CN101455645B - 植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种药物载体技术领域的植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法，包括：大豆蛋白药物分散液的制备；在植物油或石蜡中加入乳化剂形成稳态乳液；制成蛋白混合液；将蛋白混合液置于冰浴条件下固化后进行洗涤处理；将洗涤后的蛋白混合液进行分离干燥处理，制成以大豆蛋白为载体的药物微球。本发明利用大豆蛋白作为氨基酸的聚合物，同时具备亲水性和亲油性的特质做为载体，制成无毒性载体的药物微球。

Description

植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法

技术领域

本发明涉及的是一种药物技术领域的微球及其制备方法，具体是一种植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法。

背景技术

目前，新型药物制剂研究特别是小颗粒及纳米制剂已成为生物医药领域的一个重要研究热点，将药物制成新剂型主要有以下几个目的：(1)控制药物的释放速度以达到长效缓释目的；(2)增加药物的靶向性；(3)减少药物刺激，降低毒副作用，提高疗效；(4)提高药物的稳定性；(5)增加药物吸收等。微球制剂是药物新剂型研究的一个重要部分，主要也是基于以上目的，微球材料分为不可生物降解型与可生物降解型两种。不可生物降解型微球材料毒性较大、在体内难以排除且缓释效果不理想而基本上被淘汰。而可生物降解微球则是现在的研究热点，其又分为合成高分子材料和天然高分子材料两种，在体内不会造成有毒物质的释放、菌群失调等问题。不仅如此，它还具有可控降解速率、可控亲水性等优点。而合成高分子中的痕量引发剂和有毒有机物以及合成当中的其他杂质残留是阻碍其在医药研究领域发展的一个重要问题，天然高分子则以其得天独厚的无毒性及生物适应性，且能大量分离提纯。

目前，国内外已有不少的研究致力于从天然高分子材料入手寻找药物的载体材料，相对集中在如白蛋白、明胶、蚕丝蛋白、壳聚糖、海藻酸钠等研究中，如有美国专利(USP4357259)公布了人体血清白蛋白用于水溶性热敏性药物的载体材料的微球制备方法，提供了一种在低温条件下制备热敏性药物微球的方法。

经过检索发现，Christian P.Luftensteiner等在International Journal ofPharmaceutics杂志(1998年第171期第87～89页)中报道了抗肿瘤药米托蒽醌的白蛋白微球制备及优化方法，其制备的微球粒径为16～19μm之间。另经检索发现，美国专利USP5679377将天然醇溶谷蛋白包括包括醇溶盶、高粱醇溶蛋白、玉米蛋白、大麦醇溶蛋白或聚合物应用于药物微球载体材料，采用溶剂蒸发法制备蛋白质微球或蛋白质～聚合物复合微球，微球粒径在1～20μm之间。

另外，检索发现，中国专利申请号99120027.6，公开号CN1293952A，记载了一种“壳聚糖与丝心蛋白共混微球及其用途和制备方法”，该方法公开了一种壳聚糖与丝心蛋白共混微球的制备方法。

这些方法都选用了白蛋白等天然高分子作为药物载体材料，但已应用于微球制备的绝大部分天然高分子材料都不太适合大批量生产，且生产成本相对较高，因此需要寻找更多的天然高分子材料用于制备药物微球，特别是适合低成本、无毒副作用、能大批量生产的天然低毒高分子。而大豆蛋白微球就是一种来源广泛、成本低廉、无毒的天然高分子材料，它是一种植物性蛋白且在大豆中含量较高，主要为球状蛋白，其中有80～88％是可溶的，易被人体消化吸收，组成大豆蛋白的氨基酸有18种之多，含有8种必需氨基酸，比例也较合理，赖氨酸含量相对稍高，蛋氨酸、半胱氨酸含量略低，且大豆能广泛的种植及营养丰富，而大豆蛋白易于提取及生产，同时，它还含有异黄酮，可抑制因荷尔蒙失调引发的肿瘤细胞生长，以上这些使得大豆蛋白在开发成药物微球载体材料方面具有很大的潜力。

经文献检索发现，许沛虎等人在武汉大学学报(理学版)中报道将大豆分离蛋白和海藻酸钠混合得到共混溶胶后加入盐酸小檗碱，搅拌分散均匀，然后用注射器将其注入氯化钙水溶液中，制成负载盐酸小檗碱的AL/SPI复合微球，其粒径约为1000±100μm。该方法制备的微球粒径较大，这在很大程度上限制了其在药物制剂领域中的实际应用。

另经检索发现，中国专利申请号：93119951.4，公开号CN1094611A，记载了一种“改性水解植物蛋白微球及其制备方法的用途”，该技术主要采用的是采用胺反应改性剂苯甲酰氯等改性后利用注射器将大豆蛋白水分散液注入含有柠檬酸和阿拉伯树胶的去离子水溶液中等其他步骤制备蛋白微球。而该技术制备大豆蛋白微球的步骤冗长繁琐，不易实现大批量生产和实际的药物微球剂型制备和应用，因此不易普及推广。

双氯芬酸盐如双氯芬酸钾、双氯芬酸钠等为非甾体消炎镇痛药，半衰期短，一般1天需服用3～4次，且对胃肠道刺激性较强，可引起胃出血和胃溃疡。其较强的毒副作用和较短的生物半衰期使得需要将其制成药物微球等缓释或控释制剂从而达到降低毒性，增加其半衰期的目的。而目前，利用大豆蛋白制备双氯芬酸钾微球的文献却未见报道。

综上所述，利用大豆蛋白作为微球载体材料的研究及报道相对较少，而现有的两种方法制备的大豆蛋白微球均存在较大的不足，急需要寻找一种简单快速的制备方法，可实现大豆蛋白药物微球剂型制备，为提供一种成本低廉、可批量生产和商品化的药物微球剂型。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法，利用大豆蛋白作为氨基酸的聚合物，同时具备亲水性和亲油性的特质做为载体，制成无毒性载体的药物微球。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明涉及植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法，包括以下步骤：

1)大豆蛋白药物分散液的制备：在水浴条件下，将大豆蛋白分散于水中；然后依次加入待加载药物和磷酸盐缓冲液；经过搅拌混合及超声除气泡后制成大豆蛋白药物分散液。

所述的水浴条件是指40℃～80℃的水浴环境；

所述的大豆蛋白和待加载药物占大豆蛋白药物分散液中的质量百分比分别为0.2％～8％和0.05～0.5％；

所述的磷酸盐缓冲液pH值为7.2～7.8。

2)在植物油或石蜡中加入乳化剂形成稳态乳液。

所述的植物油是指大豆油、蓖麻油或棉籽油中的一种或其组合；

所述的石蜡为液态石蜡；

所述的乳化剂是指吐温类、司盘类、脱水山梨醇脂肪酸酯类乳化剂中的一种或其组合，该乳化剂的质量百分比浓度为0.05％～1％。

3)将稳态乳液磁力搅拌方式下逐滴加入含有药物微球的大豆蛋白分散液，稳态乳液与大豆蛋白分散液体积比为1∶10～1∶100，待滴加结束后持续磁力搅拌均质10～60分钟制成蛋白混合液。

4)将蛋白混合液置于冰浴条件下固化10～90分钟，然后进行洗涤处理。

所述的冰浴条件是指0℃～4℃的冰浴环境；

所述的冰浴条件下固化过程中可添加戊二醛作为固化剂。

所述的洗涤处理是指采用石油醚、丙酮或乙醚中之一或其组合作为洗涤液，对固化后的蛋白混合液进行若干次洗涤。

5)将洗涤后的蛋白混合液进行分离干燥处理，制成以大豆蛋白为载体的药物微球。

所述的分离干燥是指采用离心或抽滤方式除去洗涤后的蛋白混合液中的溶剂，然后进行真空、冷冻或粉末喷雾干燥。

本发明利用来源广泛的大豆蛋白为天然的高分子成分、且含丰富的营养成分及无毒副作用的特点，在水相制备时加入药物微球，相对于已报道的两篇关于大豆蛋白微球制备方法的文献，方法更为简便，且成本低廉，易于生产化，制备的微球粒径较小，在医药领域具有重要的应用价值。

本发明提出采用简单的制备方法制备双氯芬酸盐大豆蛋白微球，为双氯芬酸盐缓释控释制剂提供一种新的载体药物制备方法，制备的大豆蛋白微球的粒径在2～20μm，为双氯芬酸盐类提供一种有很大发展空间的药物新剂型。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1

以大豆油为稳态乳液制备大豆蛋白双氯芬酸钾微球

1)将40mg大豆蛋白分散于8mL水中，依次加入双氯芬酸钾5mg和pH为7.2的磷酸盐缓冲液，经搅拌、超声及70℃水浴使大豆蛋白分散均匀，制成大豆蛋白药物分散液，其中大豆蛋白的含量为5mg/mL，双氯芬酸钾的含量为1mg/mL；

2)稳态乳液的制备：量取大豆油50mL，磁力搅拌下逐滴加入100μL吐温80使得吐温80在大豆油中分散均匀；

3)混相：取1mL大豆蛋白药物分散液的上清液逐滴加入到正在磁力搅拌下的稳态乳液中，磁力搅拌半小时，制成蛋白混合液；

4)固化洗涤：将蛋白混合液置于转为冰浴条件下磁力搅拌1小时，期间逐滴加入戊二醛100μL，超声5分钟除去乳化过程中产生的气泡，再以30mL的乙醚洗涤三次，抽虑去除乙醚；

5)离心干燥：对洗涤后的蛋白混合液进行离心处理后再以60℃真空干燥得大豆蛋白微球产物。

本实施例所得到的药物微球经激光粒度分析得知所获得微球粒径为6±4μm，该药物微球性态稳定。

实施例2

以蓖麻油为稳态乳液制备大豆蛋白双氯芬酸钾微球

1)将32mg大豆蛋白分散于8mL水中，依次加入双氯芬酸钠8mg和pH为7.5的磷酸盐缓冲液，经搅拌、超声及70℃水浴使大豆蛋白分散均匀，制成大豆蛋白药物分散液，其中大豆蛋白的含量为4mg/mL，双氯芬酸钠的含量为1mg/mL；

2)稳态乳液的制备：量取蓖麻油50mL，磁力搅拌下逐滴加入150μL吐温80使得吐温80在蓖麻油中分散均匀；

3)混相：取2mL大豆蛋白药物分散液的上清液逐滴加入到正在磁力搅拌下的稳态乳液中，磁力搅拌25分钟，制成蛋白混合液；

4)固化洗涤：将蛋白混合液置于转为冰浴条件下磁力搅拌15分钟，超声5分钟除去乳化过程中产生的气泡，再以30mL的乙醚洗涤三次，抽虑去除乙醚；

5)离心干燥：对洗涤后的蛋白混合液进行离心处理后再以70℃真空干燥得大豆蛋白微球产物。

本实施例所得到的药物微球经激光粒度分析得知所获得微球粒径为6±6μm，该药物微球性态稳定。

实施例3

以液体石蜡为稳态乳液制备大豆蛋白空白微球

1)将32mg大豆蛋白分散于8mL水中，依次加入双氯芬酸钠8mg和pH为7.5的磷酸盐缓冲液，经搅拌、超声及60℃水浴使大豆蛋白分散均匀，制成大豆蛋白药物分散液，其中大豆蛋白的含量为4mg/mL，双氯芬酸钠的含量为1mg/mL；

2)稳态乳液的制备：量取液状石蜡50mL，磁力搅拌下逐滴加入100μL吐温80使得吐温80在石蜡中分散均匀；

3)混相：取4mL上述水相即大豆蛋白水分散液上清液逐滴加入到正在磁力搅拌下的稳态乳液即石蜡中，磁力搅拌15分钟，改为冰浴，继续磁力搅拌15分钟，超声5分钟除去乳化过程中产生的气泡；

4)固化洗涤：将上述混合液置于转为冰浴条件下磁力搅拌15分钟，超声5分钟除去乳化过程中产生的气泡，再以30mL的乙醚洗涤三次，抽虑去除乙醚；

5)离心干燥：对洗涤后的蛋白混合液进行离心处理后再以70℃真空干燥得大豆蛋白微球产物。

本实施例所得到的药物微球经激光粒度分析得知所获得微球粒径为6±6μm，该药物微球性态稳定。

实施例4

以液体石蜡为稳态乳液制备大豆蛋白空白微球

将实施例3中步骤二中的100μL的吐温80换为120μL的司盘60，其余步骤同实施例3，本实施例所得到的药物微球经激光粒度分析得知所获得微球粒径为7±4μm，该药物微球性态稳定。

实施例5

以液体石蜡为稳态乳液制备大豆蛋白空白微球

将实施例3中步骤四中的洗涤溶剂乙醚换为石油醚，其余步骤同实施例3，本实施例所得到的药物微球经激光粒度分析得知所获得微球粒径为6±5μm，该药物微球性态稳定。

Claims (1)

1.一种植物性大豆蛋白载体的双氯芬酸钾/钠微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)大豆蛋白药物分散液的制备：在水浴条件下，将大豆蛋白分散于水中，然后依次加入待加载药物和磷酸盐缓冲液，经过搅拌和超声除气泡后制成大豆蛋白药物分散液；

所述的水浴条件是指40℃～80℃的水浴环境；

所述的大豆蛋白占大豆蛋白药物分散液中的质量百分比为0.2％～8％；

所述的待加载药物占大豆蛋白药物分散液中的质量百分比为0.05～0.5％；

所述的磷酸盐缓冲液pH值为7.2～7.8；

2)在植物油或石蜡中加入乳化剂形成稳态乳液；

所述的乳化剂是指吐温80；

3)将稳态乳液磁力搅拌方式下逐滴加入含有药物的大豆蛋白分散液，待滴加结束后持续磁力搅拌均质制成蛋白混合液；

4)将蛋白混合液置于冰浴条件下固化后进行洗涤处理；

所述的固化过程中添加戊二醛作为固化剂；

所述的洗涤处理是指采用石油醚、丙酮或乙醚中之一或其组合作为洗涤液，对固化后的蛋白混合液进行若干次洗涤；

5)将洗涤后的蛋白混合液进行分离干燥处理，制成以大豆蛋白为载体的药物微球。