CN100444721C - 采用低温处理脱除菊花类病毒的方法 - Google Patents
采用低温处理脱除菊花类病毒的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100444721C CN100444721C CNB2006100483445A CN200610048344A CN100444721C CN 100444721 C CN100444721 C CN 100444721C CN B2006100483445 A CNB2006100483445 A CN B2006100483445A CN 200610048344 A CN200610048344 A CN 200610048344A CN 100444721 C CN100444721 C CN 100444721C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chrysanthemum
- bud
- low temperature
- viroids
- root
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明属于植物的提纯复壮和繁育，具体地说是采用低温处理脱除菊花类病毒的方法。包括低温处理、消毒处理、切取茎尖培养、类病毒检测、脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁等工艺步骤。本发明解决了现有技术存在的热处理加茎尖培养脱除植物病毒的方法不能脱除菊花类病毒、易导致植株干枯、死亡的问题，能够有效地脱除菊花类病毒，其工艺方法简单、易行，且效果较好的特点。该方法对于脱除其他植物类病毒研究具有一定的指导和参考价值。
Description
技术领域
本发明属于植物的提纯复壮和繁育，具体地说是采用低温处理脱除菊花类病毒的方法。
背景技术
菊花类病毒为支原体病毒，该病毒高温发作，染病菊花植株矮化、叶片局部褪绿或枯斑，病毒感染严重时叶片干枯、整株死亡，发病率达20-30％。热处理加茎尖培养是目前脱除植物病毒最常用的方法，效果较好，但该方法在菊花脱毒方面存在很大的局限性，即一是不能脱除菊花类病毒，二是热处理易导致植株干枯、死亡。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用低温处理脱除菊花类病毒的方法。
本发明的整体技术构思是：
采用低温处理脱除菊花类病毒的方法，包括如下步骤：
(1)低温处理：将菊花进行透光低温培养，温度为-2℃-3℃或4℃-6℃，取菊花刚萌动的芽点、根蘖芽或顶芽；
(2)消毒处理：将步骤(1)中获得的芽点、根蘖芽或顶芽洗净后，消毒；
(3)切取茎尖培养；
(4)类病毒检测：采用RT-PCR方法检测待检瓶苗，获得脱除菊花类病毒的菊花无性系。
(5)脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁。
本发明中各工艺步骤的工艺条件分别为：
步骤(1)中的低温处理是在自然条件下越冬的菊花根茬上覆土3-5厘米，其上覆透光保温遮盖物，当其根部地温在-2℃-3℃范围时，取菊花刚萌动的芽点或根蘖芽。
因为菊花是宿根类多年生草本植物，在华北冬季地上植株部分死亡，翌年根部萌生新芽生长，根据菊花宿根的特性，利用冬季自然低温进行处理。处理的时间因地区的不同而异，在华北地区为12月-2月份。
步骤(1)中的低温处理还可以选用人工低温处理，即选生长健壮的菊花试管瓶苗置于透光的低温培养箱中，在温度为4℃-6℃条件下，进行90-120天的低温冷处理，然后取顶芽。
步骤(2)中的消毒处理是将步骤(1)获得的芽点、根蘖芽或顶芽，用肥皂水洗净，在超净工作台上依次用70％酒精表面灭菌10-20秒，0.1％升汞溶液灭菌1～3分钟，再用无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸净芽体表面水分。
步骤(3)中切取茎尖培养是切取步骤(2)中所获得的芽点、根蘖芽或顶芽的茎尖，接种于1/3MS+6-BA1.0mg/kg+IBA0.02mg/kg+蔗糖3％+琼脂5g/L组成的培养基上进行培养，获得待检菊花组培无性系，培养基的pH为5.6-5.8，茎尖大小为0.2～0.4cm。其中6-BA为6-苄基氨基嘌呤，IBA为吲哚丁酸(下同)。
步骤(5)中脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁是将经检测脱病毒的菊花源源种，进行分化增殖培养。其中脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁中分化培养基组成为MS+6-BA1.0mg/kg+NAA0.2mg/kg+蔗糖3％+琼脂5％，其pH5.6-5.8，在分化培养基上25～30天继代一次；待菊花瓶苗长到3～4cm时进行生根培养，生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/kg+蔗糖20g/L，其pH5.6-5.8，培养条件：温度25-28℃，光照2000-3000Lx；生根后炼苗20-30天移栽，获得脱毒菊花种苗。其中NAA为萘乙酸(下同)。
本发明所取得的技术进步在于：
采用低温对菊花进行处理，结合茎尖培养，能够有效地脱除菊花类病毒，其工艺方法简单、易行，且效果较好。且对于脱除其他植物类病毒研究具有一定的指导和参考价值。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例1
采用低温处理脱除菊花类病毒的方法，包括如下步骤：
(1)低温处理：在自然条件下越冬的菊花根茬上覆土3-5厘米，其上覆塑料小拱棚，当其根部地温在-2℃-3℃范围时，取菊花刚萌动的芽点或根蘖芽。；
(2)消毒处理：将步骤(1)获得的芽点、根蘖芽或顶芽，用肥皂水洗净，在超净工作台上依次用70％酒精表面灭菌10-20秒，0.1％升汞溶液灭菌1～3分钟，再用无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸净芽体表面水分。；
(3)切取茎尖培养：切取步骤(2)中所获得的芽点、根蘖芽或顶芽的茎尖，接种于1/3MS+6-BA1.0mg/kg+IBA0.02mg/kg+蔗糖3％+琼脂5g/L组成的培养基上进行培养，获得待检菊花组培无性系，培养基的pH为5.6-5.8，茎尖大小为0.2～0.4cm。
(4)类病毒检测：采用RT-PCR方法检测待检瓶苗，获得脱除菊花类病毒的菊花无性系。
(5)脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁：将步骤(5)中脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁是将经检测脱病毒的菊花源源种，进行分化增殖培养。其中分化培养基组成为MS+6-BA1.0mg/kg+NAA0.2mg/kg+蔗糖3％+琼脂5％，其pH5.6-5.8，在分化培养基上25～30天继代一次；待菊花瓶苗长到3～4cm时进行生根培养，生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/kg+蔗糖20g/L，其pH5.6-5.8，培养条件：温度25-28℃，光照2000-3000Lx；生根后炼苗20-30天移栽，获得脱毒菊花种苗。
实施例2
本实施例中的步骤(1)低温处理是选生长健壮的菊花试管瓶苗置于透光的低温培养箱中，在温度为4℃-6℃条件下，进行90-120天的低温冷处理，然后取顶芽。其余步骤同实施例1。
Claims (5)
1、采用低温处理脱除菊花类病毒的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
(1)低温处理：其中在自然条件下越冬的菊花根茬上覆土3-5厘米，其上覆透光保温遮盖物，当其根部地温在-2℃-3℃范围时，取菊花刚萌动的芽点或根蘖芽；或者选生长健壮的菊花试管瓶苗置于透光的低温培养箱中，在温度为4℃-6℃条件下，进行90-120天的低温冷处理，然后取顶芽；
(2)消毒处理：将步骤(1)中获得的芽点、根蘖芽或顶芽洗净后，消毒；
(3)切取茎尖培养；
(4)类病毒检测：采用RT-PCR方法检测待检瓶苗，获得脱除菊花类病毒的菊花无性系；
(5)脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁。
2、根据权利要求1所述的采用低温处理脱除菊花类病毒的方法，其特征在于所述的步骤(2)中的消毒处理是将步骤(1)获得的芽点、根蘖芽或顶芽，用肥皂水洗净，在超净工作台上依次用70％酒精表面灭菌10-20秒，0.1％升汞溶液灭菌1～3分钟，再用无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸净芽体表面水分。
3、根据权利要求1所述的采用低温处理脱除菊花类病毒的方法，其特征在于所述的步骤(3)中切取茎尖培养是切取步骤(2)中所获得的芽点、根蘖芽或顶芽的茎尖，接种于1/3MS+6-BA1.0mg/kg+IBA0.02mg/kg+蔗糖3％+琼脂5g/L组成的培养基上进行培养，获得待检菊花组培无性系，培养基的pH为5.6-5.8，茎尖大小为0.2～0.4cm。
4、根据权利要求1所述的采用低温处理脱除菊花类病毒的方法，其特征在于所述的步骤(5)中脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁是将经检测脱病毒的菊花源源种，进行分化增殖培养。
5、根据权利要求1所述的采用低温处理脱除菊花类病毒的方法，其特征在于所述的步骤(5)中脱毒无性系菊花种苗的组培扩繁中分化培养基组成为MS+6-BA1.0mg/kg+NAA0.2mg/kg+蔗糖3％+琼脂5％，其pH5.6-5.8，在分化培养基上25～30天继代一次；待菊花瓶苗长到3～4cm时进行生根培养，生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/kg+蔗糖20g/L，其pH5.6-5.8，培养条件：温度25-28℃，光照2000-3000Lx；生根后炼苗20-30天移栽，获得脱毒菊花种苗。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006100483445A CN100444721C (zh) | 2006-09-26 | 2006-09-26 | 采用低温处理脱除菊花类病毒的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006100483445A CN100444721C (zh) | 2006-09-26 | 2006-09-26 | 采用低温处理脱除菊花类病毒的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1926965A CN1926965A (zh) | 2007-03-14 |
| CN100444721C true CN100444721C (zh) | 2008-12-24 |
Family
ID=37857221
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2006100483445A Expired - Fee Related CN100444721C (zh) | 2006-09-26 | 2006-09-26 | 采用低温处理脱除菊花类病毒的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100444721C (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105594590B (zh) * | 2016-02-18 | 2018-01-30 | 广西南宁市葛根源原生草药种植农民专业合作社 | 一种玫瑰多倍体品种的培育方法 |
| CN111528092B (zh) * | 2020-05-26 | 2021-12-14 | 浙江海丰生物科技股份有限公司 | 一种菊花脱毒苗的培养方法 |
| CN114680011B (zh) * | 2022-03-02 | 2023-03-31 | 浙江海丰生物科技股份有限公司 | 一种基于小批量选择的菊花品种复壮方法 |
-
2006
- 2006-09-26 CN CNB2006100483445A patent/CN100444721C/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 菊花的组织培养、脱毒与快繁技术研究. 刘鹏等.内蒙古民族大学学报(自然科学版)，第20卷第4期. 2005 |
| 菊花的组织培养、脱毒与快繁技术研究. 刘鹏等.内蒙古民族大学学报(自然科学版)，第20卷第4期. 2005 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1926965A (zh) | 2007-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101361458B (zh) | 一种甘蔗健康种苗高效繁育方法 | |
| CN102090340B (zh) | 一种糖蔗茎尖组培脱毒快繁的方法 | |
| CN105104207B (zh) | 一种通过花药培养获得甜叶菊再生植株的方法 | |
| CN105145359B (zh) | 一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法 | |
| CN111758559B (zh) | 一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法 | |
| CN103704130B (zh) | 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法 | |
| CN103283595B (zh) | 一种草莓茎尖组织初代培养方法 | |
| CN101156552A (zh) | 一种东方百合组织培养脱毒的方法 | |
| CN107494271A (zh) | 一种果蔗脱毒组培快繁的方法 | |
| CN103651124B (zh) | 一种生姜再生植株的诱导方法 | |
| CN101803571B (zh) | 一种水半夏的组培快繁法 | |
| CN102487829A (zh) | 一种粉用型荸荠综合脱毒快繁的方法 | |
| CN100444721C (zh) | 采用低温处理脱除菊花类病毒的方法 | |
| CN105145358B (zh) | 一种黄藤组织培养快繁方法 | |
| CN104823849A (zh) | 一种木薯脱毒苗快速扩繁方法 | |
| CN105284627B (zh) | 一种富士苹果组培苗锈果类病毒脱除方法 | |
| KR101246135B1 (ko) | 장미속 식물 종자의 발아 증진 방법 | |
| CN112167060B (zh) | 一种背蛇生的人工高效繁殖方法 | |
| CN113100069B (zh) | 一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法 | |
| CN106134999A (zh) | 京薯6号组培脱毒培育的方法 | |
| CN110558230A (zh) | 一种脱毒太子参块根的组培方法 | |
| CN104082149B (zh) | 脱除掌叶半夏病毒的方法 | |
| CN107667608A (zh) | 一种小叶女贞种子脱毒方法 | |
| CN115316275B (zh) | 一种适用于甘蔗健康种苗的培育方法 | |
| CN116369207B (zh) | 水茄组培快繁方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20081224 Termination date: 20091026 |