CN101011354B - 细辛脑亚微乳制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种细辛脑亚微乳的制备方法。将水不溶性药物细辛脑溶于油相，加入乳化剂、助乳化剂及其他添加剂，制备水包油(O/W)亚微乳。亚微乳载体可显著提高细辛脑溶解度，以利于制成均匀的液体制剂。本发明制备的亚微乳粒径在500nm以下，室温放置两年不发生聚凝和分层，质量稳定。细辛脑亚微乳可制成小输液、肺部吸入制剂或鼻腔给药制剂，生物有效性显著高于口服制剂，与现有的小针注射液相当或更高，但不含有机溶剂及吐温类增溶剂，使用更安全、方便。细辛脑亚微乳可用于慢性支气管哮喘、肺炎及慢性阻塞性肺病的治疗。

Description

细辛脑亚微乳制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种细辛脑水包油(O/W)型亚微乳制剂。亚微乳由油相、水相、乳化剂、助乳化剂和稳定剂形成。细辛脑作为活性成分，溶于油相中(内相)。以亚微乳为载体，可显著改善非极性药物细辛脑的溶解性，使系统载药量提高数百倍。亚微乳为乳白色均匀的液体制剂，放置两年不发生絮凝和分层，质量稳定，可制成鼻腔喷雾剂或肺部吸入剂，也可制成静脉滴注用小输液。

背景技术

a-细辛脑又名a-细辛醚和细辛脑(asarone)，主要存在于石菖蒲等植物的挥发油中。自60年代开始，国内外即对细辛脑进行了广泛的研究，证实其有很强的止咳、祛痰、平喘、镇静、解痉和抗惊厥药理活性，同时对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长有不同程度抑制作用。受药源紧缺和含量较低的限制，从植物中大量提取分离单体比较困难。1982年国内首次采用化学合成方法成功制备了细辛脑，为该产品的产业化和临床推广提供了条件。经多家医院的临床研究证实，合成的细辛脑对支气管哮喘、慢性支气管炎、小儿肺炎、慢性阻塞性肺病(COPD)急性发作的呼吸衰竭等疗效显著，总有效率达85％以上。此外，a-细辛脑对癫痫大发作和热性惊厥的预防亦表现出良好的效果，这对缓解和治疗COPD呼吸衰竭时的中枢神系统功能障碍非常有利。随着临床应用的不断扩大，近年来，国内开展了关于a-细辛脑用于支气管哮喘和COPD急性发作临床治疗的机理研究，结果表明，细辛脑可选择性激动β2-受体，且通过抑制T细胞增殖活化、抑制气道嗜酸性粒细胞炎症，使支气管平滑肌舒张，达平喘、抗炎作用；通过增加气管纤毛运动，达祛痰目的；此外，细辛脑还可抑制内源性致病物质释放，具有改善微循环的作用。

目前上市的剂型有细辛脑片剂、胶囊和注射液。据文献报道，a- 细辛脑口服制剂生物利用极低，仅为2-5％，且个体差异大，推测该药经胃肠吸收较差或存在首过效应。由于生物利用度低，临床应用的口服剂量每日高达180-270mg(分3次服用)，大剂量药物势必会存在潜在的肝肾等脏器毒性的危险。与口服制剂相比，注射液(2ml∶8mg)(临用时用葡萄糖稀释后静滴)起效快，疗效确切，但每日2次、每次2-3支)、连续7-14天的创伤性给药方式，操作繁索、治疗成本高、患者顺应性差。此外，为提高细辛脑溶解度，注射液中加入了一定量的有机溶剂和吐温80作增溶剂，易引起局部刺激性及全身不良反应，存在安全性隐患。

对于肺炎、支气管哮喘和COPD急性发作的治疗，不仅要选择疗效确要的药物，更需要起效快、有效性高、使用方便、安全性好的新的给药系统细辛脑口服制剂和注射给药存在的不足，影响了其临床疗效的发挥和市场推广。

鼻腔喷雾给药或肺部吸入给药具有起效快、吸收完全、不受胃肠因素和首过效应影响、使用自主方便等特点，是肺病疾病急性发作治疗的首选给药方式。但该类制剂要求药物必须有足够高的溶解度以满足有效剂量的要求，且给药系统不应对粘膜产生明显的刺激和毒性。

细辛脑注射有效剂量为每次16-24mg，但其溶解度仅为0.148mg/ml，因此，无法直接制成鼻腔喷雾剂或肺部吸入剂。课题组曾对环糊精包合或固体分散技术进行探讨，以期提高溶解度，但结果不理想，溶解度仅提高2-5倍；通过加入大量有机溶剂和非离子表面活性剂(如吐温类)，可提高溶解度，但会产生明显的鼻粘膜或肺部刺激。

亚微乳为新型的药物传输系统，作为非极性药物的载体，可克服非极性药物因溶解度低而不利于制成液体制剂的缺点。

本发明利用高压均质乳化技术，使用天然或刺激性较小的表面活性剂，将细辛脑制成水包油亚微乳，外观性状表现为乳白色均匀液体，室温放置2年物质性质稳定，不发生分层，乳滴粒径≤500nm。细辛脑亚微乳载药量可控制在0.2-100mg/ml。

细辛脑亚微乳可制成鼻粘喷雾剂或肺部吸入剂。与现有口服制剂相比，细辛脑亚微乳生物利用度可显著提高，且起效更快，更有利于慢性肺病急性发作的治疗。与现有小针注射液相比(临床用需用葡萄糖液稀释静滴，每次2-3支)，细辛脑亚微乳制剂同样具有起效迅速的特点，但比小针剂使用更方便自主，顺应性高，污染环节少。此外，细辛脑亚微乳还可直接制成静脉滴注用小输液乳剂。

细辛脑亚微乳制剂用于慢性支气管哮喘、肺炎及慢阻肺急性发作的治疗，比现有剂型具有明显的优势。

发明内容

一种细辛脑亚微乳制剂，其特征在于，以细辛脑为活性成分，采用油相、水相、乳化剂、助乳化剂、稳定剂和其他添加剂形成的亚微乳作为载体，制备亚微乳制剂；其中，所述乳化剂为卵磷脂或豆磷脂，所述助乳化剂为泊洛沙姆188，所述稳定剂为油酸与PEG400、甘油、山梨糖醇或甘露醇中的任意一种组成的混合物，所述其它添加剂为维生素E的抗氧剂。

亚微乳是一种热力学不稳定体系，贮存过程中可能会发生聚集、絮凝、合并，最后导致两相分层。这种系统对处方的变化很敏感，处方中乳化剂、助乳化剂、油相种类的改变、载药量的变化，以及制备工艺参数的调整，都会直接影响亚微乳的稳定性。

本发明经对处方因素(油相种类、油相用量、乳化剂、助乳化剂及稳定剂)和工艺参数的优化，成功制备了细辛脑亚微乳。根据给药系统的不同，亚微乳载药量可控制在0.2-100mg/ml。

亚微乳油相可选用长链、中链脂肪酸，长链、中链脂肪酸酯，长链脂肪醇及上述几种的混合物，包含大豆油、蓖麻油、亚油酸、油酸、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、中链脂肪酸的甘油酯、十六醇等，其中优选大豆油、蓖麻油、棕榈油和花生油。根据载药量不同，油相用量可控制在体系的5％-40％。

乳化剂是微乳的关键组分，本发明使用天然表面活性剂或刺激性较小的非离子表面活性剂作乳化剂，采用高压均质技术进行亚微乳制备。其中非离子表面活性剂脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、山梨醇及失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、Vitamin E衍生物类、聚氧烯烃整体共聚表面活性剂。天然表面活性剂包括卵磷脂、豆磷脂、胆甾醇和胆酸类、海藻酸钠、壳聚糖等。两者相比，优选天然表面活性剂卵磷脂或豆磷脂。乳化剂用量需根据载药量不同、油相比例不同而进行调整。

助乳化剂的应用有利于减小和控制乳滴粒径，本发明中，选用了刺激较小的的聚乙二醇类和聚氧烯烃整体共聚表面活性剂(泊洛沙姆类)，其中优选泊洛沙姆类。

稳定剂通过提高油水界面膜的稳定性，使制得的亚微乳外观更加均匀，性质更加稳定。本发明选用油酸、PEG类、甘油、木糖醇、山梨醇(糖)醇和甘露醇。

此外，系统中还需加入适量抗氧剂，以保证天然乳化剂的稳定性。

经考察，细辛脑亚微乳粒径在500nm以下，粒径分布均匀，加速试验(40℃、RH75％)3个月和室温放置6个月未发生聚凝及分层，粒径无明显变化，物理性质稳定。细辛脑亚微乳对鼻粘膜的毒性与生理盐水相当，安全性良好。本发明制备的细辛脑亚微乳可制成鼻腔喷雾剂或肺部给药制剂，也可直接制成静脉滴注用小输液。

粒径测定方法：

采用MALVERN Mastersizer 2000型粒径测定仪，对制备的细辛脑亚微乳进行粒径测定，由计算机软件求得体积平均直径D[4，3]和D(0.1)、D(0.5)、D(0.9)、Span径距，绘制粒径分布图。

稳定性考察：

考察加速试验(40℃、RH75％)3个月和室温放置6个月的样品，项目包括外观性状、粒径及其分布、载药量，结果表明，均无明显变化，质量稳定，见下表：

表1细辛脑亚微乳稳定性考察结果

条件	外观性状	pH值	D[4，3]  (μm)	径距	d(0.9)  (μm)	载药量  (mg/ml)
							初始0天	均匀乳白色	7.04	123	0.845	177	40.5
加速试验1个月         2个月         3个月	均匀乳白色  均匀乳白色  均匀乳白色	7.09  7.01  7.05	132  120  125	0.985  1.022  0.922	193  201  185	41.1  41.5  39.3
							室温放置3个月         6个月	均匀乳白色  均匀乳白色	7.06  7.11	137  129	0.876  0.914	198  190	39.8  40.6

鼻粘膜毒性试验：

将蟾蜍仰卧固定于蛙板上，使口腔张开，以止血钳牵拉，防止闭合和吞咽。分别将亚微乳(0.5ml)应用到蟾蜍上腭部位，以生理盐水(0.5ml)作为阴性对照，1％脱氧胆酸钠(0.5ml)作为阳性对照，保留30min。用眼科小剪刀从口腔上剪下3-4mm²粘膜，用生理盐水将表面的血液和粘液漂洗干净，并将其平铺于载玻片上，滴加生理盐水，轻轻盖上盖玻片，于400倍光学显微镜下观察10个视野的纤毛运动情况， 观察完毕，将标本置于加有少许生理盐水的培养皿中，密闭，使水蒸气近饱和状态，环境温度20℃-25℃，之后每隔适当时间取出标本，于400倍光学显微镜下观察10个视野，如果粘膜纤毛仍摆动，则放回培养皿中继续观察，记录从给药开始至纤毛运动停止的纤毛持续运动时间，评价亚微乳对鼻腔纤毛的毒性。时间越长，说明毒性越小。

表2  不同药物对纤毛持续运动时间的影响(n＝3)

药物                      纤毛持续运动时间(min，X±SD)

生理盐水                  7604±34

1％去氧胆酸钠溶液         未观察到纤毛运动，持续时间记为0

50mg/ml a-细辛脑亚微乳    752±30

将上述对各组试验结果进行显微形态观察，结果显示，①生理盐水给药30min后可见分布广泛的皱沟，两侧纤毛排列整齐，摆动急速，皱沟中流水湍急，皱沟外纤毛如草皮覆盖于粘膜表面，并不断摆动；离体700min后，在皱沟中可见脱落的纤毛细胞，皱沟逐渐减少，离体760±34min后，纤毛停止颤动，并大量脱落。②阳性对照组1％脱氧胆酸钠给药后纤毛几乎全部停止颤动，且皱沟减少，沟中可见已脱落纤毛细胞；给予生理盐水冲洗后，纤毛仍不能恢复颤动。③试验组皱沟略有减少，偶见脱落的纤毛细胞，离体后纤毛持续颤动时间为752min±30。由此表明，a-细辛脑亚微乳对蟾蜍上腭粘膜的毒性与生理盐水无明显差异，安全性良好。

附图说明：

图1：细辛脑亚微乳粒径分布图

图2：细辛脑亚微乳加速试验(40℃、RH75％)3个月粒径分布图

图3：细辛脑亚微乳室温存放6个月粒径分布图

图4：给药30分钟后蟾蜍上腭粘膜(×400)显微照片

4-A：阴性对照组(生理盐水)给药30min后蟾蜍上腭粘膜(×400)

4-B：阳性对照组(1％去氧胆酸钠溶液)给药30min后蟾蜍上腭粘膜(×400)

4-C：细辛脑亚微乳剂给药30min蟾蜍上腭粘膜(×400)

具体实施方式

为进一步说明本发明方法的制备工艺和所体现的创新性，特列出以下实施例，但本发明的权利保护并不仅限于实施例描述的内容。

实施例1：

细辛脑                  按40mg/ml投料

大豆油                  20％(ml/ml)

卵磷脂                  1.5％(g/ml)

泊洛沙姆188             3％(g/ml)

甘油                    2.5％(g/ml)

油酸                    0.6％(g/ml)

α维生素E(抗氧剂)       0.05％(g/ml)

注射用水                77％(ml/ml)

取甘油和注射用水，加热至40-60℃，加入精制卵磷脂和泊洛沙姆，置组织捣碎机中，高速搅拌使成均匀水相，保温；另取细辛脑及α维生素E，加入至大豆油中，加热到40～60℃，制成油相。在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，置组织捣碎机中高速搅拌使形成均匀初乳。将初乳迅速转移至高压均质机中均质，粒径控制在500nm以下，收集全部乳液，用NaOH调节乳液pH至7.0±0.5，即得。

实施例2：

[处方组成]

细辛脑                  按60mg/ml投料

大豆油                  25％(ml/ml)

卵磷脂                  1.5％(g/ml)

泊洛沙姆188             3％(g/ml)

甘油                    2.5％(g/ml)

油酸                    0.6％(g/ml)

α维生素E(抗氧剂)       0.05％(g/ml)

注射用水                约75％(ml/ml)

[制备方法]：同实施例1。

实施例3：

[处方组成]

细辛脑               按30mg/ml投料

大豆油               20％(ml/ml)

卵磷脂               1.5％(g/ml)

泊洛沙姆188          4％(g/ml)

甘露糖醇             6.0％

油酸                 0.6％(g/ml)

α维生素E(抗氧剂)    0.05％(g/ml)

注射用水             约80％(ml/ml)

[制备方法]：同实施例1。

实施例4：

[处方组成]

细辛脑               按30mg/ml投料

棕榈油               30％(ml/ml)

豆磷脂               1.2％(g/ml)

泊洛沙姆188          4％(g/ml)

山梨醇               6.0％

油酸                 1.0％(g/ml)

α维生素E(抗氧剂)    0.05％(g/m1)

注射用水             约67％(ml/ml)

[制备方法]：同实施例1。

实施例5：

[处方组成]

细辛脑                按40mg/ml投料

花生油                15％(ml/ml)

卵磷脂                2.0％(g/ml)

泊洛沙姆188           4％(g/ml)

PEG400                3.0％

油酸                 0.6％(g/ml)

α维生素E(抗氧剂)    0.05％(g/ml)

注射用水             约85％(ml/ml)

[制备方法]：同实施例1。

实施例6：

[处方组成]

细辛脑                按40mg/ml投料

蓖麻油                25％(ml/ml)

卵磷脂                1.2％(g/ml)

泊洛沙姆188           3％(g/ml)

甘油                  2.0％

油酸                  0.5％(g/ml)

α维生素E(抗氧剂)     0.05％(g/ml)

注射用水              约75％(ml/ml)

[制备方法]：同实施例1。

Claims (2)

1.一种细辛脑的亚微乳制剂，其特征在于，以细辛脑为活性成分，采用油相、水相、乳化剂、助乳化剂、稳定剂和其他添加剂形成的亚微乳作为载体，制备亚微乳制剂；其中，亚微乳中细辛脑的载药量为0.2-60mg/ml；所述油相选自大豆油、蓖麻油、棕榈油和花生油，并且油相的用量为15-30％；所述乳化剂为卵磷脂或豆磷脂，所述助乳化剂为泊洛沙姆188，所述稳定剂为油酸与PEG400、甘油、山梨糖醇、甘露醇中的任意一种组成的混合物，所述其它添加剂为抗氧化剂维生素E的；pH为7.0±0.5；亚微乳粒径在500nm以下。

2.根据权利要求1所述的细辛脑亚微乳制剂，可采用如下方法制备：取稳定剂及注射用水，加热至40-80℃，加入乳化剂和助乳化剂，置组织捣碎机中，高速搅拌使成均匀水相，保温；另取细辛脑及抗氧剂，加入油相，加热至40-80℃；在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，置组织捣碎机中高速搅拌使形成均匀初乳；将初乳迅速转移至高压均质机中均质，粒径控制在500nm以下，收集全部乳液，用NaOH调节乳液pH至7.0±0.5。

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