CN100420445C - 一种用于恶性胸腹腔积液的脂肪乳组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于恶性胸腹腔积液的脂肪乳剂的组合物及其制备方法，它是采用纯天然抗癌药物揽香烯和具有多种生物活性的人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖和枸杞多糖中的至少一种多糖为原料制成，本发明的组合物可明显提高药物的溶解度，增加药物稳定性，在有效的清除和杀伤癌细胞的同时，提高了机体的免疫调节功能，为机体提供高能量营养；使用时对静脉的刺激性物疼痛程度小。改善了患者的生活质量，减轻了患者的痛苦。

Description

一种用于恶性胸腹腔积液的脂肪乳组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种榄香烯与植物多糖的脂肪乳剂组合物及其制备方法，该组合物可用于治疗癌性胸腹腔积液。

发明背景

恶性胸、腹腔积液是晚期恶性肿瘤的常见并发症，临床治疗颇为棘手。单行胸腹腔穿刺抽水，由于渗出液含有蛋白，积液往往很难排尽，即使腹水完全抽尽，也不能防止液体再积聚。目前，常规全身化疗则胸腹腔内局部药物浓度较低，难以杀灭肿瘤细胞，胸腹腔直接注入化疗药物化疗是治疗晚期恶性肿瘤合并胸、腹腔积液的主要方法，但部分恶性胸水、腹水患者常因腔内化疗失败或不能耐受化疗而使病情恶化甚至导致死亡。

癌性胸、腹水主要由于肿瘤侵袭或转移至胸腹膜引发，性质一般为血性或深黄色渗出液，常可在积液中找到癌细胞，目前临床常用的治疗方法包括：(1)全身性化疗治疗原发灶；(2)对症支持治疗；(3)定期抽除积液(2～3次/每周)，腔内注入化疗药物(cBp、DDP、5一Fu、MMC、Vp一16)或注人生物因子或免疫活性细胞(IL-2、TNF、OKT432、胞必佳、LAK、TIL)。通过上述治疗，仍有一部分癌性胸腹水不能消除或消退时间偏长，后期易产生积液的分隔包裹，更为严重的是化疗药物对正常组织细胞、脏器的生理功能有一定程度的破坏作用，并抑制机体的免疫功能和骨髓造血功能，既影响患者的生存质量，又为以后复发留下隐患。应用胸膜粘连剂如四环素粉或滑石粉，虽可提高胸腔粘结闭塞，但该法对转移癌无治疗作用。有效的局部热疗可通过破坏小血管结构与功能，影响癌细胞DNA的合成与修复、抑制细胞蛋白的合成与功能、改变细胞膜的结构与通透性、改变细胞内pH值、诱导细胞凋亡等机理促进细胞死亡，缺点是有效治疗范围太小，起效缓慢，单纯热疗很难完全杀灭肿瘤细胞。

由此可以看出，要提高目前临床治疗恶性胸腹水的疗效，首先要增强抗肿瘤效应，提高机体免疫功能，其次就是减少其对正常组织细胞、脏器，骨髓造血等的毒副作用。

榄香烯是80年代先后在温莪术挥发油中分离出的物质，已经鉴定出β-、γ-、δ-榄香烯等10多种化合物，其中β-榄香烯含量最多，也最受重视。β-榄香烯(β-elemene)属于不含氧的倍半烯烃类，是温莪术挥发油中分离出来的油状物单体。60年代我国已有莪术体外抗肿瘤作用的报道。70年代国内的有关肿瘤防治部门首次运用获术治疗宫颈癌并获得初步成效。其体内分布以肺、脾、淋巴等组织为主，可部分通过血脑屏障。长期毒性试验发现该药对狗和大鼠的血象及肝肾功能无显著影响。β-榄香烯在肿瘤治疗领域应用范围较广，人们发现在肺癌、肝癌、消化道恶性肿瘤、头颈部肿瘤以及恶性胸腹积液的临床治疗中，β-榄香烯具有肯定的疗效。学者研究发现：榄香烯不仅能有效抑制小鼠肿瘤的生长，同时能增强小鼠NK细胞、腹腔巨噬细胞对移植性肿瘤的杀伤作用。在研究中发现，β-榄香烯对小鼠的Lewis肺癌皮下移植瘤有明显的抑制作用，其抑瘤率在30％以上，且与细胞毒药物替加氟的抑瘤率差异无显著性，说明β-榄香烯对肺癌有明显的治疗作用。进一步研究发现：β-榄香烯可阻滞肿瘤细胞从s期进入G2/M期，抑制其增殖并能诱导肿瘤细胞凋亡。榄香烯诱导肿瘤细胞凋亡的机理与下调稠亡抑制基因bel-2的表达有关。有报道榄香烯治疗恶性胸、腹腔积液，不仅具有使胸膜增厚，减少胸水分泌的作用，并能直接与癌细胞接触，直接杀灭转移至胸腔的癌细胞，使癌性渗液减少。榄香烯无骨髓抑制，仅个别患者出现发热或少数胸痛情况，易于为患者接受.但是有关榄香烯提高机体免疫功能，对正常细胞和组织的保护作用未见有相关的报道，因为癌性胸、腹水患者多处于肿瘤晚期，病变范围较广，体质较差，所以这些问题也限制了榄香烯的临床应用。

人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖和枸杞多糖分别为中药人参、黄芪、刺五加和枸杞的活性成分，从药理分析和临床应用情况看，它们对肿瘤细胞有不同程度的杀伤和抑制作用，人参多糖能激活吞噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞，促进抗体形成和补体激活，其细胞毒因子主要包括肿瘤坏死因子和干扰素-γ。肿瘤坏死因子是由激活的巨噬细胞/单核细胞系统产生的多功能蛋白分子，在机体内起着重要的生理作用。干扰素是细胞在受到刺激物作用后合成并释放出的蛋白性淋巴因子。其作用为：直接抗病毒作用；增强主要组织相容性抗原和肿瘤相关抗原的表达；增强自然杀伤细胞(NK)的细胞毒作用；增强抗体依赖性细胞的细胞毒作用；直接的抗细胞增殖作用和抗血管生成作用。同时多项实验表明，人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖和枸杞多糖既能高效抑杀肿瘤细胞，能显著提高机体整体免疫功能，具有免疫促进作用，主要通过刺激机体各种免疫活性细胞的成熟、分化和繁殖，使机体免疫系统恢复平衡，发挥机体自身的抵抗力去消除吞噬癌细胞。人参多糖对化疗和放疗还有增效减毒作用，升白作用明显，体现了我国传统中药之精髓——扶正固本作用.人参多糖配合化疗治疗肺癌十分有效，尤其在降低化疗毒性及改善病人生存质量方面，其作用是肯定的。人参多糖胸腔内用药无局部不良反应，全身不良反应轻微，患者易于接受，提高了生活质量，我们认为人参多糖对胸腔积液的作用是综合性的，既有肿瘤坏死因子的作用，亦有干扰素的作用。临床看到，人参多糖不但对胸腔积液有效，同时增强了T淋巴细胞及NK细胞活性，提高了机体的免疫调节功能，而有利于抗肿瘤作用的发挥。有学者研究表明药物剂量与治疗效果明显有关，也与胸腔积液量的多少有关，故主张尽量将胸腔积液放净后用药。从疗效看，人参多糖对肺癌、乳腺癌及胃癌合并的胸腔积液有效，尤其对胃癌所致的胸腔积液的疗效让人满意。

100ml∶10g(大豆油)∶1.2g(卵磷脂)所形成的脂肪乳是静脉营养的组成部分之一，为肌体提供能量和必须的脂肪酸，用于胃肠外营养补充能量及必须脂肪酸。卵磷脂可辅助治疗动脉粥样硬化，脂肪肝，以及小儿湿疹，精神衰弱症。在药用辅料中作增溶剂、乳化剂及油脂类的抗氧剂等。

因此，本发明人从辨证治疗角度出发，开发了以榄香烯为主的治疗恶性胸腹腔积液的中西复方制剂，榄香烯与植物多糖的联合应用，一方面增强了抗肿瘤的效应；另一方面增强免疫功能和对自身组织细胞的保护作用，降低了毒副作用，具有相互协同作用，使临床疗效更加提高。此外脂肪乳作为榄香烯与植物多糖的溶媒，可以为机体提供高能量营养，减小使用时对静脉的刺激性疼痛程度，减轻了患者的痛苦。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种既能抗肿瘤，又能增强免疫功能以及对自身组织细胞具有保护作用和为机体提供高能量营养，并且给药安全、使用方便简捷的可用于恶性胸腹腔积液的脂肪乳剂组合物.

本发明的药物组合物，含有榄香烯和至少一种植物多糖，以及适合制成脂肪乳剂的药用材料。

本发明的组合物，其中榄香烯是从莪术挥发油中分离出来的油状物，为β-、γ-、δ-榄香烯的混合物，以β-榄香烯计算，混合物中含β-、γ-、δ-榄香烯之和不得少于85.0％。榄香烯已经列入中国药典，可以通过现有文献制备，也可以从市场上买到，属于现有技术。

其中植物多糖是从中药植物药材中提取的多糖类成分，选自人参多糖、黄芪多糖、灵芝多糖、香菇多糖、刺五加多糖和枸杞多糖等，但不限于这些多糖。所述植物多糖有些已经列入中国药典或药品标准，可以通过现有文献制备，也可以从市场上买到，属于现有技术。

所述适合制成脂肪乳剂的药用材料，是指任何可以用于制备脂肪乳剂的材料如植物油，磷脂，甘油等，所述植物油如大豆油，花生油，蓖麻油，橄榄油，玉米油等都可以用，所述磷脂如卵磷脂等。

优选的本发明的组合物配方为：

榄香烯      5-20重量份

植物多糖    0.05-5重量份

植物油      200-800重量份

磷脂        12-48重量份

甘油        22.5-90重量份

其中优选植物多糖为人参多糖、黄芪多糖、刺五加多糖或枸杞多糖，优选的植物油为大豆油，优选的磷脂为卵磷脂。

由于不同植物多糖活性不同，在使用量上根据不同的多糖适当调整，不同的多糖组合物优选的配方为：

榄香烯      5-20重量份

人参多糖    0.1-0.5重量份

大豆油      200-800重量份

卵磷脂      12-48重量份

甘油        22.5-90重量份

或

榄香烯      5-20重量份

黄芪多糖    1-4重量份

大豆油    200-800重量份

卵磷脂    12-48重量份

甘油      22.5-90重量份

或

榄香烯       5-20重量份

刺五加多糖   0.05-0.2重量份

大豆油       200-800重量份

卵磷脂       12-48重量份

甘油         22.5-90重量份

或

榄香烯      5-20重量份

枸杞多糖    0.5-2重量份

大豆油      200-800重量份

卵磷脂      12-48重量份

甘油        22.5-90重量份

以上重量配比的配方，可制备脂肪乳1000-3000ml。在制备成制剂时，根据需要还应加入适量的水。

本发明最优选的配方列在本发明实施例中。

本发明的另一目的是提供上述可用于恶性胸腹腔积液的脂肪乳剂组合物的制备方法。本发明的制备方法可以根据制剂学常规技术制备，也可以根据本发明实施例中的方法制备。

以下通过实验数据说明本发明的有益效果。

体外药物敏感试验

剖腹术或穿刺无菌采集癌性胸腹水(肺腺癌6例、小细胞性肺癌8例、肾癌胸膜转移5例、乳癌4例、卵巢癌24例、腹膜癌17例)，并用肝素抗凝(10μ/ml胸腹水)500×g离心10分钟，弃上清液，加内含10％小牛血清1640培养液10ml制成细胞悬液。将10ml比重为1.077(100％)Ficoll-Hypaque置于离心管最低层，其上加10ml比重为1.055(75％)Ficoll-Hypaque，10ml胞悬液置于最上层，经不连续密度梯度离心(2000×g20分钟)，收集75％Ficoll-Hypaque界面上富含肿瘤细胞悬液，用Hanks液洗涤2次，在含10％小牛血清1640培养液中制成肿瘤细胞悬液，调整细胞浓度为5×10⁵个/ml，每孔加细胞悬液200ml.实验包括试剂对照、肿瘤细胞阴性对照、加入不同抗癌药物实验组。置37℃、7％CO2湿箱中孵育68小时后用MTT法检测各孔光密度值，并计算出肿瘤细胞存活率(TCSR)(TCSR＝实验组OD值÷肿瘤细胞阴性对照OD值×100％)及判断出各种抗癌药物的敏感性(TCSR＜30％为高度敏感药、30％-50％为中度敏感、＞50％为不敏感药)。结果见表1～表7.

表1癌性胸腹水药敏试验重复性试验

标本名称	n	OD  X±S	RSD％
				肺腺癌	5	0.6854±0.0254	3.70
小细胞性肺癌	5	0.8542±0.0168	1.97
				肾癌胸膜转移	5	0.7986±0.0311	3.89
乳癌	5	0.6826±0.0257	3.77
				卵巢癌	5	0.7113±0.0177	2.49
腹膜癌	5	0.8425±0.0232	2.75

表2肺腺癌胸水药敏试验试验结果

药物(μg/ml)	卡铂(50)	表阿霉素(10)	人参多糖(1)	榄香烯(50)	实施例1的药物榄香烯(50)+人参多糖(1)
						培养板TCSR(％)	27.6	23.9	26.3	18.7	11.2

表3小细胞性肺癌胸水药敏试验结果

药物(μg/ml)	卡铂(50)	表阿霉素(10)	人参多糖(1)	榄香烯(50)	实施例1的药物榄香烯(50)+人参多糖(1)
						培养板TCSR(％)	25.9	21.3	25.1	16.4	12.3

表4乳癌胸水药敏试验结果

药物(μg/ml)	卡铂(50)	表阿霉素(10)	人参多糖(1)	榄香烯(50)	实施例1的药物榄香烯(50)+人参多糖(1)
						培养板TCSR(％)	32.1	27.1	25.4	14.6	10.9

表5肾癌胸膜转移胸水药敏试验结果

药物(μg/ml)

卡铂

表阿霉素

人参多糖

榄香烯

实施例1的药物

	(50)	(10)	(1)	(50)	榄香烯(50)+人参多糖(1)
						培养板TCSR(％)	25.3	23.2	24.2	19.4	12.7

表6卵巢癌腹水药敏试验结果

药物(μg/ml)	卡铂(50)	表阿霉素(10)	人参多糖(1)	榄香烯(50)	实施例1的药物榄香烯(50)+人参多糖(1)
						培养板TCSR(％)	28.6	27.0	25.0	18.6	13.4

表7腹膜癌腹水药敏试验结果

药物(μg/ml)	卡铂(50)	表阿霉素(10)	人参多糖(1)	榄香烯(50)	实施例1的药物榄香烯(50)+人参多糖(1)
						培养板TCSR(％)	29.1	22.5	25.6	21.4	12.8

试验结果表明，本品对各种癌性胸腹水都有显著的抑制作用，肿瘤细胞存活率在10.9％～13.4％之间，比单独用卡铂、表阿霉素、榄香烯或人参多糖对癌性胸腹水的抑制作用更强。

体内抗肿瘤作用试验

按常规方法接种Hca-F₂₅/CL-16A₃腹水型肝癌细胞5×10₆个于Bal B/c近交纯系小鼠腹股沟皮下，接种后随机分4组，每组10只，接种24小时后，第一组给予人参多糖(剂量：1mg/kg)；第二组给予榄香烯(剂量：50mg/kg)；第三组给予实施例1的组合物(剂量：人参多糖1mg/kg、榄香烯50mg/kg)；第四组腹腔注射生理盐水0.2ml作为空白对照组，连续给药20天，末次给药24小时后，颈椎脱臼处死小鼠，取脾，剥离出瘤块称重，计算肿瘤生长抑制率，结果见表8。

表8受试药物对小鼠Hca-F₂₅/CL-16A₃实体瘤生长的抑制作用

组别	平均瘤重(g)	抑制率(％)	p值
				1	1.72±0.68	23.21	P＞0.05
2	1.47±0.71	34.38	P＜0.05
				3	1.02±0.35	54.46	P＜0.01
4	2.24±0.57

本发明将榄香烯与植物多糖制备成脂肪乳剂，一方面增强了抗肿瘤的效应；另一方面增强免疫功能和对自身组织细胞的保护作用，降低了毒副作用，具有相互协同作用。

具体实施方式

为了更好的阐释本发明，给出以下实施例。需要指出的是，虽然本发明给出了下述实施例，但这些实施例不应被视为是对本发明的限制。

实施例1复方榄香烯人参多糖乳注射液的制备

榄香烯       10.00g

人参多糖     0.20g

大豆油       400.00g

卵磷脂       24.00g

甘油         45.00g

注射用水     加至2000ml

                                 

准确称取卵磷脂，加50℃的注射用水适量，搅拌分散；称取人参多糖和甘油，于适量注射用水中溶解后，同搅拌分散后的卵磷脂一并转移至用50℃水浴保温的高速搅拌器内，在氮气流下充分搅拌作为水相；精密称取榄香烯，溶解于大豆油中、作为油相。在通氮气、高速搅拌条件下，将油相缓慢加人到50℃水浴保温的水相中，加完后继续搅拌，即得均匀的初乳，并用注射用水调节体积为2000ml。将初乳迅速转移至高压乳匀机中，调节乳匀压力为18000psi，待压力稳定后，收集乳匀3次后的乳液，将乳液冷却至室温.在通氮气的条件下，用2mol/L NaOH溶液将其pH值调至8.5。在氮气流下将乳液分装于洁净输液瓶中，密封，置于高压灭菌器内，缓慢升温至115℃，维持30min，即得。

实施例2复方榄香烯黄芪多糖乳注射液的制备

榄香烯      10.00g

黄芪多糖    2.00g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                               

准确称取卵磷脂，加50℃的注射用水适量，搅拌分散；称取黄芪多糖和甘油，于适量注射用水中溶解后，同搅拌分散后的卵磷脂一并转移至用50℃水浴保温的高速搅拌器内，在氮气流下充分搅拌作为水相；精密称取榄香烯，溶解于大豆油中、作为油相。在通氮气、高速搅拌条件下，将油相缓慢加入到50℃水浴保温的水相中，加完后继续搅拌，即得均匀的初乳，并用注射用水调节体积为2000ml.(6)将初乳迅速转移至高压乳匀机中，调节乳匀压力为18000psi，待压力稳定后，收集乳匀3次后的乳液，将乳液冷却至室温。在通氮气的条件下，用2mol/L NaOH溶液将其pH值调至8.5。在氮气流下将乳液分装于洁净输液瓶中，密封，置于高压灭菌器内，缓慢升温至115℃，维持30min，即得。

实施例3复方榄香烯刺五加多糖乳注射液的制备

榄香烯      10.00g

刺五加多糖  0.10g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                                   

准确称取卵磷脂，加50℃的注射用水适量，搅拌分散；称取刺五加多糖和甘油，于适量注射用水中溶解后，同搅拌分散后的卵磷脂一并转移至用50℃水浴保温的高速搅拌器内，在氮气流下充分搅拌作为水相；精密称取榄香烯，溶解于大豆油中、作为油相。在通氮气、高速搅拌条件下，将油相缓慢加人到50℃水浴保温的水相中，加完后继续搅拌，即得均匀的初乳，并用注射用水调节体积为2000ml。(6)将初乳迅速转移至高压乳匀机中，调节乳匀压力为18000psi，待压力稳定后，收集乳匀3次后的乳液，将乳液冷却至室温。在通氮气的条件下，用2mol/L NaOH溶液将其pH值调至8.5.在氮气流下将乳液分装于洁净输液瓶中，密封，置于高压灭菌器内，缓慢升温至115℃，维持30min，即得。

实施例4 复方榄香烯枸杞多糖乳注射液的制备

榄香烯      10.00g

枸杞多糖    1.00g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                                  

准确称取卵磷脂，加50℃的注射用水适量，搅拌分散；称取枸杞多糖和甘油，于适量注射用水中溶解后，同搅拌分散后的卵磷脂一并转移至用50℃水浴保温的高速搅拌器内，在氮气流下充分搅拌作为水相；精密称取榄香烯，溶解于大豆油中、作为油相。在通氮气、高速搅拌条件下，将油相缓慢加人到50℃水浴保温的水相中，加完后继续搅拌，即得均匀的初乳，并用注射用水调节体积为2000ml。(6)将初乳迅速转移至高压乳匀机中，调节乳匀压力为18000psi，待压力稳定后，收集乳匀3次后的乳液，将乳液冷却至室温。在通氮气的条件下，用2mol/L NaOH溶液将其pH值调至8.5。在氮气流下将乳液分装于洁净输液瓶中，密封，置于高压灭菌器内，缓慢升温至115℃，维持30min，即得。

实施例5复方榄香烯人参多糖乳注射液的制备

榄香烯      5.00g

人参多糖    0.1g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                               

制备方法同实施例1。

实施例6复方榄香烯人参多糖乳注射液的制备

榄香烯      20.00g

人参多糖    0.5g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                          

制备方法同实施例1。

实施例7复方榄香烯黄芪多糖乳注射液的制备

榄香烯    5.00g

黄芪多糖    1.00g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                              

制备方法同实施例2。

实施例8复方榄香烯黄芪多糖乳注射液的制备

榄香烯      20.00g

黄芪多糖    4.00g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                               

制备方法同实施例2。

实施例9复方榄香烯刺五加多糖乳注射液的制备

榄香烯        5.00g

刺五加多糖    0.05g

大豆油        400.00g

卵磷脂        24.00g

甘油          45.00g

注射用水      加至2000ml

                                

制备方法同实施例3。

实施例10复方榄香烯刺五加多糖乳注射液的制备

榄香烯      20.00g

刺五加多糖  0.20g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                             

制备方法同实施例3。

实施例4复方榄香烯枸杞多糖乳注射液的制备

榄香烯      5.00g

枸杞多糖    0.50g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                                  

制备方法同实施例4。

实施例4复方榄香烯枸杞多糖乳注射液的制备

榄香烯      20.00g

枸杞多糖    2.00g

大豆油      400.00g

卵磷脂      24.00g

甘油        45.00g

注射用水    加至2000ml

                                 

制备方法同实施例4。

Claims (4)

1. 一种用于恶性胸腹腔积液的脂肪乳剂的组合物，其特征在于，由榄香烯和人参多糖，植物油、磷脂、甘油、水组成，各组分的配比为

榄香烯   5-20重量份

人参多糖 0.05-5重量份

植物油   200-800重量份

磷脂     12-48重量份

甘油     22.5-90重量份

水       适量。

2. 如权利要求1所述的组合物，其特征在于，各组分的配比为

榄香烯       5-20重量份

人参多糖     0.1-0.5重量份

大豆油       200-800重量份

卵磷脂       12-48重量份

甘油         22.5-90重量份

水           适量。

3. 如权利要求1所述的组合物，其特征在于，各组分的配比为

榄香烯      10重量份

人参多糖    0.2重量份

大豆油      400重量份

卵磷脂      24重量份

甘油        45重量份

水          适量。

4. 权利要求1所述的组合物在制备用于排除恶性胸腹腔积液的药物中的应用。