CN109964797A - 促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法 - Google Patents

促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，包括以下步骤：割取白及组培苗单株；将所得的单株于无菌条件下接种至增殖/膨大培养基进行培养，增殖/膨大培养基由1/2MS培养基、6‑BA、NAA、土豆、琼脂、蔗糖、花宝组成，花宝为以下任一：花宝1号、花宝4号、花宝5号。本发明的促进白及假鳞茎增殖/膨大方法，可以短时间内促进白及假鳞茎增殖/膨大，从而实现短期培养优质种苗的目的。

Description

促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法
技术领域
本发明涉及一种促进白及假鳞茎膨大的方法。
背景技术
白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.为兰科白及属多年生草本植物，别名甘根，白鸡儿，连及草等。以其干燥块茎入药，味苦、甘、涩，微寒，归肺、肝、胃经。白及主要含黏胶质、多糖类、菲衍生物等成分，中医对白及有“收敛止血，消肿生肌”之说。现代医学证明，白及有抗菌、止血、促进创伤愈合、免疫、保护胃黏膜、抗胃溃疡、抗肿瘤等作用。
近年来，随着我国中医药事业的发展，白及在临床上的应用不断扩大，用药需求急剧增加，而过度采挖和生境破坏却导致白及野生资源量急剧下降，所以白及的价格总体呈逐年上涨的趋势。在市场需求日渐升温的情况下，白及资源的大量减少更凸显了保护白及野生资源及发展人工栽培白及技术的重要性。
白及虽然能产生大量的种子，但是其种子细小且没有胚乳，自然状态下需与真菌共生才能萌发，实生苗的栽培较为困难，目前市场上白及人工栽培主要依靠分株繁殖，这种方式不仅周期长，技术不成熟，而且品种容易感病退化，很难满足大量栽培的需要。
因此，促使白及幼苗假鳞茎增殖/膨大，提高产量，对于规模化种植白及具有重要意义。采用组织培养法可以促进白及假鳞茎的膨大，是提高白及产量较为有效的方法，不仅有利于保护白及野生资源，还可有效改善白及种源品质，为白及的产业化发展奠定基础。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种促进白及假鳞茎膨大/增殖的方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，包括以下步骤：
1)、割取白及组培苗单株；
2)、将步骤1)所得的单株于无菌条件下接种至增殖/膨大培养基中，于(25±3)℃的培养温度，光照12h/12h暗培养的条件下培养150±5天，光照强度为25～30μmol m-2·s-1；
所述增殖/膨大培养基为：1/2MS培养基(即溶液中所有物质的含量为MS基本培养基的一半)+6-BA(1.0±0.1)mg/L+NAA(0.2±0.02)mg/L+土豆(100±10)g/L+琼脂(7±0.5)g/L+蔗糖(30±0.5)g/L+花宝1～5g；pH调节至5.8±0.2；
所述花宝为以下任一：花宝1号、花宝4号、花宝5号。
增殖/膨大培养基的制备方法为：
以1/2MS基本培养基(即溶液中所有物质的含量为MS基本培养基的一半)为基础，每1L的1/2MS基本培养基中加分别加入6-苄基嘌呤(6-BA)(1.0±0.1)mg、萘乙酸(NAA)(0.2±0.02)mg、土豆泥(100±10)g、琼脂(7±0.5)g、蔗糖(30±0.5)g、花宝1～5g均匀混合，pH调节至5.8±0.2。
土豆泥的制备方法为：马铃薯先洗净去皮，切成小块，称取100±10g的马铃薯小块加水煮烂(煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破即可)，用2层纱布过滤，所得的滤饼为土豆泥。
作为本发明的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法的改进：接种时，控制增殖/膨大培养基上的白及苗之间的间距为2～3cm。
作为本发明的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法的进一步改进：白及组培苗事先种植于MS+琼脂(7±0.5)g/L+蔗糖(30±0.5)g/L+香蕉(100±10)g/L培养基中，待长到2～3cm时，选择植株健壮、长势一致的白及组培苗，单株进行割取。
上述培养基的制作方法为：以MS基本培养基为基础，每1L的MS基本培养基中分别加入(7±0.5)g琼脂、(30±0.5)g蔗糖、(100±10)g香蕉泥；
所述香蕉泥的制备方法为：去皮后香蕉称取100±10g，粉碎成泥状。
作为本发明的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法的进一步改进
增殖培养基为：1/2MS培养基+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+土豆100g/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+花宝5号3g/L；pH调节至5.8±0.2。
膨大培养基为：1/2MS培养基+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+土豆100g/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+花宝5号2g/L；pH调节至5.8±0.2。
说明：pH调节为常规技术，例如可利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl进行调节。
在本发明的步骤2)中，用于接种的超净工作台紫外灭菌30min，通风5min，从而实现无菌条件；培养可于组培室中进行；一般而言，对于直径为9cm的组培瓶，每个组培瓶中可放置10棵白及苗，此时间距2～3cm。
本发明的促进白及假鳞茎增殖/膨大方法，可以短时间内促进白及假鳞茎增殖/膨大，而且依靠本发明所设定的培养条件可以实现短期培养优质种苗的目的。在本发明的方法中，在培养基中添加花宝，能加快假鳞茎的增殖/膨大，提高育苗速度、提高产量。并且，本发明的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，是一种不受季节等因素的影响，高效、快速诱导假鳞茎的方法，可以缩短白及的培育周期，提高白及种植量。
本发明的技术优势在于：
1、本发明采用添加适宜激素组合和浓度的方法促进假鳞茎增殖/膨大，NAA作为植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大从而促进植物生长。6-BA作为一种人工合成的细胞分裂素，可抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运，从而诱导假鳞茎的形成。
2、本发明采用添加土豆的方法，为白及假鳞茎的生长与增殖提供必需的营养物质，促进假鳞茎的增殖/膨大。
3、本发明采用添加不同种类、浓度的花宝的方法促进假鳞茎增殖/膨大，花宝作为一种花肥，能为植物的生长提供氮、磷、钾等必需元素，从而促进假鳞茎的增殖/膨大。
4、获得了增殖培养基、膨大培养基的最佳配方。
本发明采用在培养基中添加适宜浓度的激素组合、土豆和花宝来促进白及假鳞茎的增殖，三者共同处理，更易于白及假鳞茎的增殖/膨大。本发明的方法能提高白及假鳞茎的平均粒径，加快种苗繁育的速度，提高药农收益
综上，本发明所采用的组织培养法可以提高白及假鳞茎的增殖率/膨大，是解决白及种苗需求较为有效的方法，不仅有利于保护白及野生资源，还可有效改善白及种源品质，为白及的产业化发展奠定基础。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
以下实施例中，没有明确告知的，均为在常规的室温下进行。
实施例1-1、一种促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，依次进行以下步骤：
1)、白及组培苗事先种植于MS+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+香蕉100g/L的培养基中，待长到2～3cm时，选择植株健壮、长势一致的白及组培苗，单株切下。
2)、用于接种的超净工作台紫外灭菌30min，通风5min，然后将步骤1)所得的单株白及组培苗在超净工作台上接入到假鳞茎增殖/膨大培养基(增殖/膨大培养基)中。
3)、增殖/膨大培养基为：1/2MS培养基+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+土豆100g/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+花宝1号1g，pH调节至约5.8；
对于直径为9cm的组培瓶，每个组培瓶中放置10棵白及苗，此时间距约为2～3cm。
将上述处理组培瓶置于组培室进行培养，培养温度(25±1)℃，每天光照12h，光照强度为25～30μmol m-2·s-1。
培养150天后所得结果如下：
假鳞茎增殖率为240％。
假鳞茎平均粒径为5.113mm。测量每株假鳞茎的长径和短径，计算假鳞茎的平均粒径；假鳞茎粒径(mm)＝(假鳞茎长径+短径)/2；假鳞茎平均粒径(mm)＝假鳞茎粒径总数/假鳞茎总数。
注：每组设置30个重复，取平均值。
实施例1-2～实施例1-5、将花宝1号的用量对应的改成2g/L、3g/L、4g/L、5g/L；其余等同于实施例1-1。培养150天后所得结果如表1所述。
实施例2-1～实施例2-5、将花宝1号改成花宝4号，花宝4号的用量分别为1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L；其余等同于实施例1-1。培养150天后所得结果如表1所述。
实施例3-1～实施例3-5、将花宝1号改成花宝5号，花宝5号的用量分别为1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L；其余等同于实施例1-1。培养150天后所得结果如表1所述。
对比例1、一种促进白及假鳞茎的增殖/膨大的方法：
去除实施例1-1步骤2)中增殖/膨大培养基组分中花宝1号1g/L的使用；其余等同于实施例1-1。
培养150天后所得结果如表1所述。
表1
注：表1中的小写字母表示0.05水平下差异显著性。
对比例2、将实施例3-3步骤2)中增殖/膨大培养基中土豆的用量由100g/L分别改成0、50、150g/L，其余等同于实施例3-3。培养150天后所得假鳞茎增殖率结果与实施例3-3的对比，如表2所述。
表2
对比例3、将实施例3-2步骤2)中增殖/膨大培养基中土豆的用量由100g/L分别改成0、50、150g/L，其余等同于实施例3-2。培养150天后所得假鳞茎平均粒径结果与实施例3-2的对比，如表3所述。
表3
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (5)

1.促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，其特征是包括以下步骤：
1)、割取白及组培苗单株；
2)、将步骤1)所得的单株于无菌条件下接种至增殖/膨大培养基中，于(25±3)℃的培养温度，光照12h/12h暗培养的条件下培养150±5天，光照强度为25～30μmol m-2·s-1；
所述增殖/膨大培养基为：1/2MS培养基+6-BA(1.0±0.1)mg/L+NAA(0.2±0.02)mg/L+土豆(100±10)g/L+琼脂(7±0.5)g/L+蔗糖(30±0.5)g/L+花宝1～5g；pH调节至5.8±0.2；
所述花宝为以下任一：花宝1号、花宝4号、花宝5号。
2.根据权利要求1所述的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，其特征是：
接种时，控制增殖/膨大培养基上的白及苗之间的间距为2～3cm。
3.根据权利要求1或2所述的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，其特征是：
白及组培苗事先种植于MS+琼脂(7±0.5)g/L+蔗糖(30±0.5)g/L+香蕉(100±10)g/L培养基中，待长到2～3cm时，选择植株健壮、长势一致的白及组培苗，单株进行割取。
4.根据权利要求1～3任一所述的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，其特征是：
增殖培养基为：1/2MS培养基+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+土豆100g/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+花宝5号3g/L；pH调节至5.8±0.2。
5.根据权利要求1～3任一所述的促进白及假鳞茎增殖/膨大的方法，其特征是：
膨大培养基为：1/2MS培养基+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+土豆100g/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+花宝5号2g/L；pH调节至5.8±0.2。
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Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102246695A (zh) * 2011-05-10 2011-11-23 云南植物药业有限公司 一种培养器皿内制备白及假鳞茎的方法及其专用培养基
KR20120097812A (ko) * 2011-02-25 2012-09-05 대한민국(관리부서 : 산림청 국립산림과학원장) 천마 원구경 계대배양방법
CN105613286A (zh) * 2015-12-13 2016-06-01 武汉生物工程学院 一种快速生产白芨试管苗的方法
CN105993935A (zh) * 2016-04-28 2016-10-12 陕西师范大学 一种白及组织培养基、制备方法及应用
CN107232061A (zh) * 2017-07-07 2017-10-10 重庆市药物种植研究所 一种快速诱导白及鳞茎的专用培养基及组培方法
CN108739380A (zh) * 2018-05-23 2018-11-06 广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所 一种白及组培苗一次性成苗的方法
CN109076923A (zh) * 2018-08-28 2018-12-25 河南云帮农业科技有限公司 一种白芨无菌播种专用培养基
CN109122321A (zh) * 2018-09-13 2019-01-04 南京大学 一种获得优质白及假鳞茎的组培方法以及白及苗的培育方法
CN109169273A (zh) * 2018-09-03 2019-01-11 云南中医学院 一种白及增殖假鳞茎的培育方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120097812A (ko) * 2011-02-25 2012-09-05 대한민국(관리부서 : 산림청 국립산림과학원장) 천마 원구경 계대배양방법
CN102246695A (zh) * 2011-05-10 2011-11-23 云南植物药业有限公司 一种培养器皿内制备白及假鳞茎的方法及其专用培养基
CN105613286A (zh) * 2015-12-13 2016-06-01 武汉生物工程学院 一种快速生产白芨试管苗的方法
CN105993935A (zh) * 2016-04-28 2016-10-12 陕西师范大学 一种白及组织培养基、制备方法及应用
CN107232061A (zh) * 2017-07-07 2017-10-10 重庆市药物种植研究所 一种快速诱导白及鳞茎的专用培养基及组培方法
CN108739380A (zh) * 2018-05-23 2018-11-06 广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所 一种白及组培苗一次性成苗的方法
CN109076923A (zh) * 2018-08-28 2018-12-25 河南云帮农业科技有限公司 一种白芨无菌播种专用培养基
CN109169273A (zh) * 2018-09-03 2019-01-11 云南中医学院 一种白及增殖假鳞茎的培育方法
CN109122321A (zh) * 2018-09-13 2019-01-04 南京大学 一种获得优质白及假鳞茎的组培方法以及白及苗的培育方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
薛金国: "《鳞茎鲜切花之王-百合》", 31 July 2006, 中原农民出版社 *

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