CN100531748C - 陆英提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种陆英提取物及其制备方法，本发明的陆英提取物，是用以下方法制备的，所述制备方法包括以下步骤：(1)用溶剂提取陆英药材，浓缩后得浸膏；(2)步骤(1)的浸膏经过吸附，洗脱过程，得提取物。

Description

陆英提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种天然植物提取物及其制备方法，特别涉及陆英提取物及其制备方法以及在肝炎疾病治疗中的应用。

背景技术

病毒性肝炎是一种高发病率的恶性传染病，其中尤以乙型肝炎发病率最高并遍及全世界，我国是乙肝病毒的高发区，现约有1.2亿乙肝病毒携带者。乙型肝炎可以导致慢性肝炎、肝硬化和原发肝癌等各种类型的肝病，严重危及人类健康。目前治疗乙肝药物主要包括针对病毒复制的药物α-干扰素和拉米夫定，以及辅助治疗的免疫调节剂、对症治疗和保肝药物等。α-干扰素是目前疗效较为肯定的抗乙肝病毒药物，但仅对20％～30％的病例有效。核苷类似药物拉米夫定可抑制乙肝病毒DNA多聚酶活性，治疗后患者血清中乙肝病毒DNA滴度明显下降，但易出现耐药变异病毒株。目前对慢性乙型肝炎及多重交叉感染的复合型肝炎的治疗尚缺乏特效药物。从传统的中医药疗法中寻找具有具有治疗肝炎及其它肝病的有效药物，已成为人们关注的焦点。

陆英为忍冬科接骨木属植物陆英(Sambucus Chinensis Lindl.)的全草，又名蒴藋、八棱麻、接骨草等，是我国民间常用草药，有活血散瘀、消炎止痛、利尿、镇痉消肿、祛风活络等作用，主要用于跌打损伤、风湿、脚气肿胀、肾炎水肿、黄疸性肝炎、急性菌痢、肺炎等症。70年代末，江西宜春地区即创用陆英煎剂、糖浆、冲剂治疗急性病毒性肝炎1115例，治愈率83.95％，有效率98.2％，明显优于同期中西药综合治疗对照组的效果[江西省宜春地区医学科学研究所编，医药科研资料，1978，13-14]。陆英中主要含有α-和β-香树脂醇、乌索酸、齐墩果酸、β-谷甾醇等三萜和甾醇类化学成分，其中以乌索酸的含量较高(0.4％～0.8％)。乌索酸和齐墩果酸均具有明显的抗肝炎活性，临床应用乌索酸治疗病毒性肝炎疗效显著、确切，是陆英中抗肝炎的主要活性成分[陈武等，陆英抗肝炎活性成分的研究，南昌大学学报(理科版)，2001年第25卷第2期]。

以上已有研究成果表明，陆英具有较好的急性病毒性肝炎作用。目前已有陆英片(卫生部部颁标准WS₃-B-0294-90)、陆英冲剂(卫生部部颁标准WS₃-B-0295-90)和陆英糖浆(卫生部部颁标准WS₃-B-0296-90)等制剂作为治疗急性病毒性肝炎的药物使用。但该类药物均为水提制备，工艺较为粗糙，存在服用剂量大、有效成分不清楚、剂型简单等缺点。同时对陆英的药效学研究很少，仅局限于四氯化碳(CCl₄)急性肝损伤模型的研究。对陆英的药效功能和制备工艺，尚有待于进一步深入研究。

本发明是针对现有的病毒性肝炎及其它肝病药物治疗如容易产生耐药性、复发率高、副作用大等局限性，以及以上现有陆英药品的如工艺简单，服用剂量大，有效成分不清楚，质量不容易控制，药理作用不清楚等缺点，为社会提供一种具有明确抗病毒、保护肝细胞、提高免疫力等作用的天然药物陆英提取物。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗肝炎的陆英提取物及其制备方法。

本发明的另一个目的是提供该提取物在肝病治疗中的应用。

本发明的陆英提取物，其特征在于，是用以下方法制备的，所述制备方法包括以下步骤：

(1)用溶剂提取陆英药材，浓缩后得浸膏；

(2)步骤(1)的浸膏经过吸附，洗脱过程，得提取物。

步骤(1)中所述陆英药材是经过选取陆英药材，切段，自然干燥得到的。

步骤(1)中所述溶剂选自水、醇、醚、酮、酯或它们的混合物。

步骤(1)中所述提取选自：浸泡、煎煮、渗漉、萃取、回流，所述浓缩选自：自然干燥、加热干燥、减压浓缩、喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤(2)中所述吸附是经过将步骤(1)所得陆英浸膏，溶解，过滤；滤液经过用树脂、硅藻土、硅胶、氧化铝或聚酰氨作为吸附剂的层析方法进行吸附。

步骤(2)中所述洗脱是用醇、水或醇水混合溶媒洗脱。

本发明的提取物，其制备过程中还包括洗脱后收集洗脱液，干燥，除尽溶剂，得陆英提取物的过程。

本发明的提取物，优选的是经过以下步骤制备的：

(1)选取陆英药材，切段，自然干燥；

(2)由(1)所得陆英药材采用水、醇(小于五碳)或醇水混合溶媒，渗漉或加热回流提取；加入5-10倍量溶剂，加热回流提取1-4次，每次0.5-3小时，提取物经减压浓缩或冷冻干燥，得到相应陆英流浸膏；

(3)由(2)所得陆英流浸膏用40-80度热水溶解至约相当于0.5克原生药/毫升，过滤；滤液经树脂、硅藻土、硅胶、氧化铝或聚酰氨吸附剂吸附，醇(小于五碳)或醇水混合溶媒洗脱；收集洗脱液，自然蒸发、减压浓缩、真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，除尽溶剂，即得陆英提取物。

其中步骤(2)中选用40-90％乙醇—水混合溶媒加热回流提取，步骤(2)中用8倍量溶剂，加热回流提取3次，每次1小时，提取物经减压浓缩得到相应陆英流浸膏，步骤(3)中选用大孔树脂，步骤(3)中选用60-95％乙醇—水混合溶媒洗脱，优选75％乙醇混合溶媒加热回流提取，所得提取物中含有乌索酸和齐墩果酸，其中乌索酸不小于提取物重量的1％。

本发明还包括用本发明的提取物作为药物活性成分制成的任何一种药物制剂。

本发明所述的陆英提取物，可按常规工艺制成符合制剂要求的任何一种药物制剂形式，如片剂、颗粒剂、胶囊、口服液以及注射剂等。

本发明还包括，用本发明的陆英提取物在肝病治疗中的应用，包括各种病毒性肝炎尤其是乙型肝炎，并具有以下一种或数种功效：(1)对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用；(2)对小鼠D半乳糖胺盐酸盐急性肝损伤模型的保护作用；(3)对大鼠四氯化碳慢性肝损伤模型的保护作用；(4)对体外2215乙型肝炎病毒的抑制作用；(5)对小鼠脾淋巴细胞增殖作用；(6)增强小鼠巨噬细胞吞噬功能作用；(7)对正常大鼠的利胆作用。

本发明的优点在于该提取物经过现代科学方法加以提取、浓缩、精制而成，工艺简单易行、安全无试剂污染、无环境污染，提高了原药材的有效成分含量(约10倍)和得率，减小了服用剂量(约10倍)，容易采用常规方法加工制成各种现代制剂，为社会提供了一种具有明确的抗病毒、保护肝细胞、提高免疫力、利胆等功效的抗肝炎天然药物。

本发明的内容，是在陆英有效部位的药理筛选和成分分离、制备工艺研究和优化、药理作用等大量研究工作基础上完成的。

1、陆英提取物的制备工艺研究

经药理活性筛选跟踪，我们采用醇提、大孔树脂精制技术，得到了陆英有效部位。经植化分离和结构鉴定，从陆英有效部位中分离得到乌索酸、齐墩果酸、β—谷甾醇等活性成分，其中以乌索酸的得率较高。我们以抗肝炎活性成分乌索酸为主要指标，对陆英提取物的制备工艺进行了优化研究。

(1)提取溶媒的选择

各取陆英40g，分别采用10倍量水、甲醇、35％乙醇、55％乙醇、75％乙醇、95％乙醇，加热回流提取2次，每次1小时。过滤，合并提取液，减压浓缩至稠膏状，真空干燥至干，称重，计算各组提取物得量和得率，见表1。

表1 陆英不同提取溶媒试验结果

试验结果显示，各溶媒组提取率和乌索酸含量和得率差别较大，以75％乙醇和甲醇最高，而传统的水提取工艺中乌索酸含量和得率较小。各组乙醇和水提取浸膏经药理筛选结果表明，75％乙醇提取物效果最好。从药效、安全性和实用性方面考虑，我们优选75％乙醇为提取溶媒。

我们以75％乙醇为提取溶媒，对提取工艺中的乙醇用量(A)、提取次数(C)、提取时间(B)、乙醇浓度(D)等因素，以提取率和乌索酸含量为指标进行提取条件优选。试验结果显示，C是影响提取率的主要因素(P<0.01)，而A、B的影响很小。从生产实际情况考虑，最佳提取工艺为A₂B₁C₂，即每次8倍于药材量的75％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，提取率约为36％，乌索酸含量0.47％。

(2)大孔树脂精制工艺考查结果

我们对大孔树脂精制工艺进行了大量研究，内容包括大孔树脂的种类和型号、树脂上样量、树脂吸附性能、树脂的径高比、树脂再生和使用寿命，以及药液的上样浓度、树脂洗涤用水量、不同浓度洗脱溶剂的得率、洗脱溶剂的流速等。最终工艺优化结果，以采用聚苯乙烯型大孔树脂，30-95(80)％乙醇—水混合溶媒洗脱最好。上样药液为相当于原生药0.5g/ml浓度，洗脱用水量为5倍树脂柱体积，洗脱用30-95(80)％乙醇量为3倍量柱体积。洗脱液优选减压浓缩，65℃真空干燥。在此最优化条件下，陆英提取物总得率最高，约为9.7％。其中的乌索酸含量约为1.7％。

表2 大孔树脂不同洗脱组得率试验结果

2、药理研究工作总结

药理研究结果表明，陆英提取物具有以下几方面药理作用：(1)对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用；(2)对小鼠D半乳糖胺盐酸盐急性肝损伤模型的保护作用；(3)对大鼠四氯化碳慢性肝损伤模型的保护作用；(4)对鸭乙型肝炎病毒的抑制作用；(5)对小鼠脾淋巴细胞增殖作用；(6)增强小鼠巨噬细胞吞噬功能作用；(7)对正常大鼠的利胆作用。以上药理研究证明，陆英提取物具有显著的抗病毒、保护肝细胞、提高免疫力等作用，可用于肝炎疾病治疗，包括各种病毒性肝炎尤其是乙型肝炎。

本发明的突出特点在于，本发明的提取物是经过现代科学方法加以提取、浓缩，精制而成，提高了有效成分含量，提高了疗效，减小了服用剂量和副作用，且工艺简单易行、安全无试剂污染。

具体实施方式

本发明所述的陆英提取物，以及提取物药理活性是按如下实施例所表示的方法制造或发现的，所涉及到的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段。但以下实施例不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。

实施例1：陆英提取物的制备(1)

取陆英药材100克，加入800毫升流浸膏，加水制成0.5g生药/ml药液，搅匀，过滤，滤液通过聚苯乙烯型大孔75％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩为树脂柱，先用5倍树脂体积的水洗脱，弃去水洗液，再用3倍量柱体积的80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压浓缩，65℃度真空干燥，得陆英提取物10.4克，其中的乌索酸含量为0.47％。

实施例2：陆英提取物的制备(2)

取陆英药材10千克，加入80升75％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(45℃)流浸膏，加水制成0.5g生药/ml药液，高速离心后过滤，滤液通过聚苯乙烯型大孔树脂柱，先用5倍树脂体积的水洗脱，再用3倍量柱体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压(0.09MPa，65℃)浓缩，得陆英提取物945克，其中的乌索酸含量为1.7％。

实施例3：陆英片的制备

处方：

陆英提取物380g，淀粉40g、糊精60g、蔗糖20g，硬脂酸镁3.6g

制法：取由实施例2制备的陆英提取物，加淀粉、糊精、蔗糖，混匀，制粒，80℃以下干燥，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片，包薄膜衣，共制为1000片。

实施例4：陆英颗粒剂的制备

处方：陆英提取物135g，蔗糖600g、糊精200g

制法：取由实施例2制备的陆英提取物，加蔗糖、糊精，混匀，制粒，80℃以下干燥，共制为1000g，8g/袋。

实施例5：陆英糖浆剂的制备

处方：陆英提取物150g，蔗糖500g

制法：取由实施例2制备的陆英提取物，加蔗糖、苯甲酸钠(适量)，加水1000ml搅拌溶解，100℃灭菌15min，过滤，分装为10ml/支。

Claims (1)

1、一种治疗肝病的陆英提取物的制备方法，步骤如下：

(1)选取陆英药材，切段，自然干燥；

(2)取(1)所得陆英药材，加入8倍量的75％乙醇—水混合溶媒加热回流提取3次，每次1小时，合并滤液，减压浓缩至45℃时相对密度为1.15～1.20的流浸膏；

(3)由(2)所得陆英流浸膏加水溶解至相当于0.5克原生药/毫升，高速离心后过滤，滤液通过聚苯乙烯型大孔树脂柱，先用5倍树脂体积的水洗脱，再用3倍量柱体积的70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，在0.09MPa，65℃条件减压浓缩，即得陆英提取物。