CN100548308C - 用于自身免疫性疾病和器官移植排异的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及青风藤复方药物组合物的免疫抑制作用，以及该复方药物组合物在治疗自身免疫性疾病和抗器官移植排异方面的用途。本发明的复方药物组合物可以有效地抑制免疫力。

Description

用于自身免疫性疾病和器官移植排异的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种用于自身免疫性疾病和器官移植排异的药物组合物，及其制备方法和用途。更具体地，本发明涉及青风藤复方药物组合物的免疫抑制作用，以及该复方药物组合物在治疗自身免疫性疾病和抗器官移植排异方面的用途。

背景技术

虽然免疫力是每个人抵抗病菌等外来侵袭所必需的，然而在某些情况下抑制人体的免疫力却是有利的，例如治疗自身免疫性疾病和抑制器官移植排异。

当人体免疫系统对自身成分发生过度应答所产生的自身抗体或自身致敏淋巴细胞，损伤自身正常组织，并引起相应的临床症状时，称为自身免疫性疾病。目前常见的自身免疫性疾病有活动性慢性肝炎、肾小球肾炎，系统性红斑狼疮等等，现在还没有有效的治疗措施，是一类严重危害人类健康的疾病。目前对这类疾病的治疗，主要针对疾病的病理变化和组织损伤所致的后果进行治疗；也可通过调节免疫应答的各个环节，阻断疾病的进程来达到治疗目的。目前在临床上使用的主要是抗炎药物和免疫抑制药物。

自身免疫性肝炎是一种病因不明以肝脏、门静脉周围病变为主的慢性炎症，同时外周血中存在各种自身抗体。有不少研究报导，病毒感染后，特别是乙肝病毒感染可诱导该病的发生。其免疫病理损伤与自身致敏T细胞攻击有关，是由自身反应性T细胞受自身抗原刺激后经活化、转化、增殖和分化而成。当CD+4T细胞被激活后分化为细胞毒T淋巴细胞，从而释放致炎因子(如TNFα)直接引发迟发超敏性炎症而损伤肝细胞。

在器官移植中，由于来自供体的移植器官对于受体而言是外来的异物，因此受体的免疫系统受到激发后攻击该异物，以便将移植器官作为异物排除掉。这就是器官移植的排异现象。为了防止排异，就必需抑制受体的免疫力

目前，本领域缺乏有效抑制免疫力且副作用小的药物。例如，本领域还缺乏用中药组合物抑制免疫力的报道，例如目前尚没有报导青风藤、白芍和当归组成的组合物具有免疫抑制和器官移植排异的作用，更没有这样的组合药物用于自身免疫性疾病的治疗。

为了适应抑制免疫力的需要，本领域迫切需要开发新的抑制免疫力(如用于治疗自身免疫性疾病和抑制器官移植排异)的药物，尤其是活性成分来源于中药材的药物。

发明内容

本发明的目的就是提供一种含纯中药提取物的药物和/或饮食补充剂，它可有效抑制免疫力，因此可用于治疗自身免疫性疾病和抑制器官移植排异。

在本发明的第一方面，提供了一种药物组合物的用途，按组合物的总重量计，所述的组合物含有以下活性成分：

青藤碱30-75mg/g；

芍药甙8-15mg/g；

阿魏酸1.5-3mg/g，

以及药学上可接受的载体，

其中，所述的组合物用于制备抑制免疫力的药物。

在另一优选例中，所述的组合物中青藤碱的含量为40-60mg/g，芍药甙为10-15mg/g。

在另一优选例中，其特征在于，所述的药物用于治疗自身免疫性疾病或用于抑制器官移植排异。

此外，本发明的一种药物组合物也可用药材数量的加以限定。换言之，本发明还提供了一种药物组合物的用途，所述的组合物含有选自下组的必要组份：

45-85重量份数的青风藤；

8-20重量份数的白芍；

3-10重量份数的当归；

且青风藤+白芍+当归的重量占组合物总重量的30-99％，以及余量的药学上可接受的载体，

其中，所述的组合物用于制备抑制免疫力的药物。

在另一优选例中，所述的药物组合物含有：

55-85重量份数的青风藤；

10-20重量份数的白芍；

4-10重量份数的当归，

且青风藤+白芍+当归的重量占组合物总重量的50-99％。

在另一优选例中，其特征在于，它含有：

60-85重量份数的青风藤；

12-15重量份数的白芍，

5-8重量份数的当归。

在另一优选例中，所述的药物用于治疗自身免疫性疾病或用于抑制器官移植排异。

在另一优选例中，所述的药物组合物是片剂或胶囊制剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物还含有选自下组的物质：环孢素，环磷酰胺、或硫唑嘌呤。

在本发明的第三方面，提供了一种混合物的用途，所述的混合物由45-85重量份数的青风藤；8-20重量份数的白芍；和3-10重量份数的当归构成，或者所述的混合物含有青藤碱30-75mg/g；芍药甙8-15mg/g；和阿魏酸1.5-3mg/g，其中，所述的混合物用于制备抑制免疫力的药物。

在另一优选例中，所述的混合物用于制备(a)抑制自身致敏T细胞增殖的药物；(b)抑制迟发超敏免疫反应的药物；(c)抑制TNFα水平的药物；(d)治疗自身免疫性疾病的药物；或(e)抗器官移植排异的药物。

在本发明的第四方面，提供了制备本发明药物组合物或饮食补充剂的方法，它包括步骤：

(1).选取青藤碱含量较高的青风藤粗粉以在0.1-0.5％硫酸液浸润后在渗漉缶中提取得到含青藤碱的水溶液，然后以石灰乳调pH＝12±0.5，得沉淀，再以90-95％乙醇回流提取，然后减压浓缩，得青藤碱粗粉。在粗粉中再加盐酸得盐酸青藤碱，然后重结晶，最后将此结晶溶于沸腾的60-70％(如65％)乙醇和加氨水调pH至9±0.2，即可得到纯度为大于95％(如98％)的青藤碱。

(2).用醇提法取得当归和白芍浸膏；

(3).将青风藤浸膏与当归和白芍浸膏配在一起，获得具有上述浓度的活性组份的药物组合物，

其中步骤(1)和(2)的次序可互换。

较佳地，所用的青风藤药材是青藤碱含量较高的青风藤粗粉。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现青风藤、白芍和当归三者按一定比例形成的组合物，具有较好的免疫抑制作用因而可用于治疗自身免疫性疾病和抑制器官移植中的排异反应。在此基础上完成了本发明。

可用于本发明的组合物，是一种以青风藤、白芍和当归为必要组份或相应的有效成分(即青藤碱、白芍总甙和阿魏酸)为必要成分的组合物。本发明的组合物可以是药物组合物或饮食补充剂。一种优选的组合物公开于题为“用于治疗或改善关节炎的药物组合物和饮食补充剂”的中国专利ZL01819981.X中，该文献全部引入本文作为参考。

如本文所用，术语“必要组份”指必要的中药药材，即青风藤(Sinomemiumacutum)、白芍(Paeomia lactiflora)和当归(Angelica sinensis)。

如本文所用，术语“必要成分”指作为活性成分的必要的化学物质，即青藤碱(Sinomemine)、白芍总甙(total glucosides of paecony，TGP)和阿魏酸(Ferolicacid)。

如本文所用，术语“白芍总甙”和“芍药甙”可互换使用，都指白芍中的葡糖苷类物质。

如本文所用，术语“包括”包括了“含有”、“基本上由......构成”和“由......构成”。

如本文所用，术语“基本上由......构成”指在组合物中，除了含有必要成分或必要组份之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。例如，可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化，以及其他本领域常用的添加剂。通常青风藤(Sinomemium acutum)、白芍(Paeomia lactiflora)和当归(Angelica sinensis)占全部中药药材重量的至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。来自于青风藤、白芍、当归的除必要成分(即青藤碱(Sinomemine)、白芍总甙(Total glucosides of paecony，TGP)和阿魏酸(Ferolic acid)。)之外的非必要成分，以及其他非必要成分(例如其他辅助性药材)，也包括在药学上可接受的载体的定义中。

如本文所用，术语“本发明的组合物”包括药物组合物和饮食补充剂，只要它们含有或基本上由(1)青风藤或青藤碱；(2)白芍或白芍总甙；和(3)当归或阿魏酸构成。通常，青风藤+白芍+当归的重量占组合物总重量的30-99％，较佳地50-99％，更佳地60-90％。

此外，本发明组合物可含有治疗自身免疫性疾病或抑制器官移植排异的其他物质，例如环孢素，环磷酰胺、硫唑嘌呤等或其组合。

在本发明的药物组合物中，作为必要组份的三种中药药材是(1)青风藤(Sinomemium acutum)，其中的活性成分是青藤碱(Sinomemine)；(2)白芍(Paeomia lactiflora)；其中的活性成分是白芍总甙(Total glucosides of paecony，TGP)；和(3)当归(Angelica sinensis)，其中的活性成分是阿魏酸(Ferolic acid)。

本发明药物对免疫力的抑制效果与必要活性成分的含量密切相关。研究表明，为了取得稳定的抑制免疫力效果，应使该药物中的活性成分含量达到一定的范围。药物中各活性成分的合理含量的范围是：

青藤碱30-75mg/g，较佳地40-60mg/g，

芍药甙8-15mg/g，较佳地，10-15mg/g，

阿魏酸1.5-3mg/g。

除了按必要活性成分来限定本发明的组合物之外，还可用必要组份(药材)的配比来限定本发明的组合物。

在本发明组合物中，按重量计，三种必要药材的合适配比是：

45-85重量份数，较佳地55-85重量份数，更佳地60-85重量份数的青风藤；

8-20重量份数，较佳地10-20重量份数，更佳地12-15重量份数的白芍；

3-10重量份数，较佳地4-10重量份数，更佳地5-8重量份数的当归，

且青风藤+白芍+当归的重量占组合物总重量的30-99％，较佳地50-99％，更佳地60-95％。余量的物质是药学上可接受的载体，例如淀粉、麦芽糊精等。

为了使制剂有好的治疗效果，制剂中的有效活性成分含量是关键。为此本发明人还建立了一套检测该制剂中各中药材中活性成分的高效液相(HPLC)测定方法，来监控原料和制剂中的各种活性成分。

本发明的药物组合物或饮食补充剂，可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式，优选的是片剂或胶囊制剂。

在本发明的另一方面，提供了一种制备本发明药物组合物或饮食补充剂的方法。

常规的中药提取方法难以使提取物中的活性成分达到较高的浓度来保证该制剂的疗效。本发明人发现，根据药理研究用青风藤抑制免疫力时，成年人有效剂量宜为40-80mg/天，这样每克制剂中应含青藤碱40-60mg，而这种浓度是一般提取方法难以达到的。为此试验了一种提取青藤碱的有效方法。

在该提取法中，首先选取青藤碱含量较高的青风藤粗粉以在0.1-0.5％硫酸液浸润后在渗漉缶中提取得到含青藤碱的水溶液，然后以石灰乳调PH＝12±0.5，得沉淀，再以90-95％乙醇回流提取，然后减压浓缩，得青藤碱粗粉。在粗粉中再加盐酸得盐酸青藤碱，然后重结晶，最后将此结晶溶于沸腾的60-70％(如65％)乙醇和加氨水调PH至9±0.2，即可得到纯度为大于95％(如98％)的青藤碱。

同时用常规的醇提法，取得当归和白芍的浸膏。例如，将当归以70％乙醇水溶液回流，然后对获得的溶液进行浓缩，从而获得当归浓缩物(如浸膏)。此外，经喷干后，还可获得当归浓缩物粉末。类似地，可获得白芍的浸膏。当然，较佳地，可获得同时含有当归和白芍两种有效组份的浓缩物(如浸膏)。

最后，根据制剂的需要，再将一定比例的这些浸膏配在一起，这样就可达到需要的浓度。

在一个优选例中，制备本发明药物的方法包括步骤：

(1)、用上述优选方法制得纯度为大于95％的青藤碱。

(2)、用常规的醇提法取得当归和白芍浸膏。

(3)、根据制剂需要，再将这两种浸膏和青藤碱配在一起，这样就可达到需要的浓度，其中步骤(1)和(2)的次序可互换。

本发明的优点在于：

(1)组份简单、活性成分明确且针对性强；

(2)对活性成分可进行定量控制，从而保证质量；

(3)成本低廉；

(4)对免疫力的抑制作用明显。

下面结合实施例进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于阐述本发明而不用于限制本发明。在实施例中，百分比为重量百分比，份数为重量份数，除非特别说明。

实施例1

药物组合物A的制备

在该实施例中，提供了一种药物组合物(组合物A)，其中，三种中药的配比为：

青风藤   82重量份数(820克)

白芍     12重量份数(120克)

当归     6重量份数(60克)

在本实施例中所用的三种中药皆经HPLC测试，质量符合要求。

首先选取青藤碱含量较高的青风藤粗粉以在0.4％硫酸液浸润后在渗漉缶中提取得到含青藤碱的水溶液，然后以石灰乳调PH＝12，得沉淀，再以95％乙醇回流提取，然后减压浓缩，得青藤碱粗粉。在粗粉中再加盐酸得盐酸青藤碱，然后重结晶，最后将此结晶溶于沸腾的65％乙醇和加氨水调PH至9，即可得到纯度为98％的青藤碱。

称取当归或白芍，加70％乙醇回流，提取液减压浓缩成浸膏状，1克当归浸膏相当于1.6克原药材，1克白芍浸膏相当于4.4克原药材。

将青藤碱与当归、白芍醇提浸膏充分混匀，进行真空干燥(60～70℃)3.5-4.0小时，制成干浸膏，将干浸膏粉碎，60目过筛，装入胶囊。在该实施例中，青风藤+白芍+当归占组合物总重量的约80％。

实施例2

药物组合物B的制备

按实施例1中所述的提取方法，分别制得青藤碱，白芍和当归制成浓缩提取物。各提取物经含量测定后，按下表A配方称取后与辅料(微晶纤维和硬脂酸镁)充分混合，并用干法制粒后灌胶囊，制成胶囊制剂共1000粒，每粒胶囊的内含物为300mg或250mg。

表A：每粒胶囊含各种成分数量

	含量(按原药材计)	含量(按活性成分计)
			青风藤或青藤碱	2g青风藤(80重量份)	60mg青藤碱/g组合物
白芍或芍药碱	350mg白芍(14重量份)	11mg芍药苷/g组合物
			当归或阿魏酸	75mg当归(3重量份)	1.5mg阿魏酸/g组合物

实施例3

青风藤、白芍、当归复方药物的免疫抑制作用

在本实施例1中分别测试实施例2中制备的青风藤、白芍、当归复方药物对免疫力的抑制作用。

1、对胸腺重量的影响

胸腺是T细胞发育分化的器官，所以抑制胸腺的生长，也将抑制T细胞的发育和分化。实验取大鼠，并随机分为空白对照组、阴性对照组(雷公藤多苷片，购自上海复旦复华药业有限公司)及给药组。动物分别灌胃给予蒸馏水，不同浓度的受试物或阳性对照药。每日1次，连续27日。分别取半数动物，处死后，剖取胸腺，称重，计算脏器指数。结果见表1。

表1、药物组合物对大鼠胸腺重量的影响

组别	剂量(mg/kg)	动物数	第14日胸腺指数×10<sup>-2</sup>，g/10g	第26日胸腺指数×10<sup>-2</sup>，g/10g
					空白对照	20ml	10	1.97	1.54
雷公藤多苷片	18mg	10	1.82	1.58
					药物组合物	120mg180mg240mg	101010	1.911.721.60	1.431.711.46

数据表明，本发明的药物组合物能明显降低大鼠胸腺重量。这提示它可直接影响自身致敏T细胞的增殖，因而可减少自身免疫反应。

2、对大鼠迟发超敏免疫反应的影响

用佐剂性关节炎大鼠为动物模型。由于佐剂性关节炎能引起迟发超敏免疫反应，能引起大鼠致炎踝关节对侧关节发生肿胀。如果药物能抑制对侧的肿胀，就意味着该药物能抑制迟发超敏反应。

实验取大鼠，随机分为正常对照组、空白对照组、阳性对照组及组药组。除了正常对照组外各组动物分别测取后肢足跖部的容积，每鼠测两次，取平均值作为致炎前容积。各组动物分别灌胃给予蒸馏水、不同浓度的受试物或阳性对照药。每日1次连续27日。给药第4日除正常对照组外，各组动物于右后肢足跖皮下，注射Freund′s完全佐剂0.1ml/l只。分别于致炎后测右后足跖容积，并于致炎后第20、23、26日测对侧足跖容积，计算肿胀抑制率。现将药物对致炎对侧足肿跖胀抑制率的结果列于表2。

表2药物组合物对大鼠致炎症对侧足肿跖胀抑制率(％)的影响

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)	肿胀抑制率(第26日)
				空白对照	20ml	10
雷公藤多苷	18	10	9.2
				药物组合物	120180240	101010	20.341.437.2

数据表明，本发明的药物组合物能明显抑制对侧足肿跖胀率，即明显抑制迟发超敏免疫反应。因此可减轻该反应对靶组织的损伤。

3、对大鼠血清中TNFα水平的影响

引发迟发超敏免疫反应的直接原因是激活的T淋巴细胞分泌致炎因子(如TNFα等)，所以降低血清中TNFα水平也能减轻对靶组织的损伤。

实验方法与“2、对大鼠迟发超敏免疫反应的影响”相同，但加测血清中TNFα的水平。测定是在致炎后第14、27日，分别取半数动物，以20％乌来糖溶液麻醉后，摘除眼球取血，4000rpm离心5分钟，取血清测定TNFα水平。结果见表3。

表3药物组合物对大鼠致炎后14日血清TNFα的影响

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)	TNFα(OD值)
				空白对照	20ml/kg	10	0.070
雷公藤多苷	18	13	0.067
				药物组合物	120180240	101010	0.0680.0640.062

数据表明，本发明的药物组合物能降低致炎后大鼠TNFα水平。因此也能降低自身免疫反应。

4、药物组合物的抗炎作用

治疗自身免疫疾病的另一个重要方面是抗炎，所以本实施例还观察了药物组合物对角叉菜胶致炎大鼠的抗炎作用。

实验用2-3月雄性大鼠，随机分组包括模型组，给药组(3个剂量)和阳性对照药组。先在大鼠一侧后肢足皮下注射1％浓度的角叉菜胶致炎，然后分别于致炎前及致炎后2、5小时测量足部溶剂。并以此计算肿胀抑制率。

结果见表4。

表4药物组合物对角叉菜胶致炎大鼠肿胀抑制率(％)的影响

数据表明，本药物组合物具有明显的抗炎作用。从上列所有数据表明本药物组合物既有免疫抑制作用又有较好的抗炎作用将是治疗自身免疫性肝炎的良好药物和辅助治疗剂。也可用于慢性肾炎等其它与自身免疫反应有关的疾病。

实施例4

青风藤、白芍、当归复方药物对器官移植排异反应的抑制作用

器官移植中的排异反应在免疫学方面有一定的相似，为了了解本药物组合物是否也可用于抑制器官移植中的排异反应，在本实施例测试了本药物组合物(实施例2中制备的青风藤、白芍、当归复方药物)对小鼠耳廓心肌移植的抗排异作用，以确定本发明药物组合物对器官移植排异的抑制作用。

实验以小鼠进行，首先在无菌条件下取新生24小时鼠心脏，并将此切成两半作为供体，然后植于昆明种小鼠耳廓皮下，以心电图监测心电活动，心电消失为排异发生。

结果见表5。

表5药物对器官移植排异反应的抑制作用

药物组合物剂量(mg/kg)	动物数(只)	存活时间(天)
			0	12	8.1±2.0
60	12	10.2±1.5
			120	11	11.4±2.1
180	12	12.3±1.2

数据表明，本发明药物组合物能明显延长移植心肌的存活时间，对宿主抗移植反应有一定的抑制作用。在抗器官移植排异中有潜在的临床应用价值。

实施例5

必要组份或活性成分含量与治疗效果的关系

在该实施例中，分析了本发明药物组合物中各药材或其活性成分的含量与治疗自身免疫性疾病和抑制器官移植排异功效方面的效果之间的关系。

按类似于实施例1所述的方法，制备如下配比的组合物，其中青风藤+白芍+当归总量和赋形剂的含量为占组合物总重量的百分比。并且按实施例3所述的方法测试其对胸腺重量的影响。

组合物编号	青风藤(重量份数)	白芍(重量份数)	当归(重量份数)	青风藤+白芍+当归总量(wt％)	赋形剂(wt％)
						1	50	15	7	50	50％淀粉
2	60	12	6	60	20％淀粉+麦芽糊精
						3	70	10	5	70	30％麦芽糊精
4	80	20	10	80	20％淀粉

结果表明，与对照相比，这些组合物均可降低对胸腺重量，提示这些组合物也可抑制免疫力。

组合物1-4及实施例1中的组合物A和实施例2中的组合物B，经高效液相(HPLC)测定，青藤碱的含量为30-75mg/g；芍药甙含量为8-15mg/g；阿魏酸含量为1.5-3mg/g。

实施例6

饮食补充剂的制备

按类似于实施例1的方法，制备饮食补充剂，其中，三种中药的配比为：

青风藤  60重量份数(600克)

白芍    10重量份数(100克)

当归    5重量份数(50克)

将制得的干浸膏粉碎，60目过筛，装入胶囊。在该实施例中，青风藤+白芍+当归占组合物总重量的约70％。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (7)

1.一种药物组合物的用途，按组合物的总重量计，所述的组合物含有以下活性成分：

青藤碱    30-75mg/g；

芍药甙    8-15mg/g；

阿魏酸    1.5-3mg/g；

以及药学上可接受的载体，

其特征在于，所述的组合物用于制备抑制器官移植排异的药物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物中青藤碱的含量为40-60mg/g，芍药甙为10-15mg/g。

3.一种药物组合物的用途，所述的组合物含有选自下组的必要组份：

45-85重量份数的青风藤；

8-20重量份数的白芍；

3-10重量份数的当归；

且青风藤+白芍+当归的重量占组合物总重量的30-99％，以及余量的药学上可接受的载体，

其特征在于，所述的组合物用于制备抑制器官移植排异的药物。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物含有：

55-85重量份数的青风藤；

10-20重量份数的白芍；

4-10重量份数的当归，

且青风藤+白芍+当归的重量占组合物总重量的50-99％。

5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，它含有

60-85重量份数的青风藤；

12-15重量份数的白芍，

5-8重量份数的当归。

6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物还含有选自下组的物质：环孢素，环磷酰胺、或硫唑嘌呤。

7.一种混合物的用途，所述的混合物由45-85重量份数的青风藤；8-20重量份数的白芍；和3-10重量份数的当归构成，或者所述的混合物含有青藤碱30-75mg/g；芍药甙8-15mg/g；和阿魏酸1.5-3mg/g，其特征在于，所述的混合物用于制备抗器官移植排异的药物。