CN109468309A - 一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法 - Google Patents

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胡爱生
胡心宇
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/04—Plant cells or tissues

Abstract

本发明公开了一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法，包括如下步骤：使用获得植物体作为目标材料，对目标材料造成创伤；获得外源原生质组织液，然后将目标材料浸泡到外源原生质组织液中；取浸泡后成活的目标材料种植，筛选出外源原生质与目标材料杂交成功的材料即为目标材料。本发明通过导入外源原生质可跨越巨大的亲缘关系距离，实现远缘无性杂交育种的目的。

Description

一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法。
背景技术
现有的植物杂交技术，具有成本高、效率低、操作复杂、见效慢、不能大批量处理材料，受到各种导入通道的特异性限制，具有远源杂交不亲和等现象。
发明内容
为了克服以上问题，本发明提供了一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法。本发明通过导入外源原生质可跨越巨大的亲缘关系距离，实现远缘无性杂交育种的目的。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法，包括如下步骤：使用获得植物体作为目标材料，对目标材料造成创伤；获得外源原生质组织液，然后将目标材料浸泡到外源原生质组织液中；取浸泡后成活的目标材料种植，筛选出外源原生质与目标材料杂交成功的材料即为目标材料。
进一步的改进，通过施加高浓度溶液、生化溶液腐蚀、或不利环境手段对目标材料造成创伤。
进一步的改进，原生质组织液通过对生物组织进行捣汁、压滤后获得。
进一步的改进，还对原生质组织液进行浓缩。
进一步的改进，所述浓缩的方法为低温干燥浓缩。
进一步的改进，所述目标材料为种子，调整外源原生质组织液使得种子浸泡外源原生质组织液后成活率达到50％。
进一步的改进，使用外源原生质组织液浸泡目标材料30min-24h后，清洗目标材料，外部的外源原生质组织液。
进一步的改进，被接种的外源原生质组织液作为第一外源原生质组织液；然后选择另一种植物的原生质组织液作为第二外源原生质组织液；第二外源原生质组织液与目标材料的亲缘关系大于第一外源原生质组织液与目标材料的亲缘关系；将第一外源原生质组织液与第二外源原生质组织液混合后再浸泡目标材料。
进一步的改进，所述外源原生质组织液包括细胞质成份、细胞核心成份和细胞器。
具体实施方式
下面结合具体实施例＝对本发明做进一步阐述和说明:
通过将环境脱水的生物组织进行捣汁、压滤获得外源原生质组织液，或者通过低温低压浓缩得来的浓缩液，或者原汁(未进行浓缩的)细胞浆液来包围、浸泡生物组织、种子，同时采用施加浓度、生化、不利环境等手段、使目标材料导致局部创伤，创伤指标以种子作为被导入材料为例，将有一部分种子非正常死亡，此为创伤导入发挥了作用的依据。非正常死亡的检测依据是发芽率与正常条件下的发芽率低，极限情况下可能造成99.9种子的死亡，在批量处理种子时，我们采用50％左右种子死亡为合理值。极限情况下可导致全部种子死亡歌者假死，通过移去损伤条件，优化外部环境，以及一切有益于抢救种子，使其复活，这个过程可能延长到30天或者更长，则导入外源物质的量被加大，成活下来的种可能产生更大的变异。
这种操作，对于亲缘关系远是一个扩大创伤、加剧创伤的因素。例于用亲缘关系很远的革命草(空心莲子草，苋科莲子草属)捣汁压滤液浸泡水稻种子，会造成很大的对水稻种子的杀伤力。当采用水稻捣汁压滤液浸泡水稻种子时，可以提高水稻原生质导入目标细胞的效果，此时可以混入空心莲子草的原生质实现空心莲子草的原生质的导入。
该方法可导入细胞质成份、细胞核心成份和细胞器，导入物的选择性与所选择的捣汁材料有关联性，在育种中可以总结出一定的规律性，形成导入法的弱目的性和选择性。
该方法导入外源原生质可跨越巨大的亲缘关系距离，实现远缘无性杂交育种的目的。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：使用获得植物体作为目标材料，对目标材料造成创伤；获得外源原生质组织液，然后将目标材料浸泡到外源原生质组织液中；取浸泡后成活的目标材料种植，筛选出外源原生质与目标材料杂交成功的材料即为目标材料。
2.如权利要求1所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，通过施加高浓度溶液、生化溶液腐蚀、或不利环境手段对目标材料造成创伤。
3.如权利要求1所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，原生质组织液通过对生物组织进行捣汁、压滤后获得。
4.如权利要求1所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，还对原生质组织液进行浓缩。
5.如权利要求4所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，所述浓缩的方法为低温干燥浓缩。
6.如权利要求1所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，所述目标材料为种子，调整外源原生质组织液使得种子浸泡外源原生质组织液后成活率达到50％。
7.如权利要求1所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，使用外源原生质组织液浸泡目标材料30min-24h后，清洗目标材料，外部的外源原生质组织液。
8.如权利要求1所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，被接种的外源原生质组织液作为第一外源原生质组织液；然后选择另一种植物的原生质组织液作为第二外源原生质组织液；第二外源原生质组织液与目标材料的亲缘关系大于第一外源原生质组织液与目标材料的亲缘关系；将第一外源原生质组织液与第二外源原生质组织液混合后再浸泡目标材料。
9.如权利要求1所述的原生质微创伤外部导入活细胞的方法，其特征在于，所述外源原生质组织液包括细胞质成份、细胞核心成份和细胞器。
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CN114793879A (zh) * 2022-01-06 2022-07-29 湖南袁禾农业科技有限公司 一种通过改变dna分子及周边分子环境的育种方法

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