CN104623215B

CN104623215B - 一种抗肿瘤的药物组合物

Info

Publication number: CN104623215B
Application number: CN201510051647.1A
Authority: CN
Inventors: 高文远; 范亚亚; 满淑丽; 刘振; 李红法; 高静; 刘元雪
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2015-01-30
Filing date: 2015-01-30
Publication date: 2018-05-04
Anticipated expiration: 2035-01-30
Also published as: CN104623215A

Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤的药物组合物，是按重量包括如下组份：重楼提取物71～91份，姜黄素9～29份。本发明的组合物可显著抑制LA795等肺癌细胞株以及HepG2等肝癌细胞株的生长，IC₅₀分别可达20μg/mL以下；对肺腺癌、H22肝癌、S180肉瘤及艾氏腹水瘤的荷瘤小鼠模型试验显示，抑瘤率均在50％以上，与单味药给药组相比可提高荷瘤小鼠脾指数与胸腺指数，改善荷瘤小鼠的生存质量，该药物组合物抗肿瘤的活性很高，对肿瘤的发生有很好的预防和治疗作用。

Description

一种抗肿瘤的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤的药物组合物，特别是涉及一种抗肿瘤的药物组合物。

背景技术

癌症是一个全球性的公共卫生问题，已经成是许多国家的头号杀手，在未来的几十年中也将会成为人类发病率和死亡率最高的疾病。而对于癌症的预防和治疗，一直是专家学者们研究的热点。药物治疗是癌症治疗的三大疗法之一，始于20世纪40年代，与手术治疗及放射治疗相比，药物治疗的历史要短的多，但经过几十年的发展，目前全球各国发明并获准使用的抗肿瘤的药物总数已有上百种，用这些原料药物配制的各种抗癌药物制剂总数约为1200-1400种，这些药物主要是化疗药物或生物药，虽然具有高效、特异性强的特性，但其毒性、耐药性等也是不容忽视的问题。而从天然植物中提取的药物及其衍生物在抗肿瘤药物占据着重要地位，如紫杉醇和多西紫杉醇、喜树碱和羟基喜树碱、长春碱和长春新碱等。中药在中国一直有着举足轻重的作用，并有着五千年的应用史，上述这些药物均可在中草药中分离得到,这些都为中草药活性成分抗肿瘤研究提供了应用前景。

近年来，已有不少关于重楼(Rhiaoma Paridis)及其抗肿瘤有效成分重楼总皂苷的文献报道，季申等研究表明，重楼水、甲醇及乙醇提取物对人肾腺癌A-496、人结肠腺癌HT-29、人乳腺癌MCF-7、人胰腺癌PACA-2、肺癌A-549、人前列腺癌PC-3等多种肿瘤细胞均有抑制作用，其中起活性作用的是甾体皂苷类；文章Mimaki Y,et al.Biol Pharm Bull,2001,24:1286-1289.等研究显示，重楼总皂苷对白细胞HL60、ECA109食管癌，人肝癌HepG2、人胃癌BGC823和人结肠癌SW116等癌细胞有很强的细胞毒活性，另有研究表明，重楼总皂苷对肺腺癌有很好的抑制转移和诱导凋亡的作用。

姜黄素是中药姜黄Rrhizoma Curcumae Longae)的主要成分，是一种酚性色素，具有广泛的药理作用，如抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗动脉硬化等，大量研究表明，姜黄素能够抑制多种肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞的凋亡，抑制实验动物胃癌、肝癌、结肠癌及肺癌等肿瘤的发生，缩小肿瘤体积，抑制肿瘤的转移和扩散等。中国专利CN1931353A已公开了姜黄素提取及其药物组合物制备方法。

尿囊素既是尿素的衍生物，又是尿素的复合物，广泛存在于天然产物中，其具有角质松懈、麻醉减痛、抗刺激物等作用，目前其作为外用制剂广泛用于皮肤科临床，用于缓解和治疗皮肤干燥症，治疗银屑病、鱼鳞病、多种角质性皮肤病，也直接或者间接作为高档化妆品的添加剂，但其抗肿瘤作用方面的研究却鲜有报道。

本发明涉及的这三种药物组合后有极强的抗肿瘤作用，且其中任意两种药物的组合均尚未见诸报道。此外，组合物可提高荷瘤小鼠的生活质量，改善免疫功能，可预期发展成为防治多种肿瘤的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗肿瘤的药物组合物。

本发明的技术方案概述如下：

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物71～91份，姜黄素9～29份。

优选的是重楼提取物为91份，所述姜黄素为9份。

上述组合物还可以包括：尿囊素10～30份。优选14份。

所述肿瘤为肺癌或肝癌。

本发明的优点：

经体外MTT法活性试验证明，该组合物可显著抑制LA795肺癌细胞株和Hep-G2肝癌等细胞株的生长，IC₅₀均在20μg/mL以下。体内试验证明，该药物组合物对肺腺癌、小鼠H22肝癌、S180肉瘤及艾氏腹水瘤均具有显著抑制生长作用，肿瘤抑制率可达到50％以上。该组合物所包含的成分相配伍后抑瘤效果与单独给药相比具有协同增效作用，实验结果根据Webb氏公式计算，结果显示组合物的实测抑瘤值大于理论抑瘤值，证明药物组合具有协同增效作用。并且在提高小鼠免疫功能器官(脾指数、胸腺指数)方面与单味药给药组相比具有显著性差异(P﹤0.05)。更重要的是，姜黄素与尿囊素单独抑制LA795肺癌细胞株、HepG2肝癌细胞株生长及抑制小鼠T739肺癌，HepA肝癌和H₂₂肝癌的生长作用非常弱，重楼提取物的单独应用的抗肿瘤活性也有限，而组合后表现出了强抗肿瘤作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

下面的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但并不对本发明作任何限制。

重楼提取物为市售：所含重楼皂苷I含量大于等于16mg/g，重楼皂苷II含量大于等于3mg/g，重楼皂苷VII含量大于等于10mg/g，三种皂苷的总量大于等于29mg/g。

本发明各实施例所用的重楼提取物经检测：重楼皂苷I含量为15.8mg/g，重楼皂苷II含量为2.9mg/g，重楼皂苷VII含量为10.1mg/g。

姜黄素为市售：纯度大于等于95％。

尿囊素为市售：纯度大于等于98％。

实施例1

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物91份，姜黄素9份。

实施例2

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物83份，姜黄素17份。

实施例3

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物71份，姜黄素29份。

实施例4

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物91份，姜黄素9份和14份尿囊素。

实施例5

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物83份，姜黄素17份，尿囊素22.3份。

实施例6

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物71份，姜黄素29份，尿囊素10份。

实施例7

一种抗肿瘤的药物组合物，按重量包括如下组份：重楼提取物91份，姜黄素9份和30份尿囊素。

本发明的药物组合物的药效试验如下：

一.抗肿瘤活性试验方法

1.体外抗肿瘤活性试验

1.1细胞株及培养

BEL-7402肝癌细胞株(由中国医学科学院肿瘤药物研究所提供)，培养于含10％灭活胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基(Gibco公司)中，于37℃，5％CO₂培养箱及饱和湿度条件下培养，3～4天传代一次。

HepG2肝癌细胞株(由中国协和医科大学基础医学研究所提供)，培养于含10％灭活胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养基(Gibco公司)中，于37℃，5％CO₂培养箱及饱和湿度条件下培养，3～4天传代一次。

人肺腺癌A549细胞株(由中国协和医科大学基础医学研究所提供)，培养于含10％灭活胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养基中，于37℃，5％CO₂培养箱及饱和湿度条件下培养，3～4天传代一次。

小鼠肺腺癌LA795细胞株(由中国协和医科大学基础医学研究所提供)，培养于含10％灭活胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基中，于37℃，5％CO₂培养箱及饱和湿度条件下培养，3～4天传代一次。

1.2药物抗肿瘤活性测定

MTT法：将对数生长期细胞，以0.25％胰酶消化，计数，配制成浓度为3×10⁴个/mL的细胞悬液，接种于96孔酶标板，每孔加200μL。于37℃培养24h后换不含血清培养液使细胞同步化生长，每孔200μL。第三天向孔中加入受试药，即分别加入重楼提取物水溶液，姜黄素水溶液，尿囊素水溶液，姜黄素与尿囊素(质量比为87:13)水溶液，重楼提取物与尿囊素(质量比为40:60)水溶液和按实施例1、2、3、4、5、6、7制备的组合物水溶液(其中若含有姜黄素，则将姜黄素预先用少量的DMSO溶解，再与其他药物用水混溶)；另设空白对照组：0.1％二甲基亚砜(DMSO)，每孔加200μL。受试药每组分别设0.01，0.1，1，10，100，1000μg/mL六个浓度，每个浓度设8个平行孔，于37℃下培养24h后，每孔加无血清无酚红培养液新鲜配制的0.5mg/mL MTT 100μL，继续培养4h，然后，每孔加100μL DMSO溶解的MTT甲臜颗粒，用微型振荡器振荡混匀后，在酶标仪上测定光密度值(OD)，实验重复三次，取平均值。以溶剂对照处理肿瘤细胞为对照组，由OD值计算抑制率，公式为：细胞生长抑制率＝(对照组OD值—实验组OD值)/对照组OD×100％，并以药物浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制细胞生长曲线，并求得IC₅₀(半数抑制率)，IC₅₀＝细胞生长抑制率为50％的药物浓度。结果见表1。

表1-1体外抗肿瘤活性试验结果

2体内抗肿瘤活性试验

将T739小鼠(雌性，18～20g)给予上述实施例制备的组合物进行小鼠LA795肺腺癌转移模型体内药效试验。

将昆明小鼠(雌性，18-20g)给予上述实施例制备的中药组合物进行小鼠HepA、H22肝癌、S180肉瘤及艾氏腹水瘤模型体内药效试验。

2.1动物造模

2.1.1 LA795肺腺癌模型建立

取接种LA795肺腺癌细胞7天的肿瘤生长良好的T739荷瘤鼠(LA795肺腺癌细胞株及动物模型，由中国协和医科大学基础医学研究所提供)，脱颈法处死，在无菌条件下剥离肿瘤，选择新鲜无坏死的瘤组织剪碎置玻璃研磨器中，加适量生理盐水轻轻研磨制备成瘤细胞悬液，细胞筛过滤后加生理盐水稀释、计数，调配成细胞浓度为1000万/毫升的细胞悬液，0.2mL/每只接种于健康小鼠右前肢腋窝皮下，完成造模。

2.1.2 HepA肝癌模型建立

接种HepA肝癌细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠(HepA肝癌细胞株及动物模型，由中国协和医科大学基础医学研究所提供)，消毒腹部，于超净工作台中抽取乳白色腹水为瘤源，生理盐水洗涤，腹水5mL，腹水与生理盐水的比例为1:1，生理盐水5mL，配成细胞悬液，以无菌注射器抽取0.1mL，分别接种于右前肢腋下，整个操作在无菌条件下进行。

2.1.3 H22肝癌模型建立

取接种H22肝癌细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠(H22小鼠肝癌瘤株及动物模型，由中国医学科学院基础医学研究所提供)，按2.1.2项下方法造模。

2.1.4 S180肉瘤模型建立

取接种S180肉瘤细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠(S180小鼠腹水瘤细胞株及动物模型，由海润成生物科技有限公司提供)，按2.1.2项下方法造模。

2.1.5艾氏腹水瘤模型建立

取接种艾氏腹水瘤细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠(艾氏小鼠腹水瘤细胞株及动物模型，由天津中医药研究所提供)，按2.1.2项下方法造模。

2.2动物分组及给药

5种造模小鼠于接种次日开始给药，每日1次，共给药14日：

(1)模型组，灌服生理盐水，每只0.2mL；

(2)化疗药组：按2mg/kg·bw腹腔注射丝裂霉素；

(3)重楼高剂量组：按100mg/kg·bw灌服重楼提取物；

(4)重楼低剂量组：按50mg/kg·bw灌服重楼提取物；

(5)姜黄素高剂量组：按20mg/kg·bw灌服；

(6)姜黄素低剂量组：按10mg/kg·bw灌服；

(7)尿囊素高剂量组：按25mg/kg·bw灌服；

(8)尿囊素低剂量组：按15mg/kg·bw灌服；

(9)重楼+尿囊素(87:13)高剂量组：115mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(10)重楼+尿囊素(87:13)低剂量组：按57.5mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(11)姜黄素+尿囊素(40:60)高剂量组：按50mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(12)姜黄素+尿囊素(40:60)低剂量组：按25mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(13)实施例1高剂量组：按110mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(14)实施例1低剂量组：按55mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(15)实施例2高剂量组：按120.5mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(16)实施例2低剂量组：按60.25mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(17)实施例3高剂量组：按140.8mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(18)实施例3低剂量组：按70.4mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(19)实施例4高剂量组：按125mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(20)实施例4低剂量组：按62.5mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(21)实施例5高剂量组：按145mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(22)实施例5低剂量组：按72.5mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(23)实施例6高剂量组：按155mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(24)实施例6低剂量组：按77.5mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(25)实施例7高剂量组：按143mg(药物总量)/kg·bw灌服；

(26)实施例7低剂量组：按71.5mg(药物总量)/kg·bw灌服；

于给药结束后次日颈部脱臼处死小鼠，解剖摘除瘤块并取其胸腺、脾，称重计算相应指标。

肿瘤生长抑制率(i)：抑瘤率(％)＝(模型组瘤重-实验组瘤重)/模型组瘤重×100％

脏器指数：胸腺指数(mg/kg)＝(胸腺湿重/体重)*1000；脾指数(mg/kg)＝(脾脏湿重/体重)*1000。

2.3试验结果

2.3.1药物组合物对LA795肺腺癌模型小鼠的抑瘤作用

表2-1药物组合物对T739肺癌转移小鼠抑瘤率试验结果

表2-2药物组合物对T739肺癌转移小鼠免疫器官重量指数比较

注：和模型组相比，*P<0.05，**P<0.01

2.3.2药物组合物对HepA肝癌模型小鼠的抑瘤作用

表2-3药物组合物对HepA肝癌模型小鼠抑瘤率试验结果

表2-4药物组合物对HepA肝癌模型小鼠免疫器官重量指数比较

注：和模型组相比，*P<0.05，**P<0.01

2.3.3药物组合物对H22肝癌模型小鼠的抑瘤作用

表2-5药物组合物对H22肝癌模型小鼠抑瘤率试验结果

表2-6药物组合物对H22肝癌模型小鼠免疫器官重量指数比较

注：和模型组相比，*P<0.05，**P<0.01

2.3.4药物组合物对S180肉瘤模型小鼠的抑瘤作用

表2-7药物组合物对S180肉瘤模型小鼠抑瘤率试验结果

表2-8药物组合物对S180肉瘤模型小鼠免疫器官重量指数比较

注：和模型组相比，*P<0.05，**P<0.01

2.3.5药物组合物对艾氏腹水瘤模型小鼠的抑瘤作用

表2-9药物组合物对艾氏腹水瘤模型小鼠抑瘤率试验结果

表2-10药物组合物对艾氏腹水瘤模型小鼠免疫器官重量指数比较

注：和模型组相比，*P<0.05，**P<0.01

二、结论

本发明提供的抗肿瘤的药物组合物药效显著。经体外MTT试验证明，此药物组合物可显著抑制LA795等肺癌细胞株及HepG2等肝癌细胞株生长，IC₅₀达20μg/mL以下；在荷瘤小鼠体内试验显示，配伍后抑瘤率均在50％以上，与单独应用原药物相比可提高荷瘤小鼠脾指数与胸腺指数，改善荷瘤小鼠的生存质量。本发明的显著优点在于药物的来源易得，制作简单，联合应用起到了意想不到的抗肿瘤效果。

Claims

1.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征是按重量包括如下组份：重楼提取物71～91份，姜黄素9～29份，尿囊素10～30份，所述重楼提取物所含重楼皂苷I含量大于等于16mg/g，重楼皂苷II含量大于等于3mg/g，重楼皂苷VII含量大于等于10mg/g，三种皂苷的总量大于等于29mg/g；所述肿瘤为肺癌或肝癌。

2.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的药物组合物，其特征是所述重楼提取物为91份，所述姜黄素为9份，所述尿囊素为14份。