CN100378088C - 一种丹参总酚酸的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种丹参总酚酸的制备方法，所述的方法步骤如下：丹参饮片或丹参粗粉先用水或稀碱于30～99℃下初提得丹参中的水溶性成分，然后提取液加酸调PH1～6，沉淀去除杂质后，直接干燥或浓缩后干燥，得浸膏粉末；干燥所得浸膏粉末用50～90%乙醇水溶液回流提取1～4次，合并提取液，静置，取上清液，即得高纯度丹参总酚酸溶液；所得溶液直接干燥或浓缩后干燥，即得所述的丹参总酚酸浸膏粉末。利用本发明方法得到的丹参总酚酸不但质量稳定，而且富含中药丹参的活性成分，具有抗脑缺血，抗细胞凋亡等药理作用，因此可以用来制备疗效好，安全可靠的防治心脑血管疾病药物。

Description

一种丹参总酚酸的制备方法

(一)技术领域

本发明涉及一种丹参总酚酸的制备方法。

(二)背景技术

丹参是临床上常用的治疗心脑血管病的中药，且疗效显著，有悠久的临床应用历史。

近年来，对丹参的水溶性成分进行了系统研究，分离得到丹酚酸A(1)、B(2)、C(3)、D(4)、E(5)、F(8)、G(9)、H(11)、I(12)、J(13)，迷迭香酸(6)、紫草素(7)、异丹酚酸(10)、迷迭香酸的葡萄糖甙(14)等酚酸类化合物。(Lian-niang.Li，J.chinesepharmacentical sciences 1997.6，57～64)。药理实验表明丹参水溶性成分是丹参的重要活性成分，在丹参的作用中占重要地位，其最突出的作用特点是具有很强的清除自由基和抗氧化作用。根据近年研究结果，自由基参与机体多种疾病包括衰老的发生和发展过程，清除自由基、提高机体抗氧化能力，是防治多种疾病的重要途径之一。丹酚酸可以清除自由基、减少自由基对机体的损伤，而产生保护作用，同时通过广泛的药理作用，调节和改善机体的机能状态，促进受损机体组织的修复和复原，达到预防和治疗疾病的目的。

目前，国内厂家基本上都选取丹参素和原儿茶醛作为控制丹参制剂质量的指标成分，但原儿茶醛有毒副作用，丹参素代表丹参的活性不甚合理。且国内丹参制剂的质量和效果得不到保障，不同厂家的产品或同一厂家的不同批号产品临床效果差异较大，缺乏可靠的质控依据。

(三)发明内容

本发明的目的是通过对丹参的提取工艺研究，提供一种简易、高效制备丹参总酚酸的方法，并以丹酚酸B为对照品测定总酚酸作为质量控制指标，提高其治疗心脑血管疾病的临床疗效。

为达到发明目的本发明采用的技术方案是：

一种丹参总酚酸的制备方法，所述的方法步骤如下：

(1)初提：丹参饮片或丹参粗粉用水或稀碱于30～99℃下保温浸渍1～4次，合并提取液，除去固体杂质，得丹参中的水溶性成分，所述稀碱PH7.5～12，总浸渍时间为0.5～6小时；

(2)酸化：步骤(1)所得提取液加酸调PH1～6，沉淀去除杂质；

(3)干燥：将步骤(2)所得提取液直接干燥或浓缩后干燥，得浸膏粉末；

(4)醇提：步骤(3)干燥所得浸膏粉末用50～90％乙醇水溶液回流提取1～4次，合并提取液，静置，取上清液，即得高纯度丹参总酚酸溶液；

(5)干燥：将步骤(4)所得溶液直接干燥或浓缩后干燥，即得所述的丹参总酚酸浸膏粉末。

优选的，所述的步骤(4)中所用乙醇为75～85％乙醇溶液，更优选为80％乙醇溶液。

所述的步骤(1)中稀碱为下列之一：

①氢氧化钠水溶液；②碳酸氢钠水溶液；③碳酸钠水溶液。

步骤(3)或(5)中所述干燥优选为喷雾干燥。

具体的，所述的方法步骤如下：

(1)初提：丹参饮片或丹参粗粉，加入质量为药材量6～14倍的水，于90℃下保温浸渍2次，每次1～2小时，合并提取液，过滤，得丹参中的水溶性成分；

(2)酸化：步骤(1)所得提取液加入1～3％的盐酸调PH为1.5，静置后离心，得澄清的酸化液；

(3)干燥：将步骤(2)所得酸化液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，得丹参总酚酸浸膏粉；

(4)醇提：步骤(3)干燥所得浸膏粉用质量为浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，静置8小时以上，取上清液，得高纯度丹参总酚酸溶液；

(5)干燥：将步骤(4)所得溶液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，得丹参总酚酸浸膏粉末。

或者，所述的方法步骤如下：

a)初提：丹参饮片或丹参粗粉先加量6～14倍质量的1％碳酸钠溶液于90℃下保温浸渍2次，每次1～2小时，合并提取液，过滤，得丹参中的水溶性成分；

b)酸化：步骤(1)所得提取液加入1～3％的盐酸调PH为1.5，静置后离心，得澄清的酸化液；

c)干燥：将步骤(2)所得酸化液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，得丹参总酚酸浸膏粉；

d)醇提：步骤(3)干燥所得浸膏粉用质量为浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，静置8小时以上，取上清液，得高纯度丹参总酚酸溶液；

e)干燥：将步骤(4)所得溶液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，得丹参总酚酸浸膏粉末。

利用本发明方法得到的丹参总酚酸不但质量稳定，而且富含中药丹参的活性成分，具有抗脑缺血，抗细胞凋亡等药理作用，因此可以用来制备疗效好，安全可靠的防治心脑血管疾病药物。

本发明所述的丹参总酚酸的制备方法的有益效果主要体现在：(1)由于采用水提取，使丹酚酸B、丹参素等水溶性成份提取的比较充分；(2)提取温度低于100℃，可减少丹酚酸B的破坏；(3)加酸酸化可将丹酚酸从不同盐类转化为游离的丹酚酸，同时可以沉淀除去从丹参原药材中提取出的杂质；(4)酸化后所得的浸膏粉用醇提取，进一步除去提取液中的杂质，最终得到纯度较高的总酚酸，可使丹参提取物中总酚酸的含量达到了80％以上；(5)工艺过程简单，安全，易于操作，且成本低，可以得到除去大量蛋白质，糖类，淀粉等杂质，总酚酸的含量高，杂质少，得率高，其有效部位(酚酸类成分)含量在80％以上，生理活性强。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

步骤如下：

(1)初提：10kg丹参饮片加水在90℃浸渍提取2次。第一次加70L水，加热2小时，第二次加50L水，90℃浸渍1.5小时，分离提取液，将两次提取液合并，用过滤方法除去提取液中的固体杂质；

(2)酸化：在滤液中加入滤液量1～3％的盐酸调PH，边加边搅拌，至滤液的PH值为1.5，然后静置提取液约8小时，使析出物充分沉降，离心，得澄清的酸化液；

(3)干燥：酸化液在60℃减压浓缩至适量，喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉；

(4)醇提：丹参总酚酸浸膏粉加85％乙醇回流提取3次。第一次加4倍浸膏量的85％乙醇，回流1.5小时，第二、三次各加3倍浸膏量的85％乙醇，分别回流1.5小时，合并提取液，静置8小时以上，吸取上清液；

(5)干燥：酸化液在60℃减压浓缩至适量，喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉末1.2Kg，按生药材计得率为12％。

总酚酸和丹酚酸B的检测方法：

(1)丹酚酸B：用HPLC法测定，检测波长285nm，标准品丹酚酸B由中国药品生物制品检定所提供。

(2)丹参总酚酸：含量＝F(A-B)-B

其中：A为分光光度法测定以丹酚酸B为对照计算的总酚酸含量

B为高效液相色谱法测定的丹酚酸B含量

F为校正因子

总酚酸除了丹酚酸B(分子量718)外，还含有原儿茶醛(分子量138)、丹参素(分子量162)、紫草酸(分子量538)、咖啡酸(分子量180)等酚酸类化合物，他们之间的分子量相差较大。以丹酚酸B为对照用分光光度法测定的总酚酸含量结果偏高，主要是由于其他酚酸类化合物的分子量低于丹酚酸B的分子量所致。因此，用上述6个酚酸类化合物平均分子量与丹酚酸B分子量的比值作为校正因子，以此校正后的总酚酸含量与用HPLC法分别测定原儿茶醛等5个酚酸类化合物含量之和基本一致。

原儿茶醛、丹参素、咖啡酸、紫草酸、丹酚酸B由中国药品生物制品检定所提供。

检测结果：每克干浸膏含0.35克丹酚酸B，按生药材计得率为4.2％；每克干浸膏合0.85克总酚酸，按生药材计得率为10.2％。

实施例2：

(1)初提：10kg丹参饮片加1％碳酸钠溶液在90℃浸渍提取2次：第一次加70L，加热2小时，第二次加50L，90℃浸渍1.5小时，分离提取液，将两次提取液合并，用过滤方法除去提取液中的固体杂质；

(2)酸化：在滤液中加入滤液量1～3％的盐酸调PH，边加边搅拌，至滤液的PH值为1.5，然后静置提取液约8小时，使析出物充分沉降，离心，得澄清的酸化液；

(3)干燥：酸化液在60℃减压浓缩至适量，喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉；

(4)醇提：丹参总酚酸浸膏粉加85％乙醇回流提取3次。第一次加4倍浸膏量的85％乙醇，回流1.5小时，第二、三次各加3倍浸膏量的85％乙醇，分别回流1.5小时，合并提取液，静置8小时以上，吸取上清液；

(5)干燥：酸化液在60℃减压浓缩至适量，喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉末1.1Kg。

实施例3：

(1)初提：10kg丹参粗粉加3％氢氧化钠溶液在60℃浸渍提取3次：第一次加70L，加热3小时，第二次加50L，60℃浸渍2小时，第三次加50L，60℃浸渍2小时，分离提取液，将三次提取液合并，用过滤方法除去提取液中的固体杂质；

(2)酸化：在滤液中加入滤液量1～3％的盐酸调PH，边加边搅拌，至滤液的PH值为3.0，然后静置提取液约8小时，使析出物充分沉降，离心，得澄清的酸化液；

(3)干燥：酸化液喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉；

(4)醇提：丹参总酚酸浸膏粉加85％乙醇回流提取3次。第一次加4倍浸膏量的90％乙醇，回流1.5小时，第二、三次各加3倍浸膏量的90％乙醇，分别回流1.5小时，合并提取液，静置12小时，吸取上清液；

(5)干燥：酸化液喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉末1.0Kg。

实施例4：

(1)初提：10kg丹参粗粉加5％碳酸氢钠溶液在40℃浸渍提取4次：第一次加60L，浸渍4小时，第二次加40L，40℃浸渍3小时，第三次加40L，40℃浸渍3小时，分离提取液，将三次提取液合并，用过滤方法除去提取液中的固体杂质；

(2)酸化：在滤液中加入滤液量1～3％的盐酸调PH，边加边搅拌，至滤液的PH值为5.0，然后静置提取液约10小时，使析出物充分沉降，离心，得澄清的酸化液；

(3)干燥：酸化液喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉；

(4)醇提：丹参总酚酸浸膏粉加60％乙醇回流提取3次。第一次加5倍浸膏量的60％乙醇，回流2.5小时，第二、三次各加3倍浸膏量的60％乙醇，分别回流2.5小时，合并提取液，静置12小时，吸取上清液；

(5)干燥：酸化液喷雾干燥，即得丹参总酚酸浸膏粉末0.9Kg。

实施例5：传统方法提取丹参总酚酸的提取

取100kg丹参饮片加水煎煮2次。第一次加600L水，煎煮2小时，第二次加500L水，煎煮1.5小时，自然沉降12小时以上，取上清液离心，除去提取液中的固体杂质，得澄清的药液。浓缩至250升。将浓缩液缓缓流过装有300立升D₁₀₁大孔树脂的吸附柱，用800立升水洗吸附柱除去杂质后，再以600立升40％乙醇洗出丹参总酚酸。收集40％乙醇洗出液，减压浓缩至10立升后，在搅拌下缓缓加入90立升无水乙醇，加毕放置2小时，然后倾出上清液弃去沉淀物，上清液浓缩至干，进一步干燥并粉碎得棕褐色丹参总酚酸浸膏粉1.8公斤，按生药材计得率为1.8％。按实施例1所述方法，检测总酚酸和丹酚酸B含量，检测结果：每克干浸膏含0.43克丹酚酸B，按生药材计得率为0.8％；每克干浸膏含0.86克总酚酸，按生药材计得率为1.5％。

Claims (7)

1.一种丹参总酚酸的制备方法，其特征在于所述的方法步骤如下：

(1)初提：丹参饮片或丹参粗粉用水或稀碱于30～99℃下保温浸渍1～4次，合并提取液，除去固体杂质，得丹参中的水溶性成分，所述稀碱PH7.5～12，总浸渍时间为0.5～6小时；

(2)酸化：步骤(1)所得提取液加酸调PH1～6，沉淀去除杂质；

(3)干燥：将步骤(2)所得提取液直接干燥或浓缩后干燥，得浸膏粉末；

(4)醇提：步骤(3)干燥所得浸膏粉末用50～90％乙醇水溶液回流提取1～4次，合并提取液，静置，取上清液，即得高纯度丹参总酚酸溶液；

(5)干燥：将步骤(4)所得溶液直接干燥或浓缩后干燥，即得所述的丹参总酚酸浸膏粉末。

2.如权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法，其特征在于所述的步骤(4)中所用乙醇为75～85％乙醇溶液。

3.如权利要求2所述的丹参总酚酸的制备方法，其特征在于所述的步骤(4)中所用乙醇为80％乙醇溶液。

4.如权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法，其特征在于所述的步骤(1)中稀碱为下列之一：

①氢氧化钠水溶液；②碳酸氢钠水溶液；③碳酸钠水溶液。

5.如权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法，其特征在于步骤(3)或(5)中所述干燥为喷雾干燥。

6.如权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法，其特征在于所述的方法步骤如下：

(1)初提：丹参饮片或丹参粗粉，加入质量为药材量6～14倍的水，于90℃下保温浸渍2次，每次1～2小时，合并提取液，过滤，得丹参中的水溶性成分；

(2)酸化：步骤(1)所得提取液加入1～3％的盐酸调PH为1.5，静置后离心，得澄清的酸化液；

(3)干燥：将步骤(2)所得酸化液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，的丹参总酚酸浸膏粉；

(4)醇提：步骤(3)干燥所得浸膏粉用质量为浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，静置8小时以上，取上清液，得高纯度丹参总酚酸溶液；

(5)干燥：将步骤(4)所得溶液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，得丹参总酚酸浸膏粉末。

7.如权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法，其特征在于所述的方法步骤如下：

(1)初提：丹参饮片或丹参粗粉，加入质量为药材量6～14倍的1％碳酸钠溶液于90℃下保温浸渍2次，每次1～2小时，合并提取液，过滤，得丹参中的水溶性成分；

(2)酸化：步骤(1)所得提取液加入1～3％的盐酸调PH为1.5，静置后离心，得澄清的酸化液；

(3)干燥：将步骤(2)所得酸化液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，得丹参总酚酸浸膏粉；

(4)醇提：步骤(3)干燥所得浸膏粉用质量为浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小时，合并提取液，静置8小时以上，取上清液，得高纯度丹参总酚酸溶液；

(5)干燥：将步骤(4)所得溶液在60℃减压浓缩后喷雾干燥，得丹参总酚酸浸膏粉末。