CN100348731C - 油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法 - Google Patents
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Abstract
油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，它涉及油田水系统中常规污水、含聚污水、地面工艺的水处理过程中硫酸盐还原菌(SRB)的培养及厌氧菌的计数。本发明的目的是为了解决现有的油田水质SRB菌检测中，检测周期长、不能全面真实的反映水中的SRB菌的数量、不能即时的指导生产、检测费用较高的问题。本发明选用在同一个稀释梯度下做三至五个平行样，吸取1mL注入备用的培养基中；将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动；结果观察：第四天和第七天分别计数。本发明的方法具有记数更加准确，有效的缩短了计数时间，五管平行法四天可以实现初步计数，七天可以达到准确计数，真实的反应了生产实际情况、降低了检测费用的优点。
Description
技术领域：
本发明涉及油田水系统中常规污水、含聚污水、地面工艺的水处理过程中硫酸盐还原菌(SRB)的培养及计数。
背景技术：
目前，油田系统内SRB菌的计数主要执行中国石油天然气行业标准，“油田注入水细菌分析方法——绝迹稀释法”(部颁标准)、SY-T0532-93。上述的这种方法存在的问题是：检测需要14天的时间，由于检测周期较长，不能有效的和即时的指导生产实践，在实际操作过程中有些严格的厌氧SRB菌无法生存，导致SRB菌的记数结果不准确，不能真实的反映生产实际情况，同时检测费用较高。
发明内容：
本发明的目的是为了解决现有的油田水质SRB菌检测中，检测周期长、不能真实全面的反应水中的SRB菌的数量、不能即时的指导生产、检测费用较高的问题，提供一种油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，本发明具有记数准确、缩短计数时间、真实的反映生产实际情况、降低检测费用的特点。本发明的方法是通过以下步骤实现的：1、取样：将油田的水样注入到经灭菌的含有高纯氮气的厌氧管中；2、以下的步骤在超净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(终浓度为6‰)备用；3、“厌氧MPN法”，选择水样的稀释倍数：通常大于经验值的二到三个数量级，用倍比稀释法(MPN)稀释，取水样1mL注入用于倍比稀释的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数；4、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下选择做三至五个平行样，吸取1mL注入备用的培养基中；5、将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动；6、结果观察：第四天和第七天分别计数。本发明的方法其结果表明，三管平行法记录的结果在水样低浓度的情况下，最大相差一个数量级，在高浓度的情况下，相差小于两个数量级。而五管平行法记录的结果置信度大于95％。五管平行法四天记录的结果与七天记录的结果只在系数上有差别，而在数量级上无差别。在第七天已经稳定生长，以后无变化。本发明的方法具有记数更加准确，有效的缩短了计数时间，四天可以实现初步计数，七天可以达到准确计数，真实的反应了生产实际情况、降低了检测费用的优点。
具体实施方式：
具体实施方式一：本实施方式的方法是通过以下步骤实现的：1、取样：将油田的水样注入到经灭菌的含有高纯氮气的厌氧管中；2、以下操作在超净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(终浓度为6‰)备用；3、“厌氧MPN法”，选择水样的稀释倍数：通常大于经验值的二至三个数量级，用倍比稀释法(MPN)稀释，取水样1mL注入用于倍比稀释的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数；4、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下做三至五个平行样，吸取1mL注入备用的硫酸盐还原菌的培养基中；5、将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动；6、结果观察：第四天和第七天分别计数。
具体实施方式二：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基的制备方法如下：
一、首先由下列成分按重量份数制备培养基，K2HPO4：0.2～0.8、NH4Cl：0.5～1.5、Na2SO4：5～15、CaCl2·2H2O：0.01～0.6、MgSO4·7H2O：1.5～4、酵母膏：4～8、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：5～15、葡萄糖：0.5～1.5、维生素C：1～5、蒸馏水：1000～2000，将上述成分混合均匀，然后调pH值＝7.8，制成培养基，再加入培养基总重量0.2％的指示剂刃天青溶液；二、将上述培养基用灭菌锅煮沸后，向锅内加入培养基总重量0.2～0.8％的L-半胱胺酸盐，盖上锅盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，通入高纯氮气驱氧20～30min，指示剂的颜色由紫色逐渐消失后，将另一个医用针头插入到厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射器从灭菌锅中吸8mL培养基注入到厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下灭菌15～30min即可。其它方法和步骤与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液的制备方法如下：首先制备无氧水，在灭菌锅中加入一升去离子水煮沸后，加入L-半胱胺酸盐0.2～0.8g，盖上灭菌锅的盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，向灭菌锅内通入高纯氮气驱氧10～30min。配制10mL的6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液，将称量好的FeSO4·(NH4)2SO4放入厌氧管中，将另一个医用针头插入厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射器从灭菌锅中吸9mL水注入厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下灭菌15～30min即可。其它方法和步骤与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4：0.25、NH4Cl：0.6、Na2SO4：6、CaCl2·2H2O：0.02、MgSO4·7H2O：1.6、酵母膏：4.5、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：6、葡萄糖：0.6、维生素C：1.5、蒸馏水：1050。
具体实施方式五：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4：0.75、NH4Cl：1.45、Na2SO4：14、CaCl2·2H2O：0.55、MgSO4·7H2O：3.5、酵母膏：7.5、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：14、葡萄糖：1.4、维生素C：4.5、蒸馏水：1950。
具体实施方式六：本实施方式的硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4：0.5、NH4Cl：1、Na2SO4：10、CaCl2·2H2O：0.1、MgSO4·7H2O：2.5、酵母膏：6、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：10、葡萄糖：1、维生素C：3、蒸馏水：1000。
Claims (4)
1、油田水质硫酸盐还原菌的定量检测方法，该方法是通过以下步骤实现的：(1)、取样：将油田的水样注入到经灭菌的通有高纯氮气的厌氧管中；(2)、以下操作在超净工作台下完成，紫外线灭菌20～40min，其特征是向灭菌的硫酸盐还原菌的培养基中加入1mL的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2 SO4溶液备用；(3)、“厌氧MNP法”：首先选择水样的稀释倍数，通常大于经验值的二到三个数量级，用倍比稀释法稀释，取水样1mL注入含9mL无氧水的厌氧管中，最终水样被稀释十倍，依次从该管中用一次性注射器取样1mL注入下一个用于倍比稀释的厌氧管中，直到选择稀释的倍数；(4)、选用三管至五管平行法，选用在同一个稀释梯度下做三个至五个平行样，吸取1mL注入备用的培养基中；(5)、将MPN的培养基放到摇床上，在38℃、180转/min条件下摇动；(6)、结果观察：第四天和第七天分别计数；
其中，所述的硫酸盐还原菌培养基的制备方法如下：一、首先由下列成分按重量份数制备培养基，K2HPO4：0.2～0.8、NH4Cl：0.5～1.5、Na2SO4：5～15、CaCl2·2H2O：0.01～0.6、MgSO4·7H2O：1.5～4、酵母膏：4～8、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：5～15、葡萄糖：0.5～1.5、维生素C：1～5、蒸馏水：1000～2000，将上述成分混合均匀，然后调pH值＝7.8，制成培养基，再加入培养基总重量0.2％的指示剂刃天青溶液；二、将上述培养基用灭菌锅煮沸后，向锅内加入培养基总重量0.2～0.8％的L-半胱胺酸酸盐，盖上锅盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，通入高纯氮气驱氧20～30min，指示剂的颜色由紫色逐渐消失后，将另一个医用针头插入到厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射器从灭菌锅中吸8mL培养基注入到厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下灭菌15～30min即可；
所述的质量百分浓度比为6％的FeSO4·(NH4)2 SO4溶液的制备方法如下：首先制备无氧水，在灭菌锅中加入一升去离子水煮沸后，加入L-半胱胺酸盐0.2～0.8g，盖上灭菌锅的盖，从锅盖的中间孔中插入医用针头，向灭菌锅内通入高纯氮气驱氧10～30min；配制10mL的6％的FeSO4·(NH4)2 SO4溶液，将称量好的FeSO4·(NH4)2 SO4放入厌氧管中，将另一个医用针头插入厌氧管中，通入高纯氮气，将厌氧管中的含氧空气吹走，用10mL的医用注射器从灭菌锅中吸9mL水注入厌氧管中，将密封后的厌氧管在121℃条件下灭菌15～30min即可。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4：0.25、NH4Cl：0.6、Na2SO4：6、CaCl2·2H2O：0.02、MgSO4·7H2O：1.6、酵母膏：4.5、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：6、葡萄糖：0.6、维生素C：1.5、蒸馏水：1050。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4：0.75、NH4Cl：1.45、Na2SO4：14、CaCl2·2H2O：0.55、MgSO4·7H2O：3.5、酵母膏：7.5、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：14、葡萄糖：1.4、维生素C：4.5、蒸馏水：1950。
4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于硫酸盐还原菌培养基由下列成分按重量份数制备而成：K2HPO4：0.5、NH4Cl：1、Na2SO4：10、CaCl2·2H2O：0.1、MgSO4·7H2O：2.5、酵母膏：6、质量百分浓度比为60％的乳酸钠溶液：10、葡萄糖：1、维生素C：3、蒸馏水：1000。
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