CN106769315B - 一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法 - Google Patents
一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106769315B CN106769315B CN201611251018.4A CN201611251018A CN106769315B CN 106769315 B CN106769315 B CN 106769315B CN 201611251018 A CN201611251018 A CN 201611251018A CN 106769315 B CN106769315 B CN 106769315B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hemp
- callus
- wax
- dimethylbenzene
- paraffin section
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Treatments For Attaching Organic Compounds To Fibrous Goods (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Laminated Bodies (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Abstract
一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，包括以下步骤：一、取材与固定；二、整体染色；三、脱水；四、透明；五、浸蜡与包埋；六、切片、展片及粘片；七、脱蜡；八、封片、观察。本发明对现有植物切片技术进行了改进，根据大麻愈伤组织幼嫩、易碎等特点，修改了FAA固定液的成分，增加了固定后和染色前的抽气步骤。用固定后即进行整体染色的方法，用稀氨水使之快速复蓝，本发明删减了切片后染色的步骤。本方法能够得到组织结构完整、清晰的大麻愈伤组织石蜡切片，用本方法制作大麻愈伤组织石蜡切片比现有植物石蜡切片技术更适合、效率更高。
Description
技术领域
本发明涉及一种石蜡切片的制作方法，尤其涉及一种大麻愈伤组织石蜡切片的制作方法。
背景技术
大麻（Cannabis Sativa L.）是一种环境适应性优良、吸附重金属能力强的天然纤维植物，在纺织、制药、建材、能源等领域发挥着不容低估的作用并具有广阔的发展前景（熊和平，2008）。大麻纤维具有拉伸度高、保形性好、吸湿性好、抗菌和抗静电能力强等优点，随着全球石油、煤炭等重要自然资源日益枯竭，大麻作为一种重要的天然纤维植物，将发挥越来越重要的作用。我国的纤用大麻种植面积和均产量居世界前列。
大麻是一种常雌雄异株且常异花授粉的作物，遗传背景复杂，使用传统育种方法进行品种改良进程十分缓慢，随着生物技术的发展，转基因方法进行品种改良成为一种高效、目的性强的育种手段，高效转基因体系建立的前提是高效再生体系的建立，而且，植物再生方式有体细胞胚胎发生和体细胞器官再生等多种方式，不同再生方式对转基因效率影响重大，因此，研究大麻的再生体系及其再生方式，将为大麻转基因研究提供理论基础和技术支持。对大麻再生过程产生的愈伤组织进行石蜡切片，是研究其再生方式的一种便捷方法。
石蜡切片制作程序包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片染色等步骤，涉及到的程序和环节繁多，周期长。根据组织材料特性不同，所用的试剂、浓度、时间也各不相同。至今为止没有专门应用于制备大麻组织植物切片的技术，一般情况下每一块固定的组织制作20-40个切片，每个片子需要逐一染色，耗时耗力，造成使用常规的石蜡切片技术效率不高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，根据大麻愈伤组织幼嫩等特点，提供一种操作流程较简单，特别适于大麻的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，包括以下步骤：
一、取材与固定：
（1）选取合适发育时期的大麻愈伤组织材料，流水冲洗，去掉培养基等杂物；
（2）用滤纸吸去大麻愈伤组织表面的水份；
将大麻愈伤组织材料浸入改良后的FAA固定液中，固定24h以上；为使固定液更好地渗透到大麻愈伤组织中，将固定后的材料置于抽气装置中抽气1小时以上；
因大麻愈伤组织材料幼嫩，为防止材料收缩，将FAA固定液进行了改良，本发明改良后的FAA固定液为：质量浓度为38-40%的甲醛溶液（福尔马林）、冰醋酸和体积浓度为50-65%的乙醇溶液以体积比为1：1：18-20混合；
二、整体染色：
（1）用体积浓度为70-75%的酒精洗涤经步骤1处理的大麻愈伤组织材料（优选洗涤3-5次）；（目的是洗去表面残留的固定液和杂质）；
（2）将大麻愈伤组织材料用埃氏苏木精染色液染色 7-15天，为使染色液更好地渗透到大麻愈伤组织中，将染色后的大麻愈伤组织材料置于抽气装置中抽气1小时后，然后分别用体积浓度为75%、50%、30%、10%的乙醇依次浸泡0.5-0.8h（洗涤），流水冲洗过夜；
所述埃氏苏木精染色液配方为苏木精2g，冰醋酸10ml，甘油100ml，体积浓度为95%的酒精100ml，蒸馏水100ml，硫酸铝钾5g；配置流程参见王灶安等，植物显微技术，农业出版社，1989；
（3）将大麻愈伤组织材料在质量浓度为0.04-0.06%的氨水溶液（PH 8-9）中浸泡30-35min，进行分色复蓝（使细胞核仁和染色质呈现蓝黑色，其余浅蓝色），再用流水冲洗10-30min；
三、脱水：用不同浓度的乙醇溶液进行梯度（体积浓度分别为30%、50%、70%、80%、90%、100%）脱水，每次40min-1h；
使用体积浓度为70%的乙醇溶液脱水时，可将大麻愈伤组织材料在70%乙醇溶液中浸泡过夜，再进行更高浓度乙醇脱水。
浸泡大麻愈伤组织材料所用的乙醇溶液的体积为V。
四、透明：
（1）用100%的乙醇对大麻愈伤组织材料脱水后，倒去V*1/2浸泡大麻的乙醇溶液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间0.5-1h;
（2）再次倒去V*1/2体积的原液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间0.5-1h;
（3）倒去全部原液，加入二甲苯，浸泡0.5-1h；（也可再倒去全部二甲苯，再加入二甲苯，浸泡0.5-1h）；
五、浸蜡与包埋：
（1）将透明处理后的大麻愈伤组织材料连瓶放入恒温箱中，倒去1/2体积二甲苯，加入蜡屑（石蜡切成的碎屑，熔点为52-54℃和62-64℃的蜡屑按体积比1：1混合）直到溶液饱和，48-50℃保温1-1.2h;
（2）倒去1/2原介质，加1/2纯蜡（熔点为58-62℃）（所加纯蜡的体积与倒去的原介质的体积相同），58-62℃保温1h；重复操作两次；
（3）将步骤（2）原介质倒去，加入纯蜡；倒去纯蜡，再次加入新的纯蜡，于58-62℃恒温箱过夜，用常规石蜡进行包埋；
六、切片、展片及粘片：
（1）根据材料在蜡块中的位置和方向，修裁蜡块成梯形，粘到旋转式手动切片机的蜡台上进行切片，切片厚度7-10μm，得蜡带。
（2）在洁净的载玻片上均匀涂上明胶溶液（所述明胶溶液为1g明胶溶于100ml蒸馏水制成的溶液），将蜡带平放明胶溶液上，以水作漂浮剂，在50－52℃恒温铁板上使蜡带展平后，于65－66℃烤片3－3.2h；
七、脱蜡：将经步骤（六）处理的切片放入二甲苯中浸泡脱蜡2-5h；
八、封片、观察：将经步骤（七）处理的切片从二甲苯中取出后，在二甲苯完全挥发前，在载玻片中央滴1滴中性树胶，将盖玻片从一侧慢慢放下并将空气排除，将封好的切片放入38-42℃恒温箱干燥过夜，即成为永久切片。
本发明根据大麻愈伤组织的特点，对常规石蜡切片技术进行修改，是一种适合大麻愈伤组织石蜡切片的高效方法。
本发明对现有植物切片技术进行了改进，根据大麻愈伤组织幼嫩、易碎等特点，修改了FAA固定液的成分（降低了原配方中的酒精浓度，有效防止幼嫩材料皱缩）。增加了固定后和染色前的抽气步骤（使固定液或染色液能更有效地浸入愈伤组织中间部位）。用固定后即进行整体染色的方法，用稀氨水使之快速复蓝，与其他染色方法如切片后染色，或先整体染色再在切片后复染相比（参见康海岐，常红叶，许育彬，陈 放，水稻籽粒胚乳的石蜡切片方法改良及其结构发育观察，西北植物学报 , 2008 , 28 ( 5 ) : 1069 -1074），本发明删减了切片后染色的步骤。本方法能够得到组织结构完整、清晰的大麻愈伤组织石蜡切片，用本方法制作大麻愈伤组织石蜡切片比现有植物石蜡切片技术更适合、效率更高。
附图说明
图1是本发明实施例1的大麻愈伤组织切片的显微照片；
图2是本发明实施例2的大麻愈伤组织切片的显微照片。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1
本实施例之大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，包括以下步骤：
1、取材与固定：
（1）选取培养5d后的大麻愈伤组织材料，流水冲洗，去掉培养基等杂物；
（2）用滤纸吸去大麻愈伤组织表面的水份；
将大麻愈伤组织材料浸入改良后的FAA固定液中，固定24h；为使固定液更好地渗透到大麻愈伤组织中，将固定后的材料置于抽气装置中抽气1小时；
因大麻愈伤组织材料幼嫩，为防止材料收缩，将FAA固定液进行了改良，本发明改良后的FAA固定液为：质量浓度为38%的甲醛溶液（福尔马林）、冰醋酸和体积浓度为50%的乙醇溶液以体积比为1：1：18混合；
2、整体染色：
（1）用体积浓度为70%的酒精洗涤经步骤1处理的大麻愈伤组织材料（洗涤3次）；（目的是洗去表面残留的固定液和杂质）；
（2）将大麻愈伤组织材料用埃氏苏木精染色液染色 7天，为使染色液更好地渗透到大麻愈伤组织中，将染色后的大麻愈伤组织材料置于抽气装置中抽气1小时后，然后分别用体积浓度为75%、50%、30%、10%的乙醇依次浸泡0.5h（洗涤），流水冲洗过夜；
所述埃氏苏木精染色液配方为苏木精2g，冰醋酸10ml，甘油100ml，体积浓度为95%的酒精100ml，蒸馏水100ml，硫酸铝钾5g；配置流程参见王灶安等，植物显微技术，农业出版社，1989；
（3）将大麻愈伤组织材料在质量浓度为0.04%的氨水溶液（PH 8-9）中浸泡30min，进行分色复蓝（使细胞核仁和染色质呈现蓝黑色，其余浅蓝色），再用流水冲洗10min；
3、脱水：用不同浓度的乙醇溶液进行梯度（体积浓度分别为30%、50%、70%、80%、90%、100%）脱水，每次40minh；
使用体积浓度为70%的乙醇溶液脱水时，将大麻愈伤组织材料在70%乙醇溶液中浸泡过夜，再进行更高浓度乙醇脱水。
浸泡大麻愈伤组织材料所用的乙醇溶液的体积为V。
4、透明：
（1）用100%的乙醇对大麻愈伤组织材料脱水后，倒去V*1/2浸泡大麻的乙醇溶液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间0.5h;
（2） 再次倒去V*1/2体积的原液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间0.5h;
（3）倒去全部原液，加入二甲苯，浸泡0.5h；再倒去全部二甲苯，再加入二甲苯，浸泡0.5h；
5、浸蜡与包埋：
（1）将透明处理后的大麻愈伤组织材料连瓶放入恒温箱中，倒去1/2体积二甲苯，加入蜡屑（石蜡切成的碎屑，熔点为52-54℃和62-64℃的蜡屑按体积比1：1混合）直到溶液饱和，48℃保温1h;
（2）倒去1/2原介质，加1/2纯蜡（熔点为58-62℃）（所加纯蜡的体积与倒去的原介质的体积相同），58℃保温1h，重复两次。
（3）将步骤（2）原介质倒去，加入纯蜡；倒去纯蜡，再次加入新的纯蜡，于60℃恒温箱过夜，用常规石蜡进行包埋；
6、切片、展片及粘片：
（1）根据材料在蜡块中的位置和方向，修裁蜡块成梯形，粘到旋转式手动切片机的蜡台上进行切片，切片厚度7-10μm，得蜡带。
（2）在洁净的载玻片上均匀涂上明胶溶液（所述明胶溶液为1g明胶溶于100ml蒸馏水制成的溶液），将蜡带平放明胶溶液上，以水作漂浮剂，在50－52℃恒温铁板上使蜡带展平后，于65℃烤片3h；
7、脱蜡：将经步骤（6）处理的切片放入二甲苯中浸泡脱蜡2h；
8、封片、观察：将经步骤（7）处理的切片从二甲苯中取出后，在二甲苯完全挥发前，在载玻片中央滴1滴中性树胶，将盖玻片从一侧慢慢放下并将空气排除，将封好的切片放入40℃恒温箱干燥过夜，即成为永久切片。
图1是本发明实施例1的大麻愈伤组织切片；可见本方法能够得到组织结构完整、清晰的大麻愈伤组织石蜡切片，用本方法制作大麻愈伤组织石蜡切片比现有植物石蜡切片技术更适合、效率更高。
实施例2
本实施例之大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，包括以下步骤：
1、取材与固定：
（1）选取培养9d后的大麻愈伤组织材料，流水冲洗，去掉培养基等杂物；
（2）用滤纸吸去大麻愈伤组织表面的水份；
将大麻愈伤组织材料浸入改良后的FAA固定液中，固定24h；为使固定液更好地渗透到大麻愈伤组织中，将固定后的材料置于抽气装置中抽气1小时；
因大麻愈伤组织材料幼嫩，为防止材料收缩，将FAA固定液进行了改良，本发明改良后的FAA固定液为：质量浓度为40%的甲醛溶液（福尔马林）、冰醋酸和体积浓度为65%的乙醇溶液以体积比为1：1：20混合；
2、整体染色：
（1）用体积浓度为75%的酒精洗涤经步骤1处理的大麻愈伤组织材料（洗涤5次）；（目的是洗去表面残留的固定液和杂质）；
（2）将大麻愈伤组织材料用埃氏苏木精染色液染色15天，为使染色液更好地渗透到大麻愈伤组织中，将染色后的大麻愈伤组织材料置于抽气装置中抽气1小时后，然后分别用体积浓度为75%、50%、30%、10%的乙醇依次浸泡0.8h（洗涤），流水冲洗过夜；
所述埃氏苏木精染色液配方为苏木精2g，冰醋酸10ml，甘油100ml，体积浓度为95%的酒精100ml，蒸馏水100ml，硫酸铝钾5g；配置流程参见王灶安等，植物显微技术，农业出版社，1989；
（3）将大麻愈伤组织材料在质量浓度为0.06%的氨水溶液（PH 8-9）中浸泡35min，进行分色复蓝（使细胞核仁和染色质呈现蓝黑色，其余浅蓝色），再用流水冲洗10-30min；
3、脱水：用不同浓度的乙醇溶液进行梯度（体积浓度分别为30%、50%、70%、80%、90%、100%）脱水，每次40min-1h；
使用体积浓度为70%的乙醇溶液脱水时，将大麻愈伤组织材料在70%乙醇溶液中浸泡过夜，再进行更高浓度乙醇脱水。
浸泡大麻愈伤组织材料所用的乙醇溶液的体积为V。
4、透明：
（1）用100%的乙醇对大麻愈伤组织材料脱水后，倒去V*1/2浸泡大麻的乙醇溶液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间1h;
（2）再次倒去V*1/2体积的原液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间1h;
（3）倒去全部原液，加入二甲苯，浸泡1h；再倒去全部二甲苯，再加入二甲苯，浸泡1h；
5、浸蜡与包埋：
（1）将透明处理后的大麻愈伤组织材料连瓶放入恒温箱中，倒去1/2体积二甲苯，加入蜡屑（石蜡切成的碎屑，熔点为52-54℃和62-64℃的蜡屑按体积比1：1混合）直到溶液饱和，50℃保温1.2h;
（2）倒去1/2原介质，加1/2纯蜡（熔点为58-62℃）（所加纯蜡的体积与倒去的原介质的体积相同），62℃保温1h，重复两次。
（3）将步骤（2）原介质倒去，加入纯蜡；倒去纯蜡，再次加入新的纯蜡，于62℃恒温箱过夜，用常规石蜡进行包埋；
6、切片、展片及粘片：
（1）根据材料在蜡块中的位置和方向，修裁蜡块成梯形，粘到旋转式手动切片机的蜡台上进行切片，切片厚度7-10μm，得蜡带。
（2）在洁净的载玻片上均匀涂上明胶溶液（所述明胶溶液为1g明胶溶于100ml蒸馏水制成的溶液），将蜡带平放明胶溶液上，以水作漂浮剂，在52℃恒温铁板上使蜡带展平后，于66℃烤片3.2h；
7、脱蜡：将经步骤（6）处理的切片放入二甲苯中浸泡脱蜡5h；
8、封片、观察：将经步骤（7）处理的切片从二甲苯中取出后，在二甲苯完全挥发前，在载玻片中央滴1滴中性树胶，将盖玻片从一侧慢慢放下并将空气排除，将封好的切片放入40℃恒温箱干燥过夜，即成为永久切片。
图2是本发明实施例2的大麻愈伤组织切片；可见本方法能够得到组织结构完整、清晰的大麻愈伤组织石蜡切片，用本方法制作大麻愈伤组织石蜡切片比现有植物石蜡切片技术更适合、效率更高。
Claims (8)
1.一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
一、取材与固定：
（1）选取合适发育时期的大麻愈伤组织材料，流水冲洗，去掉杂物；
（2）用滤纸吸去大麻愈伤组织表面的水分；
将大麻愈伤组织材料浸入改良后的FAA固定液中，固定24h以上；将固定后的材料置于抽气装置中抽气1小时以上；
改良后的FAA固定液为：质量浓度为38-40%的甲醛溶液、冰醋酸和体积浓度为50-65%的乙醇溶液以体积比为1：1：18-20混合；
二、整体染色：
（1）用体积浓度为70-75%的酒精洗涤经步骤一处理的大麻愈伤组织材料；
（2）将大麻愈伤组织材料用埃氏苏木精染色液染色 7-15天，将染色后的大麻愈伤组织材料置于抽气装置中抽气1小时后，分别用体积浓度为75%、50%、30%、10%的乙醇依次浸泡0.5-0.8h，流水冲洗过夜；
所述埃氏苏木精染色液配方为苏木精2g，冰醋酸10ml，甘油100ml，体积浓度为95%的酒精100ml，蒸馏水100ml，硫酸铝钾5g；
（3）将大麻愈伤组织材料在氨水溶液中浸泡30-35min，进行分色复蓝，再用流水冲洗10-30min；
三、脱水：用不同浓度的乙醇溶液进行梯度脱水，每次40min-1h；
浸泡大麻愈伤组织材料所用的乙醇溶液的体积为V；
四、透明：
（1）用100%的乙醇对大麻愈伤组织材料脱水后，倒去V*1/2浸泡大麻愈伤组织的乙醇溶液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间0.5-1h;
（2）再次倒去V*1/2体积的原液，加入V*1/2体积的二甲苯, 浸泡时间0.5-1h;
（3）倒去全部原液，加入二甲苯，浸泡0.5-1h；
五、浸蜡与包埋：
（1）将透明处理后的大麻愈伤组织材料连瓶放入恒温箱中，倒去1/2体积二甲苯，加入蜡屑直到溶液饱和，48-50℃保温1-1.2h;
（2）倒去1/2原介质，加1/2纯蜡，58-62℃保温1h；重复操作两次；
（3）将步骤（2）原介质倒去，加入纯蜡；倒去纯蜡，再次加入新的纯蜡，于58-62℃恒温箱过夜，用常规石蜡进行包埋；
六、切片、展片及粘片：
（1）根据材料在蜡块中的位置和方向，修裁蜡块成梯形，粘到旋转式手动切片机的蜡台上进行切片，切片厚度7-10μm，得蜡带；
（2）在洁净的载玻片上均匀涂上明胶溶液，将蜡带平放明胶溶液上，以水作漂浮剂，在50－52℃恒温铁板上使蜡带展平后，于65－66℃烤片3－3.2h；
七、脱蜡：将经步骤六处理的切片放入二甲苯中浸泡脱蜡2-5h；
八、封片、观察：将经步骤七处理的切片从二甲苯中取出后，在二甲苯完全挥发前，在载玻片中央滴1滴中性树胶，将盖玻片从一侧慢慢放下并将空气排除，将封好的切片放入38-42℃恒温箱干燥过夜，即成为永久切片。
2.根据权利要求1所述的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，步骤二的第（1）步中，洗涤3-5次。
3.根据权利要求1或2所述的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，步骤二的第（3）步中，所述氨水溶液质量浓度为0.04-0.06%。
4.根据权利要求1或2所述的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，步骤三中，用体积浓度分别为30%、50%、70%、80%、90%、100%的乙醇溶液进行梯度脱水。
5.根据权利要求1或2所述的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，步骤三中，使用体积浓度为70%的乙醇溶液脱水时，将大麻愈伤组织材料在70%乙醇溶液中浸泡过夜，再进行更高浓度乙醇脱水。
6.根据权利要求1或2所述的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，步骤四的第（3）步中，倒去全部原液，加入二甲苯，浸泡0.5-1h后；再倒去全部二甲苯，再加入二甲苯，浸泡0.5-1h。
7.根据权利要求1或2所述的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，步骤五的第（1）步中，所述蜡屑为石蜡切成的碎屑，为熔点为52-54℃和62-64℃的蜡屑按体积比1：1混合。
8.根据权利要求1或2所述的大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法，其特征在于，步骤六的第（2）步中，所述明胶溶液为1g明胶溶于100ml蒸馏水制成的溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611251018.4A CN106769315B (zh) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | 一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611251018.4A CN106769315B (zh) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | 一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106769315A CN106769315A (zh) | 2017-05-31 |
| CN106769315B true CN106769315B (zh) | 2019-09-10 |
Family
ID=58928375
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201611251018.4A Active CN106769315B (zh) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | 一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106769315B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107702955B (zh) * | 2017-08-24 | 2020-04-07 | 胡雨逸 | 一种石蜡切片的制备方法 |
| CN107702966A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-02-16 | 华南农业大学 | 一种制作空心菜根结巨型细胞石蜡切片的方法 |
| CN108414318A (zh) * | 2018-03-09 | 2018-08-17 | 云南省农业科学院花卉研究所 | 一种杜鹃花种子的石蜡切片制作方法 |
| CN109115573B (zh) * | 2018-08-27 | 2021-06-25 | 河南牧业经济学院 | 文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法 |
| CN113295490A (zh) * | 2021-05-21 | 2021-08-24 | 湖北师范大学 | 一种香椿愈伤组织的石蜡切片制作方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102116711A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-07-06 | 山东东方海洋科技股份有限公司 | 一种大叶藻胚石蜡切片的制作方法 |
| CN102607907A (zh) * | 2012-02-24 | 2012-07-25 | 东北农业大学 | 一种蕨类植物配子体石蜡切片的方法 |
| CN103609439A (zh) * | 2013-11-02 | 2014-03-05 | 吉林农业大学 | 不同菌种对人参发状根的影响及应用方法 |
-
2016
- 2016-12-30 CN CN201611251018.4A patent/CN106769315B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102116711A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-07-06 | 山东东方海洋科技股份有限公司 | 一种大叶藻胚石蜡切片的制作方法 |
| CN102607907A (zh) * | 2012-02-24 | 2012-07-25 | 东北农业大学 | 一种蕨类植物配子体石蜡切片的方法 |
| CN103609439A (zh) * | 2013-11-02 | 2014-03-05 | 吉林农业大学 | 不同菌种对人参发状根的影响及应用方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 丽江云杉胚性愈伤组织石蜡制片中的整块染色与切片染色方法比较;李丹;《西部林业科学》;20091231;第38卷(第4期);第82-85页 * |
| 乌拉尔甘草愈伤组织石蜡切片与半薄切片的对比;张欣 等;《湖北农业科学》;20110630;第50卷(第12期);第2487-2489页 * |
| 杏花芽石蜡切片方法的改良;帅焕丽 等;《果树学报》;20111231;第28卷(第3期);第536-539页 * |
| 植物材料快速石蜡制片方法;贺冰 等;《植物学报》;20141231;第49卷(第2期);第203-208页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106769315A (zh) | 2017-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106769315B (zh) | 一种大麻愈伤组织的石蜡切片制作方法 | |
| CN103630421B (zh) | 一种芍药成熟种胚的石蜡切片制作方法 | |
| CN102116711B (zh) | 一种大叶藻胚石蜡切片的制作方法 | |
| CN107917832A (zh) | 鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法 | |
| CN105067412A (zh) | 一种阴道分泌物染色液及其制备方法与染色方法 | |
| CN103940648A (zh) | 鱼鳃组织石蜡切片的制备方法 | |
| CN107167350A (zh) | 一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法 | |
| CN109136167A (zh) | 百合叶肉原生质体的制备方法 | |
| CN106092864A (zh) | 一种尾巨桉流式检测的方法 | |
| CN101074952A (zh) | 裸子植物花粉管微管骨架的免疫荧光标记方法及其应用 | |
| CN103808550A (zh) | 一种便于形态学观察的粘孢子虫染色封存方法 | |
| CN104568556A (zh) | 一种纤毛虫的染色方法 | |
| CN108680418B (zh) | 一种用于十字花科作物花粉快速染色的染色液及方法 | |
| Gama et al. | Transfer cells in trichomatous nectary in Adenocalymma magnificum (Bignoniaceae) | |
| CN107702955B (zh) | 一种石蜡切片的制备方法 | |
| Rasmussen | Meiosis in Bombyx mori females | |
| CN107202720B (zh) | 一种石榴籽粒的石蜡切片方法 | |
| CN103674662B (zh) | 鱼类初期胚胎发育的dapi染色方法 | |
| CN112798322A (zh) | 一种3d细胞微球石蜡切片方法 | |
| CN110220904A (zh) | 一种基于根尖的尖叶牛樟染色体核型的分析方法 | |
| CN104390834A (zh) | 树脂切片的番红与甲基紫混合染色法及其染色液 | |
| CN104764645A (zh) | 两栖类趾骨石蜡切片制作方法 | |
| CN100393871C (zh) | 一种分离细胞的方法及专用细胞分离液 | |
| CN104278078B (zh) | 一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞（PGCs）的定位标记方法 | |
| CN107964529A (zh) | 夏至草原生质体制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |