CN106967036B - 一种egcg的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种EGCG的制备方法，具体涉及一种适用于工业化生产高纯度EGCG的制备方法，属于植物单体分离纯化领域。本发明针对目前有机溶剂提取法制备EGCG工艺复杂、生产过程中使用大量有机溶剂、不够安全环保的问题，提供一种EGCG的制备方法，包括以下步骤：绿茶粉碎去离子水真空高温浸提、无机陶瓷膜过滤、大孔吸附树脂富集、反相色谱层析、真空浓缩、冻干步骤。本方法整个制备工艺过程中只采用水和含水乙醇等溶剂，减少了大量有机溶剂的使用和回收，做到无毒、安全、工艺简单，而且陶瓷膜、树脂和反向色谱柱填料可再生利用，大大降低成本，同时提高了EGCG的纯度，更加适用于大规模EGCG生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种EGCG的制备方法，具体涉及一种适用于工业化生产高纯度EGCG的制备方法，属于植物单体分离纯化领域。
背景技术
EGCG(epigallocatechin gallate)中文名表没食子儿茶素没食子酸酯，是绿茶茶多酚(TeaPolyphenols，TP)的主要组成成分和活性成分，具有抗氧化、抗癌、抗突变等活性。EGCG为白色无定形的结晶状物质，易氧化聚合，一般呈现淡黄色至褐色；略带茶香，有涩味；易溶于水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等，微溶于油脂，不溶于苯和氯仿等有机溶剂；可与铁离子生成绿黑色化合物。
在茶鲜叶中，水分含量约占75％，干物质为25％。在干物质中糖类约占茶叶干物重的20～25％，主要是纤维素、果胶、淀粉等；蛋白质约占20～30％，主要有谷蛋白、白蛋白等；脂肪及类脂物质在茶叶中约为8％。次级代谢产物中，茶多酚类占20～35％，主要是儿茶素，占总量70％以上，生物碱占3～5％，由咖啡碱、茶叶碱、可可碱组成，氨基酸占1～4％，芳香物质0.005～0.030％，以及茶皂素等。儿茶素类化合物主要包括儿茶素(C)、表儿茶素(EC)、没食子儿茶素(EGC)、儿茶素没食子酸酯(ECG)和没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等几种物质，其中EGCG占儿茶素类化合物含量的50～60％。
EGCG的分离纯化是根据其与杂质的差异，结合工程实际来进行的。主要方法如有机溶剂提取法、金属离子盐沉淀法、高效液相色谱法、高速逆流色谱法等。目前，工业化的EGCG制备方法主要是有机溶剂提取法，其优点是萃取工艺成熟，容易实现产业化；缺点是需要使用大量的有机溶剂反复除杂，工艺繁琐复杂，产品可能存在有机溶剂的残留，不够安全环保。
目前，从绿茶中分离纯化的EGCG单体纯度普遍为低于98％，较高纯度EGCG的制备也仅限于实验室规模，且工艺方法复杂、成本高，因此，开发一种适于工业化生产高纯度、低成本、绿色安全的EGCG单体的制备方法具有较大的技术先进性和经济社会效益。
发明内容
本发明针对目前有机溶剂提取法制备EGCG工艺复杂、生产过程中使用大量有机溶剂、不够安全环保的问题，提供了一种适用于工业化生产高纯度EGCG的制备方法，生产过程中减少了大量有机溶剂的使用，绿色环保，并且提高了产品的纯度。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种EGCG的制备方法，包括以下步骤：
(1)绿茶粉碎，装入提取罐，按照固液比1：8～10加入去离子水，温度70～90℃，搅拌转速50～60r/min，0.08～0.12Mpa真空提取20～30min；
(2)将提取罐内1/4～1/2提取液抽出，按照抽出提取液的体积补入去离子水，按照步骤(1)重复提取1～2次；
(3)合并步骤(1)和(2)的提取液，冷却至40～50℃，采用孔径为0.2～0.8μm的无机陶瓷膜0.15～0.3Mpa过滤，得滤液和滤渣；
(4)取步骤(3)滤液，导入真空浓缩机，40～60℃、0.09～0.12Mpa真空浓缩60～90min，得浓缩提取液；
(5)采用大孔吸附树脂对步骤(4)浓缩提取液进行儿茶素富集，上样流速1～2BV/h，再依次使用10％、25％、40％、95％乙醇以1～2BV/h流速洗脱4～5个柱体积，根据薄层色谱跟踪检测结果，收集儿茶素混合物；
(6)采用真空浓缩机50～55℃、0.09～0.12Mpa真空浓缩至无醇味，得富集后儿茶素浓缩物；
(7)将步骤(6)儿茶素浓缩物用纯水溶解，采用反相色谱填料RP-C18为固定相，以1～2BV/h的流速上样，采用纯水为流动相，3～4BV/h流速洗脱3～4个柱体积，根据薄层色谱跟踪检测结果，收集EGCG馏分；
(8)采用真空浓缩机温度45～55℃、0.09～0.12Mpa浓缩30～60min，再采用真空冻干机进行冷冻干燥，水分含量控制在6％以下，得EGCG冻干粉。
步骤(3)所述无机陶瓷膜为Al2O3陶瓷膜。
步骤(5)所述大孔吸附树脂为D101型，粒径范围为0.3～1.2mm。
步骤(7)所述反相色谱填料的粒度为20～60μm。
本发明取得的技术效果为：
(1)采用去离子水替代乙醇或者丙酮等有机溶剂对绿茶进行浸提，既保证了较高的提取率，又减少了大量有机溶剂的使用和回收，大大降低成本，更加适用于大规模EGCG生产。
(2)采用真空减压浸提工艺，EGCG不缩聚、不氧化，不仅增加了稳定性，而且提高了提取率，终产物制备量达到公斤级。
(3)采用无机陶瓷膜对茶叶原料提取物在上柱之前进行错流过滤，在一定操作压差的作用下，膜稳定性更好、孔径分布窄、机械强度高、不易被污染堵孔，小于膜孔径的物质通过膜孔进入渗透侧成为滤液，而大于孔径的物质则被膜截流而成为浓缩液，从而达到分离、浓缩的目的，可以去除悬浮颗粒、细菌、大分子多糖、蛋白质、胶质等物质，增强后续树脂柱床对儿茶素的吸附和交换，减少堵柱现象发生，提高工作效率，相比传统膜过滤方法更适于大规模生产。
(4)从茶多酚中分离纯化EGCG，EGCG与ECG的分离一直是分离纯化的难点，本发明直接使用纯水作为洗脱剂，充分发挥反相填料对于物质极性大小差异的辨别能力，利用过载效应，大大提高了上样量和分离效果，而且无需处理试剂，降低工艺成本，适合工业化生产。
(5)采用无机陶瓷膜-大孔吸附树脂-反向C18柱层析联用，提高EGCG纯度，纯度高达99.5％以上。在整个制备工艺过程中只采用水和含水乙醇等溶剂，能做到无毒、安全、工艺简单，而且陶瓷膜、树脂和反向色谱柱填料可再生利用，降低生产成本，适于工业化生产高质量EGCG。
附图说明
图1为对照品溶液HPLC色谱图，峰1为EGCG。
图2为供试品I溶液HPLC色谱图，峰1为EGCG。
图3为供试品II溶液HPLC色谱图，峰1为EGCG。
具体实施方法
下面结合实施例进一步详细说明本发明技术方案。
实施例1工业级高纯度EGCG的制备
(1)采用粉碎机将绿茶粉碎，称取100kg绿茶粉末，装入1200L提取罐中，加入800L去离子水，升温至70℃，搅拌转速60r/min，0.08Mpa真空提取30min。
(2)用抽滤管将提取罐内400L提取液抽出，向罐内补入400L离子水按照步骤(1)重复提取1次。
(3)合并步骤(1)和(2)的提取液，冷却至40℃，采用孔径为0.2μm的Al2O3陶瓷膜过滤器0.3Mpa过滤，得滤液和滤渣，弃掉滤渣。
(4)取步骤(3)滤液，导入真空浓缩机，60℃、0.12Mpa真空浓缩60min，得浓缩提取液160L；取提取液样品干燥称重，计算提取率为28.2％。
(5)称取粒径范围为0.3～1.2mm的D101型大孔吸附树脂(科海思北京科技有限公司)15kg，加入30L 95％乙醇室温下超声溶胀60min；树脂充分溶胀后湿法装柱，柱高2m，柱直径15cm，用去离子水平衡3个柱体积；取步骤(4)浓缩提取液，1BV/h流速上样；带样品进入柱体后，依次用10％、25％、40％、95％乙醇以2BV/h流速洗脱4个柱体积；根据薄层色谱跟踪检测结果，收集儿茶素混合物50L。
(6)采用真空浓缩机50℃、0.09Mpa真空浓缩至无醇味，得富集后儿茶素浓缩物1.35kg。
(7)将步骤(6)儿茶素浓缩物用3L纯水溶解，采用粒度为20～40μm反相色谱填料RP-C18(Sigma公司)为固定相，柱高1m，柱直径8cm，1BV/h的流速上样；再采用纯水为流动相，4BV/h流速洗脱，洗脱3倍柱体积，根据薄层色谱跟踪检测结果，收集EGCG馏分；
(8)采用真空浓缩机45℃、0.12Mpa浓缩30min；采用真空冷冻干燥机冻干，水分含量控制在6％以下，得到EGCG冻干粉0.96kg；经HPLC检测分析(如图2)，制备的EGCG纯度为99.6％。
实施例2工业级高纯度EGCG的制备
(1)采用粉碎机将绿茶粉碎，称取100kg绿茶粉末，装入1200L提取罐中，加入1000L去离子水，升温至90℃，搅拌转速50r/min，0.12Mpa真空提取20min。
(2)用抽滤管将提取罐内250L提取液抽出，向罐内补入250L离子水按照步骤(1)重复提取2次。
(3)合并步骤(1)和(2)的提取液，冷却至50℃，采用孔径为0.8μm的Al2O3陶瓷膜过滤器0.15Mpa过滤，得滤液和滤渣，弃掉滤渣。
(4)取步骤(3)滤液，导入真空浓缩机，40℃、0.09Mpa真空浓缩90min，得浓缩提取液120L；取提取液样品干燥称重，计算提取率为29.6％。
(5)取粒径范围为0.3～1.2mm的D101型大孔吸附树脂(科海思北京科技有限公司)15kg，加入30L 95％乙醇室温下超声溶胀60min；树脂充分溶胀后湿法装柱，柱高2m，柱直径15cm，用去离子水平衡3个柱体积；取步骤(4)浓缩提取液，2BV/h流速上样；带样品进入柱体后，依次用10％、25％、40％、95％乙醇以1BV/h流速洗脱5个柱体积；根据薄层色谱跟踪检测结果，收集儿茶素混合物80L。
(6)采用真空浓缩机55℃、0.12Mpa真空浓缩至无醇味，得富集后儿茶素浓缩物1.42kg。
(7)将步骤(6)儿茶素浓缩物用3L纯水溶解，采用粒度为40～60μm反相色谱填料RP-C18(Sigma公司)为固定相，柱高1m，柱直径8cm，2BV/h的流速上样；再采用纯水为流动相，3BV/h流速洗脱，洗脱4倍柱体积，根据薄层色谱跟踪检测结果，收集EGCG馏分；
(8)采用真空浓缩机55℃、0.09Mpa浓缩60min；采用真空冷冻干燥机冻干，水分含量控制在6％以下，得到EGCG冻干粉1.05kg；经HPLC检测分析(如图3)，制备的EGCG纯度为99.5％。
实施例3采用HPLC法检测EGCG纯度
(1)检测条件
仪器型号：液相色谱仪Agilent 1260
色谱柱：AgilentPoroshell 120SB-C18(4.6×100mm,2.7μm)
流动相：乙腈-0.1％甲酸水
流速：1.0mL/min
检测波长：280nm
柱温：30℃
进样量：5μL
梯度洗脱条件：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水
(2)溶液的制备
对照品溶液的制备：取EGCG对照品(中国药品生物检定所提供，纯度≥98％)适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释成浓度为2.3mg/mL的对照品储备液。精密量取1mL，置10mL量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得浓度为0.23mg/mL的对照品溶液。
供试品I溶液的制备：取实施例1制备的EGCG冻干粉约143mg，精密称定，置20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取1mL，置10mL量瓶中，甲醇定容，0.22μm微孔滤膜过滤，即得。
供试品II溶液的制备：取实施例2制备的EGCG冻干粉约23mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取1mL，置10mL量瓶中，甲醇定容，0.22μm微孔滤膜过滤，即得。
(3)系统适用性试验
按上述色谱条件分析，表没食子儿茶素没食子酸酯色谱峰对称因子在0.95～1.15之间，与相邻色谱峰的分离度大于1.5，色谱峰的理论塔板数大于60000。取对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样5次，计算表没食子儿茶素没食子酸酯峰面积的RSD％为0.7％，表明仪器精密度良好。对照品溶液和供试品溶液色谱图见附图1、图2和图3。
(4)样品测定
按上述溶液制备方法平行制备供试品、对照品溶液，在上述色谱条件下测定，每份供试品进样2针，按外标法以峰面积计算EGCG的含量。
计算公式：
式中：
V：供试品溶液的体积
D：供试品溶液的稀释倍数
W：供试品的称样量
(5)测定结果
标准溶液浓度：0.23mg/mL
标准溶液峰面积平均值：1854.55
供试品测定结果：
Claims (1)
1.一种EGCG的制备方法，其特征在于，所述方法由以下步骤组成：
(1)绿茶粉碎，装入提取罐，按照固液比1:10加入去离子水，温度90℃，搅拌转速50～60r/min，0.08Mpa真空提取20～30min；
(2)将提取罐内1/4～1/2提取液抽出，按照抽出提取液的体积补入去离子水，按照步骤(1)重复提取1～2次；
(3)合并步骤(1)和(2)的提取液，冷却至40～50℃，采用孔径为0.8μm的Al2O3陶瓷膜0.15Mpa过滤，得滤液和滤渣；
(4)取步骤(3)滤液，导入真空浓缩机，40～60℃、0.09Mpa真空浓缩60～90min，得浓缩提取液；
(5)采用粒径范围为0.3～1.2mm的D101大孔吸附树脂对步骤(4)浓缩提取液进行儿茶素富集，上样流速1～2BV/h，再依次使用10％、25％、40％、95％乙醇以1～2BV/h流速洗脱4～5个柱体积，根据薄层色谱跟踪检测结果，收集儿茶素混合物；
(6)采用真空浓缩机50～55℃、0.09Mpa真空浓缩至无醇味，得富集后儿茶素浓缩物；
(7)将步骤(6)儿茶素浓缩物用纯水溶解，采用反相色谱填料RP-C18为固定相，以1～2BV/h的流速上样，采用纯水为流动相，3～4BV/h流速洗脱3～4个柱体积，根据薄层色谱跟踪检测结果，收集EGCG馏份 ；所述反相色谱填料的粒度为20～60μm；
(8)采用真空浓缩机温度45～55℃、0.09Mpa浓缩30～60min，再采用真空冻干机进行冷冻干燥，水分含量控制在6％以下，得EGCG冻干粉。
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| CN107897427A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-04-13 | 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所 | 一种茶叶多产物同步模块化分离的方法 |
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1733753A (zh) * | 2005-08-12 | 2006-02-15 | 上海诺德生物实业有限公司 | 一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化方法 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1733753A (zh) * | 2005-08-12 | 2006-02-15 | 上海诺德生物实业有限公司 | 一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体的纯化方法 |
| CN102115467A (zh) * | 2009-12-30 | 2011-07-06 | 温尧林 | 一种单体儿茶素的制备方法 |
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| 茶儿茶素制备新技术研究;龚雨顺;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士）工程科技I辑》;20030915;B016-11(摘要第2段和正文第4页第3段) * |
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