CN1772878A - 窖泥己酸菌培养技术 - Google Patents

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钟甦
任静
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Abstract

本发明涉及一种生物菌的培养方法，特别是一种窖泥己酸菌的培养技术。该技术以乙酸钠培养基为基础，添加碳源及微量元素，采取如下工艺配制而成：将乙酸钠培养基在0.1Mpa，30min条件下高压灭菌，待温度降到30－40℃时在无菌操作条件下添加0.6％木糖和0.1％的L－抗坏血酸，并将其摇匀，然后加入碳酸钙和乙醇，在10％→33℃条件下每天分时间段摇匀培养基、培养7天进行接种处理，最后测定己酸含量。该制作工艺简单实用，己酸菌的产酸能力较高，优于传统工艺。

Description

窖泥己酸菌培养技术
技术领域
本发明涉及一种生物菌的培养方法，特别是一种窖泥己酸菌的培养技术。
背景技术
己酸菌是梭状芽孢杆菌的一种，是浓香型大曲白酒发酵中起决定作用的一种窖泥功能菌，它的数量多少和功能的强弱直接影响浓香型大曲酒发酵的质量。现在许多浓香型白酒厂分离、纯化己酸菌来培养己酸菌液，将其应用于白酒生产中。主要有培养人工窖泥，保养发酵池，喷洒底醅等方法来增加香醅中己酸含量，以达到提高己酸乙酯的目的，这些传统方法生产的己酸菌产酸能力普遍偏低。己酸菌的产酸能力直接影响酯化效果，所以提高酯的含量首要是提高己酸含量。因为己酸菌的产酸能力与培养基的成分有很大关系，所以选择合适的培养基及合理的工艺方法可以提高己酸菌的产酸能力。
发明内容
本发明的目的在于提出以乙酸钠培养基为基础，添加一定量的碳源、微量元素，在特定的工艺流程下，来提高己酸菌的产酸能力。
本发明是通过以下技术方案实现的：
该技术以乙酸钠培养基为基础，添加碳源及微量元素，采取如下工艺配制而成：将乙酸钠培养基在0.1Mpa，30min条件下高压灭菌，待温度降到30-40℃时在无菌操作条件下添加0.6％木糖和0.1％的L-抗坏血酸，并将其摇匀，然后加入碳酸钙和乙醇，在10％→33℃条件下每天分时间段摇匀培养基、培养7天进行接种处理，最后测定己酸含量。
乙酸钠培养基为：乙酸钠0.5％；酵母膏0.1％；磷酸氢二钾0.04％；硫酸铵0.05％；硫酸镁0.02％；灭菌后，接种前加碳酸钙0.8％；灭菌后，接种前加乙醇2％。
本发明的优点与效果是：
目前，国内己酸含量最高保持在400～500mg/100ml。本工艺方法所制做的窖泥己酸菌产酸能力明显优于现有己酸含量，具有实用价值和很强的推广性。
附图说明
图1为本发明己酸的标准曲线图。
具体实施方式
工艺流程：乙酸钠培养基→高压灭菌(0.1Mpa，30min)→待温度降到30-40℃时添加0.6％木糖，0.1％的L-抗坏血酸(无菌操作，摇匀)→加入碳酸钙，乙醇→接种10％→33℃培养7天(每天分时间段摇匀培养基)→测定己酸含量(比色法)。
乙酸钠培养基：乙酸钠0.5％；酵母膏0.1％；磷酸氢二钾0.04％；硫酸铵0.05％；硫酸镁0.02％；碳酸钙0.8％(灭菌后，接种前加)；乙醇2％(灭菌后，接种前加)。
己酸的比色法测定：由721分光光度计；带塞的试管；漏斗；移液管；容量瓶；滤纸等测定工具。
试剂为：
(1)稀释液：0.5％NaAC；0.1％酵母提取物；0.05％(NH4)2SO4；0.04％K2HPO4；0.02％MgSO4；1％乙醇，待各成分溶解后过滤即得，溶液的pH值为6.8。
(2)1％标准己酸液：精确吸取1ml己酸原液(含量98％-100％：比重0.93)，稀释液定容至100ml，其PH值为4.0左右，若要用pH值为6.8之己酸液。可在加至95ml左右时，用20％NaOH调pH值。
(3)5％醋酸铜溶液
(4)乙醚
培养基：乙酸钠培养基
己酸发酵液的制备：将己酸菌经活化后接入醋酸钠培养基中，在30℃厌氧培养10天左右，过滤即得。
标准曲线的制作：
按表加各试剂于试管中，塞紧塞子，剧烈振荡，静止片刻待分层后，用吸管将上层乙醚小心地(注意勿把下部的混浊液吸入)移入5ml比色杯中，在波长660nm处测OD值，以各试管中加入的1％己酸毫升数为横座标，光密度为纵座标，绘制出标准曲线图。(见下表)。
  试管编号   1   2   3   4   5   6   7
  1％标准己酸稀释液5％醋酸铜溶液乙醚   0825   1.256.7525   1.56.525   1.756.2525   2625   2.255.7525   2.55.525
发酵液中己酸含量的测定方法：
为了使样品测定时反应液的pH与标准曲线制作时一致。先将样品用20％NaOH调pH至6.8，然后按下表加各试剂于试管中，反应后测乙醚层溶液的OD值，在标准曲线上查得相应的己酸量，求出3个数的平均值，后乘以己酸的比重(0.93)即为每毫升样品中的己酸毫克数。
试管编号   对照   1   2   3
己酸发酵液I％标准己酸液稀释液5％醋酸铜溶液乙醚   00825   11625   11.55.525   12525
此方法己酸含量最高可以达到700mg/100ml左右，基于实验偶然性很大的特点，重复做此实验可以稳定含量在600mg/100ml。目前，国内己酸含量最高保持在400～500mg/100ml。所以，此实验具有很大的实用价值，具有很强的推广性。

Claims (2)

1.窖泥己酸菌培养技术，其特征在于该技术以乙酸钠培养基为基础，添加碳源及微量元素，采取如下工艺配制而成：将乙酸钠培养基在0.1Mpa，30min条件下高压灭菌，待温度降到30-40℃时在无菌操作条件下添加0.6％木糖和0.1％的L-抗坏血酸，并将其摇匀，然后加入碳酸钙和乙醇，在10％→33℃条件下每天分时间段摇匀培养基、培养7天进行接种处理，最后测定己酸含量。
2.如权利要求1所述的窖泥己酸菌培养技术，其特征在于：乙酸钠培养基为：乙酸钠0.5％；酵母膏0.1％；磷酸氢二钾0.04％；硫酸铵0.05％；硫酸镁0.02％；灭菌后，接种前加碳酸钙0.8％；灭菌后，接种前加乙醇2％。
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