CN103869000B - 一种药物组合物制剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种药物组合物制剂的检测方法，该方法包括指标成分的HPLC含量测定和/或对照药材或指标成分的TLC鉴别中的一种或几种。本发明是以一定配比关系的黄芩、板蓝根、甘草、山豆根、麻黄和桔梗六味中药原料药，按照常规制法制成临床可接受的剂型，如颗粒剂、口服液、丸剂、散剂、注射剂等。每制剂单位量中黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，黄芩苷不得少于20mg；甘草以甘草酸（C42H62O16）计，甘草酸不得少于4.0mg。通过本发明的含量测定方法和/或鉴别方法，提高了产品稳定性，有利于提高产品质量的可控性。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物制剂的检测方法，特别涉及一种药物组合物制剂的含量测定方法和/或鉴别方法。
背景技术
以黄芩、板蓝根、甘草、山豆根、麻黄、桔梗六味中药组成的处方，其来自洛阳畜牧兽医总站1999年开始应用的经验处方，最初源自《伤寒论》“麻杏甘石汤”，经药味加减而来，去杏仁止咳平喘的组成部分，处方中各药以传统君、臣、佐、使顺序排列，黄芩、板蓝根清热解毒，以祛除外邪为本方之君药；甘草、麻黄祛痰止咳、宣肺平喘，以解除症状为本方之臣药；组方中佐以清热解毒药山豆根，与桔梗同用增强其清热解毒、利咽喉的作用，载药上行为本方之使药。诸味药材按适当比例配制，相互作用，相辅相承，使本处方具有清热解毒、止咳平喘的功效，临床制剂有以该六位中药制成的芩黄口服液和芩黄颗粒剂，用于治疗鸡传染性支气管。临床试验结果表明，鸡口腔滴服芩黄口服液1ml/kg，一日一次，连用1～2日，对人工发病的鸡传染性支气管炎有良好的治疗效果，疗效优于双黄连口服液。
以黄芩、板蓝根、甘草、山豆根、麻黄、桔梗六味药材制成的制剂，例如芩黄口服液和芩黄颗粒剂是基于临床经验处方开发的中药制剂，其处方成分比较多，前处理难度比较大，干扰多。目前，针对该方尚无质量标准，缺乏对该产品进行全面质控的检测方法，以保证产品质量的稳定性、均一性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种由黄芩、板蓝根、甘草、山豆根、麻黄、桔梗六味药材组成的药物组合物制剂的检测方法，通过建立该检测方法，可以加强该制剂质量的可控性和稳定性。
根据本发明，提供了一种药物组合物制剂的检测方法，其中，该方法中含有如下含量测定和/或鉴别中的一种或几种：
含量测定：
（1）黄芩
以黄芩苷为对照品，采用高效液相色谱法，所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水:冰乙酸为50:50:1（v/v/v）为流动相；检测波长为274nm；柱温为25℃；理论板数按黄芩苷峰计算不低于1500；
（2）甘草
以甘草酸单铵盐为对照品，采用高效液相色谱法，所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:0.2mol/L乙酸铵为65:34（v/v），冰乙酸调节pH值至4.50为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸峰计算不低于2000；
鉴别：
（3）麻黄
以盐酸麻黄碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以三氯甲烷:甲醇:浓氨试液为20:5:0.5（v/v/v）为展开剂，以0.5%茚三酮乙醇溶液为显色剂；
（4）桔梗
以桔梗对照药材做对照，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以三氯甲烷:乙醚为1∶1（v/v）为展开剂，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂；
（5）山豆根
以氧化苦参碱和苦参碱做对照，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以三氯甲烷:甲醇:浓氨试液为4:1:0.1（v/v/v）为展开剂，以稀碘化铋钾试液为显色剂；
（6）板蓝根
以板蓝根药材和靛玉红做对照，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以苯:三氯甲烷:丙酮:冰乙酸为5:4:1:0.1（v/v/v/v）为展开剂；
该方法中所述药物组合物制剂的原料药组成及配比（按重量计）为：
黄芩400~800份 板蓝根400~800份
甘草200~600份 山豆根200~600份
麻黄50~80份 桔梗50~80份。
优选地，所述药物组合物制剂的检测方法，其中，该方法中含有如下含量测定和/或鉴别中的一种或几种：
含量测定：
（1）黄芩
照高效液相色谱法测定；
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水:冰乙酸为50:50:1（v/v/v）为流动相；检测波长为274nm；柱温为25℃；理论板数按黄芩苷峰计算不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振荡使溶解，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含黄芩苷0.1mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂中的1个制剂单位，用50%甲醇定容至200~250ml，摇匀；
所述药物组合物制剂中每制剂单位中含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，黄芩苷不少于20mg；
（2）甘草
照高效液相色谱法测定；
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:0.2mol/L乙酸铵为65:34（v/v），冰乙酸调节pH值至4.50为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg；
供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂的2个制剂单位，用流动相稀释并定容至50ml，摇匀；
所述药物组合物制剂中每制剂单位中含甘草以甘草酸（C42H62O16）计，甘草酸不少于4.0mg；
鉴别方法：
（3）麻黄
照薄层色谱法鉴别；
取所述药物组合物制剂，加浓氨试液使呈碱性，再用乙醚提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，作为供试品溶液，每1ml所述供试品溶液中含有3~10个制剂单位；
另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5~20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:浓氨试液为20:5:0.5（v/v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（4）桔梗
照薄层色谱法鉴别；
取所述药物组合物制剂，加7%硫酸乙醇溶液:水为1∶3（v/v）的混合溶液，加热回流，滤过，滤液用三氯甲烷提取，三氯甲烷液加水洗涤，然后用无水硫酸钠、无水硫酸镁、无水氯化钙等无机脱水试剂中的一种或几种对三氯甲烷液进行脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有20~30个制剂单位；
另取桔梗对照药材，加7%硫酸乙醇溶液∶水为1∶3（v/v）的混合溶液，加热回流，滤过，滤液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗涤，无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成对照药材溶液，即每1ml甲醇中含有所述桔梗对照药材2~3g；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5~20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶乙醚为1∶1（v/v）为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
（5）山豆根
照薄层色谱法鉴别；
取所述药物组合物制剂，加浓氨试液将pH值调至8.0~12.0，再加三氯甲烷，提取，过滤，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有5~10个制剂单位；
另取氧化苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg所述氧化苦参碱对照品的溶液，作为氧化苦参碱对照品溶液；
另取苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg所述苦参碱对照品的溶液，作为苦参碱对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3～20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶浓氨试液为4∶1∶0.1（v/v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（6）板蓝根
照薄层色谱法鉴别；
取所述药物组合物制剂，加硫酸钠饱和的水溶液，用乙醚提取，乙醚液用氢氧化钠溶液洗涤，再用水洗涤，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有30~60个制剂单位；
另取板蓝根对照药材，加入三氯甲烷，超声处理5~30分钟，滤过，滤液浓缩至每1ml溶液含有1g所述板蓝根对照药材，作为对照药材溶液；
再取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5~20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯∶三氯甲烷∶丙酮∶冰乙酸为5∶4∶1∶0.1（v/v/v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
该方法中所述药物组合物制剂的原料药组成及配比（按重量计）为：
黄芩400~800份 板蓝根400~800份
甘草200~600份 山豆根200~600份
麻黄50~80份 桔梗50~80份。
优选地，所述药物组合物制剂的原料药组成及配比为：
黄芩600g 板蓝根600g
甘草400g 山豆根400g
麻黄66g 桔梗66g。
上述药物组合物制剂由如下方法制成：
板蓝根用乙醇回流提取，过滤，合并滤液，经浓缩，收集浓缩液，备用；麻黄用水于70℃以下真空动态提取，过滤，浓缩，浓缩液用NaOH调pH值至10~12，水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加稀盐酸调节pH至4~5，备用；黄芩、山豆根、甘草、桔梗4味药材与板蓝根经乙醇提取后的药渣混合，用8~10体积份的水于70℃以下真空动态提取，过滤，滤液经浓缩，备用；合并以上各备用液，与药学上可接受的赋形剂混合制成1000个制剂单位，所述制剂为颗粒剂、口服液、丸剂、注射剂。
所述该药物组合物的口服液的鉴别还包括：该口服液pH为4.0~7.0；该口服液的相对密度不低于1.02。
本发明是以一定配比关系的黄芩、板蓝根、甘草、山豆根、麻黄和桔梗六味中药原料药，按照常规制法制成临床可接受的剂型，如颗粒剂、口服液、丸剂、散剂、注射剂等。本发明提供了黄芩苷和甘草酸的HPLC方法，该方法专属性强，重现性好。本发明还提供了麻黄等其他四味药材的TLC鉴别方法，通过本发明的含量测定方法和/或鉴别方法，提高了产品稳定性，有利于提高产品质量的可控性。
附图说明
图1芩黄口服液之黄芩苷对照品、供试品、阴性对照品的HPLC图。
图2芩黄口服液之甘草酸对照品、供试品、阴性对照品的HPLC图。
图3芩黄颗粒剂之黄芩苷对照品、供试品、阴性对照品的HPLC图。
图4芩黄颗粒剂之甘草酸对照品、供试品、阴性对照品的HPLC图。
具体实施方式
为使本发明更加容易理解，下面将结合实施例来详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。本发明所述的1个制剂单位即为1g或1ml或1片或1丸或1粒等，例如，颗粒剂的1个制剂单位即为颗粒剂1g；口服液的1个制剂单位为口服液1ml。本发明中采用“%”表达含量或浓度时，未特别说明之处均为质量百分比。本发明所提供的该药物组合物制剂的检测方法中包含的含量测定和/或鉴别中的一种或几种是指对于黄芩和甘草两味药材的HPLC含量测定方法以及麻黄、桔梗、山豆根和板蓝根四味药材的TLC鉴别方法这六种方法中任选其一或几种作为该药物组合物制剂的检测方法，以下的实施例中均例举了各制剂中该六种方法的组合作为其检测方法，这仅仅是示范而已，本发明对该六种方法是选取一种，还是两种或多种方法的组合并不做限制。
实施例
以下通过实验例来进一步说明本发明的具体实施方式：
实施例1芩黄口服液及芩黄颗粒剂的制备
（1）芩黄口服液：处方：黄芩600g，板蓝根600g，甘草400g，山豆根400g，麻黄66g，桔梗66g。制法：以上6味，板蓝根用乙醇回流提取3次，每次4800ml，过滤，合并滤液，回收乙醇，收集浓缩液，备用；麻黄置提取罐内加8倍量水，50℃下真空动态提取6小时，过滤，浓缩，浓缩液加0.1mol/L NaOH调pH值至11，水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加稀盐酸调节pH至4，备用；黄芩、山豆根、甘草、桔梗4味药材与板蓝根经乙醇提取后的药渣一起置提取罐内，50℃下真空动态提取4小时，过滤，浓缩至相对密度1.3（70℃），加乙醇使含醇量达60%，冷藏24小时，过滤，滤液回收乙醇，收集浓缩液，备用。合并以上各备用液，加纯化水制成1000个制剂单位，即口服液1000ml。
（2）芩黄颗粒剂：处方：黄芩600g，板蓝根600g，甘草400g，山豆根400g，麻黄66g，桔梗66g。制法：以上6味，板蓝根用乙醇回流提取3次，每次4800ml，过滤，合并滤液，回收乙醇，收集浓缩液，备用；麻黄置提取罐内加8倍量水，70℃下真空动态提取6小时，滤过，浓缩，浓缩液加0.1mol/L NaOH调pH值至12，水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加稀盐酸调节pH至5，备用；黄芩、山豆根、甘草、桔梗4味药材与板蓝根经乙醇取提后的药渣一起置提取罐内，加水20.66L70℃下真空动态提取4小时，滤过，浓缩，备用。合并以上各备用液，加蔗糖、糊精适量制成颗粒剂，干燥，制成1000个制剂单位，即颗粒剂1000g。
实施例2芩黄口服液鉴别方法的专属性考察
（1）试剂与样品
对照品：盐酸麻黄碱，靛玉红，氧化苦参碱，苦参碱，桔梗对照药材，板蓝根对照药材均购自中国兽医药品监察所。
样品：实施例1（1）制备。
阴性样品：按照实施例1（1）方法制备各鉴别项阴性对照样品。
（2）麻黄的鉴别
取实施例1（1）制备的样品5ml，浓缩至近干，加0.2%盐酸溶液20ml，超声处理使溶解，用浓氨试液调节pH值至11～12，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；按处方配比称取除麻黄外其它药材并按实施例1（1）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶浓氨试液（20∶5∶0.5，v/v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果：在与对照品色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
（3）桔梗的鉴别
取实施例1（1）制备的样品20ml，加7%硫酸乙醇溶液∶水（1∶3，v/v）混合溶液20ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液用三氯甲烷振摇提取3次，每次40ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤，无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材3g，加7%硫酸乙醇溶液-水（1∶3）混合溶液40ml，同法制成对照药材溶液；按处方配比称取除桔梗外其它药材并按实施例1（1）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5~10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶乙醚（1∶1，v/v）为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果：在与对照药材色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
（4）山豆根的鉴别
取实施例1（1）制备的样品10ml，加浓氨试液数滴使呈碱性，再加三氯甲烷10ml，振摇提取，静置，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取氧化苦参碱及苦参碱对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按处方配比称取除山豆根外其它药材并按实施例1（1）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各3～6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶浓氨试液(4∶1∶0.1，v/v/v)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。结果：在与对照品色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
（5）板蓝根的鉴别
取实施例1（1）制备的样品30ml，加硫酸钠饱和的水溶液30ml，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，再用水洗涤3次，每次20ml，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材1g，加入三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按处方配比称取除板蓝根外其它药材并按实施例1（1）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯∶三氯甲烷∶丙酮∶冰乙酸(5∶4∶1∶0.1，v/v/v/v)为展开剂，展开，取出，晾干，立即观察。结果：在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
实施例3芩黄口服液中黄芩苷含量测定的方法学考察
（1）仪器与试剂、样品
仪器：依利特P230型高效液相色谱仪（UV230型紫外检测器）。
试剂：甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其他试剂均为分析纯。
对照品：黄芩苷对照品购自中国兽医药品监察所。
样品：实施例1（1）制备。
（2）色谱条件
色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱(150×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇:水:冰乙酸（50:50:1，v/v/v）；检测波长为274nm；柱温为25℃；流速为1.0ml/min。
（3）溶液的制备
对照品溶液的制备称取黄芩苷对照品10.18mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振荡使溶解，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密量取实施例1（1）制备的样品2ml，置100ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
阴性对照溶液的制备按照实施例1（1）的制备方法制备缺黄芩的阴性制剂，取阴性制剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，即得。
（4）专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，检测结果见图1，其中，1是黄芩苷对照品色谱图，2是供试品（黄芩苷）色谱图，3是缺黄芩阴性对照色谱图。由图1可知，1和2中在约10分钟时出现典型的黄芩苷峰（即1中标号为A的峰，2中编号为A的峰），且与3比较，表明阴性对照溶液在与对照品、供试品色谱峰相应的位置上无干扰，方法专属性良好。
（5）线性范围考察
精密量取黄芩苷对照品溶液（509.2μg/ml）2、4、8、12、20ml置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为20.4、40.7、81.5、122.2、203.7、509.2μg/ml的对照品溶液。分别进样10μl，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值（A）对进样量（x）进行回归，得标准曲线方程，结果表明，在0.204～5.092μg范围内，黄芩苷峰面积值与进样量有良好的线性关系。数据见表1。
表1黄芩苷线性关系试验结果
（6）重复性试验
取实施例1（1）制备的同一批样品，精密量取2ml，平行操作6份，按照（3）中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精密吸取6份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积并计算含量，结果测得黄芩苷含量RSD为1.1%，表明方法精密度良好。结果见表2。
表2重复性试验结果
（7）回收率试验
精密量取已知含量的芩黄口服液1ml，置100ml量瓶中，精密加入黄芩苷对照品溶液（2.0032mg/ml）10ml，平行操作6份，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，记录峰面积并计算加样回收率，结果平均回收率为99.4%，RSD为0.59%，表明方法准确度良好，数据见表3。
表3黄芩苷回收率试验测定结果
（8）三批样品含量测定
取按照实施例1（1）制备的3批芩黄口服液（批号分别为：20110501、20110601、20110701），按照本发明建立的含量测定方法测定黄芩苷的含量，其结果分别为23.9mg/ml，27.6mg/ml，22.5mg/ml，根据黄芩药材中黄芩苷的含量限度为不少于9.0%，考虑到药材产地及生产过程中的提取效率和纯化过程中的损失，将本品中黄芩苷的含量限度定为每1ml中不少于20mg。
实施例4芩黄口服液中甘草酸含量测定的方法学考察
（1）仪器与试剂、样品
仪器：依利特P230型高效液相色谱仪（UV230型紫外检测器）。
试剂：甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其他试剂均为分析纯。
对照品：甘草酸单铵盐对照品购自中国兽医药品监察所。
样品：实施例1（1）制备。
（2）色谱条件
色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱(150×4.6mm,5μm)；流动相为65:34（v/v）的甲醇:0.2mol/L乙酸铵（冰乙酸调节pH值至4.50）；检测波长为250nm；柱温为30℃；流速为1.0ml/min。
（3）溶液的制备
对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品10.45mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密量取实施例1（1）制备的样品2ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
阴性对照溶液的制备按照实施例1（1）制备方法制备缺甘草的阴性制剂，取阴性制剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，即得。
（4）专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，检测结果见图2，其中，其中1是甘草酸对照品色谱图，2是供试品（甘草酸）色谱图，3是缺甘草阴性对照色谱图。由图2可知，1和2中在约13分钟时出现典型的甘草酸峰（即1中标号为B的峰，2中编号为B的峰），且与3比较，表明阴性对照溶液在与对照品、供试品色谱峰相应的位置上无干扰，方法专属性良好。
（5）线性范围考察
精密量取甘草酸对照品溶液（797.6μg/ml）5、10、20ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为89.7、159.5、319.0μg/ml的对照品溶液。89.7μg/ml的对照品溶液分别进样5、10μl，其余对照品溶液各进样10μl，记录色谱图，测定峰面积，并以峰面积值（A）对进样量（x）进行回归，得标准曲线方程，结果表明，在0.448～7.976μg范围内，甘草酸峰面积值与进样量有良好的线性关系。数据见表4
表4甘草酸线性关系试验结果
（6）重复性试验
取实施例1（1）制备的同一批样品，精密量取2ml，平行操作6份，按照（3）中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精密吸取6份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积并计算含量，结果测得甘草酸含量RSD为2.6％，表明方法重复性良好。结果见表5。
表5重复性试验结果
（7）回收率试验
精密量取已知含量的芩黄口服液1ml，置50ml量瓶中，精密加入甘草酸对照品溶液（0.8044mg/ml）5ml，平行操作6份，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，记录峰面积并计算加样回收率，结果平均回收率为97.5%，RSD为1.55%，表明方法准确度良好，数据见表6。
表6甘草酸回收率试验测定结果
（8）三批样品含量测定
取按照实施例1（1）制备的3批芩黄口服液（批号分别为：20110501、20110601、20110701），按照本发明建立的含量测定方法测定甘草酸的含量，其结果分别为4.5mg/ml，4.3mg/ml，4.8mg/ml，根据甘草中甘草酸的含量限度为不少于2.0％，考虑到药材产地及提取效率和纯化损失，将本品中甘草酸的含量限度定为每1ml中不少于4.0mg。
实施例5芩黄颗粒剂鉴别方法的专属性考察
（1）试剂与样品
对照品：盐酸麻黄碱，靛玉红，氧化苦参碱，苦参碱，桔梗对照药材，板蓝根对照药材均购自中国兽医药品监察所。
样品：实施例1（2）制备。
阴性样品：按照实施例1（2）方法制备各鉴别项阴性对照样品。
（2）麻黄的鉴别
取实施例1（2）制备的样品5g，浓缩至近干，加浓氨试液5滴和乙醚30ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；按处方配比称取除麻黄外其它药材并按实施例1（2）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:浓氨试液(20:5:0.5，v/v/v)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果：在与对照品色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
取实施例1（2）制备的样品15g，加7%硫酸乙醇溶液∶水（1∶3，v/v）混合溶液40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液用三氯甲烷振摇提取3次，每次40ml，合并三氯甲烷液，加水100ml洗涤，三氯甲烷液用适量无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取桔梗对照药材1g，加7%硫酸乙醇溶液:水（1∶3，v/v）混合溶液20ml，同法制成对照药材溶液；按处方配比称取除桔梗外其它药材并按实施例1（2）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5~10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:乙醚（1:1，v/v）为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果：在与对照药材色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
（4）山豆根的鉴别
取实施例1（2）制备的样品5g，加浓氨试液4ml和加三氯甲烷50ml，超声处理20分钟，滤过，重复操作1次，合并滤液，蒸干，加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取氧化苦参碱及苦参碱对照品，分别加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按处方配比称取除山豆根外其它药材并按实施例1（2）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各6～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:浓氨试液(4:1:0.1，v/v/v)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。结果：在与对照品色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
（5）板蓝根的鉴别
取实施例1（2）制备的样品15g，加饱和硫酸钠溶液60ml，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，再用水洗涤3次，每次20ml，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材1g，加入三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；再取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按处方配比称取除板蓝根外其它药材并按实施例1（2）制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯:三氯甲烷:丙酮:冰乙酸(5:4:1:0.1，v/v/v)为展开剂，展开，取出，晾干，立即观察。结果：在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。
实施例6芩黄颗粒剂中黄芩苷含量测定的方法学考察
（1）仪器与试剂、样品
仪器：依利特P230型高效液相色谱仪（UV230型紫外检测器）。
试剂：甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其他试剂均为分析纯。
对照品：黄芩苷对照品购自中国兽医药品监察所。
样品：实施例1（2）制备。
（2）色谱条件
色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱(150×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇:水:冰乙酸（50:50:1，v/v/v）；检测波长为274nm；柱温为25℃；流速为1.0ml/min。
（3）溶液的制备
对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品10.18mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振荡使溶解，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取实施例1（2）制备的样品0.4996g，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
阴性对照溶液的制备按照实施例1（2）的制备方法制备缺黄芩的阴性制剂，取阴性制剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，即得。
（4）专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，检测结果见图3，其中，其中1是黄芩苷对照品色谱图，2是供试品（黄芩苷）色谱图，3是缺黄芩阴性对照色谱图。由图3可知，1和2中在约10分钟时出现典型的黄芩苷峰（即1中标号为A的峰，2中编号为A的峰），且与3比较，表明阴性对照溶液在与对照品、供试品色谱峰相应的位置上无干扰，方法专属性良好。
（5）线性范围考察
精密量取黄芩苷对照品溶液（509.2μg/ml）2、4、8、12、20ml置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为20.4、40.7、81.5、122.2、203.7、509.2μg/ml的对照品溶液。分别进样10μl，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值（A）对进样量（x）进行回归，得标准曲线方程，结果表明，在0.204～5.092μg范围内，黄芩苷峰面积值与进样量有良好的线性关系。数据见表7。
表7黄芩苷线性关系试验结果
（6）重复性试验
取实施例1（2）制备的同一批样品，称取0.5g，精密称定，平行操作6份，按照（3）中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精密吸取6份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积并计算含量，结果测得黄芩苷含量RSD为0.77%，表明方法精密度良好。结果见表8。
表8重复性试验结果
（7）回收率试验
取已知含量的芩黄颗粒剂0.25g，精密称定，置100ml量瓶中，精密加入黄芩苷对照品溶液（0.6240mg/ml）10ml，平行操作6份，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，记录峰面积并计算加样回收率，结果平均回收率为99.7%，RSD为0.16%，表明方法准确度良好，数据见表9。
表9黄芩苷回收率试验测定结果
（8）三批样品含量测定
取按照实施例1（2）制备的3批芩黄颗粒剂（批号分别为：20110501、20110601、20110701），按照本发明建立的含量测定方法测定黄芩苷的含量，其结果分别为28.1mg/g，29.5mg/g，28.6mg/g，根据黄芩药材中黄芩苷的含量限度为不少于9.0%，考虑到药材产地及生产提取效率，将本品中黄芩苷的含量限度定为每1g中不少于25mg。
实施例7芩黄颗粒剂中甘草酸含量测定的方法学考察
（1）仪器与试剂、样品
仪器：依利特P230型高效液相色谱仪（UV230型紫外检测器）。
试剂：甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其他试剂均为分析纯。
对照品：甘草酸单铵盐对照品购自中国兽医药品监察所。
样品：实施例1（2）制备。
（2）色谱条件
色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱(150×4.6mm,5μm)；流动相为65:34（v/v）的甲醇:0.2mol/L乙酸铵（冰乙酸调节pH值至4.50）；检测波长为250nm；柱温为30℃；流速为1.0ml/min。
（3）溶液的制备
对照品溶液的制备精密称取甘草酸单铵盐对照品10.45mg，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取实施例1（2）制备的样品1.9896g，置50ml量瓶中，加流动相适量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
阴性对照溶液的制备：按照实施例1（2）制备方法制备缺甘草的阴性制剂，取阴性制剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，即得。
（4）专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，检测结果见图4，其中，其中1是甘草酸对照品色谱图，2是供试品（甘草酸）色谱图，3是缺甘草阴性对照色谱图。由图4可知，1和2中在约13分钟时出现典型的甘草酸峰（即1中标号为B的峰，2中编号为B的峰），且与3比较，表明阴性对照溶液在与对照品、供试品色谱峰相应的位置上无干扰，方法专属性良好。
（5）线性范围考察
精密量取甘草酸对照品溶液（797.6μg/ml）10、20ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为159.5、319.0μg/ml的对照品溶液。89.7μg/ml的对照品溶液分别进样5、10μl，其余对照品溶液各进样10μl，记录色谱图，测定峰面积，并以峰面积值（A）对进样量（x）进行回归，得标准曲线方程，结果表明，在0.448～7.976μg范围内，甘草酸峰面积值与进样量有良好的线性关系。数据见表10。
表10甘草酸线性关系试验结果
（6）重复性试验
取实施例1（2）制备的同一批样品，称取2g，精密称定，平行操作6份，按照（3）中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精密吸取6份供试品溶液各10μl，记录峰面积并计算含量，结果测得甘草酸含量RSD为2.5%，表明方法重复性良好。结果见表11。
表11重复性试验结果
（7）回收率试验
称取已知含量的芩黄颗粒剂1g，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入甘草酸对照品溶液（0.8044mg/ml）5ml，平行操作6份，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，记录峰面积并计算加样回收率，结果平均回收率为99.3%，RSD为0.59%，表明方法准确度良好，数据见表12。
表12甘草酸回收率试验测定结果
（8）三批样品含量测定
取按照实施例1（2）制备的3批芩黄颗粒剂（批号分别为：20110501、20110601、20110701），按照本发明建立的含量测定方法测定甘草酸的含量，其结果分别为4.9mg/ml，4.6mg/ml，5.1mg/ml，根据甘草中甘草酸的含量限度为不少于2.0％，考虑到药材产地及提取效率和纯化损失，将本品中甘草酸的含量限度定为每1ml中不少于4.0mg。
实施例8.芩黄口服液中pH值测定
取按照实施例1（1）制备的3批芩黄口服液（批号分别为：20110501、20110601、20110701），按照pH值测定法测定其pH值，结果分别为6.1，6.0，6.1。
实施例9.芩黄口服液相对密度的测定
常温下，取按照实施例1（1）制备的3批芩黄口服液（批号分别为：20110501、20110601、20110701），按照相对密度测定法测定其相对密度，结果分别为1.06，1.06，1.05。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种药物组合物制剂的检测方法，其特征在于，该方法中含有如下含量测定和鉴别：
含量测定：
(1)黄芩
以黄芩苷为对照品，采用高效液相色谱法，所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水:冰乙酸的体积比为50:50:1为流动相；检测波长为274nm；柱温为25℃；理论板数按黄芩苷峰计算不低于1500；
其中，对照品溶液的制备：称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，置水浴中振荡使溶解，放置至室温，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含黄芩苷0.1mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂中的1个制剂单位，用50％甲醇定容至200～250ml，摇匀；
(2)甘草
以甘草酸单铵盐为对照品，采用高效液相色谱法，所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:0.2mol/L乙酸铵的体积比为65:34，冰乙酸调节pH值至4.50为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸峰计算不低于2000；
其中，对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg；
供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂的2个制剂单位，用流动相稀释并定容至50ml，摇匀；
鉴别：
(3)麻黄
以盐酸麻黄碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以三氯甲烷:甲醇:浓氨试液的体积比为20:5:0.5为展开剂，以0.5％茚三酮乙醇溶液为显色剂；
其中，供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂，加浓氨试液使呈碱性，再用乙醚提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，作为供试品溶液，每1ml所述供试品溶液中含有3～10个制剂单位；
对照品溶液的制备：另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
(4)桔梗
以桔梗对照药材做对照，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以三氯甲烷:乙醚的体积比为1:1为展开剂，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂；
供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂，加7％硫酸乙醇溶液:水的体积比为1∶3的混合溶液，加热回流，滤过，滤液用三氯甲烷提取，三氯甲烷液加水洗涤，然后用无水硫酸钠、无水硫酸镁和无水氯化钙无机脱水试剂中的一种或几种对三氯甲烷液进行脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有20～30个制剂单位；
对照品溶液的制备：另取桔梗对照药材，加7％硫酸乙醇溶液:水的体积比为1∶3的混合溶液，加热回流，滤过，滤液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗涤，无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成对照药材溶液，即每1ml甲醇中含有所述桔梗对照药材2～3g；
(5)山豆根
以氧化苦参碱和苦参碱做对照，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以三氯甲烷:甲醇:浓氨试液的体积比为4:1:0.1为展开剂，以稀碘化铋钾试液为显色剂；
其中，供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂，加浓氨试液将pH值调至8.0～12.0，再加三氯甲烷，提取，过滤，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有5～10个制剂单位；
氧化苦参碱对照品溶液的制备：另取氧化苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg所述氧化苦参碱对照品的溶液；
苦参碱对照品溶液的制备：另取苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg所述苦参碱对照品的溶液；
(6)板蓝根
以板蓝根药材和靛玉红做对照，采用薄层色谱法鉴别，所述薄层色谱条件为：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以苯:三氯甲烷:丙酮:冰乙酸的体积比为5:4:1:0.1为展开剂；
其中，供试品溶液的制备：取所述药物组合物制剂，加硫酸钠饱和的水溶液，用乙醚提取，乙醚液用氢氧化钠溶液洗涤，再用水洗涤，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有30～60个制剂单位；
对照药材溶液的制备：另取板蓝根对照药材，加入三氯甲烷，超声处理5～30分钟，滤过，滤液浓缩至每1ml溶液含有1g所述板蓝根对照药材；
对照品溶液的制备：取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液；
按重量计，该方法中所述药物组合物制剂的原料药组成及配比为：
黄芩 400～800份 板蓝根 400～800份
甘草 200～600份 山豆根 200～600份
麻黄 50～80份 桔梗 50～80份。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述药物组合物制剂的原料药组成及配比为：
黄芩 600g 板蓝根 600g
甘草 400g 山豆根 400g
麻黄 66g 桔梗 66g。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述药物组合物制剂由如下方法制成：
板蓝根用乙醇提取，过滤，合并滤液，经浓缩，收集浓缩液，备用；麻黄用水于70℃以下真空动态提取，过滤，浓缩，浓缩液用NaOH调pH值至10～12，水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加稀盐酸调节pH至4～5，备用；黄芩、山豆根、甘草、桔梗4味药材与板蓝根经乙醇提取后的药渣混合，用纯化水于70℃以下真空动态提取，过滤，滤液经浓缩，备用；合并以上各备用液，与药学上可接受的赋形剂混合制成1000个制剂单位，所述制剂为颗粒剂、口服液、丸剂或注射剂。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述药物组合物制剂由如下方法制成：
板蓝根用6～10体积份的乙醇回流提取3次，过滤，合并滤液，经浓缩，收集浓缩液，备用；麻黄用8体积份的水于50～70℃真空动态提取6小时，过滤，浓缩，浓缩液用0.1mol/LNaOH调pH值至11～12，水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加稀盐酸调节pH至4～5，备用；黄芩、山豆根、甘草、桔梗4味药材与板蓝根经乙醇提取后的药渣混合，用8～10体积份的水于50～70℃真空动态提取4小时，过滤，滤液经浓缩，备用；合并以上各备用液，浓缩至相对密度为1.1～1.3，加乙醇使含醇量为60～90％，冷藏，过滤，滤液经浓缩，备用，合并以上各备用液，加水制成1000个制剂单位，即口服液1000ml。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述药物组合物制剂由如下方法制成：
板蓝根用6～10体积份的乙醇回流提取3次，过滤，合并滤液，经浓缩，收集浓缩液，备用；麻黄用8体积份的水于50～70℃真空动态提取6小时，过滤，浓缩，浓缩液用0.1mol/LNaOH调pH值至11～12，水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加稀盐酸调节pH至4～5，备用；黄芩、山豆根、甘草、桔梗4味药材与板蓝根经乙醇提取后的药渣混合，用8～10体积份的水于50～70℃真空动态提取4小时，过滤，滤液经浓缩，备用；合并以上各备用液，加药学上可接受的赋形剂制成1000个制剂单位，即颗粒剂1000g。
6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，
(1)所述黄芩的含量测定方法中，
供试品溶液的制备：取所述口服液2ml，用50％甲醇定容至100ml，混匀后量取其中的10ml，用50％甲醇定容至50ml，摇匀；
(2)所述甘草的含量测定方法中，
供试品溶液的制备：取所述口服液2ml，用流动相稀释并定容至50ml，摇匀；
(3)所述麻黄的鉴别方法中，
供试品溶液的制备：取所述口服液5ml，浓缩至干，用0.2％盐酸溶液20ml，超声处理使溶解，用浓氨试液调pH至11～12，加乙醚，所述乙醚与所述口服液的体积比为5～20倍，过滤，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有3～10ml所述口服液；
(4)所述桔梗的鉴别方法：
供试品溶液的制备：取所述口服液20ml，加7％硫酸乙醇溶液∶水的体积比为1∶3的混合溶液20ml，加热回流，滤过，滤液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗涤，无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有所述口服液10～30ml；
(5)所述山豆根的鉴别方法中，
供试品溶液的制备：取所述口服液10ml，加浓氨试液将pH值调至8.0～12.0，再加三氯甲烷提取，过滤，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有所述口服液5～20ml；
(6)所述板蓝根的鉴别方法中，
供试品溶液的制备：取所述口服液，加硫酸钠饱和水溶液，该硫酸钠饱和水溶液与所述口服液的体积比为1:1，用乙醚提取，合并乙醚液，乙醚液先用1％氢氧化钠溶液洗涤，再用水洗涤，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml所述供试品溶液中含有所述口服液40～80ml。
7.根据权利要求4或6所述的检测方法，其特征在于，所述鉴别还包括：该口服液pH为4.0～7.0。
8.根据权利要求4或6所述的检测方法，其特征在于，所述鉴别还包括：该口服液的相对密度不低于1.02。
9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，
(1)所述黄芩的含量测定中，
供试品溶液的制备：取所述颗粒剂0.5g，用50％甲醇定容至100ml，摇匀；
(2)所述甘草的含量测定中，
供试品溶液的制备：取所述颗粒剂2g，用流动相稀释并定容至50ml，摇匀；
(3)所述麻黄的鉴别方法中，
供试品溶液的制备：取所述颗粒剂，加乙醚，所述乙醚与所述颗粒剂的体积质量比为20～40ml/g，用浓氨试液调pH至11～12，超声处理5～30min，过滤，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml三氯甲烷中含有3～10g所述颗粒剂；
(4)所述桔梗的鉴别方法中，
供试品溶液的制备：取所述颗粒剂，加7％硫酸乙醇溶液∶水的体积比为1∶3的混合溶液，该混合溶液与所述颗粒剂的体积质量比为2～5ml/g，加热回流，滤过，滤液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗涤，无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液，即每1ml甲醇中含有所述颗粒剂20～40g；
(5)所述山豆根的鉴别方法中，
供试品溶液的制备：取所述颗粒剂，加浓氨试液将pH值调至8.0～12.0，再加三氯甲烷，所加三氯甲烷与所述颗粒剂的体积质量比为5～20ml/g，提取，过滤，收集三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml三氯甲烷中含有所述颗粒剂3～10g；
(6)所述板蓝根的鉴别方法中，
供试品溶液的制备：取所述颗粒剂，加硫酸钠饱和水溶液，该硫酸钠饱和水溶液与所述颗粒剂的体积质量比为2～6ml/g，用乙醚提取，合并乙醚液，先用1％氢氧化钠溶液洗涤，再用水洗涤，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液，即每1ml三氯甲烷中含有所述颗粒剂20～40g。
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