CN100446778C - 一种银杏叶提取液/物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新的银杏叶提取液/物的制备方法，根据本发明所述方法得到的银杏叶提取液/物，各项成分纯度更高，可大大减少将来由于中药成分复杂所带来的问题，由其制备的制剂，疗效更好，安全性更高。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体的说，涉及一种新的银杏叶提取液/物的制备方法。
背景技术
舒血宁注射液系银杏叶提取物配制成的无菌水溶液，其有效成分主要是黄酮苷类和萜类内酯活性物质，包括：槲皮素、山柰素、银杏三酯、银杏内酯、苦内脂等。具有扩张心脑血管、改善微循环、抗血小板激活因子(PAF)、抗氧化清除和抑制氧自由基、抗病毒、抗菌消炎等药理作用，被应用于多种疾病，并取得显著效果。目前其制备工艺中仍存在许多需要改进的地方。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的银杏叶提取液/物的制备方法。
为了实现本发明的目的，本发明提供了一种新的银杏叶提取液/物的制备方法，包括如下步骤：1)取银杏叶粉碎至小块，加入银杏叶质量2～16倍的50％～85％的乙醇浸泡12小时以上，加热回流提取至少1次，每次1～3小时，过滤，合并提取液，调节pH值7.0～9.0，过滤，回收乙醇；2)滤液加水稀释至生药4～6倍量体积，调节pH值3.0～6.5，过滤，加于已处理好的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的2～4％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％～30％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的60～80％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0-1.2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，经微孔滤膜精滤后，回收乙醇；3)滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.3～7.8，静置24h，上清液经微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。其中所述的大孔树脂可以是HPD450、D101、DM130。
所述步骤1)优选的方案为取银杏叶适量，粉碎至0.5～1.5cm的小块，加入5倍量的50％的乙醇浸泡24h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.5～8.0，过滤，回收乙醇。
所述步骤2)优选的方案为滤液加纯化水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.0～4.5，过滤，加于已处理好的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇。
所述步骤3)优选的方案为滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.3～7.8，静置24h，上清液经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.2～0.3μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
本发明也提供了所述提取方法制得的银杏叶提取液/物，其中银杏叶提取液中总黄酮醇苷的含量为1.0～8.0mg/ml，银杏内酯A的含量为0.07～0.8mg/ml，银杏内B的含量为0.03～0.5mg/ml，银杏内酯C的含量为0.04～0.6mg/ml，而以干燥品重量计，所制得的银杏叶提取物中的总黄酮醇苷的含量为20～36％，银杏内酯A的含量不少于1.7％。银杏内酯B的含量不少于0.3％。银杏内酯C的含量不少于1.0％。
本发明的银杏叶提取液/物的各项成分纯度更高，由此降低了将来由于中药成分复杂所带来的问题，由其制备得到的制剂质量完全满足有关规定，可以更好的为患者所使用。
本发明也提供了含有银杏叶提取液/物与药用辅料的制剂，其特征在于，所述的银杏叶提取液/物通过上述制备方法制得，药用辅料包括葡萄糖、乙醇(95％)，甘露醇，右旋糖酐，乳糖，氯化钠，聚山梨酯80等。所述制剂可以是注射液、冻干粉针剂、输液剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、片剂等。当该制剂为注射液时，每1ml该注射液含有总黄酮醇苷0.76～1.25mg，银杏内酯A 0.07～0.3mg，银杏内酯B 0.01～0.15mg，银杏内酯C 0.02～0.2mg
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1银杏叶提取液的制备
取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入5倍量的50％的乙醇浸泡12h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.6，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.2，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.5，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味。加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液。
经测定，该提取液中总黄酮醇苷的含量为1.0mg/ml，银杏内酯A的含量为0.14mg/ml，银杏内B的含量为0.06mg/ml，银杏内酯C的含量为0.07mg/ml。
实施例2银杏叶提取液的制备
取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入8倍量的70％的乙醇浸泡18h，回流提取3h；第二次加入6倍量70％乙醇回流提取2h；第三次加入5倍量70％乙醇回流提取1h；合并提取液，调节pH值至7.8，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值至4.3，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的4.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值至7.6，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味。加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液。
经测定，该提取液中总黄酮醇苷的含量为6.2mg/ml，银杏内酯A的含量为0.45mg/ml，银杏内B的含量为0.20mg/ml，银杏内酯C的含量为0.30mg/ml。
实施例3银杏叶提取液的制备
取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入10倍量的80％的乙醇浸泡24h，回流提取3h；第二次加入8倍量80％乙醇回流提取2h；第三次加入6倍量80％乙醇回流提取1h；第四次加入4倍量80％乙醇回流提取1h；合并提取液，调节pH值至7.5，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值至4.4，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的4.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值至7.7，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味。加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液。
经测定，该提取液中总黄酮醇苷的含量为5.12mg/ml，银杏内酯A的含量为0.8mg/ml，银杏内B的含量为0.5mg/ml，银杏内酯C的含量为0.6mg/ml。
实施例4银杏叶提取物的制备
取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入6倍量的60％的乙醇浸泡30h，回流提取2h；第二次加入3倍量60％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.5，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.3，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.5，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
经测定，以干燥品重量计，该提取物中含总黄酮醇苷为20％，含银杏内酯A为1.7％、含银杏内酯B为0.3％、含银杏内酯C为1.0％。
实施例5银杏叶提取物的制备
取银杏叶适量，粉碎至1cm的小块，加入10倍量的75％的乙醇浸泡24h，回流提取3h；第二次加入7倍量75％乙醇回流提取2h；第三次加入6倍量75％乙醇回流提取1h；合并提取液，调节pH值至7.7，过滤，回收乙醇，加水稀释至生药5倍量体积，调节pH值至4.5，过滤，加于已处理好的HPD450大孔吸附树脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，周树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱。收集洗脱液，经0.22μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇，并浓缩至4g(生药)/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值至7.5，静置24h。上清液经0.22μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.22μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
经测定，以干燥品重量计，该提取物中含总黄酮醇苷为36％，含银杏内酯A为8.2％、含银杏内酯B为4.0％、含银杏内酯C为5.3％。
实施例6银杏叶提取液的测定
取实施例1所制备的银杏叶提取液，用0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水稀释，用氢氧化钠溶液调pH5.0，加入0.3％药用炭，搅拌均匀，煮沸15分钟，调pH6.0，粗滤脱炭，0.22μm微孔滤膜精滤后，灌装，105℃30分钟高压灭菌，得规格为2ml/支的银杏叶注射液。
经测定，该注射液中含总黄酮醇苷0.88mg/ml，含银杏内酯A0.12mg/ml，银杏内酯B 0.05mg/ml，银杏内酯C 0.06mg/ml。
实施例7银杏叶提取液的测定
取实施例3所制备的银杏叶提取液，用0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水稀释，用氢氧化钠溶液调pH5.5，加入0.3％药用炭，搅拌均匀，煮沸15分钟，调pH6.5，粗滤脱炭，0.22μm微孔滤膜精滤后，灌装，105℃30分钟高压灭菌，得规格为2ml/支的银杏叶注射液。
经测定，该注射液中含总黄酮醇苷1.18mg/ml，含银杏内酯A0.22mg/ml，银杏内酯B 0.12mg/ml，银杏内酯C 0.15mg/ml。
实施例8银杏叶提取物的测定
取实施例5所制备的银杏叶提取物，用注射用水溶解，用0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水稀释，用氢氧化钠溶液调pH5.6，加入0.3％药用炭，搅拌均匀，煮沸15分钟，调pH6.4，粗滤脱炭，0.22μm微孔滤膜精滤后，灌装，105℃30分钟高压灭菌，得规格为2ml/支的银杏叶注射液。
经测定，该注射液中含总黄酮醇苷1.25mg/ml，含银杏内酯A0.3mg/ml，银杏内酯B 0.15mg/ml，银杏内酯C 0.2mg/ml。
而目前的生产工艺制得的舒血宁注射液中各成分的含量为：总黄酮醇苷0.84mg/ml，银杏内酯A 0.07mg/ml，银杏内酯B 0.03mg/ml，银杏内酯C 0.04mg/ml。
由此可以看出，本发明所述提取方法制得的银杏叶提取液/物中，各项成分纯度更高，可降低将来由于中药成分复杂所带来的问题。由其制得的制剂，含量高，疗效好，更安全。
Claims (9)
1、一种银杏叶提取液/物的制备方法，包括如下步骤：
1)取银杏叶粉碎至小块，加入银杏叶质量2～16倍的50％～85％的乙醇浸泡12小时以上，加热回流提取至少1次，每次1～3小时，过滤，合并提取液，调节pH值7.0～9.0，过滤，回收乙醇；
2)滤液加水稀释至生药4～6倍量体积，调节pH值3.0～6.5，过滤，加于已处理好的HPD450、D101或DM130型的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的2～4％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％～30％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的60～80％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0-1.2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，经微孔滤膜精滤后，回收乙醇；
3)滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值，静置24h，上清液经微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
2、如权利要求1所述的银杏叶提取液/物制备方法，其特征在于，所述步骤1)为取银杏叶适量，粉碎至0.5～1.5cm的小块，加入5倍量的50％的乙醇浸泡24h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，调节pH值7.5～8.0，过滤，回收乙醇。
3、如权利要求1所述的银杏叶提取液/物制备方法，其特征在于，所述步骤2)为滤液加纯化水稀释至生药5倍量体积，调节pH值4.0～4.5，过滤，加于已处理好的HPD450、D101或DM130型的大孔树脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用树脂1倍量纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的3.0％的醋酸钠溶液以5.0～6.0BV/h的流速冲洗树脂柱，继续用纯化水以6.0～7.5BV/h的流速冲洗树脂柱至中性，再用树脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速冲洗树脂柱，最后用树脂5倍量的70％乙醇加入树脂柱内浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤后，回收乙醇。
4、如权利要求1-3任一项所述的银杏叶提取液/物制备方法，其特征在于，步骤3)为滤液浓缩至4g生药/ml，加入高浓度乙醇使含醇量达到85％，用10％NaOH调pH值7.3～7.8，静置24h，上清液经0.2～0.3μm的微孔滤膜精滤，沉淀用离心机离心后经0.2～0.3μm的微孔滤膜过滤，回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药等量，灌于适宜的容器中，110℃30分钟高压灭菌，冷冻，冷藏，获得银杏叶提取液；或回收乙醇后减压干燥得银杏叶提取物。
5、根据权利要求1～4任意一项方法制备的银杏叶提取液，其特征在于，该银杏叶提取液中总黄酮醇苷的含量为1.0～8.0mg/ml，银杏内酯A的含量为0.07～0.8mg/ml，银杏内酯B的含量为0.03～0.5mg/ml，银杏内酯C的含量为0.04～0.6mg/ml。
6、根据权利要求1～4任意一项方法制备的银杏叶提取物，其特征在于，以干燥品重量计，该银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量为20～36％，银杏内酯A的含量不少于1.7％。银杏内酯B的含量不少于0.3％。银杏内酯C的含量不少于1.0％。
7、一种含有银杏叶提取液/物制剂，其特征在于，所述的银杏叶提取液/物通过权利要求1-4任一项制备方法制得，药用辅料包括葡萄糖、95％乙醇、甘露醇、右旋糖酐、乳糖、氯化钠、聚山梨酯80。
8、根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，该制剂为注射液、冻干粉针剂、输液剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂或片剂。
9、根据权利要求7或8所述的制剂，其特征在于，该制剂为注射液，每1ml该注射液含有总黄酮醇苷0.76～1.25mg，银杏内酯A0.07～0.3mg，银杏内酯B 0.01～0.15mg，银杏内酯C 0.02～0.2mg。
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