CN100503673C - 具有疏水核心、亲水表面的纳米粒及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属两亲性纳米材料技术领域，具体为一种具有疏水核心、亲水表面的纳米粒及其制备方法和应用。本发明的纳米粒含有聚丙烯酸烷基酯或聚甲基丙烯酸烷基酯的疏水性聚合物嵌段和亲水性不饱和单体或由该亲水性不饱和单体形成的聚合物修饰的壳聚糖的亲水性聚合物嵌段。其按如下步骤制备：在引发剂作用下，壳聚糖的氨基自由基化，同亲水性不饱和单体和丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯结合得两性的三嵌段共聚物。其可用于药物、营养及化妆品的生产。与现有技术相比，其具有稳定性较好及载活性成分量高的特点。

Description

具有疏水核心、亲水表面的纳米粒及其制备方法和应用

技术领域

本发明属两亲性纳米材料技术领域，具体涉及一种具有疏水核心、亲水表面的嵌段共聚物纳米粒及其制备方法和应用。

背景技术

现代的纳米技术和纳米科学是指研究粒径大小在1～100nm的物质所具有的物理、化学性质和功能的科学，它可通过直接操纵单个原子、分子来组装和创造特定功能的物质。纳米粒以高分子物质为材料，活性成分可以溶解、吸附或包裹于材料中。通常纳米粒具有缓释、靶向和保护活性成分作用，可提高疗效和降低毒副作用等。纳米粒不易阻塞血管，可以由细胞内或细胞间穿过内皮壁到达靶部位，也可通过人体的毛细血管甚至血脑屏障(BBB)，再发挥作用。纳米粒具有高度的分散性和巨大的表面积，其尺寸降低3个数量级，则表面积提高6个数量级，具有较高的载活性成分量并提高活性成分吸收，增强活性成分的作用。纳米粒可有效的控制活性成分的释放速度。纳米粒包载活性成分还可以屏蔽活性成分与体内酶液或者酸碱液的接触，保护活性成分不被酶或酸碱降解。

20世纪90年代以前，纳米粒的材料大多是丙烯酸衍生物，而这些材料大多是疏水性的，包载亲水性活性成分能力低。90年代后，Akashi等研制了一系列疏水核心、亲水表面的接枝纳米粒，提高了纳米粒的亲水性和包载亲水性活性成分的能力(Oral peptide usingnanoparticles composed of novel graft copolymers having hydrophobic backbone andhydrophilic branches，Int.J.Pharm.，1997，149：93-106)。Stieneker等开发了氨基烷酯甲基丙烯酸系列的亲水纳米粒，有几种纳米粒带有较强的正电荷，易吸附带负电荷的亲水DNA和蛋白质药物，提高载运亲水性活性成分的能力(Preparation，characterization and cytotoxicityof methylmethacrylate copolymer nanoparticles with a permanent positive surface charge，Int.J.Pharm.，1997，157：189-198)。现有纳米粒存在载活性成分量低、突释和稳定性差等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种载活性成分量高、稳定性好的具有疏水核心、亲水表面的嵌段共聚物纳米粒及其制备方法，并提供这种疏水核心、亲水表面的嵌段共聚物纳米粒的应用，以克服现有技术的不足和缺陷。

本发明的构思如下：

选用疏水性的甲基丙烯酸甲酯和亲水性的甲基丙烯酸衍生物共聚合得到二嵌段的共聚物，纯化处理后，分散于水中，形成两亲性的纳米粒，其亲水链较短。壳聚糖具有良好的生物相容性、安全性，是制备纳米粒的良好材料，但壳聚糖纳米粒在生理环境条件下易产生沉淀、凝聚现象，严重影响活性成分的吸收。为了提高壳聚糖纳米粒的稳定性和获得具有较长亲水链的纳米粒，本发明采用自由基反应原理先用丙烯酸衍生物或甲基丙烯酸衍生物修饰壳聚糖，然后通过共聚合反应得到三嵌段的共聚物，纯化后即得纳米粒。

本发明的技术方案如下：

本发明提出的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒，由下述两种聚合物组成：聚丙烯酸烷基酯或聚甲基丙烯酸烷基酯的疏水性聚合物嵌段和亲水性不饱和单体或由该亲水性不饱和单体形成的聚合物修饰的壳聚糖的亲水性聚合物嵌段。

其中亲水性不饱和单体与壳聚糖的重量比例在20：80到80：20的范围内，丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯与亲水性不饱和单体-壳聚糖共聚物或由该亲水性不饱和单体形成的聚合物-壳聚糖共聚物的重量比例在90：10到50：50的范围内。

所说的甲基丙烯酸烷基酯为甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丁酯和甲基丙烯酸己酯中的一种或一种以上。

所说的丙烯酸烷基酯为丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸异丁酯和丙烯酸己酯中的一种或一种以上。

所说的亲水性不饱和单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸盐类、甲基丙烯酸盐类、丙烯酸酯的盐类或酸类、甲基丙烯酸酯的盐类或酸类、丙烯酸的酰胺类、甲基丙烯酸的酰胺类、丙烯酸的N-烷基酰胺类、甲基丙烯酸的N-烷基酰胺类、丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、甲基丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、丙烯酰胺、丙烯酰胺衍生物、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺衍生物中的一种或一种以上。

通常所用的亲水性不饱和单体为甲基丙烯酸、丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(TMAEMC)、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMC)、3-磺丙基-丙烯酸钾盐中的一种或一种以上。

本发明的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒，粒径为100-250nm。

本发明的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒，其制备方法如下：

(1)将壳聚糖溶于1％的乙酸中，加热至60～75℃，加入引发剂，10～60分钟后加入亲水性不饱和单体，形成接枝共聚物；

(2)10～90分钟后加入疏水性的丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯，反应2～24小时，获得两性的三嵌段共聚物；

(3)将上述三嵌段共聚物纯化，即得具有疏水核心、亲水表面的三嵌段两亲性纳米粒。

其中亲水性不饱和单体与壳聚糖的重量比例在20：80到80：20的范围内，丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯与亲水性不饱和单体-壳聚糖共聚物或由该亲水性不饱和单体形成的聚合物-壳聚糖共聚物的重量比例在90：10到50：50的范围内。

所说的甲基丙烯酸烷基酯为甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丁酯和甲基丙烯酸己酯中的一种或一种以上。

所说的丙烯酸烷基酯为丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸异丁酯和丙烯酸己酯中的一种或一种以上。

所说的亲水性不饱和单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸盐类、甲基丙烯酸盐类、丙烯酸酯的盐类或酸类、甲基丙烯酸酯的盐类或酸类、丙烯酸的酰胺类、甲基丙烯酸的酰胺类、丙烯酸的N-烷基酰胺类、甲基丙烯酸的N-烷基酰胺类、丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、甲基丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、丙烯酰胺、丙烯酰胺衍生物、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺衍生物中的一种或一种以上。

通常所用的亲水性不饱和单体为甲基丙烯酸、丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(TMAEMC)、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMC)、3-磺丙基-丙烯酸钾盐中的一种或一种以上。

所说的引发剂为过硫酸铵或过硫酸钾。其用量为反应体系的0.01～0.2％(g/ml)。

进行反应时，壳聚糖、甲基丙烯酸烷基酯和亲水性不饱和单体的加入次序可不分先后。

本发明的三嵌段共聚物的分子量可由投入单体量、反应时间和引发剂浓度决定。其它参数，如反应温度，亲水聚合物的加入方式、使用氮气、反应时间等，可根据需要进行调整。

本发明考察了亲水单体浓度、疏水单体浓度、单体总浓度、引发剂浓度、pH、反应时间等对纳米粒的影响，已制备数种稳定的纳米粒。

纳米粒的制备中纯化步骤包括本领域技术人员已知的工艺。在透析或超滤后，获得的纳米粒的悬液，它可以直接使用，或者也可以通过本身已知的任何适宜物理方式分离或收集，例如：通过过滤、浓缩、密度梯度离心、沉淀、加入盐或冷冻干燥等。

通过任何合适的物理分离处理可将杂质(盐)和溶剂除去，例如通过透析、过滤、pH改变、色谱或蒸馏等。

本发明的三嵌段聚合物在水溶液中自发构成纳米粒，且该纳米粒可形成粉状固体或在生理介质中形成稳定的胶体悬液。

本发明的纳米粒可作为活性成分的载体使用。含有本发明的纳米粒胶体悬液和/或粉状固体可包括至少一种下述的活性成分：

(1)蛋白质和多肽：胰岛素、血红蛋白、白蛋白、细胞色素、干扰素、抗原、抗体、红细胞生成素、生长激素、白介素、集落刺激因子等条件生长因子等。

(2)疫苗：单独或与至少一种抗原结合。

(3)多糖：特别是选择肝素。

(4)核酸：RNA、DNA、低聚核苷酸和多核苷酸。

(5)属于不同抗癌化学治疗类型的非肽-蛋白质分子，特别是蒽环霉素、阿霉素、秋水仙素、紫杉烷类等。

(6)上述各种活性成分的混合物。

本发明的纳米粒胶体悬液可以通过灭菌过滤器过滤，获得无菌可注射或口服的药用液体，方便且经济。载有活性成分的纳米粒用于生产例如控制释放活性成分体系类型的药用产品。它们可以是经口或鼻、阴道、眼、皮下、静脉内、肌肉内、真皮内、腹膜内、大脑内等途径给药的药用产品。

本发明的纳米粒可用于生产营养、植物保护或化妆品专用产品。化妆品的应用例如纳米粒与活性成分的组合物，可以透皮使用。

本发明的优点在于：

(1)本发明的纳米粒在生理条件下较稳定，避免了壳聚糖纳米粒的易絮凝沉淀，并且本发明的纳米粒的亲水链较长，有利于提高载亲水性活性成分的量。

(2)本发明的三嵌段共聚物合成路线易行、纯化过程简便，单体材料来源方便。

(3)在水溶液中合成的共聚物可自发形成纳米粒，不需要加入有机溶剂、表面活性剂等。

(4)本发明的纳米粒的粒径均小于250nm，多分散性指数均小于0.1，表明纳米粒的粒径较小，分布范围较窄。本发明的纳米粒均带有较强的的表面电荷(Zeta电位)，在生理环境条件下比较稳定，不易产生凝聚和沉淀。

(5)本发明的表面亲水的荷电纳米粒不易被内皮吞噬系统识别，可增加活性成分在体内的循环时间，增强活性作用。如肿瘤等病变部位的上皮细胞处于一种渗漏状态，由于纳米粒在体内长循环，其包载的药物进入病变部位的机会增多。

(6)本发明的纳米粒中的壳聚糖具有黏附作用，能使黏膜表面与黏膜内层的活性成分浓度差增大，有利于活性成分的扩散，提高活性成分的作用。

(7)丙烯酸衍生物或甲基丙烯酸衍生物上的某些基团(如羧基)能与一些酶类结合，破坏酶的活性中心，从而保护核酸和蛋白质药物。

(8)本发明中的两亲性纳米粒具有较长的亲水链，且丙烯酸衍生物、甲基丙烯酸衍生物和壳聚糖带有一定的电荷，亲水性的活性成分不用经过高速离心、超声处理、有机溶剂、表面活性剂、乳化、蒸发等特别处理就可自由吸附在纳米粒表面，不会破坏活性成分的活性。

(9)药物与纳米粒结合较牢固，在体内不会发生突释现象，活性成分可以从纳米粒中缓慢释放出来，起到缓释、降低活性成分毒性的作用。

(10)通过改变共聚物的结构，可有效地控制活性成分的结合及释放。

具体实施方式

实施例1

将0.75克壳聚糖加至70ml 1％的乙酸中，加热至60℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，加入1.5克甲基丙烯酸甲酯、0.0175克过硫酸铵，反应2小时，透析48小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成二嵌段纳米粒(CM纳米粒)，粒径为152.6nm。

实施例2

将0.75克壳聚糖加至70ml1％的乙酸中，加热至65℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，加入1.5克甲基丙烯酸正丁酯、0.02克过硫酸铵，反应3小时，透析72小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成二嵌段纳米粒，粒径为187.4nm。

实施例3

将1克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至70℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.1克过硫酸钾，10分钟后加入1克甲基丙烯酸季铵盐，30分钟后再加入1.5克甲基丙烯酸甲酯，反应18小时，透析96小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒(CTM纳米粒)，粒径为169.2nm。

实施例4

将0.75克壳聚糖加至70ml 1％的乙酸中，加热至70℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.06克过硫酸铵，20分钟后加入1克甲基丙烯酸叔铵盐，30分钟后再加入1.2克甲基丙烯酸甲酯，反应24小时，透析56小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒(CDM纳米粒)，粒径为139.4nm。

实施例5

将0.5克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至75℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.1克过硫酸铵，10分钟后加入0.5克甲基丙烯酸季铵盐，60分钟后再加入0.75克甲基丙烯酸甲酯，反应16小时，透析72小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒(CTM纳米粒)，粒径为154.7nm。

实施例6

将1克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至65℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.1克过硫酸铵，20分钟后加入1克甲基丙烯酸季铵盐，，30分钟后再加入1.8克甲基丙烯酸异丁酯，反应24小时，透析96小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒，粒径为189.5nm。

实施例7

将0.75克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至72℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.09克过硫酸钾，30分钟后加入1.2克甲基丙烯酸季铵盐，，30分钟后再加入2克丙烯酸甲酯，反应14小时，透析60小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒，粒径为166.8nm。

实施例8

将1克壳聚糖加至95ml 1.5％的乙酸中，加热至65℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.12克过硫酸铵，20分钟后加入0.5克甲基丙烯酸叔铵盐，50分钟后再加入1克甲基丙烯酸正丁酯，反应15小时，透析80小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒，粒径为192.3nm。

实施例9

将0.75克壳聚糖加至95ml 1.5％的乙酸中，加热至75℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.1克过硫酸铵，20分钟后加入0.75克甲基丙烯酸叔铵盐，30分钟后再加入1克甲基丙烯酸异丁酯，反应12小时，透析96小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒，粒径为154.2nm。

实施例10

将0.75克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至70℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.09克过硫酸铵，20分钟后加入0.5克甲基丙烯酸叔铵盐，，30分钟后再加入1.2克丙烯酸甲酯，反应8小时，透析60小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒，粒径为147.9nm。

实施例11

将0.375克壳聚糖加至70ml 1％的乙酸中，，加热至75℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.06克过硫酸铵，40分钟后加入0.5克甲基丙烯酸叔铵盐，60分钟后再加入0.6克甲基丙烯酸甲酯，反应8小时，透析72小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒(CDM纳米粒)，粒径为133.6nm。

实施例12

将1克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至68℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.1克过硫酸铵，20分钟后加入1克甲基丙烯酸季铵盐，，30分钟后再加入2克甲基丙烯酸甲酯，反应24小时，透析68小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒(CTM纳米粒)，粒径为176.4nm。

实施例13

将0.75克壳聚糖加至70ml 1％的乙酸中，加热至75℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.06克过硫酸铵，30分钟后加入1克甲基丙烯酸叔铵盐，40分钟后再加入1.8克甲基丙烯酸甲酯，反应12小时，透析56小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒(CDM纳米粒)，粒径为145.2nm。

实施例14

将1.2克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至65℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.1克过硫酸铵，30分钟后加入1.2克甲基丙烯酸季铵盐，，30分钟后再加入1.5克甲基丙烯酸甲酯，反应24小时，透析80小时，冷冻干燥成粉末，分散于水中，形成三嵌段纳米粒(CTM纳米粒)，粒径为149.8nm。

实施例15

将1克壳聚糖加至95ml 1％的乙酸中，加热至70℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.075克过硫酸铵，30分钟后加入1克甲基丙烯酸季铵盐，，30分钟后再加入1.5克甲基丙烯酸甲酯，反应24小时，透析75小时，形成三嵌段纳米粒(CTM纳米粒)，粒径为171.5nm。

实施例16

将0.75克壳聚糖加至70ml 1％的乙酸中，加热至72℃，搅拌至壳聚糖完全溶解，通入氮气，加入0.06克过硫酸铵，20分钟后加入0.75克甲基丙烯酸叔铵盐，40分钟后再加入1.2克甲基丙烯酸甲酯，反应16小时，透析96小时，形成三嵌段纳米粒(CDM纳米粒)，粒径为141.8nm。

实施例17

用HCl和NaOH溶液调节CM(实施例1)、CDM(实施例12)、CTM(实施例13)纳米粒溶液的pH分别为3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14，考察纳米粒的稳定性，结果见下表1：

表1 在不同pH时，纳米粒的稳定性

 

pH	CM	CDM	CTM
				3	稳定	稳定	稳定
4	稳定	稳定	稳定
				5	稳定	稳定	稳定
6	稳定	稳定	稳定
				7	缓慢沉淀	稳定	稳定
8	缓慢沉淀	稳定	稳定
				9	缓慢沉淀	稳定	稳定
10	缓慢沉淀	稳定	稳定
				11	立即沉淀	缓慢沉淀	稳定
12	立即沉淀	缓慢沉淀	稳定
				13	立即沉淀	立即沉淀	稳定
14	立即沉淀	立即沉淀	缓慢沉淀

由表1可见：单一的壳聚糖纳米粒在pH大于6时产生絮凝、沉淀，在生理环境下不稳定，而本发明的纳米粒在生理条件下均较稳定。

实施例18

将1mg/ml的胰岛素PBS溶液与2％的CM(实施例1)、CDM(实施例12)、CTM(实施例13)纳米粒胶体悬液混合，37℃下振荡5小时，15,000rpm离心50分钟，取上清液，使用Lowry法测定上清液中胰岛素的含量，计算包封率。结果见下表2。

表2 不同纳米粒载胰岛素的包封率

 

纳米粒	包封率(％)
		CM纳米粒	65.7
CDM纳米粒	100
		CTM纳米粒	100

实施例19

正常的SD大鼠灌胃给予载有胰岛素的CM(实施例1)、CDM(实施例12)、CTM(实施例13)纳米粒胶体悬液(100U/kg)，分别于0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时尾静脉取血0.2ml，待血液凝固后，12,000rpm离心4分钟，取血清20ul，葡萄糖氧化酶法测定血糖值。

表3 不同的载胰岛素纳米粒的降血糖作用

 

	血糖回到基础水平的时间(小时)
		胰岛素溶液	1
CM纳米粒胰岛素溶液	6
		CDM纳米粒胰岛素溶液	10
CTM纳米粒胰岛素溶液	16

由表3可见，CDM、CTM纳米粒具有良好的缓释作用。

实施例20

超氧化物歧化酶(SOD)易失去活性，限制其在化妆品中的使用。将纳米粒CDM(实施例12)、CTM(实施例13)与SOD混合，均质乳化，70℃放置1小时，利用邻苯三酚自氧法(325nm)测定SOD活性。结果见表4。

表4 纳米粒对SOD稳定性的影响

 

	活性(％)
		SOD	51.7
CDM纳米粒+SOD	88.4
		CTM纳米粒+SOD	89.2

由表4可见，CDM、CTM纳米粒具有稳定SOD的作用

Claims (20)

1、一种具有疏水核心、亲水表面的纳米粒，其特征在于由下述三嵌段共聚物组成：聚丙烯酸烷基酯或聚甲基丙烯酸烷基酯的疏水性聚合物嵌段，和由亲水性不饱和单体形成的聚合物修饰的壳聚糖的亲水性聚合物嵌段，前者为疏水核心，后者为亲水表面；其中，亲水性不饱和单体与壳聚糖的重量比例在20：80到80：20的范围内，丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯与由亲水性不饱和单体形成的聚合物-壳聚糖共聚物的重量比例在90：10到50：50的范围内。

2、根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于所说的甲基丙烯酸烷基酯为甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丁酯和甲基丙烯酸己酯中的一种或一种以上；所说的丙烯酸烷基酯为丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸异丁酯和丙烯酸己酯中的一种或一种以上。

3、根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于所说的亲水性不饱和单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸盐类、甲基丙烯酸盐类、丙烯酸酯的盐类或酸类、甲基丙烯酸酯的盐类或酸类、丙烯酸的酰胺类、甲基丙烯酸的酰胺类、丙烯酸的N-烷基酰胺类、甲基丙烯酸的N-烷基酰胺类、丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、甲基丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、丙烯酰胺、丙烯酰胺衍生物、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺衍生物中的一种或一种以上。

4、根据权利要求3所述的纳米粒，其特征在于所用的亲水性不饱和单体为丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯、3-磺丙基-丙烯酸钾盐中的一种或一种以上。

5、根据权利要求1、2或4所述的纳米粒，其特征在于粒径为100-250nm。

6、一种具有疏水核心、亲水表面的纳米粒的制备方法，其特征在于具体步骤如下：

(1)将壳聚糖溶于1％的乙酸中，加热至60～75℃，加入引发剂，10～60分钟后加入亲水性不饱和单体，形成接枝共聚物；

(2)10～90分钟后加入疏水性的丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯，反应2～24小时，获得两性的三嵌段共聚物；

(3)将上述三嵌段共聚物纯化，即得具有疏水核心、亲水表面的三嵌段两亲性纳米粒；

其中，亲水性不饱和单体与壳聚糖的重量比例在20：80到80：20的范围内，丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯与亲水性不饱和单体形成的聚合物-壳聚糖共聚物的重量比例在90：10到50：50的范围内。

7、根据权利要求6所述的纳米粒制备方法，其特征在于所说的甲基丙烯酸烷基酯为甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丁酯和甲基丙烯酸己酯中的一种或一种以上；所说的丙烯酸烷基酯为丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸异丁酯和丙烯酸己酯中的一种或一种以上；所说的亲水性不饱和单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸盐类、甲基丙烯酸盐类、丙烯酸酯的盐类或酸类、甲基丙烯酸酯的盐类或酸类、丙烯酸的酰胺类、甲基丙烯酸的酰胺类、丙烯酸的N-烷基酰胺类、甲基丙烯酸的N-烷基酰胺类、丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、甲基丙烯酸N-烷基酰胺类的盐类和酸类、丙烯酰胺、丙烯酰胺衍生物、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺衍生物中的一种或一种以上。

8、根据权利要求7所述的纳米粒制备方法，其特征在于所用的亲水性不饱和单体为丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯、3-磺丙基-丙烯酸钾盐中的一种或一种以上。

9、根据权利要求6所述的纳米粒制备方法，其特征在于所说的引发剂为过硫酸铵或过硫酸钾的一种100ml反应体系中引发剂的用量为0.01～0.2g。

10、一种如权利要求1所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，该活性成分为蛋白质和多肽中的至少一种。

11、一种如权利要求10所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，其中所述活性成分为胰岛素、血红蛋白、白蛋白、细胞色素、干扰素、抗原、抗体、红细胞生成素、生长激素、白介素和集落刺激因子中的一种。

12、一种如权利要求1所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，该活性成分为疫苗中的至少一种：。

13、一种如权利要求12所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，其中所述活性成分为单独或与至少一种抗原结合疫苗中的一种。

14、一种如权利要求1所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，该活性成分为多糖中的至少一种。

15、一种如权利要求14所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，其中所述活性成分为肝素。

16、一种如权利要求1所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，该活性成分为核酸中的至少一种。

17、一种如权利要求16所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，其中所述活性成分为RNA、DNA、低聚核苷酸和多核苷酸中的一种。

18、一种如权利要求1所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，该活性成分为属于不同抗癌化学治疗类型的非肽-蛋白质分子中的至少一种。

19、一种如权利要求18所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒作为活性成分载体的应用，其中所述活性成分为蒽环霉素、阿霉素、秋水仙素、紫杉烷类中的一种。

20、一种如权利要求1所述的具有疏水核心、亲水表面的纳米粒在营养、植物保护或化妆品专用产品中的应用。