CN115105510B - 去氢吴茱萸碱的抗肿瘤用途及其有效组分的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开去氢吴茱萸碱的抗肿瘤新用途及其有效组分的制备方法，本发明首次研究发现吴茱萸中的去氢吴茱萸碱（简称DeHE）具有显著的抗肿瘤活性，可靶向胰腺癌干细胞，对胰腺癌干细胞及小鼠胰腺癌皮下瘤有明显的抑制作用，并且去氢吴茱萸碱可增强胰腺癌细胞对吉西他滨（GEM）的化疗敏感性，提升对胰腺癌细胞的杀伤效果。所述制备方法步骤包括：浸泡、沥干、提取、调pH值、抽滤、再浸泡、旋干、萃取、再提取、结晶，酸提碱沉并溶剂萃取过程中分3次，从50%、70%到85%逐步提高乙醇提取液的浓度，所得到的产物不仅DeHE的含量较高（＞90%），而且制备过程不需要过任何离子交换柱、硅胶柱、聚酰胺树脂柱，不涉及有害健康的溶剂，步骤简易，成本低。

Description

去氢吴茱萸碱的抗肿瘤用途及其有效组分的制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，特别是一种来源于中药吴茱萸的天然药物的抗肿瘤新用途及其有效组分的制备方法。

背景技术

胰腺癌， 主要指胰腺导管腺癌 (PDAC，约占90%)，是一种预后极差的消化道肿瘤，被称为癌王（参考文献： Mizrahi J D， Surana R， Valle J W， et al. Pancreaticcancer. Lancet， 2020， 395(10242): 2008-2020）。胰腺癌发病机制复杂，是遗传-环境因素及生活方式共同作用的结果，与KRAS、CDKN2A、TP53、SMAD4等基因的累积突变或失活有关。胰腺癌具有恶性程度高，进展快，发病隐匿、早期诊断困难，转移早，预后差等特点；目前诊断患癌后中位生存期为6-12个月，5年生存率小于10%。PDAC发病率在全球范围近年来逐渐升高，美国癌症协会预测：2030年左右PDAC将成为美国仅次于肺癌的第二大患癌死因（参考文献：SiegelR L， Miller K D， Jemal A. Cancer statistics 2020. CA Cancer JClin， 2020， 70(1): 7-30），我国近年亦有类似的趋势。鉴于其对生命健康的严重威胁，因此胰腺癌近年来受到了越来越多的关注和重视。

胰腺癌目前尚无较好的临床治疗手段：手术切除局部肿瘤组织仍是目前唯一有望显著延长患者生存时间的办法，但该病确诊时仅有20%的患者有手术机会，手术后患者的5年生存率也仅有15-20%（80%的患者死于术后复发和转移）（参考文献： Grossberg A J，Chu L C， DeigC R， et al. Multidisciplinary standards of care and recentprogress in pancreatic ductal adenocarcinoma. CA Cancer J Clin， 2020， 70(5):375-403）。

胰腺癌对放化疗敏感性较低，目前也无有效靶向药。现临床药物治疗仍主要依靠吉西他滨（Gemcitabine简称GEM）等化疗药进行全身化疗来控制病情进展，但经系统化疗（包括FOLFIRINOX联用方案）后患者的生存期也仅延长6-12个月，且这些化疗毒副作用大，并易耐药（参考文献：Neoptolemos J P， Kleeff J，Michl P， et al. Therapeuticdevelopments in pancreatic cancer: current and future perspectives. Nat RevGastroenterolHepatol， 2018， 15(6):333-348）。此外胰腺癌还具有高度免疫抑制的特殊肿瘤微环境，现有的免疫疗法如免疫检查点治疗也几乎无效（参考文献：BalachandranV P，Beatty G L， Dougan S K. Broadening the impact of immunotherapy to pancreaticcancer: Challenges and opportunities. Gastroenterology， 2019，156(7):2056-2072）。

胰腺癌干细胞（Pancreatic Cancer Stem Cells，PCSCs）是公认的胰腺癌耐药和复发转移的主要诱因（参考文献：Sergeant G， Vankelecom H， Gremeaux L， etal. Roleof cancer stem cells in pancreatic ductal，Nat Rev Clin Oncol, 2009, 6(10):580-586） 。近年来发现：胰腺癌体的癌细胞存在细胞异质性：癌组织内存在着少数一群具有自我更新和无限增殖能力及多向分化潜能的胰腺癌干细胞（参考文献： Li C， Heidt DG， Dalerba P， et al. Identification of pancreaticcancer stem cells. CancerRes， 2007， 67(3):1030-1037），其细胞表面的特异标志物有ALDH、CD44、 CD24、 ESA、CD133等。与增生活跃的胰腺癌细胞相比，这些在胰腺癌体内少量存在的PCSCs通常是处于静息或休眠状态，对化疗和免疫治疗不敏感， 肿瘤干细胞的这些特性也称为干性(Stemness)。如果不清除PCSCs，即便通过放化疗消灭了大部分普通肿瘤细胞，最终还是会因为残存的肿瘤干细胞在一定条件下重新转换为快速增殖的癌细胞，导致肿瘤复发和转移，并对化疗产生耐药性（参考文献：Clevers H. The cancer stem cell: premises，promises and challenges. Nat Med， 2011， 17(3):313-319）。例如，作为胰腺癌治疗的一线化疗药吉西他滨(GEM)虽能显著抑瘤，但却会诱导癌体内肿瘤干细胞的增加，这也成为其治疗后耐药和转移复发的重要原因（参考文献：Zhang Z， Duan Q， Zhao H， et al.Gemcitabine treatment promotes pancreatic cancer stemness through the Nox/ROS/NF-kappaB/STAT3 signaling cascade. Cancer Lett， 2016， 382(1):53-63）。因此，靶向肿瘤干细胞和清除PCSCs是克服胰腺癌化疗耐药并防止癌症复发转移的关键。但迄今为止，临床尚未有抑制PCSCs的有效药物，亟待进一步发现（包括从天然来源的中草药天然产物挖掘）靶向PCSCs的治疗药物。

吴茱萸活性成分去氢吴茱萸碱(DeHE)化学结构首次在1999年被确证（参考文献：张虎，杨秀伟，崔育新. 吴茱萸碱、吴茱萸次碱和去氢吴茱萸碱的碳氢NMR信号全指定. 波谱学杂志， 1999(06):563-564），之后对DeHE的活性研究集中在消炎镇痛和心血管神经系统领域(杨志欣等,吴茱萸药理作用及其物质基础研究概况， 中华中医药学刊，2011，29(11): 2415-17)以及抗农业病原菌（参见专利文献CN106892919A），但之前从未报道过去氢吴茱萸碱(DeHE)的抗肿瘤活性。

目前提纯去氢吴茱萸碱单体化合物的方法 （参考文献：1、唐元清，冯孝章，黄量.吴茱萸化学成分的研究. 药学学报， 1996(02): 151-155；2、Zhao N， Li Z L， Li D H，et al. Quinolone and indole alkaloids from the fruits of Euodia rutaecarpaand theircytotoxicity against two human cancer cell lines. Phytochemistry，2015， 109:133-139）、以及人工合成该天然产物纯品的方法（参考文献：Wehle S.Espargaró A， Sabaté R. at al. Investigation into the stability and reactivityof the pentacyclic alkaloid dehydroevodiamine and the benz-analogthereof.Tetrahedron， 2016， 72(20): 2535-43.） 都成本较高，在大规模实际应用制备时有明显不足。

综上所述，在现有治疗胰腺癌的技术中存在以下不足：

1、尚未有抑制肿瘤干细胞的有效药物，胰腺癌尚无较好的临床治疗手段。

2、现临床药物治疗仍主要依靠吉西他滨等化疗药进行全身化疗来控制病情进展，但经系统化疗（包括FOLFIRINOX联用方案）后患者的生存期也仅延长6-12个月，且这些化疗毒副作用大，并易耐药。

3、目前去氢吴茱萸碱的分离纯化方法多要用到硅胶柱层析、大孔树脂或聚酰胺树脂，步骤繁琐，成本较高。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明首次发现去氢吴茱萸碱的抗肿瘤新用途并提供其有效组分的简易制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

去氢吴茱萸碱的抗肿瘤新用途及其有效组分的制备方法，其特征在于所述药物的主要活性成分为去氢吴茱萸碱，其结构式是：

CAS No: 67909-49-3 ；分子式：C19H15N3O；分子量：301.34；熔点：216-218 ℃。

去氢吴茱萸碱用于治疗肿瘤的用途。

去氢吴茱萸碱应用于治疗肿瘤药物的用途。

去氢吴茱萸碱用于治疗胰腺癌的用途。

去氢吴茱萸碱应用于治疗胰腺癌药物的用途。

去氢吴茱萸碱用于克服化疗药物耐药性的用途。

去氢吴茱萸碱应用于克服化疗药耐药性的药物的用途。

去氢吴茱萸碱用于克服吉西他滨耐药性的用途。

去氢吴茱萸碱应用于克服吉西他滨耐药性的药物的用途。

去氢吴茱萸碱有效组分的制备方法步骤如下：

（1）、浸泡：用6倍量的石油醚溶剂冷浸泡吴茱萸果实6小时。

（2）、沥干：将浸泡后的吴茱萸果实沥干，滤去石油醚，去除吴茱萸果实中所含的脂溶性的低极性杂质。

（3）、提取：将沥干后的吴茱萸果实用含5%盐酸的浓度为50%的乙醇提取液浸泡，浸泡温度为37℃，浸泡时间为6小时，得到含有总生物碱的溶液。

（4）、调pH值：往溶液中滴加10%的氢氧化钠调节pH至10，静置。

（5）、抽滤；将静置后的溶液进行抽滤，得到滤渣。

（6）、再浸泡：将滤渣再用浓度为70%的乙醇提取液37℃浸泡6小时，抽滤得到滤液。

（7）、旋干：将滤液用旋转蒸发仪旋干，温度设置为60℃，旋转蒸发得乙醇浸膏。

（8）、萃取：所得的乙醇浸膏用正丁醇萃取，得萃取液。

（9）、调pH值：用碱调节萃取液的pH至10，然后静置，静置至不再沉淀，得不溶性的生物碱成分。

（10）、再提取：将步骤（9）中不溶性的生物碱成分用含5% 盐酸的浓度为85%的乙醇提取液进行再提取，再次得到可溶性的生物碱并蒸干。

（11）、结晶：将步骤（10）所得产物用结晶溶剂溶解并进行结晶，得到的粉末状结晶即为去氢吴茱萸碱有效组分。

所述去氢吴茱萸碱有效组分的制备方法中步骤（11）的结晶溶剂为二氯甲烷和甲醇的结晶混合液，二氯甲烷和甲醇的体积比为2：1。

本发明的有益效果是：

1、首次发现去氢吴茱萸碱有显著的抗肿瘤活性，可靶向胰腺癌干细胞，对腺癌干细胞有明显的抑制作用，从而起到治疗胰腺癌的作用。

2、去氢吴茱萸碱通过靶向清除胰腺癌干细胞，从而增强了化疗药物吉西他滨的治疗敏感性，提升化疗药物吉西他滨对胰腺癌细胞的杀伤效果，是一种克服化疗药的耐药的潜在新辅助药物。

3、本发明中的去氢吴茱萸碱有效组分的制备方法步骤简易，成本低，酸提碱沉并溶剂萃取过程中分3次，从50%、70%到85%逐步提高乙醇提取液的浓度，得到的产物不仅DeHE的含量较高（＞90%），而且制备过程不需要过任何离子交换柱、硅胶柱、聚酰胺树脂柱，不涉及有害健康的溶剂。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

图1是去氢吴茱萸碱(DeHE)对胰腺癌干细胞的抑制作用；

图2是DeHE对胰腺癌皮下瘤小鼠和胰腺癌干细胞的抑制作用；

图3去氢吴茱萸碱（DeHE）增强胰腺癌细胞对吉西他滨（GEM）的化疗敏感性；

图4是DeHE靶向胰腺癌干细胞的新治疗策略的模式图；

图 5 DeHE抗胰腺癌有效组分对胰腺癌皮下瘤小鼠肿瘤的抑制效果。

具体实施方式

去氢吴茱萸碱的抗肿瘤新用途及其有效组分的制备方法，本发明研究发现吴茱萸中的去氢吴茱萸碱具有显著的抗肿瘤活性，可靶向胰腺癌干细胞，对胰腺癌干细胞和小鼠胰腺癌皮下瘤有明显的抑制作用，并且去氢吴茱萸碱通过靶向清除胰腺癌干细胞，从而增强了化疗药物吉西他滨的治疗敏感性，提升化疗药物吉西他滨对胰腺癌细胞的杀伤效果从而克服其耐药作用。

制备包含去氢吴茱萸碱有效组分的提取分离的新方法步骤如下：

（1）、浸泡：用6倍量的石油醚溶剂冷浸泡吴茱萸果实6小时，充分溶解吴茱萸果实。

（2）、沥干：将浸泡后的吴茱萸果实沥干，滤去石油醚，去除吴茱萸果实中所含的脂溶性的低极性杂质。

（3）、提取：将沥干后的吴茱萸果实用含5%盐酸的浓度为50%乙醇提取液浸泡，浸泡温度为37℃，浸泡时间为6小时，得到含有总生物碱的溶液。

（4）、调pH值：往溶液中滴加10%的氢氧化钠调节pH至10，静置。

（5）、抽滤；将静置后的溶液进行抽滤，得到含不溶性的总生物碱的滤渣。

（6）、再浸泡：将滤渣再用浓度为70%乙醇提取液37℃浸泡6小时，抽滤得到含溶解的生物碱成分滤液。

（7）、旋干：将滤液用旋转蒸发仪旋干，温度设置为60℃，旋转蒸发得乙醇浸膏。

（8）、萃取：所得的乙醇浸膏用正丁醇萃取，得萃取液。

（9）、调pH值：用碱调节萃取液的pH至10，然后静置，静置至不再沉淀，得不溶性的生物碱成分。

（10）、再提取：将步骤（9）中不溶性的生物碱成分用含5% 盐酸的浓度为85%乙醇提取液进行再提取，再次得到可溶性的生物碱并蒸干。

（11）、结晶：将步骤（10）所得产物用结晶溶剂溶解并进行结晶，得到的粉末状结晶即为去氢吴茱萸碱有效组分(纯度>90%)，结晶溶剂为二氯甲烷和甲醇的结晶混合液，二氯甲烷和甲醇的体积比为2：1。

所述步骤（3）、（6）和（10）中，酸提碱沉并溶剂萃取过程中分3次逐步提高乙醇提取液的浓度从50%、70%到85%，可有效分离出DeHE有效组分。

上述制备方法最后可继续通过对所得的结晶粉末进行重结晶方式以获得纯度更高（>99.9%）的去氢吴茱萸碱单体化合物。

参照图1：去氢吴茱萸碱(DeHE)对胰腺癌干细胞的抑制作用，（A）将胰腺癌细胞Panc-1和Mia PaCa-2在含有图中所示浓度的去氢吴茱萸碱和吉西他滨（GEM，5µM）的无血清悬浮干细胞培养体系中培养7天，进行干细胞球形成试验；第7天用200×倒置显微镜对单个干细胞球体进行拍摄，比例尺=50 µm。同时计算球体的数量，与DMSO空白溶剂相比，***P<0.001。（B）将Panc-1和Mia PaCa-2细胞在无血清悬浮干细胞培养体系培养5天形成干细胞球，再加入图示指定浓度的DeHE和GEM（5 μM）继续培养2天；在第7天用200×倒置显微镜对单个干细胞球体进行拍摄。同时计算球体的数量，与DMSO空白溶剂相比，*P<0.05，**P<0.01，**P<0.001。（C）用DeHE和GEM（5 µM）处理Panc-1和Mia PaCa-2细胞48 h后，收集细胞，流式检测ALDH(+)细胞比例；并对ALDH(+)细胞比例进行统计分析，与DMSO空白溶剂相比，*P<0.05，***P<0.001。（D）用指定浓度的DeHE和GEM（5 μM）处理Panc-1和Mia PaCa-2细胞48h，采用蛋白免疫印迹法检测癌细胞干性相关基因的表达水平。DMSO：二甲基亚砜。DeHE:去氢吴茱萸碱。GEM:吉西他滨。ALDH（乙醛脱氢酶，胰腺癌干细胞重要标志物之一）。

以上实验表明，无论是在含有药物的胰腺癌干细胞球的悬浮培养体系中 (见图1中A)，还是在形成胰腺癌干细胞球后再加入药物处理(见图1中B)；相比阴性对照，DeHE均可显著抑制胰腺癌干细胞的生长（化疗药吉西他滨GEM为阳性对照）。为进一步证明上述靶向胰腺癌干细胞的作用，还用流式细胞仪检测了胰腺癌细胞中乙醛脱氢酶（ALDH，胰腺癌干细胞重要标志物之一）的阳性细胞比例，结果显示：DeHE处理后胰腺癌细胞中的ALDH(+) 细胞比例呈剂量依赖性下降 (见图1中C)，而在GEM处理下ALDH(+) 细胞比例却上升。此外申请人还检测了胰腺癌细胞中与PCSCs干性密切相关的Nanog、Sox-2及Oct-4基因的表达，与上述结果一致，这3种肿瘤细胞干性相关基因的表达都在DeHE的作用下被下调，而在GEM处理下却升高 (见图1中D)。以上结果表明DeHE对胰腺癌干细胞有明显抑制作用，而阳性对照药吉西他滨 (GEM)却诱导胰腺癌细胞干性增强。

参照图2： DeHE对胰腺癌皮下瘤小鼠和胰腺癌干细胞的抑制作用。每只裸鼠皮下接种4×106个Panc-1胰腺癌细胞，当移植瘤长至约75 mm3时，将15只裸鼠随机分组：空白对照组，DeHE（30 mg/kg体重），GEM（50 mg/kg体重）；给药方式：三天一次，腹腔注射，30天后结束给药。（A）小鼠皮下移植瘤示意图及肿瘤生长曲线图。给药期间每三天记录一次小鼠肿瘤体积，与空白对照组比较，**P<0.01。（B）每三天记录一次小鼠体重，以曲线图统计分析小鼠体重，说明DeHE的用药对小鼠体重无影响，而GEM用药后（吉西他滨）会使小鼠体重明显降低。（C）DeHE和GEM给药对肝肾指数和血液生化指标的影响，说明DeHE对小鼠肝肾功能无影响，而对照药吉西他滨(GEM)影响肝脏毒性明显。与空白对照组比较，*P<0.05。（D）DeHE和GEM治疗后流式检测裸鼠肿瘤组织中带有ALDH(+)标记的胰腺癌干细胞，并对相应的ALDH(+)细胞比例进行统计分析，结果表明，DeHE毒副作用小，几乎无肝肾毒性（见图2中B和C：和现有的临床药物吉西他滨对照）。与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。缩写：DeHE：去氢吴茱萸碱；GEM：化疗药吉西他滨。

以上实验表明，去氢吴茱萸碱（DeHE）可显著抑制小鼠胰腺癌皮下瘤的生长，其抑瘤效果与现在临床广泛使用的一线化疗药物吉西他滨 (GEM，阳性对照)相当（见图2中A），但两者作用机制不同(见图2中D)。并且DeHE的毒性低：DeHE给药不会引起小鼠体重的下降，而对照药吉西他滨在治疗中略有体重下降（见图2中B）；DeHE对小鼠肝肾功能均无影响（对小鼠的机体损伤小、毒性低），而吉西他滨组有明显的肝损伤：肝脏系数下降，肝功能指标AST和ALT表达上升（见图2中C）。此外，与上述在细胞水平上DeHE对胰腺癌干细胞的抑制相一致（图1中C），DeHE在小鼠动物水平也可明显降低胰腺癌组织中带有干性标志ALDH(+) 的胰腺癌细胞比例，而吉西他滨处理使对应的ALDH(+) 细胞比例升高（见图2中D：流式检测结果）。

上述图1-2实验证据表明,去氢吴茱萸碱（DeHE）对极难清除的高转移、高侵袭的胰腺癌干细胞有显著抑制效果，可能提供一种与现有临床化疗药物作用机制不同的新治疗策略。那么，对于DeHE的作用是否可增强胰腺癌细胞对化疗药吉西他滨(GEM)的治疗敏感性，申请人继续进行了实验。

参照图3：去氢吴茱萸碱（DeHE）增强胰腺癌细胞对吉西他滨（GEM）的化疗敏感性。用DeHE（50 μM）预处理胰腺癌Panc-1细胞和Mia-PaCa-2细胞48 h后，继续用GEM处理48 h，用细胞增殖实验（CCK8）检测细胞增殖活力。（A）Panc-1癌细胞未预处理和DeHE预处理情况下对GEM干预的增殖曲线图。（B）Mia PaCa-2癌细胞未预处理和DeHE预处理情况下对GEM干预的增殖曲线图。数值表示为：平均值±标准偏差。缩写：GEM，吉西他滨；DeHE，去氢吴茱萸碱。

图3实验表明，利用DeHE先对胰腺癌细胞预处理作用48小时（利用其清除癌细胞中所含的肿瘤干细胞），再用现有的化疗药吉西他滨 (简称GEM) 作用于预处理过的胰腺癌细胞，结果可显著提高化疗药GEM对胰腺癌细胞的杀伤能力（其中作用于Mia PaCa-2胰腺癌细胞时，单独使用GEM和DeHE+GEM联用的IC50值分别为53.39±4.28μM、0.7329±0.131μM。

实验表明，靶向肿瘤干细胞的吴茱萸活性成分DeHE和化疗药吉西他滨(GEM)的联用，可明显增加对胰腺癌细胞的杀伤效果。这意味着DeHE有作为现有胰腺癌临床一线化疗药物吉西他滨(GEM)的辅助药物应用的潜力，DeHE的预处理很可能通过靶向清除胰腺癌干细胞从而增强了化疗药物吉西他滨的治疗敏感性，DeHE通过靶向胰腺癌干细胞可有效克服现有化疗药物的耐药性。

参照图4：模式图阐述DeHE靶向胰腺癌干细胞的新治疗策略：图中的原发性胰腺癌体由普通癌细胞（灰色细胞）和少数胰腺癌干细胞（PCSCs，图中的深灰色细胞）组成。传统化疗方法(如吉西他滨GEM化疗药物)不能有效清除胰腺癌干细胞（甚至增加胰腺癌干细胞比例），导致胰腺癌耐药和转移复发。预先使用吴茱萸抗胰腺癌天然产物DeHE靶向PCSCs治疗清除胰腺癌干细胞后，再使用化疗药GEM进行杀伤的克服化疗耐药的治疗新策略有效杀灭胰腺癌细胞。缩写：PCSCs：胰腺癌干细胞；GEM：吉西他滨；DeHE：去氢吴茱萸碱。

参照图5：DeHE抗胰腺癌有效组分对胰腺癌皮下瘤小鼠肿瘤的抑制效果。每只裸鼠皮下接种4×106个Panc-1胰腺癌细胞，当移植瘤长至约75 mm3时，将15只裸鼠随机分组：空白溶剂对照组(Control)，DeHE单体化合物组（30 mg/kg体重），DeHE抗胰腺癌有效组分（30mg/kg体重）；给药方式：三天一次，腹腔注射，30天后结束给药。图示为按如上给药处理后各组小鼠皮下移植胰腺癌细胞的胰腺癌瘤体生长曲线图。给药期间每三天记录一次小鼠肿瘤体积，与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，**P<0.001。缩写：DeHE：去氢吴茱萸碱。

上述实验表明，采用主要包含DeHE天然产物的抗胰腺癌有效组分（含DeHE>90%）处理胰腺癌皮下瘤小鼠后，可显著抑制小鼠胰腺癌皮下瘤的生长，治疗效果比DeHE单体化合物组效果还略好（参见图5），这可能是含DeHE>90%有效组分粗品的制备物中还含有其他与DeHE有协同抗胰腺癌功效的未知微量有效成分。

申请人主要对胰腺癌作了详细的研究及实验，得到了详细的实验数据，得到了本申请记载的详细的完整的实验数据，对于其他的肿瘤如：肝癌、胃癌、肠癌等也做了初步的研究，但尚未形成详细的完整的实验数据，根据现有的数据表明，去氢吴茱萸碱及其有效组分对治疗肝癌、胃癌、肠癌等消化道肿瘤也有一定的效果。

以上的实施方式不能限定本发明创造的保护范围，专业技术领域的人员在不脱离本发明创造整体构思的情况下，所做的均等修饰与变化，均仍属于本发明创造涵盖的范围之内。

Claims (3)

1.去氢吴茱萸碱有效组分的制备方法，其特征在于其步骤如下：

（1）、浸泡：用6倍量的石油醚溶剂冷浸泡吴茱萸果实6小时；

（2）、沥干：将浸泡后的吴茱萸果实沥干，滤去石油醚，去除吴茱萸果实中所含的脂溶性的低极性杂质；

（3）、提取：将沥干后的吴茱萸果实用含5%盐酸的浓度为50%乙醇提取液浸泡，浸泡温度为37℃，浸泡时间为6小时，得到含有总生物碱的溶液；

（4）、调pH值：往溶液中滴加10%的氢氧化钠调节pH至10，静置；

（5）、抽滤；将静置后的溶液进行抽滤，得到滤渣；

（6）、再浸泡：将滤渣再用浓度为70%的乙醇提取液37℃浸泡6小时，抽滤得到滤液；

（7）、旋干：将滤液用旋转蒸发仪旋干，温度设置为60℃，旋转蒸发得乙醇浸膏；

（8）、萃取：所得的乙醇浸膏用正丁醇萃取，得萃取液；

（9）、调pH值：用碱调节萃取液的pH至10，然后静置，静置至不再沉淀，得不溶性的生物碱成分；

（10）、再提取：将步骤（9）中不溶性的生物碱成分用含5% 盐酸的浓度为85%的乙醇提取液进行再提取，再次得到可溶性的生物碱并蒸干；

（11）、结晶：将步骤（10）所得产物用结晶溶剂溶解并进行结晶，得到的粉末状结晶即为去氢吴茱萸碱有效组分。

2.根据权利要求1所述去氢吴茱萸碱有效组分的制备方法，其特征在于步骤（11）中，结晶溶剂为二氯甲烷和甲醇的结晶混合液，二氯甲烷和甲醇的体积比为2：1。

3.根据权利要求1所述方法得到的去氢吴茱萸碱有效组分的用途，其特征在于得到的去氢吴茱萸碱有效组分在制备用于治疗胰腺癌的药物中的用途。