CN101006173A - 脂肪酶粉末组合物以及使用其的酯化物的制造方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种脂肪酶组合物，该组合物含有：(a)源自根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的粉末状的脂肪酶或青霉菌属(Penicillum sp.)的粉末状的脂肪酶；以及(b)选自源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末状的脂肪酶、源自根霉属(Rhizopus sp.)的粉末状的脂肪酶和源自嗜热真菌属(Thermomyces sp.)的粉末状的脂肪酶中的粉末状的脂肪酶。使用该脂肪酶组合物时，可以用羧酸高效地将分子内具有至少一个醇羟基的化合物进行酯化。

Description

脂肪酶粉末组合物以及使用其的酯化物的制造方法
技术领域
本发明涉及在甘油等具有醇羟基的化合物与各种脂肪酸等的酯化中可以适合使用的粉末状脂肪酶组合物以及使用该组合物的甘油三酸酯等酯化物的制造方法。
背景技术
脂肪酶被广泛使用于脂肪酸等各种羧酸和一元醇或多元醇等醇类的酯化反应、多个羧酸酯之间的酯交换反应等。其中，在伴随着脱水的酯化反应中，原样使用脂肪酶粉末无法充分表现活性，不仅如此，难于均匀地分散于反应体系中，其回收也是困难的。因此，通常将脂肪酶固定到一些载体上、例如阴离子交换树脂(专利文献1)、酚醛吸附树脂(专利文献2)、疏水性载体(专利文献3)、阳离子交换树脂(专利文献4)、螯合树脂(专利文献5)等上来用于酯化反应中。
如上所述，以往将脂肪酶固定化后用于酯化反应中，该固定化脂肪酶不仅伴随有固定化处理导致的原有的脂肪酶活性的损失，而且使用多孔性载体时原料和产物堵塞细孔，结果导致酯化率降低。
鉴于上述情况，已开发了各种使用脂肪酶粉末的技术。例如，提出了如下方法：在惰性有机溶剂的存在下或不存在下，将脂肪酶粉末分散于含有酯的原料中并进行酯交换反应，以使在酯交换反应时将分散脂肪酶粉末颗粒的90％以上保持在粒径1～100μm的范围内(专利文献6)。此外，还提出了将含有磷脂和脂溶性维生素的酶溶液进行干燥，使用所得到的酶粉末的技术(专利文献7)。
专利文献1：  日本专利特开昭60-98984号公报
专利文献2：  日本专利特开昭61-202688号公报
专利文献3：  日本专利特开平2-138986号公报
专利文献4：  日本专利特开平3-61485号公报
专利文献5：  日本专利特开平1-262795号公报
专利文献6：  日本专利第2668187号公报
专利文献7：  日本专利特开2000-106873号公报
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以高效地进行酯化反应的粉末脂肪酶组合物。
本发明的目的还在于提供使用上述脂肪酶组合物的酯化物的制造方法。
本发明的这些目的以及其它目的，从以下的描述将变得清楚。
本发明是基于如下发现完成的，即，不使用固定化脂肪酶而将两种特定的粉末脂肪酶组合使用时，可实现极其高的酯化率，从而解决了上述课题。
即，本发明提供一种脂肪酶组合物，其特征在于，该组合物含有：
(a)源自根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的粉末状的脂肪酶或源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末状的脂肪酶；以及，
(b)选自源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末状的脂肪酶、源自根霉属(Rhizopus sp.)的粉末状的脂肪酶和源自嗜热真菌属(Thermomyces sp.)的粉末状的脂肪酶中的粉末状的脂肪酶。
本发明还提供一种酯化物的制造方法，其特征在于，在上述粉末状的脂肪酶组合物的存在下，用羧酸将分子内具有至少一个醇羟基的化合物进行酯化。
附图说明
图1表示使用本发明的并用两种粉末脂肪酶的脂肪酶组合物(RM(1％)+QL(0.1％))以及(G(0.7％)+QL(0.3％))时的酯化反应中甘油三酸酯的生成情况。
具体实施方式
作为用作本发明的成分(a)的源自根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的脂肪酶，  优选使用源自米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)的脂肪酶、即1，3-特异性脂肪酶，也可以将Novozymes Japan Co.，Ltd.生产的含脂肪酶水溶液、即Palatase 20000L粉末化后用于粉末脂肪酶。作为该粉末脂肪酶，优选使用形状为球状、水分含量为10质量％以下的粉末。进一步优选水分含量为6.5～8.5质量％。此外，米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)以往也有被归属于毛霉菌属(Mucor sp.)的情况。
这种粉末脂肪酶例如可以通过喷雾干燥(spray drying)含脂肪酶水溶液而容易地制备。
其中，作为含脂肪酶水溶液，可以举出除去了菌体的脂肪酶培养液、精制培养液、由它们获得的脂肪酶粉末再次溶解·分散于水中得到的物质；将市售的脂肪酶粉末再次溶解·分散于水中的物质；市售的液体脂肪酶等。此外，为了进一步提高脂肪酶活性，更优选除去了盐类等低分子成分的溶液；为了进一步提高粉末性状，更优选除去了糖等低分子成分的溶液。
作为脂肪酶培养液，可以举出例如含有大豆粉、蛋白胨、玉米浆、K2HPO4、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O等的水溶液。作为它们的浓度，大豆粉是0.1～20质量％、优选为1.0～10质量％；蛋白胨是0.1～30质量％、优选为0.5～10质量％；玉米浆是0.1～30质量％、优选为0.5～10质量％；K2HPO4是0.01～20质量％、优选为0.1～5质量％。此外，(NH4)2SO4是0.01～20质量％、优选为0.05～5质量％；MgSO4·7H2O是0.01～20质量％、优选为0.05～5质量％。培养条件最好控制如下：培养温度10～40℃、优选为20～35℃；通气量为0.1～2.0VVM、优选为0.1～1.5VVM；搅拌转速为100～800rpm、优选为200～400rpm；pH为3.0～10.0、优选为4.0～9.5。
菌体的分离优选通过离心分离、膜过滤等进行。此外，盐类和糖等低分子成分的除去可以通过UF膜(ultrafiltrationmenbrane，超滤膜)处理来进行。具体而言，进行UF膜处理，将含有脂肪酶的水溶液浓缩至体积的1/2量，然后添加与浓缩液等量的磷酸缓冲液，重复上述操作1～5次，从而得到除去了低分子成分的含脂肪酶水溶液。
离心分离优选为200～20000×g，膜过滤优选由MF膜(microfiltration membrane，微滤膜)、压滤机等将压力控制在3.0kg/m2以下。菌体内酶的情况下，优选用均化器、韦林掺合器、超声波破碎、弗式压碎器、球磨机等将细胞破碎，并进行离心分离、膜过滤等，以此除去细胞残渣。均化器的搅拌转速为500～30000rp m，优选为1000～15000rpm，韦林掺合器的转速为500～10000rpm，优选为1000～5000rpm。搅拌时间为0.5～10分钟，优选为1～5分钟。超声波破碎较佳在1～50KHz，优选在10～20KHz的条件下进行。球磨机优选使用直径0.1～0.5 mm左右的玻璃制小球。
作为含脂肪酶水溶液，优选使用含有5～30质量％固体成分的水溶液。
其中，含脂肪酶水溶液中的固体成分浓度可以使用糖度计(CIS Co.，Ltd.生产的BRX-242)，作为Brix.％(糖度％)求出。
优选在即将进行喷雾干燥(spray dry)等干燥工序之前，将含脂肪酶水溶液的pH调节为6～7.5。特别优选将pH调节为7.0以下，进一步优选将pH调节为6.5～7.0的范围内。pH调节可以在喷雾干燥(spray dry)等干燥工序之前的任意工序中进行，为了使即将进行干燥之前的pH在上述范围内，也可以预先调节含脂肪酶水溶液的pH。pH调节可以使用各种碱剂和酸，优选使用氢氧化钠等碱金属氢氧化物。
此外，在干燥工序之前的中途的工序中，可以浓缩含脂肪酶水溶液。浓缩方法没有特别地限定，可以举出蒸发器、闪蒸器、UF膜浓缩、MF膜浓缩、利用无机盐类的盐析、利用溶剂的沉淀法、利用离子交换纤维素等的吸附法、利用吸水性凝胶的吸水法等。优选UF膜浓缩、蒸发器。作为用于UF膜浓缩的模件，优选馏分分子量3000～100000、优选6000～50000的平膜或中空纤维膜，材质优选为聚丙烯腈系、聚磺酸系等。
喷雾干燥(spray dry)优选使用例如喷嘴逆流式、盘逆流式、喷嘴并流式、盘并流式等喷雾干燥器来进行，优选盘并流式。喷雾干燥(spray dry)优选控制在如下条件进行：喷雾器转速为4000～20000rpm、加热的入口温度100～200℃、出口温度40～100℃。
本发明所使用的成分(a)的其它脂肪酶为源自青霉属(Penicillum sp.)的脂肪酶，优选使用源自沙门柏干酪青霉(Penicillium camemberti)的脂肪酶、即1，3-特异性脂肪酶。作为该粉末脂肪酶，可以使用AMANO ENZYME Co.，Ltd.销售的脂肪酶G“AMANO”50等。该脂肪酶的最适pH为5.0，特别是在pH4.5～6.0下可以有效地作用，最适温度为40℃。该粉末为不具有载体的白色～淡黄褐色的细粉末。
另外，除此之外还可以使用源自青霉属(Penicillum sp.)的脂肪酶，并通过与对上述源自根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的脂肪酶进行说明的方法同样的方法得到粉末状物质。
本发明所使用的成分(b)的脂肪酶为源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的脂肪酶。作为该脂肪酶的粉末状物质，可以使用名糖产业株式会社生产的脂肪酶QL、脂肪酶PL等。
脂肪酶QL所具有的特性为：用凝胶过滤法求得的分子量为18～19万、等电点4.1、最适pH7～8.5、最适温度60℃、pH稳定性6～10、温度稳定性40℃以下；脂肪酶PL所具有的特性为：用凝胶过滤法求得的分子量为35～37万、等电点4.5、最适pH7～8.5、最适温度37～40℃、pH稳定性7～10、温度稳定性40℃以下。两者均为不具有载体的淡黄色的细粉末。本发明中优选使用脂肪酶QL。
另外，除此之外还可以通过与对上述源自根毛霉菌属(Mucor sp.)的脂肪酶进行说明的方法同样的方法，将源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的脂肪酶制成粉末状物质并使用该粉末状物质。
本发明所使用的成分(b)的其它脂肪酶为源自根霉属(Rhizopus sp.)的脂肪酶和源自嗜热真菌属(Thermomyces sp.)的脂肪酶。作为源自根霉属(Rhizopus sp.)的脂肪酶优选源自米根霉(Rhizopus oryzae)的脂肪酶，作为该脂肪酶的粉末物质可以使用AMANO ENZYME Co.，Ltd.生产的粉末脂肪酶F-AP15。
此外，作为源自嗜热真菌属(Thermomyces sp.)的脂肪酶优选源自棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanugenousu)的脂肪酶，作为该脂肪酶的粉末物质可以使用对Novozymes JapanCo.，Ltd.生产的lipozyme TL(100L)进行膜处理、然后用喷雾干燥器将其粉末化得到的脂肪酶。
本发明所使用的成分(a)和(b)的粉末脂肪酶的粒径可以为任意，优选粉末脂肪酶的90质量％以上为粒径1～100μm。
粉末脂肪酶的粒径可以使用例如HORIBA公司的粒度分布测定装置(LA-500)进行测定。
本发明中，作为成分(a)和成分(b)的并用比例，成分(a)：成分(b)的质量比优选为1∶99～99∶1。特别是，更优选(a)源自根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的粉末状的脂肪酶：(b)源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末状的脂肪酶的质量比为60∶40～98∶2，进一步优选为70∶30～95∶5。此外，(a)源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末状的脂肪酶：(b)源自产碱杆菌属(Alcaligens sp.)的粉末状的脂肪酶的质量比为10∶90～90∶10，进一步更优选为70∶30～30∶70。特别是在将该脂肪酶组合使用的情况下，其特征在于，更加发挥效果的两种粉末脂肪酶的并用比例范围是极其广的。
更优选(a)的粉末状的脂肪酶∶(b)源自根霉属(Rhizopus sp.)的粉末状的脂肪酶的质量比为10∶90～70∶30，进而最优选为20∶80～40∶60。此外，更优选(a)的粉末状的脂肪酶∶(b)源自嗜热真菌属(Thermomyces sp.)的粉末状的脂肪酶的质量比为10∶90～90∶10，进而最优选为30∶70～80∶20。
接着，对使用本发明的粉末脂肪酶组合物的酯化方法进行说明。
作为酯化对象的在分子内至少具有1个醇羟基的化合物，可以举出各种一元醇、多元醇、氨基醇等各种化合物。具体而言，可以举出短链、中链、长链的饱和、不饱和、直链、支链醇、乙二醇类、甘油、季戊四醇类之类的多元醇。其中优选甘油。
另一方面，作为羧酸，可以举出短链、中链、长链的饱和、不饱和、直链、支链羧酸。其中，可以举出碳原子数6～30的脂肪酸，例如辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等。可以使用这些中的一种或并用两种以上。其中，优选不饱和脂肪酸，特别优选使用共轭亚油酸。
酯化条件例如可以按照日本特开平13-169795号公报、 日本特开平15-113396号公报等中记载的条件来进行。例如，相对于基质的总质量、即具有醇羟基的化合物和羧酸的总质量，优选添加0.1～2质量％本发明的粉末脂肪酸组合物，并在30～60℃下使其反应24～72小时。此时，优选边将反应体系减压并除去由酯化产生的水(脱水)、边进行反应。减压度优选为1～100hPa，更优选为1～50hPa，最优选为1～25hPa，更优选在该范围内逐渐提高减压度的同时进行脱水。进而，如果在脱水处理时边充入氮气边进行脱水，则可以效率更加良好地进行脱水。
另外，使用(a)的源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末状的脂肪酶时，优选相对于基质的总质量预先添加0.1～5质量％的水后开始反应，之后，边除去由酯化产生的水、边进行反应。
根据本发明，可以实现极高的酯化率，特别是可直接由甘油和羧酸高产率地制造甘油三酸酯。
接着通过实施例对本发明进行更详细地说明。
实施例
制造例1
使用UF模件(旭化成工业(株)公司生产SIP-0013)，将水溶液中溶解·分散有脂肪酶的形态的Novozymes Japan Co.，Ltd.生产的源自Rhizomucor miehei的脂肪酶、即商品名Palatase(20000L)除去低分子成分，得到含脂肪酶水溶液(固体成分浓度10.6质量％)。具体而言，在冰冷却下对液体脂肪酶(Palatase)进行UF膜处理，浓缩至体积的1/2量，然后添加与浓缩液等量的pH7的0.01M磷酸缓冲液。对所得溶液进行同样的UF膜处理后添加磷酸缓冲液的操作，重复3次该操作，得到含脂肪酶水溶液(脂肪酶浓缩液∶缓冲液的体积比为1∶1)。
使用氢氧化钠水溶液将该含脂肪酶水溶液的pH调节到pH6.8～6.9。
使用喷雾干燥器(SD-1000型：东京理化器械(株)公司生产)，在入口温度130℃、干燥空气量0.7～1.1m3/min、喷雾压力11～12 kpa的条件下将该溶液喷雾，得到脂肪酶粉末。脂肪酶粉末颗粒的形状为球状，脂肪酶粉末的90质量％以上在粒径1～100μm的范围内，平均粒径为8.2μm。粒径使用HORIBA公司的粒度分布测定装置(LA-500)进行测定。通过105℃下干热干燥1小时的方法测得的水分含量为7.9质量％。
另外，含脂肪酶水溶液中的固体成分浓度可以使用糖度计(CIS Co.，Ltd.生产  BRX-242)，作为Brix.％求出。
实施例1[使用了各种脂肪酶或脂肪酶组合物的充入氮气条件下的酯化反应]
在带有搅拌机的反应容器中加入10g甘油和90g共轭亚油酸，在搅拌下向其中加入下述脂肪酶粉末酶。边在水浴中维持45℃左右的温度、边放置30分钟，然后迅速用减压泵减压。此时，充入氮气以容易脱水。
最初维持在40hPa左右。2～3小时后缓慢加温至50℃左右，进而在2～3小时后加温至60℃左右，之后维持该温度。另一方面，缓慢增强减压，最终维持在10hPa左右。
另外在使用G或G+QL作为酶时，在反应之前，相对于甘油和共轭亚油酸的总量添加2质量％的水。
酯化反应的进展是通过随时抽样、并通过GLC分析来确认的。此时，求出未反应甘油、MG、DG、TG的百分率，将其中的TG的生成率示于下述表-1或在图1中示为图表。
所使用的脂肪酶
RM(1％)：单独使用制造例1所制造的源自属于根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)的粉末脂肪酶。()内的数值表示脂肪酶的使用量，在该数值为1％时，表示脂肪酶的使用量为甘油和共轭亚油酸总量的1质量％(以下同样)。
RM(1％)+QL(0.1％)(本发明)：并用制造例1所制造的源自属于根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的米赫根毛霉(Rhizomucormiehei)的粉末脂肪酶和名糖产业株式会社生产的源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶QL。使用量记载在()内(以下同样)。
G(1％)：单独使用AMANO ENZYME Co.，Ltd.生产的源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末脂肪酶G“AMANO”50。
G(0.7％)+QL(0.3％)(本发明)：并用AMANO ENZYMECo.，Ltd.生产的源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末脂肪酶G“AMANO”50和名糖产业株式会社生产的源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶QL。
QL(1％)：单独使用名糖产业株式会社生产的源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶QL。
表-1
反应时间(h) RM(1％) RM(1％)+QL(0.1％) G(1％) G(0.7％)+QL(0.3％) QL(1％)
0 0 0 0 0 0
4 14 2
5.5 25
8 26 0 28
16 53
20 56 81 64 3
22 2 69
24 64 85
28 69 87 3
44 75 91 4 87 3
从表-1的结果可知，与单独使用源自属于根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)的粉末脂肪酶(RM(1％))相比，并用源自属于根毛霉菌属(Rhizomucorsp.)的Rhizomucor miehei的粉末脂肪酶和源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶QL时(RM(1％)+QL(0.1％))，44小时后的甘油三酸酯的产率从75％大幅提升至91％。此外，如果着眼于甘油三酸酯的产量，则甘油三酸酯的产量达到75％的时间为：RM(1％)的情况下为40多小时，相对于此，RM(1％)+QL(0.1％)的情况下为其一半20小时。
此外，从单独使用源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶QL时即使使用1％也几乎无法得到甘油三酸酯这一结果来看，对于本领域技术人员来说是惊人的。
另一方面，单独使用源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末脂肪酶G“AMAN O”50(G(1％))以及单独使用源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶QL(QL(1％))时，几乎无法得到甘油三酸酯，但如果将两者并用(G(0.7％)+QL(0.3％))，则44小时后的甘油三酸酯的产率变高为87％，这对于本领域技术人员来说是惊人的。
实施例2[使用了RM或各种脂肪酶组合物的酯化反应]
除了不充入氮气、添加水或者未添加水、而且将最终减压设为表-2所示的状态以外，与实施例1同样地进行酯化反应。从反应开始经过47小时后，进行抽样，通过GLC分析确认TG的生成率。此时，求出未反应甘油、MG、DG、TG的百分率。将TG的生成率示于表-2。表中对水的添加没有记载的是未添加水。此外，表中的酶项目中以％表示的数值表示脂肪酶的使用量，该数值为1％时，表示脂肪酶的使用量为甘油和共轭亚油酸总量的1质量％。此外，表中的酶项目中()内记载的数值比为各种脂肪酶的组合的质量比。
所使用的脂肪酶
RM：与实施例1使用的脂肪酶相同的源自属于根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)的粉末脂肪酶。
QL：与实施例1使用的脂肪酶相同的名糖产业株式会社生产的源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶QL。
G： 与实施例1使用的脂肪酶相同的AMANO ENZYMECo.，Ltd.生产的源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末脂肪酶G“AMANO”50。
PL：名糖产业株式会社生产的源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末脂肪酶PL。
TL：对Novozymes Japan Co.，Ltd.生产的源自棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanugenousu)的lipozyme TL(100L)进行膜处理，然后用喷雾干燥器将其粉末化得到的物质。
F-AP： AMANOE NZYME Co.，Ltd.生产的源自米根霉(Rhizzopus oryzae)的粉末脂肪酶F-AP15。
表-2
酶     TG％   减压hPa
RM单独1％RM+QL(1％、8∶2)G+QL(1％、5∶5)添力加水2％RM+PL(1％、8∶2)G+TL(1％、5∶5)添力加水1％G+F-AP(1％、3∶7)添力加水2％RM+TL(0.6％、8∶2)     69828083898372   201919175316
从表-2的结果明显可知，并用(a)和(b)的特定的粉末脂肪酶时，可提高酯化率。

Claims (12)

1.一种脂肪酶组合物，其特征在于，该组合物含有：
(a)源自根毛霉菌属(Rhizomucor sp.)的粉末状的脂肪酶或源自青霉属(Penicillum sp.)的粉末状的脂肪酶；以及
(b)选自源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末状的脂肪酶、源自根霉属(Rhizopus sp.)的粉末状的脂肪酶和源自嗜热真菌属(Thermomyces sp.)的粉末状的脂肪酶中的粉末状的脂肪酶。
2.根据权利要求1所述的脂肪酶组合物，其中，(b)的粉末状的脂肪酶为源自产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)的粉末状的脂肪酶。
3.根据权利要求1或2所述的脂肪酶组合物，其中，(a)的粉末状的脂肪酶为源自米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)的脂肪酶。
4.根据权利要求1或2所述的脂肪酶组合物，其中，源自青霉属(Penicillum sp.)的脂肪酶为源自沙门柏干酪青霉(Penicillium camemberti)的脂肪酶。
5.根据权利要求1～4任一项所述的脂肪酶组合物，其中，成分(a)和(b)的粉末脂肪酶为未被负载于载体上的脂肪酶。
6.根据权利要求1～5任一项所述的脂肪酶组合物，其中，成分(a)和(b)的粉末脂肪酶的水分量为10质量％以下。
7.根据权利要求1～6任一项所述的脂肪酶组合物，其中，粉末脂肪酶的90质量％以上为粒径1～100μm。
8.根据权利要求1～7任一项所述的脂肪酶组合物，其中，该脂肪酶组合物用于酯化。
9.一种酯化物的制造方法，其特征在于，在权利要求1～7任一项所述的脂肪酶组合物的存在下，用羧酸将分子内具有至少一个醇羟基的化合物进行酯化。
10.根据权利要求9所述的酯化物的制造方法，其中，分子内具有至少一个醇羟基的化合物为甘油。
11.根据权利要求9或10所述的酯化物的制造方法，其中，羧酸为不饱和脂肪酸。
12.根据权利要求9～11任一项所述的酯化物的制造方法，其特征在于，所述酯化是在减压下进行。
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