CN101003565A

CN101003565A - 同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法

Info

Publication number: CN101003565A
Application number: CN 200610171008
Authority: CN
Inventors: 孟春晓; 高政权
Original assignee: Shandong University of Technology
Current assignee: Shandong University of Technology
Priority date: 2006-12-27
Filing date: 2006-12-27
Publication date: 2007-07-25
Anticipated expiration: 2026-12-27
Also published as: CN100560599C

Abstract

本发明提供一种同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于采用如下步骤：(1)制备藻胆蛋白粗提物，(2)羟基磷灰石装柱及平衡层析柱，(3)分别洗脱藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，(4)洗脱液的浓缩、脱盐及冷冻干燥，最终获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。本发明以人工养殖的钝顶螺旋藻纯藻粉为原料，采用羟基磷灰石柱层析法一次性分离了藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白两种蛋白，作为生产原料的螺旋藻藻粉则可以直接从市场上批量购买，价格低廉且纯度高，简化了从鲜活藻体中制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的繁琐步骤，用作柱料的羟基磷灰石可以自制，简单易行，且降低了生产成本，是目前较为理想的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法。

Description

同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法

所属技术领域

本发明提供一种同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

藻胆蛋白是红藻、蓝绿藻、隐藻中的捕光色素蛋白，根据其吸收光谱性质，可以分为藻红蛋白(Phycoerythrin，PE)，藻红蓝蛋白(Phycoerythrocyanin，PEC)，藻蓝蛋白(Phycocyanin，PC)和别藻蓝蛋白(Allophyxoxyanin，APC)四种。藻胆蛋白把捕获的光能高效地传递给叶绿素，从而使藻类的光合作用得以发生。每分子藻胆蛋白含α和β二个亚基，亚基的分子量大约均为17～22kD，(B-和R-藻红蛋白还含有γ亚基，它的分子量约为30kD)每条多肽链含一个或多个共价连结的发色团。近年来的科学研究表明，藻胆蛋白既可以作为天然色素用于食品、化妆品、染料等工业上；也可制成荧光试剂，用于临床医学诊断和免疫化学及生物工程等研究领域。另外，还可以制成食品和药品用于医疗保健。所以其应用范围广阔，具有很高的开发、利用价值。它们的主要功能如下：

1.可作为纯天然的色素，用于食品、化妆品和染料等工业

现代医学发现，人工合成色素有增加人类致癌机率的危险，因此有关天然色素的开发利用日益受到科学家的重视。藻胆蛋白是部分藻类特有的天然光和色素，色泽鲜艳，可取代人工合成的染料，用作食品和化妆品的添加剂，以避免人工合成物对人体的伤害。国外研究表明，藻胆蛋白是一种很好的纯天然色素，可用作食物色素，也是一种十分有效的化妆品护肤品。

2.可制成保健食品和药品用于医疗保健

(1)抗辐射：藻胆蛋白能显著地减轻和逐渐消除辐照、化疗对血白细胞和骨髓细胞的损伤，并能加速外周血白细胞和骨髓有核细胞的恢复；

(2)抗癌：藻胆蛋白能显著抑制癌细胞生长，可用于癌症的防治；有研究表明从螺旋藻中提取出来的藻蓝蛋白在动物实验中有极强的抗癌作用；中科院海洋研究所和中科院上海药物研究所联合开发的重组别藻蓝蛋白对肿瘤细胞就具有很强的杀灭作用，尤其是对肝癌细胞；

(3)调节免疫：最近的一些研究表明，藻胆蛋白可以提高淋巴细胞活性，刺激人B-淋巴细胞的增殖反应，通过淋巴系统提高机体免疫功能，全面增强机体的防病、抗病能力；

(4)促进造血：藻胆蛋白对骨髓造血功能具有刺激作用，因而对白血病和再生障碍性贫血等血液顽症有着积极的辅助治疗作用；

(5)延缓衰老等：藻胆蛋白还具抗氧化、清楚细胞中自由基、防止人体衰老，及消炎、促进伤口愈合等功能；

(6)试剂级藻胆蛋白可制成荧光试剂，应用于临床诊断及生物工程等研究领域。

目前，国内市场上已经有几个相关的专利技术，如“藻蓝蛋白的制备方法”(95110950.2)，主要是利用沉淀法从螺旋藻藻粉中提取藻蓝蛋白，所得的产品并非只有藻蓝蛋白，还含有很多水溶性的杂蛋白；“从螺旋藻中提取藻蓝蛋白的方法”(99122280.6)需要鲜藻为原料，采用盐析的方法沉淀藻蓝蛋白产品中也还含有许多杂蛋白；中国科学院水生生物研究所的“一种藻蓝蛋白的制备方法”(99116402.4)，则需要鲜藻为原料，还需要经过微滤和超滤等较烦琐的步骤来制备藻蓝蛋白。“高纯度高活性藻蓝蛋白的分离纯化方法”(00117512.2)，公布了以新鲜的钝顶螺旋藻藻泥为原料，通过藻泥→提取→盐析→透析→浓缩→Sephadex G-200→DEAE→Sephadex G-25→Sephadex G-200→冷冻干燥等一系列工艺流程来制备藻蓝蛋白的方法，该方法分离得到的产品虽然纯度高，活性强，但需要经过四次柱层析，这无疑增加了成本，限制了推广的难度。中国科学院武汉植物园的螺旋藻藻蓝蛋白提取及综合利用技术(未申请专利)，发明者培育了1株高藻蓝蛋白含量的螺旋藻新品系，该技术侧重于提取藻蓝蛋白后其剩余物质内的营养成分利用途径，其可作为食品添加剂，也可直接用作食品和珍贵水产品的饲料。中国科学院植物研究所的“一种大量提取藻蓝蛋白的简便方法”(200510059188.8)，是一种用微生物的培养液从蓝藻、蓝绿藻中规模化提取藻蓝蛋白的方法，该方法虽然技术先进，但涉及几种菌种的培养，分离方法也比较复杂。以上技术都有待于进一步改进。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够克服现有技术中存在的缺陷，廉价高效、简单易行且能同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白产品的方法。其技术方案为：

一种同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于采用如下步骤：(1)制备藻胆蛋白粗提物，(2)羟基磷灰石装柱及平衡层析柱，(3)分别洗脱藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，(4)洗脱液的浓缩、脱盐及冷冻干燥，最终获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。

所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，步骤1中，取螺旋藻藻粉加蒸馏水，藻粉与水的质量比为1∶5～15，搅拌均匀后，置于-10℃以下冷冻5小时以上，室温融化，然后4000转/分以上离心20分钟以上，弃沉淀取上清，上清即为藻胆蛋白粗提物。

所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，步骤2中羟基磷灰石采用如下方法制备：(1)分别配制浓度为0.001～0.002M、0.025～0.035M、0.045～0.06M的磷酸缓冲液，上述磷酸缓冲液均含有磷酸氢二钾和磷酸二氢钾及0.1～0.2M氯化钠，pH值为6.7～7.0；

(2)分别配置1～2M磷酸氢二钾溶液和1～2M氯化钙溶液；

(3)在玻璃棒不断搅拌下，将等体积的1～2M磷酸氢二钾溶液和1～2M氯化钙溶液以3～6毫升/分钟的速度慢慢滴入容器中，使其形成磷酸氢钙沉淀；

(4)继续搅拌，再滴加1～2M氢氧化钾溶液到上述磷酸氢钙沉淀中，当pH值达11.0左右，缓慢搅拌均匀，室温静置后，pH值回降到6.0左右后；继续添加1～2M氢氧化钾溶液，如此重复多次，最后使磷酸氢钙沉淀的pH值稳定在6.7～7.0左右，即制成羟基磷灰石填料；

(5)用含0.1～0.2M氯化钠、pH值为6.7～7.0的0.001～0.002M磷酸缓冲液浮洗新制成的羟基磷灰石，除去微细颗粒即可。

所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，步骤2中，将羟基磷灰石加到层析柱内，待羟基磷灰石沉淀后，用含有0.1～0.2M氯化钠、pH值为6.7～7.0的0.001～0.002M磷酸缓冲液平衡洗脱2～3次，待缓冲液滴完并露出羟基磷灰石表面时，加藻胆蛋白粗提物，其加入量是羟基磷灰石柱长的1/3～2/3。

所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，步骤3中，待藻胆蛋白粗提物中的蛋白被完全吸附后，添加0.001～0.002M磷酸缓冲液开始洗脱，先把叶绿素和藻黄素完全洗脱掉，再添加0.025～0.035M磷酸缓冲液，洗脱并收集藻蓝蛋白；待藻蓝蛋白被洗脱收集完成后，添加0.045～0.06M磷酸缓冲液洗脱并收集别藻蓝蛋白洗脱液。

所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，步骤4中，将收集的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白洗脱液分别用40～60％饱和度硫酸铵溶液沉淀浓缩，沉淀后的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白再分别用透析法进行脱盐处理，最后分别置于冷冻干燥器中冷冻干燥，即获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的蛋白粉末。

本发明与现有技术相比，以人工养殖的钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)纯藻粉为原料，采用羟基磷灰石柱层析法一次性分离了藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白两种蛋白，而且作为生产原料的螺旋藻藻粉则可以直接从市场上批量购买，价格低廉且纯度高，也简化了从鲜活藻体中制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的繁琐步骤(不需要筛选优势藻株)。用作柱料的羟基磷灰石可以是自制的，简单易行，且降低了生产成本，是目前较为理想的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法。本发明生产出来的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白粉末纯度很高(分别为A₆₂₀/A₂₈₀≥2.1，A₆₅₀/A₂₈₀≥2.1，达到药品级纯度，蛋白含量均达98％以上)，不破坏蛋白的生物活性，最主要的优点就是能同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白纯品。

具体实施方式

实施例1：

1羟基磷灰石的制备：

(1)溶液配制：分别配制0.001M磷酸缓冲液(含0.1M氯化钠，pH＝6.7)，0.025M磷酸缓冲液(含0.1M氯化钠，pH＝6.7)和0.045M磷酸缓冲液(含0.1M氯化钠，pH＝6.7)；

(2)分别配制2M磷酸氢二钾溶液和2M氯化钙溶液；

(3)制备磷酸氢钙沉淀：在玻璃棒不断搅拌下，将2M磷酸氢二钾溶液和2M氯化钙溶液等体积混合，以3毫升/分钟的速度将混合液慢慢滴入容器中，使其形成磷酸氢钙沉淀；

(4)转化成羟基磷灰石：在连续搅拌情况下，滴加2M氢氧化钾溶液到上述磷酸氢钙沉淀中，当混合液的pH值达11.0，缓慢搅拌均匀，室温静置后待pH值回降到6.0，继续添加2M氢氧化钾溶液，如此重复多次，最后使磷酸氢钙混合液的pH值稳定在6.7。

(5)平衡：用0.001M磷酸缓冲液(含0.1M氯化钠，pH＝6.7)浮洗新制成的羟基磷灰石，除去微细颗粒，平衡以便用于层析。

2用羟基磷灰石层析柱制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白：

(1)藻胆蛋白粗提物的制备：取螺旋藻藻粉溶于蒸馏水(含0.1M氯化钠)，其中螺旋藻藻粉与水的比例控制在1∶5；搅拌均匀后，采用一次性冻融法(-10℃，5小时)来破碎藻细胞的细胞壁，然后4000转/分离心20分钟，弃沉淀取上清，上清即为藻胆蛋白粗提物。

(2)羟基磷灰石装柱：用注射器抽取上述羟基磷灰石混合液加到层析管中(层析管底部要用松软干净的脱脂棉球铺垫)，待羟基磷灰石沉淀后，用0.001M磷酸缓冲液(含0.1M氯化钠，pH＝6.7)平衡洗脱3次；待缓冲液滴完并露出羟基磷灰石表面时，加上述藻胆蛋白粗提物，其加样量是羟基磷灰石柱长的1/3；待藻胆蛋白粗提物中的蛋白被完全吸附后，添加0.001M磷酸缓冲液(pH＝6.7，含0.1M氯化钠)开始洗脱，先把叶绿素和藻黄素完全洗脱掉，然后添加0.025M磷酸缓冲液(pH＝6.7，含0.1M氯化钠)，把藻蓝蛋白洗脱下来；待藻蓝蛋白被洗脱收集完成后，再添加0.045M磷酸缓冲液(pH＝6.7，含0.1M氯化钠)洗脱并收集别藻蓝蛋白洗脱液；

(3)收取的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白于-20℃分别冷冻保存，浓缩时用40％饱和度硫酸铵溶液分别沉淀上述藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白溶液；沉淀后的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白用透析法进行脱盐处理，最后分别置于冷冻干燥器中干燥，即获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的蛋白粉末。

(4)蛋白粉末中的蛋白含量测定：利用分光光度法来测定产品中的蛋白含量及纯度，经多次测量，发现利用上述方法制备的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白粉末中，藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白纯度分别达到A₆₂₀/A₂₈₀＝2.2，A₆₅₀/A₂₈₀＝2.1，达到了药品级纯度。

实施例2：

1羟基磷灰石的制备：

(1)溶液配制：分别配制0.0015M磷酸缓冲液(含0.15M氯化钠，pH＝6.9)，0.03M磷酸缓冲液(含0.15M氯化钠，pH＝6.9)和0.05M磷酸缓冲液(含0.15M氯化钠，pH＝6.9)；

(2)分别配制1.5M磷酸氢二钾溶液和1.5M氯化钙溶液；

(3)制备磷酸氢钙沉淀：在玻璃棒不断搅拌下，将1.5M磷酸氢二钾溶液和1.5M氯化钙溶液等体积混合，以5毫升/分钟的速度将混合液慢慢滴入容器中，使其形成磷酸氢钙沉淀；

(4)转化成羟基磷灰石：在连续搅拌情况下，滴加1.5M氢氧化钾溶液到上述磷酸氢钙沉淀中，当混合液的pH值达11.0时，缓慢搅拌均匀，室温静置后待pH值回降到6.0，继续添加1.5M氢氧化钾溶液，如此重复多次，最后使磷酸氢钙混合液的pH值稳定在6.9。

(5)平衡：用0.0015M磷酸缓冲液(含0.15M氯化钠，pH＝6.9)浮洗新制成的羟基磷灰石，除去微细颗粒，平衡以便用于层析。

2用羟基磷灰石层析柱制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白：

(1)藻胆蛋白粗提物的制备：取螺旋藻藻粉溶于蒸馏水(含0.15M氯化钠)，其中螺旋藻藻粉与水的比例控制在1∶10；搅拌均匀后，采用一次性冻融法(-20℃，8小时)来破碎藻细胞的细胞壁，然后6000转/分离心30分钟，弃沉淀取上清，上清即为藻胆蛋白粗提物。

(2)羟基磷灰石装柱：用注射器抽取上述羟基磷灰石混合液加到层析管中(层析管底部要用松软干净的脱脂棉球铺垫)，待羟基磷灰石沉淀后，用0.0015M磷酸缓冲液(含0.15M氯化钠，pH＝6.9)平衡洗脱3次；待缓冲液滴完并露出羟基磷灰石表面时，加上述藻胆蛋白粗提物，其加样量是羟基磷灰石柱长的1/2；待藻胆蛋白粗提物中的蛋白被完全吸附后，添加0.0015M磷酸缓冲液(pH＝6.9，含0.15M氯化钠)开始洗脱，先把叶绿素和藻黄素完全洗脱掉，然后添加0.03M磷酸缓冲液(pH＝6.9，含0.15M氯化钠)，把藻蓝蛋白洗脱下来；待藻蓝蛋白被洗脱收集完成后，再添加0.05M磷酸缓冲液(pH＝6.9，含0.15M氯化钠)洗脱并收集别藻蓝蛋白洗脱液；

(3)收取的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白于-20℃分别冷冻保存，浓缩时用50％饱和度硫酸铵溶液分别沉淀上述藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白溶液；沉淀后的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白用透析法进行脱盐处理，最后分别置于冷冻干燥器中干燥，即获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的蛋白粉末。

(4)蛋白粉末中的蛋白含量测定：利用分光光度法来测定产品中的蛋白含量及纯度，经多次测量，发现利用上述方法制备的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白粉末中，藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白纯度分别达到A₆₂₀/A₂₈₀＝2.1，A₆₅₀/A₂₈₀＝2.1，达到了药品级纯度。

实施例3：

1羟基磷灰石的准备：

(1)溶液配制：分别配制0.002M磷酸缓冲液(含0.2M氯化钠，pH＝7.0)，0.035M磷酸缓冲液(含0.2M氯化钠，pH＝7.0)和0.06M磷酸缓冲液(含0.2M氯化钠，pH＝7.0)；

(2)从市场上购买羟基磷灰石商品用0.002M磷酸缓冲液(含0.2M氯化钠，pH＝7.0)浸泡一天；

(3)平衡：用0.002M磷酸缓冲液(含0.2M氯化钠，pH＝7.0)平衡购买并浸泡过的羟基磷灰石，除去微细颗粒，以便用于层析。

2用羟基磷灰石层析柱制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白：

(1)藻胆蛋白粗提物的制备：取螺旋藻藻粉溶于蒸馏水(含0.2M氯化钠)，其中螺旋藻藻粉与水的比例控制在1∶15；搅拌均匀后，采用一次性冻融法(-30℃，10小时)来破碎藻细胞的细胞壁，然后8000转/分离心40分钟，弃沉淀取上清，上清即为藻胆蛋白粗提物。

(2)羟基磷灰石装柱：用注射器抽取上述羟基磷灰石混合液加到层析管中(层析管底部要用松软干净的脱脂棉球铺垫)，待羟基磷灰石沉淀后，用0.002M磷酸缓冲液(含0.2M氯化钠，pH＝7.0)平衡洗脱3次；待缓冲液滴完并露出羟基磷灰石表面时，加上述藻胆蛋白粗提物，其加样量是羟基磷灰石柱长的2/3；待藻胆蛋白粗提物中的蛋白被完全吸附后，添加0.002M磷酸缓冲液(pH＝7.0，含0.2M氯化钠)开始洗脱，先把叶绿素和藻黄素完全洗脱掉，然后添加0.035M磷酸缓冲液(pH＝7.0，含0.2M氯化钠)，把藻蓝蛋白洗脱下来；待藻蓝蛋白被洗脱收集完成后，再添加0.06M磷酸缓冲液(pH＝7.0，含0.2M氯化钠)洗脱并收集别藻蓝蛋白洗脱液；

(3)收取的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白于-20℃分别冷冻保存，浓缩时用60％饱和度硫酸铵溶液分别沉淀上述藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白溶液；沉淀后的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白用透析法进行脱盐处理，最后分别置于冷冻干燥器中干燥，即获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的蛋白粉末。

(4)蛋白粉末中的蛋白含量测定：利用分光光度法来测定产品中的蛋白含量及纯度，经多次测量，发现利用上述方法制备的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白粉末中，藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白纯度分别达到A₆₂₀/A₂₈₀＝2.3，A₆₅₀/A₂₈₀＝2.2，达到了药品级纯度。

(3)收取的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白可于-20℃分别冷冻保存，浓缩时用60％饱和度硫酸铵溶液分别沉淀上述藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白溶液：沉淀后的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白可用透析袋进行脱盐处理，最后分别置于冷冻干燥器中制备蛋白粉末即可；

(4)蛋白粉末中的蛋白含量测定：利用分光光度法法来测定产品中的蛋白含量及纯度，经多次测量，发现利用上述方法制备的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白粉末中，藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白纯度分别达到A₆₂₀/A₂₈₀＝2.3，A₆₅₀/A₂₈₀＝2.2，达到了药品级纯度。

实施例1-3中，藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白洗脱完成后，可以用0.5M NaOH溶液洗脱层析柱致无色，并浸泡约10分钟后，用蒸馏水从下向上冲洗，将NaOH清洗干净，使层析柱得到再生。

Claims

1、一种同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于采用如下步骤：(1)制备藻胆蛋白粗提物，(2)羟基磷灰石装柱及平衡层析柱，(3)分别洗脱藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，(4)洗脱液的浓缩、脱盐及冷冻干燥，最终获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。

2、根据权利要求1所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于：步骤1中，取螺旋藻藻粉加蒸馏水，藻粉与水的质量比为1∶5～15，搅拌均匀后，置于-10℃以下冷冻5小时以上，室温融化，然后4000转/分以上离心20分钟以上，弃沉淀取上清，上清即为藻胆蛋白粗提物。

3、根据权利要求1所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于：步骤2中羟基磷灰石采用如下方法制备：(1)分别配制浓度为0.001～0.002M、0.025～0.035M、0.045～0.06M的磷酸缓冲液，上述磷酸缓冲液均含有磷酸氢二钾和磷酸二氢钾及0.1～0.2M氯化钠，pH值为6.7～7.0；

(2)分别配置1～2M磷酸氢二钾溶液和1～2M氯化钙溶液；

4、根据权利要求1所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于：步骤2中，将羟基磷灰石加到层析柱内，待羟基磷灰石沉淀后，用含有0.1～0.2M氯化钠、pH值为6.7～7.0的0.001～0.002M磷酸缓冲液平衡洗脱2～3次，待缓冲液滴完并露出羟基磷灰石表面时，加藻胆蛋白粗提物，其加入量是羟基磷灰石柱长的1/3～2/3。

5、根据权利要求1所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于：步骤3中，待藻胆蛋白粗提物中的蛋白被完全吸附后，添加0.001～0.002M磷酸缓冲液开始洗脱，先把叶绿素和藻黄素等杂质完全洗脱掉，再添加0.025～0.035M磷酸缓冲液，洗脱并收集藻蓝蛋白；待藻蓝蛋白被洗脱收集完成后，添加0.045～0.06M磷酸缓冲液洗脱并收集别藻蓝蛋白洗脱液。

6、根据权利要求1所述的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于：步骤4中，将收集的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白洗脱液分别用40～60％饱和度硫酸铵溶液沉淀浓缩，沉淀后的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白再分别用透析袋进行脱盐处理，最后分别置于冷冻干燥器中冷冻干燥，即获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的蛋白粉末。