用高效液相色谱法按如下条件进行测定：

a、填充剂：辛烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.08％磷酸(21～23∶77～79)；检测波长：203nm；理论板数按人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰计算应不低于2000；

b、对照品：人参皂苷Rg1或/和人参皂苷Re对照品，溶剂为甲醇；

c、供试品溶液的制备：精密量取相当于含人参茎叶总皂苷0.02～0.2g的液体制剂蒸干，用15～40ml三氯甲烷转移至具塞锥形瓶中，或取固体制剂研细，混匀，取相当于含人参茎叶总皂苷0.02～0.2g的量，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷15～40ml；样品加热回流20～40分钟，滤过，将具塞锥形瓶中的残渣连同滤纸挥去三氯甲烷，放冷，精密加甲醇15～40ml，称定重量，超声处理15～45分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.2～0.8μm的微孔滤膜滤过，即得。

9、根据权利要求7或8的质量控制方法，其特征在于测得制剂中人参皂苷Rg1的量不得少于所含人参茎叶总皂苷量的6.5％或测得制剂中人参皂苷Re的量不得少于所含人参茎叶总皂苷量的21.5％，或/和测得制剂中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量不得少于所含人参茎叶总皂苷量的28％。

10、根据权利要求1的质量控制方法，其特征在于对制剂中附片的乌头碱限量用薄层色谱法按如下条件进行检查：

a、供试品溶液的制备：取药物制剂，其中液体制剂蒸干；样品加乙醚振摇，再加氨试液振摇，放置，分取醚层，蒸干，加无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；

b、对照品：乌头碱对照品；

c、薄层板：以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板；

d、展开剂：正己烷-醋酸乙酯-乙醇(4～8∶2～6∶1～2)或甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(12～16∶2～6∶1～2)；

e、显色：碘化铋钾试液为显色剂：

f、样品中乌头碱限量应小于所含附片重量的0.033％。

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