CN100356173C - 一种乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法及测定标准 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药品的检测方法，特别是涉及测定乳癖安消制剂中功劳木含量的方法及其测定的标准。该方法中含有如下盐酸小檗碱的含量检测方法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为15～35∶60～80∶0.5～2∶0.5～2为流动相；检测波长为265nm，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算不低于3000；测定结果：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10-20μl，注入高效液相色谱仪，测定计算；检测标准为每单位剂量乳癖安消制剂中含功劳木以盐酸小檗碱计不得少于0.06mg。采用本发明方法检测乳癖安消制剂，盐酸小檗碱在色谱柱中的分离效果好，灵敏度高，所测得的样品含量较高，能真实地反映药品质量。

Description

一种乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法及测定标准

技术领域

本发明涉及一种药品的检测方法，特别是涉及测定乳癖安消制剂中功劳木含量的方法及其测定的标准。

背景技术

乳癖，现代医学称之为乳腺增生病，是一种乳腺组织的良性疾病，临床上特征为乳房肿块和疼痛，与月经周期及情志抑郁密切相关。乳腺增生病从病理学角度来说，是由于正常乳腺小叶生理性增生但复旧不全形成乳腺正常结构紊乱；从激素角度来说，大多认为是由于卵泡期雌激素提早分泌过度，雌、孕激素之间比例关系失调，性腺激素和促性腺激素分泌节律消失引起，各项激素在乳腺增生病女性整个性周期的病理性变化情况则众说纷纭。

临床实验结果显示：乳癖安消口服液治疗乳腺疾病疗效显著，并对月经量多、经期延长、小腹作胀、乳房胀痛、倦怠乏力及舌象异常、脉象异常等症状的改善作用极为明显。乳癖安消口服液对红细胞和血红素的恢复也有很好的疗效，并能降低血液粘滞度，改善血液循环及贫血等病状。随访结果表明，该药对乳腺疾病效果稳定。临床实验中未发现该药有明显的不良反应。由此可见，乳癖安消口服液临床疗效确切，服用安全、方便。

乳癖安消颗粒是在乳癖安消口服液基础上改剂型而成，乳癖安消口服液收载于部颁标准中药成方制剂第二十册，标准号为WS-10646(ZD-0646)-2002，乳癖安消口服液由功劳木、三叉苦、益母草、鸡血藤、土茯苓、连翘等药材组成。临床用于活血化瘀，软坚散结。用于气滞血瘀所致乳癖，乳腺小叶增生，卵巢囊肿，子宫肌瘤见上述证候者。乳癖为常见妇科疾病，多见于已婚妇女，其发生乳腺癌的危险性要比健康妇女高1.4～1.5倍，发病率居女性恶性肿瘤之首。在我国生活水平相对较低的特有条件下，发病率呈明显上升趋势，越来越严重地影响着妇女的健康。

功劳木药材作为乳癖安消处方中的君药，味苦、性寒，有清热燥湿消火解毒的功效。其主要活性成分为盐酸小檗碱。

药理毒理证明：功劳木的水煎剂对金黄色葡萄球菌，大肠杆球和绿脓杆菌有抗菌作用。准确检测乳癖安消制剂中功劳木所含有的盐酸小檗碱的含量是生产中有效控制产品质量的好方法。现有的检测乳癖安消口服液中功劳木所含盐酸小檗碱含量的方法所采用的流动相为甲醇一水，供试品制备时采用的提取液为盐酸-甲醇(1→100)，其标准为每单位剂量含功劳木以盐酸小檗碱计，不得少于0.05mg。其盐酸小檗碱在色谱柱中的分离效果不如本方法好，且含量限度较低，不能真实地反映药品的质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的检测乳癖安消制剂中功劳木含量的方法，采用此方法检测乳癖安消制剂具有盐酸小檗碱在色谱柱中的分离效果好，灵敏度高，所测得的样品含量较高，能真实地反映药品质量的特点。

本发明的另一个目的就是提供一种检测乳癖安消制剂中功劳木含量新的标准。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的，一种乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法，该方法中含有如下盐酸小檗碱的含量检测方法：

用高效液相色谱法测定：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为15～35∶60～80∶0.5～2∶0.5～2为流动相；检测波长为265nm，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇或不同浓度的甲醇、无水乙醇或不同浓度的乙醇制成每1ml含0.025mg的溶液；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的乳癖安消制剂，研细，混匀，取5.0g，精密加入盐酸-甲醇混合物20-80ml，盐酸与甲醇的体积比为0.5-2∶100，密塞，称定重量，250W、50MHz超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用上述盐酸-甲醇混合物补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液5-20ml，通过已处理好的中性氧化铝柱(100-200目，3g，内径1.0cm)，加甲醇或乙醇20——60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或不同浓度的甲醇、无水乙醇或不同浓度的乙醇适量使溶解，移至5ml容量瓶中，加甲醇或不同浓度的甲醇、无水乙醇或不同浓度的乙醇稀释至刻度5ml，摇匀，即得；

测定结果：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10-20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算；检测标准为每单位剂量乳癖安消制剂中含功劳木以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于0.06mg。

所述的动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为25∶73∶1∶1。

所述的含有如下盐酸小檗碱的含量检测方法，盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄ ·HCl)的含量测定方法具体为：

在供试品溶液的制备时，所加的盐酸-甲醇的体积比例为1∶100，体积为50ml，超声处理时间为30分钟；洗脱液为甲醇或96％乙醇，稀释液为甲醇或96％乙醇，洗脱量为40ml，在对照品溶液的制备时，所用的溶剂为甲醇。

所述的乳癖安消制剂是颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液体制剂、针剂、外用贴膏剂、凝胶剂、膜剂、气雾剂、搽剂、酊剂。

所述的中性氧化铝柱为100-200目，3g，内径1.0cm。

本发明的优点和效果如下：

功劳木的主要化学成分以及有效成分为盐酸小檗碱，以上述检测方法检测功劳木的含量和监测生产过程中有效成分的损失，可以真正做到可以控制产品的质量，保证产品疗效，使得产品的质量得到保证。采用本发明方法检测乳癖安消制剂具有盐酸小檗碱在色谱柱中的分离效果好，灵敏度高，所测得的样品含量较高，能真实地反映药品质量。本发明与现有技术方法的区别如下：原方法中流动相配制过程复杂，不同时间，不同人员配制的流动相出峰时间，峰形各异，新测定方法中流动相配置过程中不用调节pH值，不同时间，不同人员操作，出峰时间及峰形差别不大。新方法小檗碱峰形，分离度，理论板数，托尾因子等指标均比原方法好，故本发明方法更适用于本项含量测定。本发明方法含量限度比原口服液标准有所提高。

具体实施方式

下列实施例用于进一步说明本发明，但本发明的保护范围不受实施例所限制。

实施例1：盐酸小檗碱含量测定方法的研究

(1)仪器与试药：

高效液相色谱仪：日本岛津LC-10Avp；LC-10Avp泵；SPD-10Avp可见紫外检测器；浙大N2000色谱工作站；AS3120A超声提取器；METTLER AB135-S十万分之一电子天平(瑞士)。

盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号0753-200011，纯度为100％。乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水，其它试剂均为分析纯。待测药物样品为乳癖安消颗粒(批号：20050301沈阳明华制药有限公司)

(2)色谱条件

色谱柱：Diamonsil^TM C₁₈5μ(250×4.6mm)色谱柱；流动相：体积比为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸25∶73∶1∶1；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：265nm。

(3)提取溶剂的选择

本制剂功劳木为经提取而制成制剂，参照中国药典2000年版一部中功劳木药材【含量测定】项下方法，本试验选用盐酸-甲醇(1∶100)作为提取溶剂，采用超声处理方式提取。

(4)提取时间考察

取本品(批号20050301)1.5g，精密称定，以盐酸-甲醇(1∶100)为溶剂，采用超声方法提取。不同时间盐酸小檗碱的含量测定结果见表1。

表1提取时间考察结果

提取时间(min)	盐酸小檗碱含量(mg/袋)
		203040	1.09011.13701.1905

结果表明，超声提取20分钟、30分钟、40分钟，盐酸小檗碱含量无明显差异，故以超声提取30分钟作为供试品提取方法。

(5)流动相的选择

盐酸小檗碱的含量测定参照中国药典2000年版一部附录VID中高效液相色谱法，选用乙腈-水-三乙胺-冰醋酸不同比例为流动相，保留时间过长，调整比例后，采用体积比为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸25∶73∶1∶1为流动相，保留时间适宜，分离效果良好。

(6)阴性对照试验

按处方配制不含有功劳木的阴性对照制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测试，绘制液相色谱图。由图可见，在与盐酸小檗碱对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液有相同保留时间的色谱峰，而阴性液在此位置上无色谱峰。

(7)标准曲线的绘制及线性范围考察

对照品溶液制备：取盐酸小檗碱对照品4.80mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含0.0480mg的盐酸小檗碱)。

标准曲线的绘制：分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液2、4、6、8、10μl，按上述色谱条件进行色谱分析，结果见表2。

表2线性范围考察结果

进样量(μg)0.480	0.0960	0.1920	0.2880	0.3840
					峰面积A999546	201128	396753	602670	796872

以进样量为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，经回归处理，得到回归方程为Y＝2080161X-307.5，相关系数为r＝0.9999。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0.096～0.48μg范围内线性关系良好。

(8)精密度试验

精密吸取同一供试品溶液(批号20050301)，分别测定五次，结果见表3。

表3精密度考察结果

编号	1	2	3	4	5	平均值	RSD％
								峰面积	561974	540087	557313	560983	567040	557479	1.9

结果表明，仪器精密度良好。

(9)重复性试验

取五份同一批号的本品(批号20050301)，分别按【含量测定】项下方法测定，结果见表4。

表4重复性考察结果

编号	称样量(g)	色谱峰面积	盐酸小檗碱含量		平均值(mg/g)	RSD(％)
							(mg/g)	(mg/袋)
			12345	4.9814.9824.8215.0695.077					582650585531557303578913570185	0.15960.16140.15880.15680.1543	1.2701.2911.2701.2551.234	0.1582	1.8

结果表明，本方法的重复性较好。

(10)稳定性试验

取同一供试品溶液(批号20050301)，每隔2小时进样一次，分别测定其色谱峰面积。结果见表5。

表5稳定性考察结果

时间(小时)	0	2	4	6	8	平均值	RSD(％)
								峰面积A	585570	583737	594200	595846	603671	592605	1.4

结果表明，色谱峰面积在8小时内基本无变化，表明本实验条件下稳定性良好。

(11)回收率试验

取已知盐酸小檗碱的乳癖安消颗粒(批号：20050301，含量为1.221mg/袋)5份，各2.5g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入盐酸小檗碱对照品10ml(浓度为0.0480mg/ml)于量瓶中，按【含量测定】项下供试品溶液制备方法操作，注入液相色谱仪中测定。结果见表6。

表6加样回收率考察结果

编号	称样量(g)	样品盐酸小檗碱(mg)	对照品加入量(mg)	实测盐酸小檗碱总量(mg)	回收率(％)	平均回收率(％)	RSD(％)
								12345	2.4932.5072.5862.3252.546	0.38050.38270.39460.35400.3885	0.4800.4800.4800.4800.480	0.86240.83490.87780.81120.8764	100.498.53100.695.08101.6	99.2	2.6

结果表明，本方法回收率较高。

实施例2  乳癖安消颗粒中盐酸小檗碱的含量测定

按照上述含量测定方法操作，分别测定10批乳癖安消颗粒样品，结果见表7。

表710批样品中盐酸小檗碱含量测定结果

批号	盐酸小檗碱含量(mg/袋)		平均盐酸小檗碱含量(mg/g)	盐酸小檗碱含量(mg/袋)
					20050301200503022005030320050304200503052005030620050307200503082005030920050310	1.2211.3231.1911.3101.4091.3001.3711.4221.2741.285	1.2061.3191.1831.2151.4031.3271.2331.4341.2881.298	0.15160.16510.23390.15780.17580.16410.16210.17850.16010.1614	1.2131.3211.1871.2621.4061.3131.2971.4281.2811.291

10批乳癖安消颗粒样品测定结果表明，10批样品中盐酸小檗碱最低含量为1.187/每单位剂量，依据其他剂型的含量限度，规定本品每单位剂量制剂含功劳木以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCL)计，不得少于0.06mg。

实施例3

比较两种方法流动相条件：

原标准中：色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3)(30∶70)为流动相：检测波长为270nm，理论版数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液。

乳癖安消口服液含量测定条件为：精密量取本品10ml，蒸干，精密加入盐酸-甲醇溶液(1→100)20ml，密塞，称定重量，超声处理(250W，50MHz)30分钟，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇溶液(1→100)补足减失重量，滤过，精密称取续滤液10ml，通过已处理好的中性氧化铝柱，(100-200目，3g，内径1.0cm)，加甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至5ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明标准中：色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(25∶73∶1∶1)为流动相；流速：1.0ml/min，检测波长：265nm。理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液；

供试品溶液的制备  取装量差异项下的本品，研细，混匀，取5.0g，精密加入盐酸-甲醇体积比为1∶100的溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理(250W，50MHz)30分钟，放冷，在称定重量，用盐酸-甲醇1∶100溶液补足减失的重量，滤过，精密量取滤液5ml，通过已处理好的中性氧化铝柱(100-200目，3g，内径1.0cm)，加甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

比较上述两种含量测定方法得知：原方法中流动相配制过程复杂，不同时间，不同人员配制流动相出峰时间，峰形各异，新测定方法中流动相配置过程中不用调节pH值，不同时间，不同人员操作，出峰时间及峰形差别不大。新方法小檗碱峰形，分离度，理论板数，托尾因子等指标均比原方法好，故新方法更适用于本项含量测定。其他含量测定方法无质的改变。新方法含量限度比原口服液标准有所提高，我们经过实际考察含量限度为含功劳木以盐酸小檗碱计不低于1mg/袋，但是考虑到药材不同采收期，不同产地，盐酸小檗碱含量有所差异；我们通过对市售品乳癖安消口服液的含量限度测定，得出现在市售乳癖安消口服液含量均在0.06mg/支以上，故将本品含量限度定为符合大众标准的0.06mg/袋。

实施例4

实施例3中所述流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为35∶80∶2∶2为，盐酸-甲醇为0.5∶100或2∶100，其它同实施例3。

实施例5

实施例3中所述流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为15∶60∶0.5∶0.5，其它同实施例3。

实施例6

实施例3中所述加甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液中的甲醇可以由不同浓度的甲醇、无水乙醇或不同浓度的乙醇替代，其它同实施例3。

Claims (5)

1、一种乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法，其特征在于该方法中含有如下盐酸小檗碱的含量检测方法：

用高效液相色谱法测定：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为15～35∶60～80∶0.5～2∶0.5～2为流动相；检测波长为265nm，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇或不同浓度的甲醇、无水乙醇或不同浓度的乙醇制成每1ml含0.025mg的溶液；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的乳癖安消制剂，研细，混匀，取5.0g，精密加入盐酸-甲醇混合物20-80ml，盐酸与甲醇的体积比为0.5-2∶100，密塞，称定重量，250W、50MHz超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用上述盐酸-甲醇混合物补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液5-20ml，通过已处理好的中性氧化铝柱，加甲醇或乙醇20-60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或不同浓度的甲醇、无水乙醇或不同浓度的乙醇适量使溶解，移至5ml容量瓶中，加甲醇或不同浓度的甲醇、无水乙醇或不同浓度的乙醇稀释至刻度5ml，摇匀，即得；

测定结果：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10-20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算；检测标准为每单位剂量乳癖安消制剂中含功劳木以盐酸小檗碱C₂₀H₁₇NO₄·HCl计，不得少于0.06mg。

2、根据权利要求1所述的乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法，其特征在于所述的流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为25∶73∶1∶1。

3、根据权利要求1所述的乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法，其特征在于盐酸小檗碱C₂₀H₁₇NO₄·HCl的含量测定方法具体为：

在供试品溶液的制备时，所加的盐酸-甲醇的体积比例为1∶100，体积为50ml，超声处理时间为30分钟；洗脱液为甲醇或96％乙醇，稀释液为甲醇或96％乙醇，洗脱量为40ml，在对照品溶液的制备时，所用的溶剂为甲醇。

4、根据权利要求1或3所述的乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法，其特征在于所述的乳癖安消制剂为乳癖安消颗粒、胶囊剂、片剂、口服液体制剂、针剂、外用贴膏剂、凝胶剂、膜剂、气雾剂、搽剂或酊剂。

5、根据权利要求1所述的乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法，其特征在于所述的中性氧化铝柱为100-200目，3g，内径1.0cm。