CN100569262C - 一种降脂护肝的复方制剂、其制备方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于具有清热、解毒、降脂、护肝以及保健作用的复方包括中药组分和药用辅料，所述中药组分包括香附，五味子，决明子，枳椇子。本发明也涉及该复方制剂的制备方法以及在制备预防和治疗病毒性肝炎、黄疸性肝炎、化学性肝损伤、酒精性肝损伤、脂肪肝、高血脂、糖尿病、肥胖药物或保健食品中的应用。本发明的复方制剂药效强、无毒副作用。

Description

一种降脂护肝的复方制剂、其制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及一种复方制剂，具体是用于降脂护肝的复方制剂。本发明也涉及该复方制剂的制备方法及其用途。

背景技术

肝脏是人体最大的腺体，它在人的代谢、胆汁生成、解毒、凝血、免疫、热量产生及水与电解质的调节中均起着非常重要的作用。

一般来说，造成肝损伤主要有两大类致病因素，一类是由病原微生物如病毒感染而引起的肝脏炎症，如甲肝、乙肝等。另一类则是化学性肝损伤，它由各种毒性物质，如食物中的酒精、环境中的化学毒物及某些药物等对肝脏造成的损伤。另外由于肝脏是人体的主要代谢器官，肝脏脂肪代谢功能的失调会导致诸如高血脂、肥胖等症状。

病毒性肝损伤：

肝炎病毒侵入机体后，主要在肝细胞内复制并引起细胞病变。肝脏病变的轻重与机体免疫状态、病毒剂量大小、受染细胞多少等有关。各型肝炎的肝脏病变基本相同，主要是弥漫性肝细胞的变性、坏死和增生以及间质增生和炎性浸润。感染的肝细胞可查见各型相应的病原体。急性肝炎早期，肝细胞为气球样变、嗜酸性变、核溶解，最后灶性坏死与再生；汇管区淋巴细胞浸润，肝血窦壁枯否氏细胞增生。重型肝炎特征为大量肝细胞坏死，急性重型为急性肝坏死，亚急性和慢性重型为亚急性肝坏死伴肝细胞结节性增生及结缔组织增生，易演变为坏死后肝硬化。慢性肝炎由乙、丙、丁三型所致，慢性迁延性肝炎常见肝细胞失去索状排列，肝细胞膜增厚，胞浆空虚，堆砌成铺路石状；汇管区纤维组织轻微增生，肝细胞坏死处和汇管区有淋巴细胞浸润。慢性活动性肝炎的肝细胞坏死较重，常发生碎屑状坏死；汇管区纤维组织扩展到肝小叶内，当肝坏死在肝小叶中心区与汇管区连成一片时，称为桥状坏死，淋巴细胞浸润多，纤维组织增生重，肝细胞再生结节形成，可导致肝硬化。淤胆型肝炎除有轻微急性肝炎的变化，主要是毛细胆管内胆栓形成，肝细胞内胆色素滞留。由于肝脏充血、细胞浸润及肿胀，引起肝脏肿大、有叩击痛；肝细胞变性、坏死和溶解，引起肝功能不同程度的损害；部分患者由于胆汁排出受阻，胆栓形成，胆红素反流入血而出现不同程度的梗阻性或反流性黄疸。胆汁瘀积，胆盐可刺激感觉神经末稍而引起皮肤瘙痒，胆盐刺激迷走神经而使心跳减慢。糖代谢及乳酸转化糖元过程发生障碍，可出现乏力、倦怠、感。胃肠道炎症及充血，消化腺分泌减少等可引起食欲不振、恶心、腹胀等消化道症状。肝细胞大量坏死时，解毒功能减低，血氨及毒性物质蓄积、芳香氨基酸升高，胺类假性神经递质通过血脑屏障取代正常神经递质，以及低钾低钠血症、消化道大出血和感染等均可导致肝性脑病；由于肝脏合成凝血因子缺乏、血小板减少、播散性血管内凝血(DIC)、以及合并再生障碍性贫血等，均可引起出血；肝坏死和肝硬化时，由于内毒素血症、肾血管收缩、肾缺血等，可导致肾功能不全、低蛋白、门脉高压、醛固酮增高、钠水潴留等，均可产生腹水。

病毒性肝炎是世界性分布的传染病，每年受肝炎折磨的病人数以亿计，其中200多万人发生死亡。所有肝炎病毒中以乙肝病毒的危害影响面最大，全球现有3亿人携带乙肝病毒，其中我国就占了1.5亿。据有关资料，我国现有4000万慢性肝炎病人(主要由乙型病毒引起，丙肝病毒也可引起)，同时每年有数以百万计的急性甲型肝炎病人发生。

化学性肝损伤(包括酒精性肝损伤)：

作为人体的重要解毒器官的肝脏，具有肝动脉和肝静脉双重血液供应。化学物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到化学物中的毒性物质损害。自然界和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为“亲肝毒物”，这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变性、肝硬化和肝癌。某些工业生产中的原料、中间产物与最终产物均可能有肝毒性，因此，需十分警惕化学性肝中毒的发生。

化学毒物造成肝脏损伤的类型主要有：①脂肪变性。四氯化碳、黄磷等可干扰脂蛋白的合成与转运，形成脂肪肝。②脂质过氧化反应，这是中毒性肝损伤的特殊表现形式，如四氯化碳在体内代谢产生一种氧化能力很强的中间产物，导致生物膜上的脂质过氧化，破坏膜的磷脂，改变细胞的结构与功能。③胆汁郁积反应，主要与肝细胞膜和微绒毛受损而引起胆汁酸排泄障碍有关。这些肝脏损伤的机理是以下多种机制协同作用的结果：

(1)胆酸引起的肝细胞凋亡：合成和分泌胆汁是肝脏的基本功能，肝脏功能异常时出现胆汁郁积，胆汁郁积能导致肝损伤、肝硬化，最终导致肝衰竭。在培养的大鼠肝细胞中加入疏水性胆汁酸鹅脱氧胆酰甘氨酸(GCDC，20～100μM)可诱导细胞凋亡。GCDC主要通过活化死亡受体Fas来诱导细胞凋亡，GCDC通过微管促进胞浆Fas向细胞膜转运，Fas在细胞膜聚积，达到一定程度后，活化Fas/FasL信号途径，导致细胞凋亡，这是细胞死亡的一种新模式。

(2)黏附分子和氧化应激引起的炎性肝损伤：脓毒血症、内毒素、酒精性肝炎、缺血再灌注损伤及某些药物引起的肝毒性表现为全身和局部炎症，伴巨噬细胞和中性粒细胞向肝脏血管集结。这些吞噬细胞的主要功能是，消灭入侵的病原体并清除死亡细胞。但这些吞噬细胞产生的毒性介质，对周围正常细胞也会造成损伤，从而加重肝损伤。药物毒性、组织损伤、缺血再灌注、脓毒血症和其他病理生理事件直接或通过补体途径活化中性粒细胞和枯否氏细胞，后者释放细胞毒介质(例如活性氧基)和促炎介质(如细胞因子、趋化因子)。细胞因子及补体成份(如C5a)吸引中性粒细胞向肝脏血管集结。中性粒细胞上的黏附分子(β2整合素，尤其是CD11b/CD18)与内皮细胞和肝细胞上的细胞间黏附分子1(ICAM-1)使中性粒细胞附壁、外渗，生成氧化剂。活化的中性粒细胞附着在肝实质细胞，通过释放活性氧基和蛋白酶导致肝细胞死亡。而细胞因子能够诱导肝黏附分子及趋化因子生成，后者也受氧化应激调节。

(3)CYP2E1介导的毒性作用：肝脏表达很多细胞色素的亚型，细胞色素P4502E1(CYP2E1)在酒精的肝毒性中起重要作用。它代谢酒精、四氯化碳、对乙酰氨基酚等，生成毒性更大的物质；代谢乙醇生成活性氧基，产生肝毒性。

(4)过氧化亚硝酸盐在肝脏药物中毒中的作用：肝脏内一氧化氮(NO)与超氧化物反应，生成过氧化亚硝酸盐，过氧化亚硝酸盐能够使酪氨酸硝酸化造成组织损伤。肝脏细胞和星状细胞均能表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)，对乙酰氨基酚能诱导大鼠肝细胞生成iNOS。但组织学检查显示，在iNOS基因敲除小鼠，对乙酰氨基酚的肝脏毒性没有明显减轻。发现在该模型中，虽然小鼠肝脏内NO的生成减少，蛋白的硝酸化作用减弱，但出现超氧化物聚集，通过脂类的过氧化，造成肝损伤。肝脏内谷胱甘肽(GSH)对过氧化亚硝酸盐解毒，但某些肝脏毒素如对乙酰氨基酚、溴苯、氯仿、丙烯醇能够消耗体内的GSH，生成过氧化亚硝酸盐，产生毒性。正常体内NO与超氧化物作用，生成过氧化亚硝酸盐，GSH又作用于过氧化亚硝酸盐，因而，当其中任何一个环节出现问题时，都能造成肝损伤。

(5)线粒体功能障碍引起肝毒性：药物引起的微泡脂肪变性(microvesicular steatosis)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝细胞自溶性肝炎均与线粒体功能障碍有关。线粒体脂肪酸β氧化严重受损，可导致微泡脂肪变性，影响线粒体的修复，进而损伤线粒体DNA。线粒体功能障碍还导致线粒体膜通透性的改变(MPT)，使线粒体膜去极化、肿胀导致细胞坏死或凋亡，当细胞线粒体渗透小孔完全开放，影响ATP的合成，细胞出现死亡；而当渗透小孔不完全开放，还能完成ATP合成功能时，细胞肿胀，外膜破裂，释放线粒体细胞色素C，活化胞液天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspases)，导致细胞凋亡。

与肝脏相关的脂肪代谢疾病：

肝脏在脂类代谢中也有重要作用，肝细胞分泌的胆汁可以促进脂类的消化和吸收，脂肪的合成和释放、脂肪酸分解、酮体生成与氧化、胆固醇与磷脂的合成、脂蛋白合成和运输等均在肝脏内进行。人体正常肝组织中的脂类物质有三类：甘油三酯、磷酯和胆固醇。其中甘油三酯约2～3.5％，磷脂约占2.5％，胆固醇约占0.3％。现代医学研究认为，进食过多的碳水化合物或脂肪，会打破脂肪在肝脏中的输入、输出平衡，脂肪在肝内堆积，形成脂肪肝；如果机体组织对游离脂肪酸的动员和利用减少，脂肪在体内淤积，会形成肥胖；并会导致血液中的脂肪含量升高，形成高血脂。临床发现，血液中甘油三酯和胆固醇升高的水平与肥胖程度成正比，肥胖的人不单只有总胆固醇值较高，且拥有的LDL(低比重脂蛋白)较多，而HDL(高比重脂蛋白)较体重正常者少，因而对人体健康的危害就更大。

随着我国人民生活水平的提高，人们的膳食结构和生活方式发生了很大的变化，专家预测我国的肥胖人群在未来十年内将超过2亿，由此导致的高血脂和脂肪肝的发病率呈明显上升态势。目前我国高血脂症患者人数高达9000万。而由化学性肝损伤及高血脂等导致的脂肪肝的发病率在15％左右，是仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。

利用传统中医药治疗肝脏及与肝脏相关的各种疾病在我国已有悠久的历史，但传统中药汤剂存在服用不方便、剂量与质量难于控制等诸多弊端，同时对这些中药的治疗机理少有现代药学研究，从而难于以现代医学理论诠释这些药物的科学性。

因此，利用现代生物技术，研究发现传统护肝中药及药食两用药材的作用机理，结合现代制剂技术，研发适合长期服用的具有预防和治疗病毒性肝炎、黄疸性肝炎、化学性肝损伤、酒精性肝损伤、脂肪肝、高血脂、肥胖的药物和保健食品具有现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种能降脂护肝，对病毒性肝炎、黄疸性肝炎、化学性肝损伤、酒精性肝损伤、脂肪肝、高血脂、肥胖具有预防和治疗以及保健作用复方制剂。

为此，本发明提供一种复方制剂，包括中药组分和药用辅料，所述中药组分包括：

香附1～27份，五味子1～27份，决明子1～27份，枳椇子1～27份。

优选地，香附3～7份，五味子2～6份，决明子4～7份，枳椇子3～10份。

本发明所述的复方制剂为软胶囊、片剂、胶囊剂、液体制剂、颗粒剂、丸剂、分散剂或糖浆剂。

上述复方制剂，药用辅料选自食用葵花籽油、糊精、蔗糖、乳糖、淀粉、老蜜、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中几种的混合物。

本发明的另一目的是提供一种制备上述复方制剂的制备方法。

本发明所述的复方制剂的制备包括下列步骤：

(1)取按重量份计的香附1～27份和五味子1～27份，粉碎，混合均匀，用CO₂超临界萃取方法提取有效成分，得提取物I，萃取釜压力为20～25MPa，温度为50～70℃；

(2)取按重量份计的决明子1～27份和枳椇子1～27份，粉碎，混合，加3～6倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II；

(3)合并提取物I、II，制得药物提取物，向药物提取物中加入药用辅料，制得药剂，药用辅料选自食用葵花籽油、糊精、蔗糖、乳糖、淀粉、老蜜、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中几种的混合物。

向药物提取物中加入药用辅料，混合均匀，制粒，干燥，加入微粉硅胶，填充胶囊制成软胶囊。

向药物提取物中加入药用辅料，混合均匀，制粒，干燥，经压片制得片剂或装入胶囊制得胶囊剂或制粒后直接分装制成颗粒剂。

向药物提取物中加入药用辅料，加水，混合均匀，灌制成液体制剂。

向药物提取物中加入药用辅料，混合均匀，制得丸剂。

向药物提取物中加入药用辅料，混合均匀，制粒，压制成片，制得分散剂剂。

向药物提取物中加入药用辅料，加水，混合均匀，灌制成糖浆剂。

上述剂型的药用辅料均选自食用葵花籽油、糊精、蔗糖、乳糖、淀粉、老蜜、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中几种的混合物。

CO₂超临界萃取方法提取香附和五味子有效成分的方法为，按比例称取香附和五味子药材，粉碎，混合均匀，置萃取釜中，萃取釜压力20～25MPa，萃取温度50～70℃，萃取时间为1～4小时，CO₂流量按每公斤药材计为60～80kg/小时，收集分离釜中的萃取物，即得。

本发明的再一目的是提供上述复方制剂的用途，即本发明在制备预防和治疗病毒性肝炎、黄疸性肝炎、化学性肝损伤、酒精性肝损伤、脂肪肝、高血脂、肥胖药物或保健食品中的应用。

五味子为木兰科植五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill的果实。性温，味酸、甘。入、心、肾经，具有收敛固，益气生津，补肾宁心的功效。

枳椇子为鼠李科植物枳椇Hovrnia acerba Lingdl.的干燥种子。味甘，性平。无毒。入胃经，解酒毒，止吐，利尿。

决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。性凉，味苦、甘，具有清肝明目、清热泻火、利水通便作用。

香附为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的根茎。性平，味辛、微甘、微苦，具有行气解郁闷，调经止痛的作用。

《内经》云：“肝苦急，急食甘以缓之。肝欲散，急食辛以散之，用甘补之，酸泻之”。其从中医理论的角度指出了辛、甘、酸三味与肝病的重要关系。五味子味酸、甘，温，而酸能补阴血而敛肝气，能养肝柔肝，敛肝，补肝体而助肝用，甘能补益、和中、缓急，所以五味子既具泄肝又具补肝作用，为君药。决明子、枳椇子清热利湿，通便解毒，可解肝气之郁滞而起清肝、护肝作用，为臣药。方中香附为疏肝利胆之气之要药，为使药。方中各药合用，清泻渗利之中养阴补血、畅达肝气，祛邪而不伤正，达到清热、解毒、清肝、护肝的功效。

对组方中的两味单味药材进行了分子药理学和动物体内药效学研究，发现了与其保护肝脏作用相关的功能部位。利用生物分子学实验发现，香附提取物具有激活核受体PXR的作用，PXR是胆汁酸代谢的重要调节分子，PXR被激活后可以从多个环节上防止胆汁淤积的发生；香附提取物参还与了肝细胞内几个关键代谢酶基因(如CYP7A1)的表达调控，这些酶参与体内的胆固醇代谢、解毒、胆汁酸代谢等过程，提示香附具有疏肝利胆的作用，动物实验证明香附提取物能够明显降低模型动物的谷丙转氨酶(ALT)，明显促进肝损伤大鼠胆汁分泌，促进胆汁中总胆红素的排出，证实香附具有很好的保肝、利胆、退黄作用；枳椇子提取物在体外实验中显示出对核受体PPARα的激活作用，PPARα被激活后主导脂肪的分解代谢，说明枳椇子具有降低脂肪含量和减肥的作用；同时辅以已经证实了的、同样具有保肝降酶作用的五味子和具有降脂减肥、护肝作用的决明子，使得配方具有降酶、护肝、利胆、降脂的作用。这从现代医学的角度说明了本制剂组方的科学性。(见实施例9-13)

五味子中降酶护肝的有效成分为木脂素，二氧化碳超临界萃取是近年来发展起来的先进方法，二氧化碳超临界萃取五味子与水蒸气蒸馏、醇提所得的木脂素成分的种类相近，但总木脂素含量远高于水提和醇提；分子生物学实验表明，香附挥发油对PXR的激活作用效果最佳，采用二氧化碳超临界萃取能有效提取香附挥发油；决明子降脂的有效部位是乙酸乙酯提取物；故本发明制剂用二氧化碳超临界提取萃取五味子和香附，用乙酸乙酯回流提取决明子和枳椇子，生产工艺先进、合理。

本发明制剂在临床上可以通过口服方式进行用药，用量根据剂型不同而不一，其中软胶囊为每日3-5粒，颗粒剂为每日12-20g，片剂为每日15-25片，胶囊为每日15-25粒，液体制剂为每日3-5支，丸剂为每日3-5丸，分散剂为每日15-25片，糖浆剂为每日2-5ml。

本发明的有益效果在于，采用CO₂超临界萃取五味子中的木脂素及香附挥发油，大大提高了香附和五味子有效成分的利用率，使得本发明制剂的药效更显著。本发明具有清热、解毒、降脂、护肝及保健的作用，可用于预防和治疗病毒性肝炎、黄疸性肝炎、化学性肝损伤、酒精性肝损伤、脂肪肝、高血脂、肥胖等症。

附图说明：

图1香附提取物对核受体PXR的激活情况；

图2枳椇子提取物对核受体PPARα的激活情况；

图3香附提取物对肝细胞内代谢相关酶诱导的RT-PCR试验结果；

图4本发明制剂解酒效果分析图；

图5本发明制剂减轻体重效果分析图；

图6本发明制剂降胆固醇效果分析图；

图7本发明制剂降甘油三脂效果分析图；

图8本发明制剂对脂肪肝治疗效果分析图。

具体实施方式

下列实施例将进一步说明本发明，实施例不应被视为限制本发明的范围。

实施例1

中药组分为：香附8kg，五味子5kg，决明子10kg，枳椇子17kg；

其制备包括如下步骤：

(1)称取香附8kg，五味子5kg，粉碎，混合，CO₂超临界萃取，得提取物I 396g，萃取釜压力为20MPa，温度为50℃；

(2)称取决明子10kg，枳椇子17kg，粉碎，混合，加3倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II 891g；

(3)合并上述提取物I和提取物II，制得药物提取物，并向药物提取物中加入药用辅料食用葵花籽油2712g，混合均匀，制成软胶囊10000粒。

实施例2

所用的工艺设备及原料基本同实施例1，唯有不同的是中药组分为：香附3kg，五味子1kg，决明子7kg，枳椇子27kg。

实施例3

所用的工艺设备及原料基本同实施例1，唯有不同的是中药组分为：香附7kg，五味子2kg，决明子27kg，枳椇子10kg。

实施例4

所用的工艺设备及原料基本同实施例1，唯有不同的是中药组分为：香附1kg，五味子27kg，决明子4kg，枳椇子1kg。

实施例5

所用的工艺设备及原料基本同实施例1，唯有不同的是中药组分为：香附27kg，五味子6kg，决明子1kg，枳椇子3kg。

实施例6

中药组分为：香附8kg，五味子9kg，决明子12kg，枳椇子8kg；

其制备包括如下步骤：

(1)称取香附8kg，五味子9kg，粉碎，混合，CO₂超临界萃取，得提取物I 605g，萃取釜压力为22±2MPa，温度为60℃；

(2)称取决明子12kg，枳椇子8kg，粉碎，混合，加4倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II 720g；

(3)合并上述提取物I和提取物II，制得药物提取物，并向药物提取物中加入药用辅料糊精4000g、蔗糖34675g，混合均匀，制粒，干燥，分装，制成颗粒剂40000g。

实施例7

所用的工艺设备及原料基本同实施例6，唯有不同的是中药组分为：香附3kg，五味子1kg，决明子7kg，枳椇子27kg。

实施例8

中药组分为：香附8kg，五味子9kg，决明子12kg，枳椇子8kg；

其制备包括如下步骤：

(1)称取香附8kg，五味子9kg，粉碎，混合，CO₂超临界萃取，，得提取物I 620g。萃取釜压力为23±2MPa，温度为70℃；

(2)称取决明子12kg，枳椇子8kg，粉碎，混合，加5倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II 705g；

(3)合并上述提取物I和提取物II，制得药物提取物，并向药物提取物中加入药用辅料糊精2000g和淀粉21675g，混合均匀，制粒，干燥，压片，制成片剂50000片。

实施例9

所用的工艺设备及原料基本同实施例8，唯有不同的是中药组分为：香附1kg，五味子27kg，决明子4kg，枳椇子1kg。

实施例10

中药组分为：香附8kg，五味子9kg，决明子12kg，枳椇子8kg；

其制备包括如下步骤：

(1)称取香附8kg，五味子9kg，粉碎，混合，CO₂超临界萃取，得提取物I 618g，萃取釜压力为25MPa，温度为60℃；

(2)称取决明子12kg，枳椇子8kg，粉碎，混合，加6倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II 712g。

(3)合并上述提取物I和提取物II，制得药物提取物，并向药物提取物中加入药用辅料糊精2000g和淀粉20670g，混合均匀，制粒，干燥，装入胶囊，制成80000粒胶囊剂。

实施例11

所用的工艺设备及原料基本同实施例10，唯有不同的是中药组分为：香附7kg，五味子2kg，决明子27kg，枳椇子10kg。

实施例12

中药组分为：香附8kg，五味子5kg，决明子10kg，枳椇子17kg；

其制备包括如下步骤：

(1)称取香附8kg，五味子5kg，粉碎，混合，CO₂超临界萃取，得提取物I 396g，萃取釜压力为20MPa，温度为50℃；

(2)称取决明子10kg，枳椇子17kg，粉碎，混合，加3倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II 891g；

(3)合并上述提取物I和提取物II，制得药物提取物，并向药物提取物中加入药用辅料蔗糖10kg，加水至100L，混合均匀，灌制成液体制剂10000支。

实施例13

所用的工艺设备及原料基本同实施例12，唯不同的是中药组分为：香附27kg，五味子6kg，决明子1kg，枳椇子3kg。

实施例14

中药组分为：香附8kg，五味子5kg，决明子10kg，枳椇子17kg；

其制备包括如下步骤：

(1)称取香附8kg，五味子5kg，粉碎，混合，CO₂超临界萃取，得提取物I 396g，萃取釜压力为20MPa，温度为50℃；

(2)称取决明子10kg，枳椇子17kg，粉碎，混合，加3倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II 891g；

(3)合并上述提取物I和提取物II，制得药物提取物，并向药物提取物中加入药用辅料老蜜4000g，淀粉1713g，混合均匀，制成丸剂10000丸。

实施例15

所用的工艺设备及原料基本同实施例14，唯不同的是中药组分为：香附8kg，五味子9kg，决明子12kg，枳椇子8kg。

实施例16

中药组分和制备步骤基本同实施例8，唯不同的是向合并的提取物I和II中加入药用辅料乳糖21175g，羧甲基淀粉钠1250g，聚乙烯吡咯烷酮1250g，制成颗粒，压制成分散剂50000片。

实施例17

中药组分和制备步骤基本同实施例1，唯不同的是向合并的提取物I和II中加入药用辅料蔗糖3kg，加水至4L，混合均匀，灌制成糖浆剂50瓶。

实施例18香附提取物对核受体PXR的激活试验

香附提取物在体外实验中显示出对核受体PXR的激活作用。PXR是胆汁酸代谢的重要调节分子。动物实验的结果显示，PXR被激活后可以从多个环节上防止胆汁淤积的发生：它通过抑制胆汁酸合成的关键酶(CYP7A1)抑制胆汁酸的合成，通过激活转运蛋白(Oatp2)促进胆汁酸的排放，通过激活相应的代谢酶(CYP3A，PAPSS2)加快胆汁酸的代谢。从目前临床一线用药情况看，苯巴比妥是治疗胆汁淤积及其引起骚痒症的首选药物，利福平也是常用的治疗药物，两者共同的特征是它们都是PXR的激活剂。

采用萤火虫荧光素酶报告基因系统对PXR受体激活活性的分析。用PCR的方法从人的肝组织中克隆到PXR受体的全长cDNA，所用的引物序列1为5′-ggggtaccttcaccaccatggaggtgagacccaaagaaagc-3′，序列2为5′-gctctagactcagctacctgtgatgccg-3′，将扩增到的PCR产物插入表达载体后测序鉴定。报告基因用Promega公司的荧光素酶报告基因质粒pGL3-Promoter，在多克隆位点插入了PXR的结合元件PXRE(序列3：gatctatatgaactcaaaggaggtcagtgatatgaactcaaaggaggtcagtgatatgaactcaaaggaggtcagtg)。转染实验用L-02细胞在96孔板中进行，在转报告基因的同时共转PXR基因和RXR基因，转染24小时后每孔加入阳性药物利福平及香附提取物，并使溶剂DMSO的终浓度保持在0.1％。药物作用24小时后裂解细胞并进行荧光素酶活性的检测。(结果见图1)

实施例19 枳椇子提取物对核受体PPARα的激活试验

枳椇子提取物在体外实验中显示出对核受体PPARα的激活作用。PPAR是20世纪90年代初克隆出的一种超家族核受体中的一类孤儿受体，是一类依赖于配体的转录因子。PPAR对营养物的代谢和存储起了重要的作用，它也是多类化合物的主要的靶标，这些化合物有些已被成功地用于治疗糖尿病和异常脂血症等慢性疾病。PPARα的靶基因是一类基本同源的基因，主要分布在肝中，它们参与脂类物质的分解代谢活动，如脂肪酸的摄取(在位粒体内)、脂肪酸与细胞的结合(在过氧化酶体内)、脂肪酸的氧化(在线粒体内)以及脂蛋白的装配和运输等。PPARα被激活后主导脂肪的分解代谢，达到减肥和降低脂肪含量的作用。

采用萤火虫荧光素酶报告基因系统对PPARα受体激活活性的分析。用PCR的方法从人的肝组织中克隆到PPARα受体的配体结合区域(LBD)，所用的引物序列1为5′-gcggatccgtcgccaccatggtggacacggaaagccca-3′，序列2为5′-gcgggccccgtctcctttgtagtgc-3′，将扩增到的PCR产物插入表达载体后测序鉴定。报告基因用Promega公司的荧光素酶报告基因质粒pG5-LUC。转染实验用L-02细胞在96孔板中进行，在转报告基因的同时共转PPARa-LBD基因，转染24小时后每孔加入50mM阳性药物WY14643及枳椇子提取物，并使溶剂DMSO的终浓度保持在0.1％。药物作用24小时后裂解细胞并进行荧光素酶活性的检测。(结果见图2)

实施例20香附提取物对肝细胞内代谢相关酶诱导的RT-PCR试验

香附提取物参与了肝细胞内几个关键代谢酶基因的表达调控，这些酶参与体内的胆固醇代谢、解毒、胆汁酸代谢等过程，与香附的保肝利胆功能相吻合。例如，在体外培养的人肝细胞L02中，香附提取物能诱导CYP7A1基因(胆汁酸合成中的关键酶)的表达，促进胆固醇向胆汁酸的转化；同时它也诱导CYP3A家族基因(药物代谢主要酶)的表达，加速毒物在体内的代谢。

RT-PCR分析实验在人的肝细胞L-02中进行。细胞接种至6孔板24小时后加入阳性药物苯巴比妥及香附提取物，浓度均为10μg/ml。加药24小时后裂解细胞提取RNA，并用以下的引物进行RT-PCR表达检测。GAPDH所用的引物序列1为5′-atgccatcactgccaccc-3′，序列2为5′-gcctgcttcaccaccttctt-3′；CYP7A1所用的引物序列3为5′-gcctttctggaagcgatacct-3′，序列4为5′-ggggaagaggaagccatcaac-3′；CYP3A4所用的引物序列5为5′-cacgggactatttccaccac-3′，序列6为5′-tgacctcaggcgatccaccc-3′。

实施例21香附挥发油降低大鼠谷丙转氨酶的试验

动物实验显示香附挥发油能明显抑制异硫氰酸萘酯所致急性肝损伤大鼠血清中的谷丙转氨酶活性升高。

受试药物：香附提取物，由深圳微芯生物科技有限责任公司提供；阳性药：国嘉胆维他片(批号：20040115)。

动物：SD种大白鼠，雄性，260±20g，由广西中医药研究所实验动物室提供。动物置不锈钢笼具内，分笼饲养，每笼10只，喂标准颗粒饲料，自由饮水。室温22-24℃，相对湿度65±5％。

试剂与仪器：丙氨酸氨基转移酶试剂盒(批号：040522)，为四川省迈克科技有限责任公司产品；异硫氰酸萘酯，美国Sigma公司产品；722型光栅分光光度计，上海分析仪器三厂。

试验方法：

选取SD大白鼠40只，雄性，随机分为正常对照组，模型动物组，阳性药组，香附挥发油高剂量组和低剂量组共5组，每组8只大鼠。每日上午给大鼠灌胃给药，正常对照组和模型动物组灌服赋型剂10ml/kg体重；阳性药组灌服阳性药10ml/kg体重；香附挥发油高剂量组和低剂量组分别灌服试验药10ml/kg体重，连续3天。连续灌药后第4天上午除正常对照组外，各组动物均灌胃异硫氰酸萘酯80mg/kg(花生油溶解稀释)，当日下午及次日分别再灌药1次。造模48小时后，禁食不禁水，剪大鼠尾部取血，分离血清。按试剂盒方法测定血清丙氨酸氨基转移酶活性。

表1 香附挥发油对异硫氰酸萘酯所致急性肝损伤大鼠血清ALT的影响(X±SD，N＝8)

与正常对照组比较：^*P＜0.001；与模型组比较：^**P＜0.01

结果：香附挥发油能明显抑制异硫氰酸萘酯所致急性肝损伤大鼠血清中的谷丙转氨酶活性升高(表1)。

实施例22 香附挥发油促进大鼠胆汁分泌的试验

动物实验显示香附挥发油能明显促进异硫氰酸萘酯所致肝损伤大鼠胆汁分泌，提高胆汁中总胆红素含量，明显促进胆汁中总胆红素的排出量。

受试药物：香附提取物，由深圳微芯生物科技有限责任公司提供；阳性药：国嘉胆维他片(批号：20040115)。

动物：SD种大白鼠，雄性，260±20g，由广西中医药研究所实验动物室提供。动物置不锈钢笼具内，分笼饲养，每笼10只，喂标准颗粒饲料，自由饮水。室温22-24℃，相对湿度65±5％。

试剂与仪器：总胆红素试剂盒(批号：0404091)，为四川省迈克科技有限责任公司产品；异硫氰酸萘酯，美国Sigma公司产品；722型光栅分光光度计，上海分析仪器三厂。

试验方法：

选取SD大白鼠40只，雄性，随机分为正常对照组，模型动物组，阳性药组，中药提取物高剂量组和低剂量组等5组，每组8只大鼠。每日上午给大鼠灌胃给药，正常对照组和模型动物组灌服赋型剂10ml/kg体重；阳性药组灌服阳性药10ml/kg体重；中药提取物高剂量组和低剂量组分别灌服试验药10ml/kg体重，连续3天。连续灌药后第4天上午除正常对照组外，各组动物均灌胃异硫氰酸萘酯80mg/kg(花生油溶解稀释)，当日下午及次日分别再灌药1次。造模48小时后，禁食不禁水，剪大鼠尾部取血。取血后，再给大鼠灌胃给药1次，立即以戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉后，将大鼠仰位固定于手术板上，沿腹正中线切开约2cm，打开腹腔，找到胃幽门部，翻转十二指肠降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管，在其下穿2根丝线，结扎乳头部，向肝脏方向作“V”型切口，插入塑料管，即可见有淡黄绿色胆汁流出，结扎固定塑料管，用试管收集胆汁。手术后用止血钳夹闭腹壁，以盐水纱布覆盖，分别在用药1小时后收集药后1小时胆汁，测量每只大鼠胆汁流量和胆汁中总胆红素含量，计算胆汁中总胆红素总排出量。

结果：香附挥发油能明显促进异硫氰酸萘酯所致肝损伤大鼠胆汁的分泌，提高胆汁中总胆红素(TBil)含量，明显促进胆汁中总胆红素的排出量(表2)。

表2 香附挥发油对异硫氰酸萘酯所致急性肝损伤大鼠胆汁流量、TBil和肝重的影响(X±SD，N＝8)

与正常对照组比较：##P＜0.01；###P＜0.001；

与模型组比较：^*P＜0.05；^**P＜0.01；^***P＜0.001

实施例23对化学性肝损伤辅助保护作用的试验

用本发明制剂且按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)进行了对化学性肝损伤有辅助保护作用的动物功能学试验，结果表明：本发明软胶囊制剂连续30天经口服灌胃给药，能显著降低大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶(AST)含量(表3)，组织病理学检查中，高剂量组病理评分显著低于模型对照组，证实本发明制剂软胶囊对化学性肝损伤有辅助保护作用。

受试药物：本发明软胶囊制剂(批号：20040512)。

动物：SD种大白鼠，雄性，195±15g，由四川抗生素研究所动物中心提供。动物置不锈钢笼具内，分笼饲养，每笼10只，喂标准颗粒饲料，自由饮水。室温22-23℃，相对湿度40％～70％。

试剂与仪器：CCL₄，重庆化学试剂厂生产；丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒、CX4全自动生化分析仪(均为美国贝克曼库尔特公司产品)。

试验方法：取雄性SD大白鼠60只，随机分为正常对照组，模型动物组及高、中、低剂量给药组，每组12只大鼠。给药组每日经口灌胃给予剂量分别为533mg/kg.bw、267mg/kg.bw、133mg/kg.bw的受试软胶囊内容物，灌胃体积按10ml/kg.bw计算，模型动物组和阴性对照组给予蒸馏水，每周称重两次以调整灌胃体积，连续30天，于第30天将各组动物隔夜禁食16小时，模型组和各给药剂量组一次灌胃给予食用油稀释至3％的CCL₄ 5ml/kg.bw(折合CCL₄的剂量为240mg/kg.bw)，阴性对照组给予食用植物油，给药组继续给予受试验样品至实验结束(与CCL₄灌胃间隔4小时以上)，给予CCL₄后24小时处死动物，取血分离血清，测定ALT、AST。

结果：本发明软胶囊制剂连续30天经口服灌胃给药，能显著降低大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶(AST)含量。

表3 本发明软胶囊制剂对大鼠血清ALT、AST的影响

注：与阴性对照组比较##P＜0.01；与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01.

实施例24 解酒试验

用本发明制剂对患者进行了为期两个月的解酒试验，通过对患者醉酒程度的改善的观察和分析，结果证明该产品具有解酒的功效。

试验方法和过程：

一、病例选择标准：

1、临床症状表现：

①体重逐渐超重，尤其是腹部

②食欲不振、腹胀、很少有饥饿感

③肝区或右上腹隐痛或不舒服

④四肢乏力，右肩背疼痛发胀，无缘无故地感觉到很累、头晕

⑤口苦、口干、口臭

⑥精神抑郁、爱发脾气、多梦

⑦大便不规律，忽干忽稀

⑧酒后醒酒时间延长，比以前更容易醉酒

2、体征表现：

①皮肤暗淡、无光泽

②B超诊断属中、轻度脂肪肝患者

③血脂、肝功检查异常者

④严重者肝肿大并有压痛，部分患者可有轻度脾肿大

二、试验病例标准：

1、纳入病例标准：

B超诊断属中、轻度脂肪肝的患者

2、排除病例标准：

B超诊断属重度脂肪肝、肝纤维化、肝硬化的患者

确诊病毒性肝炎患者(如乙肝、甲肝、戊肝等)

合并有心血管、肾、肝和造血系统等严重原发性疾病患者

正在服用同类其他药品或保健食品的患者

年龄在18岁以下或65岁以上者

妊娠或哺乳期妇女

3、剔除病例标准：

凡不符合纳入标准，未按规定用药，无法判定疗效或资料不全等影响疗效或安全性判断者

三、观察指标：

通过询问患者临床症状的轻重程度变化来判断该产品的疗效性，试验期前、中、后各检查一次

四、临床疗效判定标准：

1、症状划及判分标准：

症状	重(以5分计)	中(以3分计)	轻(以1分计)	正常(以0分计)
					醉酒、醒酒	易醉，醉后醒酒时间长且非常难受	易醉，醉后醒酒时间稍短且比较难受	不太容易醉，醉后醒酒时间短且不难受	酒量稍微有所增加，醉酒后也不难受

2、临床综合疗效判定标准

①痊愈：症状、体征消失或基本消失，N≥95％

②显效：症状、体征明显改善，94％＞N≥40％

③有效：症状、体征均有好转，39％＞N≥10％

④无效：症状、体征无明显改善，甚或加重，N＜10％

其中疗效指数按下表执行：

五、试验过程：

通过询问病情、填写初筛表等方式按本方案中“病例选择要求”初筛15人，再通过一系列的检查(如肝胆脾肾B超检查、实验室检查等)后选择10人作为试验病例参加本软胶囊制剂为期2个疗程(即2个月)的临床测试，并通过患者临床症状、体征变化观察以及B超和实验室检查的结果变化等方面对该产品的脂肪肝辅助治疗作用和相关指标的有效性作出科学的评价。

六、剂量与疗程：口服，每日2次，每次2粒，30天为一疗程，服用2个疗程。

试验结果：按5分制对醉酒轻重程度进行划分，得解酒疗效指数N＝87％，说明“本发明制剂”有显著解酒功效，具体分析如图4(其中纵坐标中酒醉轻重程度的变化值是以0月值为基线的变化值)。

实施例25 减肥试验

用本发明制剂对肥胖患者进行了为期两个月的减肥试验，通过对肥胖患者的体重变化进行科学的观察和分析，结果证明该产品具有减少体重的功效。

试验方法和过程：

一、病例选择标准：同实施例15

二、试验病例标准：同实施例15

三、观察指标：

检查项目：体重、身高

四、试验过程：同实施例15

五、剂量与疗程：同实施例15

试验结果：其中75％的患者体重有不同幅度的下降，BMI减幅为0.15～1.23且平均减幅为0.61，具体分析如图5(其中BMI＝体重(kg)/身高(m)²，纵坐标中BMI变化值是以0月值为基线的BMI的变化值)。

实施例26 降胆固醇试验

用本发明制剂对患者进行了为期两个月的降低胆固醇试验，通过对患者总胆固醇的变化进行科学的观察、分析，结果证明该产品具有降低胆固醇的功效。

试验方法和过程：

一、病例选择标准：同实施例15

二、试验病例标准：同实施例15

三、观察指标：

检查项目：血脂4项

四、试验过程：同实施例15

五、剂量与疗程：同实施例15

试验结果：其中89％的人群有显著下降，下降幅度：1～0.05，平均下降幅度为0.43，具体分析如图6(其中纵坐标中总胆固醇的变化值是以0月值为基线的变化值)。

实施例27降甘油三脂试验

用本发明制剂对患者进行了为期两个月的降甘油三脂试验，通过对患者甘油三脂进行科学的观察和分析，结果证明该产品具有降低甘油三脂的功效。

试验方法和过程：同实施例15

试验结果：其中56％的人群有显著下降，下降幅度0.06～2.53且平均下降0.09，具体分析如图7(其中纵坐标中甘油三脂的变化值是以0月值为基线的变化值)。

实施例28辅助治疗脂肪肝试验

用本发明制剂对患者进行了为期两个月的辅助治疗脂肪肝的试验，通过对患者肝脏B超的变化进行科学的观察、分析，结果证明该产品对脂肪肝有较好的功效，尤其针对营养过剩型加酒精型的脂肪肝效果更佳。

试验方法和过程：

一、病例选择标准：同实施例15

二、试验病例标准：同实施例15

三、观察指标：

检查项目：肝胆B超，按临床轻重程度分正常(以0分计)、轻度(以1分计)、中度(以3分计)、重度(以5分计)四种。

四、试验过程：同实施例15

五、剂量与疗程：同实施例15

试验结果：其中56％人群脂肪肝有本质性的好转，具体分析如图8。

Claims (8)

1、一种降脂护肝的复方制剂，其特征在于该制剂由中药组分和药用辅料组成，所述中药组分由下述原料药制成：

香附1～27份，五味子1～27份，决明子1～27份，枳椇子1～27份。

2、如权利要求1所述的复方制剂，其特征在于该制剂的中药组分由下述原料药制成：

香附3～7份，五味子2～6份，决明子4～7份，枳椇子3～10份。

3、如权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，所述制剂为片剂、胶囊剂、液体制剂、颗粒剂、丸剂、分散剂或糖浆剂。

4、如权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，所述药用辅料选自食用葵花籽油、糊精、蔗糖、乳糖、淀粉、老蜜、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中几种的混合物。

5、一种降脂护肝的复方制剂的制备方法，其特征在于，所述中药组分包括：

香附1～27份，五味子1～27份，决明子1～27份，枳椇子1～27份；

其制备包括如下步骤：

(1)取按重量份计的香附1～27份和五味子1～27份，粉碎，混合均匀，用CO₂超临界萃取方法提取有效成分，得提取物I，萃取釜压力为20～25MPa，温度为50～70℃；

(2)取按重量份计的决明子1～27份和枳椇子1～27份，粉碎，混合，加3～6倍的乙酸乙酯回流提取二次，合并提取液，浓缩得提取物II；

(3)合并提取物I、II，制得药物提取物，向药物提取物中加入药用辅料，制得药剂；其中药用辅料选自食用葵花籽油、糊精、蔗糖、乳糖、淀粉、老蜜、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中几种的混合物。

6、如权利要求5所述的复方制剂的制备方法，其特征在于，向药物提取物中加入药用辅料，混合均匀，制成软胶囊，其中药用辅料选自食用葵花籽油、糊精、蔗糖、乳糖、淀粉、老蜜、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中几种的混合物。

7、如权利要求5所述的复方制剂的制备方法，其特征在于，向药物提取物中加入药用辅料，混合均匀，制粒，干燥，经压片制得片剂或装入胶囊制得胶囊剂或制粒后直接分装制成颗粒剂，其中药用辅料选自食用葵花籽油、糊精、蔗糖、乳糖、淀粉、老蜜、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或其中几种的混合物。

8、权利要求1-3任一复方制剂在制备预防和治疗化学性肝损伤、酒精性肝损伤、脂肪肝、高血脂、肥胖的药物或保健食品中的应用。

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