CN100482655C

CN100482655C - 一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化方法

Info

Publication number: CN100482655C
Application number: CNB2005100287233A
Authority: CN
Inventors: 范小兵; 殷梦龙; 林涛; 李红
Original assignee: NUODE BIOLOGICAL IND CO Ltd SHANGHAI
Current assignee: NUODE BIOLOGICAL IND CO Ltd SHANGHAI
Priority date: 2005-08-12
Filing date: 2005-08-12
Publication date: 2009-04-29
Anticipated expiration: 2025-08-12
Also published as: CN1733753A

Abstract

本发明公开了一种新颖的表没食子儿茶素没食子酸酯的纯化制备方法，将绿茶提取物经微孔膜过滤，滤液通过弱极性的大孔型聚苯乙烯树脂，用稀的低级醇解析，收集EGCg解析部位，经真空浓缩，结晶，过滤，冷冻干燥后得到产品，由高效液相色谱检测EGCg产品纯度大于98%。本发明方法具有工艺简单、溶剂无毒、产物纯度高、生产周期短、成本低的优点，符合环保和安全的要求，宜于规模型工业化生产。

Description

一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化方法

技术领域

本发明涉及一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化制备方法。

背景技术

茶多酚是一种天然的抗氧化剂，其主要组分是儿茶素，它由六种以上的单体组成，即D、L—儿茶素(D、L—C)，L—表儿茶素(L—EC)，L—表没食子儿茶素(L—EGC)，D、L—没食子儿茶素(D、L—GC)，L—表儿茶素没食子酸酯(L—ECG)，L—表没食子儿茶素没食子酸酯(L—EGCG)等。研究表明L—EGCG是绿茶主要的高活性成分，具有抑制和抵抗病毒和细菌、抑制和预防心血管疾病、预防和抗癌、预防和治疗辐射伤害、延缓衰老等功效，可应用于药品、食品、保健食品、化妆品等领域。因此，研究开发表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化新方法具有重要的现实意义。

表没食子儿茶素没食子酸酯单体的提取分离纯化方法已经发表的主要是溶剂提取法，离子沉淀法、超临界萃取法、高速逆流层和膜分离技术结合凝胶柱分离制备法。溶剂提取法是用极性溶剂从茶叶中浸取，所用有机溶剂如：丙酮、乙醚、甲醇、乙醇、己烷以及三氯甲烷等。该方法使用多种有机溶剂，有些有毒的有机溶剂使产品和操作不尽安全，且易造成环境污染。离子沉淀法是利用金属能够沉淀茶多酚，而使其与咖啡碱分离，如铜盐、铅盐或三氯化铝。该方法使用了对人体有危害的金属作沉淀剂，其产品为食品和医药工业所不能接受。超临界萃取法投资大，不利于工业化生产。高速逆流层和膜分离技术结合凝胶柱层析法，工艺过程繁复，柱层析一般使用凝胶层析，试剂消耗大价格昂贵，制备量小且周期长，显然不合适用于大规模工业化生产。

发明内容

本发明的目的是克服了现有技术纯化表没食子儿茶素没食子酸酯单体方法技术和成本方面的不足，提供一种产品纯度高、生产周期短，简单、能工业化生产的纯化工艺。

将绿茶提取物，其中儿茶素含量为60～80％，EGCG含量在40～60％，在非氧化性气体的存在下(例如氮气、氦气、氩气或氢气)溶于20～50倍量的去离子水中，将溶液经1-0.45微米膜过滤器过滤，除去未溶解的杂质。采用大孔型聚苯乙烯弱极性树脂，它们为市场上购得的ADS-5，AB-8或D-130作为填充料装柱层析，在20～60℃下，5％～40％低级醇溶液解析，根据紫外检测结果，收集表没食子儿茶素没食子酸酯的流分，将收集的流分在35～70℃真空浓缩至小体积，放置，析出结晶，重结晶，重结晶溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇或丙三醇。过滤、冷冻干燥得成品，该成品经HPLC检测，EGCG产品纯度为大于98％，无农药及溶剂残留。

本方法采用的是，以非氧化性气体隔绝空气，在20～60℃温度条件下，用大孔型聚苯乙烯非极性或弱极性树脂吸附EGCg等儿茶素类化合物，利用大孔型聚苯乙烯弱极性树脂在合适浓度的低级醇条件下能够洗脱出，低级醇为C₁-C₃伯醇或仲醇EGCg的原理。有效分离EGCg、咖啡因等组分，可以得到EGCg的纯度大于98％理论收率在50～80％。

现有技术多用凝胶柱层析和高速逆流色谱的方法进行分离、纯化，多采用氯仿、乙酸乙脂等溶剂，造成产品溶剂残留高，层析用填料多采用进口产品，成本高，不利于工业化生产。本发明采用国产树脂作为柱填料，醇为解析液，产品无有毒有害溶剂残留，成本较低，易于工业化生产。

附图说明

图1是用HPLC检测产品的纯度。

具体实施方式(本发明涉及的百分比均以重量百分比计)

实施例一

称取20g含量为57％EGCg的茶多酚提取物置于一双口瓶中，在双口瓶的一个口通入氮气另一个口导出气体的同时使20g固体溶解120ml去离子水中备用。取D101树脂2000ml用乙醇装柱，用乙醇洗脱树脂中的致孔剂和聚合单体残余，直至洗脱剂经浓缩后用气相层析检测结果，与起始样品比较无致孔剂和聚合单体残余为止。再用去离子水替换掉柱中的乙醇在此过程中水要经过氮气饱和并在氮气的存在下进行替换。柱中的乙醇被完全替换后，在氮气的存在下将备用的溶液注于柱面上以0.4倍体积/小时流速上样，待样品进入柱体后，首先用2倍体积的去离子水以0.2倍体积/小时流速洗脱，洗完后，改用25％乙醇洗脱，洗脱体积为3倍体积，经紫外检测器和HPLC指示，收集EGCG流份。流份合并，在45℃下真空浓缩至小体积，在浓缩瓶中滴加乙醇(AR)，稍加热使溶解后转移到三角瓶中储存于冰箱中，待结晶完成取出过滤，干燥。称量得6.12g，产率为53.68％。经HPLC检测纯度为98.7％。

实施例二

称取40g含量为44％EGCg的茶多酚提取物置于一双口瓶中，在双口瓶的一个口通入氦气另一个口导出气体的同时使40g固体溶解240ml去离子水中备用。取AB-8树脂3000ml用乙醇装柱，用乙醇洗脱树脂中的致孔剂和聚合单体残余，直至洗脱剂经浓缩后用气相层析检测结果，与起始样品比较无致孔剂和聚合单体残余为止。再用去离子水替换掉柱中的乙醇在此过程中水要经过氦气饱和并在氦气的存在下进行替换。柱中的乙醇被完全替换后，在氦气的存在下将备用的溶液注于柱面上以0.4倍体积/小时流速上样，待样品进入柱体后，首先用2倍体积体积的去离子水以0.2倍体积/小时流速洗脱，洗完后，改用5％异丙醇洗脱2倍体积，接着用20％异丙醇洗脱，洗脱体积为3倍体积，经紫外检测器结合HPLC检测指示，收集EGCG流份。流份合并，在45℃下真空浓缩至小体积，在浓缩瓶中滴加乙醇(AR)，稍加热使溶解后转移到三角瓶中储存于冰箱中，待结晶完成取出过滤，干燥。称量得14.25g，产率为80.97％。经HPLC检测纯度为98.2％。

实施例三

称取25g含量为65％EGCg的茶多酚提取物置于一双口瓶中，在双口瓶的一个口通入氩气另一个口导出气体的同时使25g固体溶解150ml去离子水中备用。取D-130树脂2000ml用乙醇装柱，用乙醇洗脱树脂中的致孔剂和聚合单体残余，直至洗脱剂经浓缩后用气相层析检测结果，与起始样品比较无致孔剂和聚合单体残余为止。再用去离子水替换掉柱中的乙醇在此过程中水要经过氩气饱和并在氩气的存在下进行替换。柱中的乙醇被完全替换后，在氩气的存在下将备用的溶液注于柱面上以0.4倍体积/小时流速上样，待样品进入柱体后，首先用2倍体积的去离子水以0.2倍体积/小时流速洗脱，洗完后，改用7％甲醇洗脱2倍体积，接着用24％甲醇洗脱，洗脱体积为3倍体积，经紫外检测器结合HPLC检测指示，收集EGCG流份。流份合并，在45℃下真空浓缩至小体积，在浓缩瓶中滴加乙醇(AR)，稍加热使溶解后转移到三角瓶中储存于冰箱中，待结晶完成取出过滤，干燥。称量得10.24g，产率为63.15％。经HPLC检测纯度为98.0％。

Claims

1.一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化制备方法，包括如下步骤：

(1)将绿茶提取物，其中儿茶素含量为60～80％，EGCg含量为40～60％，在非氧化性气体存在下，溶于非氧化性气体饱和的去离子水中，溶液经微米膜过滤，滤液备用；

(2)采用大孔型弱极性聚苯乙烯树脂装柱，用5％～40％v/vC₁-C₃伯醇或仲醇溶液解析；

(3)采用紫外检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯流分，收集液经35～70℃真空浓缩至小体积，放置析出结晶，用C₁-C₃伯醇或仲醇重结晶，HPLC检测。

2.根据权利要求1所述的一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化制备方法，其特征在于非氧化性气体选自氦气、氩气、氮气或氢气。

3.根据权利要求1所述的一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化制备方法，其特征在于采用大孔型聚苯乙烯弱极性树脂为AB-8或D-130或ADS-5。

4.根据权利要求1所述的一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化制备方法，其特征在于C₁-C₃伯醇或仲醇重结晶溶剂选自乙醇、正丙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇或丙三醇。