CN100567941C

CN100567941C - 标贴式生物切片制作工艺

Info

Publication number: CN100567941C
Application number: CNB2005100178819A
Authority: CN
Inventors: 段增强; 高致明; 贺德先; 田朝阳
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-08-15
Filing date: 2005-08-15
Publication date: 2009-12-09
Anticipated expiration: 2025-08-15
Also published as: CN1916590A

Abstract

本发明公开了一种标贴式生物切片制作工艺，从取材、固定到展片等步骤与现有生物切片技术相同；而从移片到封片等步骤采用如下特有的方法，(10)移片：采用环氧树脂材料作为切片载体，将展好的切片一一摆放上去，每张载体可放置一百至数百个切片；(11)脱蜡：切片摆放好晾干后，即可在一个容器内用二甲苯集中脱蜡；(12)染色：切片上的蜡被二甲苯完全溶去后，用无水乙醇和95%至50%浓度梯度的乙醇处理，然后进行集中染色，(13)透明：切片被染色后，用50%至无水乙醇浓度梯度的乙醇处理，再用二甲苯进行集中透明；(14)封片：将通过二甲苯透明的切片，采用高光树脂喷膜封片。然后经过烘干、分割，并根据需要，象贴标签一样将其贴在载玻片的中部，这样，一次就可制作出一百至数百张切片来。

Description

标贴式生物切片制作工艺

技术领域

本发明涉及一种生物切片技术，尤其是一种标贴式生物切片制作工艺。

背景技术

传统的生物切片技术于上世纪初期传入我国，长期以来在生物学科研究与教学等领域发挥着重要作用。我国相继建立了许多生物切片标本厂，为全国农、医、生物类有关大专院校及中小学校提供了大量的生物学、医学等切片标本。但现有的生物切片制作工艺由于受载体的限制，切片标本不能集中处理，每个载玻片只能放一至数个切片标本，由于载玻片的限制，这在一定程度上影响了切片标本染色、封片的一致性，更重要的是每次只能制作一张标本，制作效率低下。再次，制作者较长时间受到二甲苯等有害药品的毒害，至今无法解决。

发明内容

本发明的目的是提供一种可大规模集中处理，制作效率高的标贴式生物切片制作工艺。

本发明的技术方案是：一种标贴式生物切片制作工艺，主要步骤(1)取材：动物或植物器官材料；(2)固定：将所取材料用甲醛或冰乙酸或乙醇药液其中一种快速杀死并固定，使其保持原来的生活状态；(3)水洗：材料经杀死固定后，用水或50％乙醇溶液洗涤液洗去材料中的固定液；(4)脱水：用乙醇或正丁醇或叔丁醇或丙酮其中一种药剂把材料中的水分全部替代出来；(5)透明：材料脱水后，用二甲苯作为透明剂，这是因为它既能与脱水剂又能与石蜡混合，便于包埋剂渗入到材料组织中去；(6)浸蜡：材料完全透明后，用石蜡替换材料中的二甲苯，并使石蜡渗透到材料组织中去；(7)包埋：将材料与石蜡同时倒入一纸盒内并摆放好材料，然后冷却；(8)切片：经分割修整，蜡块材料即可上机切片，切片厚度调整为10微米左右；(9)展片：切片机所切出的切片有绉折，因此要在盛有35℃温水的容器内进行展片；(10)移片：采用环氧树脂材料作为切片载体，将展好的切片一一摆放上去，每张载体可放置一百至数百个切片；(11)脱蜡：切片摆放好后，经过几小时的晾干，即可在一个容器内用二甲苯集中脱蜡；(12)染色：切片上的蜡被二甲苯完全溶去后，用无水乙醇和95％至50％浓度梯度的乙醇处理，然后进行集中染色，如此，可保证染色均匀一致；(13)透明：切片被染色后，用50％至无水乙醇浓度梯度的乙醇处理，再用二甲苯进行集中透明；(14)封片：将通过二甲苯透明的切片，采用高光树脂喷膜封片。然后经过烘干、分割，并根据需要，象贴标签一样将其贴在载玻片的中部，这样，一次就可制作出一百至数百张切片来。

第(10)移片步骤中环氧树脂为551AB-3。

本发明标贴式生物切片工艺的优点：

(1)解决了长期以来展好后的切片不能大规模集中摆放的问题。生物切片材料集中排列于某一新型载体上，并在脱蜡、染色、透明封片等过程中进行大规模集中处理，这在生物切片技术领域尚属首创。

(2)解决了切片不能集中进行脱蜡、染色、透明、封片的问题。

(3)采用此工艺制作的生物切片标本为标贴式产品，此产品新颖、独特，适合工业化生产，大大提高了切片标本的制作效率。

(4)集约化处理技术降低了二甲苯等药品对环境和人的污染和危害。

具体实施方式

现有生物切片技术及其不足(以石蜡切片为例)

(1)现有生物切片技术的主要步骤

取材：因制作目的而定，但无论是动物或植物器官材料，取材时都应本着″小而精″的原则，以利于快速固定。

固定：将所取材料用甲醛或冰乙酸、乙醇药液快速杀死并固定，使其保持原来的生活状态。

水洗：材料经杀死固定后，用水或50％乙醇洗涤液洗去材料中的固定液。

脱水：用乙醇、正丁醇、叔丁醇、丙酮其中一种药剂把材料中的水分全部替代出来。

透明：材料脱水后，常用二甲苯作为透明剂，这是因为它既能与脱水剂又能与石蜡混合，便于包埋剂渗入到材料组织中去。

浸蜡：材料完全透明后，用石蜡替换材料中的二甲苯，并使石蜡渗透到材料组织中去。

包埋：将材料与石蜡同时倒入一纸盒内并摆放好材料，然后冷却。

切片：经分割修整，蜡快材料即可上机切片，切片厚度一般调整为10微米左右。

展片：切片机所切出的切片有绉折，因此要在盛有35℃温水的容器内进行展片。

移片：通过展片并冷却的切片移至载玻片的中部。每个载玻片放1-2个切片。

脱蜡：通常用二甲苯将蜡脱去。

染色：切片上的蜡被完全溶去后，用无水乙醇和(从95％降至50％)的乙醇处理，然后进行染色。

透明：组织被染色后，用不同浓度梯度的乙醇(从50％至无水乙醇)处理，然后再用二甲苯作透明。

封片：在透明好的组织上面滴一滴树胶，盖上洁净的盖玻片，如此一张动植物切片标本即制作完毕。2.本发明标贴式生物切片的方法与步骤(以石蜡切片为例)

本发明贴式生物切片工艺从取材固定到展片等步骤与现有生物切片技术相同。而从移片到封片等步骤采用特有的方法，其具体方法如下：

移片：采用551A B-3环氧树脂材料(市场有售)作为切片载体，将展好的切片一一摆放上去，每张载体可放置一百至数百个切片。

脱蜡：切片摆放好后，经过几小时的晾干，即可在一个容器内用二甲苯集中脱蜡。

染色：切片上的蜡被二甲苯完全溶去后，用无水乙醇和不同浓度梯度(从95％至50％)的乙醇处理，然后进行集中染色。如此，可保证染色均匀一致。

透明：切片被染色后，用不同浓度梯度的乙醇(由50％至无水乙醇)处理，再用二甲苯进行集中透明。

封片：将通过二甲苯透明的切片，采用高光树脂喷膜封片。然后经过烘干、分割，并根据需要，象贴标签一样将其贴在载玻片的中部。这样，一次就可制作出一百至数百张切片来。

本发明标贴式生物切片技术是在现有生物切片技术的基础上发明和发展起来的。该制作工艺运用超常思维方式，用树脂材料作为载体，并采用集约排列、集中处理等技术，使切片标本的制作质量和效率大幅度提高。本发明是生物切片技术的一个飞跃。

Claims

1、一种标贴式生物切片制作工艺，其特征是：主要步骤(1)取材：动物或植物器官材料；(2)固定：将所取材料用甲醛或冰乙酸或乙醇药液其中一种快速杀死并固定，使其保持原来的生活状态；(3)水洗：材料经杀死固定后，用水或50％乙醇溶液洗涤液洗去材料中的固定液；(4)脱水：用乙醇或正丁醇或叔丁醇或丙酮其中一种药剂把材料中的水分全部替代出来；(5)透明：材料脱水后，用二甲苯作为透明剂，这是因为它既能与脱水剂又能与石蜡混合，便于包埋剂渗入到材料组织中去；(6)浸蜡：材料完全透明后，用石蜡替换材料中的二甲苯，并使石蜡渗透到材料组织中去；(7)包埋：将材料与石蜡同时倒入一纸盒内并摆放好材料，然后冷却；(8)切片：经分割修整，蜡块材料即可上机切片，切片厚度调整为10微米左右；(9)展片：切片机所切出的切片有绉折，因此要在盛有35℃温水的容器内进行展片；(10)移片：采用环氧树脂材料作为切片载体，将展好的切片一一摆放上去，每张载体可放置一百至数百个切片；(11)脱蜡：切片摆放好后，经过几小时的晾干，即可在一个容器内用二甲苯集中脱蜡；(12)染色：切片上的蜡被二甲苯完全溶去后，用无水乙醇和95％至50％浓度梯度的乙醇处理，然后进行集中染色，如此，可保证染色均匀一致；(13)透明：切片被染色后，用50％至无水乙醇浓度梯度的乙醇处理，再用二甲苯进行集中透明；(14)封片：将通过二甲苯透明的切片，采用高光树脂喷膜封片，然后经过烘干、分割，并根据需要，象贴标签一样将其贴在载玻片的中部，这样，一次就可制作出一百至数百张切片来。

2、根据权利要求1所述的标贴式生物切片制作工艺，其特征是：第(10)移片步骤中环氧树脂为551 AB-3。