CN105993935B - 一种白及组织培养基、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.4‑0.6mg、多效唑0.2‑0.5mg、蔗糖20‑25g、土豆20‑40g和香蕉皮80‑100g，且培养基的pH为5.8‑6.2。本发明还提供了一种白及培养基的制备方法及其在白及原球茎诱导培养中的应用。本发明使用废弃的香蕉皮作为培养基的制备材料之一，并在此基础上添加了其他的组分，不但保证了白及种子发芽率在95％以上、原球茎分化率在98％以上，同时，将培养基的制作成本降低了至少60％，此外，与传统的培养基相比，利用本发明的培养基培养的白及组织叶肉饱满、茎枝粗壮，生长状况更佳，白及成活率提高了50％。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种白及组织培养基，本发明还涉及一种白及组织培养基的制备方法及应用。
背景技术
白及(Bletilla striata)，又名白芨，为兰科白及属多年生草本植物，属国家二级濒危植物，其干燥根茎入药，成熟之后除去须根、洗净，润透，切薄片，晒干，具有收敛止血，消肿生肌之功效，用于治疗肺结核咳血、胃溃疡及外伤出血等疾病。另一方面，白及块茎中富含白及胶、白及多糖，被广泛应用于食品工业和日化工业中。
白及果荚内存有3-5万个种子，自然界条件下萌发率仅为5％，极难萌发。目前随着白及药材市场需求量增加，高利润的趋势，导致野生白及采挖量加大日益稀少，价格日趋增高。因此，开发出能够提高白及发芽率的培养基，扩大白及优良种苗快速繁殖，迅速实施白及产业化生产，不但可以降低药材价格，而且对濒危植物白及的保护具有重要意义。
现有技术的缺点是，用于提高白及发芽率的培养基是在MS培养基的基础之上添加许多其他组分，成本较高。
发明内容
本发明提供的一种白及组织培养基、制备方法及应用，可以提高白及的发芽率，且成本较低。
本发明的第一个目的是提供一种白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.4-0.6mg、多效唑0.2-0.5mg、蔗糖20-25g、土豆20-40g和香蕉皮80-100g，且培养基的pH为5.8-6.2。
优选的，一种白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.5mg、多效唑0.3mg、蔗糖20g、土豆20g和香蕉皮80g，且培养基的pH为6.2。
优选的，一种白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.4mg、多效唑0.2mg、蔗糖25g、土豆30g和香蕉皮100g，且培养基的pH为6.0。
优选的，一种白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.6mg、多效唑0.5mg、蔗糖22g、土豆40g和香蕉皮95g，且培养基的pH为5.8。
本发明的第二个目的是提供一种白及组织培养基的制备方法，按照以下步骤制备：
步骤1，按常规方法配制1/2MS培养基；
步骤2，按每升1/2MS培养基中添加0.4-0.6mg萘乙酸、0.2-0.5mg多效唑、蔗糖20-25g、土豆20-40g和香蕉皮80-100g的配方比例，分别称取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
步骤3，分别将土豆和香蕉皮切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的方块，得到土豆块和香蕉皮块；
步骤4，将步骤2中称取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步骤3中的土豆块和香蕉皮块混匀，并按配方比例加入配制好的1/2MS培养基，充分搅拌均匀，获得组织培养液；
步骤5，将步骤4中组织培养液的pH调节至5.8-6.2，于121℃高压灭菌20-30min，得到白及组织培养基。
优选的，上述白及组织培养基的制备方法，调节pH使用的试剂为NaOH。
本发明的第三个目的是提供一种白及组织培养基，在白及原球茎诱导培养中的应用。
本发明一种白及组织培养基，使用废弃的香蕉皮作为培养基的制备材料之一，并在此基础上添加了其他的组分，不但保证了白及种子发芽率在95％以上、原球茎分化率在98％以上，同时，将培养基的制作成本降低了至少60％，此外，与传统的培养基相比，利用本发明的培养基培养的白及组织叶肉饱满、茎枝粗壮，生长状况更佳，白及成活率提高了50％。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。下面实施例中未注明具体条件的实验方法，均按照本领域的常规方法和条件进行。
需要说明的是，本发明的方法以及下面实施例中，白及组织培养基配制时使用的1/2MS培养基为本领域技术人员公知的培养基，1/2MS培养基配制时按照公知的配方称取其中的各个组分和配制方法进行配制即可。
MS培养基的配方如表1所示，首先分别按照表1所述的配方分别配制母液I、母液II、母液III和母液IV，其中母液I是10倍浓缩液，母液II、母液III和母液IV均是100倍浓缩液，每升MS培养基配制时，取母液I 100mL，取母液II、母液III和母液IV各10mL，然后加水至1L即可，1/2MS培养基的配方是将MS培养基中配制母液I的用量减半，而其他母液的用量不变。
表1 MS培养基的配方
本发明一种白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸(NAA)0.4-0.6mg、多效唑0.2-0.5mg、蔗糖20-25g、土豆20-40g和香蕉皮80-100g，pH为5.8-6.2。
基于同一发明构思，本发明提供了一种白及组织培养基的制备方法，按照以下步骤制备：
步骤1，按常规方法配制1/2MS培养基；
步骤2，按每升1/2MS培养基中添加0.4-0.6mg萘乙酸、0.2-0.5mg多效唑、20-25g蔗糖、20-40g土豆和80-100g香蕉皮的配方比例，分别称取萘乙酸、多效唑、土豆和香蕉皮；
步骤3，分别将土豆和香蕉皮切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的方块，得到土豆块和香蕉皮块；
步骤4，将步骤2中称取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步骤3中的土豆块和香蕉皮块混匀，并按配方比例加入配制好的1/2MS培养基，充分搅拌均匀，获得组织培养液；
步骤5，将步骤4中组织培养液的pH调节至5.8-6.2，于121℃高压灭菌20-30min，得到白及组织培养基。
优选的，本发明一种白及组织培养基，还包括以下实施例：
实施例1
实施例1的白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.5mg、多效唑0.3mg、蔗糖20g、土豆20g和香蕉皮80g，且培养基的pH为6.2。
上述培养基按照以下步骤制备：
步骤1，按常规方法配制1/2MS培养基；
步骤2，按每升1/2MS培养基中添加0.5mg萘乙酸、0.3mg多效唑、20g蔗糖、20g土豆和80g香蕉皮的配方比例，分别称取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
步骤3，分别将土豆和香蕉皮切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的方块，得到土豆块和香蕉皮块；
步骤4，将步骤2中称取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步骤3中的土豆块和香蕉皮块混匀，并按配方比例加入配制好的1/2MS培养基，充分搅拌均匀，获得组织培养液；
步骤5，将步骤4中组织培养液调节pH至6.2，于121℃高压灭菌20min，得到白及组织培养基。
实施例2
实施例2的白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.4mg、多效唑0.2mg、蔗糖25g、土豆30g和香蕉皮100g，且培养基的pH为6.0。
上述培养基按照以下步骤制备：
步骤1，按常规方法配制1/2MS培养基；
步骤2，按每升1/2MS培养基中添加0.4mg萘乙酸、0.2mg多效唑、25g蔗糖、30g土豆和100g香蕉皮的配方比例，分别称取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
步骤3，分别将土豆和香蕉皮切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的方块，得到土豆块和香蕉皮块；
步骤4，将步骤2中称取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步骤3中的土豆块和香蕉皮块混匀，并按配方比例加入配制好的1/2MS培养基，充分搅拌均匀，获得组织培养液；
步骤5，将步骤4中组织培养液的pH调节至6.0，于121℃高压灭菌25min，得到白及组织培养基。
实施例3
实施例3的白及组织培养基，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.6mg、多效唑0.5mg、蔗糖22g、土豆40g和香蕉皮95g，且培养基的pH为5.8。
上述培养基按照以下步骤制备：
步骤1，按常规方法配制1/2MS培养基；
步骤2，按每升1/2MS培养基中添加0.6mg萘乙酸、0.5mg多效唑、22g蔗糖、40g土豆和95g香蕉皮的配方比例，分别称取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
步骤3，分别将土豆和香蕉皮切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的方块，得到土豆块和香蕉皮块；
步骤4，将步骤2中称取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步骤3中的土豆块和香蕉皮块混匀，并按配方比例加入配制好的1/2MS培养基，充分搅拌均匀，获得组织培养液；
步骤5，将步骤4中组织培养液的pH调节至5.8，于121℃高压灭菌30min，得到白及组织培养基。
培养基验证实验：
选取适量的白及种子，并将白及种子经过消毒处理，然后分成三组，将三组白及种子分别置于本发明实施例1-3的培养基上培养，观察种子的萌发状况，结果表明，实施例1培养基中种子的萌发率为96％，实施例2培养基中种子的萌发率为95％，实施例3培养基中种子的萌发率为95％，解决了白及种子萌发难，萌发率低的问题。
种子萌发4-5周以后，继续培养4周，进行原球茎诱导培养，观察原球茎的分化情况，结果表明，实施例1培养基中原球茎的分化率为99％，实施例2培养基中原球茎的分化率为98％，实施例3培养基中原球茎的分化率为98％。
与传统的培养基相比，利用本发明的培养基培养的白及组织叶肉饱满、原球茎粗壮，生长状况更佳，白及成活率提高了50％。
此外，目前大多数白及培养基的制作选用的是香蕉果肉作为材料，而将香蕉皮作为废弃物处理，而本发明的方法中，以香蕉皮作为培养基的制备材料之一，并在此基础上添加了其他的组分，在保证白及种子具有较高的发芽率和原球茎分化率的前提下，将培养基的制作成本降低了至少60％。
本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (7)
1.一种白及组织培养基，其特征在于，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.4-0.6mg、多效唑0.2-0.5mg、蔗糖20-25g、土豆20-40g和香蕉皮80-100g，且培养基的pH为5.8-6.2。
2.根据权利要求1所述的白及组织培养基，其特征在于，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.5mg、多效唑0.3mg、蔗糖20g、土豆20g和香蕉皮80g，且培养基的pH为6.2。
3.根据权利要求1所述的白及组织培养基，其特征在于，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.4mg、多效唑0.2mg、蔗糖25g、土豆30g和香蕉皮100g，且培养基的pH为6.0。
4.根据权利要求1所述的白及组织培养基，其特征在于，每升1/2MS培养基中添加以下组分：萘乙酸0.6mg、多效唑0.5mg、蔗糖22g、土豆40g和香蕉皮95g，且培养基的pH为5.8。
5.根据权利要求1所述的白及组织培养基的制备方法，其特征在于，按照以下步骤制备：
步骤1，按常规方法配制1/2MS培养基；
步骤2，按每升1/2MS培养基中添加0.4-0.6mg萘乙酸、0.2-0.5mg多效唑、20-25g蔗糖、20-40g土豆和80-100g香蕉皮的配方比例，分别称取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
步骤3，分别将土豆和香蕉皮切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的方块，得到土豆块和香蕉皮块；
步骤4，将步骤2中称取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步骤3中的土豆块和香蕉皮块混匀，并按配方比例加入配制好的1/2MS培养基，充分搅拌均匀，获得组织培养液；
步骤5，将步骤4中组织培养液的pH调节至5.8-6.2，于121℃高压灭菌20-30min，得到白及组织培养基。
6.根据权利要求5所述的白及组织培养基的制备方法，其特征在于，调节pH使用的试剂为NaOH。
7.如权利要求1中所述的白及组织培养基在白及原球茎诱导培养中的应用。
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