CN100360133C - 用于戒毒、镇痛的河豚毒素呼吸道给药制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明是一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素呼吸道给药制剂，其特点是以河豚毒素枸橼酸盐或河豚醋酸盐为原料药，按常规方法制成气雾剂、喷雾剂或气溶胶制剂。本发明呼吸道给药制剂安全、高效、非成瘾性、使用方便。本发明的河豚毒素呼吸道给药制剂对癌痛患者有效率达97%以上，戒毒有效率达100%，因此是一种很好的戒毒、镇痛的药物制剂。

Description

用于戒毒、镇痛的河豚毒素呼吸道给药制剂
技术领域
本发明涉及河豚毒素及其类似物用于戒毒、镇痛的呼吸道给药制剂。
背景技术
河豚毒素(tetrodotoxin，TTX)又称鲀毒素。因来源不同还有东方鲀毒(Fugu poison)、圆鲀素(Spheroidine)、斑章毒素(Maculotoxin)、鰕虎鱼毒素(Gobytoxin)、蠌螈毒素(Tarichatoxin)等。分子式为C11H17N3O8，分子量319.28，属全氢化氨基喹唑啉类化合物。
自古以来，河豚鱼就和人类结下不解之缘，有统计数字表明因贪食河豚中毒身亡者已经有数万人之多。19世纪就有人将之用于治疗麻风病，50年代前后，“水煎剂”型的所谓[成药]已用作镇痛、镇静、镇惊。这种纯度不到1％的粗制品曾试销全世界(日本药业时报社：《药名检索辞典》1974年，P1368)。
有关河豚毒素的药理研究，自上世纪初就已开始。1909年日本的田原良纯提制得到粗品毒素，并命名为河豚毒素(tetrodotoxin)，其纯度仅0.2％。从那以后，日本学者已用TTX对各种动物及其脏器和组织的药理作用进行了广泛研究。20世纪30年代到40年代很多旨在医药开发上的研究报道相应发表，在临床上涉及到内科、外科、皮肤科和眼科等广泛领域。虽然那时所用的“毒素”纯度不高，但所含杂质无生理活性，因此这些医学成果仍可视为河豚毒素本身的作用(陈冀胜  潘心富：《中国海洋药物》杂志1986(2)31-34)。
20世纪50年代，河豚毒素的制剂在临床上扩大了应用，如治疗关节炎、风湿病、瘙痒、阳痿、遗尿、破伤风、百日咳、气喘、头痛等，而且也已作镇痛药。文献报道河豚毒素用作肌肉松弛剂对显性的痉挛特别有效。
河豚毒素中毒的药理、毒理作用；
据报道，人和动物因河豚毒素中毒后，虽然意识尚存，但因严重的外周和中枢性肌肉麻痹而被误认为“已经死亡”，已经不乏其例，因为此时心跳极慢，呼吸微弱。而低等动物对之耐受性比高等动物高，也提示河豚毒素中毒主要作用于中枢神经系统CNS，因为低等动物的生命对CNS的生理整体依赖比高等动物低得多。已经发现，河豚毒素是最强的降血压剂之一，他能使血管运动中枢的麻痹而引起渐进性低血压。呕吐是动物中毒的最明显症状，而且潜伏期很短，呕吐症状对猫、狗等动物更为敏感，因而TTX被称为最强的呕吐剂。人中毒也会出现呕吐，这也是TTX临床中毒的最直观症状。而且这种症状很可能是中枢性的。小仓认为是TTX对第四脑室的呕吐中枢，大脑皮层末梢的化学呕吐区域(CTZ)的刺激所致(小仓：神经研究的进展24(5)，860 1971)。
蔡志基教授发现对家兔iv TTX 0.5-2μg/kg均引起血压下降(平均值为5-6mmHg，时间为0.5-33分钟)；对大鼠iv TTX同样剂量也引起血压下降(10-44mmHg，7.5-61分钟)。TTX对心脏的作用既有外周性作用也有中枢性的作用，但主要是中枢性的。TTX中毒后，使刺激迷走神经和坐骨神经中枢传出部位引起的血压变化消失；对兔横断颈髓实验后表明毒素主要影响血管运动中枢。TTX对自主细胞的影响不一，只抑制由神经引发的自主细胞的活动，而对药物引起的自主细胞活动则无影响。实验发现对猫注入TTX刺激交感神经，可抑制猫尾毛的竖毛活动，但注入肾上腺素后，TTX则不能抑制猫尾毛的竖毛活动。TTX能抑制平滑肌的收缩，但内脏平滑肌对其敏感性较差，TTX对血管平滑肌的松弛效果明显。TTX可使瞳孔扩大，致使动物对光反射减弱或消失。TTX能抑制因刺激神经而引起的汗腺的分泌，能抑制胃酸的分泌，减少游离酸并降低pH值。TTX具有极强的局麻作用，将极低浓度的TTX溶液注射到小鼠坐骨神经周围，测定TTX局麻作用的半数有效浓度ED50为0.89μg/ml，相比之下为普鲁卡因的3596倍。而且二者作用持续时间分别为73分钟和10分钟(P<0.01>(蔡志基等：河北水产科技1983(1)1-3)。在某些组织上相差则更大。TTX与某些经典的局麻药伍用，可增加局麻效力，延长时间，降低毒性，增大治疗指数。微量的TTX与常用抗心率失常药物伍用，可显著增强其疗效(朱成华等，海洋药物，1984(1)7)。
TTX用大鼠甲醛法测定其镇痛活性比吗啡强2950倍，采用小鼠热板法TTX为哌替啶的1600倍，小鼠扭体法为哌替啶的594倍(参见人民日报，1986，1，6第七版“日本仙台医学院的一名教授发现，河豚毒素具有极好的镇痛作用。据研究，河豚毒素的镇痛效果大约是吗啡的4000倍以上”)。
河豚毒素的临床应用有以下几方面的用途：
1.镇痛方面：
(1)对神经、肌肉和关节等创伤、火用力、跌打损伤、挫伤等所产生的疼痛能发挥显著的镇痛作用。尤其是神经、关节、肌肉疼痛，只要不是痼疾，疗效均较理想。
(2)用作局部麻醉药。由于河豚毒素比一般的局麻药要强上万倍，在豚鼠真皮内风块(intradermal wheals)的局麻活性比普鲁卡因强16万倍，比狄布卡因(dibucaine)强1万倍，在脱鞘蝼蛄腹部神经纤维上试验，TTX要比普鲁卡因或狄布卡因强10亿倍，故国外已有将河豚毒素与普通局麻药配伍而作为局麻药的专利。
(3)用于晚期癌症患者的止痛，效果良好，且未见成瘾性的报道。
2.镇静方面：
(1)用作搔痒镇静剂，对于冬季皮肤痒症、痒疹、疥癣、皮炎等可以止痒而促进其痊愈。
(2)用作呼吸镇静剂，可治气喘和百日咳等症。
(3)用作尿意镇静剂，对遗尿症有良效。
3.镇痉方面：
用作镇痉剂，可用于松弛肌肉痉挛、胃痉挛和其它痉挛，特别对于破伤风痉挛，被称为特效药。
4.降压方面：
河豚毒素的降血压作用独特，对猫给药(iv)2～3μg/kg则能引起正常动脉压突然下降2/3，而作用时间又比较短，此后尚有继发的升压期。由此可以考虑河豚毒素可能在临床抢救高血压方面有一定用途。
5  其它方面：
(1)对麻疯病人的痛苦有一定缓解作用。
(2)由于河豚毒素具有充血作用，对阳萎和妇女性欲缺乏等亦属有效。但有膀胱及尿路疾病者忌用，因为毒素能使其粘膜充血或强度郁血(引自潘心富，黄致强，药学通报，1984(2))
1953年日本三共株式会社从日本河豚卵巢中制取的所谓“河豚毒素”注射药，还属于毒素原液类型的粗品，每只安瓿中装有1ml注射液。其配制方法是用1.6g的“河豚毒素”粉末溶于11含有0.5％石碳酸(用作防腐剂)的蒸馏水溶液中，当时的这种所谓“河豚毒素”粉末仅含百分之一的纯品河豚毒素(对小鼠的致死剂量仅为1μg/g)。据此计算，一个人一次注射量仅为16μg的纯品河豚毒素(对小鼠的致死剂量为10μg/kg)。
而按日本针剂规定用相当于每公斤小鼠最低死亡剂量的1/14的50倍(一般人体重量以50kg计)的毒素溶于0.5％的石碳酸水溶液1ml作为一次注射量(亦即相当于人的死亡剂量的1/14)。据此推算，每只安瓿中含纯河豚毒素35.7μg。
注射河豚毒素针剂后，部分患者可能产生口、舌知觉异常，头部充血，头痛等反应，但持续时间不长。
(3)在专利号USP5846975、CN1051706C和EP0750909A1提出的《氨基氢化喹唑类化合物及其衍生物戒除药物依赖性的新用途》的专利中指出，以河豚毒素为代表的氨基氢化喹唑啉类化合物及其衍生物在戒毒领域有着前所未有的脱毒疗效，而且本身无药物依赖性和较小的毒副作用，但给药方法仅包括口服和皮下肌肉或静脉注射。
发明内容
本发明的目的是提供一种安全、高效、非成瘾性、使用方便的戒毒、镇痛的以河豚毒素为原料药的新的制剂。
本发明是以河豚毒素为代表的氨基氢化喹唑啉类化合物及其衍生物在戒毒、镇痛等适应症方面的呼吸道给药制剂，主要包括气雾剂(Aerosol)、喷雾剂(Spray)或粉末吸入剂(Powder Inhaler)即气溶胶。
本发明所述的呼吸道给药制剂是由河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐和选自药剂学允许的包括稀释剂、抛射剂、稳定剂、调味剂、皮肤助渗剂或载体的一种、两种或两种以上配制成的气雾剂、喷雾剂或气溶胶。
所述的抛射剂包括碳氢化合物、氟利昂(毛磊著，《药用气雾剂》，中国医药科技出版社，1997年6月第一版，P49)。
所述的稳定剂包括抗氧化剂、维生素E，主要是为了提高制剂的化学稳定性。
所述的调味剂包括香料和其它调味剂，目的是提高患者对制剂的可接受性。
所述的皮肤助渗剂包括氮酮(Azone)、咖啡因、维生素(如尼克酰胺)和药物辅料包括香草醛、苯甲醇。
上述制取本发明河豚毒素呼吸道给药制剂的辅剂都是制备喷雾剂、气雾剂或气溶剂常用的，都是市售产品。
本发明的河豚毒素呼吸道给药制剂的最佳配方有下列几种：
(1)由河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐和高纯水配制成浓度为每毫升5微克制剂。
(2)由河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐和甘油配制成5％(重量/体积)的甘油水溶液制剂。
(3)由河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐和咖啡因以重量比为0.2∶1.5量配制成的制剂。
(4)由河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐和尼克酰胺、香草醛、氮酮以重量比为0.1∶5∶1.5∶10的量以及适量的吐温-80配制成的试剂。
本发明的所述的气雾剂、喷雾剂或气溶胶的给药制剂制备方法均是医学上常用的方法(毛磊著，《药用气雾剂》，中国医药科技出版社，1997年6月第一版，P2-6)，是将河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐、助渗剂等溶于水，必要时可调整pH，通过过滤或同位素照射灭菌消毒，然后在无菌条件下灌装入喷雾罐。
本发明所述的河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐包括市售的或按实例1方法制备的。
本发明制剂的给药方式包括鼻腔、口腔或舌给药，最好是鼻腔给药，给药所用的喷射装置是已知的。
鼻腔内给药，现已成为一种给药模式。鼻腔黏膜的吸收率取决于多种可变因子，然而，鼻腔吸收的表面积和鼻腔的局部血流量是其关键。鼻腔表面积受气流阻力控制，这种阻力由毛细血管所决定，毛细血管舒张导致鼻炎或鼻充血。血管的舒张也能增加血流量并通过增加吸收部位药物迁移率来增强吸收。我们惊奇的发现，河豚毒素及其类似物可成功地通过鼻黏膜给药途径被毛细血管吸收，而且其吸收率不亚于皮下、肌肉或静脉给药途径。
本发明的河豚毒素给药剂量应为0.01到10微克/喷，更优选的是0.1到1微克/喷；可给药一次或多次，更优选的是每天1到4次。
对于河豚毒素的稳定剂制剂，每次喷射体积为5到200微升，更优选为50到100微升。该鼻类给药溶液制剂可从鼻类滴瓶中作为滴鼻剂给药，或者从压缩瓶中作为气雾剂给药，单个单位剂量或者定量泵喷雾。为了避免鼻刺激可以应用标准的缓冲系统，如枸橼酸盐、醋酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐等缓冲系统控制pH值，使该制剂优选缓冲到pH3到7，更优选缓冲到pH4到6。另外，必须用标准的等渗物(如氯化钠、甘露醇或葡萄糖)调节渗透性，使其制剂等渗，便于吸收。
粉末颗粒大小是鼻腔黏膜吸收的致关重要因素。粉末颗粒小于1微米时，容易吸入肺中；而粉末颗粒较大时，不便于鼻腔黏膜吸收或呼出鼻腔。本发明优选颗粒大小分布为1到100微米，更优选的颗粒大小为5到40微米。
另外，载体粉末如乳糖和葡萄糖经常与药物粉末混合，以便在鼻内给药时辅助生产和剂量重现性。
本发明的优点和效果：
本发明的河豚毒素呼吸道给药制剂，可直接将药物给到作用部位，起效快，毒副作用小，而且使用方便，不用打针、吃药，便于家庭使用，同时可解决部分患者注射河豚毒素针剂后产生口、舌知觉异常、头痛等反应的问题，因此本发明是一种很好的镇痛、戒毒药物制剂。
用犬来评价本发明呼吸道给药制剂的有效性：4只禁食的海洛因成瘾犬轻度麻醉，每只犬在鼻孔中接受1微克河豚毒素制剂，经过5分钟，4只犬的戒断症状均消失。这与人的临床戒断症状一致。一般有效时间可维持4到18小时。
本发明制剂使用效果：
收治住院或非住院癌痛患者40例，其中男性22例，女性18例，年龄20到82岁。这些自愿受试者，分别患有骨、乳腺、淋巴、消化道、肺和脑癌，均为中、晚期，出现剧烈疼痛。其中35例已用杜冷丁、长效吗啡缓解疼痛。20例强效镇痛药已基本不管用。使用本发明制剂，一般每日2到5次，严重者10次。用药5至40天，最长半年。显效15例，缓解20例，有效4例，有效率97％。
自愿戒毒者40例，其中海洛因吸毒者38例，冰毒加摇头丸1例，可卡因1例，男性31例，女性9例，年龄15岁到32岁。吸毒史3月到5年不等。采用本发明的制剂，一般每日2到8次，严重者10次。用药3至10天。一般在1-3日内，辅以镇静催眠剂。3日后，对症治疗。治疗3日后，纳洛酮催瘾为阴性，5到6日后，血、尿吗啡检查为阴性。有效率100％。
具体实施方式
下面通过具体实例进一步说明本发明的特点。
实例1
本实例是河豚毒素原料药的制备。
具体制备方法：将冷冻的菊黄东方鲀卵巢100kg用刀割破，100升无离子水(以下称水)浸泡，过滤，于离心甩干机中甩滤，干渣再用水浸泡，共提4次。所得滤液直火煮沸5分钟，有大量蛋白凝固，所得凝固蛋白用水提取2次，甩滤。合并滤液用纸浆过滤，合并滤液即毒素原液，共450升(含毒量约12.5mg/l)，此液加入9升正丁醇冰箱内放置，备交换用。
10升D152型弱酸性阳离子交换树脂(60目左右)常法预处理后，用8％氨水转成NH4 +型，水冲至pH8，交换时毒素原液再精滤一次，交换柱(h 130cm，Φ12cm)，流速80-120ml/分，交换的后期用小鼠毒性跟踪监测。交换完毕用水(150升)冲柱至无色、不含固型物。改用10％醋酸水溶液洗脱毒素，流速30-50ml/分，小鼠毒性跟踪，分步收集馏分。前馏分弱毒，用于下次浸泡，提取，最后有毒馏分醋酸含量极高，用于下次冲柱时配制醋酸洗脱液使用，中间高毒馏分(3.5升，含毒浓度约1420mg/l)。
高毒馏分用氨水调pH8.5，上活性炭柱(直径8.5cm，高110cm)，活性炭常法减活处理(5kg的粒状活性炭以1.2％(W/V)硬脂酸的乙醇溶液12升浸没，搅拌1小时，抽滤，水洗涤，凉干后，100-120℃活化1-2小时备用。湿法装柱)，流速40ml/分，小鼠毒性跟踪。吸附完成后，用水冲柱后，换用0.5％醋酸的20％乙醇水溶液洗脱，得1500ml的高毒洗脱液，减压浓缩后用氨水调pH至8.5，冰箱放置过夜，过滤得白色粉晶(约5克)。即河豚毒素粗制品。
此白色固体与3.59克苦味酸混合，加水50ml煮沸溶解，趁热过滤，滤液放置冷却后析出黄色针状结晶，热水重结晶三次后得毒素的苦味酸盐(6.9克)。将之溶于热水，滴加氨水，冷却后，所得固体以醋酸溶解，氨水转化，水，乙醇洗涤等方法处理后得粗品TTX(2.9克)，收率约51％。
此样品的LD50为10.0μg/kg(小鼠，ip)
以上所得白色粉状结晶用0.2mol的醋酸-醋酸钠以37/63比例的缓冲剂溶解，在C18反相柱上，使用RI检测器，进行HPLC制备，流动相为pH4的醋酸水溶液，流速为1ml/分，收集合并保留时间为11-12分的馏分。减压浓缩至小体积，氨水调pH8.5，放冷，过滤所得的固体用高纯水和优级纯乙醇洗涤后真空干燥得纯品毒素。
此毒素以0.1mol枸橼酸-枸橼酸盐44.5/55.5比例的缓冲剂作为稳定剂溶解，毒素与稳定剂的比例为1∶5。24小时内冷冻干燥，经检验合格后封装保存，即为原料药。
(1)TTX精制对照品水分测定
仪器：684KF coulometer库仑计——Swiss made
样品称重：4.9mg
水分：0.0136％
注：  本方法用于测定含微量水分(0.1％-0.0001％)的物质
检验依据：中国药典1995年版增补版。水分测定法。(库仑滴定法)
(2)化学结构式
Figure C0211792800091
分子式：C11H17N3O8
分子量：319.28
化学名：八氢-12-(羟甲基)-2-亚氨-5，9：7，10a-二甲桥-10aH-[1，3]-二氧华[5，6-d]嘧啶-4，7，10，11，12-五醇(Octahydro-12-(hydroxymethyl)-2-imino-5，9，7，10a-dimethano-10aH-1，3]dioxocino[5，6-d]pyrimidine-4，7，10，11，12-pentol)。
实施例2
本实例是确证制备本发明的河豚毒素原料药的河豚毒素的化学结构
外观：白色结晶性粉末。
溶解度：易溶于酸水，不溶于水，甲醇，乙醇等溶剂。
熔点：mp：220-222℃。与文献报道值一致。
比旋光  [α]15 D-8.64°(c 1.0，稀AcOH)。
元素分析
测试仪器：CEST MOD.110元素分析仪
测定元素齐全性：测定结果只含C、H、N、O
测定数据列表并与对照品或理论值进行比较(见表1和表2)
表1  样品的元素分析结果
元素分析     百分含量(％)   平均值(％)
    C     40.83， 40.85， 40.88     40.86
    H     5.57，  5.58，  5.58     5.58
    N     12.89， 12.86， 12.87     12.88
表2    标准品的元素分析结果
元素分析     百分含量(％)   平均值(％)
    C     40.23，40.25，40.26     40.24
    H     5.52， 5.55， 5.53     5.53
    N     12.82，12.81，12.79     12.80
分析和结论：实验值与理论值一致。
红外吸收光谱(IR)
仪器型号及测试条件：
PERKIN-ELMER 983红外谱仪，KBr压片法
仪器校正：按照中国药典1995版二部附录红外光谱测定法进行仪器校正.以聚苯乙烯膜为校正和检定。
样品制备方法：KBr压片法。
测定结果：见表3。
表3  样品的红外光谱测定数据
  吸收峰波数(cm-1) 吸收峰强度 振动类型 归属
32003081290128701664143313001201，1126，841，802，725， 中强中强中强中强强中中强中中中中 υN-υO-υC-υC-υυC-nC-αO-αC-αC-υC-υC＝N-H     胍基的N-H伸缩振动羟基O-亚甲基，次甲基的伸缩振动次甲基的伸缩振动胍基的C＝N伸缩振动亚甲基，次甲基伸缩振动C-N面外弯曲振动醚键O-C变性振动羟基O-C变性振动C-H变性振动C-N变性振动C＝N-H变性振动
紫外可见吸收光谱(UV-VIS)
仪器型号：Pharmacia LKB Biochrom.4060
测试条件：H2O
测定数据：只有末端吸收(200nm)
核磁共振氢谱(1H NMR谱)
仪器型号：Varian 300MHz型核磁共振仪
测试条件：DMSO-d6为溶剂，TMS为内标
测定数据列表4
表4样品的1H NMR谱数据
序号   化学位移δ(ppm)   多重性   质子数   偶合常数     归属
    244a57891111-OH     ---5.202.043.983.713.733.643.313.243.94 ddbrddsddddd 111111111 9.59.51.51.512.5，4.512.5，4.54.5 H-4/H-4a邻位偶合H-4a/H-4邻位偶合H-5次甲基信号H-7/H-8邻位偶合H-8/H-7邻位偶合H-9次甲基信号H-11亚甲基信号H-11亚甲基信号OH-11羟基信号
1H NMR谱数据及其解析：
在1H NMR谱中，δ5.20(d，J＝9.5)为H-4质子，它与H-4a显a-a反式偶合；δ2.04(d，J＝9.5)为H-4a质子，由于其与H-5(e键)为约90°键角，故偶合常数趋于0.δ3.98(br)为H-5质子，它与H-4a显弱偶合。H-7(δ3.71，d，J＝1.5)和H-8(δ3.73，d，J＝1.5)显弱偶合是由a-e质子偶合所致；δ3.64(s)单峰为H-9质子。CH2-11的2质子δ3.31(d，J＝12.5)和δ3.24(d，J＝12.5)显偕二偶合。上述波谱归属与TTX结构吻合。由于D2O-DAc溶剂的配比不同，导致与文献值比皆向高场位移。化合物(1)和(2)的氢谱归属见表4。
核磁共振碳谱(13C NMR谱)
仪器型号：Varian 300MHz型核磁共振仪
测试条件：DMSO-d6为溶剂，TMS为内标
波谱数据：见表5
表5  样品的13C NMR谱数据
序号   化学位移δ(ppm)    归属    序号 化学位移δ(ppm)    归属
  12344a56     ----156.23(s)----74.81(d)40.36(d)73.49(d)71.12(s) C-2C-4C-4aC-5C-6 788a91011 79.31(d)72.46(d)59.38(s)70.93(d)110.49(s)65.18(t) C-7C-8C-8aC-9C-10C-11
13C NMR数据及解析
13C NMR(DAc-D2O)谱中，δ156.23为胍基碳信号，δ74.81(d)为C-4信号，4-OH处于e键；δ40.36(d)为C-4a信号；δ73.49(d)为C-5信号；δ71.12(s)为6-OH处于a键的C-6信号(6-表-TTX的C-6信号在δ72.8ppm)；δ79.31(d)为C-7信号；δ70.53(d)为C-9信号；δ110.49(s)为半缩酯碳C-10信号，它与C-5和C-7以C-O键形成笼状结构。C-11的羟甲基化学位移为δ65.18(t)。碳谱解析结果与TTX的文献报道结果一致。以D2O-DAc为溶剂，测定NMR谱时，TTX存在半缩酯(1)和TTX-酯(2)的动态平衡，当13C NMR谱的的测定时间小于15小时时，平衡式中主要成分为TTX(1)，仅存在少量化合物(2)，化合物(2)的13C NMR谱归属见表5。
质谱(MS)
仪器型号：JEOL JMS-D-300型质谱仪
测试方法：PFAB-MS法
质谱数据：见表6
表6样品的质谱裂解峰
    No.     片断峰(m/z)
    12345678910     320(M<sup>+</sup>+1)319(M<sup>+</sup>)3022772612311851317557
质谱解析：
EI-MS谱测定分子离子峰为m/z320(M++1)，m/z302为M+-H2O峰。其它质谱裂解片断峰见图1。
粉晶X-射线衍射谱
仪器型号：D/Max-RC型粉晶X-射线衍射谱(略)。
差热分析
仪器：PKIN ELMER差热分析仪
测试条件：30-300℃，升温速度：10℃/min
热分析结果：峰值是222.18℃
化学结构综合解析：
样品的熔点mp.220-222℃。元素分析结果(％：C 40.86，H 5.58，N12.88确定分子组成为C11H17N3O8。红外光谱在3200，1664，1300提示为胍基等特征吸收峰；3081cm-1宽带吸收峰提示为羟基特征吸收峰。
在1H NMR谱中，δ5.20(d，J＝9.5)为H-4质子，它与H-4a显a-a反式偶合；δ2.04(d，J＝9.5)为H-4a质子，由于其与H-5(e键)为约90°键角，故偶合常数趋于0.δ3.98(br)为H-5质子，它与H-4a显弱偶合。H-7(δ3.71，d，J＝1.5)和H-8(δ3.73，d，J＝1.5)显弱偶合是由a-e质子偶合所致；δ3.64(s)单峰为H-9质子。CH2-11的2质子δ3.31(d，J＝12.5)和δ3.24(d，J＝12.5)显偕二偶合。上述波谱归属与TTX结构吻合。所有质子信号与文献报道值一致。
13C NMR(DAc-D2O)谱中，δ156.23为胍基碳信号，δ74.81(d)为C-4信号，4-OH处于e键；δ40.36(d)为C-4a信号；δ73.49(d)为C-5信号；δ71.12(s)为6-OH处于a键的C-6信号(6-表-TTX的C-6信号在δ72.8ppm)δ79.31(d)为C-7信号；δ70.53(d)为C-9信号；δ110.49(s)为半缩酯碳C-10信号，它与C-5和C-7以C-O键形成笼状结构。C-11的羟甲基化学位移为δ65.18(t)。碳谱解析结果与TTX的文献报道结果一致。
质谱提供的分子离子峰m/z 319(M+)与元素分析测定结果一致。质谱裂解规律及各片断峰(见图)与河豚毒素结构的裂解相符。进一步对照样品的IR，MS，1HNMR，13C NMR谱的信号，与文献值结构的各谱完全一致。证明样品的化学结构为河豚毒素。
实例3-7
实例3-7制备下列组合物的呼吸道给药溶液制剂
实例3
由实例1方法制备河豚毒素枸橼酸盐、河豚毒素醋酸盐为河豚毒素原料药1毫克溶于高纯水，使其浓度为每毫升5个微克。
实例4
由实例1方法制备河豚毒素原料药1毫克，
葡萄糖50毫克，
苯甲醇10毫克，
注射用水加至10毫升。
实例5
由实例1方法制备河豚毒素原料药1毫克，
5％重量/体积的甘油水溶液，
注射用水加至100毫升。
实例6
由实例1方法制备河豚毒素原料药200毫克，
咖啡因1.5克，
水加至2万毫升，
搅拌上述混合物至溶解，无菌漏斗过滤后，灌入4万个单剂量鼻喷雾装置。
实例7
由实例1方法制备河豚毒素纯品原料药100毫克，
尼克酰胺5克，
香草醛1.5克，
氮酮10克，
土温-80适量，
水加至1000升，
搅拌上述成分至溶解，通过超滤过滤除去杂菌和不溶物，灌装入100万个单剂量鼻喷雾装置中。

Claims (6)

1、一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素呼吸道给药制剂，其特征在于由河豚毒素枸椽酸盐或河豚毒素醋酸盐和选自药剂学上允许的包括稀释剂、抛射剂、稳定剂、调味剂、皮肤助渗剂在内的载体中的一种、两种或两种以上配制成的气雾剂，喷雾剂或气溶胶。
2、按照权利要求1所述的呼吸道给药制剂，其特征在于由河豚毒素枸椽酸盐或河豚毒素醋酸盐和高纯水制得浓度为每毫升5微克的河豚毒素的枸椽酸盐或河豚毒素醋酸盐的呼吸道给药制剂。
3、按照权利要求1所述的呼吸道给药制剂，其特征在于由河豚毒素枸椽酸盐或河豚毒醋素酸盐和葡萄糖、苯甲醇以重量比1∶50∶10的量配制呼吸道给药制剂。
4、按照权利要求1所述的呼吸道给药制剂，其特征在于由河豚毒素枸椽酸盐或河豚素醋酸盐和甘油制得重量/体积为5％的甘油水溶液的呼吸道给药制剂。
5、按照权利要求1所述的呼吸道给药制剂，其特征在于由河豚毒素枸椽酸盐或河豚毒素醋酸盐和咖啡因以重量比为0.2∶1.5的量配制成的给药制剂。
6、按照权利要求1所述的呼吸道给药制剂，其特征在于由河豚毒素枸椽酸盐或河豚毒素醋酸盐和尼克酰胺、香草醛、氮酮的重量比为0.1∶5∶1.5∶10的量以及1-100ppm的吐温-80配制的呼吸道给药制剂。
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